CN105758692A - 一种适合实验室使用的大型真菌的粉化方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种适合实验室使用的大型真菌的粉化方法，该方法包括以下步骤：⑴将新鲜的大型真菌子实体或菌丝体样品采用硅胶干燥方法进行干燥，得到干燥样品；⑵将所述干燥样品装入聚乙烯离心管或冻存管中，同时在聚乙烯离心管或冻存管中装入两到三颗氧化锆小珠；⑶将所述步骤⑵填装好的聚乙烯离心管或冻存管全部放入有盖的聚苯乙烯塑料盒中，打开该聚苯乙烯塑料盒的盖子，放入温度为?90℃~?80℃的超低温冰箱中保存20~30min；⑷取出所述聚苯乙烯塑料盒，盖上盖子进行震摇，每8~15秒停下一次，打开盒盖，检视样品粉化情况，直到粉化程度满足需要即可。本发明具有简单、安全、环保、成本低、高通量的特点，不但避免了样品间的污染，而且保证了样品无损失。

Description

一种适合实验室使用的大型真菌的粉化方法

技术领域

本发明涉及大型真菌技术领域，尤其涉及一种适合实验室使用的大型真菌的粉化方法。

背景技术

对大型真菌的研究和应用工作中，多会涉及大型真菌的粉化。例如，在生理生态、生物化学、分子生物学等领域的研究中，为了提取或分析大型真菌的生物代谢产物、DNA或RNA，一般会把大型真菌的子实体或菌丝体进行粉化作为预处理。

在实验室对大型真菌的粉化方法中，首先要提及的是利用研钵、研杵进行手工研磨，研磨的过程中有的会在研钵中加入液氮辅助粉化或保护样品，这种传统的方法直接而有效，被广泛使用。然而，这种方法存在诸多缺陷：首先，这种方法费时费力；其次，研钵和研杵的反复使用有潜在的样品交叉污染；再次，使用液氮的过程中，液氮的剧烈沸腾会使样品迸溅，从而造成样品损失；另外，一旦操作失误，-196℃的液氮可能会对操作者造成冻伤，危及操作者的身体健康。在常规改进的研磨方法中，常见的是利用手持式电动研磨棒，目前这种研磨方法的应用虽然广见于实验室，但反响不佳，其最让人诟病的是研磨的粉化效果不佳，而且并不能为操作者节省时间。还有一种被广大操作者认可的粉化方法，是利用高通量组织研磨仪进行的粉化方法，该方法实现了高通量，研磨粉化效果一般能达到需求，并且节省时间，而其缺点是高通量组织研磨器本身价格昂贵，如果操作不当，其工作过程中高速摆动的金属机械摆臂也会对操作者或仪器本身造成伤害。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种简单、安全、成本低的适合实验室使用的大型真菌的粉化方法。

为解决上述问题，本发明所述的一种适合实验室使用的大型真菌的粉化方法，包括以下步骤：

⑴将新鲜的大型真菌子实体或菌丝体样品采用硅胶干燥方法进行干燥，得到干燥样品；

⑵将所述干燥样品装入聚乙烯离心管或冻存管中，同时在聚乙烯离心管或冻存管中装入两到三颗氧化锆小珠；

⑶将所述步骤⑵填装好的聚乙烯离心管或冻存管全部放入有盖的聚苯乙烯塑料盒中，打开该聚苯乙烯塑料盒的盖子，放入温度为-90℃~-80℃的超低温冰箱中保存20~30min；

⑷取出所述聚苯乙烯塑料盒，盖上盖子进行震摇，每8~15秒停下一次，打开盒盖，检视样品粉化情况，直到粉化程度满足需要即可。

本发明与现有技术相比具有以下优点：

1、本发明中采用硅胶干燥方法对大型真菌子实体或菌丝体样品进行干燥，而使用的硅胶干燥剂，可以在室温中进行物理干燥，干燥过程中不会产热，在干燥的同时保护了大型真菌的内含物不因高温而降解。此外，使用后的硅胶经过加热处理，可以反复使用，避免资源浪费，保护了环境。

2、本发明中涉及的仪器、材料等是实验室常备物品，不需另外购置，一些材料可以反复使用，既节约又环保，符合绿色理念。

3、本发明中的聚乙烯离心管（或冻存管）是实验室常用品，推荐的坚硬小珠都可以在清洗、灭菌后也可以重复使用。

4、本发明中聚乙烯离心管或冻存管可以为被粉化样品提供独立的密闭空间，避免了样品在粉化过程中的损失，同时保证多个不同样品之间不会发生交叉污染，使高通量的实现成为可能。同时，使用的离心管或冻存管可以作为样品粉化后的储存容器，减少了粉化后的转移步骤。

5、本发明中的低温环境，可以保护被粉化样品的内含物免受高温降解。

6、本发明中聚苯乙烯塑料盒具有很好的保温隔温效果、密度低、软质且具有一定的弹性，从而有利于操作者手持震摇，并保证盒内物品在剧烈震摇时不会被盒壁撞破。

7、本发明由于对样品没有顺序要求，因此，多个不同种类的样品可以同时混装进行震摇，实现了高通量，其通量超过了市场上常见的商品类高通量组织研磨器。

8、本发明简单、安全、环保、成本低。

具体实施方式

一种适合实验室使用的大型真菌的粉化方法，包括以下步骤：

⑴将新鲜的大型真菌子实体或菌丝体样品采用硅胶干燥方法进行干燥，得到干燥样品。

⑵将干燥样品装入聚乙烯（polyethylene，PE）离心管或冻存管中，同时在聚乙烯离心管中装入两到三颗氧化锆小珠。

聚乙烯离心管和氧化锆小珠的大小可根据需要选择；氧化锆小珠可以根据需要用钢珠、玻璃珠等坚硬小珠代替。

⑶将步骤⑵填装好的聚乙烯离心管或冻存管全部放入有盖的聚苯乙烯(Polystyrene , PS)塑料盒中，打开塑料盒的盖子，放入温度为-90℃~-80℃的超低温冰箱中保存20~30min；

⑷取出聚苯乙烯塑料盒，盖上盖子进行震摇，即：手持迅速上下摇晃约，使盒内聚乙烯离心管或冻存管快速运动，与聚苯乙烯塑料盒发生碰撞而剧烈震荡。每8~15秒停下一次，打开盒盖，检视样品粉化情况，直到粉化程度满足需要。

常见的大型真菌一般在第一个10秒的震摇过程中，就能达到需要的粉化程度。

如果条件受限，没有超低温冰箱，可以将装填好的样品埋藏在干冰中。以家庭用冰箱的冷冻部分代替超低温冰箱，效果略逊，但对于大型真菌子实体菌伞的样品材料，可以达到很好的粉化效果。

Claims (1)

1.一种适合实验室使用的大型真菌的粉化方法，包括以下步骤：

⑴将新鲜的大型真菌子实体或菌丝体样品采用硅胶干燥方法进行干燥，得到干燥样品；

⑵将所述干燥样品装入聚乙烯离心管或冻存管中，同时在聚乙烯离心管或冻存管中装入两到三颗氧化锆小珠；

⑶将所述步骤⑵填装好的聚乙烯离心管或冻存管全部放入有盖的聚苯乙烯塑料盒中，打开该聚苯乙烯塑料盒的盖子，放入温度为-90℃~-80℃的超低温冰箱中保存20~30min；

⑷取出所述聚苯乙烯塑料盒，盖上盖子进行震摇，每8~15秒停下一次，打开盒盖，检视样品粉化情况，直到粉化程度满足需要即可。