CN105767168A - 丁香酚和/或其衍生物在抑制赭曲霉生长中的应用 - Google Patents

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滑慧娟
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Abstract

本发明公开了丁香酚和/或其衍生物在抑制赭曲霉生长中的应用。本发明还公开了一种赭曲霉生长抑制剂，其活性成分为丁香酚和/或其衍生物。本发明丁香酚的原料资源在我国来源广、生产工艺简易、成本低、具有挥发性；对人畜安全性好，已被列入食品添加剂目录(GB 2760‑2011食品安全国家标准‑食品添加剂使用标准)；对环境无污染，并且有清香，有效期可达一年以上。本发明丁香酚和/或其衍生物应用于抑制赭曲霉生长的效果好，安全无毒副作用。

Description

丁香酚和/或其衍生物在抑制赭曲霉生长中的应用
技术领域
本发明涉及一种丁香酚和/或其衍生物在抑制赭曲霉生长中的应用。
背景技术
丁香酚：英文名，Eugenol是一种酚类有机化合物，有强烈的丁香香气，具有抗菌、蒋血压活性。大量存在于丁香等植物体内。分子式为：C10H12O2，分子量：164.20，结构式如下所示。
丁香酚为GB2760-2011规定为允许使用的使用香料，主要用于配制薄荷、坚果、辛香型食品香精和烟用香精，用量按正常生产需要，在肉类中使用量为40～2000mg/kg；胶姆糖中500mg/kg；调味品中9.6～100mg/kg；烘烤食品中33mg/kg；糖果中32mg/kg；冷饮中3.1mg/kg；软饮料中1.4mg/kg；布丁类0.6mg/kg；由此可见，丁香酚被长期用于食品添加剂，食用安全性非常好。
赭曲霉(Aspergillusochraceus)是属于散囊菌目发菌科曲霉属的一种真菌，主要污染大米、小麦、燕麦、咖啡及其饮料等，赭曲霉污染可导致上述食品霉变变质，食品营养品质和加工品质大幅度下降，造成巨大的经济损失；更为严重的的是赭曲霉在生长过程中可产生具有强毒性和致癌性的赭曲霉毒素，赭曲霉毒素有7种结构类似的化合物，其中赭曲霉毒素A(OTA)毒性最强，分布最为广泛。在已发现的真菌毒素中，赭曲霉毒素A(OTA)的危害性仅次于黄曲霉毒素，毒理学研究表明，OTA主要损害肝脏和肾脏，具有很强的肝脏毒性和肾脏毒性，大量的毒素也可能引起肠粘膜炎症甚至坏死；OTA被认为是目前致癌力最强的天然物质之一，被IARC定为二级致癌物。
由于赭曲霉毒素A(OTA)的毒性，国内外都公布了食品和饲料中OTA的限量标准，以规范生产，控制OTA的污染，最大限度地保障人和动物的食用安全，表1列举了欧盟、中国及台湾地区赭曲霉毒素的限量标准。
表1欧盟、中国及中国台湾对食品中OTA先行的限量标准
因此，筛选和开发能够高效抑制赭曲霉生长安全、无毒的天然活性物质，用于防控食品受到赭曲霉及赭曲霉毒素的污染，提升食品安全水平，具有十分重要的经济价值和社会意义。
发明内容
本发明的目的是提供丁香酚和/或其衍生物在抑制赭曲霉生长中的应用。本发明丁香酚和/或其衍生物对赭曲霉生长的抑制效果好。
本发明提供了丁香酚和/或其衍生物在抑制赭曲霉生长中的应用。
上述的应用中，所述赭曲霉为赭曲霉(Aspergillusochraceus)CGMCCNo.3.4412。
上述的应用中，所述丁香酚和/或其衍生物抑制如下产品中所述赭曲霉生长：谷物、食品和/或饮料。
上述的应用中，所述丁香酚和/或其衍生物占所述产品的浓度可为900～2000μL/L，具体可为。
上述的应用中，采用熏蒸的方法处理所述产品；
所述谷物和食品的水分含量均可为0～15％，具体可为12％、15％、0～12％、12％～15％或5～15％。
上述的应用中，所述熏蒸处理的温度可为-10～37℃，具体可为28℃、-10～28℃、28～37℃或10～35℃；
所述熏蒸处理的时间可为3～45d，具体可为14d、3～14d、14～45d或10～25d；
所述熏蒸处理在密闭系统中进行。
上述的应用中，所述谷物为小麦、大麦、大米、玉米、黑麦和燕麦中的至少一种；
所述食品为咖啡豆、花生、核桃、开心果、榛子、腰果、杏仁、葵花籽、鲜葡萄和葡萄干中的至少一种；
所述饮料为葡萄汁、葡萄酒、咖啡饮品、麦芽饮料、酒精饮料、燕麦饮料和大米饮料中的至少一种。
本发明还提供了一种赭曲霉生长抑制剂，其活性成分为丁香酚和/或其衍生物。
本发明中，采用丁香酚和/或其衍生物抑制赭曲霉生长的方法，包括如下步骤：将所述丁香酚和/或其衍生物熏蒸处理的产品，抑制所述赭曲霉的生长。
本发明具有以下优点：
丁香酚的原料资源在我国来源广、生产工艺简易、成本低、具有挥发性；对人畜安全性好，已被列入食品添加剂目录(GB2760-2011食品安全国家标准-食品添加剂使用标准)；对环境无污染，并且有清香，有效期可达一年以上。丁香酚和/或其衍生物应用于抑制赭曲霉生长的效果好，安全无毒副作用。
附图说明
图1为不同浓度丁香酚对赭曲霉生长的影响。
图2为丁香酚熏蒸对小麦(水分含量12％)中赭曲霉生长的抑制效果。
图3为丁香酚熏蒸对小麦(水分含量15％)中赭曲霉生长的抑制效果。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中，使用的赭曲霉(Aspergillusochraceus)购于CGMCC，该菌株在CGMCC的编号为3.4412；在本文的发明内容和权利要求中均表示成CGMCCNo.3.4412。
实施例1、丁香酚熏蒸抑菌效果测定
丁香酚：含量≥99％。
PDA培养基：去皮马铃薯200g煮沸30min后取滤液，加入葡萄糖20g、琼脂16g，用蒸馏水定容至1000mL，加去离子水补足1L，115℃高压灭菌30分钟，降温到55℃左右倒平板，每平板20mL。
MEA培养基：酵母提取物(1g/L)、麦芽提取物(1g/L)、蛋白胨(1g/L)、KH2PO4(1g/L)、MgSO4·7H2O(0.3g/L)、KCl(0.3g/L)、ZnSO4·7H2O(0.05g/L)、CuSO4·5H2O(0.01g/L)、果糖(20g/L)、琼脂(15g/L)，加去离子水补足1L，121℃高压灭菌20分钟，降温到55℃左右倒平板，每平板20mL。
菌种活化：把赭曲霉接种于PDA培养基上，28℃下生长14天，4℃储藏。
赭曲霉孢子液制备：用无菌棉签挑取平板培养基上的赭曲霉孢子溶于0.01％吐温20中，用无菌水稀释初始孢子液至孢子浓度为1×105cfu/mL。
把赭曲霉菌悬液10μL(1×105cfu/mL)接种于MEA培养基中央至完全吸收。将3片直径为10mm的灭菌滤纸片对称放置于培养皿盖的边缘，丁香酚分别0、5、10、20、30μL于不同培养皿中，使之均匀吸附于滤纸片上，空白不添加丁香酚，使丁香酚的浓度范围100-600μL/L，每个做3个平行，培养皿用封口膜密封后放入自封袋中，置于培养箱中28℃培养，培养20天后把没有赭曲霉生长的平板中取出丁香酚后再培养7天，观察有无菌丝的生长。每2天测量一次菌落直径，采用十字交叉法测定两次，结果取平均值。结果表明，所有熏蒸浓度的丁香酚均能显著抑制赭曲霉的生长，抑制效果随着丁香酚浓度的升高而增强，当丁香酚熏蒸浓度达到400μL/L时即能持续显著抑制赭曲霉的生长，使赭曲霉的菌落直径小于1cm。取出丁香酚纸片并在通风橱内通风散味后，在放到培养箱培养7天，发现菌丝重新生长，表明丁香酚对赭曲霉的作用为抑菌作用。
实施例2、丁香酚熏蒸抑制赭曲霉在小麦(水分含量为12％)上的生长
丁香酚：含量≥99％。
菌种活化和赭曲霉孢子液制备方法同实施例1。
小麦样品经1％次氯酸钠溶液清洗消毒，无菌水冲洗，无菌滤纸吸干表面水分。根据与预调目标水分差值加入定量无菌水，放于4℃静置24h使水分含量平衡，获得实验所需水分含量(12％)的小麦。将小麦以200g为单位分装到1L锥形瓶中，加入1mL孢子悬液(浓度2×106个/mL)，轻轻摇动瓶子使孢子均匀覆盖到小麦上。紧接着滴加丁香酚于无菌滤纸上，放入锥形瓶内，使丁香酚添加浓度分别为0、300、600、900和1200μL/L，密封后恒温恒湿箱28℃培养14d，测定污染率。每组做3个重复。结果表明，与对照相比，所有实验浓度丁香酚对小麦中赭曲霉污染率均有显著的降低效果，并且随着丁香酚浓度的升高而增强，当丁香酚浓度达到900、1200μL/L时小麦污染率分别降为13.4％和4.6％。
实施例3、丁香酚熏蒸抑制赭曲霉在小麦(水分含量为15％)上的生长
丁香酚：含量≥99％。
菌种活化和赭曲霉孢子液制备方法同实施例1。
小麦样品经1％次氯酸钠溶液清洗消毒，无菌水冲洗，无菌滤纸吸干表面水分。根据与预调目标水分差值加入定量无菌水，放于4℃静置24h使水分含量平衡，获得实验所需水分含量(15％)的小麦。将小麦以200g为单位分装到1L锥形瓶中，加入1mL孢子悬液(浓度2×106个/mL)，轻轻摇动瓶子使孢子均匀覆盖到小麦上。紧接着滴加丁香酚于无菌滤纸上，放入锥形瓶内，使丁香酚添加浓度分别为0、300、600、900和1200μL/L，密封后恒温恒湿箱28℃培养14d，测定污染率。每组做3个重复。结果表明，与对照相比，所有实验浓度丁香酚对小麦中赭曲霉污染率均有显著的降低效果，并且随着丁香酚浓度的升高而增强，当丁香酚浓度达到1200μL/L时小麦污染率降为11.2％，对照组小麦污染率高达86.5％；水分含量15％小麦的赭曲霉污染率明显高于12％的小麦。

Claims (8)

1.丁香酚和/或其衍生物在抑制赭曲霉生长中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述赭曲霉为赭曲霉(Aspergillusochraceus)CGMCCNo.3.4412。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述丁香酚和/或其衍生物抑制如下产品中所述赭曲霉生长：谷物、食品和/或饮料。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述丁香酚和/或其衍生物占所述产品的浓度为900～2000μL/L。
5.根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于：采用熏蒸的方法处理所述产品；
所述谷物和食品的水分含量均为0～15％。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述熏蒸处理的温度为-10～37℃；
所述熏蒸处理的时间为3～45d；
所述熏蒸处理在密闭系统中进行。
7.根据权利要求3-6中任一项所述的应用，其特征在于：所述谷物为小麦、大麦、大米、玉米、黑麦和燕麦中的至少一种；
所述食品为咖啡豆、花生、核桃、开心果、榛子、腰果、杏仁、葵花籽、鲜葡萄和葡萄干中的至少一种；
所述饮料为葡萄汁、葡萄酒、咖啡饮品、麦芽饮料、酒精饮料、燕麦饮料和大米饮料中的至少一种。
8.一种赭曲霉生长抑制剂，其特征在于：该抑制剂的活性成分为丁香酚和/或其衍生物。
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