CN105815244B - 云纹石斑鱼雌鱼与鞍带石斑鱼雄鱼杂交育种方法 - Google Patents

云纹石斑鱼雌鱼与鞍带石斑鱼雄鱼杂交育种方法 Download PDF

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Abstract

一种云纹石斑鱼雌鱼与鞍带石斑鱼雄鱼杂交育种方法，它包括亲本选择、亲本水温调控、亲本营养强化、亲本催产、人工授精和孵化；云纹石斑鱼为暖温性中下层鱼类，个体大、生长速度快，鞍带石斑鱼为热带亚热带暖水性鱼类，具有生长快、营养价值高，将其进行杂交，可获得具有生长速度快、较广的温度适应范围的优良后代。

Description

云纹石斑鱼雌鱼与鞍带石斑鱼雄鱼杂交育种方法
技术领域
本发明属于海水鱼类育种技术，是一种云纹石斑鱼与鞍带石斑鱼杂交育种技术。
背景技术
云纹石斑鱼(Epinephelus moara)和鞍带石斑鱼(E.lanceolatus)同属于鲈形目(Perciformes)、鳍科(Serranidae)、石斑鱼亚科(Epinephelinae)、石斑鱼属。云纹石斑鱼，俗名油斑，为暖温性海洋底层大型鱼类，主要分布于北太平洋西部，从越南海域到中国南、东海至日本、韩国沿海，具有较广的温度适应范围。鞍带石斑鱼，俗名龙趸、龙胆石斑，是石斑是石斑鱼类中体型最大者，以体型大、生长快著称，故也被称为“斑王”。鞍带石斑是一种具有高经济价值的食用鱼，属暖水性鱼类，广泛分布于印度洋、太平洋、大西洋的热带亚热带海域，在我国南方省份、台湾、澳洲、香港及东南亚国家和地区均有人工养殖。
云纹石斑和其它石斑鱼一样，为雌雄同体，雌性先成熟，具有性转换特征。一般4龄鱼雌性性腺开始成熟，发育成雌性亲鱼。而到7龄个别雄体性腺才可能成熟，发育成雄鱼，所以云纹石斑雄鱼很少见。而鞍带石斑鱼，一般人工养殖2龄雌性开始出现成熟，人工养殖至3龄性转变为雄性。
将云纹石斑鱼雌性亲本与鞍带石斑鱼雄性亲本进行杂交，一方面解决云纹石斑鱼雄鱼较少的问题，另一方面期望获得生长速度快和较广的温度适应范围的杂种优势种，为石斑鱼类遗传育种、品种选育提供基础。
目前国内外还没有云纹石斑鱼(♀)与鞍带石斑鱼杂交育种的报道，其他石斑鱼类中的远缘杂交，虽有成功案例，但是以热带或亚热带品种之间杂交居多，难以解决暖温性地带石斑鱼养殖新品种问题，拓宽其养殖的范围。
发明内容
本发明要解决的技术问题在于提供一种云纹石斑鱼雌鱼与鞍带石斑鱼雄鱼杂交育种方法，本发明是基于两个不同暖温性、暖水性品种间的远缘杂交，获得一种生长速度快和较广的温度适应范围的优良杂交新品种。
本发明是通过以下技术方案来实现的：
一种云纹石斑鱼雌鱼与鞍带石斑鱼雄鱼杂交育种方法，它包括亲本选择、亲本水温调控、亲本营养强化、亲本催产、人工授精和孵化；
所述的亲本选择：a.云纹石斑雌性亲本：选择4龄以上体型正常、无病害、活力强的健康的云纹石斑鱼；b.鞍带石斑雄性亲本：选择6龄以上、体型正常、无病害、活力强、健康的鞍带石斑鱼；
所述的亲本水温调控：a.云纹石斑雌性亲本培育水温从19℃逐渐降温至12℃再逐渐升温至16℃进行培育；鞍带石斑雄性亲本培育水温从23℃逐步降低至20℃再逐步升温至25℃进行培育，升温和降温频率每10-20天升高或降低1℃；水的盐度26～35，pH 7.5～8.3，溶解氧≥5mg/L；
b.准备繁殖时，云纹石斑鱼亲鱼从16℃升温至22℃进行培育，鞍带石斑鱼从25℃升温至30℃进行培育，升温频率每3-5天升高1℃；
所述的亲本营养强化：营养强化时间选择亲鱼培育水温由最低值开始上升的过程中进行，将强化剂黏附在新鲜或冰冻鲐鱼、鱿鱼中，营养强化包括增加裂壶藻、维生素C、维生素E，每三天投喂1次，投饵量至鱼体质量的3～4％；
所述的亲本催产：挑选性腺发育至Ⅳ期的云纹石斑雌鱼亲本进行催熟、催产，水温维持在22℃，所用催产激素剂量为：400-700IU/kg鱼体质量的绒毛膜促性腺激素和30-50μg/kg鱼体质量的促黄体激素释放激素类似物，用0.9％的生理盐水溶解，进行催产，分两次催产，首次催产激素用量为总量的2/3，第二次用余量的催产激素催产，两次催产相隔24h；挑选挤压腹部后可排出精液的鞍带石斑鱼雄鱼亲本进行催产，水温维持30℃；所用催产激素剂量为：200～300IU/kg鱼体质量的HCG和10～30μg/kg鱼体质量的LRH-A3，雄亲鱼与雌亲鱼同步催产，其催产方法与雌鱼相同；
所述的人工授精：轻压催产后外观上腹部隆起，生殖孔微红的云纹石斑鱼雌鱼腹部，将挤出的成熟卵子放入容器中；再轻压生殖孔微红的鞍带石斑鱼雄鱼腹部，挤出乳白色的精液，将挤出的成熟精液挤入盛有云纹石斑鱼卵子的容器中，精卵数量比按照(1～10)ml：1000g比例，搅拌均匀后迅速加入过滤海水，静置后加入新鲜海水冲洗受精卵，静置分离后，取上浮受精卵放入孵化器中孵化；
所述的孵化：采用分两步孵化法，首先将受精卵放入圆锥形孵化桶孵化或孵化网箱进行孵化，；受精卵孵化条件为水温20～23℃，盐度26～35，pH 7.5～8.3，溶解氧≥6mg/L，不间断微充气，流水，孵化8-10小时胚胎发育至原肠期后，收集受精卵移至育苗池中孵化，在育苗池中，放卵密度1～3万粒/m3，每1.5～2m2布1个气石，不间断微充气；孵化22-28小时后，即可孵化出仔鱼；育苗池孵化用水保持溶解氧≥5mg/L以上,pH值控制在7.5～8.3，氨氮含量≤0.5mg/L，盐度保持在26～35。
进一步，所述的营养强化剂用量为8～10g/kg鱼体质量的裂壶藻、5～8g/kg鱼体质量的维生素C和维生素E混合物，所述的维生素C和维生素E以1：1质量比混合。
本发明的原理是：将具备不同生物学特性、生活在不同海域的石斑鱼鱼种亲本，进行远缘杂交，从而获得具有优良特性和性状的组合，采用亲鱼培育的温度调控，并对亲鱼进行营养强化，是保证其双亲和产生的后代(受精卵、仔稚幼鱼)具备健康体质、正确表达其优良特性，甚至出现超亲代优良性状的杂交后代。
本发明与其他海水鱼类育种方法的不同之处和有益效果如下：
1、云纹石斑鱼为暖温性中下层鱼类，个体大、生长速度快，鞍带石斑鱼为热带亚热带暖水性鱼类，具有生长快、营养价值高，将其进行杂交，可获得具有生长速度快、较广的温度适应范围的优良后代。
2、对亲本培育的水温进行调控，温度先降低后升高，亲鱼经历低温期，可提高卵子和精子质量，提高受精率。
3、进行营养强化时，将营养强化剂黏附在配合饲料或添加在冰鲜饲料中，可保证营养强化剂与饲料被亲鱼吞食，并且加大投饵量，有利提高亲鱼的体制，提高了受精卵的质量。
具体实施方法
下面结合实例详述本发明的技术内容：
一种云纹石斑鱼雌鱼与鞍带石斑鱼雄鱼杂交育种方法，它的步骤包括：亲本选择、培育设施和饲喂、亲本水温调控、亲本营养强化、亲本催产、人工授精和孵化；
1)亲本选择：
本实验于2014年6月进行，选择4龄以上体型正常、无病害、活力强的健康云纹石斑鱼作为雌性亲本；选择6-7龄体型正常、无病害、活力强的健康鞍带石斑鱼作为雄性亲本；
2)亲本培育：
a.雌雄亲本分别置于不同亲鱼培育池内培育，云纹石斑鱼培育池为面积(5m×7m)35m2的长方形水泥池，鱼池四角取圆，池底池壁光滑，池深1.5m，水深1.1～1.2m，每池饲养50～100尾；鞍带石斑鱼培育池为面积(8m×8m)64m2的正方形水泥池，池深3m，每池饲养8～10尾。种鱼放入培育池前，处理养殖水用30ppm～50ppm的漂白粉处理，并开动增氧机将药物搅匀12小时，然后加入等量的硫代硫酸钠中和。在使用前用正甲苯胺(5毫升水样中加3滴)对蓄水池内的水进行检查，以确保水中没有氯残留(显示为黄色)，然后用100目筛网进水，1-2天后即可使用；
b.以新鲜或冰冻鲐鱼、鲅鱼及鱿鱼为饵料，每周投喂3次，每次投饵量为鱼体质量的1-2％；
3)亲本温度调控：
a.对亲本培育的水温进行调控，将亲本繁殖时间控制在每年5～6月间。方法为：从12月份开始，云纹石斑鱼亲本从水温19℃逐渐降温至12℃再逐渐升温至16℃进行培育，鞍带石斑鱼亲本从水温从23℃逐步降低至20℃再逐步升温至25℃进行培育，温和降温频率每10天升高或降低1℃；培育用水的盐度28～32‰，pH 7.8～8.2，溶解氧≥5mg/L；至2015年5月份准备繁殖，云纹石斑鱼亲鱼从16℃升温至22℃进行培育，鞍带石斑鱼从25℃升温至30℃进行培育，最后一次升温后保持该温度，升温频率每5天升高1℃；
4)亲本营养强化
于2015年1月份开始进行营养强化，将营养强化剂黏附在新鲜或冰冻鲐鱼、鱿鱼中，即用食品级黄原胶将8g/kg鱼体质量的裂壶藻、4g/kg鱼体质量的维生素C和4g/kg鱼体质量维生素E黏附后一起投喂，饲料鱼每三天投喂1次，加大投饵量至鱼体质量的3～4％。
5)亲本催产
a.于2015年5月份开始挑选腹部明显膨胀性腺发育至Ⅳ期的云纹石斑鱼雌鱼亲本进行催熟、催产，水温维持在22℃，所用催产激素剂量为：500IU/kg鱼体质量的HCG和30μg/kg鱼体质量的LRH-A3，用0.9％的生理盐水溶解，一次性进行催产，催产部位为背部肌肉；
b.挑选挤压腹部后可排出精液的鞍带石斑鱼雄鱼亲本进行催产，水温维持30℃；所用催产激素剂量为：300IU/kg鱼体质量的HCG和200μg/kg鱼体质量的LRH-A3，雄亲鱼与雌亲鱼同步催产，其催产方法与雌鱼相同；
6)人工授精：
轻压催产后的云纹石斑鱼雌鱼腹部，将挤出的成熟卵子放入500ml塑料容器中，再轻压七带石斑雄鱼腹部，将挤出的成熟精液挤入盛有云纹石斑鱼卵子的容器中，精卵数量比按照1ml：100g比例，搅拌均匀后迅速加入过滤海水，静置15min后加入新鲜海水冲洗受精卵2～3次，静置分离20min后，取上浮受精卵放入孵化网箱中孵化，受精率85％。
7)孵化：
孵化网箱中，受精卵孵化条件为水温21～22.5℃，盐度28～32，pH 7.8～8.1，溶解氧≥6mg/L，孵化密度为20万粒受精卵/m3，也可以放到0.5m3的圆锥形孵化桶孵化，放卵密度20～30万粒/m3，不间断微充气，流水，孵化8小时后，收集受精卵移至育苗池中孵化。在育苗池中，放受精卵密度2万粒/m3，每1.5m2布1个气石，不间断微充气；孵化25小时后，即可孵化出仔鱼，孵化率为78.5％。放入育苗池时应注意水温和盐度变化，孵化用水与育苗池的水温差不超过2℃，盐度差不超过3‰。育苗池孵化期间溶解氧6～8mg/L，pH值7.8～8.2，氨氮含量0.3～0.4mg/L，盐度26～32。

Claims (3)

1.一种云纹石斑鱼雌鱼与鞍带石斑鱼雄鱼杂交育种方法，其特征在于它包括亲本选择、亲本水温调控、亲本营养强化、亲本催产、人工授精和孵化；
所述的亲本选择： a.云纹石斑雌性亲本：选择4龄以上体型正常、无病害、活力强的健康的云纹石斑鱼； b.鞍带石斑雄性亲本：选择6 龄以上、体型正常、无病害、活力强、健康的鞍带石斑鱼； 所述的亲本水温调控：a. 从12月份开始，云纹石斑雌性亲本培育水温从19℃逐渐降温至12℃再逐渐升温至16℃进行培育；鞍带石斑雄性亲本培育水温从23℃逐步降低至20℃再逐步升温至25℃进行培育，温度变化频率每10-20天升高或降低1℃；水的盐度26~35，pH 7.5~8.3，溶解氧≥5 mg/L；
b.准备繁殖时，次年5月份开始，云纹石斑鱼亲鱼从16℃升温至22℃进行培育，鞍带石斑鱼从25℃升温至30℃进行培育，升温频率每3-5天升高1℃；
所述的亲本营养强化：营养强化时间选择亲鱼培育水温由最低值开始上升的过程中进行，将强化剂黏附在新鲜或冰冻鲐鱼、鱿鱼中，营养强化包括增加裂壶藻、维生素C、维生素E，每三天投喂1 次，投饵量为鱼体质量的3~4%；
所述的亲本催产：挑选性腺发育至Ⅳ期的云纹石斑雌鱼亲本进行催熟、催产，水温维持在22℃，所用催产激素剂量为：400-700IU/kg鱼体质量的绒毛膜促性腺激素和30-50µg/kg鱼体质量的促黄体激素释放激素类似物，挑选挤压腹部后可排出精液的鞍带石斑鱼雄鱼亲本进行催产，水温维持30℃；所用催产激素剂量为：200~300 IU/kg鱼体质量的HCG和 10~30µg/kg鱼体质量的LRH-A3，雄亲鱼与雌亲鱼同步催产，其催产方法与雌鱼相同；
所述的人工授精：轻压催产后外观上腹部隆起，生殖孔微红的云纹石斑鱼雌鱼腹部，将挤出的成熟卵子放入容器中；再轻压生殖孔微红的鞍带石斑鱼雄鱼腹部，挤出乳白色的精液，将挤出的成熟精液挤入盛有云纹石斑鱼卵子的容器中，精卵数量比按照（1~10）ml：1000g比例，搅拌均匀后迅速加入过滤海水，静置后加入新鲜海水冲洗受精卵，静置分离后，取上浮受精卵放入孵化器中孵化；
所述的孵化：采用分两步孵化法，首先将受精卵放入圆锥形孵化桶孵化或孵化网箱进行孵化；受精卵孵化条件为水温 20~23℃，盐度26~35，pH 7.5~8.3，溶解氧≥6 mg/L，不间断微充气，流水，孵化8-10小时胚胎发育至原肠期后，收集受精卵移至育苗池中孵化，在育苗池中，放卵密度1～3万粒／m3，每1.5～2m2布1个气石，不间断微充气；孵化22-28小时后，即可孵化出仔鱼；育苗池孵化用水保持溶解氧≥5mg/L以上,pH值控制在7.5～8.3，氨氮含量≤0.5mg/L，盐度保持在26～35。
2.根据权利要求1所述的一种云纹石斑鱼雌鱼与鞍带石斑鱼雄鱼杂交育种方法，其特征在于分两次催产，首次催产激素用量为总量的2/3，第二次用余量的催产激素催产，两次催产相隔24h。
3.根据权利要求1所述的一种云纹石斑鱼雌鱼与鞍带石斑鱼雄鱼杂交育种方法，其特征在于所述的营养强化剂用量为8～10 g/kg鱼体质量的裂壶藻、5～8g/kg鱼体质量的维生素C和维生素E混合物，所述的维生素C和维生素E混合物中两种维生素以1：1质量比混合。
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