CN105766808B - 赤子爱胜蚯蚓室内饲养与繁殖的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种赤子爱胜蚯蚓室内饲养与繁殖的方法，其室内饲养方法为：将赤子爱胜蚯蚓在装有基质的饲养箱中饲养，每隔6天喂食一次；按照上述培养4周后，将所述赤子爱胜蚯蚓从基质中分离，放入另一装有基质的饲养箱中按照上述方法继续饲养。其繁殖方法包括：将饲养得到的赤子爱胜蚯蚓从基质中分离，倒入饲养箱中培养，使蚓茧孵化成幼蚓；待幼蚓培养至直径有1mm以上时，与基质分离，放入另一装有基质的饲养箱中，继续饲养成具生殖带的成蚓。本发明的方法具有操作简单易行，成本低、保证各个批次蚯蚓大小均一、体重相近等优势。
Description
技术领域
本发明涉及动物饲养技术领域，尤其涉及赤子爱胜蚯蚓室内饲养与繁殖的方法。
背景技术
环节动物栖息于海洋、淡水或潮湿的土壤，是软底质生境中最占优势的潜居动物。其中赤子爱胜蚯蚓是其中的代表生物。体长60～160毫米，体宽3～5毫米，体节80～110个。环带呈橙红色或栗红色，外观有条纹，体背刚毛对生。有雄孔、雌孔各1对，受精囊孔2对，储精囊4对。砂囊大，位于第17～19节。赤子爱胜蚯蚓生命周期短，在20℃的条件下，孵化需要3～4周，7～8周即可发育成熟。它繁殖能力强，一条蚯蚓可以在一周内产2～5个蚓茧，每个蚓茧可孵化出几条蚯蚓。它繁殖率高、适应性强，适宜人工养殖，是目前世界上养殖最普遍的蚯蚓良种。因此，赤子爱胜蚯蚓广泛应用于农药毒性检测、生态环境检测等试验中，是生态毒理学研究中的模式物种。
目前，国内虽有一些规模化养殖赤子爱胜蚯蚓的机构，但缺乏室内标准化养殖赤子爱胜蚯蚓的机构。因此，提供一种可操作的赤子爱胜蚯蚓室内饲养与繁殖的方法，实现赤子爱胜蚯蚓在室内有序分类饲养与繁殖，对获取高质量的生物试材、保证药物安全性评估顺利开展、有效评估药物的环境毒性等具有重要作用。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种可操作的、实现赤子爱胜蚯蚓室内标准化饲养与繁殖的方法。
为解决上述技术问题，本发明提供了一种赤子爱胜蚯蚓的室内饲养方法，包括以下步骤：
S1、将赤子爱胜蚯蚓在装有基质的饲养箱中饲养，每隔6天喂食一次；
S2、按照所述步骤S1的方法培养4周后，将所述赤子爱胜蚯蚓从基质中分离，放入另一装有基质的饲养箱中按照所述步骤S1的方法继续饲养。
上述的室内饲养方法，优选的，所述饲养箱的箱盖为透气箱盖；所述基质占所述饲养箱体积的1/3。
上述的室内饲养方法，优选的，所述饲养温度15℃～25℃。
上述的室内饲养方法，优选的，所述基质为泥炭藓，所述步骤S1中所述喂食的饲料为灭菌牛粪或浸泡后灭菌的紫花苜蓿颗粒。
上述的室内饲养方法，优选的，所述基质在使用前，加入20℃的曝气水，将所述基质与水搅拌均匀，至捏团不流水、松开不散落的状态。
上述的室内饲养方法，优选的，所述步骤S2中，从基质中分离得到的所述赤子爱胜蚯蚓身上不带有基质。
作为一个总的技术构思，本发明还提供了一种赤子爱胜蚯蚓的繁殖方法，包括以下步骤：
S3、将经过上述室内饲养方法饲养得到的赤子爱胜蚯蚓从基质中分离，得到含有蚓茧的基质；
S4、将所述含有蚓茧的基质倒入饲养箱中培养，使蚓茧孵化成幼蚓；
S5、所述幼蚓培养至直径有1mm以上时，将所述幼蚓与基质分离，放入另一装有基质的饲养箱中，按照所述步骤S1的饲养方法继续饲养成具生殖带的成蚓。
上述的繁殖方法，优选的，所述步骤S4的培养过程中，每周定期饲喂一次饲料；所述饲养温度为15℃～25℃。
上述的繁殖方法，优选的，所述基质为泥炭藓。
上述的繁殖方法，优选的，所述基质在使用前，加入20℃的曝气水，将所述基质与水搅拌均匀，至捏团不流水、松开不散落的状态。
与现有技术相比，本发明的优点在于：
(1)本发明提供了一种赤子爱胜蚯蚓室内标准化饲养与繁殖的方法，操作简单易行，成本低，该方法可保证赤子爱胜蚯蚓各个批次有序地分箱，各批次蚯蚓大小均一、周龄相近，符合赤子爱胜蚯蚓的生活规律，可为药物安全性评价提供高质量的生物试材，可实现赤子爱胜蚯蚓的批量培养，适用于实验室养殖。
(2)本发明首次采用室内标准化方法饲养和繁殖赤子爱胜蚯蚓；可以实现赤子爱胜蚯蚓各个批次、世代的有序分类饲养与繁殖，保证各个批次蚯蚓大小均一、体重相近。
具体实施方式
以下结合具体优选的实施例对本发明作进一步描述，但并不因此而限制本发明的保护范围。
实施例
以下实施例中所采用的材料和仪器均为市售。
实施例1：
一种本发明的赤子爱胜蚯蚓的室内饲养方法，包括以下步骤：
(1)器具的准备：准备一个规格为长×宽×高为0.4m×0.2m×0.2m的塑料箱，切去箱盖中间区域，保留箱盖边缘约6cm左右，在切去的区域覆盖80目纱网后用溶胶固定，做为饲养箱。
将制作好的上述饲养箱，用20mg/L高锰酸钾溶液或40mg/L次氯酸钠溶液浸泡饲养箱30min，再用清水冲洗干净。
(2)准备基质：将泥炭藓充分捏碎，加入20℃的曝气水，用手搅拌均匀至捏团不流水、松开不散落的状态。
(3)成蚓的饲养：2015年2月28日在清洗好的饲养箱中放入占饲养箱体积1/3的上述基质，放入300条左右体色红润、大小均一、具生殖带、活跃的赤子爱胜蚯蚓的成蚓，给其编号为QY20150228F。设定饲养温度为15～25℃。第二天观察成蚓情况，若未发现蚯蚓逃逸或死亡，则饲喂饲料(饲料为灭菌牛粪或浸泡后灭菌的紫花苜蓿颗粒)，此后每周(隔6天)定期饲喂一次，饲喂前一天需检查饲料剩余情况，若剩余量超过饲喂量的1/3，则减少饲喂量。
(5)成蚓的分离：成蚓连续培养四周(2015年3月28日)时，将基质倒在干净的托盘中，将基质中全部的成蚓挑出，使成蚓上不带有基质。将成蚓放入另外一个加了约1/3基质的饲养箱中(基质的成分与步骤(2)中相同)，给其编号为QY20150328F，挑出的成蚓继续按照步骤(4)中方法培养四周。四周后按照步骤(5)的方法继续分离。
按照实施例1的方法，培养的成蚓大小均一、体色红润、活跃，生长良好，未发现病虫害与死亡。
实施例2：
一种本发明的赤子爱胜蚯蚓的繁殖方法，包括以下步骤：
(1)器具的准备：准备一个规格为长×宽×高为0.4m×0.2m×0.2m的塑料箱，切去箱盖中间区域，保留箱盖边缘约6cm左右，在切去的区域覆盖80目纱网后用溶胶固定，做为饲养箱。
将制作好的上述饲养箱，用20mg/L高锰酸钾溶液浸泡饲养箱30min，再用清水冲洗干净。
(2)准备基质：将泥炭藓充分捏碎，加入20℃的曝气水，用手搅拌均匀至捏团不流水、松开不散落的状态。
(3)蚓茧的培养：2015年3月28日，取实施例1的步骤(5)分离成蚓后剩下的基质，所述基质内含大量蚓茧。将基质倒回原饲养箱中继续培养，蚓茧编号为QY20150228F01T。保持基质湿润，无需饲喂。
(4)蚓茧孵化期间的培养：蚓茧培养1周(2015年4月4日)之后，开始有幼蚓孵化，随时观察，培养四周时(2015年4月25日)，蚓茧基本上全部孵化为幼蚓，蚓茧孵化率为90％。此后每周定期饲喂一次饲料(饲料为灭菌牛粪或浸泡后灭菌的紫花苜蓿颗粒)。
(5)幼蚓分离：培养8周(2015年5月23日)左右，目测幼蚓身体直径约有1mm以上时，将基质倒在干净的托盘中，挑出全部的幼蚓(约900条)。将幼蚓分为三箱，在每个装有约1/3基质的饲养箱(基质的成分与步骤(2)相同)中放入约300条幼蚓，编号分别为QY20150228F01T01、QY20150228F01T02、QY20150228F01T03。
(6)幼蚓培养：在幼蚓分离的第二天对幼蚓继续仔细检查，若幼蚓正常(未发现蚯蚓逃逸或死亡)，则饲喂饲料(饲料为灭菌牛粪或浸泡后灭菌的紫花苜蓿颗粒)。此后每周(隔6天)定期饲喂一次饲料；继续培养约6周(2015年7月4日)左右，幼蚓基本上已经成为具生殖带的成蚓，可用于试验与繁殖。
按照实施例2的方法，蚓茧的孵化良好，幼蚓活跃，大小均一，得到的成蚓体色红润、活跃，大小均一。
1、对编号QY20150228F01T01的赤子爱胜蚯蚓进行体重称量：
取编号QY20150228F01T01用于参比物氯乙酰胺试验的赤子爱胜蚯蚓，染毒前，将蚯蚓用去离子水水洗干净，用纱布吸干身体表面水分后，逐条称重，随机选择体重300mg～600mg之间的蚯蚓，每10条蚯蚓分为一组，称量体重见表1。
表1：编号QY20150228F01T01赤子爱胜蚯蚓的体重记录表
从表1的体重称量结果可知：各组之间体重没有显著性差异，P>0.05。
2、编号QY20150228F01T01的赤子爱胜蚯蚓氯乙酰胺染毒试验：
取编号QY20150228F01T01的赤子爱胜蚯蚓，随机选择体重300mg～600mg之间的蚯蚓，每10条蚯蚓分为一组，进行氯乙酰胺溶液染毒实验，具体过程为：
称取氯乙酰胺1.014g，用去离子水溶解并定容于100mL容量瓶中，配成浓度为10.00mg/mL的氯乙酰胺储备液S。
取7份1500g的人工土壤(干重)，用移液器向1500g人工土壤(干重)中上述储备液和蒸馏水，充分搅拌使药液、土壤和水混合均匀，得到浓度分别为10.0、20.0、40.0、80.0、160mg a.i./kg干土的试验液。将上述每组试验液平均分为三份，作为平行样，分别盛装于1L的标本瓶中。为确保每个重复中染毒的人工土壤干重达到500g，故每处理染毒的人工土壤干重为1650g(大于500g×3)，染毒后向每个烧杯中称取675g(含水量为35％，干重为500g)染毒后的人工土壤。
挑选体重0.30～0.60g有生殖带的健康赤子爱胜蚯蚓随机放入标本瓶中，每个标本瓶中放入10条赤子爱胜蚯蚓。于染毒后7d、14d观察并记录赤子爱胜蚯蚓的中毒症状和死亡数，将观察结果记录于表2中。
表2：参比物氯乙酰胺对蚯蚓急性毒性试验数据记录表
数据处理：
采用统计软件SPSS12.0，以处理浓度的对数值为自变量x，以(校正)死亡率的机率值为因变量y，建立毒力回归方程，计算参比物对蚯蚓急性毒性的半致死浓度LC50及95％置信限。具体的计算结果参见表3。
表3：参比物氯乙酰胺对蚯蚓急性毒性试验结果表
从表3的计算结果可知：参比物氯乙酰胺对蚯蚓急性毒性LC50(14d)为28.38mg/kg干土，95％置信限为26.47～30.73mg/kg干土。符合GB/T 31270.15-2014中质量控制中要求，参比物质试验中氯乙酰胺对蚯蚓14d LC50应在20.0mg/kg干土～80.0mg/kg干土之间。证明所用蚯蚓进行参比试验的结果准确可靠，未发现病虫害与死亡。
3、对编号QY20150228F01T02的赤子爱胜蚯蚓进行体重称量：
取编号QY20150228F01T02用于参比物氯乙酰胺试验的赤子爱胜蚯蚓，染毒前，将蚯蚓用去离子水水洗干净，用纱布吸干身体表面水分后，逐条称重，随机选择体重300mg～600mg之间的蚯蚓，每10条蚯蚓分为一组，称量体重见表4。
表4：编号QY20150228F01T02的赤子爱胜蚯蚓的体重记录表
| 处理 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 平均体重 |
| CK-1 | 0.335 | 0.363 | 0.374 | 0.361 | 0.377 | 0.372 | 0.328 | 0.345 | 0.346 | 0.373 | 0.357 |
| CK-2 | 0.388 | 0.385 | 0.338 | 0.375 | 0.381 | 0.379 | 0.379 | 0.380 | 0.337 | 0.367 | 0.371 |
| CK-3 | 0.363 | 0.374 | 0.370 | 0.392 | 0.390 | 0.382 | 0.346 | 0.353 | 0.380 | 0.357 | 0.371 |
| CK-4 | 0.322 | 0.309 | 0.316 | 0.365 | 0.325 | 0.366 | 0.333 | 0.348 | 0.359 | 0.424 | 0.347 |
| 1-1 | 0.339 | 0.342 | 0.384 | 0.309 | 0.371 | 0.322 | 0.317 | 0.346 | 0.429 | 0.306 | 0.347 |
| 1-2 | 0.333 | 0.380 | 0.358 | 0.359 | 0.316 | 0.310 | 0.334 | 0.363 | 0.419 | 0.376 | 0.355 |
| 1-3 | 0.329 | 0.328 | 0.323 | 0.371 | 0.352 | 0.340 | 0.339 | 0.437 | 0.416 | 0.404 | 0.364 |
| 1-4 | 0.407 | 0.351 | 0.379 | 0.361 | 0.343 | 0.349 | 0.444 | 0.437 | 0.336 | 0.461 | 0.387 |
| 2-1 | 0.354 | 0.303 | 0.335 | 0.403 | 0.409 | 0.365 | 0.379 | 0.308 | 0.334 | 0.300 | 0.349 |
| 2-2 | 0.399 | 0.339 | 0.321 | 0.330 | 0.380 | 0.318 | 0.300 | 0.313 | 0.373 | 0.476 | 0.355 |
| 2-3 | 0.320 | 0.339 | 0.341 | 0.327 | 0.402 | 0.338 | 0.511 | 0.421 | 0.300 | 0.344 | 0.364 |
| 2-4 | 0.420 | 0.306 | 0.418 | 0.392 | 0.404 | 0.460 | 0.301 | 0.468 | 0.403 | 0.319 | 0.389 |
| 3-1 | 0.310 | 0.313 | 0.364 | 0.353 | 0.366 | 0.460 | 0.331 | 0.347 | 0.300 | 0.365 | 0.351 |
| 3-2 | 0.358 | 0.360 | 0.385 | 0.356 | 0.365 | 0.314 | 0.300 | 0.376 | 0.417 | 0.324 | 0.356 |
| 3-3 | 0.323 | 0.334 | 0.301 | 0.307 | 0.447 | 0.569 | 0.339 | 0.352 | 0.319 | 0.369 | 0.366 |
| 3-4 | 0.460 | 0.476 | 0.308 | 0.322 | 0.339 | 0.383 | 0.379 | 0.422 | 0.356 | 0.481 | 0.393 |
| 4-1 | 0.301 | 0.413 | 0.391 | 0.319 | 0.418 | 0.321 | 0.334 | 0.328 | 0.380 | 0.317 | 0.352 |
| 4-2 | 0.469 | 0.323 | 0.349 | 0.330 | 0.300 | 0.434 | 0.303 | 0.320 | 0.374 | 0.364 | 0.357 |
| 4-3 | 0.361 | 0.396 | 0.341 | 0.420 | 0.344 | 0.368 | 0.350 | 0.322 | 0.315 | 0.476 | 0.369 |
| 4-4 | 0.426 | 0.393 | 0.400 | 0.373 | 0.497 | 0.324 | 0.387 | 0.394 | 0.348 | 0.387 | 0.393 |
| 5-1 | 0.362 | 0.361 | 0.352 | 0.369 | 0.339 | 0.351 | 0.354 | 0.37 | 0.383 | 0.303 | 0.354 |
| 5-2 | 0.391 | 0.360 | 0.306 | 0.362 | 0.401 | 0.318 | 0.309 | 0.425 | 0.317 | 0.386 | 0.358 |
| 5-3 | 0.346 | 0.300 | 0.352 | 0.454 | 0.393 | 0.523 | 0.358 | 0.345 | 0.317 | 0.330 | 0.372 |
| 5-4 | 0.396 | 0.392 | 0.310 | 0.432 | 0.353 | 0.566 | 0.326 | 0.342 | 0.488 | 0.406 | 0.401 |
| 6-1 | 0.325 | 0.398 | 0.370 | 0.383 | 0.367 | 0.315 | 0.402 | 0.359 | 0.300 | 0.326 | 0.355 |
| 6-2 | 0.304 | 0.352 | 0.425 | 0.394 | 0.324 | 0.461 | 0.317 | 0.334 | 0.364 | 0.324 | 0.360 |
| 6-3 | 0.399 | 0.301 | 0.380 | 0.309 | 0.339 | 0.378 | 0.422 | 0.306 | 0.466 | 0.434 | 0.373 |
| 6-4 | 0.381 | 0.363 | 0.360 | 0.502 | 0.465 | 0.333 | 0.432 | 0.527 | 0.332 | 0.367 | 0.406 |
从表4的体重称量结果可知：各组之间体重没有显著性差异，P>0.05。
2、编号QY20150228F01T02的赤子爱胜蚯蚓氯乙酰胺染毒试验：
取编号QY20150228F01T02的赤子爱胜蚯蚓，随机选择体重300mg～600mg之间的蚯蚓，每10条蚯蚓分为一组，进行氯乙酰胺溶液染毒实验，具体过程为：
称参比物氯乙酰胺0.6061g，用去离子水溶解并定容于100mL容量瓶中，配成浓度为6.00mg/mL的氯乙酰胺储备液S。
移取储备液S加入至水分含量为3.88％的2493g人工土壤中，再加入739g去离子水，搅拌均匀后，得到水分含量为35％染毒后的人工土壤。染毒后的人工土壤中，氯乙酰胺溶液的浓度分别为20.0、24.0、28.8、34.6、41.5、49.8mg/kg干土。将上述每组试验液平均分为四份，作为平行样，分别盛装于1L的标本瓶中。
挑选体重0.30～0.60g有生殖带的健康赤子爱胜蚯蚓随机放入标本瓶中，每个标本瓶中放入10条赤子爱胜蚯蚓。于染毒后7d、14d观察并记录赤子爱胜蚯蚓的中毒症状和死亡数，将观察结果记录于表5中。
表5：参比物氯乙酰胺对蚯蚓急性毒性试验数据记录表
数据处理：
采用统计软件SPSS12.0，以处理浓度的对数值为自变量x，以(校正)死亡率的机率值为因变量y，建立毒力回归方程，计算参比物对蚯蚓急性毒性的半致死浓度LC50及95％置信限。具体的计算结果参见表6。
表6：参比物氯乙酰胺对蚯蚓急性毒性试验结果表
从表6的计算结果可知：测试结果表明氯乙酰胺对蚯蚓急性毒性半致死浓度LC50(14d)为36.0mg/kg干土，95％置信限为34.2～38.0mg/kg干土，符合GB/T 31270.15-2014中质量控制中要求，参比物质试验中氯乙酰胺对蚯蚓14d LC50应在20.0mg/kg干土～80.0mg/kg干土之间。证明所用蚯蚓进行参比试验的结果准确可靠，未发现病虫害与死亡。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制。虽然本发明已以较佳实施例揭示如上，然而并非用以限定本发明。任何熟悉本领域的技术人员，在不脱离本发明的精神实质和技术方案的情况下，都可利用上述揭示的方法和技术内容对本发明技术方案做出许多可能的变动和修饰，或修改为等同变化的等效实施例。因此，凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改、等同替换、等效变化及修饰，均仍属于本发明技术方案保护的范围内。
Claims (1)
1.一种赤子爱胜蚯蚓的繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）器具的准备：准备一个规格为长×宽×高为0.4 m×0.2 m×0.2m的塑料箱，切去箱盖中间区域，保留箱盖边缘6 cm左右，在切去的区域覆盖80目纱网后用溶胶固定，做为饲养箱；将制作好的上述饲养箱，用20 mg/L高锰酸钾溶液浸泡饲养箱30 min，再用清水冲洗干净；
（2）准备基质：将泥炭藓充分捏碎，加入20 ℃的曝气水，用手搅拌均匀至捏团不流水、松开不散落的状态；
（3）成蚓的饲养：在清洗好的饲养箱中放入占饲养箱体积1/3的基质，放入300条左右体色红润、大小均一、具生殖带、活跃的赤子爱胜蚯蚓的成蚓；设定饲养温度为15～25 ℃；第二天观察成蚓情况，若未发现蚯蚓逃逸或死亡，则饲喂饲料，所述饲料为灭菌牛粪或浸泡后灭菌的紫花苜蓿颗粒，此后每隔6天定期饲喂一次，饲喂前一天需检查饲料剩余情况，若剩余量超过饲喂量的1/3，则减少饲喂量；
（4）成蚓的分离：成蚓连续培养四周时，将基质倒在干净的托盘中，将基质中全部的成蚓挑出，使成蚓上不带有基质；将成蚓放入另外一个加了约1/3基质的饲养箱中，挑出的成蚓继续按照所述步骤（3）中方法培养四周；四周后按照步骤（4）的方法继续分离；
（5）蚓茧的培养：取所述步骤（4）分离成蚓后剩下的基质，所述剩下的基质内含蚓茧，将所述剩下的基质倒回原饲养箱中继续培养，保持基质湿润，无需饲喂；
（6）蚓茧孵化期间的培养：蚓茧培养1周之后，开始有幼蚓孵化，随时观察，培养四周时，蚓茧基本上全部孵化为幼蚓；此后每周定期饲喂一次饲料，所述饲料为灭菌牛粪或浸泡后灭菌的紫花苜蓿颗粒；
（7）幼蚓分离：培养8周左右，目测幼蚓身体直径约有1mm以上时，将基质倒在干净的托盘中，挑出全部的幼蚓约900条；将幼蚓分为三箱，在每个装有约1/3基质的饲养箱中放入约300条幼蚓；
（8）幼蚓培养：在幼蚓分离的第二天对幼蚓继续仔细检查，若未发现幼蚓逃逸或死亡，则饲喂饲料，所述饲料为灭菌牛粪或浸泡后灭菌的紫花苜蓿颗粒；此后每隔6天定期饲喂一次饲料；继续培养约6周，幼蚓基本上已经成为具生殖带的成蚓，可用于试验与繁殖。
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