CN105821124A - 一种大肠杆菌 o26、o45、o121血清型三重pcr检测试剂盒及其引物组 - Google Patents

一种大肠杆菌 o26、o45、o121血清型三重pcr检测试剂盒及其引物组 Download PDF

Info

Publication number
CN105821124A
CN105821124A CN201610208130.3A CN201610208130A CN105821124A CN 105821124 A CN105821124 A CN 105821124A CN 201610208130 A CN201610208130 A CN 201610208130A CN 105821124 A CN105821124 A CN 105821124A
Authority
CN
China
Prior art keywords
escherichia coli
serotype
primer
detection
pcr
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201610208130.3A
Other languages
English (en)
Inventor
王金良
沈志强
陈金龙
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Binzhou Shandong Province Animal And Veterinary Research Institute
Original Assignee
Binzhou Shandong Province Animal And Veterinary Research Institute
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Binzhou Shandong Province Animal And Veterinary Research Institute filed Critical Binzhou Shandong Province Animal And Veterinary Research Institute
Priority to CN201610208130.3A priority Critical patent/CN105821124A/zh
Publication of CN105821124A publication Critical patent/CN105821124A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/689—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/16—Primer sets for multiplex assays

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种大肠杆菌O26、O45、O121血清型检测试剂盒及其检测方法。本发明所述试剂盒3对引物组能在同一反应体系能进行有效扩增。实验表明，本发明所述含该引物组的检测试剂盒及其检测方法具有快速、敏感、特异、成本低和操作简单的特点，能较好的弥补当前大肠杆菌O26、O45、O121血清分型检测方法上的不足，可以满足当前大肠杆菌O26、O45 O121血清型分型的检测需求，易于大范围推广应用，适用于食源性致病菌的初筛选，具有广阔的市场前景和较大的经济效益。

Description

一种大肠杆菌 O26、O45、O121血清型三重PCR检测试剂盒及其引物组
技术领域
本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种大肠杆菌O26、O45、O121血清型检测试剂盒及其引物组。
背景技术
大肠埃希氏菌(Escherichiacoli)通常被称为大肠杆菌，是Escherich在1885年发现的，在相当长的一段时间内，一直被当作正常肠道菌群的组成部分，认为是非致病菌。直到20世纪中叶，才认识到一些特殊血清型的大肠杆菌对人和动物有病原性，尤其对婴儿和幼畜(禽)，常引起严重腹泻和败血症。产志贺氏毒素大肠杆菌是重要的食源性致病源，严重危害公共健康。O157:H7可以导致腹泻、出血性肠炎，尿毒血症等临床症状。近年来，产志贺毒素而非O157的大肠杆菌，尤其是被美国农业部称为“theBigSix”的6种大肠杆菌在诸多国家及地区暴发流行，严重威胁人类的健康，越来越受到世界各国的关注。“theBigSix”包括大肠杆菌O26、O45、O103、O111、O121、O145等6种血清型。
据统计，在美国由non-O157STEC引起的患病病例中，有71％是由O26、O45、O103、O111、O121、O145血清型引起的。为了保障人类的健康和牛肉市场的正常供应，2011年9月，美国农业部颁布了一项禁止出售带有大肠杆菌“theBigSix”(O26、O45、O103、O111、O121、O145)牛肉制品的法令。基于我国目前掌握的食源性疾病和风险监测资料，对高危食品(牛肉制品和即食果蔬)和高致病性血清型(O157：H7)进行了严格的规定和限量要求，但未对其他血清型的STEC作明确的要求。有助于开展大肠杆菌O26,O45,O103,O111,O121,O145血清型风险监测和风险评估的检测技术相对滞后。
大肠杆菌抗原复杂，主要有菌体抗原(O)、荚膜抗原(K)、鞭毛抗原(H)和菌毛抗原(F)等，大肠杆菌表面抗原O-抗原是刺激机体产生先天性免疫和获得性免疫的重要毒力因子，在大肠杆菌的致病性过程中起着重要的作用。针对于O抗原的传统血凝试验是检测血清型的主要方法，该方法费时、费力，PCR检测技术在大肠杆菌血清型检测过程得到发展和应用，目前国内，针对O26、O45、O121血清型多重PCR检测方法还未见报道，因此，本发明研究人员研究一种多重PCR检测方法应用于O26、O45、O121血清型的检测，该方法省时、省力、特异性和敏感性高，适用于推广应用。
本发明公开了一种大肠杆菌O26、O45、O121血清型检测试剂盒及其检测方法。本发明所述试剂盒3对引物组能在同一反应体系能进行有效扩增。现有技术中虽然也有其它检测试剂盒，但实验表明，本发明所述含该引物组的检测试剂盒及其检测方具有快速、敏感、特异、成本低和操作简单的特点，能较好的弥补当前大肠杆菌O26、O45、O121血清分型检测方法上的不足，可以满足当前大肠杆菌O26、O45、O121血清型分型的检测需求，易于大范围推广应用，适用于食源性致病菌的初筛选，具有广阔的市场前景和较大的经济效益。
发明内容
本发明要解决的技术问题寻找一种能够快速、准确、特异性和灵敏性高的大肠杆菌O26、O45、O121血清型的引物组，实现对O26、O45、O121血清型的高通量检测，并组装成试剂盒，便于推广应用。
为解决上述技术问题，本发明提供一种用于检测大肠杆菌O26、O45、O121血清型的引物组，包括以下引物，其核苷酸序列分别为：O26-F:5'-TTCAATGGGCGGAAATTTTAGAATA-3',O26-R:5'-TAATAATTTTCTCTGCCGTCGCG-3'；O45-F:5'-CTTGCAGTAACCTGCACGGGCGC-3',O45-R:5'-TAGCAGGCACAACAGCCACTACTAGGC-3'；O121-F:5'-ACTCCAACAATTGGTCGTGAAAC-3',O121-R:5'-ACAGAAAGTGTGAAATGCCCGTA-3'；
其特异性扩增的目的片段大小分别为：若电泳结果出现159bp条带为大肠杆菌O26血清型；出现241bp条带为大肠杆菌O45血清型；出现632bp条带为大肠杆菌O121血清型。
所述引物组在制备检测大肠杆菌O26、O45、O121血清型试剂盒中的应用。
4.在一些实施例中，所述大肠杆菌O26、O45、O121血清型检测试剂盒还含有商品化的2×PCR反应液试剂。
另一方面，本发明还提供所述试剂盒在用于检测大肠杆菌O26、O45、O121血清型的检测方法，大肠杆菌菌液或其DNA提取物作为模板，用所述的O抗原特异性引物进行PCR扩增，对扩增产物进行检测，电泳结果出现159bp条带为大肠杆菌O26血清型；出现241bp条带为大肠杆菌O45血清型；出现632bp条带为大肠杆菌O121血清型。
所述PCR反应体系为50μL时含有：2×PCRBuffer25μL、终浓度为10uM引物混合液5μL、模板1μL、超纯水19μL。
PCR反应参数：95℃预变性15min；95℃30s，55℃1min30s，72℃1min30s，30个循环；72℃10min。
本发明所述试剂盒在用于检测大肠杆菌O26、O45、O121血清型的方法，包括下列步骤：
1)大肠杆菌模板的制备
将待测大肠杆菌菌株菌液接种至商品化的VIB液体培养基，37℃过夜摇菌，取1mL菌液，分别用煮沸法和商品化细菌基因组提取试剂盒，进行模板制备；
2)特异性引物的制备所述的O抗原特异性引物O26-F、O26-R、O45-F、O45-R、O121-F和O121-R的使用浓度为10uM；引物稀释液置于-20℃保存备用，避免反复冻融；
3)PCR反应体系的建立和扩增
取PCR管，分别加2×PCR反应混合液25μL、引物O26-F、O26-R、O45-F、O45-R、O121-F和O121-R混合液5μL、模板1.0μL、超纯水19.0μL，混匀；PCR反应参数：95℃预变性15min；95℃30s，55℃1min30s，72℃1min30s，30个循环；72℃10min；
4)PCR检测结果判定
取10μLPCR产物，点样于1.0％琼脂糖凝胶电泳板孔中，120V电压，电泳20min，于凝胶成像系统下拍照判定，判定前提条件为阴性对照无任何条带出现，具体判定方法：电泳结果出现159bp条带为大肠杆菌O26血清型；出现241bp条带为大肠杆菌O45血清型；出现632bp条带为大肠杆菌O121血清型。
大肠杆菌经典检测技术是血清凝集试验，缺点是交叉反应多，敏感性低。本发明基于大肠杆菌O抗原基因，设计可以在同一检测体系进行以O26、O45、O121血清型大肠杆菌O抗原基因的特异性引物，采用聚合酶链反应(PCR)判定该菌大肠杆菌的血清型。所述检测试剂盒及其检测方法具有快速、敏感、特异、成本低和操作简单的特点，能较好的弥补当前大肠杆菌血清型检测方法上的不足，易于大范围推广应用，具有广阔的市场前景和较大的经济效益。
附图说明
图1大肠杆菌O26、O45、O121血清型PCR检测
图2大肠杆菌O26、O45、O121血清型PCR检测试剂盒特异性测试
图3以大肠杆菌培养物为模板的PCR检测试剂盒灵敏度测试
图4以大肠杆菌基因组DNA为模板的PCR检测试剂盒灵敏度测试
具体实施方式
下列实施例中所有的实验方法如无特殊说明，均为常规方法；所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业化途径得到。
实施例1
大肠杆菌O26、O45、O121血清型检测引物组的设计
设计的3对血清型特异性引物。根据设计的引物组分别扩增159bp、241bp和632bp的O26、O45、O121血清型特异性片段。
2.大肠杆菌O26、O45、O121血清型检测试剂盒的制备
(1)大肠杆菌模板的制备
将大肠杆菌菌株接种至VIB液体培养基，37℃增菌过夜。各取1mL菌液，制成模板备用。
(2)特异性引物的制备
本试剂盒检测的大肠杆菌O26、O45、O121血清型特异性引物扩增的目的片段大小分别为：159bp(O26)、241bp(O45)和632bp(O121)。各条引物使用浓度为10uM，引物稀释液置于-20℃保存备用，避免反复冻融；可根据如下引物序列人工合成。：O26-F:5'-TTCAATGGGCGGAAATTTTAGAATA-3',O26-R:5'-TAATAATTTTCTCTGCCGTCGCG-3'；O45-F:5'-CTTGCAGTAACCTGCACGGGCGC-3',O45-R:5'-TAGCAGGCACAACAGCCACTACTAGGC-3'；O121-F:5'-ACTCCAACAATTGGTCGTGAAAC-3',O121-R:5'-ACAGAAAGTGTGAAATGCCCGTA-3'；
(3)PCR反应体系的建立和扩增
取PCR管，取PCR管，分别加2×PCR反应混合液25μL、引物O26-F、O26-R、O45-F、O45-R、O121-F和O121-R混合液5μL、模板1.0μL、超纯水19.0μL，混匀；PCR反应参数：95℃预变性15min；95℃30s，55℃1min30s，72℃1min30s，30个循环；72℃10min；
(4)PCR检测结果判定
取10μLPCR产物，点样于1.5％琼脂糖凝胶电泳板孔中，120V电压，电泳20min，于凝胶成像系统下拍照判定，判定前提条件为阴性对照无任何条带出现。
具体判定方法：电泳结果出现159bp条带为大肠杆菌O26血清型(图1第1泳道)；出现241bp条带为大肠杆菌O45血清型(图1第2泳道)；出现632bp条带为大肠杆菌O121血清型(图1第3泳道)。
3.大肠杆菌O26、O45、O121血清型检测试剂盒的特异性和敏感性评价
本实施例中对实施例1中制备的大肠杆菌O26、O45、O121血清型检测试剂盒特异性、敏感性和重复性等主要特征分别进行了测评。
(1)试剂盒特异性试验
选取大肠杆菌O26、O45、O121、O103、O145、O113、O111、O157、O78、O101、鼠伤寒沙门氏菌(CVCC3384)、肠炎沙门氏菌(CVCC1805)、鸡白痢沙门氏菌(CVCC519)、鸭沙门氏菌(CAU0118)、禽巴氏杆菌(CVCC493)、鸡毒支原体(CVCC1651)、禽支原体(CVCC274)、金黄色葡萄球菌(CVCC543)、禽波氏菌(ATCC菌株IPDH591-77)、猪2型链球菌。按照试剂盒使用说明操作进行PCR，产物于1.5％的琼脂糖凝胶电泳鉴定。大肠杆菌O26、O45、O121可扩增到特异性条带，其它菌株的PCR结果均为阴性(如图2)，泳道1-20分别为：O26、O45、O121、O103、O145、O113、O111、O157、O78、O101、鼠伤寒沙门氏菌(CVCC3384)、肠炎沙门氏菌(CVCC1805)、鸡白痢沙门氏菌(CVCC519)、鸭沙门氏菌(CAU0118)、禽巴氏杆菌(CVCC493)、鸡毒支原体(CVCC1651)、禽支原体(CVCC274)、金黄色葡萄球菌(CVCC543)、禽波氏菌(ATCC菌株IPDH591-77)、猪2型链球菌。
(2)以细菌培养物为模板的试剂盒灵敏度试验
分别接种大肠杆菌O26、O45、O121至VIB液体培养基中，37℃增菌过夜，各取1mL菌液，分别制备菌液，浓度为106CFU/μL、105CFU/μL、104CFU/μL、103CFU/μL、102CFU/μL、10CFU/μL、1CFU/μL。各吸取1μL加入PCR反应体系，按照试剂盒操作说明进行PCR，根据试验结果测定试剂盒的灵敏度。结果表明，本发明建立的大肠杆菌O26、O45、O121血清型检测方法可以检测出100CFU的O26和O121血清型大肠杆菌，能检测出10CFU的O45血清型大肠杆菌(如图3)。
(3)以细菌基因组DNA为模板的试剂盒灵敏度试验
分别接种大肠杆菌O26、O45、O121至VIB液体培养基中，37℃增菌过夜，各取1mL菌液提取细菌基因组DNA，分别稀释浓度为100ng/μL、10ng/μL、1ng/μL、500pg/μL、100pg/μL、10pg/μL、1pg/μL。各吸取1μL加入PCR反应体系，按照试剂盒操作说明进行PCR，根据试验结果测定试剂盒的灵敏度。结果表明，本发明建立的大肠杆菌O26、O45、O121血清型检测方法可以检测出10pg的O26、O45、O121血清型大肠杆菌基因组DNA(如图4)
通过条件优化，确定了最佳的PCR反应体系和反应参数，组装了大肠杆菌O26、O45、O121血清型检测试剂盒。对实验室已保存的阳性菌株进行扩增，均可扩增到特异性条带，而其他细菌标准菌株等对照样品均未扩增到，说明该试剂盒具有很好的特异性。灵敏性检测表明，试剂盒具有较高的灵敏性，其最低检测灵敏度可达到10CFU细菌菌液及10pg细菌基因组DNA。研究结果表明，本发明研制的大肠杆菌O26、O45、O121血清型检测试剂盒具有灵敏、特异、快速的优点，为大肠杆菌O26、O45、O121血清型检测及流行病学调查提供了新的技术手段。
以上所述是本发明的优选实施例，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种用于检测大肠杆菌O26、O45、O121血清型的引物组，其特征在于，包括以下引物，其核苷酸序列分别为：
O26-F:5'-TTCAATGGGCGGAAATTTTAGAATA-3',
O26-R:5'-TAATAATTTTCTCTGCCGTCGCG-3'；
O45-F:5'-CTTGCAGTAACCTGCACGGGCGC-3',
O45-R:5'-TAGCAGGCACAACAGCCACTACTAGGC-3'；
O121-F:5'-ACTCCAACAATTGGTCGTGAAAC-3',
O121-R:5'-ACAGAAAGTGTGAAATGCCCGTA-3'；
任选的，含有或者不含有其它引物。
2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，大肠杆菌O26、O45、O121血清型特异性引物扩增的目的片段大小分别为：159bp、241bp和632bp。
3.权利要求1或2所述引物组在制备检测大肠杆菌O26、O45、O121血清型试剂盒中的应用。
4.一种含权利要求1或2所述引物组的大肠杆菌O26、O45、O121血清型检测试剂盒。
5.根据权利要求4所述的大肠杆菌O26、O45、O121血清型检测试剂盒，其特征在于，其还含有商品化的2×PCR反应液。
6.权利要求4-5任意一项所述试剂盒在检测大肠杆菌O26、O45、O121血清型中的应用，其特征在于，所述应用中，采用先将待测大肠杆菌菌液或待测大肠杆菌的DNA提取物作为模板，用所述引物进行PCR扩增，对扩增产物进行检测，若电泳结果出现159bp条带为大肠杆菌O26血清型；出现241bp条带为大肠杆菌O45血清型；出现632bp条带为大肠杆菌O121血清型；优选的，所述的检测是非诊断目的的。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，PCR反应体系为50μL时含有：2×PCRBuffer25μL、各条引物终浓度为10uM引物混合液5μL、模板1μL、超纯水19μL。
8.根据权利要求6或7所述的应用，其特征在于，PCR反应参数：95℃预变性15min；95℃30s，55℃1min30s，72℃1min30s，30个循环；72℃10min。
CN201610208130.3A 2016-04-06 2016-04-06 一种大肠杆菌 o26、o45、o121血清型三重pcr检测试剂盒及其引物组 Pending CN105821124A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610208130.3A CN105821124A (zh) 2016-04-06 2016-04-06 一种大肠杆菌 o26、o45、o121血清型三重pcr检测试剂盒及其引物组

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610208130.3A CN105821124A (zh) 2016-04-06 2016-04-06 一种大肠杆菌 o26、o45、o121血清型三重pcr检测试剂盒及其引物组

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105821124A true CN105821124A (zh) 2016-08-03

Family

ID=56525561

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610208130.3A Pending CN105821124A (zh) 2016-04-06 2016-04-06 一种大肠杆菌 o26、o45、o121血清型三重pcr检测试剂盒及其引物组

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105821124A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107201400A (zh) * 2017-05-17 2017-09-26 中国农业科学院上海兽医研究所 禽大肠杆菌、鸡伤寒沙门菌、鸡白痢沙门菌等的五重pcr检测方法及检测试剂盒
CN108950033A (zh) * 2018-07-26 2018-12-07 江苏省农业科学院 同时检测肠出血性大肠杆菌o45和o145的纳米pcr试剂盒及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101967509A (zh) * 2009-07-28 2011-02-09 天津生物芯片技术有限责任公司 检测常见牛致病性大肠杆菌的方法、基因芯片及检测试剂盒
CN104619860A (zh) * 2012-06-14 2015-05-13 国家食品安全环境及劳工局 用于检测和鉴定肠出血性大肠杆菌的方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101967509A (zh) * 2009-07-28 2011-02-09 天津生物芯片技术有限责任公司 检测常见牛致病性大肠杆菌的方法、基因芯片及检测试剂盒
CN104619860A (zh) * 2012-06-14 2015-05-13 国家食品安全环境及劳工局 用于检测和鉴定肠出血性大肠杆菌的方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHITRITA DEBROY等: "Detection of Shiga Toxin–Producing Escherichia coli O26,O45, O103, O111, O113, O121, O145, and O157 Serogroups by Multiplex Polymerase Chain Reaction of the wzx Gene of the O-Antigen Gene Cluster", 《FOODBORNE PATHOGENS AND DISEASE》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107201400A (zh) * 2017-05-17 2017-09-26 中国农业科学院上海兽医研究所 禽大肠杆菌、鸡伤寒沙门菌、鸡白痢沙门菌等的五重pcr检测方法及检测试剂盒
CN108950033A (zh) * 2018-07-26 2018-12-07 江苏省农业科学院 同时检测肠出血性大肠杆菌o45和o145的纳米pcr试剂盒及其应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Paton et al. Molecular characterization of a Shiga toxigenic Escherichia coli O113: H21 strain lacking eae responsible for a cluster of cases of hemolytic-uremic syndrome
Lund et al. Detection of Campylobacter spp. in chickenfecal samples by real-timePCR
Konkel et al. Identification of the enteropathogens Campylobacter jejuni and Campylobacter coli based on the cadF virulence gene and its product
Fagan et al. Detection of shiga-like toxin (stx1 and stx2), intimin (eaeA), and enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) hemolysin (EHEC hlyA) genes in animal feces by multiplex PCR
Rubin et al. Reproduction of mucohaemorrhagic diarrhea and colitis indistinguishable from swine dysentery following experimental inoculation with “Brachyspira hampsonii” strain 30446
Hein et al. Real-time PCR for the detection of Salmonella spp. in food: an alternative approach to a conventional PCR system suggested by the FOOD-PCR project
Wise et al. Quantitative detection of Clostridium perfringens in the broiler fowl gastrointestinal tract by real-time PCR
Lambertz et al. Real-time PCR method for detection of pathogenic Yersinia enterocolitica in food
Tahamtan et al. Prevalence and distribution of the stx1, stx2 genes in Shiga toxin producing E. coli (STEC) isolates from cattle
McIngvale et al. Optimization of reverse transcriptase PCR to detect viable Shiga-toxin-producing Escherichia coli
Kanakaraj et al. Multiplex PCR assay for detection of Clostridium perfringens in feces and intestinal contents of pigs and in swine feed
Schrank et al. Influence of enrichment media and application of a PCR based method to detect Salmonella in poultry industry products and clinical samples
CN103305627B (zh) 一种大肠杆菌o1、o2、o18、o78血清型检测试剂盒及其检测方法
Chandra et al. A single step multiplex PCR for identification of six diarrheagenic E. coli pathotypes and Salmonella
Feng et al. Genetic diversity among clonal lineages within Escherichia coli O157: H7 stepwise evolutionary model
Barlow et al. Prevalence of enterohemorrhagic Escherichia coli serotypes in Australian beef cattle
Chen et al. Detection of verotoxigenic Escherichia coli by magnetic capture-hybridization PCR
Geue et al. Rapid microarray-based genotyping of enterohemorrhagic Escherichia coli serotype O156: H25/H−/Hnt isolates from cattle and clonal relationship analysis
Wang et al. Development of an allele-specific PCR assay for simultaneous sero-typing of avian pathogenic Escherichia coli predominant O1, O2, O18 and O78 strains
Ogunremi et al. Evaluation of a multiplex PCR assay for the identification of Salmonella serovars Enteritidis and Typhimurium using retail and abattoir samples
Norman et al. Association of nucleotide polymorphisms within the O-antigen gene cluster of Escherichia coli O26, O45, O103, O111, O121, and O145 with serogroups and genetic subtypes
Prakasan et al. Isolation of Shiga toxin-producing Escherichia coli harboring variant Shiga toxin genes from seafood
Beyer et al. Suitability of repetitive-DNA-sequence-based PCR fingerprinting for characterizing epidemic isolates of Salmonella enterica serovar Saintpaul
Yan et al. Comprehensive approaches to molecular biomarker discovery for detection and identification of Cronobacter spp.(Enterobacter sakazakii) and Salmonella spp
Feng et al. Virulence characterization of Shiga-toxigenic Escherichia coli isolates from wholesale produce

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination