CN105861711A - 罂粟种属特异性遗传标记检测体系 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种罂粟种属特异性遗传标记检测体系。本发明提供了用于鉴定罂粟的引物对组，由引物对P12(序列1和2)、引物对P13(序列3和4)、引物对P5(序列5和6)和引物对P14(序列7和8)组成。本发明同时扩增罂粟4个STR基因座，比单个基因座的扩增更加准确、快捷，在鉴别罂粟与其近缘种植物方面具有更高的种属特异性，为罂粟STR基因座的进一步研究、案件中罂粟种属的检验鉴定提供了有效的方法；本发明优化后的罂粟STR复合扩增体系中各基因座间能实现平衡扩增、灵敏度高、稳定性强，有利于检验涉毒案件中常遇到的腐败检材；本发明准确率高，不同产地的罂粟样本经检测和数据统计分析，均能得到各自4个基因座的分型。

Description

罂粟种属特异性遗传标记检测体系

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种罂粟种属特异性遗传标记检测体系。

背景技术

罂粟(Papaver somniferum L.)是一年生草本，茎高30-80厘米，分枝，叶互生，羽状深裂，裂片披针形或条状披针形，两面有糙毛，原产于西亚地区，早在六朝时，即已传入中国，并有种植，由于它是制取鸦片的主要原料，其提取物也是吗啡、蒂巴因、可待因、罂粟碱、那可丁等多种镇静剂的来源，所以被联合国禁毒公约列为世界三大毒品原植物之一。在法庭科学中，传统对它的检验主要是通过生物形态学和化学的方法，这些方法虽然可以对罂粟壳食物中生物碱的残留进行检测，适用范围也比较广，但是检测对象仅为各种生物碱，不能对罂粟幼苗及植株物种来源进行明确定性，所以为了更好的进行罂粟种属鉴定，需要尝试寻求新的更好的方法来解决这一问题。近年来随着分子生物学的快速发展，用DNA检验技术对罂粟进行分子水平的鉴定成为法庭科学研究的热点和新技术方法。

RAPD即随机扩增多态性DNA标记，是建立在PCR基础之上的一种可对整个未知序列基因组进行多态性分析的分子技术。它采用人工合成的含有9-10个碱基的随机序列组成的寡核酸做引物，通过PCR扩增获得长度不同的多态性DNA片断。RAPD形成的遗传基础是：在DNA等位区域内，因引物靶序列发生点突变，使扩增子(两个反向聚合的引物靶序列之间的DNA区域)丢失，产生显性的RAPD，或因扩增子内发生序列的插入、缺失突变，产生共显性的RAPD。个体的模板不同，其扩增产物就不同。在关于罂粟的研究中，2006年路帆等人使用TD-RAPD技术对罂粟品种鉴别进行初探，从10个随机引物中筛选出扩增良好，带型清晰的6对引物。2004年Parmaksiz等用15对RAPD引物对53份植物样本进行分析，扩增产生的84.3％的条带具有多态性，基于53个植物样本的聚类分析发现两个集群。2009年Acharya等用12对引物对来自美国的24份罂粟种子进行RAPD方法分析并构建了含有两个集群的聚类图。

但是由于RAPD方法对模板DNA要求较高，且随机引物的片段较短，扩增产物的稳定性和重复性欠佳，检测费用较高，费时费事，所以在法庭科学实际工作中很难作为常规检测方法。

AFLP检测技术是RAPD和RFLP技术相结合的产物，该技术的原理是对基因组DNA限制性酶切片段进行选择性扩增，它具有多态性强、不需要预先知道目标基因组序列、DNA模板浓度宽容度大、谱带清晰，实验稳定性好等优点。在关于罂粟的研究中，2001年James A.Saunders利用AFLP标记对40份罂粟和两种其他物种(P.bracteatumLindley and P.setigerum DC.)进行鉴别，研究表明AFLP是一种可靠有效可用于罂粟种属鉴别的分子标记。2002年Straka等构建了含有77个AFLP和个48RAPD标记的罂粟基因连锁图谱。2008年Dittbrenner等采用AFLP技术对300份罂粟进行遗传多样性分析，结果发现了两类不同的罂粟亚种，这是目前最为广泛的研究。同年国内路帆等利用荧光AFLP检测技术对原产于缅甸和中国云南昆明市宜良县罂粟植株DNA进行了检测，从64对选择性扩增引物中筛选出了8对在两国罂粟植株DNA中均具有高度多态的选择性扩增产物，结果表明荧光AFLP技术可用于罂粟DNA多态性的检测，同时他们用6对引物分别对罂粟、大麻、虞美人进行AFLP检测，结果6对引物分别在罂粟、大麻和虞美人样本中检出27-46、5-20、4-31条扩增片段，种属间存在明显差异，表明该6对引物可适用于大麻和虞美人DNA的AFLP种属鉴定，为罂粟和大麻毒品原植物的鉴定提供了依据。但由于AFLP技术存在操作繁琐，费时费力，不便进行数据统计和对比等不足，所以AFLP也一般被用于标记的筛查等。

短串联重复序列STR是由2-6bp的核心序列串联重复多次组成的寡核苷酸序列，它是近十多年发展起来的以特异引物PCR为基础的新兴分子遗传标记技术，微卫星中重复单位的数目存在高度变异，表现为微卫星数目的整倍性变异或重复单位序列中的序列有可能不完全相同，将微卫星侧翼保守序列克隆、测序，人工合成引物进行PCR扩增，扩增出单个微卫星位点，具有多态性。

通过序列信息进行STR标记开发主要分两方面，即从BAC末端、基因间序列等非编码序列及从EST等编码序列中开发，前者称为基因组STR，后者称为EST-STR，由于转录区的DNA序列保守型较强，EST-STR的多态性一般低于基因组STR。

当前STR标记被广泛应用到法庭科学实践中进行个体识别和亲子鉴定。也有部分法庭科学家尝试利用STR标记对植物DNA进行分析的报道。2008年国内徐小玉等已经用自行设计的罂粟EST-SSR引物成功确定实际案件中的可疑种子为罂粟籽，为案件的定性提供了线索。2011年Eun Jung Lee等开发了22对罂粟EST-SSR标记引物，通过对135个罂粟样本和7个近缘种属样本(5个罂粟属和2个花菱草属)检测，筛选出多态性的6对引物，其中2对引物可在近缘物种间通用。2013年Selale等用37个罂粟样本和7个近缘种样本对67对EST–SSR标记引物进行检测，其中65对引物的多态性和有效性得以证实。在两者的研究中罂粟EST-SSR标记均显示出低水平的基因多态性，并且部分EST-SSR标记在罂粟近缘种植物间是可通用的。2014年Ibrahim Celik等通过第二代焦磷酸测序技术开发罂粟基因组SSR标记，53个基因组SSR标记被检测于37个罂粟样本和7个罂粟近缘种样本中，这些标记在近缘种间通用性达到88％以上。以上研究成果大大丰富了罂粟SSR标记的数量，为将SSR标记进一步应用于法庭科学领域对罂粟的种属鉴别提供了理论依据。STR技术的优势在于基因座位点丰富、多态性较高、结果稳定，检测可实现自动化，节省时间和人力，而目前国内外关于罂粟的STR复合扩增体系的研究仍处于空白。

发明内容

有鉴于此，为实现在分子生物学水平上对罂粟种属进行鉴别，填补国内外罂粟STR复合扩增体系研究的空白，发明了这一简便、快速、高效的罂粟STR荧光复合扩增检测体系。

本发明的第一个目的是提供一种用于鉴定罂粟的引物对组。

本发明所提供的用于鉴定罂粟的引物对组由引物对P12、引物对P13、引物对P5和引物对P14共4个引物对组成：

所述引物对P12由序列表中序列1所示的单链DNA分子和序列表中序列2所示的单链DNA分子组成；

所述引物对P13由序列表中序列3所示的单链DNA分子和序列表中序列4所示的单链DNA分子组成；

所述引物对P5由序列表中序列5所示的单链DNA分子和序列表中序列6所示的单链DNA分子组成；

所述引物对P14由序列表中序列7所示的单链DNA分子和序列表中序列8所示的单链DNA分子组成。

在所述引物对组中，所述引物对P5、所述引物对P12、所述引物对P13和所述引物对P14的摩尔比具体可为10：8：1：2；所述引物对组中，每个引物对中的两条引物之间的摩尔比具体可为1：1。

上述引物对组中，每个引物对中的一条引物均标记荧光基团。根据本发明涉及的如上4个引物对对应的罂粟基因组扩增产物的大小，将所述引物对P12和所述引物对P13划为一组，每个引物对中的一条引物均标记荧光基团A；将所述引物对P5和所述引物对P14划为另一组，每个引物对中的一条引物均标记荧光基团B；所述荧光基团A和所述荧光基团B为不同颜色的荧光基团。

更加具体的，在本发明中，所述荧光基团A为FAM；所述荧光基团B为HEX。

本发明的第二个目的是提供一种用于鉴定罂粟的PCR试剂。

本发明所提供的用于鉴定罂粟的PCR试剂含有所述引物对组。

在上述PCR试剂中，所述引物对P5中各条引物在所述PCR试剂中的终浓度均可为1μmol/L；所述引物对P12中的各条引物在所述PCR试剂中的终浓度均可为0.8μmol/L；所述引物对P13中的各条引物在所述PCR试剂中的终浓度均可为0.1μmol/L；所述引物对P14中的各条引物在所述PCR试剂中的终浓度均可为0.2μmol/L。

本发明的第三个目的是提供一种用于鉴定罂粟的PCR试剂盒。

本发明所提供的用于鉴定罂粟的PCR试剂盒，含有所述引物对组或所述PCR试剂。

当然，所述PCR试剂盒中还可含有其他PCR常规试剂和/或耗材，如PCR扩增缓冲液、DNA聚合酶、dNTP、PCR管等。

所述引物对组或所述PCR试剂或所述PCR试剂盒在鉴定罂粟中的应用也属于本发明的保护范围。

所述引物对组或所述PCR试剂在制备鉴定罂粟的产品中的应用也属于本发明的保护范围。

所述引物对组或所述PCR试剂或所述PCR试剂盒在鉴定待测样本中是否含有罂粟中的应用也属于本发明的保护范围。

所述引物对组或所述PCR试剂在制备鉴定待测样本中是否含有罂粟的产品中的应用也属于本发明的保护范围。

本发明的第四个目的是提供一种检测或辅助检测待测样本是否为罂粟或是否含有罂粟的方法。

本发明所提供的检测或辅助检测待测样本是否为罂粟或是否含有罂粟的方法，具体可包括如下步骤：检测待测样本中是否含有靶标序列1、靶标序列2、靶标序列3和靶标序列4，根据检测结果按照如下确定所述待测样本是否为罂粟或是否含有罂粟：若所述待测样本中同时含有所述靶标序列1、所述靶标序列2、所述靶标序列3和所述靶标序列4，则所述待测样本为或候选为罂粟，或者含有或候选含有罂粟；若所述待测样本中不同时含有所述靶标序列1、所述靶标序列2、所述靶标序列3和所述靶标序列4，则所述待测样本不为或候选不为罂粟，或者不含有或候选不含有罂粟；

所述靶标序列1为以罂粟基因组DNA为模板，采用所述引物对P12进行PCR扩增所得的片段；所述靶标序列2为以罂粟基因组DNA为模板，采用所述引物对P13进行PCR扩增所得的片段；所述靶标序列3为以罂粟基因组DNA为模板，采用所述引物对P5进行PCR扩增所得的片段；所述靶标序列4为以罂粟基因组DNA为模板，采用所述引物对P14进行PCR扩增所得的片段。

在本发明中，所述方法具体包括如下步骤：

(a)用所述引物对组中的所述4个引物对共同对待测样本的基因组DNA进行STR复合扩增，得到扩增产物；

(b)检测所述扩增产物，根据检测结果按照如下确定所述待测样本是否为罂粟或是否含有罂粟：若所述扩增产物满足如下1)-4)全部标准，则所述待测样本为或候选为罂粟，或者含有或候选含有罂粟；若所述扩增产物不满足如下1)-4)全部标准，则所述待测样本不为或候选不为罂粟，或者不含有或候选不含有罂粟；

1)含有显所述荧光基团A的荧光颜色且大小为242-244bp的等位基因片段；

2)含有显所述荧光基团A的荧光颜色且大小为182-184bp的等位基因片段；

3)含有显所述荧光基团B的荧光颜色且大小为165-167bp的等位基因片段；

4)含有显所述荧光基团B的荧光颜色且大小为210-212bp和222-224bp的两个等位基因片段。

更加具体的，在本发明中，所述荧光基团A为FAM；所述荧光基团B为HEX。

在所述方法中，所述STR复合扩增反应的退火温度为56.5℃。

更加具体的，所述STR复合扩增反应的条件为：95℃初始变性15分钟；94℃变性30秒钟，56.5℃退火30秒钟，72℃延伸30秒钟，28个循环；72℃终延伸10分钟；4℃保温。

本发明的检验系统适合于中国范围内种植的罂粟。

实验证明，本发明有如下优点：

1、同时扩增罂粟4个STR基因座，比单个基因座的扩增更加准确、快捷，在鉴别罂粟与其近缘种植物方面具有更高的种属特异性，为罂粟STR基因座的进一步研究、案件中罂粟种属的检验鉴定提供了有效的方法；

2、优化后的罂粟4对引物扩增体系能实现平衡扩增、具有高灵敏度和稳定性，利于检验涉毒案件中经常遇到的腐败检材；

3、准确率高,采自不同产地的罂粟样本，经检测和数据分析，能够得到各自在4个基因座上的分型。

附图说明

图1为对罂粟STR 4plex荧光复合体系进行优化前后的扩增效果图。其中，A为优化前；B为优化后。

图2为罂粟STR 4plex荧光扩增系统的灵敏度检测结果。其中，A的模板浓度4ng/μL；B的模板浓度2ng/μL；C的模板浓度1ng/μL；D的模板浓度为0.5ng/μL；E的模板浓度为0.25ng/μL；F的模板浓度为0.1ng/μL。

图3为罂粟STR 4plex荧光扩增系统的组织同一性检测结果。其中，A为罂粟的花；B为罂粟的茎；C为罂粟的叶；D为罂粟的籽。

图4为罂粟STR 4plex荧光扩增系统的种属特异性检测结果。其中，A为罂粟；B为东方罂粟；C为虞美人；D为冰岛虞美人；E为白屈菜；F为烟草；G为大麻；H为桑；I为麦；J为草果；K为茶叶；L为蝴蝶兰；M为核桃。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1、STR复合扩增引物设计

1、设计原则

依据下列原则筛选合适的罂粟STR基因座：

(1)基因座的重复序列简单，重复单位为二、三、四或五核苷酸的基因座；

基因座的扩增片段大小在90～400bp之间，为了防止基因座之间出现重叠，相同荧光组合的基因座之间至少应有9～10bp的间隔；

(2)基因座突变率低、多态性好，保证检测结果的稳定性和可靠性；

(3)各个基因座的引物必须具有兼容性即引物不相互作用，特别是引物3’端不能出现互补序列；因为基因座的引物间的特殊序列发生相互作用如出现引物二聚体、发卡结构时会产生非特异性条带或额外带，使产物量下降，甚至是无扩增产物；

(4)各基因座引物长短适中，具有相似的物理特性和反应动力学特点、扩增效率高。复合扩增各个基因座之间的扩增效率的平衡是通过调节引物的浓度来达到一致的；所以尽量选择扩增效率高的基因座，在调节平衡的时候引物浓度的变动范围就比较宽松，从而为扩增效率相对较低的基因座引物的浓度调节提供空间。

(5)基因座必须具有高度的种属特异性。

2、STR复合扩增引物

根据上述基因座设计原则，自行设计出4个罂粟STR基因座的4个引物对P5、P12、P13、P14，通过多引物配对软件AutoDimer version1.0对获得的4对引物进行发卡结构及二聚体的配对分析，设置Minimum SCORE(指两个引物间互补配对的碱基对数减去错配的碱基对数所得到的值)为7，结果表明引物间无稳定的二聚体或者发卡结构，扩增效率高，灵敏度强，引物序列如表1所示。

表1为STR复合扩增引物序列

上述P12、P13的上游引物FAM荧光标记，P5、P14的上游引物HEX荧光标记。引物序列由上海英潍捷基公司和上海生工生物工程公司合成，带修饰的引物序列一律采用HPLC纯化方式进行纯化，未经修饰的引物序列采用PAGE方式纯化。

实施例2、STR复合扩增引物在罂粟种属特异性鉴定中的应用

1、基因组DNA的提取

分别提取罂粟样本的花、茎、叶和种籽的基因组DNA。

2、STR复合扩增体系的优化

以罂粟叶的基因组DNA为模板，将引物对P5、P12、P13、P14混合进行PCR扩增，并对扩增体系和反应条件进行优化，具体如下：

优化前扩增体系如表2所示：

表2优化前扩增体系

优化前STR复合扩增反应条件如下：

初始变性条件：92-96℃，5-11分钟；

变性条件：91-97℃，30秒钟-2分钟；

退火条件：53-62℃，30秒钟-2分钟；

延伸条件：65-75℃，30秒钟-1分钟；

循环参数：25-30个循环；

终延伸：65-72℃，25-60分钟；

保温：4℃维持。

优化后扩增体系如表3所示。

表3为优化后扩增体系

优化后反应条件为：

初始变性条件：95℃，15分钟；

变性条件：94℃，30秒钟；

退火条件：56.5℃，30秒钟；

延伸条件：72℃，30秒钟；

循环条件：28次

终延伸条件：72℃，10分钟；

保温：4℃维持。

优化前后复合扩增体系结果见图1所示，可以看出，优化前复合扩增体系扩增不平衡，出现基因座的丢失并有较多的非特异性峰和杂带，优化后的复合体系得到了4个基因座的完整等位基因片段，扩增图谱清晰明确，具有良好的平衡性与稳定性。P5基因座得到的165-167bp等位基因片段，P12基因座得到242-244bp的等位基因片段，P13基因座得到182-184bp的等位基因片段，P14基因座得到210-212bp和222-224bp的等位基因片段。

P5、P12、P13、P14扩增产物为罂粟特异基因座片段，可用这4对引物对检测待测样本是否为罂粟或者是否含有罂粟，具体方法如下：

用4个引物对组成的复合扩增体系共同对待测样本进行STR复合扩增，检测扩增产物，若扩增产物满足如下1)～4)全部标准，则待测样本为罂粟或者含有罂粟；若扩增产物不满足如下1)～4)全部标准，则待测样本不为罂粟或者不含有罂粟；

所述标准为：

1)含有显FAM基团颜色且大小为242-244bp的等位基因片段；

2)含有显FAM基团颜色且大小为182-184bp的等位基因片段；

3)含有显HEX基团颜色且大小为165-167bp的等位基因片段；

4)含有显HEX基团颜色且大小为210-212bp和222-224bp的等位基因片段。

因此，选用优化后反应体系和优化后反应条件为最佳反应体系和条件，进行后期实验。

3、灵敏度检测

将罂粟叶基因组DNA依次稀释为4ng/μL、2ng/μL、1ng/μL、0.5ng/μL、0.25ng/μL、0.1ng/μL，用表1中的4对罂粟STR复合扩增引物按照最佳反应体系和最佳反应条件分别进行PCR扩增。

结果如图2所示，满足上述步骤2中所述的标准，该体系的最小检出量为0.1ng/μL，说明其灵敏度为0.1ng/μL。

进一步，用0.05ng/μL作为模板，进行反复试验，结果无法得到可辨认的STR荧光图谱。

4、组织同一性检测

将罂粟样本花、茎、叶和种籽的基因组DNA 2ng/μL，用4对罂粟STR复合扩增引物按照最佳反应体系和最佳反应条件分别进行PCR扩增。

结果如图3所示，可以看出，该体系具有良好的组织同一性。

5、种属特异性

选择基因座时很重要的一方面就是要考虑该基因座是否有良好的种属特异性，对本体系来说就是检验建立的罂粟4个基因荧光复合扩增检测体系能否区分罂粟与其他植物检材，达到对罂粟准确鉴别鉴定的目的。

在植物学分类中，罂粟(Papaver somniferum L.)属被子植物门双子叶植物纲罂粟目罂粟科罂粟属罂粟种，其与大麻、烟草属于同一纲，与白屈菜于同一亚科、与东方罂粟、虞美人、冰岛虞美人属于同一属，而且从形态上很难鉴别。而且在某些毒品案件中，烟草经常被掺杂在罂粟植物毒品中，或者用烟草做掩护来掩盖罂粟。此外，茶叶等常见的经济作物也可能被用来掩盖贩毒，也需要鉴别。

分别提取罂粟、东方罂粟、虞美人、冰岛虞美人、白屈菜、烟草、大麻、桑、麦、草果、茶叶、蝴蝶兰、核桃等的基因组DNA，用上述最佳反应体系和反应条件进行PCR扩增。

结果如图4所示，罂粟的扩增产物含有显FAM基团颜色且大小为242-244bp的等位基因片段；含有显FAM基团颜色且大小为182-184bp的等位基因片段；含有显HEX基团颜色且大小为165-167bp的等位基因片段；含有显HEX基团颜色且大小为210-212bp和222-224bp的等位基因片段；满足上述4种全部标准。

而其余检测的植物均不满足上述4种全部标准，在这些非罂粟植物中对应基因片段没有出现属于罂粟的特异基因片段。

其中东方罂粟的扩增产物含显HEX基团颜色且大小为169bp和205bp的等位基因片段；

其中虞美人和冰岛虞美人的扩增产物含显HEX基团颜色且大小为208bp的等位基因片段；

上述结果表明，本发明的引物及方法可以特异检测罂粟，并将能将其与同为罂粟属的近缘物种东方罂粟、虞美人、冰岛虞美人准确区分开。

Claims (10)

1.一种用于鉴定罂粟的引物对组，由引物对P12、引物对P13、引物对P5和引物对P14共4个引物对组成：

所述引物对P12由序列表中序列1所示的单链DNA分子和序列表中序列2所示的单链DNA分子组成；

所述引物对P13由序列表中序列3所示的单链DNA分子和序列表中序列4所示的单链DNA分子组成；

所述引物对P5由序列表中序列5所示的单链DNA分子和序列表中序列6所示的单链DNA分子组成；

所述引物对P14由序列表中序列7所示的单链DNA分子和序列表中序列8所示的单链DNA分子组成。

2.根据权利要求1所述的引物对组，其特征在于：所述引物对组中，所述引物对P5、所述引物对P12、所述引物对P13和所述引物对P14的摩尔比为10：8：1：2；和/或

所述引物对组中，每个引物对中的两条引物之间的摩尔比为1：1。

3.根据权利要求1或2所述的引物对组，其特征在于：所述引物对P12和所述引物对P13中每个引物对中的一条引物均标记荧光基团A；所述引物对P5和所述引物对P14中每个引物对中的一条引物均标记荧光基团B；所述荧光基团A和所述荧光基团B为不同颜色的荧光基团；

具体的，所述荧光基团A为FAM；所述荧光基团B为HEX。

4.一种用于鉴定罂粟的PCR试剂，含有权利要求1-3中任一所述的引物对组。

5.根据权利要求4所述的PCR试剂，其特征在于：

所述引物对P5中各条引物在所述PCR试剂中的终浓度均为1μmol/L；

所述引物对P12中的各条引物在所述PCR试剂中的终浓度均为0.8μmol/L；

所述引物对P13中的各条引物在所述PCR试剂中的终浓度均为0.1μmol/L；

所述引物对P14中的各条引物在所述PCR试剂中的终浓度均为0.2μmol/L。

6.一种用于鉴定罂粟的PCR试剂盒，含有权利要求1-3中任一所述的引物对组或权利要求4或5所述的PCR试剂。

7.权利要求1-3中任一所述的引物对组或权利要求4或5所述的PCR试剂或权利要求6所述的PCR试剂盒在鉴定罂粟中的应用；或

权利要求1-3中任一所述的引物对组或权利要求4或5所述的PCR试剂在制备鉴定罂粟的产品中的应用。

8.权利要求1-3中任一所述的引物对组或权利要求4或5所述的PCR试剂或权利要求5所述的PCR试剂盒在鉴定待测样本中是否含有罂粟中的应用；或

权利要求1-3中任一所述的引物对组或权利要求4或5所述的PCR试剂在制备鉴定待测样本中是否含有罂粟的产品中的应用。

9.一种检测或辅助检测待测样本是否为罂粟或是否含有罂粟的方法，包括如下步骤：检测待测样本中是否含有靶标序列1、靶标序列2、靶标序列3和靶标序列4，根据检测结果按照如下确定所述待测样本是否为罂粟或是否含有罂粟：若所述待测样本中同时含有所述靶标序列1、所述靶标序列2、所述靶标序列3和所述靶标序列4，则所述待测样本为或候选为罂粟，或者含有或候选含有罂粟；若所述待测样本中不同时含有所述靶标序列1、所述靶标序列2、所述靶标序列3和所述靶标序列4，则所述待测样本不为或候选不为罂粟，或者不含有或候选不含有罂粟；

所述靶标序列1为以罂粟基因组DNA为模板，采用权利要求1-3中任一所述引物对中的所述引物对P12进行PCR扩增所得的片段；所述靶标序列2为以罂粟基因组DNA为模板，采用权利要求1-3中任一所述引物对中的所述引物对P13进行PCR扩增所得的片段；所述靶标序列3为以罂粟基因组DNA为模板，采用权利要求1-3中任一所述引物对中的所述引物对P5进行PCR扩增所得的片段；所述靶标序列4为以罂粟基因组DNA为模板，采用权利要求1-3中任一所述引物对中的所述引物对P14进行PCR扩增所得的片段。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：

(a)用权利要求1-3中任一所述引物对组中的所述4个引物对共同对待测样本的基因组DNA进行STR复合扩增，得到扩增产物；

(b)检测所述扩增产物，根据检测结果按照如下确定所述待测样本是否为罂粟或是否含有罂粟：若所述扩增产物满足如下1)-4)全部标准，则所述待测样本为或候选为罂粟，或者含有或候选含有罂粟；若所述扩增产物不满足如下1)-4)全部标准，则所述待测样本不为或候选不为罂粟，或者不含有或候选不含有罂粟；

1)含有显所述荧光基团A的荧光颜色且大小为242-244bp的等位基因片段；

2)含有显所述荧光基团A的荧光颜色且大小为182-184bp的等位基因片段；

3)含有显所述荧光基团B的荧光颜色且大小为165-167bp的等位基因片段；

4)含有显所述荧光基团B的荧光颜色且大小为210-212bp和222-224bp的两个等位基因片段。