CN105865879A - 一种冰冻切片免疫组化染色操作方法 - Google Patents
一种冰冻切片免疫组化染色操作方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105865879A CN105865879A CN201610334604.9A CN201610334604A CN105865879A CN 105865879 A CN105865879 A CN 105865879A CN 201610334604 A CN201610334604 A CN 201610334604A CN 105865879 A CN105865879 A CN 105865879A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- minutes
- frozen section
- immunohistochemical staining
- acetone
- hydrogen peroxide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 26
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 title claims abstract description 17
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 28
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 28
- 238000010186 staining Methods 0.000 claims abstract description 5
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 9
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 claims description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 abstract description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 abstract 1
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000011017 operating method Methods 0.000 description 4
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 229920002457 flexible plastic Polymers 0.000 description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 238000002309 gasification Methods 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种冰冻切片免疫组化染色操作方法，将3—5um的冰冻组织切片，室温放置30分钟，3‑8℃丙酮固定10‑12分钟，然后用PBS清洗15分钟，采用过氧化氢孵育5—10分钟。本发明所采用的技术方案对常规的染色操作步骤进行改变，改变组织切片的厚度，丙酮固定时间，以及对过氧化氢孵育时间进行选择，改变组织切片的染色效果。本发明操作步骤简单，与现有技术的操作步骤、试剂等使用均不同，极大的便利于实验室操作人员的免疫组化操作，可快速的掌握滴入抗体的位置和大小。
Description
技术领域
本发明涉及实验室检验分析方法，具体涉及一种冰冻切片免疫组化染色操作方法。
背景技术
实验室做免疫组化滴抗体时，发现在染色操作步骤时，无法进行正常染色，导致实验操作人员滴加抗体时，无法把握滴加组织大小和位置。
基于此，实验室研发人员研究开发了一种冰冻切片免疫组化染色操作方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是：现有冰冻切片免疫组化染色所采用的操作方法无法对组织切片的组织进行正常染色，导致滴加抗体时，无法把握滴加组织的大小和位置。现提供一种冰冻切片免疫组化染色操作方法，通过对现有操作步骤进行处理，解决免疫组化染色操作步骤染色效果不佳等技术问题。
本发明的通过下述技术方案实现：
一种冰冻切片免疫组化染色操作方法，将冰冻组织切片3—5um，室温放置30分钟，3-8℃丙酮固定10-12分钟，然后用PBS清洗15分钟，采用过氧化氢孵育5—10分钟。
对冰冻切片的常规处理是将组织切片置于软塑料盖中，组织切片小可加入适量OCT包埋剂浸没组织，然后将装有组织切片的软塑料盖放入盛有液氮的容器内，当接触液氮开始气化沸腾，将小盒保持原味切不加入液氮内，大约10—20秒组织迅速冰冻切片。取出组织切片立即置于-80℃冰箱内保存。
本发明技术方案通过采用将组织切片的厚度进行调整，切片厚度设置在3-5um，而这种厚度采用人工是无法操作做到的，而本发明技术方案是通过机器操作实现，利于滴加抗体后，组织切片的抗体着色。
优选地，所述染色具体操作方法为将冰冻切片4um，在室温下放置30分钟后依次采用4℃丙酮固定10分钟，PBS缓冲液以每次5分钟，共三次对冰冻切片进行清洗，最后采用可消除内氧化物酶活性的过氧化氢孵育5分钟。
优选地：所述染色具体操作方法为将冰冻切片5um，在室温下放置30分钟后依次采用8℃丙酮固定12分钟，PBS缓冲液清洗冰冻切片15分钟，最后采用可消除内氧化物酶活性的过氧化氢孵育10分钟。
优选地，所述染色具体操作方法为将冰冻切片3um，在室温下放置30分钟后依次采用8℃丙酮固定11分钟，PBS缓冲液清洗冰冻切片15分钟，最后采用可消除内氧化物酶活性的过氧化氢孵育8分钟。
优选地，所述冰冻切片切完后放置的温度为-80℃或-20℃。
本发明与现有技术相比，具有如下的优点和有益效果：
（1）本发明所采用的技术方案对常规的染色操作步骤进行改变，改变组织切片的厚度，丙酮固定时间，以及对过氧化氢孵育时间进行选择，改变组织切片的染色效果。
（2）本发明操作步骤简单，与现有技术的操作步骤、试剂等使用均不同，极大的便利于实验室操作人员的免疫组化操作，可快速的掌握滴入抗体的位置和大小。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例，对本发明作进一步的详细说明，本发明的示意性实施方式及其说明仅用于解释本发明，并不作为对本发明的限定。
实施例1：
一种冰冻切片免疫组化染色操作方法，将4um的冰冻切片在室温下放置30分钟后依次采用4℃丙酮固定10分钟，PBS缓冲液以每次5分钟，共三次对冰冻切片进行清洗，最后采用可消除内氧化物酶活性的过氧化氢孵育5分钟。
实施例2：
一种冰冻切片免疫组化染色操作方法，将5um的冰冻切片，在室温下放置30分钟后依次采用8℃丙酮固定12分钟，PBS缓冲液清洗冰冻切片15分钟，最后采用可消除内氧化物酶活性的过氧化氢孵育10分钟。
实施例3：
一种冰冻切片免疫组化染色操作方法，将3um的冰冻切片，冰冻切片的温度为-80℃，然后在室温下放置30分钟后依次采用8℃丙酮固定11分钟，PBS缓冲液清洗冰冻切片15分钟，最后采用可消除内氧化物酶活性的过氧化氢孵育8分钟。
以上所述的具体实施方式，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施方式而已，并不用于限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (5)
1.一种冰冻切片免疫组化染色操作方法，其特征在于，包括染色步骤：冰冻组织切片3—5um，室温放置30分钟，3-8℃丙酮固定10-12分钟，然后用PBS清洗15分钟，采用过氧化氢孵育5—10分钟。
2.根据权利要求1所述的一种冰冻切片免疫组化染色操作方法，其特征在于：所述染色具体操作方法为将冰冻切片4um，在室温下放置30分钟后依次采用4℃丙酮固定10分钟，PBS缓冲液以每次5分钟，共三次对冰冻切片进行清洗，最后采用可消除内氧化物酶活性的过氧化氢孵育5分钟。
3.根据权利要求1所述的一种冰冻切片免疫组化染色操作方法，其特征在于：所述染色具体操作方法为将冰冻切片5um，在室温下放置30分钟后依次采用8℃丙酮固定12分钟，PBS缓冲液清洗冰冻切片15分钟，最后采用可消除内氧化物酶活性的过氧化氢孵育10分钟。
4.根据权利要求1所述的一种冰冻切片免疫组化染色操作方法，其特征在于：所述染色具体操作方法为将冰冻切片3um，在室温下放置30分钟后依次采用8℃丙酮固定11分钟，PBS缓冲液清洗冰冻切片15分钟，最后采用可消除内氧化物酶活性的过氧化氢孵育8分钟。
5.根据权利要求1所述的一种冰冻切片免疫组化染色操作方法，其特征在于：所述冰冻切片切完后放置的温度为-80℃或-20℃。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610334604.9A CN105865879A (zh) | 2016-05-19 | 2016-05-19 | 一种冰冻切片免疫组化染色操作方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610334604.9A CN105865879A (zh) | 2016-05-19 | 2016-05-19 | 一种冰冻切片免疫组化染色操作方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105865879A true CN105865879A (zh) | 2016-08-17 |
Family
ID=56635365
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201610334604.9A Pending CN105865879A (zh) | 2016-05-19 | 2016-05-19 | 一种冰冻切片免疫组化染色操作方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105865879A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110411808A (zh) * | 2019-08-05 | 2019-11-05 | 李海南 | 一种术中快速冰冻切片免疫组化染色方法 |
| CN111929136A (zh) * | 2020-08-28 | 2020-11-13 | 广州金域医学检验中心有限公司 | 一种冰冻病理切片的染色方法及装置和系统 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1945333A (zh) * | 2006-09-28 | 2007-04-11 | 孙爱静 | 乳腺癌淋巴结转移快速免疫组化检测试剂及其检测方法 |
| CN103884694A (zh) * | 2012-12-21 | 2014-06-25 | 深圳先进技术研究院 | 一种lkb1蛋白检测方法及试剂盒 |
| CN104359741A (zh) * | 2014-09-26 | 2015-02-18 | 南通大学 | 多用途免疫组化笔在细胞爬片免疫组织化学检测中的应用 |
-
2016
- 2016-05-19 CN CN201610334604.9A patent/CN105865879A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1945333A (zh) * | 2006-09-28 | 2007-04-11 | 孙爱静 | 乳腺癌淋巴结转移快速免疫组化检测试剂及其检测方法 |
| CN103884694A (zh) * | 2012-12-21 | 2014-06-25 | 深圳先进技术研究院 | 一种lkb1蛋白检测方法及试剂盒 |
| CN104359741A (zh) * | 2014-09-26 | 2015-02-18 | 南通大学 | 多用途免疫组化笔在细胞爬片免疫组织化学检测中的应用 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 李哲夫等: "Muc-1和MDR3在胆囊结石形成过程中的作用", 《腹部外科》 * |
| 李海红等: "表皮细胞去分化的初步实验研究", 《感染.炎症.修复》 * |
| 陈耿臻等: "ICAM-1在同种大鼠肝移植物中的表达及其意义", 《四川医学》 * |
| 马中等: "MMP-9在腹主动脉瘤和动脉硬化闭塞性疾病中组织表达的比较研究", 《中国现代医学杂志》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110411808A (zh) * | 2019-08-05 | 2019-11-05 | 李海南 | 一种术中快速冰冻切片免疫组化染色方法 |
| CN111929136A (zh) * | 2020-08-28 | 2020-11-13 | 广州金域医学检验中心有限公司 | 一种冰冻病理切片的染色方法及装置和系统 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103930761B (zh) | 用于预处理包埋的生物样本的不混溶两相系统 | |
| Canene-Adams | Preparation of formalin-fixed paraffin-embedded tissue for immunohistochemistry | |
| CA2849908C (en) | Ultra-rapid diagnostic tissue preparation as an alternative to frozen section | |
| Guerin et al. | Molecular medicine Ireland guidelines for standardized biobanking | |
| CN105289773B (zh) | 一种用于植物代谢组分析的样品前处理方法 | |
| CN105865879A (zh) | 一种冰冻切片免疫组化染色操作方法 | |
| WO2005018418A3 (en) | Automated quality control protocols in a multi-analyser system | |
| EP2831560B1 (en) | Composition, use of the composition and method for processing histological and cytological samples post mortem | |
| Aziz et al. | Tissue processing | |
| CN107367607A (zh) | 一种病理标本切片免疫组化操作方法及其系统 | |
| Sehgal et al. | Processing and reporting of cytology specimens from mediastinal lymph nodes collected using endobronchial ultrasound-guided transbronchial needle aspiration: a state-of-the-art review | |
| CA2893303A1 (en) | Automatic cleaning validation swabbing devices, methods, and systems | |
| Hatta et al. | A simple and rapid decalcification procedure of skeletal tissues for pathology using an ultrasonic cleaner with D-mannitol and formic acid | |
| CN104101701B (zh) | 高效细胞爬片免疫组化方法 | |
| WO2015152788A1 (en) | Product and method for cell preservation | |
| Aquino et al. | Ovarian tissue vitrification: the use of a novel metal closed system for clinical grade cryopreservation | |
| EP3207379B1 (en) | Automated batch stainer for immunohistochemistry | |
| Li et al. | Reducing oxidative DNA damage by adding antioxidants in human semen samples undergoing cryopreservation procedure | |
| Peters et al. | Rapid Lump Examination (RLE)–a bedside 3‐dimensional microscopy of tumor specimens | |
| Di Meo et al. | Optical Clearing and Labeling for Light-sheet Fluorescence Microscopy in Large-scale Human Brain Imaging | |
| Tixier et al. | Infectious keratitis after penetrating keratoplasty | |
| Bath et al. | Technical brief: Optimized pipeline for isolation of high-quality RNA from corneal cell subpopulations | |
| Pradhan et al. | A novel approach to decalcification in histopathology laboratory: An adaptation from the Hammersmith protocol | |
| Alwahaibi et al. | Immunoperoxidase and immunofluorescence on formalin-fixed, paraffin-embedded tissue sections versus immunofluorescence on frozen sections in the assessment of renal biopsies | |
| CN105383805B (zh) | 生物组织样本的冻存方法和生物组织冻存容器 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20160817 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |