CN105861754A - 一种美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪细小病毒的多重rt-pcr检测试剂盒 - Google Patents

一种美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪细小病毒的多重rt-pcr检测试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN105861754A
CN105861754A CN201610369343.4A CN201610369343A CN105861754A CN 105861754 A CN105861754 A CN 105861754A CN 201610369343 A CN201610369343 A CN 201610369343A CN 105861754 A CN105861754 A CN 105861754A
Authority
CN
China
Prior art keywords
american type
primer
respiratory syndrome
syndrome virus
porcine reproductive
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201610369343.4A
Other languages
English (en)
Inventor
丁耀忠
张中旺
周建华
吕建亮
周鹏
张�杰
张永光
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Lanzhou Veterinary Research Institute of CAAS
Original Assignee
Lanzhou Veterinary Research Institute of CAAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lanzhou Veterinary Research Institute of CAAS filed Critical Lanzhou Veterinary Research Institute of CAAS
Priority to CN201610369343.4A priority Critical patent/CN105861754A/zh
Publication of CN105861754A publication Critical patent/CN105861754A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
    • C12Q1/701—Specific hybridization probes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/16—Primer sets for multiplex assays

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明提供一种美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪细小病毒的多重RT‑PCR检测试剂盒，包括用于扩增美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒目的基因的引物对一和用于扩增猪细小病毒目的基因的引物对二。并提供了检测试剂盒的使用方法。本发明提供的检测试剂盒较经典的病毒分离、单RT‑PCR和血清型分型方法快捷，可以方便地一次性鉴定并区分出属于美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪细小病毒中的任意一种，以便于对疫病情况及区域、环境做出及时快捷的反应，以最短的时间做出正确的处理办法，这对及时扑灭或阻断传染病的传播具有积极的意义，同时，本发明特别适于小样品的提取，本发明具有广泛的市场应用前景。

Description

一种美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪细小病毒的多重 RT-PCR检测试剂盒
技术领域
本发明涉及畜类病毒检测试剂盒，具体涉及一种美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪细小病毒的多重RT-PCR检测试剂盒。
背景技术
猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndromevirus, PRRSV）引起的，以妊娠母猪发生早产、流产、死胎、弱仔和木乃伊胎，仔猪和育肥猪发生呼吸道疾病，生产性能降低，饲料报酬率降低，死亡率升高等，目前，我国以美洲型PRSV的威胁最为显著。
猪细小病毒病（Porcine parvovirus disease）是由猪细小病毒(Porcineparvovirus，PPV)引起的一种猪繁殖障碍病，各种不同年龄、性别的家猪和野猪均易感。传染源主要来自感染猪细小病毒的母猪和带毒的公猪，后备母猪比经产母猪易感染，病毒能通过胎盘垂直传播，而带毒猪所产的活猪可能带毒排毒时间很长甚至终生。感染种公猪也是该病最危险的传染源，种公猪通过配种传染给易感母猪，并使该病传播扩散。
尽管目前国内外对PRRSV和PPV的病原学、血清分型、诊断做了大量的研究，但由于其几乎遍及世界各地，对全世界猪及相关产品的威胁众所周知，造成的经济损失每年至少为上百亿美元。尤其二者具有相似的临床表现，临床上很难区分，同时可能缺乏特征病症，这给诊断和防治带来极大困难。因此，单靠临床诊断难以定性。
为了确定以上两种疾病是否在某一地区存在，仅仅检测动物血清抗体的方法并非完全可靠，还必须通过通过病原学检测以确诊病原的存在，一般检测方法为生物学实验、血清型诊断技术和分子生物学技术等诊断技术，但是这些方法有的敏感性不高、有的特异性不强、有的检出率较低，检测周期太长，并且这些技术普遍费用太高。建立一种快速诊断美洲型株猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）和猪细小病毒（PPV）的多重RT-PCR试剂盒，完成对PRRSV和PPV的快速诊断以及对其进行严格监控具有重要意义。
发明内容
本发明的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，提供一种能够快速、简便、灵敏和经济的区分动物所感染的美洲型株猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪细小病毒的多重RT-PCR检测试剂盒。
本发明提供一种美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪细小病毒的多重RT-PCR检测试剂盒，所述试剂盒包括用于扩增美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒目的基因的引物对一和用于扩增猪细小病毒目的基因的引物对二；
所述引物对一为：
上游引物：5′-AACCACGCATTTGTCGTC-3′
下游引物：5′-TGGCACAGCTGATTGACTGG-3′；
所述引物对二为：
上游引物：5′-gCACACgCATCAAgACTCATACAA-3′
下游引物：5′-TggTggTgAggTTgCTgATTCCC-3′。
作为优选，在50μl反应体系中，所述引物对一的使用量为0.8μl，引物对二的使用量为1μl。
更优选地，所述试剂盒还包括混和酶Enzyme Mix ，2 ×Buffer和无菌的双蒸水；所述2 ×Buffer是由Tris-HCL、KCL、MgSO4、(NH4)2SO4、Tween-20和dNTPS组成的。
本发明还提供上述试剂盒在检测美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪细小病毒中的应用；所述检测不以专利法中规定的疾病的诊断和治疗为目的。
上述试剂盒的使用方法为：采集待检动物的血液或病死动物的组织，制成乳悬液，提取其全基因组RNA，以RNA为模板，以试剂盒中的特异性美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪细小病毒的引物进行多重RT-PCR，对得到的产物进行电泳，根据电泳图谱分析被检动物是否感染有美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪细小病毒。
所述多重RT-PCR反应程序为：50℃ 30min，94℃ 2 min，然后是循环程序为94℃30s，58℃ 1min，72℃ 50s，35个循环。最后72℃延伸10min。
本发明的有益效果为：本发明提供的一种猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪细小病毒的多重RT-PCR检测试剂盒，较经典的病毒分离、单RT-PCR和血清型分型方法快捷，可以方便地一次性鉴定并区分出属于美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪细小病毒中的任意一种，以便于对疫病情况及区域、环境做出及时快捷的反应，以最短的时间做出正确的处理办法，这对及时扑灭或阻断传染病的传播具有积极的意义，同时，本发明特别适于小样品的提取，具有广泛的市场应用前景。
附图说明
附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：
图1为利用本发明提供的试剂盒检测标准样品的检测结果电泳图；其中，从左至右依次为：M，DNA分子量标准DL-2000（marker条带的大小依次为2000bp、1000bp、750bp、500bp、250bp、100bp）；泳道1为美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪细小病毒的多重RT-PCR检测结果；泳道2为美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒的RT-PCR检测结果；泳道3为猪细小病毒的RT-PCR检测结果；泳道4为阴性对照。
图2 为本发明提供的试剂盒的特异性试验结果电泳图；其中，从左至右依次为：M，DNA分子量标准DL-2000（marker条带的大小依次为2000bp、1000bp、750bp、500bp、250bp、100bp）；泳道1为应用本发明的方法检测美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪细小病毒的结果；泳道2为应用本发明的方法检测猪圆环病毒-2型病毒的结果；泳道3为应用本发明的方法检测猪瘟病毒结果；泳道4为应用本发明的方法检测猪伪狂犬病毒结果；泳道5为应用本发明的方法检测结果O型口蹄疫病毒的结果，泳道6为阴性对照。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为市售。
实施例1
本发明的美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪细小病毒的多重RT-PCR检测试剂盒的组成如下：
（1）用于扩增美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒目的基因的引物对一；
上游引物：5′-AACCACGCATTTGTCGTC-3′和
下游引物：5′-TGGCACAGCTGATTGACTGG-3′；（198bp)
（2）用于扩增猪细小病毒目的基因的引物对二；
上游引物：5′-gCACACgCATCAAgACTCATACAA-3′和
下游引物：5′-TggTggTgAggTTgCTgATTCCC-3′。(294bp)
（3）其他试剂：Enzyme Mix，2 ×Buffer和无菌的双蒸水。
使用时，各组分浓度及使用量如下：
待检测样品RNA 2μl
引物对一（10μmol/L） 0.8μl（上下游引物各为0.8μl）
引物对二（10μmol/L） 1μl（上下游引物各为1μl）
Enzyme Mix 2μl
2 ×Buffer 25μl
无菌的双蒸水 补至50μl
其中上述所述的2 ×Buffer是由Tris-HCL、KCL、MgSO4、(NH4)2SO4、Tween-20和dNTPS组成的。
实施例2
本发明的美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪细小病毒的多重RT-PCR检测试剂盒的使用方法为：采集待检动物的血液或病死动物的组织，制成1:5的乳悬液，提取其全基因组RNA，以RNA为模板，以试剂盒中的特异性美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪细小病毒的引物进行多重RT-PCR，对得到的产物进行电泳，根据电泳图谱分析被检动物是否感染有美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪细小病毒。
具体使用方法如下：
1、美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪细小病毒毒的核酸提取：
采集待检动物的血液或病死动物的组织，用生理盐水稀释或研磨成1:5的乳悬液，采用TAKARA 病毒RNA提取试剂盒提取其全基因组RNA。
2、多重RT-PCR反应：
本试剂盒参照Genbank登录的美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪细小病毒的ORF-6编码区基因的序列，设计并合成两对引物。本试剂盒涉及多重RT-PCR扩增的引物序列及片段的大小如表1所示：
按照TaKaRa一步法RT-PCR试剂盒提供的50µl反应体系加入相应的检测试剂进行RT-PCR反应。RT-PCR反应程序如下：50℃ 30min，94℃ 2 min，然后是循环程序为94℃ 30s，58℃ 1min，72℃ 50s，35个循环。最后72℃延伸10min。RT-PCR反应在BIOMRTRA扩增仪中进行。
3、对RT-PCR产物进行电泳，根据电泳图谱分析被检动物是否感染有美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪细小病毒：产生200bp左右条带的为感染美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒，产生300bp左右条带的为感染猪细小病毒。
实施例3
本发明的美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪细小病毒的多重RT-PCR检测试剂盒的特异性和敏感性试验
1、PRRSV 多重RT-PCR的敏感性试验：
1.1美洲型PRRSV和PPV的定量：
将美洲型PRRSV和PPV提取的病毒RNA按照2.0×105拷贝的RNA、2.0×104拷贝的RNA、2.0×103拷贝的RNA、2.0×102拷贝的RNA和2.0×101拷贝的RNA分别进行稀释，进行PT-PCR扩增，结果显示，本发明的试剂盒可以特异的检出美洲型PRRSV和PPV的目的片段,且至少可检出20拷贝的RNA。
2、建立的PRRSV多重RT-PCR的特异性试验：
2.1猪圆环病毒-2型病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒结果和O型口蹄疫病毒的提取和多重RT-PCRT反应：
分别用美洲型PRRSV、PPV、猪圆环病毒-2型病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒结果和O型口蹄疫病毒中提取的RNA作为PRRSV的多重PT-PCR的反应模板，以健康猪的血液提取的RNA作为阴性对照模板。然后程序按照实施例1中的多重PT-PCR体系和条件进行反应，反应产物用琼脂凝胶电泳检测。
2.2 特异性结果分析：
PRRSV、PPV与猪圆环病毒-2型病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒结果和O型口蹄疫病毒的RT-PCR方法交叉反应结果如图2所示。图2中2-6道分别是猪圆环病毒-2型病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒结果、O型口蹄疫病毒的核酸和健康猪血清的RNA。从图中可以看见上述四种病毒与本发明的多重PT-PCR方法无交叉反应。健康猪血液中提取的RNA的反应结果也为阴性。上述结果表明本实验所建立的美洲型PRRSV和PPV的多重RT-PCR方法与上述四种在临床症状表现相似的病毒无交叉反应。
3、应用美洲型PRRSV和PPV的多重PT-PCR试剂盒进行临床样品检测：
本实验室保存的美洲型PRRSV和PPV阳性的临床样品用本发明的多重RT-PCR试剂盒进行检测，多重RT-PCR检测方法的敏感性比较检测结果如表2所示，从表中可以看出，多重RT-RCR方法对40个美洲型PRRSV和PPV为阳性的临床样品的检出率为100%，比ELISA检出率要高约4个百分点。
表2
4、结论：
上述试验证明本发明的试剂盒和所建立的美洲型PRRSV和PPV的多重PT-PCR方法具有敏感性高、特异性强、快速、实验设备简单和操作容易等特点，适合于实验室和临床对美洲型PRRSV和PPV的快速诊断。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 中国农业科学院兰州兽医研究所
<120> 一种美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪细小病毒的多重RT-PCR检测试剂盒
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
aaccacgcat ttgtcgtc 18
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
tggcacagct gattgactgg 20
<210> 3
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
gcacacgcat caagactcat acaa 24
<210> 4
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
tggtggtgag gttgctgatt ccc 23

Claims (4)

1.一种美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪细小病毒的多重RT-PCR检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括用于扩增美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒目的基因的引物对一和用于扩增猪细小病毒目的基因的引物对二；
所述引物对一为：
上游引物：5′-AACCACGCATTTGTCGTC-3′
下游引物：5′-TGGCACAGCTGATTGACTGG-3′；
所述引物对二为：
上游引物：5′-gCACACgCATCAAgACTCATACAA-3′
下游引物：5′-TggTggTgAggTTgCTgATTCCC-3′。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：在50μl反应体系中，所述引物对一的使用量为0.8μl，引物对二的使用量为1μl。
3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括混和酶EnzymeMix ，2 ×Buffer和无菌的双蒸水；所述2 ×Buffer是由Tris-HCL、KCL、MgSO4、(NH4)2SO4、Tween-20和dNTPS组成的。
4.权利要求1-3任一所述的试剂盒在检测美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪细小病毒中的应用；所述检测不以专利法中规定的疾病的诊断和治疗为目的。
CN201610369343.4A 2016-05-30 2016-05-30 一种美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪细小病毒的多重rt-pcr检测试剂盒 Pending CN105861754A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610369343.4A CN105861754A (zh) 2016-05-30 2016-05-30 一种美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪细小病毒的多重rt-pcr检测试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610369343.4A CN105861754A (zh) 2016-05-30 2016-05-30 一种美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪细小病毒的多重rt-pcr检测试剂盒

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105861754A true CN105861754A (zh) 2016-08-17

Family

ID=56642730

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610369343.4A Pending CN105861754A (zh) 2016-05-30 2016-05-30 一种美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪细小病毒的多重rt-pcr检测试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105861754A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106367529A (zh) * 2016-08-30 2017-02-01 中国农业科学院兰州兽医研究所 一种快速显色一步法检测美洲型高致病性猪繁殖与呼吸综合征的rt‑lamp试剂盒

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN202071259U (zh) * 2011-03-18 2011-12-14 中山市恒滨塑胶模具有限公司 一种推杆式弧形抽芯模具

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN202071259U (zh) * 2011-03-18 2011-12-14 中山市恒滨塑胶模具有限公司 一种推杆式弧形抽芯模具

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHONGXU SHI等: "（The Influence of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Infection on the Expression of Cellular Prion Protein in Marc-145 Cells", 《JOURNAL OF VIROLOGY&ANTIVIRAL RESEARCH》 *
刘志杰等: "一例猪细小病毒、猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒混合感染的诊断", 《中国畜牧兽医》 *
崔立等: "猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒以及猪细小病毒混合感染的流行病学调查", 《上海交通大学学报（农业科学版）》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106367529A (zh) * 2016-08-30 2017-02-01 中国农业科学院兰州兽医研究所 一种快速显色一步法检测美洲型高致病性猪繁殖与呼吸综合征的rt‑lamp试剂盒

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Beall et al. Characterization of a pathogenic full-length cDNA clone and transmission model for porcine epidemic diarrhea virus strain PC22A
Fernández‐Pinero et al. Molecular diagnosis of African swine fever by a new real‐time PCR using universal probe library
Greiser-Wilke et al. Diagnostic methods for detection of Classical swine fever virus—status quo and new developments
Baxi et al. A one-step multiplex real-time RT-PCR for detection and typing of bovine viral diarrhea viruses
CN103627816B (zh) 一种猪繁殖与呼吸综合征病毒的多重rt-pcr检测试剂盒及其应用
Elschner et al. Nested reverse transcriptase‐polymerase chain reaction for the detection of group A rotaviruses
Ciacci-Zanella et al. Influenza A virus infection in Brazilian swine herds following the introduction of pandemic 2009 H1N1
Yong-Feng et al. Intraspecies and interspecies transmission of mink H9N2 influenza virus
CN110878377A (zh) 非洲猪瘟病毒强弱毒荧光定量pcr鉴别诊断试剂盒
Liu et al. A generic real-time TaqMan assay for specific detection of lapinized Chinese vaccines against classical swine fever
CN107974513A (zh) 一种基于rpa的牛病毒性腹泻病毒检测试剂盒及其应用
Fulton et al. Multiple diagnostic tests to identify cattle with Bovine viral diarrhea virus and duration of positive test results in persistently infected cattle
CN103160615A (zh) 用于同时检测牛传染性鼻气管炎病毒和赤羽病毒的多重pcr引物及其设计方法
Marshall et al. Bona fide evidence for natural vertical transmission of infectious salmon anemia virus in freshwater brood stocks of farmed Atlantic salmon (Salmo salar) in Southern Chile
Zhang et al. An isothermal molecular point of care testing for African swine fever virus using recombinase-aided amplification and lateral flow assay without the need to extract nucleic acids in blood
Valdazo-González et al. Genetic and antigenic typing of border disease virus isolates in sheep from the Iberian Peninsula
Wieringa-Jelsma et al. Limited BVDV transmission and full protection against CSFV transmission in pigs experimentally infected with BVDV type 1b
Kawanishi et al. First isolation of border disease virus in Japan is from a pig farm with no ruminants
Barman et al. Classical swine fever in the pygmy hog
Lai et al. The study of antigen carrying and lesions observed in pigs that survived post African swine fever virus infection
Chiou et al. The feasibility of field collected pig oronasal secretions as specimens for the virologic surveillance of Japanese encephalitis virus
Verpoest et al. Age-and strain-dependent differences in the outcome of experimental infections of domestic pigs with wild boar pseudorabies virus isolates
Hemida The Middle East Respiratory Syndrome Coronavirus (MERS-CoV)
Socha et al. Occurrence of bovine coronavirus and other major respiratory viruses in cattle in Poland
CN105861754A (zh) 一种美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪细小病毒的多重rt-pcr检测试剂盒

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20160817

RJ01 Rejection of invention patent application after publication