CN105832797B - 白术提取物在制备抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌药物方面的应用 - Google Patents

白术提取物在制备抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌药物方面的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种白术提取物及其在抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌方面应用，涉及中药医疗领域，该提取物的制备方法为取白术药材或饮片粉碎清洗后，浸泡，离心，烘干，加入过氧化氢水溶液搅拌后，滤取白术处理粉末，烘干，在白术处理粉末中掺入抗坏血酸，用乙醇溶液先超声微波提取，再回流提取，抽滤，回收滤液，过0.2μm微滤膜进行微滤澄清，滤液减压浓缩，经过体内外实验证明，所述白术提取物可以单独用于抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌也可以用于抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌方面的抗生素的增敏剂。

Description

白术提取物在制备抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌药物方面的 应用
技术领域
本发明涉及中药医疗领域，具体涉及一种白术提取物及其在抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌方面应用。
背景技术
白术为菊科植物白术的干燥根茎。白术中含有多糖、苍术酮、白术内酯、挥发油、氨基酸及树脂等成分，其对调节胃肠运动、调节免疫、抗肿瘤、抗氧化、延缓衰老都具有一定的药理作用。白术非极性部位提取物，包括挥发油，具有很强的生物活性，目前主要用于制成抗肿瘤的药物或保健品等，还少有用于抑菌治疗方面的报道。
申请号为201510770416.6的发明申请公开了“具有抗帕金森作用的白术内酯提取物、制备方法及其应用，提取出白术中的有效成分白术内酯用于治疗帕金森，其中加入了双氧水对白术进行氧化，用锌粒保护氧化的产物，这种提取白术内酯的方法有可取之处，但是，并没有考虑到双氧水易挥发，高温易分解，分解产物为大量的氧气具有危险性等问题，而锌粒在提取物中虽然起到保护作用，但是由于锌粒为固体，在提取过程中容易堵塞提取管道，不方便流动，也没有其他影响功效，使用不方便，如需使用，需要对该方法进行改进。
金黄色葡萄球菌是临床十分常见的病原菌之一，自1961年研究人员首次分离出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)以来，其临床检出率逐年上升，20世纪80年代后期已成为全球性的病原菌，居于医院感染病原菌首位。由其引起的感染与乙型肝炎、艾滋病并列为世界范围内的三大难以解决的感染性疾病。由于其致病力强，传播速度快，常出现多重耐药性，在医院内播散可导致病区内的暴发流行。当人体抵抗力低下时趁虚而入，对人体组织器官造成化脓性炎症甚至会引起脑膜炎、心内膜炎和败血症等危重的致死性疾病。尤其是近几年来，对糖肽类抗生素万古霉素和替考拉宁的敏感性降低，因此十分迫切的需要研发可替代抗生素的药物。
中草药治疗细菌性感染疾病，其最大的优点就是不易产生耐药性，并且中药的毒副作用较小，抑菌作用广泛，被机体吸收后能够增进机体抵抗病原微生物的能力。虽然对治疗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染的药物中含有白术，但是对于采用不同的提取方法从白术得到提取物也是不同的。使用本发明的提取方法得到白术提取物对金黄色葡萄球菌进行摸索性的体内外的抑菌研究，期望白术提取物未来可以抗菌药物治疗金黄色葡萄球菌引起的疾病。
发明内容
本发明所要解决的问题是提供一种白术提取物及其在抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌方面应用。
为了实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种白术提取物，该提取物的制备方法包括：
(1)取白术药材或饮片粉碎过60目筛，20-30℃条件下用双蒸水冲洗干净，离心得到固体，并加入双蒸水浸泡6-12h，再离心后，得到的固体经恒温箱内干燥，温度控制在40-50℃，得到白术粉末；
(2)室温下，向白术粉末中加入1-3倍体积的过氧化氢水溶液和 0.1-0.5％的焦磷酸钠搅拌0.5-1h后，抽滤滤取白术处理粉末；
(3)将步骤(2)中得到的白术处理粉末置于通风橱内用紫外灯进行照射，连续照射10次，每次1-3min，每次照射后对白术处理粉末进行翻摊；
(4)将步骤(3)中的得到的粉末通过减压干燥的方法在真空干燥箱中进行烘干，烘干的温度为40-50℃；
(5)在白术处理粉末中掺入10-20％抗坏血酸，加入1-2倍30-50％乙醇溶液进行超声微波提取10-30min，功率为200-300W；
(6)将步骤5中所得到的提取液可采用色谱法、回流法进行分离纯化；
具体提取步骤如下：
色谱法：将提取液过聚酰胺树脂柱，依次用2-4倍柱体积的水、 3-5倍柱体积的20％-40％乙醇、2-3倍柱体积的60％-90％乙醇洗脱，控制洗脱液流速为1-2倍柱体积/h；合并洗脱液。
回流法：将提取液用5-12倍30-50％乙醇溶液60-70℃回流提取 6-8h，抽滤，回收滤液。
(7)将步骤6中得到白术提取液可采用低温重结晶法、减压浓缩法得到最终的白术提取物。
具体提取步骤如下：
低温重结晶法：加入1-2倍体积的加热至沸腾的乙醇，加到白术提取液中，用冰水冷却乙醇，有结晶析出，过滤，收集析出的晶体，得到白术提取物。
减压浓缩法：将白术提取液用0.2μm微滤膜进行微滤澄清，将分离液减压浓缩，冷冻干燥，得到白术提取物。
优选的，该提取物的最优制备方法：
(1)取白术药材或饮片粉碎过60目筛，25℃条件下用双蒸水冲洗干净，离心得到固体，并加入双蒸水浸8h，再离心后，得到的固体经恒温箱内干燥，温度控制在40℃，得到白术粉末；
(2)室温下，向白术粉末中加入3倍体积的过氧化氢水溶液和 0.2％的焦磷酸钠搅拌1h后，抽滤滤取白术处理粉末；
(3)将步骤(2)中得到的白术处理粉末置于通风橱内用紫外灯进行照射，连续照射10次，每次2min，每次照射后对白术处理粉末进行翻摊；
(4)将步骤(3)中的得到的粉末通过减压干燥的方法在真空干燥箱中进行烘干，烘干的温度为40℃；
(5)在白术处理粉末中掺入10％抗坏血酸，加入2倍40％乙醇溶液进行超声微波提取30min，功率为300W；
(6)12倍40％乙醇溶液65℃回流提取6h，抽滤，回收滤液；
(7)将白术提取液用0.2μm微滤膜进行微滤澄清，将分离液减压浓缩，冷冻干燥，得到白术提取物。
优选的，所述白术提取物可为口服制剂或者皮肤外用制剂。
优选的，这种白术提取物可应用于抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌方面。
优选的，所述白术提取物的研究方法包括体外抑菌实验和动物实验。
优选的，所述体外抑菌实验包括采用牛津杯法测定抗菌活性,采用二倍稀释法测定最低抑菌浓度MIC。
优选的，所述动物实验采用豚鼠中耳炎模型。
优选的，所述白术提取物可以单独用于抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。
优选的，所述白术提取物可以用于抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌方面的抗生素的增敏剂。
优选的，所述抗生素为氧氟沙星。
本发明的有益效果在于：本发明的优点之一在于公开白术提取物的提取制备方法，本发明采用对白术进行先氧化再保护氧化产物的方法提高白术中白术内酯的含量，选用乙醇水溶液进行提取其中有效成分，而不是乙酸乙酯、石油醚这样的有机溶剂，这样的提取方法投入市场时，既可以单独投入处理好的白术中药，这种具有较便宜，药效提高的优点，也可以制成西药剂型，这种具有虽然价格较高，但方便使用，剂型的安全性高的优点，通过这样的处理实现了中药方剂和西药中的剂型的合理融合，灵活性大，可调节性强。
其中，加双蒸水浸泡，可以去除部分多糖，提高白术提取物的纯度，另外过氧化氢水溶液的使用可将白术中的苍术酮等物质氧化成白术内酯类化合物，针对过氧化氢存在易挥发，高温易分解，分解产物为大量的氧气具有危险性等缺点，在氧化反应过程中加入常用的食品添加剂焦磷酸钠，在反应中起到稳定剂的作用，在氧化后，通风条件下用紫外灯短波照射分解多余的过氧化氢同时对白术进行二次氧化，提高产率，同时过氧化氢水溶液还具有杀菌消毒的作用，特别是作为中药进行市场投放时，可以减少长期放置的白术的微生物的滋生。
通过天然的抗氧化剂抗坏血酸保护生成的白术提取物，使其避免被进一步氧化而降解，抗坏血酸为水溶性的维生素，安全可靠，直接添加在白术提取物中，无需二次处理，也可以增强人体的抵抗力，过量使用可以通过血液循环排出，不会影响人体的健康。
优点之二在于研究白术提取物在抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌方面的体内外作用，并对提取物中的细节进行优化，意图开发出更高活性的提取物用于抗菌抗炎方面。
优点之三在于研究白术提取物对其他药物抗菌的增敏效果，减少西药的使用量，减少其副作用，同时也克制现在抗生素滥用所致的细菌耐药性。
为使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。
附图说明
图1为实施例6中白术提取物对MRSA致中耳炎模型豚鼠中耳腔内金黄色葡萄球菌含量的影响；
图2为实施例7中白术提取物对MRSA致中耳炎模型豚鼠中耳腔内金黄色葡萄球菌含量的影响；
图3为实施例8中白术提取物对MRSA致中耳炎模型豚鼠中耳腔内金黄色葡萄球菌含量的影响。
具体实施方式
实施例1：
制备白术提取物
(1)取300g白术药材或饮片(合肥百姓缘大药房提供)粉碎过 60目筛，25℃条件下用双蒸水冲洗干净，离心得到固体，并加入双蒸水浸泡12h，再离心后，得到的固体经恒温箱内干燥，温度控制在 45℃，得到白术粉末；
(2)室温下，向白术粉末中加入3倍体积的过氧化氢水溶液和 0.1％的焦磷酸钠搅拌0.5h后，抽滤滤取白术处理粉末；
(3)将步骤(2)中得到的白术处理粉末置于通风橱内用紫外灯进行照射，连续照射10次，每次2min，每次照射后对白术处理粉末进行翻摊；
(4)将步骤(3)中的得到的粉末通过减压干燥的方法在真空干燥箱中进行烘干，烘干的温度为45℃；
(5)在白术处理粉末中掺入20％抗坏血酸，加入2倍50％乙醇溶液进行超声微波提取20min，功率为250W；
(6)12倍50％乙醇溶液70℃回流提取7h，抽滤，回收滤液；
(7)将白术提取液用0.2μm微滤膜进行微滤澄清，将分离液减压浓缩，冷冻干燥，得到白术提取物，所得的白术提取物的收率为 6.45％。
实施例2：
制备白术提取物
(1)取300g白术药材或饮片(合肥百姓缘大药房提供)粉碎过 60目筛，25℃条件下用双蒸水冲洗干净，离心得到固体，并加入双蒸水浸8h，再离心后，得到的固体经恒温箱内干燥，温度控制在40℃，得到白术粉末；
(2)室温下，向白术粉末中加入3倍体积的过氧化氢水溶液和 0.2％的焦磷酸钠搅拌1h后，抽滤滤取白术处理粉末；
(3)将步骤(2)中得到的白术处理粉末置于通风橱内用紫外灯进行照射，连续照射10次，每次2min，每次照射后对白术处理粉末进行翻摊；
(4)将步骤(3)中的得到的粉末通过减压干燥的方法在真空干燥箱中进行烘干，烘干的温度为40℃；
(5)在白术处理粉末中掺入10％抗坏血酸，加入2倍40％乙醇溶液进行超声微波提取30min，功率为300W；
(6)12倍40％乙醇溶液65℃回流提取6h，抽滤，回收滤液；
(7)将白术提取液用0.2μm微滤膜进行微滤澄清，将分离液减压浓缩，冷冻干燥，得到白术提取物，所得的白术提取物的收率为 9.50％。
实施例3：
制备白术提取物
(1)取300g白术药材或饮片(合肥百姓缘大药房提供)粉碎过 60目筛，25℃条件下用双蒸水冲洗干净，离心得到固体，并加入双蒸水浸8h，再离心后，得到的固体经恒温箱内干燥，温度控制在40℃，得到白术粉末；
(2)室温下，向白术粉末中加入3倍体积的过氧化氢水溶液和 0.2％的焦磷酸钠搅拌1h后，抽滤滤取白术处理粉末；
(3)将步骤(2)中得到的白术处理粉末置于通风橱内用紫外灯进行照射，连续照射10次，每次2min，每次照射后对白术处理粉末进行翻摊；
(4)将步骤(3)中的得到的粉末通过减压干燥的方法在真空干燥箱中进行烘干，烘干的温度为40℃；
(5)在白术处理粉末中掺入10％抗坏血酸，加入2倍40％乙醇溶液进行超声微波提取30min，功率为300W；
(6)将提取液过聚酰胺树脂柱，依次用3倍柱体积的水、4倍柱体积的30％乙醇、3倍柱体积的60％乙醇洗脱，控制洗脱液流速为 1.5倍柱体积/h；合并洗脱液；
(7)加入1.5倍加热至沸腾的乙醇，加到白术提取液中，用冰水冷却乙醇，有结晶析出，过滤，收集析出的晶体，得到白术提取物，所得的白术提取物的收率为8.03％。
实施例4：
抗菌活性检测
采用牛津杯法测定抗菌活性,牛津杯法的实验步骤为吸取菌悬液 0.1mL均匀涂布后，在平板上等距离放入4个经灭菌后的牛津杯，逐一加入100μL的白术提取物。37℃恒温培养24h，观察抑菌情况，用游标卡尺记录抑菌圈直径大小，结果以mm表示。各菌重复3次。其中当抑菌直径≥20为极敏感，15mm≤抑菌直径<20mm为高敏，10mm ≤抑菌直径<15mm为中敏，抑菌直径<10mm为低敏或者无效。
表1对实施例1-3中的白术提取物进行抗菌活性检测结果比较
注：选用ATCC29213作为菌液，菌液的浓度为50mg/mL
实验结果说明白术提取物可以用于治疗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染的疾病。
实施例5：
分别对实施例1-3中得到的白术提取物稀释成不同的浓度
采用二倍稀释法测定最低抑菌浓度。抑菌能力的测定以平板菌落计数法配终浓度约为0.5×107CFU/mL的菌悬液。其中，以白术提取物为例，最低抑菌浓度测定方法的具体步骤为将白术提取物分别稀释到 100、50、25、12.5、6.25、3.125、1,562、0.781、0.390、0.195mg/mL, 在每个牛津杯内加入100μL的不同浓度的稀释液，在37℃下培养 24h，观察各菌生长情况。在没有抑菌圈即菌落被完全抑制的最高稀释度提取物浓度为MIC。
表2白术提取物的最低抑菌浓度
注：“+”说明出现抑菌圈，“-”说明没有出现抑菌圈。
其中实施例1中得到最低抑菌浓度为1.562mg/mL；实施例2中得到最低抑菌浓度为0.781mg/mL；实施例3中得到最低抑菌浓度为 0.781mg/mL。
统计比较白术提取物、氧氟沙星以及和最低抑菌浓度的白术提取物混合的氧氟沙星对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度。
表3白术提取物、氧氟沙星以及和最低抑菌浓度的白术提取物混合的氧氟沙星的最低抑菌浓度
注：A1表示实施例1中的白术提取物；A2表示实施例2中的白术提取物；A3 表示实施例3中的白术提取物；B表示氧氟沙星。
结果表明：白术提取物具有抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌作用，而且白术提取物与氧氟沙星进行混合后，与氧氟沙星有协同作用，使得氧氟沙星对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌具有增敏作用，可以使得氧氟沙星的最低抑菌浓度降低。另外，通过比较实施例1、2和3，可以看到最优条件下的实施例2提取的白术提取物较实施例1和实施例 3中白术提取物药效更稳定更强效，对不同抗药性的菌种抵抗性更强。
其中，在实施列4、5中的菌株来源：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(编号为M01-10)临床分离株10株，金黄色葡萄球菌标准菌株(ATCC29213) 均有合肥艾迪康临床检验所有限公司提供并确认其耐药性。
实施例6：
中耳炎模型中对MRSA的作用
动物模型构建：选取正常健康豚鼠100只，洁净环境下，一名实验人员用双手固定豚鼠，使之不能随意摆动。另一名实验人员在耳内窥镜帮助下用注射器针头于豚鼠一侧鼓膜前下象限穿刺并注入0.1mL 菌液，2日后取中耳腔分泌物接种于LB固体培养基上，37℃培养， 24h后观察结果，若LB固体培养基上出现菌斑则造模成功。
其中，所述正常健康豚鼠，为SPF级，雌雄兼用，体重(200±20)g。模型制备前适应饲养1周，实验前24h用放大镜及手电筒检查豚鼠耳朵有无异常。金黄色葡萄球菌(批号：ATCC29213)实验前将各菌株接种于LB固体培养基，37℃培养24h后，挑选单个菌落接种于TSB液体培养基中，37℃培养18-24h，备用。
实验结果：100只实验豚鼠中91只豚鼠的中耳分泌物在LB固体培养基中均出现菌斑，菌落密集，量多，豚鼠耳鼓膜周围充血明显，有明显分泌物，炎性症状明显。在整个试验周期内，造模成功的豚鼠初期躁动不安，骚耳，耳朵中出现化脓症状，精神状态轻度萎靡不振，缺乏活力，进食量和饮水量都较少，随着药物治疗时间延长，逐渐恢复正常，精神状态有所好转，耳朵中出现结痂，进食和饮水量都有所增加。
动物模型分组给药：选取24只造模成功的豚鼠分为6组，分别为白术提取物高剂量组、白术提取物中剂量组、白术提取物低剂量组、氧氟沙星滴耳液组5g/L、万古霉素组100g/L和空白模型组，所述空白模型组中给药物质为灭菌生理盐水，进行滴耳给药，每日3次，每次1滴，连续给药7天。
其中白术提取物采用实施例1的实验方法进行提取，所述白术提取物高剂量组、白术提取物中剂量组、白术提取物低剂量组中白术提取物的剂量分别为MIC的8倍、4倍和2倍。
动物模型分组给药：选取24只造模成功的豚鼠分为6组，分别为白术提取物高剂量组、白术提取物中剂量组、白术提取物低剂量组、氧氟沙星滴耳液组5g/L、万古霉素组100g/L和空白模型组，所述空白模型组中给药物质为灭菌生理盐水，进行滴耳给药，每日3次，每次1滴，连续给药7天。
所述白术提取物高剂量组、白术提取物中剂量组、白术提取物低剂量组中白术提取物的剂量分别为MIC的8倍、4倍和2倍。
菌落计数：每天给药前用乙醇对豚鼠外耳道进行用棉棒沾取75％乙醇消毒后，用少量灭菌生理盐水清洗中耳腔，收集清洗液，稀释后均匀涂布于琼脂平板上，37℃培养24h，计数，绘制计数曲线，如图 1所示。图1中，横坐标为用药天数，纵坐标为菌落数量(单位：×103CFU/mL)。
从绘制的计数曲线中可以看出，与空白模型模型组相比，其他各模型组给药1天后，菌落数量明显下降，氧氟沙星和万古霉素组在1 天的给药后，菌落数量急速下降，与模型组比较差异有统计学意义(P ＜0.05)，而各种浓度的白术提取物组在给药的第2天，菌落数量也与模型组相比差异有统计学意义(P＜0.05)，说明与氧氟沙星和万古霉素相比，白术提取物虽然起效比较慢，但在动物体内实验中对MRSA 有效，同时从图中可以看出，不同浓度的白术提取物对MRSA控制效果也有差异，浓度越高，抑菌作用越强，可以推测白术提取物对MRSA 抗菌作用为浓度依赖性的。
实施例7：
中耳炎模型中对MRSA的作用
动物模型分组给药：选取实施例6中造模成功的24只豚鼠分为 6组，分别为白术提取物高剂量组、白术提取物中剂量组、白术提取物低剂量组、氧氟沙星滴耳液组5g/L、万古霉素组100g/L和空白模型组，所述空白模型组中给药物质为灭菌生理盐水，进行滴耳给药，每日3次，每次1滴，连续给药7天。
其中白术提取物采用实施例2的实验方法进行提取，所述白术提取物高剂量组、白术提取物中剂量组、白术提取物低剂量组中白术提取物的剂量分别为MIC的8倍、4倍和2倍。
菌落计数：每天给药前用乙醇对豚鼠外耳道进行用棉棒沾取75％乙醇消毒后，用少量灭菌生理盐水清洗中耳腔，收集清洗液，稀释后均匀涂布于琼脂平板上，37℃培养24h，计数，绘制计数曲线，如图 2所示。图2中，横坐标为用药天数，纵坐标为菌落数量(单位：×103CFU/mL)
实施例8：
中耳炎模型中对MRSA的作用
动物模型分组给药：选取实施例6中造模成功的24只豚鼠分为 6组，分别为白术提取物高剂量组、白术提取物中剂量组、白术提取物低剂量组、氧氟沙星滴耳液组5g/L、万古霉素组100g/L和空白模型组，所述空白模型组中给药物质为灭菌生理盐水，进行滴耳给药，每日3次，每次1滴，连续给药7天。
其中白术提取物采用实施例3的实验方法进行提取，所述白术提取物高剂量组、白术提取物中剂量组、白术提取物低剂量组中白术提取物的剂量分别为MIC的8倍、4倍和2倍。
菌落计数：每天给药前用乙醇对豚鼠外耳道进行用棉棒沾取75％乙醇消毒后，用少量灭菌生理盐水清洗中耳腔，收集清洗液，稀释后均匀涂布于琼脂平板上，37℃培养24h，计数，绘制计数曲线，如图 3所示。图3中，横坐标为用药天数，纵坐标为菌落数量(单位：×103CFU/mL)
显然本发明具体实现并不受上述方式的限制，只要采用了本发明的方法构思和技术方案进行的各种非实质性的改进，或未经改进将本发明的构思和技术方案直接应用于其它场合的，均在本发明的保护范围之内。

Claims (3)

1.一种白术提取物在制备抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌药物中的应用，其特征在于，该提取物的制备方法，包括：
(1)取白术药材或饮片粉碎过60目筛，25℃条件下用双蒸水冲洗干净，离心得到固体，并加入双蒸水浸8h，再离心后，得到的固体经恒温箱内干燥，温度控制在40℃，得到白术粉末；
(2)室温下，向白术粉末中加入3倍体积的过氧化氢水溶液和0.2％的焦磷酸钠搅拌1h后，抽滤滤取白术处理粉末；
(3)将步骤(2)中得到的白术处理粉末置于通风橱内用紫外灯进行照射，连续照射10次，每次2min，每次照射后对白术处理粉末进行翻摊；
(4)将步骤(3)中的得到的粉末通过减压干燥的方法在真空干燥箱中进行烘干，烘干的温度为40℃；
(5)在白术处理粉末中掺入10％抗坏血酸，加入2倍40％乙醇溶液进行超声微波提取30min，功率为300W；
(6)采用12倍40％乙醇溶液对步骤5中所得到的提取液在65℃下回流提取6h，抽滤，回收滤液；
(7)用0.2μm微滤膜对步骤6中得到的滤液进行微滤澄清，再分离液减压浓缩，冷冻干燥，得到白术提取物。
2.一种白术提取物在制备抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌抗生素增敏剂中的应用，其特征在于，
将白术提取物与抗生素进行混合，该提取物的制备方法，包括：
(1)取白术药材或饮片粉碎过60目筛，25℃条件下用双蒸水冲洗干净，离心得到固体，并加入双蒸水浸8h，再离心后，得到的固体经恒温箱内干燥，温度控制在40℃，得到白术粉末；
(2)室温下，向白术粉末中加入3倍体积的过氧化氢水溶液和0.2％的焦磷酸钠搅拌1h后，抽滤滤取白术处理粉末；
(3)将步骤(2)中得到的白术处理粉末置于通风橱内用紫外灯进行照射，连续照射10次，每次2min，每次照射后对白术处理粉末进行翻摊；
(4)将步骤(3)中的得到的粉末通过减压干燥的方法在真空干燥箱中进行烘干，烘干的温度为40℃；
(5)在白术处理粉末中掺入10％抗坏血酸，加入2倍40％乙醇溶液进行超声微波提取30min，功率为300W；
(6)采用12倍40％乙醇溶液对步骤5中所得到的提取液在65℃下回流提取6h，抽滤，回收滤液；
(7)用0.2μm微滤膜对步骤6中得到的滤液进行微滤澄清，再分离液减压浓缩，冷冻干燥，得到白术提取物。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述抗生素为氧氟沙星。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的化学研究进展;梁志远等;《贵州师范学院学报》;20130930;第29卷(第9期);第29-33页 *

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