CN105779424A

CN105779424A - 检测HDACl蛋白的适体在制备检测麻醉耐受个体的试剂盒中的应用

Info

Publication number: CN105779424A
Application number: CN201610235272.9A
Authority: CN
Inventors: 孟繁好
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2016-04-17
Filing date: 2016-04-17
Publication date: 2016-07-20

Abstract

本发明通过蛋白质芯片技术筛选对麻醉耐受的人体体内蛋白质表达谱的差异，获得了多个差异表达蛋白，其中HDACl蛋白差异显著。并且通过验证，HDACl蛋白与麻醉耐受直接相关。通过SELEX技术，筛选得到的能够特异性结合HDACl蛋白的适体具有较强的结合特性和稳定性；该适配子可以用于鉴定麻醉耐受的人体，进而用于指导麻醉给药。所述适配子可以用于制备试剂盒，所述试剂盒能够快速麻醉耐受，具有检测方便的效果。

Description

检测HDACl蛋白的适体在制备检测麻醉耐受个体的试剂盒中的应用

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种用于用于麻醉科中针对麻醉耐受个体的诊断，及诊断用的适配子及其试剂盒。

背景技术

随着现代医学的发展，在进行各种手术时，都需在麻醉下对患者进行手术，手术时的麻醉大致分为全身麻醉和局部麻醉。全身麻醉是在实施较大的、复杂的手术时进行，全身麻醉有吸入麻醉(气体麻醉)和静脉麻醉。吸入麻醉中，使用乙醚、氟烷、恩氟烷、异氟烷、甲氧氟烷、七氟烷等吸入麻醉剂。吸入麻醉具有通常容易气化，从肺部吸收、由肺部排泄的大的优点，其特征在于麻醉的导入和从麻醉中苏醒快。但是，吸入麻醉(气体麻醉)对呼吸、心血管系统的抑制作用(副作用)大。与此相对，静脉麻醉是使用戊巴比妥、硫喷妥、美索比妥、丙泊酚等静脉麻醉药。静脉麻醉药具有通过静脉内注射快速地到达目标器官(脑)、使意识消失的特征，根据其种类，有短时间作用型、长时间作用型等各种种类，目前在日本主要采用持续给予型的静脉麻醉药丙泊酚，市场上销售的有I％得普利麻得普利麻注射剂(AstraZeneca公司)、1％丙泊酚注射剂(丸石制药公司)等。

在大型且复杂的手术中需在全身麻醉下实施手术，关于该麻醉，全身麻醉的持续和苏醒的控制较为困难，因此手术时除执刀的外科医生之外，还需要由管理、控制接受手术的患者的麻醉状态的、麻醉经验丰富的麻醉科专业医生参与到团队中实施手术。

但是，全身麻醉作用于中枢(脑)，通过使中枢功能低下来进行麻醉。脑是掌管全身代谢的重要的器官，因此，脑功能的低下导致全身代谢功能低下。因此，麻醉苏醒的延迟会抑制代谢功能的恢复，使自主呼吸的恢复延迟或组织和器官的功能低下持续，结果，产生机体防御反应的延迟或免疫力下降，引发并发症的危险率增高。

因此，在全身麻醉下完成目标手术后，优选迅速从麻醉中苏醒。但是，目前加快从麻醉中苏醒的方法是观察手术时的手术实施动态、以及配合该动态对患者麻醉的深度(全身状态)，通过给予速度来控制麻醉的维持，这依赖于麻醉科专业医生的经验，除此之外并无它法。因此，临床上客观要求麻醉应当对机体的应激反应最小，生理干扰最少，术后恢复快。尤其随着我国人口老龄化的趋势，高龄、危重手术病人越来越多，同时有人认为婴幼儿以及青少年和老年人的麻醉用药会对认知造成不利影响，因此，麻醉药物应用的安全性问题也成了人们所关注的焦点之一。

由于个体不同，对于麻醉药物的耐受程度各不相同。虽然现在已经有研究开始寻找关于麻醉耐受的机理及其机制，但是截至目前还没有学者能够清晰的阐明麻醉的机理。但是对个体耐药的研究变得迫在眉睫。

随着蛋白质芯片技术的发展，对于人体差异蛋白的研究变得简便易行，通过研究麻醉耐受个体与正常人群的差异，寻找差异蛋白的表达变化，从而研究时候差异蛋白能够导致个体具有麻醉耐受性。通过检测所述差异蛋白的表达变化，即可快速的初步筛选麻醉耐药个体，从而在医生麻醉的时候，针对个体进行加大麻醉用药，避免了手术中麻药药效不够，再次进行麻醉的风险。同时也能够避免给正常人体的麻醉药物过量，使得苏醒缓慢。

发明内容

本发明的技术方案通过以下步骤实现：

本发明的目的是提供一种麻醉耐受个体差异蛋白的筛选方法。

所述的方法优选为包括有如下步骤:步骤1:将实验样本进行蛋白质芯片的实验操作，每个样本都可以得到一系列蛋白质离子峰的数据；步骤2:根据实验设计的情况，对样本进行分组，得到不同组份样本间的差异蛋白峰；步骤3:对步骤2得到的差异蛋白峰进行蛋白质预测；依据蛋白质断裂的三种情况，采用三种方式来对差异蛋白峰进行蛋白质预测；其中，在步骤3中对其得到的差异蛋白峰采用三种方法进行蛋白质预测:方法一:假定目标蛋白没有发生断裂，将差异蛋白峰与蛋白质数据库已经存在的蛋白质进行比较，比较的标准是利用质荷比m/z这个参数；方法二:假设蛋白只断裂一次，该方法假定蛋白只断裂一次，那么将生成负离子b-1on和正离子y-1on两种离子，通过将感兴趣的离子峰的质荷比m/z值与蛋白数据库中所有理论的b-1on和y-1on的质荷比m/z相比较，即可找出质谱峰对应的蛋白，允许误差取Am/z＝0.01～0.1Da；方法三:假设蛋白断裂的次数大于一次，利用假设检验的方法可以给出质荷比m/z与基因的关联的显著性。

本发明另外一个技术方案是提供一种是用上述方法筛选得到的麻醉耐受蛋白-HDACl，其序列如SEQIDNO：24所示。

本发明此外还提供一种特异性识别HDACl的适配子筛选方法。

本发明中，所述的HDACl的核酸适配体(序列1-23)能够特异结合HDACl。

从体外合成的随机寡聚DNA文库，(5′-TGACAACGTAATTGGCATGA----N34----CCGTGAACTTGAACAATATA-3′)，其中N34为34个随机寡核苷酸；从中筛选出与HDACl特异结合的核酸适配体；将筛选出的序列用引物P1：TGACAACGTAATTGGCATGA；引物P2：TATATTGTTCAAGTTCACGG，进行扩增并进行TA克隆入pMD19-T载体(购自上海博光生物公司)，转化DH5a细菌(购自北京天根生物公司)；挑去白色菌落进行PCR确定阳性克隆后，抽提质粒并测序反应，上测序仪测序。

本发明采用核酸适配体的体外筛选(SELEX)技术，以HDACl为正筛靶标筛选与HDACl特异结合的核酸适配体，制得具有特异结合HDACl的序列，本发明中命名为适配体HDACl-1～23。序列如下：

HDACl-1：

TGACAACGTAATTGGCATGACACTAAAAAATTTCCTCCCACCCCCAATTCAACTCCGTGAACTTGAACAATATA

HDACl-2：

TGACAACGTAATTGGCATGAACCTATAAATTCCCCCCATACACCCCTAAATTCACCGTGAACTTGAACAATATA

HDACl-3：

TGACAACGTAATTGGCATGATCAAATACCCAACTCCTCCCAATCTACATCCTCTCCGTGAACTTGAACAATATA

HDACl-4：

TGACAACGTAATTGGCATGACAATAAATCAACAAAACACCCATCCCTACTCAATCCGTGAACTTGAACAATATA

HDACl-5：

TGACAACGTAATTGGCATGACATCATTTTTTAACCAACCAACAATACCACCACACCGTGAACTTGAACAATATA

HDACl-6：

TGACAACGTAATTGGCATGAACAATTTACCCACTTATAATTCACTAACTCTCAACCGTGAACTTGAACAATATA

HDACl-7：

TGACAACGTAATTGGCATGAATATTACATTCCCAATATTCTCTATAACCCTAACCCGTGAACTTGAACAATATA

HDACl-8：

TGACAACGTAATTGGCATGATAATATATCTTTTCACCATTAAAACCATATCCATCCGTGAACTTGAACAATATA

HDACl-9：

TGACAACGTAATTGGCATGAAACTTCTTTAACTTAAATACTTCTTCCAAAAAAACCGTGAACTTGAACAATATA

HDACl-10：

TGACAACGTAATTGGCATGAAAATACTCAAATTCATCCTTATCCCTCCATCACTCCGTGAACTTGAACAATATA

HDACl-11：

TGACAACGTAATTGGCATGACCTCATTCCATCCACCTAAACATACTATACTTTACCGTGAACTTGAACAATATA

HDACl-12：

TGACAACGTAATTGGCATGAATCAAACAACACTTCATTTTCCCAATATTATCATCCGTGAACTTGAACAATATA

HDACl-13：

TGACAACGTAATTGGCATGAATCCTCATCCATTCACCTATTTTTATATCTTTCCCCGTGAACTTGAACAATATA

HDACl-14：

TGACAACGTAATTGGCATGACTTCACATCCCTATTCACTTCCTTTTTCTAACCACCGTGAACTTGAACAATATA

HDACl-15：

TGACAACGTAATTGGCATGACATTATTTTTCTATAATTCTATTATATCCACTAACCGTGAACTTGAACAATATA

HDACl-16：

TGACAACGTAATTGGCATGAACCAATCACAATACATTAACACTCCACTAACTCACCGTGAACTTGAACAATATA

HDACl-17：

TGACAACGTAATTGGCATGAACACTTTAACCACATCCCCTCACATACCACTAACCCGTGAACTTGAACAATATA

HDACl-18：

TGACAACGTAATTGGCATGATAAACTTTCTTCCTCCATACCTATACCTCTATCTCCGTGAACTTGAACAATATA

HDACl-19：

TGACAACGTAATTGGCATGAATTACTTTTCTACCAACTCCTTTTCCTTCTTCACCCGTGAACTTGAACAATATA

HDACl-20：

TGACAACGTAATTGGCATGATCTATCCACTCTCTCAACTCTAACTACAACTCCTCCGTGAACTTGAACAATATA

HDACl-21：

TGACAACGTAATTGGCATGACATCTATCTACCAATCTTACATTCAATCCCTATACCGTGAACTTGAACAATATA

HDACl-22：

TGACAACGTAATTGGCATGATTCAACTCAATATCTTCCCTTAACTTATCCCTACCCGTGAACTTGAACAATATA

HDACl-23：

TGACAACGTAATTGGCATGAATCTCAAAACCCATTCTCTACACACCTTTACATCCCGTGAACTTGAACAATATA

本发明的进一步的目的是提供所述核酸适配体序列的用途。本发明中根据对该序列应用，可进一步用于制备特异性结合HDACl的试剂盒。

本发明的适配子可以用于构建试剂盒，该试剂盒可以用于特异性的分离和定量检测HDACl蛋白，具有分离效果快，效率高，节省时间，节约成本的功效。具有极强的应用价值。

本发明的有益效果：(1)通过蛋白质芯片技术筛选得到麻醉耐受蛋白HDACl；(2)获得了一种能够特异高效结合HDACl的适配子。该适配子可以大量人工制备，方法简单，成本低廉。(3)以核酸适配子为基础可以制备成为特异性检测HDACl的试剂盒。

具体实施方式

实施例1麻醉耐受差异蛋白的筛选

病人的选择：选择正常体重范围内的骨科病人个体(超重或偏瘦的排除在外，避免个体体重的差异巨大对麻醉药物的使用量产生的影响，骨科病人没有其它影响人体免疫系统改变的因子发生)，取麻醉耐受病人，100例(男60例，平均年龄40岁；女40例，平均年龄45岁)。取血浆20mL用980mL磷酸缓冲液(10mM，pH7.0)稀释。将所述的100个实验样本进行蛋白质芯片的实验操作，利用CN101776681B中公开的蛋白质芯片技术鉴定差异表达蛋白分析方法，通过软件分析共获得了10个差异表达蛋白，其中表达差异最为显著的为HDACl蛋白。

实施例2HDACl蛋白作为麻醉耐药靶标准确性的检验

取需要骨科手术的病人30例，血液20mL用980mL磷酸缓冲液(10mM，pH7.0)稀释，采用制备的HDACl单克隆抗体进行酶联免疫反应，在30个病人血液中检测得到HDACl蛋白高表达的病人2例，高表达水平几乎相同。按照正常的麻醉说明书指导剂量给予这2个病人给药，发现在给予正常量1.3倍的给药，才能导致病人达到标准麻醉值。而其余28例病人，均按照正常的麻醉说明书指导剂量即可导致病人达到标准麻醉值。这充分证明HDACl蛋白高表达是麻醉耐受的重要指示蛋白。

实施例3HDACl蛋白适配子的筛选

a、从体外合成的随机寡聚DNA文库，

5′-TGACAACGTAATTGGCATGA----N34----CCGTGAACTTGAACAATATA-3′

其中引物P1：TGACAACGTAATTGGCATGA；引物P2：TATATTGTTCAAGTTCACGG，

b、文库的扩增、保存：

(1)、采用常规PCR反应法得到双链DNA文库：将步骤a中的单链DNA文库0.1μg、上游引物l00pmol、下游引物I00pmolUOXPCR缓冲液10μl、氯化镁(MgCl2)6y1、dNTPs100ymol/L,Taq酶2U混合在一起，加去离子水使总体积为100μ1；然后放入PCR仪中，94V反应预变性5分钟，94V反应变性40秒，58V退火1.5分钟，72℃延伸3分钟，最后72℃延伸10分钟，得到双链DNA文库，并进行保存；

(2)、采用非对称PCR反应法，以双链DNA文库为模板扩增出单链DNA文库，即得到双链DNA文库PCR扩增产物：将上步骤中得到的双链DNA文库0.1μg、10XPCR缓冲液10μl、氯化镁(MgCl2)6μl、dNTPs100μmol/L、Taq酶2U、上游引物l00pmol、下游引物I00pmol混合在一起，其中：上游引物与下游引物的浓度比为：1：100，加去离子水使总体积为100μ1；然后放入PCR仪中，94℃预变性5分钟，94℃变性40秒，58℃退火1.5分钟，72℃延伸5分钟，最后72℃延伸10分钟，得到双链DNA文库PCR扩增产物，即扩增出单链DNA文库以备筛选；

C、扩增产物的回收：将步骤b(2)中的PCR扩增产物用含0.5μg/ml溴化乙锭的1.8％琼脂糖凝胶进行电泳，然后将其放在260nm荧光透视板上，将呈橘红色条带的PCR扩增产物切下，用DNA纯化回收试剂盒回收纯化；

D、筛选：按照下述方法共做15轮重复性SELEX筛选，第1轮筛选中的被筛选物是步骤c中得到单链DNA，第2-15轮筛选中的被筛选物是上一轮筛选所得到的单链DNA随机库；第5-9轮筛选中，反应体积200μ1，单链DNA随机库与HDACl蛋白的用量各为250pmol和2.5μg；第10-15轮筛选中，反应体积200μ1，单链DNA随机库与HDACl蛋白的用量各为I00pmol和0.5μg；缓冲液为浓度20mmol/L、pH为7.35的Tris-HCl与137mmol/L的氯化钠(NaCl)、5mmol/L的氯化钾(KCl)、2mmol/L氯化钙(CaCl2)、lmmol/L氯化镁(MgCl2)的混合液，每轮筛选方法如下：

取被筛选物400pmol，置于85℃水浴20分钟，再冰浴5分钟，然后与4μgHDACl蛋白在400μ1缓冲液中混勻，同时加5倍ssDNA摩尔量的tRNA与牛血清白蛋白(BSA)，37℃孵育Ih；加入双蒸水浸润过的直径2.5cm、孔径0.45μm的硝酸纤维膜后，放到真空抽滤器上，经真空滤过后，用缓冲液A洗涤滤膜3次，剪碎滤膜，用7mol尿素或酚或氯仿从滤膜中回收单链DNA；再把单链DNA按照步骤b(1)常规PCR反应，重复循环做20次，而后按照步骤b(2)进行非对称PCR反应，获得富集单链DNA随机库；

经过上述15轮筛选获得富集单链DNA随机库，即适配子库；

将最后一轮筛选得到的适配子进行扩增并进行TA克隆入pMD19-T载体(购自上海博光生物公司)，转化DH5a细菌(购自北京天根生物公司)；挑去白色菌落进行PCR确定阳性克隆后，抽提质粒并测序反应，上测序仪测序。测定得到序列如SEQIDNO：1-23所示。

实施例4特异性高亲和力的HDACl蛋白效果验证

将适配子分别取1.5μg，用牛小肠碱性磷酸酶(CIP)37℃消化1h，纯化回收去磷酸化的DNA；通过T4多核苷酸激酶标记[γ-32P]ATP于去磷酸化的适配子分子末端。10nmol放射性标记的DNA适配子分别与不同浓度(1-200nM)的HDACl蛋白37℃孵育30min，各组反应液经硝酸纤维素膜滤过，洗涤滤膜，干燥滤膜，液闪计数仪测定滤膜上残留的放射量，同一样品平行做两次测定。计算各个适配子与HDACl蛋白的解离常数。结果如下：

从以上结果可以看出，本发明的23个适配子具有非常强的结合特性，现有技术中也没有公开所述结合特性的适配子能够结合HDACl蛋白。

实施例5特异性以及降解活性分析

分别采用人血白蛋白，IgG，血红蛋白与23条适配子进行特异性检测，经过结合试验发现，这些适配子都不与这些蛋白相结合，而只与HDACl蛋白结合保持较高的特异性。

将所述的适配子，取0.2ug，分别置于常温的血清(加入抗菌剂)、水溶液中，放置二周。通过RT-PCR检测，发现二周的放置其结构稳定，没有被降解，适配子浓度保持95％的存在率。

实施例6临床试验分析

将23个适配子分别用于检测需要手术的病人50例的血清样本，取血液血液20mL用980mL磷酸缓冲液(10mM，pH7.0)稀释，分别将偶联有磁珠的23组适配子与50例样本血液溶液混合孵育20分钟，而后磁分离，即可获得相应的分离的HDACl蛋白，通过检测发现，在50例样本中有2例病人的体内HDACl蛋白表达量显著高于其余48组病人，表达量大约提高30％，23组适配子的检测结果基本相同。按照正常的麻醉说明书指导剂量给予这2个病人给药，发现在给予正常量1.4倍的给药，才能导致病人达到标准麻醉值。而其余42例病人，均按照正常的麻醉说明书指导剂量即可导致病人达到标准麻醉值。

由此可见，本发明的适配子可以用于定量检测HDACl蛋白并能够检测麻醉耐受个体。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

序列表

〈110〉孟繁好

〈120〉检测HDACl蛋白的适体在制备检测麻醉耐受个体的试剂盒中的应用

〈210〉1

〈211〉74

〈212〉DNA

〈213〉人工序列

〈400〉HDACl-1

TGACAACGTAATTGGCATGACACTAAAAAATTTCCTCCCACCCCCAATTCAACTCCGTGAACTTGAACAATATA

〈210〉2

〈211〉74

〈212〉DNA

〈213〉人工序列

〈400〉HDACl-2

TGACAACGTAATTGGCATGAACCTATAAATTCCCCCCATACACCCCTAAATTCACCGTGAACTTGAACAATATA

〈210〉3

〈211〉74

〈212〉DNA

〈213〉人工序列

〈400〉HDACl-3

TGACAACGTAATTGGCATGATCAAATACCCAACTCCTCCCAATCTACATCCTCTCCGTGAACTTGAACAATATA

〈210〉4

〈211〉74

〈212〉DNA

〈213〉人工序列

〈400〉HDACl-4

TGACAACGTAATTGGCATGACAATAAATCAACAAAACACCCATCCCTACTCAATCCGTGAACTTGAACAATATA

〈210〉5

〈211〉74

〈212〉DNA

〈213〉人工序列

〈400〉HDACl-5

TGACAACGTAATTGGCATGACATCATTTTTTAACCAACCAACAATACCACCACACCGTGAACTTGAACAATATA

〈210〉6

〈211〉74

〈212〉DNA

〈213〉人工序列

〈400〉HDACl-6

TGACAACGTAATTGGCATGAACAATTTACCCACTTATAATTCACTAACTCTCAACCGTGAACTTGAACAATATA

〈210〉7

〈211〉74

〈212〉DNA

〈213〉人工序列

〈400〉HDACl-7

TGACAACGTAATTGGCATGAATATTACATTCCCAATATTCTCTATAACCCTAACCCGTGAACTTGAACAATATA

〈210〉8

〈211〉74

〈212〉DNA

〈213〉人工序列

〈400〉HDACl-8

TGACAACGTAATTGGCATGATAATATATCTTTTCACCATTAAAACCATATCCATCCGTGAACTTGAACAATATA

〈210〉9

〈211〉74

〈212〉DNA

〈213〉人工序列

〈400〉HDACl-9

TGACAACGTAATTGGCATGAAACTTCTTTAACTTAAATACTTCTTCCAAAAAAACCGTGAACTTGAACAATATA

〈210〉10

〈211〉74

〈212〉DNA

〈213〉人工序列

〈400〉HDACl-10

TGACAACGTAATTGGCATGAAAATACTCAAATTCATCCTTATCCCTCCATCACTCCGTGAACTTGAACAATATA

〈210〉11

〈211〉74

〈212〉DNA

〈213〉人工序列

〈400〉HDACl-11

TGACAACGTAATTGGCATGACCTCATTCCATCCACCTAAACATACTATACTTTACCGTGAACTTGAACAATATA

〈210〉12

〈211〉74

〈212〉DNA

〈213〉人工序列

〈400〉HDACl-12

TGACAACGTAATTGGCATGAATCAAACAACACTTCATTTTCCCAATATTATCATCCGTGAACTTGAACAATATA

〈210〉13

〈211〉74

〈212〉DNA

〈213〉人工序列

〈400〉HDACl-13

TGACAACGTAATTGGCATGAATCCTCATCCATTCACCTATTTTTATATCTTTCCCCGTGAACTTGAACAATATA

〈210〉14

〈211〉74

〈212〉DNA

〈213〉人工序列

〈400〉HDACl-14

TGACAACGTAATTGGCATGACTTCACATCCCTATTCACTTCCTTTTTCTAACCACCGTGAACTTGAACAATATA

〈210〉15

〈211〉74

〈212〉DNA

〈213〉人工序列

〈400〉HDACl-15

TGACAACGTAATTGGCATGACATTATTTTTCTATAATTCTATTATATCCACTAACCGTGAACTTGAACAATATA

〈210〉16

〈211〉74

〈212〉DNA

〈213〉人工序列

〈400〉HDACl-16

TGACAACGTAATTGGCATGAACCAATCACAATACATTAACACTCCACTAACTCACCGTGAACTTGAACAATATA

〈210〉17

〈211〉74

〈212〉DNA

〈213〉人工序列

〈400〉HDACl-17

TGACAACGTAATTGGCATGAACACTTTAACCACATCCCCTCACATACCACTAACCCGTGAACTTGAACAATATA

〈210〉18

〈211〉74

〈212〉DNA

〈213〉人工序列

〈400〉HDACl-18

TGACAACGTAATTGGCATGATAAACTTTCTTCCTCCATACCTATACCTCTATCTCCGTGAACTTGAACAATATA

〈210〉19

〈211〉74

〈212〉DNA

〈213〉人工序列

〈400〉HDACl-19

TGACAACGTAATTGGCATGAATTACTTTTCTACCAACTCCTTTTCCTTCTTCACCCGTGAACTTGAACAATATA

〈210〉20

〈211〉74

〈212〉DNA

〈213〉人工序列

〈400〉HDACl-20

TGACAACGTAATTGGCATGATCTATCCACTCTCTCAACTCTAACTACAACTCCTCCGTGAACTTGAACAATATA

〈210〉21

〈211〉74

〈212〉DNA

〈213〉人工序列

〈400〉HDACl-21

TGACAACGTAATTGGCATGACATCTATCTACCAATCTTACATTCAATCCCTATACCGTGAACTTGAACAATATA

〈210〉22

〈211〉74

〈212〉DNA

〈213〉人工序列

〈400〉HDACl-22

TGACAACGTAATTGGCATGATTCAACTCAATATCTTCCCTTAACTTATCCCTACCCGTGAACTTGAACAATATA

〈210〉23

〈211〉74

〈212〉DNA

〈213〉人工序列

〈400〉HDACl-23

TGACAACGTAATTGGCATGAATCTCAAAACCCATTCTCTACACACCTTTACATCCCGTGAACTTGAACAATATA

〈210〉24

〈211〉482

〈212〉PRT

〈213〉序列

〈400〉HDACl

1maqtqgtrrkvcyyydgdvgnyyygqghpmkphrirmthnlllnyglyrkmeiyrphkan

61aeemtkyhsddyikflrsirpdnmseyskqmqrfnvgedcpvfdglfefcqlstggsvas

121avklnkqqtdiavnwagglhhakkseasgfcyvndivlailellkyhqrvlyididihhg

181dgveeafyttdrvmtvsfhkygeyfpgtgdlrdigagkgkyyavnyplrdgiddesyeai

241fkpvmskvmemfqpsavvlqcgsdslsgdrlgcfnltikghakcvefvksfnlpmlmlgg

301ggytirnvarcwtyetavaldteipnelpyndyfeyfgpdfklhispsnmtnqntneyle

361kikqrlfenlrmlphapgvqmqaipedaipeesgdededdpdkrisicssdkriaceeef

421sdseeegeggrknssnfkkakrvktedekekdpeekkevteeektkeekpeakgvkeevk

481la

Claims

1.一种HDACl蛋白，其特征在于序列为SEQIDNO：24所示。

2.一种特异性结合HDACl的适体，其特征在于为包括SEQIDNo.1-23任一条序列所示。

3.权利要求2所示的适体在检测HDACl蛋白中的应用。

4.权利要求2所示的适体用于制备检测麻醉耐受个体的试剂盒中的应用。