CN105745225A - Nav1.7抗体和使用所述抗体的方法 - Google Patents

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Abstract

本文公开了与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的抗体。本文还公开了治疗有需要的受试者的疼痛、瘙痒、神经原性炎症或咳嗽的方法。所述方法包括将所述抗体给予受试者。

Description

Nav1.7抗体和使用所述抗体的方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2013年9月5日提交的美国临时专利申请号61/874,234、2013年12月12日提交的美国临时专利申请号61/915,304和2014年2月25日提交的美国临时专利申请号61/944,388的优先权，其全部均通过引用结合到本文中。
政府权利声明
本发明在美国国立卫生研究院(NationalInstitutesofHealth)授予的合同号NIH1DP2OD008380-01、R01DE17794、R01DE22743和R01NS67686的政府支持下完成。美国政府在本发明中享有一定权利。
技术领域
本发明涉及抗NaV1.7抗体和使用所述抗体检测和/或抑制NaV1.7的方法。抗体可用于治疗患有疾病、咳嗽、疼痛和/或瘙痒的受试者。
发明背景
电压门控钠(NaV)通道(Voltage-gatedsodiumchannel)负责可兴奋细胞中动作电位的上行。NaV通道含有四聚重复序列(即DI-DIV)，各重复序列由6个跨膜螺旋或区段(即区段S1-S6)组成。前4个区段(S1-S4)包含电压传感器结构域(VSD)，其中区段S4因响应膜电位的变化而移动。具体地讲，区段S4含有感知膜电位变化的精氨酸残基，并且与区段S3的羧基(C)端一半一起形成称为电压传感器开关(voltagesensorpaddle)的螺旋-转角(环)-螺旋。当四聚重复序列D1-DIV装配在一起时，各四聚重复序列D1-DIV的区段S5和S6形成孔结构域。因此，通过电压传感器开关在响应膜电位变化时的移动使孔结构域开启、关闭和不活动(即门控)。
人具有9个高度同源的NaV通道亚型(即NaV1.1-NaV1.9)，其每一个分别在各种组织(例如神经元和肌细胞)中起截然不同的作用以影响神经和心脏兴奋性。NaV通道亚型调节异常导致多种疾病，包括心律失常、癫痫、共济失调、周期性瘫痪和疼痛病症。NaV通道是例如抗惊厥药、局部麻醉药、抗心律失常药和镇痛药等多种药物的靶标。这些药物常常结合NaV通道的开启失活状态。然而，这些药物在9个NaV通道亚型中显示选择性差，因此，无选择性地靶向多个NaV通道亚型可导致脱靶作用，这进而导致严重的副作用(例如心脏毒性)。
因此，有需要鉴定和开发对一个NaV通道亚型的选择性超过其它8个NaV通道亚型的新分子。所述选择性可允许治疗与NaV通道亚型有关的疾病并且防止导致有害和严重副作用的脱靶作用。
发明概述
本发明涉及结合NaV1.7的电压传感器开关(VSP)的分离的抗体或其抗体片段。
VSP可位于NaV1.7的结构域II(DII)上。VSP可包含SEQIDNO:23所示氨基酸序列。分离的抗体或抗体片段可与VSP的环结合。环可包含SEQIDNO:21所示氨基酸序列。
VSP可位于NaV1.7的结构域IV(DIV)上。VSP可包含SEQIDNO:50所示氨基酸序列。分离的抗体或抗体片段可与VSP的环结合。环可包含SEQIDNO:51所示氨基酸序列。
VSP可包含选自以下的氨基酸序列：SEQIDNO:23和SEQIDNO:50。VSP可包含SEQIDNO:23所示氨基酸序列。VSP可包含SEQIDNO:50所示氨基酸序列。
分离的抗体或其抗体片段可与VSP的环结合。该环可包含选自以下的氨基酸序列：SEQIDNO:21和SEQIDNO:51。该环可包含SEQIDNO:21所示氨基酸序列。该环可包含SEQIDNO:51所示氨基酸序列。
抗体或抗体片段可抑制NaV1.7。抗体或抗体片段可以约0.03μM的IC50抑制NaV1.7。抗体或抗体片段可以约23nM的KD自NaV1.7中解离。
抗体可选自：人抗体、免疫球蛋白分子、二硫键连接的Fv、单克隆抗体、亲和力成熟抗体(affinitymatured)、scFv、嵌合抗体、单结构域抗体、CDR移植抗体、双抗体、人源化抗体、牛源化抗体、犬源化抗体、马源化抗体、猫源化抗体、猪源化抗体、多特异性抗体、Fab、双重特异性抗体、DVD、Fab’、二特异性抗体、F(ab’)2和Fv。
抗体或抗体片段可以是人的、牛的、犬的、马的、猫的或猪的。
抗体或抗体片段可包含选自以下的重链免疫球蛋白恒定结构域：人IgM恒定结构域、人IgG4恒定结构域、人IgG1恒定结构域、人IgE恒定结构域、人IgG2恒定结构域、人IgG3恒定结构域和人IgA恒定结构域。
抗体或抗体片段可包含重链牛免疫球蛋白恒定结构域、重链犬免疫球蛋白恒定结构域、重链马免疫球蛋白恒定结构域、重链猫免疫球蛋白恒定结构域或重链猪免疫球蛋白恒定结构域。
抗体或抗体片段可包含轻链牛免疫球蛋白恒定结构域、轻链犬免疫球蛋白恒定结构域、轻链马免疫球蛋白恒定结构域、轻链猫免疫球蛋白恒定结构域或轻链猪免疫球蛋白恒定结构域。
抗体可以是单克隆抗体。
抗体或抗体片段可包含：(a)包含与SEQIDNO:4所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含与SEQIDNO:8所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含与SEQIDNO:5所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的互补决定区(CDR)1、包含与SEQIDNO:6所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:7与所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含与SEQIDNO:9所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:10所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:11所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。
抗体或抗体片段可包含：(a)包含与SEQIDNO:4所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含与SEQIDNO:8所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含与SEQIDNO:5所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:6所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:7所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含与SEQIDNO:9所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:10所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:11所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。
抗体或抗体片段可包含：(a)包含SEQIDNO:4的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含SEQIDNO:5的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:6的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:7的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:11的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。
抗体或抗体片段可含有包含SEQIDNO:5、SEQIDNO:6和SEQIDNO:7的可变重链结构域(variableheavydomain)。
抗体或抗体片段可含有包含SEQIDNO:9、SEQIDNO:10和SEQIDNO:11的可变轻链结构域(variablelightdomain)。
抗体或抗体片段可含有包含SEQIDNO:5、SEQIDNO:6和SEQIDNO:7的可变重链结构域和包含SEQIDNO:9、SEQIDNO:10和SEQIDNO:11的可变轻链结构域。
抗体或抗体片段可含有包含SEQIDNO:4的氨基酸序列的可变重链结构域和包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的可变轻链结构域。
抗体或抗体片段可包含可变重链和可变轻链，所述可变重链含有包含SEQIDNO:5的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:6的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:7的氨基酸序列的CDR3，所述可变轻链含有包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:11的氨基酸序列的CDR3。
本发明还涉及与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含与SEQIDNO:4所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含与SEQIDNO:8所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含与SEQIDNO:5所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的互补决定区(CDR)1、包含与SEQIDNO:6所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:7所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含与SEQIDNO:9所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:10所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:11所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。抗体或抗体片段与NaV1.7结构域II的跨膜螺旋S3和S4之间的环结合。NaV1.7结构域II的跨膜螺旋S3和S4之间的环可包含SEQIDNO:21所示氨基酸序列。
本发明进一步涉及与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含与SEQIDNO:4所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含与SEQIDNO:8所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含与SEQIDNO:5所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:6所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:7所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含与SEQIDNO:9所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:10所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:11所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。抗体或抗体片段与NaV1.7结构域II的跨膜螺旋S3和S4之间的环结合。NaV1.7结构域II的跨膜螺旋S3和S4之间的环可包含SEQIDNO:21所示氨基酸序列。
本发明进一步涉及与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含SEQIDNO:4的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含SEQIDNO:5的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:6的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:7的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:11的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。抗体或抗体片段与NaV1.7结构域II的跨膜螺旋S3和S4之间的环结合。NaV1.7结构域II的跨膜螺旋S3和S4之间的环可包含SEQIDNO:21所示氨基酸序列。
本发明进一步涉及与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含与SEQIDNO:4所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含与SEQIDNO:8所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含与SEQIDNO:5所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的互补决定区(CDR)1、包含与SEQIDNO:6所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:7所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含与SEQIDNO:9所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:10所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:11所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。抗体或抗体片段可抑制NaV1.7。抗体或抗体片段可通过稳定NaV1.7的关闭状态来抑制NaV1.7。
本发明进一步涉及与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含与SEQIDNO:4所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含与SEQIDNO:8所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含与SEQIDNO:5所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:6所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:7所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含与SEQIDNO:9所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:10所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:11所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。抗体或抗体片段可抑制NaV1.7。抗体或抗体片段可通过稳定NaV1.7的关闭状态来抑制NaV1.7。
本发明进一步涉及与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含SEQIDNO:4的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含SEQIDNO:5的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:6的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:7的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:11的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。抗体或抗体片段可抑制NaV1.7。抗体或抗体片段可通过稳定NaV1.7的关闭状态来抑制NaV1.7。
本发明进一步涉及与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含与SEQIDNO:4所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含与SEQIDNO:8所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含与SEQIDNO:5所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的互补决定区(CDR)1、包含与SEQIDNO:6所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:7所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含与SEQIDNO:9所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:10所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:11所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。抗体可选自人抗体、免疫球蛋白分子、二硫键连接的Fv、单克隆抗体、亲和力成熟抗体、scFv、嵌合抗体、单结构域抗体、CDR移植抗体、双抗体、人源化抗体、牛源化抗体、犬源化抗体、马源化抗体、猫源化抗体、猪源化抗体、多特异性抗体、Fab、双重特异性抗体、DVD、Fab’、二特异性抗体、F(ab’)2和Fv。
本发明进一步涉及与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含与SEQIDNO:4所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含与SEQIDNO:8所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含与SEQIDNO:5所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:6所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:7所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含与SEQIDNO:9所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:10所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:11所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。抗体可选自人抗体、免疫球蛋白分子、二硫键连接的Fv、单克隆抗体、亲和力成熟抗体、scFv、嵌合抗体、单结构域抗体、CDR移植抗体、双抗体、人源化抗体、牛源化抗体、犬源化抗体、马源化抗体、猫源化抗体、猪源化抗体、多特异性抗体、Fab、双重特异性抗体、DVD、Fab’、二特异性抗体、F(ab’)2和Fv。
本发明进一步涉及与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含SEQIDNO:4的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含SEQIDNO:5的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:6的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:7的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:11的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。抗体可选自人抗体、免疫球蛋白分子、二硫键连接的Fv、单克隆抗体、亲和力成熟抗体、scFv、嵌合抗体、单结构域抗体、CDR移植抗体、双抗体、人源化抗体、牛源化抗体、犬源化抗体、马源化抗体、猫源化抗体、猪源化抗体、多特异性抗体、Fab、双重特异性抗体、DVD、Fab’、二特异性抗体、F(ab’)2和Fv。
本发明进一步涉及与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含与SEQIDNO:4所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含与SEQIDNO:8所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含与SEQIDNO:5所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的互补决定区(CDR)1、包含与SEQIDNO:6所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:7所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含与SEQIDNO:9所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:10所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:11所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。抗体或抗体片段可以是人的、牛的、犬的、马的、猫的或猪的。
本发明进一步涉及与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含与SEQIDNO:4所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含与SEQIDNO:8所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含与SEQIDNO:5所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:6所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:7所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含与SEQIDNO:9所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:10所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:11所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。抗体或抗体片段可以是人的、牛的、犬的、马的、猫的或猪的。
本发明进一步涉及与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含SEQIDNO:4的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含SEQIDNO:5的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:6的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:7的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:11的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。抗体或抗体片段可以是人的、牛的、犬的、马的、猫的或猪的。
本发明进一步涉及与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含与SEQIDNO:4所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含与SEQIDNO:8所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含与SEQIDNO:5所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的互补决定区(CDR)1、包含与SEQIDNO:6所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:7所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含与SEQIDNO:9所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:10所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:11所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。抗体可以是克隆抗体。
本发明进一步涉及与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含与SEQIDNO:4所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含与SEQIDNO:8所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含与SEQIDNO:5所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:6所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:7所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含与SEQIDNO:9所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:10所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:11所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。抗体可以是克隆抗体。
本发明进一步涉及与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含SEQIDNO:4的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含SEQIDNO:5的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:6的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:7的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:11的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。抗体可以是克隆抗体。
本发明进一步涉及与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含与SEQIDNO:4所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含与SEQIDNO:8所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含与SEQIDNO:5所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的互补决定区(CDR)1、包含与SEQIDNO:6所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:7所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含与SEQIDNO:9所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:10所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:11所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。抗体或抗体片段可包含选自以下的重链免疫球蛋白恒定结构域：人IgM恒定结构域、人IgG4恒定结构域、人IgG1恒定结构域、人IgE恒定结构域、人IgG2恒定结构域、人IgG3恒定结构域和人IgA恒定结构域。
本发明进一步涉及与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含与SEQIDNO:4所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含与SEQIDNO:8所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含与SEQIDNO:5所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:6所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:7所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含与SEQIDNO:9所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:10所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:11所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。抗体或抗体片段可包含选自以下的重链免疫球蛋白恒定结构域：人IgM恒定结构域、人IgG4恒定结构域、人IgG1恒定结构域、人IgE恒定结构域、人IgG2恒定结构域、人IgG3恒定结构域和人IgA恒定结构域。
本发明进一步涉及与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含SEQIDNO:4的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含SEQIDNO:5的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:6的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:7的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:11的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。抗体或抗体片段可包含选自以下的重链免疫球蛋白恒定结构域：人IgM恒定结构域、人IgG4恒定结构域、人IgG1恒定结构域、人IgE恒定结构域、人IgG2恒定结构域、人IgG3恒定结构域和人IgA恒定结构域。
本发明还涉及与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含与SEQIDNO:4所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含与SEQIDNO:8所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含与SEQIDNO:5所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的互补决定区(CDR)1、包含与SEQIDNO:6所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:7所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含与SEQIDNO:9所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:10所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:11所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。抗体或抗体片段可包含重链牛免疫球蛋白恒定结构域、重链犬免疫球蛋白恒定结构域、重链马免疫球蛋白恒定结构域、重链猫免疫球蛋白恒定结构域或重链猪免疫球蛋白恒定结构域。
本发明进一步涉及与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含与SEQIDNO:4所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含与SEQIDNO:8所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含与SEQIDNO:5所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:6所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:7所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含与SEQIDNO:9所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:10所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:11所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。抗体或抗体片段可包含重链牛免疫球蛋白恒定结构域、重链犬免疫球蛋白恒定结构域、重链马免疫球蛋白恒定结构域、重链猫免疫球蛋白恒定结构域或重链猪免疫球蛋白恒定结构域。
本发明进一步涉及与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含SEQIDNO:4的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含SEQIDNO:5的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:6的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:7的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:11的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。抗体或抗体片段可包含重链牛免疫球蛋白恒定结构域、重链犬免疫球蛋白恒定结构域、重链马免疫球蛋白恒定结构域、重链猫免疫球蛋白恒定结构域或重链猪免疫球蛋白恒定结构域。
本发明还涉及与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含与SEQIDNO:4所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含与SEQIDNO:8所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含与SEQIDNO:5所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的互补决定区(CDR)1、包含与SEQIDNO:6所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:7所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含与SEQIDNO:9所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:10所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:11所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。抗体或抗体片段可包含轻链牛免疫球蛋白恒定结构域、轻链犬免疫球蛋白恒定结构域、轻链马免疫球蛋白恒定结构域、轻链猫免疫球蛋白恒定结构域或轻链猪免疫球蛋白恒定结构域。
本发明进一步涉及与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含与SEQIDNO:4所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含与SEQIDNO:8所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含与SEQIDNO:5所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:6所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:7所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含与SEQIDNO:9所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:10所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:11所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。抗体或抗体片段可包含轻链牛免疫球蛋白恒定结构域、轻链犬免疫球蛋白恒定结构域、轻链马免疫球蛋白恒定结构域、轻链猫免疫球蛋白恒定结构域或轻链猪免疫球蛋白恒定结构域。
本发明进一步涉及与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含SEQIDNO:4的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含SEQIDNO:5的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:6的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:7的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:11的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。抗体或抗体片段可包含轻链牛免疫球蛋白恒定结构域、轻链犬免疫球蛋白恒定结构域、轻链马免疫球蛋白恒定结构域、轻链猫免疫球蛋白恒定结构域或轻链猪免疫球蛋白恒定结构域。
本发明进一步涉及编码与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段的分离的核酸。该核酸可编码SEQIDNO:4-11的至少一个氨基酸序列。该核酸可包含SEQIDNO:12-19的至少一个核苷酸序列。
本发明进一步涉及编码与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段的分离的核酸，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含与SEQIDNO:4所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含与SEQIDNO:8所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含与SEQIDNO:5所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的互补决定区(CDR)1、包含与SEQIDNO:6所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:7所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含与SEQIDNO:9所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:10所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:11所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。该核酸可编码SEQIDNO:4-11的至少一个氨基酸序列。该核酸可包含SEQIDNO:12-19的至少一个核苷酸序列。
本发明进一步涉及编码与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段的分离的核酸，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含与SEQIDNO:4所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含与SEQIDNO:8所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含与SEQIDNO:5所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:6所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:7所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含与SEQIDNO:9所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:10所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:11所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。该核酸可编码SEQIDNO:4-11的至少一个氨基酸序列。该核酸可包含SEQIDNO:12-19的至少一个核苷酸序列。
本发明进一步涉及编码与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段的分离的核酸，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含SEQIDNO:4的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含SEQIDNO:5的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:6的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:7的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:11的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。该核酸可编码SEQIDNO:4-11的至少一个氨基酸序列。该核酸可包含SEQIDNO:12-19的至少一个核苷酸序列。
本发明进一步涉及包含编码与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段的分离的核酸的载体。
本发明进一步涉及包含编码与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段的分离的核酸的载体，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含与SEQIDNO:4所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含与SEQIDNO:8所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含与SEQIDNO:5所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的互补决定区(CDR)1、包含与SEQIDNO:6所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:7所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含与SEQIDNO:9所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:10所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:11所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。
本发明进一步涉及包含编码与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段的分离的核酸的载体，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含与SEQIDNO:4所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含与SEQIDNO:8所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含与SEQIDNO:5所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:6所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:7所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含与SEQIDNO:9所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:10所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:11所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。
本发明进一步涉及包含编码与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段的分离的核酸的载体，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含SEQIDNO:4的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含SEQIDNO:5的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:6的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:7的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:11的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。
本发明进一步涉及含有包含编码与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段的分离的核酸的载体的宿主细胞。
本发明进一步涉及含有包含编码与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段的分离的核酸的载体的宿主细胞，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含与SEQIDNO:4所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含与SEQIDNO:8所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含与SEQIDNO:5所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的互补决定区(CDR)1、包含与SEQIDNO:6所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:7所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含与SEQIDNO:9所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:10所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:11所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。
本发明进一步涉及含有包含编码与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段的分离的核酸的载体的宿主细胞，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含与SEQIDNO:4所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含与SEQIDNO:8所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含与SEQIDNO:5所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:6所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:7所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含与SEQIDNO:9所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:10所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:11所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。
本发明进一步涉及含有包含编码与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段的分离的核酸的载体的宿主细胞，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含SEQIDNO:4的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含SEQIDNO:5的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:6的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:7的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:11的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。
本发明进一步涉及包含与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段的药物组合物。药物组合物可进一步包含药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。药物组合物可包含治疗有效量的上述抗体或抗体片段。
本发明进一步涉及包含与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段的药物组合物，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含与SEQIDNO:4所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含与SEQIDNO:8所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含与SEQIDNO:5所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的互补决定区(CDR)1、包含与SEQIDNO:6所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:7所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含与SEQIDNO:9所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:10所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:11所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。药物组合物可进一步包含药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。药物组合物可包含治疗有效量的上述抗体或抗体片段。
本发明进一步涉及包含与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段的药物组合物，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含与SEQIDNO:4所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含与SEQIDNO:8所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含与SEQIDNO:5所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:6所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:7所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含与SEQIDNO:9所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:10所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:11所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。药物组合物可进一步包含药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。药物组合物可包含治疗有效量的上述抗体或抗体片段。
本发明进一步涉及包含与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段的药物组合物，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含SEQIDNO:4的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含SEQIDNO:5的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:6的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:7的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:11的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。药物组合物可进一步包含药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。药物组合物可包含治疗有效量的上述抗体或抗体片段。
本发明进一步涉及治疗有需要的受试者的疼痛的方法。所述方法可包括给予与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段。
疼痛可为炎症性疼痛、神经性疼痛、痛觉过敏、异常性疼痛、阵发性剧痛症(paroxysmalextremepaindisorder)、遗传性红斑性肢痛症、癌症相关疼痛、非典型疼痛、神经原性炎症相关疼痛、慢性疼痛或病理性疼痛或其组合。炎症性疼痛可为关节炎疼痛、牙疼、腰痛、炎性肠病相关疼痛或颞下颌关节(TMJ)相关疼痛或其组合。神经性疼痛可能与糖尿病性神经病、化疗、人免疫缺陷病毒(HIV)感染、疱疹后神经痛(PHN)、手术、脊髓损伤或中风或其组合有关。手术可为截肢术、开胸术、疝手术或乳房切除术。神经原性炎症相关疼痛病况可为复杂性区域性疼痛综合征(CRPS)、头痛或偏头痛或其组合。
疼痛可能与瘙痒有关。瘙痒可为急性瘙痒、慢性瘙痒、依赖组胺的瘙痒或不依赖组胺的瘙痒或其组合。急性瘙痒可由胃泌素释放肽(GRP)介导。急性瘙痒可由浅层背角神经元中的GRP介导。慢性瘙痒可能与特应性皮炎、变应性接触性皮炎、银屑病、肾病、肝病、带状疱疹病毒或湿疹或其组合有关。
上述方法可进一步包括抑制受试者的疼痛。
上述方法可进一步包括提高受试者的疼痛阈值。
受试者可为人、牛、犬、马、猫或猪。
本发明进一步涉及治疗有需要的受试者的疼痛的方法。所述方法可包括给予与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含与SEQIDNO:4所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含与SEQIDNO:8所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含与SEQIDNO:5所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的互补决定区(CDR)1、包含与SEQIDNO:6所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:7所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含与SEQIDNO:9所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:10所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:11所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。
疼痛可为炎症性疼痛、神经性疼痛、痛觉过敏、异常性疼痛、阵发性剧痛症、遗传性红斑性肢痛症、癌症相关疼痛、非典型疼痛、神经原性炎症相关疼痛、慢性疼痛或病理性疼痛或其组合。炎症性疼痛可为关节炎疼痛、牙疼、腰痛、炎性肠病相关疼痛或颞下颌关节(TMJ)相关疼痛或其组合。神经性疼痛可能与糖尿病性神经病、化疗、人免疫缺陷病毒(HIV)感染、疱疹后神经痛(PHN)、手术、脊髓损伤或中风或其组合有关。手术可为截肢术、开胸术、疝手术或乳房切除术。神经原性炎症相关疼痛病况可为复杂性区域性疼痛综合征(CRPS)、头痛或偏头痛或其组合。
疼痛可能与瘙痒有关。瘙痒可为急性瘙痒、慢性瘙痒、依赖组胺的瘙痒或不依赖组胺的瘙痒或其组合。急性瘙痒可由胃泌素释放肽(GRP)介导。急性瘙痒可由浅层背角神经元中的GRP介导。慢性瘙痒可能与特应性皮炎、变应性接触性皮炎、银屑病、肾病、肝病、带状疱疹病毒或湿疹或其组合有关。
上述方法可进一步包括抑制受试者的疼痛。
上述方法可进一步包括提高受试者的疼痛阈值。
受试者可为人、牛、犬、马、猫或猪。
本发明进一步涉及治疗有需要的受试者的疼痛的方法。所述方法可包括给予与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含与SEQIDNO:4所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含与SEQIDNO:8所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含与SEQIDNO:5所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:6所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:7所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含与SEQIDNO:9所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:10所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:11所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。
疼痛可为炎症性疼痛、神经性疼痛、痛觉过敏、异常性疼痛、阵发性剧痛症、遗传性红斑性肢痛症、癌症相关疼痛、非典型疼痛、神经原性炎症相关疼痛、慢性疼痛或病理性疼痛或其组合。炎症性疼痛可为关节炎疼痛、牙疼、腰痛、炎性肠病相关疼痛或颞下颌关节(TMJ)相关疼痛或其组合。神经性疼痛可能与糖尿病性神经病、化疗、人免疫缺陷病毒(HIV)感染、疱疹后神经痛(PHN)、手术、脊髓损伤或中风或其组合有关。手术可为截肢术、开胸术、疝手术或乳房切除术。神经原性炎症相关疼痛病况可为复杂性区域性疼痛综合征(CRPS)、头痛或偏头痛或其组合。
疼痛可能与瘙痒有关。瘙痒可为急性瘙痒、慢性瘙痒、依赖组胺的瘙痒或不依赖组胺的瘙痒或其组合。急性瘙痒可由胃泌素释放肽(GRP)介导。急性瘙痒可由浅层背角神经元中的GRP介导。慢性瘙痒可能与特应性皮炎、变应性接触性皮炎、银屑病、肾病、肝病、带状疱疹病毒或湿疹或其组合有关。
上述方法可进一步包括抑制受试者的疼痛。
上述方法可进一步包括提高受试者的疼痛阈值。
受试者可为人、牛、犬、马、猫或猪。
本发明进一步涉及治疗有需要的受试者的疼痛的方法。所述方法可包括给予与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含SEQIDNO:4的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含SEQIDNO:5的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:6的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:7的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:11的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。
疼痛可为炎症性疼痛、神经性疼痛、痛觉过敏、异常性疼痛、阵发性剧痛症、遗传性红斑性肢痛症、癌症相关疼痛、非典型疼痛、神经原性炎症相关疼痛、慢性疼痛或病理性疼痛或其组合。炎症性疼痛可为关节炎疼痛、牙疼、腰痛、炎性肠病相关疼痛或颞下颌关节(TMJ)相关疼痛或其组合。神经性疼痛可能与糖尿病性神经病、化疗、人免疫缺陷病毒(HIV)感染、疱疹后神经痛(PHN)、手术、脊髓损伤或中风或其组合有关。手术可为截肢术、开胸术、疝手术或乳房切除术。神经原性炎症相关疼痛病况可为复杂性区域性疼痛综合征(CRPS)、头痛或偏头痛或其组合。
疼痛可能与瘙痒有关。瘙痒可为急性瘙痒、慢性瘙痒、依赖组胺的瘙痒或不依赖组胺的瘙痒或其组合。急性瘙痒可由胃泌素释放肽(GRP)介导。急性瘙痒可由浅层背角神经元中的GRP介导。慢性瘙痒可能与特应性皮炎、变应性接触性皮炎、银屑病、肾病、肝病、带状疱疹病毒或湿疹或其组合有关。
上述方法可进一步包括抑制受试者的疼痛。
上述方法可进一步包括提高受试者的疼痛阈值。
受试者可为人、牛、犬、马、猫或猪。
本发明进一步涉及治疗有需要的受试者的瘙痒的方法。所述方法可包括给予与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段。
瘙痒可为急性瘙痒、慢性瘙痒、依赖组胺的瘙痒或不依赖组胺的瘙痒或其组合。急性瘙痒可由胃泌素释放肽(GRP)介导。急性瘙痒可由浅层背角神经元中的GRP介导。慢性瘙痒可能与特应性皮炎、变应性接触性皮炎、银屑病、肾病、肝病、带状疱疹病毒或湿疹或其组合有关。
瘙痒可与变应性接触性皮炎有关。
受试者可为人、牛、犬、马、猫或猪。
本发明进一步涉及治疗有需要的受试者的瘙痒的方法。所述方法可包括给予与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含与SEQIDNO:4所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含与SEQIDNO:8所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含与SEQIDNO:5所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的互补决定区(CDR)1、包含与SEQIDNO:6所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:7所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含与SEQIDNO:9所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:10所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:11所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。
瘙痒可为急性瘙痒、慢性瘙痒、依赖组胺的瘙痒或不依赖组胺的瘙痒或其组合。急性瘙痒可由胃泌素释放肽(GRP)介导。急性瘙痒可由浅层背角神经元中的GRP介导。慢性瘙痒可能与特应性皮炎、变应性接触性皮炎、银屑病、肾病、肝病、带状疱疹病毒或湿疹或其组合有关。
瘙痒可与变应性接触性皮炎有关。
受试者可为人、牛、犬、马、猫或猪。
本发明进一步涉及治疗有需要的受试者的瘙痒的方法。所述方法可包括给予与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含与SEQIDNO:4所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含与SEQIDNO:8所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含与SEQIDNO:5所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:6所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:7所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含与SEQIDNO:9所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:10所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:11所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。
瘙痒可为急性瘙痒、慢性瘙痒、依赖组胺的瘙痒或不依赖组胺的瘙痒或其组合。急性瘙痒可由胃泌素释放肽(GRP)介导。急性瘙痒可由浅层背角神经元中的GRP介导。慢性瘙痒可能与特应性皮炎、变应性接触性皮炎、银屑病、肾病、肝病、带状疱疹病毒或湿疹或其组合有关。
瘙痒可与变应性接触性皮炎有关。
受试者可为人、牛、犬、马、猫或猪。
本发明进一步涉及治疗有需要的受试者的瘙痒的方法。所述方法可包括给予与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含SEQIDNO:4的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含SEQIDNO:5的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:6的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:7的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:11的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。
瘙痒可为急性瘙痒、慢性瘙痒、依赖组胺的瘙痒或不依赖组胺的瘙痒或其组合。急性瘙痒可由胃泌素释放肽(GRP)介导。急性瘙痒可由浅层背角神经元中的GRP介导。慢性瘙痒可能与特应性皮炎、变应性接触性皮炎、银屑病、肾病、肝病、带状疱疹病毒或湿疹或其组合有关。
瘙痒可与变应性接触性皮炎有关。
受试者可为人、牛、犬、马、猫或猪。
本发明进一步涉及治疗有需要的受试者的神经原性炎症的方法。所述方法可包括给予与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段。
神经原性炎症可与哮喘、关节炎、湿疹、头痛、偏头痛或银屑病或其组合有关。
受试者可为人、牛、犬、马、猫或猪。
本发明进一步涉及治疗有需要的受试者的神经原性炎症的方法。所述方法可包括给予与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含与SEQIDNO:4所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含与SEQIDNO:8所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含与SEQIDNO:5所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的互补决定区(CDR)1、包含与SEQIDNO:6所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:7所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含与SEQIDNO:9所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:10所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:11所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。
神经原性炎症可与哮喘、关节炎、湿疹、头痛、偏头痛或银屑病或其组合有关。
受试者可为人、牛、犬、马、猫或猪。
本发明进一步涉及治疗有需要的受试者的神经原性炎症的方法。所述方法可包括给予与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含与SEQIDNO:4所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含与SEQIDNO:8所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含与SEQIDNO:5所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:6所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:7所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含与SEQIDNO:9所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:10所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:11所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。
神经原性炎症可与哮喘、关节炎、湿疹、头痛、偏头痛或银屑病或其组合有关。
受试者可为人、牛、犬、马、猫或猪。
本发明进一步涉及治疗有需要的受试者的神经原性炎症的方法。所述方法可包括给予与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含SEQIDNO:4的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含SEQIDNO:5的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:6的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:7的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:11的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。
神经原性炎症可与哮喘、关节炎、湿疹、头痛、偏头痛或银屑病或其组合有关。
受试者可为人、牛、犬、马、猫或猪。
本发明进一步涉及治疗有需要的受试者的咳嗽的方法。所述方法可包括给予与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段。
咳嗽可为病理性咳嗽或慢性咳嗽。
受试者可为人、牛、犬、马、猫或猪。
本发明进一步涉及治疗有需要的受试者的咳嗽的方法。所述方法可包括给予与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含与SEQIDNO:4所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含与SEQIDNO:8所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含与SEQIDNO:5所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的互补决定区(CDR)1、包含与SEQIDNO:6所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:7所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含与SEQIDNO:9所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:10所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:11所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。
咳嗽可为病理性咳嗽或慢性咳嗽。
受试者可为人、牛、犬、马、猫或猪。
本发明进一步涉及治疗有需要的受试者的咳嗽的方法。所述方法可包括给予与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含与SEQIDNO:4所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含与SEQIDNO:8所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含与SEQIDNO:5所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:6所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:7所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含与SEQIDNO:9所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:10所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:11所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。
咳嗽可为病理性咳嗽或慢性咳嗽。
受试者可为人、牛、犬、马、猫或猪。
本发明进一步涉及治疗有需要的受试者的咳嗽的方法。所述方法可包括给予与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含SEQIDNO:4的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含SEQIDNO:5的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:6的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:7的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:11的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。
咳嗽可为病理性咳嗽或慢性咳嗽。
受试者可为人、牛、犬、马、猫或猪。
本发明进一步涉及用于检测NaV1.7的试剂盒，其中试剂盒包含与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段。
本发明进一步涉及用于检测NaV1.7的试剂盒，其中试剂盒包含与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含与SEQIDNO:4所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含与SEQIDNO:8所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含与SEQIDNO:5所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的互补决定区(CDR)1、包含与SEQIDNO:6所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:7所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含与SEQIDNO:9所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:10所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:11所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。
本发明进一步涉及用于检测NaV1.7的试剂盒，其中试剂盒包含与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含与SEQIDNO:4所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含与SEQIDNO:8所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含与SEQIDNO:5所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:6所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:7所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含与SEQIDNO:9所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:10所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:11所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。
本发明进一步涉及用于检测NaV1.7的试剂盒，其中试剂盒包含与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段可包含：(a)包含SEQIDNO:4的氨基酸序列的可变重链结构域；(b)包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的可变轻链结构域；(c)含有包含SEQIDNO:5的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:6的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:7的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或(d)含有包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:11的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。
本发明进一步涉及与NaV1.7结合的分离的抗体或其抗体片段，其中抗体或抗体片段与SEQIDNO:20所示氨基酸序列结合。抗体或抗体片段可不抑制NaV1.7。
本发明进一步涉及包含以下的肽：(a)与SEQIDNO:21所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列；(b)与SEQIDNO:23所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列；(c)与SEQIDNO:50所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列；或(d)与SEQIDNO:51所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列。
该肽可包含(a)与SEQIDNO:21所示氨基酸序列具有至少95%同一性的氨基酸序列；(b)与SEQIDNO:23所示氨基酸序列具有至少95%同一性的氨基酸序列；(c)与SEQIDNO:50所示氨基酸序列具有至少95%同一性的氨基酸序列；或(d)与SEQIDNO:51所示氨基酸序列具有至少95%同一性的氨基酸序列。
该肽可包含(a)SEQIDNO:21所示氨基酸序列；(b)SEQIDNO:23所示氨基酸序列；(c)SEQIDNO:50所示氨基酸序列；或(d)SEQIDNO:51所示氨基酸序列。
该肽可包含SEQIDNO:21所示氨基酸序列。
该肽可包含SEQIDNO:23所示氨基酸序列。
该肽可包含SEQIDNO:50所示氨基酸序列。
该肽可包含SEQIDNO:51所示氨基酸序列。
本发明进一步涉及编码包含以下的肽的分离的核酸：(a)与SEQIDNO:21所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列；(b)与SEQIDNO:23所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列；(c)与SEQIDNO:50所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列；或(d)与SEQIDNO:51所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列。
本发明进一步涉及编码可包含以下的肽的分离的核酸：(a)与SEQIDNO:21所示氨基酸序列具有至少95%同一性的氨基酸序列；(b)与SEQIDNO:23所示氨基酸序列具有至少95%同一性的氨基酸序列；(c)与SEQIDNO:50所示氨基酸序列具有至少95%同一性的氨基酸序列；或(d)与SEQIDNO:51所示氨基酸序列具有至少95%同一性的氨基酸序列。
本发明进一步涉及编码可包含以下的肽的分离的核酸：(a)SEQIDNO:21所示氨基酸序列；(b)SEQIDNO:23所示氨基酸序列；(c)SEQIDNO:50所示氨基酸序列；或(d)SEQIDNO:51所示氨基酸序列。
本发明进一步涉及编码可包含SEQIDNO:21所示氨基酸序列的肽的分离的核酸。
本发明进一步涉及编码可包含SEQIDNO:23所示氨基酸序列的肽的分离的核酸。
本发明进一步涉及编码可包含SEQIDNO:50所示氨基酸序列的肽的分离的核酸。
本发明进一步涉及编码可包含SEQIDNO:51所示氨基酸序列的肽的分离的核酸。
附图简述
图1显示(A)人NaV1.7的氨基酸序列(GenBank登记号NP_002968)，其中下划线表示被1E16单克隆抗体识别的表位；(B)显示被1E16单克隆抗体识别的人NaV1.7表位的氨基酸序列。
图2显示(A)编码1E16单克隆抗体的可变重链的核苷酸序列；和(B)编码1E16单克隆抗体的可变轻链的核苷酸序列。重链和轻链各自的互补决定区(CDR)用下划线表示。
图3显示(A)1E16单克隆抗体的可变重链的氨基酸序列；和(B)1E16单克隆抗体的可变轻链的氨基酸序列。可变重链和轻链各自的CDR用下划线表示。
图4显示(A)细菌NaV通道的晶体结构，其中结构域II(DII)的跨膜螺旋S1和S2(即环1-2)和S3和S4(即环3-4)之间各自的环用铅线表示；(B)人NaV亚型DII的环3-4各自的氨基酸序列的比对，其中括弧表示选择用于产生1E16单克隆抗体(mAb)的氨基酸序列；(C)人NaV亚型的环1-2各自的氨基酸序列的比对，其中括弧表示选择用于产生1I5mAb的氨基酸序列。
图5显示使用完整NaV1.7DIIVSD的1E16mAb和1I5mAb的ELISA反应。数据表示为均值±S.E.M(n=3)。
图6显示电压传感器打靶1E16在HEK293细胞中抑制人NaV1.7。在1μM1I5(A)和100nM1E16(C)不存在或存在下表达hNaV1.7的HEK293细胞的代表性电流迹线。使用介于?80和+60mV之间的30ms电压阶跃从?120mV的膜钳制电位(holdingpotential)以10mV增量产生在1μM1I5(B)和100nM1E16(D)不存在(○)或存在(●)时的电流-电压关系。(E)在100nM1E16不存在(○)或存在(●)时稳态激活的电压依赖。使用30-ms试验脉冲从?120mV膜钳制电位起以从?90到+10mV的5mV增量产生稳态激活曲线。使各细胞的值归一化至在1E16不存在时的最大电导值(G0)。归一化曲线应用玻耳兹曼方程式拟合。实心正方形(■)显示与用实心圆(●)所示相同的1E16改进的激活曲线但定标至在1E16不存在时(○)的曲线。与在1E16不存在时(○)的?43.9±0.2mV相比，在1E16存在时(●)半激活电压(Vmid)为?24.0±0.2mV。(F)从?110mV到?30mV使用5mV增量500ms接着到?10mV的试验脉冲30ms，获得在100nM1E16不存在(○)或存在(●)时的稳态失活曲线。实心正方形(■)显示与实心圆(●)所示相同的1E16改进的稳态失活曲线但定标至在1E16不存在时(○)的曲线。半失活电压不受1E16影响(在1E16不存在时(○)为?79.3±0.3mV，在1E16存在时(●)为?78.6±0.2mV)。数据为均值±S.E.M。(n=10-12/组)。
图7显示在HEK293细胞中1E16以亚型特异性和状态依赖性方式抑制NaV1.7。(A)由1E16引起的人NaV1.7的状态(应用)依赖性抑制。在100nM1E16存在时在0.1(▲)、2(●)和10(■)Hz下从?120mV的膜钳制电位施加的30-ms去极化脉冲至?10mV期间的归一化电流振幅示图。(B)在不同频率(0.1、2和10Hz)下人NaV1.7电流的1E16抑制的浓度-反应曲线。0.1Hz的IC50和最大抑制值为106.7±18.0nM和83.7±5.6%，2Hz的为30.7±1.9nM和86.0±2.3%，10Hz的为16.7±1.6nM和98.6±4.1。(C)在10μM1E16不存在(对照，○)和存在(●)时7个不同NaV通道亚型的电流-电压关系。在?120mV的膜钳制电位下以10-mV增量持续30ms从–80至+60mV施加电压阶跃。(D)由1E16所致NaV通道亚型的浓度-反应曲线(对于NaV1.7，IC50=30.7±1.9nM，对于NaV1.6为6.3±2.2μM，对于NaV1.1、1.2、1.3、1.4、1.5和1.8为>5μM)。在2Hz的频率下从?120mV的膜钳制电位步进至?10mV达30ms持续时间诱导钠电流。数据以均值±S.E.M.给出(n=6?10/组)。
图8显示(A)人NaV亚型DII的跨膜螺旋S3和S4之间的环区的各氨基酸序列的比对；和(B)来自用于HEK293细胞中的电生理记录的不同物种的NaV亚型的跨膜螺旋S3和S4间的环区各自的氨基酸序列比对(用于电生理记录的NaV亚型中的序列差异与人NaV亚型的一样显著)。(A)和(B)中的括弧表示用于产生1E16mAb的人NaV1.7的区域。(B)中的下划线残基表示物种特异性差异，另在(B)中h=人，r=大鼠，m=小鼠。
图9显示1E16mAb对产生于电压传感器开关的尖端(环)和1E16之间的特异性相互作用的NaV1.7的作用。表达人NaV1.7通道的HEK293细胞(A)、在1E16(100nM)和肽(1μM)存在时(B)和仅在1E16(100nM)存在时在冲洗后(C)的代表性迹线和电流–电压关系。
图10显示1E16在小鼠中减轻炎症性和神经性疼痛并抑制脊髓突触传递。(A，B)1E16的鞘内注射减轻福尔马林诱导的炎症性疼痛。(A)在足跖内注射5%福尔马林后舔舐和退缩行为的时程。(B)在福尔马林注射后的I期(1-10min)和II期(10-45分钟)反应。与相应的对照抗体相比，*P<0.05。n=5只小鼠/组。(C)1E16(50μg)的鞘内(i.t.)注射减轻CCI诱导的神经性疼痛(机械性异常性疼痛)。与对照抗体相比，*P<0.05，n=6只小鼠/组。(D)1E16(10mg/kg，i.v.)的全身注射减轻CCI诱导的神经性疼痛(机械性异常性疼痛)。与对照抗体相比，*P<0.05，n=6只小鼠/组。(E，F)1E16抑制脊髓切片中的兴奋性突触传递。(e)laminaIIo神经元中的自发性EPSC(sEPSC)迹线。下组图，在对照Ab(1I5)和1E16处理(300nM)之前和期间迹线(1、2、3)的放大。(f)laminaIIo神经元中的sEPSC频率。与未处理基线相比，*P<0.05；与对照Ab(300nM)相比，#P<0.05，n=5个神经元/组。
图11显示幼稚小鼠和患有神经损伤(CCI.)的小鼠的整个固定背根节(DRG)的小型神经元中1E16mAb对持续钠电流(INaP)的作用。(A)显示在正常情况(未处理)下和在用对照1I5抗体(300nM)和1E16抗体(300nM)处理后持续钠电流(INaP)的迹线。(B)显示DRG神经元中INaP电流的振幅。在(b)中，在神经性疼痛情况下，CCI(1w)增加INaP电流，1E16mAb(300nM)对INaP产生较大的抑制。相比之下，对照mAb1I5没有作用。*P<0.05，n=5-17个神经元/组。各个柱中表明了记录的神经元的数目。数据表示为均值±S.E.M。
图12显示在鞘内注射1E16Ab和对照Ab1I5(50μg)之前和之后转棒试验中小鼠的跌落潜伏期(即转棒上的时间)。在鞘内注射后1E16Ab对运动功能没有作用。数据表示为均值±S.E.M。与对照Ab1I5和基线相比，P>0.05，n=5只小鼠。
图13显示1E16抗体与人NaV1.7的结合。数据表示为均值±S.E.M.(n=10)。
图14显示(A，B)在CCI后4天1E16在脊髓切片中抑制慢性疼痛增强的兴奋性伤害感受突触传递。(A)laminaIIo神经元中自发性EPSC(sEPSC)的迹线。下组图，在1I5和1E16处理(300nM)之前和期间迹线(1、2和3)的放大。(B)laminaIIo神经元中的sEPSC频率。与未处理基线相比，*P<0.05；与1I5(300nM)相比，#P<0.05，n=5个神经元/组。注意1E16在抑制慢性疼痛的突触传递中更有效，并且在TTX和1E16处理组之间没有差异。
图15显示1E16在小鼠的脊髓切片中抑制急性和慢性瘙痒和慢性瘙痒增强的突触传递。(A-C)1E16的鞘内注射减轻由化合物48/80(A，皮内)、氯喹(CQ)(B，皮内)和GRP(C，鞘内)诱导的急性瘙痒。与相应的对照(1I5)相比，*P<0.05。n=5-8只小鼠/组。(D，E)对背部皮肤的AEW处理后5天，1E16的鞘内(50μg，D)或i.v.(10mg/kg，E)注射减轻慢性瘙痒。*P<0.05，n=6只小鼠/组。(F，G)在AEW处理后5天，1E16抑制脊髓切片中的慢性瘙痒增强的兴奋性突触传递。(F)laminaIIo神经元中自发性EPSC(sEPSC)的迹线。下组图，在1I5和1E16处理(300nM)之前和期间迹线(1、2和3)的放大。(G)laminaIIo神经元中的sEPSC频率。注意在慢性瘙痒中sEPSC增强，这种增强被1E16(300nM)抑制。与未处理基线相比，*P<0.05；与1I5(300nM)相比，#P<0.05，n=5个神经元/组。
图16显示由1E16引起的人NaV1.7的状态(应用)依赖性抑制。在0.1(△)、2(○)和10(□)Hz下在100nM1E16存在时从-120mV的膜钳制电位施加的30-ms去极化脉冲至-10mV期间的归一化电流振幅示图。
图17显示DRG神经元中INaP电流的振幅。注意CCI增加INaP电流。在神经性疼痛情况下1E16(300nM)对InaP产生更大的抑制。相比之下，1I5没有作用。*P<0.05，n=5-17个神经元/组。数据表示为均值±S.E.M。
图18显示在小鼠的脊髓切片中SVmab1(1E16mAb)抑制急性和慢性瘙痒和慢性瘙痒增强的突触传递。(A-C)SVmab1的鞘内注射减轻由化合物48/80(A，皮内)、CQ(B，皮内)和GRP(C，鞘内)诱导的急性瘙痒。*P<0.05，n=5-8只小鼠/组。(D，E)在AEW处理后(5天)，SVmab1的鞘内(50μg，D)或i.v.(10mg/kg，E)注射减轻干性皮肤诱导的慢性瘙痒。*P<0.05，n=6只小鼠/组。(F-H)SVmab1的鞘内或全身注射减轻DNFB诱导的慢性瘙痒。(F)DNFB诱导的慢性瘙痒的范例和时程。(G)SVmab1的鞘内(50μg)注射在第10天减轻慢性瘙痒。(H)SVmab1(50mg/kg，i.v.)的全身注射在第12天减轻慢性瘙痒。*P<0.05，n=6只小鼠/组。(I，J)在AEW处理后5天，SVmab1抑制脊髓切片中的慢性瘙痒增强的兴奋性突触传递。(I)laminaIIo神经元中自发性EPSC(sEPSC)的迹线。下组图，在CTmab(1I5mAb)和SVmab1治疗(300nM)之前和期间迹线(1、2、3)的放大。(J)laminaIIo神经元中的sEPSC频率。注意sEPSC在慢性瘙痒中增强，这种增强被SVmab1抑制。*P<0.05，n=5个神经元/组。所有数据表示为均值±S.E.M。
图19显示小型DRG神经元中SVmab1抑制动作电位及瞬时钠电流和持续钠电流。(A)在离解的DRG神经元中SVmab1(1E16mAb)剂量依赖性地抑制动作电位。左，单个动作电位的迹线。右，动作电位振幅。*P<0.05，n=25-30个神经元/组。n.s.，无意义。(B)在离解的DRG神经元中SVmab1抑制持续钠电流(INaP)。左，处理之前(对照)和在用CTmab(1I5mAb，300nM)和SVmab1(300nM)处理后持续钠电流(INaP)的迹线。右，在解离的神经元中INaP的振幅。与对照相比，*P<0.05；与CTmab(300nM)相比，#P<0.05；n=10-15个神经元/组。(C)在幼稚小鼠的整个固定DRG的小型神经元中SVmab1(300nM)抑制动作电位。上部，动作电位的迹线。底部，峰数，*P<0.05，n=5-10个神经元/组。(D)在整个固定DRG的小型神经元中SVmab1(300nM)抑制瞬时钠电流(INas，密度)。n=5-10个神经元/组。所有数据表示为均值±S.E.M。
图20显示在脊髓切片的laminaII神经元中SVmab1延迟C-纤维刺激诱导的突触反应的传导。(A)带有连接的背根的小鼠脊髓切片的照片。注意将背根的远端插入吸力电极中。(B)显示脊髓切片的浅层背角中的膜片钳记录的示意图。(C)在SVmab1(1E16mAb，300nM)和CTmab(1I5mAb，300nM)处理后诱发EPSC(eEPSC)的迹线。注意SVmab1延迟sEPSC。(D)sEPSC延迟的比率。*P<0.05，n=5个神经元/组。数据表示为均值±S.E.M。
图21显示SVmab1(1E16mAb)的鞘内(I.T.50μg)和皮内(I.D.50μg)注射对化合物48/80和CQ诱导的急性瘙痒的作用的比较。*P<0.05，n=5只小鼠/组。
图22显示SVmab1(1E16mAb)减轻炎症性和神经性疼痛而不影响运动协调和平衡。(A，B)SVmab1的鞘内注射减轻福尔马林诱导的炎症性疼痛。(A)足跖内注射5%福尔马林后舔舐和退缩行为的时程。(B)福尔马林诱导的I期(1-10分钟)和II期(10-45分钟)反应。与相应的对照(CTmab)相比，*P<0.05。(C)转棒试验中的跌落潜伏期(转棒上的时间)和SVmab1和CTmab(50μg，i.t.)的作用。(D-F)SVmab1(10和50mg/kg，i.v.)的全身注射也减轻福尔马林诱导的炎症性疼痛和水肿。(D)福尔马林诱导的疼痛的时程。(E)福尔马林诱导的第1期和第2期反应。(F)福尔马林诱导的爪水肿(受累后爪的体积)。(G)SVmab1(50μg)的鞘内(i.t.)注射减轻CCI诱导的神经性疼痛(机械性异常性疼痛)。(H)SVmab1(10和50mg/kg，i.v.)的全身注射剂量依赖性地减轻CCI诱导的神经性疼痛(机械性异常性疼痛)。箭头表明注射抗体的时间。所有数据表示为均值±S.E.M。BL，基线。*P<0.05，相对于在相同剂量下相应的CTmab(B、E、F、G、H)；#P<0.05，相对于基线(F)。n=5-6只小鼠/组。
图23显示在脊髓切片的小型DRG神经元和伤害感受突触传递中SVmab1(1E16mAb)抑制瞬时钠电流和持续钠电流和动作电位。(A-D)在离解的DRG神经元中SVmab1抑制瞬时钠电流(INas)。(A)INas的电流/电压(I/V)关系和SVmab1(7、70和300nM)和CTmab(1I5mAb，300nM)的作用，n=15-20个神经元/组。(B)INas的迹线和SVmab1、CTmab(300nM)和TTX(1μM)的作用。(C)由SVmab1和TTX(1μM)引起的INas的百分比抑制。*P<0.05，相对于对照(未治疗)；#P<0.05，相对于CTmab(300nM)，&P<0.05，n=15-20。注意与SVmab1(300nM)相比，TTX(1μM)更大程度地抑制INas。(D)在大型DRG神经元中TTX(1μM)但非SVmab1(300nM)抑制INas。n=10。(E，F)在离解的小型DRG神经元中SVmab1抑制动作电位频率。(E)动作电位的迹线。(F)在电流注入(100和200pA)后的动作电位频率。*P<0.05，n=15-20个神经元/组。(G，H)在幼稚小鼠和具有神经损伤(CCI)的小鼠的整个固定DRG的小型神经元中SVmab1抑制持续钠电流(INaP)。(G)在处理前(对照)和在用CTmab(300nM)和SVmab1(300nM)处理后INaP的迹线。(H)DRG神经元中INaP的振幅，其在CCI之后增加。注意在CCI之后SVmab1(300nM)对INaP产生更大的抑制。*P<0.05，n=6-7个神经元/组。(I，J)在正常小鼠脊髓切片的IIo神经元中SVmab1抑制兴奋性突触传递。(I)自发性EPSC(sEPSC)的迹线。下组图，在CTmab和SVmab1处理(300nM)之前和期间迹线(1、2、3)的放大。(J)sEPSC的频率。*P<0.05，相对于基线；#P<0.05，相对于CTmab(300nM)；&P<0.05，n=5-6个神经元/组。(K，L)在CCI后4天在脊髓切片的laminaIIo神经元中SVmab1抑制慢性疼痛增强的兴奋性伤害感受突触传递。(K)sEPSC的迹线。下组图，在CTmab和SVmab1处理(300nM)之前和期间，迹线(1、2、3)的放大。(L)sEPSC的频率。*P<0.05，相对于在CCI后的未处理基线；#P<0.05，相对于CTmab(300nM)，n=5个神经元/组。注意在抑制慢性疼痛的突触传递中SVmab1与TTX一样有效。n.s.，无意义。所有数据表示为均值±S.E.M。
图24显示在第1期和第2期SVmab1(1E16mAb)的足跖内(i.pl.)注射减轻福尔马林诱导的炎症性疼痛。*P<0.05，相对于对照抗体(CTmab，在本文亦称为1I5mAb或1I5)，n=6只小鼠/组。在福尔马林注射前30分钟注射抗体。
图25显示NaV1.7单克隆抗体SVmab1(在本文亦称为1E16mAb或1E16)对疼痛和瘙痒的外周和中枢作用的示意图。由于在DRG中传导无髓鞘C-纤维初级感觉神经元的疼痛和瘙痒而表达NaV1.7。这些伤害感受/本体感受神经元的外周端支配皮肤、肌肉和关节，这些神经元的中枢端投射至脊髓浅层背角(laminaI和laminaII)。在C-纤维DRG神经元的胞体中合成的NaV1.7转运到脊髓中枢端，所述中枢端在laminaI中形成瘙痒和疼痛选择性投射神经元的突触(虚线框中的椭圆形)。在其中进行膜片钳记录的laminaIIo中，这些表达NaV1.7的C型传入端还形成兴奋性中间神经元(椭圆形)的突触。此外，这些laminaII中间神经元形成突触至疼痛和瘙痒选择性投射神经元，并且是疼痛和瘙痒传递两者必需的。SVmab1的全身注射通过抑制DRG神经元胞体中的NaV1.7介导的神经元兴奋性和外周与中枢轴突中动作电位的传导，而产生外周作用。SVmab1的鞘内注射通过抑制laminaIIo中间神经元中的NaV1.7介导的谷氨酸能突触传递而具有中枢作用。由于SVmab1的外周和中枢调节的结果，在急性和慢性两种情况下的疼痛和瘙痒被抑制。*表示NaV1.7抗体(即1E16mAb，在本文亦称为SVmab1)的作用部位。
图26显示(A)1E16mAb(即在本文亦称为SVmab1)的表位结合区的棒状图，(B)1E16mAb的Fab片段的带状图。
发明详述
本发明涉及结合NaV1.7的抗体。所述抗体对NaV1.7具有超过其它NaV通道亚型的高选择性，通过稳定NaV1.7的关闭状态来抑制NaV1.7。在人中，NaV1.7中的功能失去突变导致无力感知疼痛，而NaV1.7中的功能获得突变导致对疼痛的超敏反应。因此，抗NaV1.7抗体通过抑制NaV1.7可抑制或减轻有需要的受试者的疼痛。疼痛可与例如急性瘙痒、慢性瘙痒、依赖组胺的瘙痒、不依赖组胺的瘙痒等瘙痒或其组合有关。NaV1.7抗体还可提高受试者的疼痛的阈值。因此，本发明还涉及治疗有需要的受试者的疼痛的方法，其中将NaV1.7抗体给予受试者。
此外，抗NaV1.7抗体通过抑制NaV1.7可抑制或减轻有需要的受试者的瘙痒。瘙痒可为急性瘙痒、慢性瘙痒、依赖组胺的瘙痒、不依赖组胺的瘙痒、变应性接触性皮炎或其组合。急性瘙痒可以是胃泌素释放肽(GRP)诱导或介导的急性瘙痒。因此，本发明还涉及治疗有需要的受试者的瘙痒的方法，其中将NaV1.7抗体给予受试者。
另外，抗NaV1.7抗体通过抑制NaV1.7可抑制有需要的受试者的神经原性炎症。因此，本发明还涉及治疗有需要的受试者的神经原性炎症的方法，其中将NaV1.7抗体给予受试者。
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1.定义
除非本文另有说明，否则本文所用全部技术和科学术语具有与本领域普通技术人员通常理解的相同含义。万一发生抵触，则以本文件(包括定义)为准。下面描述了优选的方法和材料，但是类似或等同于本文所述的方法和材料可用于本发明的实践和测试。本文提及的所有出版物、专利申请、专利和其它参考文献通过引用以其整体结合到本文中。本文公开的材料、方法和实施例只是说明性的，无意是限制性的。
本文所用术语“包含”、“包括”、“具有”、“怀有”、“能够”、“含有”及其变体欲为开放式过渡性短语、术语或措词，不排除其它行动或结构的可能性。单数形式“a”、“and”和“the”包括复数对象，除非文中另有明确规定。不论是否明确阐述，本公开内容还考虑“包括”本文呈现的实施方案或要素、“由”和“基本由”本文呈现的实施方案或要素“组成”的其它实施方案。
对于数字范围的引述，明确考虑了具有相同精确度的其中的每个间插数字。例如，对于6-9的范围，除6和9以外，还考虑了数字7和8，对于范围6.0-7.0，明确考虑了数字6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9和7.0。
“接纳体”和“接纳体抗体”在本文用来是指提供或编码一个或多个构架区的氨基酸序列的至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的抗体或核酸序列。术语“接纳体”包括提供或编码恒定区的抗体氨基酸或核酸序列。该术语还包括提供或编码构架区和恒定区的一个或多个的抗体氨基酸或核酸序列。例如，术语“接纳体”可指提供或编码一个或多个构架区的氨基酸序列的至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的人抗体氨基酸或核酸序列。所述接纳体可含有不出现在人抗体的一个或多个特定位置的至少1个、至少2个、至少3个、至少4个、至少5个或至少10个氨基酸残基。例如，接纳体构架区和/或接纳体恒定区可来源于或获自种系抗体基因、成熟抗体基因或功能抗体(例如本领域众所周知的抗体、研发中的抗体或市购可获得的抗体)。
“亲和力成熟抗体”本文用来是指在一个或多个CDR中具有一个或多个变化的抗体，这导致与没有变化的亲本抗体相比，抗体对靶抗原的亲和力(即KD、kd或ka)改进。示例性亲和力成熟抗体对靶抗原可具有纳摩尔或甚至微微摩尔亲和力。用于产生亲和力成熟抗体的多种方法是本领域已知的，包括采用生物展示制备的组合抗体文库的筛选。例如，Marks等,BioTechnology,10:779-783(1992)描述了通过VH和VL结构域改组的亲和力成熟。Barbas等,Proc.Nat.Acad.Sci.USA,91:3809-3813(1994)；Schier等,Gene,169:147-155(1995)；Yelton等,J.Immunol.,155:1994-2004(1995)；Jackson等,J.Immunol.,154(7):3310-3319(1995)；以及Hawkins等,J.Mol.Biol.,226:889-896(1992)描述了CDR和/或构架残基的随机诱变。在选择性诱变位置和在具有提高活性的氨基酸残基的接触或超突变位置处的选择性突变描述于美国专利号6,914,128B1。
本文所用“抗体”是指单克隆抗体、多特异性抗体、人抗体、人源化抗体(完全或部分人源化)、动物抗体例如但不限于鸟(例如鸭或鹅)、鲨鱼、鲸和哺乳动物，包括非灵长类动物(例如牛、猪、骆驼、美洲驼、马、山羊、兔、绵羊、仓鼠、豚鼠、猫、狗、大鼠、小鼠等)或非人灵长类动物(例如猴、黑猩猩等)、重组抗体、嵌合抗体、单链Fv(“scFv”)、单链抗体、单结构域抗体、Fab片段、F(ab')片段、F(ab')2片段、二硫键连接的Fv(“sdFv”)和抗独特型(“抗-Id”)抗体、双重结构域抗体、双重可变结构域(DVD)或三重可变结构域(TVD)抗体(双重可变结构域免疫球蛋白及其制备方法描述于Wu,C.等，NatureBiotechnology，25(11):1290-1297(2007)和PCT国际申请WO2001/058956，其每一个的内容均通过引用结合到本文中)和上述任一种的功能活性表位结合片段。具体地讲，抗体包括免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性片段，即含有分析物结合部位的分子。免疫球蛋白分子可为任何类型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、类别(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚类。为简单起见，针对分析物的抗体在本文常被称为“抗分析物抗体”或简称“分析物抗体”(例如抗NaV1.7抗体或NaV1.7抗体)。
本文所用“抗体片段”是指包含抗原结合部位或可变区的完整抗体的一部分。该部分不包括完整抗体Fc区的恒定重链结构域(即CH2、CH3或CH4，这取决于抗体同种型)。抗体片段的实例包括但不限于Fab片段、Fab'片段、Fab'-SH片段、F(ab')2片段、Fd片段、Fv片段、双抗体、单链Fv(scFv)分子、只含一条轻链可变结构域的单链多肽、含有轻链可变结构域的3个CDR的单链多肽、只含一条重链可变区的单链多肽和含有重链可变区的3个CDR的单链多肽。
本文描述了“结合常数”。本文所用术语“缔合速率常数”、“kon”或“ka”是指表明抗体与其靶抗原的结合速率或如下式所示抗体和抗原之间复合体形成的速率的值：
抗体(Ab)+抗原(Ag)→Ab-Ag。
本文可互换使用的术语“解离速率常数”、“koff”或“kd”是指表明抗体自其靶抗原上的解离速率或如下式所示Ab-Ag复合体随时间推移分离成游离抗体和抗原的值：
抗体(Ab)+抗原(Ag)←Ab-Ag。
用于测定缔合和解离速率常数的方法是本领域众所周知的。采用基于荧光的技术提供高灵敏度和检查平衡时生理缓冲液中的样品的能力。可采用其它实验方法和仪器例如BIACORE(生物分子相互作用分析)测定法(例如可获自BIAcoreInternationalAB，GEHealthcare公司，Uppsala，Sweden的仪器)。另外，还可采用可获自SapidyneInstruments(Boise，Idaho)的KINEXA(KineticExclusionAssay)测定法。
本文可互换使用的术语“平衡解离常数”、“Kd”、“Kd”或“KD”是指通过将解离速率(koff)除以缔合速率(kon)得到的值。使用缔合速率、解离速率和平衡解离常数表示抗体对抗原的结合亲和力。
“结合蛋白”在本文用来指与结合配偶体结合并形成复合体的单体或多聚体蛋白质，结合配偶体例如多肽、抗原、化合物或其它分子或任何类型的底物。结合蛋白特异性地结合结合配偶体。结合蛋白包括抗体及其抗原结合片段及其本领域已知且下文中描述的其它不同形式和衍生物和包含与抗原分子或抗原分子的特定部位(表位)结合的一个或多个抗原结合结构域的其它分子。因此，结合蛋白包括但不限于抗体、四聚体免疫球蛋白、IgG分子、IgG1分子、单克隆抗体、嵌合抗体、CDR移植抗体、人源化抗体、亲和力成熟抗体和保留结合抗原的能力的任何这类抗体的片段。
“二特异性抗体”在本文用来指通过四源杂交瘤(quadroma)技术(参见Milstein等,Nature,305(5934):537-540(1983))、通过两种不同的单克隆抗体的化学缀合(参见Staerz等,Nature,314(6012):628-631(1985))或通过将突变引入Fc区的knob-into-hole或类似方法(参见Holliger等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90(14):6444-6448(1993))(导致多种不同的免疫球蛋白类型，其中只有一种是功能性二特异性抗体)产生的全长抗体。二特异性抗体在其两个结合臂(一对HC/LC)之一上结合一个抗原(或表位)，并在其第二臂(不同的一对HC/LC)上结合不同的抗原(或表位)。根据此定义，二特异性抗体具有两个截然不同的抗原结合臂(在特异性和CDR序列两方面)，并且对于抗体与之结合的各抗原是单价的。
“牛抗体”在本文用来指由从不同品种的牛中分离的天然抗体的代表性氨基酸序列组成的天然存在的或重组产生的免疫球蛋白。牛抗体是具有来源于牛种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。本公开内容的牛抗体(例如在CDR中)可包括非由牛种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如体外通过随机或位点专一诱变或体内通过体细胞突变引入的突变)。然而，术语“牛抗体”往往不包括其中来源于另一个哺乳动物物种(例如小鼠)的种系的CDR序列已植入牛构架序列的抗体。
“牛源化”本文用来指用于将非牛抗原结合氨基酸从供体抗体转移到牛抗体接纳体构架以产生可用于牛的蛋白质治疗性治疗的方法。
“牛源化抗体”本文用来指包含来自非牛物种(例如小鼠)的重链和轻链可变区序列但其中VH和/或VL序列的至少一部分被改变得更“像牛”(即更类似于牛种系可变序列)的抗体。牛源化抗体的一个类型是CDR移植抗体，其中将非牛CDR序列引入牛VH和VL序列中以置换相应的牛CDR序列。
本文提供的非牛抗体的牛源化形式是含有来自非牛抗体的序列的牛抗体。就绝大部分而言，牛源化抗体是其中接受体的超变区残基被来自例如小鼠、大鼠、兔、猫、狗、山羊、鸡、马、美洲驼、骆驼、单峰驼、鲨鱼、非人灵长类动物、人等非牛物种(“供体”抗体)的超变区残基、具有所需性质的人源化、重组序列或工程改造序列置换的牛抗体序列(“接纳体”或“接受体”抗体)。在某些情况下，牛抗体的构架区(FR)残基被相应的非牛FR残基置换。此外，牛源化抗体可包括不存在于接受体抗体或供体抗体中的残基。可进行这些修饰以进一步精修抗体性能。牛源化抗体还可包含牛抗体的免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分。
牛源化抗体是与目标抗原免疫特异性结合并包含主要具有牛抗体的氨基酸序列的构架区(FR)和主要具有非牛抗体的氨基酸序列的互补决定区(CDR)的抗体或其变体、衍生物、类似物或片段。牛源化抗体主要包含至少一个、通常两个可变结构域(Fab、Fab′、F(ab′)2、FabC、Fv)的基本全部，其中全部或基本全部的CDR区相当于非牛免疫球蛋白(即供体抗体)的CDR区和全部或基本全部的构架区是牛免疫球蛋白共有序列的构架区。牛源化抗体还包含免疫球蛋白恒定区(Fc)、通常牛免疫球蛋白的恒定区的至少一部分。牛或牛源化抗体可含有轻链以及至少重链的可变结构域两者。该抗体还可包括重链的CH1、铰链、CH2、CH3和CH4区。牛源化抗体可只含有牛源化轻链或牛源化重链。示例性牛源化抗体只含有轻链的牛源化可变结构域和重链的牛源化可变结构域。
“犬抗体”在本文用来指由从不同品种的犬分离的天然抗体的代表性氨基酸序列组成的天然存在的或重组产生的免疫球蛋白。犬抗体是具有来源于犬种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。本公开内容的犬抗体(例如在CDR中)可包括非由犬种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如体外通过随机或位点专一诱变或体内通过体细胞突变引入的突变)。然而，术语“犬抗体”往往不包括其中来源于另一哺乳动物物种(例如小鼠)的种系的CDR序列已植入犬构架序列中的抗体。
“犬源化”本文用来指用于将非犬抗原结合氨基酸从供体抗体转移到犬抗体接纳体构架以产生可用于狗的蛋白质治疗性治疗的方法。
“犬源化抗体”本文用来指包含来自非犬物种(例如小鼠)的重链和轻链可变区序列但其中可变重链(VH)和/或可变轻链(VL)序列的至少一部分已变得更“像犬”(即更类似于犬种系可变序列)的抗体。犬源化抗体的一个类型是CDR移植抗体，其中将非犬CDR序列引入犬VH和VL序列以置换相应的犬CDR序列。
本文提供的非犬抗体的犬源化形式是含有来源于非犬抗体的序列的犬抗体。就绝大部分而言，犬源化抗体是其中接受体的超变区残基被来自例如小鼠、大鼠、兔、猫、山羊、鸡、牛、马、美洲驼、骆驼、单峰驼、鲨鱼、非人灵长类动物、人等非犬物种(“供体”抗体)的超变区残基、具有所需性质的人源化、重组序列或工程改造序列置换的犬抗体序列(“接纳体”或“接受体”抗体)。在某些情况下，犬抗体的构架区(FR)残基被相应的非犬FR残基置换。此外，犬源化抗体可包括不存在于接受体抗体或供体抗体中的残基。可进行这些修饰以进一步精修抗体性能。犬源化抗体还可包含犬抗体的免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分。用于抗体犬源化的策略包括但不限于WO2003/060080公开的策略。
犬源化抗体是与目标抗原免疫特异性结合且包含主要具有非犬抗体的氨基酸序列的构架(FR)区和主要具有非犬抗体的氨基酸序列的互补决定区(CDR)的抗体或其变体、衍生物、类似物或片段。犬源化抗体包含至少一个、通常两个可变结构域(Fab、Fab′、F(ab′)2、FabC、Fv)的基本全部，其中全部或基本全部的CDR区相当于非犬免疫球蛋白(即供体抗体)的CDR区，全部或基本全部的构架区是犬免疫球蛋白共有序列的构架区。犬源化抗体还包含免疫球蛋白恒定区(Fc)，通常是犬免疫球蛋白的恒定区的至少一部分。犬或犬源化抗体可含有轻链以及至少重链的可变结构域两者。该抗体还可包括重链的CH1、铰链、CH2、CH3和CH4区。犬源化抗体可只含有犬源化轻链，或可只含有犬源化重链。示例性犬源化抗体含有轻链的犬源化可变结构域和重链的犬源化可变结构域。
“CDR”本文用来指抗体可变序列内的“互补决定区”。在重链和轻链可变区的每一个中有3个CDR，对于各可变区被命名为“CDR1”、“CDR2”和“CDR3”。本文所用术语“CDR套(CDRset)”是指出现在结合抗原的单一可变区的一组3个CDR。按照不同的系统不同地界定这些CDR的确切边界。Kabat(Kabat等,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest(NationalInstitutesofHealth,Bethesda,Md.(1987)和(1991))描述的系统不仅提供适于抗体的任何可变区的明确的残基编号系统，而且还提供界定3个CDR的精确残基界线。这些CDR可称为“KabatCDR”。Chothia和同事(Chothia和Lesk,J.Mol.Biol.,196:901-917(1987)；以及Chothia等,Nature,342:877-883(1989))发现KabatCDR内的某些亚部分采用几乎相同的肽骨架构象，尽管在氨基酸序列水平上具有大的多样性。这些亚部分被命名为“L1”、“L2”和“L3”或“H1”、“H2”和“H3”，其中“L”和“H”分别标明轻链和重链区。这些区可称为“ChothiaCDR”，它具有与KabatCDR重叠的界线。Padlan,FASEBJ.,9:133-139(1995)和MacCallum,J.Mol.Biol.,262(5):732-745(1996)描述了界定与KabatCDR重叠的CDR的其它界线。再有其它的CDR界线定义不会严格遵循本文的系统之一，但尽管如此仍会与KabatCDR重叠，虽然根据特定残基或残基组或甚至整个CDR不明显影响抗原结合的预测或实验结果，它们可能被缩短或延长。本文所用方法可利用这些系统的任一个定义的CDR，尽管某些实施方案利用Kabat-或Chothia定义的CDR。
“CDR移植抗体”本文用来指包含来自一个物种的重链和轻链可变区序列但其中VH和/或VLCDR区的一个或多个的序列被另一物种的CDR序列置换的抗体，例如具有其中鼠CDR的一个或多个(例如CDR3)被人CDR序列置换的鼠重链和轻链可变区的抗体。
“嵌合抗体”本文用来指包含来自一个物种的重链和轻链可变区序列和来自另一物种的恒定区序列的抗体，例如具有与人、犬、马或猫恒定区连接的鼠重链和轻链可变区的抗体。嵌合抗体包含与来自来源于特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体的相应序列相同或同源的重链和/或轻链的一部分，而链的其余部分与来自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体以及显示所需生物活性的所述抗体的片段的相应序列相同或同源(参见例如美国专利号4,816,567和Morrison等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA81:6851-6855(1984))。
“组分”、“多种组分”或“至少一种组分”一般是指按照本文所述方法和本领域已知的其它方法，可包括在用于试验样品(例如患者尿液、血清或血浆样品)测定的试剂盒中的俘获抗体、检测物或缀合物、校准物、对照、灵敏度板(sensitivitypanel)、容器、缓冲剂、稀释剂、盐、酶、酶的辅因子、检测试剂、预处理试剂/溶液、底物(例如作为溶液)、终止溶液等。一些组分可为溶液或被冻干用于在测定时复溶使用。
本文所用的抗体的“衍生物”可指当与非人造抗体或亲本抗体相比时其氨基酸序列具有一个或多个修饰的抗体并显示修饰的结构域结构。衍生物仍然能够呈存在于天然抗体的典型的结构域构型以及能够以特异性与靶标(抗原)结合的氨基酸序列。抗体衍生物的典型实例是与其它多肽、重排抗体结构域或抗体片段偶联的抗体。衍生物还可包含至少一种其它的化合物，例如蛋白质结构域，所述蛋白质结构域通过共价或非共价键连接。连接可基于按照本领域已知方法的遗传融合。存在于包含按照本发明应用的抗体的融合蛋白的其它结构域优选可通过柔性接头、有利地为肽接头连接，其中所述肽接头包含多个亲水的肽键合的氨基酸，其长度足以跨越其它蛋白质结构域的C端和抗体的N端或跨越其它蛋白质结构域的N端和抗体的C端之间的距离。抗体可与具有适于生物活性或与例如固相支持体、生物活性物质(例如细胞因子或生长激素)、化学制剂、肽、蛋白质或药物选择性结合的构象的效应分子连接。
“双抗体”本文用来指具有两个抗原结合部位的小的抗体片段，所述片段包含在同一多肽链上与轻链可变结构域(VL)连接的重链可变结构域(VH)(VH-VL)。通过使用短而不允许在同一链上的两个结构域间配对的接头，迫使结构域与另一链的互补结构域配对，并产生两个抗原结合部位。
“供体”和“供体抗体”在本文用来是指提供一个或多个CDR的抗体。供体抗体可以是来自不同于构架区获自或衍生自其中的抗体的物种的抗体。在人源化抗体的情况下，术语“供体抗体”是指提供一个或多个CDR的非人抗体。在牛源化抗体的情况下，术语“供体抗体”是指提供一个或多个CDR的非牛抗体。在猪源化抗体的情况下，术语“供体抗体”是指提供一个或多个CDR的非猪抗体。在犬源化抗体的情况下，术语“供体抗体”是指提供一个或多个CDR的非犬抗体。在猫源化抗体的情况下，术语“供体抗体”是指提供一个或多个CDR的非猫抗体。在马源化抗体的情况下，术语“供体抗体”是指提供一个或多个CDR的非马抗体。
“双重特异性抗体”在本文用来指其两个结合臂(一对HC/LC)的每个中可结合两种不同抗原(或表位)的全长抗体(参见PCT公开文本WO02/02773)。因此，双重特异性结合蛋白具有含相同特异性和相同CDR序列的两个相同的抗原结合臂，并且对与之结合的各抗原是二价的。
“双重可变结构域”本文用来指结合蛋白上的两个或更多个抗原结合部位，其可以是二价(两个抗原结合部位)、四价(4个抗原结合部位)或多价结合蛋白。DVD可以是单特异性的，即能够结合一个抗原(或一个特定表位)或多特异性的，即能够结合两个或更多个抗原(即相同靶抗原分子的两个或更多个表位或不同靶抗原的两个或更多个表位)。优选的DVD结合蛋白包含两个重链DVD多肽和两个轻链DVD多肽，并称为“DVD免疫球蛋白”或“DVD-Ig”。因此所述DVD-Ig结合蛋白是四聚体的，并且使人想起IgG分子，但提供比IgG分子多的抗原结合部位。因此，四聚体DVD-Ig分子的每一半使人想起IgG分子的一半并包含重链DVD多肽和轻链DVD多肽，但与提供单一抗原结合结构域的IgG分子的一对重链和轻链不一样，DVD-Ig的一对重链和轻链提供两个或更多个抗原结合部位。
DVD-Ig结合蛋白的各抗原结合部位可来源于供体(“亲本”)单克隆抗体，因此包含重链可变结构域(VH)和轻链可变结构域(VL)，每抗原结合部位共6个CDR参与抗原结合。因此，结合2个不同表位(即2个不同抗原分子的2个不同表位或相同抗原分子的2个不同表位)的DVD-Ig结合蛋白包含来源于第一亲本单克隆抗体的抗原结合部位和第二亲本单克隆抗体的抗原结合部位。
PCT公布号WO2007/024715、美国专利号7,612,181和Wu等,NatureBiotech.,25:1290-1297(2007)中提供了DVD-Ig结合分子的设计、表达和表征的描述。所述DVD-Ig分子的优选实例含有包含结构式VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n的重链和包含结构式VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n的轻链，重链中，VD1为第一重链可变结构域，VD2为第二重链可变结构域，C为重链恒定结构域，X1为接头，前体条件是它不是CH1，X2为Fc区，n为0或1，但优选1；轻链中，VD1为第一轻链可变结构域，VD2为第二轻链可变结构域，C为轻链恒定结构域，X1为接头，前体条件是它不是CH1，X2不包含Fc区；n为0或1，但优选1。所述DVD-Ig可包含2个所述重链和2个所述轻链，其中每条链包含串联连接的在可变区间没有间插恒定区的可变结构域，其中重链和轻链缔合形成串联功能抗原结合部位，且一对重链和轻链可与另一对重链和轻链缔合形成具有4个功能抗原结合部位的四聚体结合蛋白。在另一个实例中，DVD-Ig分子可包含各自包含串联连接的在可变结构域之间没有间插恒定区的3个可变结构域(VD1、VD2、VD3)的重链和轻链，其中一对重链和轻链可缔合形成3个抗原结合部位，且其中一对重链和轻链可与另一对重链和轻链缔合形成具有6个抗原结合部位的四聚体结合蛋白。
在一个优选的实施方案中，本发明的DVD-Ig结合蛋白不仅仅结合被其亲本单克隆抗体结合的相同靶分子，而且还具有其亲本单克隆抗体的一个或多个的一种或多种所需性质。优选所述其它性质是亲本单克隆抗体的一个或多个的抗体参数。可有助于来自其亲本单克隆抗体的一个或多个的DVD-Ig结合蛋白的抗体参数包括但不限于抗原特异性、抗原亲和力、效能、生物功能、表位识别、蛋白质稳定性、蛋白质溶解性、生产效率、免疫原性、药代动力学、生物利用度、组织交叉反应性和直系同源抗原结合。
DVD-Ig结合蛋白结合NaV1.7的至少一个表位。DVD-Ig结合蛋白的非限制性实例包括结合NaV1.7的一个或多个表位的DVD-Ig结合蛋白、结合人NaV1.7的表位和另一物种(例如小鼠)的NaV1.7的表位的DVD-Ig结合蛋白和结合NaV1.7的表位和另一个靶分子的表位的DVD-Ig结合蛋白。
“表位”或“多个表位”或“目标表位”是指被识别并可结合其特异性结合配偶体上的互补部位的任何分子上的部位。分子和特异性结合配偶体是特异性结合对的一部分。例如，表位可位于多肽、蛋白质、半抗原、糖抗原(例如但不限于糖脂、糖蛋白或脂多糖)或多糖上。其特异性结合配偶体可以是但不限于抗体。
“马抗体”在本文用来指由从不同品种的马分离的天然抗体的代表性氨基酸序列组成的天然存在的或重组产生的免疫球蛋白。马抗体是具有来源于马种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。本公开内容的马抗体(例如在CDR中)可包括非由马种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如体外通过随机或位点专一诱变或体内通过体细胞突变引入的突变)。然而，术语“马抗体”往往不包括其中来源于另一哺乳动物物种(例如小鼠)的种系的CDR序列已植入马构架序列中的抗体。
“马源化”本文用来指用于将来自供体抗体的非马抗原结合氨基酸转移到马抗体接纳体构架以形成可用于马的蛋白质治疗性治疗的方法。
“马源化抗体”本文用来指包含来自非马物种(例如小鼠)的重链和轻链可变区序列但其中可变重链(VH)和/或可变轻链(VL)序列的至少一部分被改变得更“像马”、即更类似于马种系可变序列的抗体。马源化抗体的一个类型是CDR移植抗体，其中将非马CDR序列引入马VH和VL序列中以置换相应的马CDR序列。
本文提供的非马抗体的马源化形式是含有来源于非马抗体的序列的马抗体。就绝大部分而言，马源化抗体是其中接受体的超变区残基被来自例如小鼠、大鼠、兔、猫、狗、山羊、鸡、牛、马、美洲驼、骆驼、单峰驼、鲨鱼、非人灵长类动物、人等非马物种(“供体”抗体)的超变区残基、具有所需性质的人源化、重序组列或工程改造序列置换的马抗体序列(“接纳体”或“接受体”抗体)。在某些情况下，马抗体的构架区(FR)残基被相应的非马FR残基置换。此外，马源化抗体可包括不存在于接受体抗体或供体抗体中的残基。可进行这些修饰以进一步精修抗体性能。马源化抗体还可包含马抗体的免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分。
马源化抗体是与目标抗原免疫特异性结合并包含主要具有马抗体的氨基酸序列的构架区(FR)和主要具有非马抗体的氨基酸序列的互补决定区(CDR)的抗体或其变体、衍生物、类似物或片段。马源化抗体包含至少一个、通常两个可变结构域(Fab、Fab′、F(ab′)2、FabC、Fv)的基本全部，其中全部或基本全部的CDR区相当于非马免疫球蛋白(即供体抗体)的CDR区，全部或基本全部的构架区是马免疫球蛋白共有序列的构架区。马源化抗体还包含免疫球蛋白恒定区(Fc)、通常为马免疫球蛋白的恒定区的至少一部分。例如，马或马源化抗体可含有轻链以及至少重链的可变结构域两者。该抗体还可包括重链的CH1、铰链、CH2、CH3和CH4区。马源化抗体还可含有马源化轻链或马源化重链。示例性马源化抗体含有轻链的马源化可变结构域和重链的马源化可变结构域。马同种型包括例如IgGa、IgGb、IgGc、IgG(T)、IgM和IgA。
“Fab”本文用来指抗体片段。抗体的木瓜蛋白酶消化产生两个相同的抗原结合片段，称为“Fab”片段，各具有单一抗原结合部位，和余留的“Fc”片段，其名称反映了其容易结晶的能力。胃蛋白酶处理产生结合交联抗原。Fab片段还含有轻链的恒定结构域和重链的第1结构域(CH1)。Fab′片段因在重链CH1结构域羧基端添加几个残基(包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸)而不同于Fab片段。Fab′-SH是本文对Fab′的名称，其中恒定结构域的半胱氨酸带有游离的硫醇基。F(ab′)2抗体片段最初作为其间具有铰链半胱氨酸的Fab′片段对产生。抗体片段的其它化学偶联也是已知的。
本文所用“F(ab')2片段”是指通过胃蛋白酶消化完整IgG抗体除去大部分Fc区同时留下完整的一些铰链区而产生的抗体。F(ab')2片段具有通过二硫键连接在一起的两个抗原结合F(ab)部分，因此是二价的，分子量为约110kDa。二价抗体片段(F(ab')2片段)小于完整的IgG分子，使得能够更好地渗入组织，从而在免疫组织化学中促进更好的抗原识别。使用F(ab')2片段还避免与活细胞上的Fc受体或与蛋白A/G的非特异性结合。F(ab')2片段可结合和沉淀抗原。
“猫抗体”在本文用来指由从不同品种的猫分离的天然抗体的代表性氨基酸序列组成的天然存在的或重组产生的免疫球蛋白。猫抗体是具有来源于猫种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。本公开内容的猫抗体(例如在CDR中)可包括非由猫种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如体外通过随机或位点专一诱变或体内通过体细胞突变引入的突变)。然而，术语“猫抗体”往往不包括其中来源于另一哺乳动物物种(例如小鼠)的种系的CDR序列已植入猫构架序列中的抗体。
“猫源化”本文用来指用于将来自供体抗体的非猫抗原结合氨基酸转移到猫抗体接纳体构架中以产生可用于猫的蛋白质治疗性治疗的方法。
“猫源化抗体”本文用来指包含来自非猫物种(例如小鼠)的重链和轻链可变区序列但其中可变重链(VH)和/或可变轻链(VL)序列的至少一部分被改变成更“像猫”、即更类似于猫种系可变序列的抗体。猫源化抗体的一个类型是CDR移植抗体，其中将非猫CDR序列引入猫VH和VL序列以置换相应的猫CDR序列。
本文提供的非猫抗体的猫源化形式是含有来源于非猫抗体的序列的猫抗体。就绝大部分而言，猫源化抗体是其中接受体的超变区残基被例如小鼠、大鼠、兔、猫、狗、山羊、鸡、牛、马、美洲驼、骆驼、单峰驼、鲨鱼、非人灵长类动物、人等非猫物种(“供体”抗体)的超变区残基、具有所需性质的人源化、重组序列或工程改造序列置换的猫抗体序列(“接纳体”或“接受体”抗体)。在某些情况下，猫抗体的构架区(FR)残基被相应的非猫FR残基置换。此外，猫源化抗体可包括不存在于接受体抗体或供体抗体中的残基。可进行这些修饰以进一步精修抗体性能。猫源化抗体还可包含猫抗体的免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分。
猫源化抗体是与目标抗原免疫特异性结合并包含主要具有猫抗体的氨基酸序列的构架区(FR)和主要具有非猫抗体的氨基酸序列的互补决定区(CDR)的抗体或其变体、衍生物、类似物或片段。猫源化抗体包含至少一个、通常两个可变结构域(Fab、Fab′、F(ab′)2、FabC、Fv)的基本全部，其中全部或基本全部的CDR区相当于非猫免疫球蛋白(即供体抗体)的CDR区，全部或基本全部的构架区是猫免疫球蛋白共有序列的构架区。猫源化抗体还包含免疫球蛋白恒定区(Fc)、通常为猫免疫球蛋白的恒定区的至少一部分。猫或猫源化抗体可含有轻链以及至少重链的可变结构域两者。该抗体还可包括重链的CH1、铰链、CH2、CH3和CH4区。猫源化抗体可只含有猫源化轻链或猫源化重链。示例性猫源化抗体只含有轻链的猫源化可变结构域和重链的猫源化可变结构域。
本文所用“构架”(FR)或“构架序列”可意指可变区减去CDR的剩余序列。因为CDR序列的确切界定可通过不同系统(例如参见上文)确定，构架序列的含义受相对不同的解释支配。6个CDR(轻链的CDR-L1、-L2和-L3和重链的CDR-H1、-H2和-H3)还把轻链和重链上的构架区分成各链上的4个亚区(FR1、FR2、FR3和FR4)，其中CDR1位于FR1和FR2之间，CDR2位于FR2和FR3之间，CDR3位于FR3和FR4之间。没有指定具体的亚区作为FR1、FR2、FR3或FR4，像其它人提及的构架区代表了单一天然存在的免疫球蛋白链的可变区内的综合FR。如本文所用，FR表示4个亚区之一，且FRs表示构成构架区的4个亚区的两个或更多个。
人重链和轻链FR序列是本领域已知的，可用作重链和轻链“接纳体”构架序列(或简称“接纳体”序列)以采用本领域已知技术使非人抗体人源化。在一个实施方案中，人重链和轻链接纳体序列选自列于可公开获取的数据库例如V-base(hypertexttransferprotocol://vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk/)或列于国际ImMunoGeneTics?(IMGT?)信息系统(hypertexttransferprotocol://imgt.cines.fr/texts/IMGTrepertoire/LocusGenes)的构架序列。
本文所用的“功能抗原结合部位”可意指能够结合靶抗原的结合蛋白(例如抗体)上的部位。抗原结合部位的抗原结合亲和力可能不如抗原结合部位来源于其中的亲本结合蛋白(例如亲本抗体)一样强，但结合抗原的能力必须是采用已知用于评价与抗原结合的蛋白质(例如抗体)的多种方法的任一种可测量的。此外，多价蛋白质(例如多价抗体)的抗原结合部位各自的抗原结合亲和力在本文不必在数量上相同。
“Fv”本文用来指含有完整的抗原识别和结合部位的最小抗体片段。该区由一个重链和一个轻链可变结构域的二聚体组成。
“种系抗体基因”或“基因片段”在本文用来指未进行导致特定免疫球蛋白表达的遗传重排和突变的成熟过程的非淋巴样细胞编码的免疫球蛋白序列(Shapiro等,Crit.Rev.Immunol.22(3):183-200(2002)；Marchalonis等,Adv.Exp.Med.Biol.484:13-30(2001))。由本公开内容的结合蛋白提供的一个优势来自以下认识，即种系抗体基因比成熟抗体基因更可能保存所述物种的个体特有的必需氨基酸序列结构，因此当在治疗上用于该物种时更不可能作为来自外源而识别。
“人抗体”本文用来指具有来源于人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。本公开内容的人抗体(例如在CDR中)可包括非由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如体外通过随机或位点专一诱变或体内通过体细胞突变引入的突变)。然而，术语“人抗体”往往不包括其中来源于另一哺乳动物物种(例如小鼠)的种系的CDR序列已植入人构架序列中的抗体。
“人源化抗体”在本文用来描述包含来自非人物种(例如小鼠)的重链和轻链可变区序列但其中VH和/或VL序列的至少一部分被改变得更“像人”、即更类似于人种系可变序列的抗体。“人源化抗体”是与目标抗原免疫特异性结合并包含主要具有人抗体的氨基酸序列的构架(FR)区和主要具有非人抗体的氨基酸序列的互补决定区(CDR)的抗体或其变体、衍生物、类似物或片段。本文所用术语“基本上”在CDR的情况下是指含有与非人抗体CDR的氨基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%同一性的氨基酸序列的CDR。人源化抗体包含至少一个、通常两个可变结构域(Fab、Fab'、F(ab')2、FabC、Fv)的基本全部，其中全部或基本全部的CDR区相当于非人免疫球蛋白(即供体抗体)的CDR区，全部或基本全部的构架区为人免疫球蛋白共有序列的构架区。在一个实施方案中，人源化抗体还包含免疫球蛋白恒定区(Fc)，通常为人免疫球蛋白的恒定区的至少一部分。在一些实施方案中，人源化抗体含有轻链以及至少重链的可变结构域。该抗体还可包括重链的CH1、铰链、CH2、CH3和CH4区。在一些实施方案中，人源化抗体只含人源化轻链。在一些实施方案中，人源化抗体只含人源化重链。在具体的实施方案中，人源化抗体只含轻链的人源化可变结构域和/或人源化重链。
人源化抗体可选自免疫球蛋白的任何类别，包括IgM、IgG、IgD、IgA和IgE和任何同种型，包括而不限于IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。人源化抗体可包含来自一个以上类别或同种型的序列，可采用本领域众所周知的技术，选择特定的恒定结构域使所需效应子功能优化。
人源化抗体的构架区和CDR不必与亲本序列精确一致，例如，可通过至少一个氨基酸残基的取代、插入和/或缺失使供体抗体CDR或共有构架诱变，使得在该位点的CDR或构架残基与供体抗体或共有构架不一致。然而，在一个优选的实施方案中，所述突变不应是大规模的。通常至少80%、优选至少85%、更优选至少90%、最优选至少95%的人源化抗体残基将与亲本FR和CDR序列的残基一致。本文所用术语“共有构架”是指共有免疫球蛋白序列中的构架区。本文所用术语“共有免疫球蛋白序列”是指由相关免疫球蛋白序列家族中最频繁出现的氨基酸(或核苷酸)形成的序列(参见例如Winnaker，FromGenestoClones(Verlagsgesellschaft，Weinheim，1987))。“共有免疫球蛋白序列”因此可包含“共有构架区”和/或“共有CDR”。在免疫球蛋白家族中，共有序列中的每个位置被家族中最频繁出现在该位置处的氨基酸占据。如果2个氨基酸同等频繁地出现，则任一个均包括在共有序列中。
“超变区”本文用来指负责抗原结合的抗体的氨基酸残基。超变区包含来自如Kabat等,第5版,PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,Md.(1991)定义的和/或Chothia和Lesk,Mol.Biol.196:901-917(1987)定义的轻链可变结构域和重链可变结构域中的“互补决定区”或“CDR”和/或如Martin等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,86:9268-9272(1989)定义的和/或Lefranc等,NucleicAcidsRes.,27:209-212(1999)在国际ImMunoGeneTics信息系统数据库中定义的“AbM环”的氨基酸残基。“构架”或“FR”残基是本文定义的超变区残基以外的那些可变结构域残基。
本文在两个或更多个多肽或多核苷酸序列情况下使用的“相同的”或“同一性”可意指序列在特定区域内具有相同残基的特定百分比。百分比可如下计算：通过最优地比对两个序列，比较特定区域内的2个序列，测定两个序列中出现相同残基的位置数以得出匹配位置数，将匹配位置数除以特定区域中的总位置数，将结果乘以100得到序列同一性的百分比。在其中2个序列具有不同长度或比对产生一个或多个交错末端且比较的特定区域只包括单一序列的情况下，单一序列的残基包括在计算的分母中，但不在分子中。
本文所用“炎症”可指血管组织对例如但不限于组织损伤、感染和刺激物等刺激的生物反应。急性炎症的病征可包括疼痛、发热、发红、肿胀和/或功能丧失。
本文所用“神经原性炎症”可指通过激活初级传入神经元和随后释放炎性介质(例如但不限于物质P和降钙素基因相关肽)引发的炎症。
本文所用“神经炎症”可指可发生在外周神经系统(PNS，例如外周神经和神经节)和/或中枢神经系统(CNS；例如脊髓和脑)中的局部炎症。在一些实施方案中，神经炎症可包括PNS和CNS中白细胞的浸润和炎性介质的产生增加。在一些实施方案中，神经炎症可包括PNS和CNS中神经胶质细胞(例如小胶质细胞和星形细胞)的激活。
本文所用“分离的抗体”是指基本上不含具有不同抗原特异性的其它抗体的抗体(例如特异性地结合NaV1.7的分离的抗体基本上不含特异性地结合NaV1.7以外的抗原的抗体)。此外，分离的抗体可基本上不含其它细胞物质和/或化学物质。
本文所用的“分离的多核苷酸”可意指根据其来源，分离的多核苷酸不与“分离的多核苷酸”在自然界与之一起存在的多核苷酸的全部或部分缔合；与在自然界不与之连接的多核苷酸有效连接；或在自然界不作为较大序列的一部分存在的多核苷酸(例如基因组、cDNA或合成来源的多核苷酸，或其组合)。
本文所用“Kd”是指本领域已知的特定抗体-抗原相互作用的缔合常数。
本文所用“Kon”是指如本领域已知的抗体与抗原缔合形成抗体/抗原复合体的速率常数。
“Koff”是指如本领域已知的抗体从抗体/抗原复合体中解离的解离速率常数。
“Kabat编号”、“Kabat定义”和“Kabat标记”在本文可互换使用。本领域公认的这些术语是指为比抗体的重链和轻链可变区或其抗原结合部分的其它氨基酸残基更可变(即超变的)的氨基酸残基编号的系统(Kabat等,Ann.NYAcad.Sci.,190:382-391(1971)和Kabat等,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第5版,U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,NIHPublicationNo.91-3242(1991))。对于重链可变区，CDR1超变区的范围为氨基酸第31-35位，CDR2为氨基酸第50-65位，CDR3为氨基酸第95-102位。对于轻链可变区，CDR1超变区的范围为氨基酸第24-34位，CDR2为氨基酸第50-56位，CDR3为氨基酸第89-97位。
本文所用“标记”和“可检测标记”是指与抗体或分析物连接以使抗体和分析物之间的反应可检出的部分，如此标记的抗体或分析物称为“可检测标记的”。标记可产生通过视觉或仪器装置可检测的信号。各种标记包括信号产生物质，例如色原、荧光化合物、化学发光化合物、放射性化合物等。标记的代表性实例包括产生光的部分(例如吖啶化合物)和产生荧光的部分(例如荧光素)。本文描述了其它标记。在这一方面，部分本身可以不是可检测的，但在与另一部分反应时可变成可检测的。术语“可检测标记的”的使用意欲包括这类标记。
可以使用本领域已知的任何合适的可检测标记。例如，可检测标记可以是放射性标记(例如3H、14C、32P、33P、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I、177Lu、166Ho和153Sm)、酶标记(例如辣根过氧化物酶、碱性过氧化物酶、葡萄糖6-磷酸脱氢酶等)、化学发光标记(例如吖啶酯、硫酯或磺酰胺；鲁米诺(luminol)、异鲁米诺、菲啶酯等)、荧光标记(例如荧光素(例如5-荧光素、6-羧基荧光素、3’6-羧基荧光素、5(6)-羧基荧光素、6-六氯-荧光素、6-四氯荧光素、异硫氰酸荧光素等))、罗丹明、藻胆蛋白、R-藻红蛋白、量子点(例如硫化锌帽化的硒化镉)、温度标记或免疫-聚合酶链式反应标记。标记的引入、标记程序和标记的检测参见Polak和Van,Noorden,IntroductiontoImmunocytochemistry,第2版,SpringerVerlag,N.Y.(1997)，以及载于Haugland,HandbookofFluorescentProbesandResearchChemicals(1996)，这是由MolecularProbes,Inc.,Eugene,Oregon出版的综合手册和目录。荧光标记可用于FPIA(参见例如美国专利号5,593,896、5,573,904、5,496,925、5,359,093和5,352,803，其通过引用以其整体结合到本文中)。吖啶化合物可在均相化学发光测定法中用作可检测标记(参见例如Adamczyk等,Bioorg.Med.Chem.Lett.16:1324-1328(2006)；Adamczyk等,Bioorg.Med.Chem.Lett.4:2313-2317(2004)；Adamczyk等,Biorg.Med.Chem.Lett.14:3917-3921(2004)；以及Adamczyk等,Org.Lett.5:3779-3782(2003))。
一方面，吖啶化合物是吖啶-9-甲酰胺。用于制备吖啶9-甲酰胺的方法描述于Mattingly,J.Biolumin.Chemilumin.6:107-114(1991)；Adamczyk等,J.Org.Chem.63:5636-5639(1998)；Adamczyk等,Tetrahedron55:10899-10914(1999)；Adamczyk等,Org.Lett.1:779-781(1999)；Adamczyk等,BioconjugateChem.11:714-724(2000)；Mattingly等,载于LuminescenceBiotechnology:InstrumentsandApplications；Dyke,K.V.编辑；CRCPress:BocaRaton,第77–105页(2002)；Adamczyk等,Org.Lett.5:3779-3782(2003)；以及美国专利号5,468,646、5,543,524和5,783,699(其每一个通过引用以其整体结合到本文中用于有关所述方法的教导)。
吖啶化合物的另一个实例是吖啶-9-甲酸芳基酯。式II的吖啶-9-甲酸芳基酯的实例为10-甲基-9-(苯氧基羰基)吖啶氟磺酸酯(可获自CaymanChemical，AnnArbor，MI)。用于制备吖啶9-甲酸芳基酯的方法描述于McCapra等,Photochem.Photobiol.4:1111-21(1965)；Razavi等,Luminescence15:245-249(2000)；Razavi等,Luminescence15:239-244(2000)和美国专利号5,241,070(其每一个通过引用以其整体结合到本文中用于有关所述方法的教导)。这类吖啶-9-甲酸芳基酯是就信号的强度和/或信号的速度而言分析物被至少一种氧化酶氧化时产生的过氧化氢的有效化学发光指示物。吖啶-9-甲酸芳基酯的化学发光发射的进程快速(即不足1秒种)完成，而吖啶-9-甲酰胺化学发光发射延长超过2秒钟。然而，吖啶-9-甲酸芳基酯在蛋白质存在时失去其化学发光性质。因此，其应用要求在信号产生和检测期间不存在蛋白质。用于分离或除去样品中的蛋白质的方法为本领域技术人员所熟知，包括但不限于超滤、提取、沉淀、透析、层析法和/或消化(参见例如Wells,HighThroughputBioanalyticalSamplePreparation.MethodsandAutomationStrategies,Elsevier(2003))。从试验样品除去或分离的蛋白质的量可为约40%、约45%、约50%、约55%、约60%、约65%、约70%、约75%、约80%、约85%、约90%或约95%。2007年4月9日提交的美国专利申请号11/697,835给出了有关吖啶-9-甲酸芳基酯及其应用的更多详情。可将吖啶-9-甲酸芳基酯溶于任何合适的溶剂中，例如脱气无水N,N-二甲基甲酰胺(DMF)或胆酸钠水溶液。
“连接序列”或“连接肽序列”是指与一个或多个目标多肽序列(例如全长、片段等)连接的天然或人工多肽序列。术语“连接的”是指连接序列与目标多肽序列的连接。这类多肽序列优选通过一个或多个肽键连接。连接序列可具有约4-约50个氨基酸的长度。优选连接序列的长度为约6-约30个氨基酸。天然连接序列可通过氨基酸取代、添加或缺失修饰以产生人工连接序列。示例性连接序列包括但不限于：(i)组氨酸(His)标签，例如具有HHHHHH(SEQIDNO:1)的氨基酸序列的6XHis标签，可用作连接序列以促进目标多肽和抗体的分离和纯化；(ii)肠激酶切割位点，像His标签，被用于目标蛋白质和抗体的分离和纯化。通常，肠激酶切割位点与His标签一起用于目标蛋白质和抗体的分离和纯化。各种肠激酶切割位点是本领域已知的。肠激酶切割位点的实例包括但不限于DDDDK的氨基酸序列(SEQIDNO:2)及其衍生物(例如ADDDDK(SEQIDNO:3)等)；(iii)各种序列可用来连接或联结单链可变区片段的轻链和/或重链可变区。其它连接序列的实例可参见Bird等，Science242：423-426(1988)；Huston等，PNASUSA85：5879-5883(1988)；和McCafferty等，Nature348：552-554(1990)。还可针对其它功能(例如与药物连接或与固相支持体连接)对连接序列进行修饰。在本公开内容的情况下，单克隆抗体例如可含有连接序列(例如His标签)、肠激酶切割位点或两者。
本文所用“哺乳动物源化”是指用于将供体抗原结合信息转移到哺乳动物抗体接纳体以产生有用的治疗性治疗的方法。更具体地讲，本发明提供用于抗体的猫源化、马源化、犬源化、牛源化和猪源化的方法。
本文所用“哺乳动物源化抗体”是指包含哺乳动物物种(例如小鼠)的重链和轻链可变区序列但其中VH和/或VL序列的至少一部分已被改变得更像“目标哺乳动物”的抗体，参见例如本文定义的人源化、牛源化、犬源化、马源化、猫源化或猪源化抗体。这类哺乳动物源化抗体包括但不限于牛源化、犬源化、马源化、猫源化、人源化或猪源化抗体。
本文所用“单克隆抗体”是指获自基本均质的抗体群的抗体，即该群所包含的各个抗体是相同的，不同的是可少量存在的可能的天然存在的突变。单克隆抗体是高度特异性的，针对单一抗原。此外，与通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制备物形成对比，各单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。单克隆抗体在本文明确包括其中重链和/或轻链的一部分与来源于特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体的相应序列相同或同源，而链的其余部分与来源于另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体的相应序列相同或同源的“嵌合”抗体以及所述抗体的片段，只要它们显示所需生物功能。
“多价结合蛋白”在本文用来指包含两个或更多个抗原结合部位(在本文亦称为“抗原结合结构域”)的结合蛋白。优选对多价结合蛋白进行工程改造以具有三个或更多个抗原结合部位，且一般不是天然存在的抗体。术语“多特异性结合蛋白”是指可结合两个或更多个相关或无关靶标的结合蛋白，包括能够结合相同靶分子的两个或更多个不同表位的结合蛋白。
本文所用“有效连接”是指其中所述组分处于允许它们以其既定方式起作用的关系的接近。与编码序列“有效连接”的控制序列以这样的方式连接使得在与控制序列相容的条件下实现编码序列的表达。“有效连接”序列包括与目标基因邻接的表达控制序列和以反式(intrans)或在远处起作用以控制目标基因的表达控制序列两者。术语“表达控制序列”是指实现与其连接的编码序列的表达和加工所必需的多核苷酸序列。表达控制序列包括合适的转录起始、终止、启动子和增强子序列；有效的RNA加工信号例如剪接和聚腺苷酸化信号；稳定胞质mRNA的序列；提高翻译效率的序列(即Kozak共有序列)；提高蛋白质稳定性的序列；需要时，提高蛋白质分泌的序列。这类控制序列的性质随宿主生物而不同；在原核生物中，这类控制序列一般包括启动子、核糖体结合位点和转录终止序列；在真核生物中，这类控制序列一般包括启动子和转录终止序列。术语“控制序列”欲包括其存在是表达和加工所必需的组分，还可包括其存在是有利的其它组分，例如，前导序列和融合配偶体序列。
本文所用“药学上可接受的载体”包括生理上相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣材料、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和延迟吸收剂等。药学上可接受的载体的实例包括水、盐水、磷酸缓冲盐水、葡萄糖、甘油、乙醇等的一种或多种及其组合。在许多情况下，优选在组合物中包括等渗剂，例如糖、多元醇例如甘露糖醇、山梨糖醇或氯化钠。药学上可接受的载体另可包含提高抗体或抗体部分的保存限期或有效性的少量的辅助物质例如润湿剂或乳化剂、防腐剂或缓冲剂。
本文所用“多核苷酸”是指两个或更多个核苷酸(核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸或核苷酸的任一类型的修饰形式)的多聚形式。该术语包括DNA的单链或双链形式。术语“分离的多核苷酸”应是指根据其来源“分离的多核苷酸”不与“分离的多核苷酸”在自然界与之一起存在的多核苷酸的全部或部分缔合；与在自然界中不与之连接的多核苷酸有效连接；或在自然界中不作为较大序列的一部分存在的多核苷酸(例如基因组、cDNA或合成源的多核苷酸或其某些组合)。
本文所用“多肽”是指氨基酸的任何聚合链。术语“肽”和“蛋白质”可与术语多肽互换使用，另是指氨基酸的聚合链。术语“多肽”包括天然或人工蛋白质、蛋白质片段和蛋白质序列的多肽类似物。多肽可以是单体或聚合的。
“猪抗体”在本文用来指由从不同品种的猪中分离的天然抗体的代表性氨基酸序列组成的天然存在的或重组产生的免疫球蛋白。猪抗体是具有来源于猪种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。本公开内容的猪抗体(例如在CDR中)可包括非由猪种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如体外通过随机或位点专一诱变或体内通过体细胞突变引入的突变)。然而，术语“猪抗体”往往不包括其中来源于另一哺乳动物物种(例如小鼠)的种系的CDR序列已植入猪构架序列中的抗体。
“猪源化”本文用来指用于将来自供体抗体的非猪抗原结合氨基酸转移到猪抗体接纳体构架以产生可用于猪的蛋白质治疗性治疗的方法。
“猪源化抗体”本文用来指包含来自非猪物种(例如小鼠)的重链和轻链可变区序列但其中VH和/或VL序列的至少一部分已被改变得更“像猪的”，即更类似于猪种系可变序列的抗体。猪源化抗体的一个类型是CDR移植抗体，其中将非猪CDR序列引入猪VH和VL序列以置换相应的猪CDR序列。
本文提供的非猪抗体的猪源化形式是含有来源于非猪抗体的序列的猪抗体。就绝大部分而言，猪源化抗体是其中接受体的超变区残基被来自非猪物种(“供体”抗体)例如小鼠、大鼠、兔、猫、狗、山羊、鸡、牛、马、美洲驼、骆驼、单峰驼、鲨鱼、非人灵长类动物、人的超变区残基、具有所需性质的人源化、重组序列或工程改造序列置换的猪抗体序列(“接纳体”或“接受体”抗体)。在某些情况下，猪抗体的构架区(FR)残基被相应的非猪FR残基置换。此外，猪源化抗体可包括不存在于接受体抗体或供体抗体中的残基。可进行这些修饰以进一步精修抗体性能。猪源化抗体还可包含猪抗体的免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分。
猪源化抗体是与目标抗原免疫特异性结合且包含主要具有猪抗体的氨基酸序列的构架区(FR)和主要具有非猪抗体的氨基酸序列的互补决定区(CDR)的抗体或其变体、衍生物、类似物或片段。猪源化抗体包含至少一个、通常两个可变结构域(Fab、Fab′、F(ab′)2、FabC、Fv)的基本全部，其中全部或基本全部的CDR区相当于非猪免疫球蛋白(即供体抗体)的CDR区，全部或基本全部的构架区是猪免疫球蛋白共有序列的构架区。猪源化抗体还包含免疫球蛋白恒定区(Fc)，通常猪免疫球蛋白的恒定区的至少一部分。猪或猪源化抗体可含有轻链以及至少重链的可变结构域两者。该抗体还可包括重链的CH1、铰链、CH2、CH3和CH4区。猪源化抗体可只含有猪源化轻链或猪源化重链。示例性猪源化抗体只含有轻链的猪源化可变结构域和重链的猪源化可变结构域。
用于本文所述诊断测定法的“预处理试剂”(例如溶解、沉淀和/或增溶试剂)是溶解存在于试验样品中的任何细胞和/或增溶存在于试验样品中的任何分析物的试剂。预处理不是所有样品所必需的，如本文的进一步描述。特别是，增溶分析物(例如NaV1.7、NaV1.7的片段、NaV1.7的变体或其任何组合)需要从存在于样品中的任何内源结合蛋白中释放分析物。预处理试剂可以是同质的(不需要分离步骤)或异质的(需要分离步骤)。在使用异质预处理试剂时，在进行下一步测定之前，要从试验样品除去任何沉淀的分析物结合蛋白。预处理试剂任选可包含：(a)一种或多种溶剂和盐，(b)一种或多种溶剂、盐和去污剂，(c)去污剂，(d)去污剂和盐，或(e)适于细胞溶解和/或分析物增溶的任何试剂或试剂的组合。
本文所用“预防有效量”是指在所需剂量下并持续一段时间，有效实现所需预防结果的量。
“质量控制试剂”在本文所述免疫测定法和试剂盒的情况下包括但不限于校准物、对照和灵敏度板。通常使用(例如一种或多种，例如众多)“校准物”或“标准品”以建立校准(标准)曲线用于内推分析物(例如抗体或分析物)的浓度。或者，可使用接近预定的阳性/阴性截断值的单一校准物。可结合使用多个校准物(即一种以上校准物或不同量的校准物)以包括“灵敏度板”。
“重组抗体”和“多种重组抗体”是指通过以下一个或多个步骤制备的抗体：包括通过重组技术将编码一个或多个单克隆抗体的全部或部分的核酸序列克隆至合适的表达载体，随后在合适的宿主细胞中表达抗体。该术语包括但不限于重组产生的单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体(完全或部分人源化)、由抗体片段形成的多特异性或多价结构、双功能抗体、异缀合Ab、DVD-Ig?和本文(i)中描述的其它抗体。(双重可变结构域免疫球蛋白及制备所述双重可变结构域免疫球蛋白的方法描述于Wu,C.等,NatureBiotechnology,25:1290-1297(2007))。本文所用术语“双功能抗体”是指包含对一个抗原部位具有特异性的第一臂和对不同抗原部位具有特异性的第二臂的抗体，即双功能抗体具有双重特异性。
本文所用“重组宿主细胞”(或简称“宿主细胞”)是指外源DNA已引入其中的细胞。应了解，该术语不仅仅欲指特定细胞，而且还指所述细胞的子代。因为某些修饰由于突变或环境影响所致可发生在随后的子代中，所以实际上所述子代可能与亲本细胞不同，但仍包括在术语“宿主细胞”的范围内。一方面，宿主细胞包括选自任一生命界的原核和真核细胞。真核细胞包括原生生物、真菌、植物和动物细胞。另一方面，宿主细胞包括但不限于原核细胞系大肠杆菌(E.coli)；哺乳动物细胞系CHO、HEK293和COS；昆虫细胞系Sf9；和真菌细胞酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)。
标准技术可用于重组DNA、寡核苷酸合成和组织培养和转化(例如电穿孔、脂转染)。可按照生产商说明书或如本领域通常实现的或本文描述的一样进行酶促反应和纯化技术。一般可按照本领域众所周知和整个本说明书中引述和论述的各种通用和更专业的参考文献中描述的常规方法进行前述技术和程序。参见例如Sambrook等,MolecularCloning:ALaboratoryManual(第2版,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.(1989))，其通过引用结合到本文中用于任何目的。
本文使用的术语“样品”、“试验样品”、“样本”、“来自受试者的样品”或“患者样品”可互换使用，并可以是血液、组织、尿液、血清、血浆、羊水、脑脊液、胎盘细胞或组织、内皮细胞、白细胞或单核细胞的样品。可按从受试者中获得的直接使用，或可预处理，例如通过过滤、蒸馏、提取、浓缩、离心、灭活干扰组分、添加试剂等，以按本文所述的或本领域另外已知的某种方式改进样品的品质。
可使用任何细胞类型、组织或体液获得样品。所述细胞类型、组织和体液可包括组织(例如活检和尸检样品)的切片、为组织学目的所取的冷冻切片、血液(例如全血)、血浆、血清、痰、大便、眼泪、粘液、唾液、支气管肺泡灌洗(BAL)液、毛发、皮肤、红细胞、血小板、间质液、眼晶状体液、脑脊液、汗液、鼻液、滑液、月经、羊水、精液等。细胞类型和组织还可包括淋巴液、腹水、妇产科液体、尿液、腹膜液、脑脊液、通过阴道清洗收集的流体或通过阴道冲洗收集的流体。组织或细胞类型可通过从动物中取出细胞样品来提供，但是也可通过使用之前分离的细胞(例如通过另一个人、在另一时间和/或用于另一目的而分离)实现。还可使用归档组织，例如具有治疗史或结局史的归档组织。蛋白质或核苷酸分离和/或纯化不是必需的。
“校准组合物系列”是指包含已知浓度的NaV1.7的多种组合物，其中组合物的每一种因NaV1.7的浓度而不同于系列中的其它组合物。
本文所用“单链Fv”或“scFv”是指包含抗体的VH和VL结构域的抗体片段，其中这些结构域存在于单一多肽链上。Fv多肽一般进一步包含介于VH和VL结构域之间使得scFv能够形成用于抗原结合的所需结构的多肽接头。有关scFv的综述，参见Pluckthun，载于ThePharmacologyofMonoclonalAntibodies,第113卷,Rosenburg和Moore编辑,Springer-Verlag,NewYork,第269-315页(1994)。
“固相”是指不溶解的或可通过后续反应使之不溶解的任何材料。可针对其吸引和固定俘获剂的固有能力选择固相。或者，可将固相与具有吸引和固定俘获剂的能力的连接剂连接。例如，连接剂可包括带电荷的物质，其带有相对于俘获剂本身或与俘获剂缀合的带电荷物质是相反的电荷。一般而言，连接剂可以是固定(连接)至固相且具有通过结合反应固定俘获剂的能力的任何结合配偶体(优选特异性的)。连接剂能够在进行测定前或在进行测定期间使俘获剂与固相材料间接结合。例如，固相可以是塑料、衍生塑料、磁性金属、或非磁性金属、玻璃或硅，包括例如试管、微量滴定孔、片层、珠粒、微粒、芯片和本领域普通技术人员已知的其它构造。
本文所用“特异性结合”或“特异性地结合”可以是指抗体、蛋白质或肽与第二化学物类的相互作用，其中相互作用取决于化学物类上特殊结构(例如抗原决定簇或表位)的存在；例如，抗体识别并结合特定的蛋白质结构而非普通蛋白质。如果抗体对表位“A”有特异性，则在含有标记的“A”和抗体的反应中，含有表位A(或游离的、未标记的A)的分子的存在将降低与抗体结合的标记的A的量。
“特异性结合配偶体”是特异性结合对的成员。特异性结合对包含通过化学或物理方法彼此特异性结合的两种不同的分子。因此，除通用的免疫测定法的抗原和抗体特异性结合对以外，其它特异性结合对可包括生物素和抗生物素蛋白(或链霉抗生物素)、糖和凝集素、互补核苷酸序列、效应分子和受体分子、辅因子和酶、酶和酶抑制剂等。此外，特异性结合对可包括是原始特异性结合成员的类似物的成员，例如分析物-类似物。免疫反应性特异性结合成员包括抗原、抗原片段和抗体(包括单克隆和多克隆抗体)以及复合体及其片段，不论是分离的或重组产生的。
本文可互换使用的术语“受试者”和“患者”是指任何脊椎动物，包括但不限于哺乳动物(例如牛、猪、骆驼、美洲驼、马、山羊、兔、绵羊、仓鼠、豚鼠、猫、狗、大鼠和小鼠、非人灵长类动物(例如猴、例如食蟹猴或猕猴、黑猩猩等)和人)。在一些实施方案中，受试者可以是人或非人。在其它实施方案中，受试者可以是牛、犬、马、猫或猪。受试者或患者可进行其它形式的治疗。
本文所用“治疗有效量”是指在必需的剂量下持续必需的一段时间，有效实现所需治疗结果的量。治疗有效量可以是足以减轻或改善病症或其一个或多个症状的严重程度和/或持续时间；防止病症进展；促使病症消退；防止与病症有关的一个或多个症状的复发、发生、发作或进展；检测病症或提高或改进另一疗法(例如预防剂或治疗剂)的预防或治疗作用的某一疗法的量和/或持续时间。治疗有效量的抗体或抗体部分可由本领域技术人员确定，并且可随例如个体的疾病状态、年龄、性别和体重及抗体或抗体部分在个体中诱导所需反应的能力等因素而变化。治疗有效量也是其中抗体或抗体部分的治疗有益作用超过任何毒性作用或有害作用的量。
本文所用“转化”是指外源DNA籍以进入宿主细胞的任何过程。采用本领域众所周知的各种方法，转化可发生在天然或人工条件下。转化可依赖于将外源核酸序列插入原核或真核宿主细胞中的任何已知方法。根据待转化的宿主细胞选择方法，可包括但不限于病毒感染、电穿孔、脂转染和粒子轰击。所述“转化的”细胞包括稳定转化的细胞，其中插入的DNA能够作为自主复制质粒或作为宿主染色体的部分复制。它们还包括瞬时表达插入的DNA或RNA持续有限时间的细胞。
本文所用“转基因生物”是指具有含有转基因的细胞的生物，其中被引入生物(或生物的祖先)中的转基因表达在生物中非天然表达的多肽。“转基因”为DNA构建体，其稳定且有效整合至转基因生物产生于其中的细胞的基因组中，指导所编码的基因产物在转基因生物的一个或多个细胞类型或组织中表达。
“治疗”、“医治”或“医疗”各自在本文可互换使用以描述逆转、缓解或抑制疾病的进展或该术语适用的所述疾病的一个或多个症状。根据受试者的状况，该术语还是指预防疾病，包括预防疾病的发生或预防与疾病相关的症状。治疗可以急救或长期方式进行。该术语还是指在遭受疾病困扰之前减轻疾病或与这类疾病有关的症状的严重性。在受困之前疾病严重性的这类防止或减轻是指将本发明的抗体或药物组合物给予在给药时间不遭受疾病困扰的受试者。“预防”还指预防疾病或与所述疾病相关的一个或多个症状的复发。“治疗”和“治疗上地”是指治疗行动，“治疗”如上定义。
“变体”本文用来描述在氨基酸序列上通过氨基酸的插入、缺失或保守取代而不同，但保留至少一种生物活性的肽或多肽。“生物活性”的代表性实例包括被特定抗体结合或促进免疫应答的能力。变体在本文还用来描述具有与具有保留至少一种生物活性的氨基酸序列的参考蛋白质基本相同的氨基酸序列的蛋白质。氨基酸的保守取代，即氨基酸被性质类似(例如带电荷区的亲水性、程度和分布)的氨不同基酸置换，在本领域被视为通常涉及少量变化。正如本领域所了解的，在某种程度上，通过考虑氨基酸的亲水指数，可鉴定这些少量变化。Kyte等,J.Mol.Biol.157:105-132(1982)。氨基酸的亲水指数基于其疏水性和电荷的考量。本领域已知，相似亲水指数的氨基酸可被取代，并仍保留蛋白质功能。一方面，亲水指数为±2的氨基酸被取代。氨基酸的亲水性还可用于揭示可产生保留生物功能的蛋白质的取代。在肽的情况下考虑氨基酸的亲水性，允许计算该肽的最大局部平均亲水性，一种据报告与抗原性和免疫原性极相关的度量。美国专利号4,554,101，通过引用全部予以结合。正如本领域所了解的，具有相似亲水性值的氨基酸的取代可产生保留生物活性(例如免疫原性)的肽。取代可用彼此亲水性值在±2内的氨基酸进行。氨基酸的疏水性指数和亲水性值两者受氨基酸的特定侧链影响。与该观察结果一致，与生物功能相容的氨基酸取代要理解为取决于通过疏水性、亲水性、电荷、大小和其它性质显示的氨基酸的相对相似性，特别是那些氨基酸的侧链。“变体”还可用来指在氨基酸序列上不同于抗NaV1.7抗体的相应片段但仍有抗原反应性的且可与抗NaV1.7抗体的相应片段竞争与NaV1.7结合的抗NaV1.7抗体的抗原反应性片段。“变体”还可用于描述例如通过蛋白酶解、磷酸化或其它翻译后修饰等差异化加工但仍保留其抗原反应性的多肽或其片段。
“载体”本文用来描述可转移与之连接的核酸的核酸分子。载体的一个类型是“质粒”，这是指其它DNA区段可连入其中的环状双链DNA环。载体的另一个类型是病毒载体，其中其它DNA区段可被连接至病毒基因组。某些载体可在其所导入的宿主细胞中自主复制(例如具有细菌复制起点的细菌载体和附加型哺乳动物载体)。其它载体(例如非附加型哺乳动物载体)在导入宿主细胞时可整合至宿主细胞基因组，因此与宿主基因组一起复制。此外，某些载体能够指导与之有效连接的基因表达。所述载体在本文被称为“重组表达载体”(或简称“表达载体”)。一般而言，用于重组DNA技术的表达载体通常呈质粒的形式。“质粒”和“载体”可互换使用，因为质粒是最常用的载体形式。然而，可以使用起等同功能的表达载体的其它形式，例如病毒载体(例如复制缺陷型反转录病毒、腺病毒和腺伴随病毒)。在这一方面，RNA形式的载体(包括RNA病毒载体)也可应用于本公开内容的情况。
本文所用“游标带(Vernierzone)”是指如Foote和Winter(1992,J.Mol.Biol.224:487-499，其通过引用结合到本文中)所述可调节CDR结构和微调与抗原契合的一亚类构架残基。游标带残基在CDR基础上形成层，可影响CDR的结构和抗体的亲和力。
除非本文另有定义，否则与本公开内容联用的科学和技术术语可具有本领域普通技术人员通常理解的意义。例如，与本文所述细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学和蛋白质和核酸化学和杂交联用的任何名称及其技术是本领域众所周知和常用的那些。术语的含义和范围应是明确的；然而在任何潜在歧义的情况下，本文提供的定义优先于任何词典或外来定义。另外，除非文中另有要求，否则单数术语应包括复数，复数术语应包括单数。
2.NaV1.7抗体
本文提供用于检测和/或抑制NaV1.7和治疗疾病(例如疼痛和/或瘙痒病症)的方法的抗体。针对与NaV1.7的结合选择本文所述抗体。
a.NaV1.7
电压门控钠(NaV)通道亚型1.7(NaV1.7)在感知疼痛的背根节(DRG)神经元中表达。NaV1.7尤其促进疼痛感觉，在小鼠中具体地说在DRG神经元中NaV1.7的缺失抑制疼痛。如本文所示，NaV1.7还在脊髓伤害感受和本体感受突触传递中起作用。像伤害感受神经元一样，传入神经表达NaV1.7。传入神经参与引发咳嗽。
如本文进一步所示，抑制NaV1.7抑制与变应性接触性皮炎、急性瘙痒、慢性瘙痒、依赖组胺的瘙痒和不依赖组胺的瘙痒有关的瘙痒。另如本文所示，NaV1.7的外周和中枢调节抑制瘙痒的急性和慢性状态两者。急性瘙痒可由胃泌素释放肽(GRP)诱导或介导。急性瘙痒可由浅层背角神经元中的GRP诱导或介导。
在人中，SCN9A(即编码人NaV1.7的基因)的功能失去突变导致先天无法感知疼痛(CIP)，而其它感觉例如触觉和温度不受功能失去突变影响。编码人NaV1.7的基因的功能获得突变导致对疼痛、阵发性剧痛症和遗传性红斑性肢痛症的超敏反应。
人NaV1.7具有图1A所示氨基酸序列，其也可以GenBank登记号NP_002968获取。
NaV1.7含有四聚重复序列DI-DIV，各重复序列由6个跨膜螺旋组成。前4个区段S1-S4包含电压传感器结构域(VSD)。电压传感器结构域包括电压传感器开关(VSP)，其是包含S3、S4的部分的螺旋-转角(环)-螺旋；和介于S3和S4之间的环。
具体地讲，SEQIDNO:23可以是NaV1.7的DII的VSP的氨基酸序列。SEQIDNO:21可以是NaV1.7DIIVSP的S3和S4之间的环的氨基酸序列。
因此，本文还提供包含与SEQIDNO:23所示氨基酸序列具有至少约80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列的肽。在一些实施方案中，肽包含SEQIDNO:23所示氨基酸序列。
本文还提供包含与SEQIDNO:21所示氨基酸序列具有至少约80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列的肽。在一些实施方案中，肽包含SEQIDNO:21所示氨基酸序列。
SEQIDNO:50可以是NaV1.7的DIV的VSP的氨基酸序列。SEQIDNO:51可以是NaV1.7DIVVSP的S3和S4之间的环的氨基酸序列。
因此，本文还提供包含与SEQIDNO:50所示氨基酸序列具有至少约80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列的肽。在一些实施方案中，肽包含SEQIDNO:50所示氨基酸序列。
本文还提供包含与SEQIDNO:51所示氨基酸序列具有至少约80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列的肽。在一些实施方案中，肽包含SEQIDNO:51所示氨基酸序列。
b.Nav1.7-识别抗体
抗体是与NaV1.7、其片段、NaV1.7的表位(例如SEQIDNO:21、SEQIDNO:23、SEQIDNO:50或SEQIDNO:51)或其变体结合的抗体。SEQIDNO:21可以是NaV1.7DIIVSP的S3和S4之间的环的氨基酸序列。SEQIDNO:23可以是NaV1.7的DII的VSP的氨基酸序列。SEQIDNO:51可以是NaV1.7DIIVSP的S3和S4之间的环的氨基酸序列。抗体可以是抗NaV1.7抗体或其变体或衍生物的片段。SEQIDNO:50可以是NaV1.7DIV的VSP的氨基酸序列。下表1中显示了SEQIDNOS:21、23、50和51的氨基酸序列。
表1
抗体可以是多克隆或单克隆抗体。抗体可以是嵌合抗体、单链抗体、亲和力成熟抗体、人抗体、人源化抗体、牛源化抗体、犬源化抗体、马源化抗体、猫源化抗体、猪源化抗体、完全人抗体或其抗体片段(例如Fab片段)或混合物。抗体片段或衍生物可包含F(ab’)2、Fv或scFv片段。抗体衍生物可通过肽模拟物(peptidomimetics)产生。另外，可改编所述用于产生单链抗体的技术以产生单链抗体。
抗Nav1.7抗体可以是嵌合抗NaV1.7或人源化抗NaV1.7抗体。在一个实施方案中，人源化抗体和嵌合抗体两者是单价的。在一个实施方案中，人源化抗体和嵌合抗体两者包含与Fc区连接的单一Fab区。
人抗体可来源于噬菌体展示技术或来源于表达人免疫球蛋白基因的转基因小鼠。人抗体可作为人体内免疫应答的结果产生并分离。参见例如Funaro等,BMCBiotechnology,2008(8):85。因此，抗体可以是人和非动物库的产物。因为是人源的，所以可使针对自身抗原的反应性的风险降到最小。或者，可采用标准酵母展示文库和展示技术以选择并分离人抗NaV1.7抗体。例如，可采用幼稚人单链可变片段(scFv)的文库来选择人抗NaV1.7抗体。可使用转基因动物表达人抗体。
人源化抗体可以是来自结合所需抗原的非人物种抗体、具有来自非人物种的一个或多个互补决定区(CDR)和来自人免疫球蛋白分子的构架区的抗体分子。
抗Nav1.7抗体可以是嵌合抗NaV1.7或牛源化抗NaV1.7抗体。在一个实施方案中，牛源化抗体和嵌合抗体两者是单价的。在一个实施方案中，牛源化抗体和嵌合抗体两者包含与Fc区连接的单一Fab区。
牛源化抗体可以是来自结合所需抗原的非牛物种抗体、具有来自非牛物种的一个或多个互补决定区(CDR)和来自牛免疫球蛋白分子的构架区的抗体分子。
抗Nav1.7抗体可以是嵌合抗NaV1.7或犬源化抗NaV1.7抗体。在一个实施方案中，犬源化抗体和嵌合抗体两者是单价的。在一个实施方案中，犬源化抗体和嵌合抗体两者包含与Fc区连接的单一Fab区。
犬源化抗体可以是来自结合所需抗原的非人物种抗体、具有来自非犬物种的一个或多个互补决定区(CDR)和来自犬免疫球蛋白分子的构架区的抗体分子。
抗Nav1.7抗体可以是嵌合抗NaV1.7或马源化抗NaV1.7抗体。在一个实施方案中，马源化抗体和嵌合抗体两者是单价的。在一个实施方案中，马源化抗体和嵌合抗体两者包含与Fc区连接的单一Fab区。
马源化抗体可以是来自结合所需抗原的非马物种抗体、具有来自非马物种的一个或多个互补决定区(CDR)和来自马免疫球蛋白分子的构架区的抗体分子。
抗Nav1.7抗体可以是嵌合抗NaV1.7或猫源化抗NaV1.7抗体。在一个实施方案中，猫源化抗体和嵌合抗体两者是单价的。在一个实施方案中，猫源化抗体和嵌合抗体两者包含与Fc区连接的单一Fab区。
猫源化抗体可以是来自结合所需抗原的非猫物种抗体、具有来自非猫物种的一个或多个互补决定区(CDR)和来自猫免疫球蛋白分子的构架区的抗体分子。
抗Nav1.7抗体可以是嵌合抗NaV1.7或猪源化抗NaV1.7抗体。在一个实施方案中，猪源化抗体和嵌合抗体两者是单价的。在一个实施方案中，猪源化抗体和嵌合抗体两者包含与Fc区连接的单一Fab区。
猪源化抗体可以是来自结合所需抗原的非猪物种抗体、具有来自非猪物种的一个或多个互补决定区(CDR)和来自猪免疫球蛋白分子的构架区的抗体分子。
抗体可以特异性和状态依赖方式抑制NaV1.7。抑制NaV1.7的能力的比较可按照本领域已知的各种方法进行。在一个实施方案中，可在以下抗体浓度范围内测定IC50值：约0.01nM-约1000nM、约0.1nM-约1000nM、约1.0nM-约1000nM、约10.0nM-约1000nM、约20.0nM-约1000nM、约50.0nM-约1000nM、约100.0nM-约1000nM、约200.0nM-约1000nM、约0.01nM-约900nM、约0.1nM-约900nM、约1.0nM-约900nM、约10.0nM-约900nM、约20.0nM-约900nM、约50.0nM-约900nM、约100.0nM-约900nM、约200.0nM-约900nM、约0.01nM-约800nM、约0.1nM-约800nM、约1.0nM-约800nM、约10.0nM-约800nM、约20.0nM-约800nM、约50.0nM-约800nM、约100.0nM-约800nM、约200.0nM-约800nM、约0.01nM-约700nM、约0.1nM-约700nM、约1.0nM-约700nM、约10.0nM-约700nM、约20.0nM-约700nM、约50.0nM-约700nM、约100.0nM-约700nM、约200.0nM-约700nM、约0.01nM-约500nM、约0.1nM-约500nM、约1.0nM-约500nM、约10.0nM-约500nM、约20.0nM-约500nM、约50.0nM-约500nM、约100.0nM-约500nM或约200.0nM-约500nM。例如，本发明的抗体不仅仅识别和结合NaV1.7，还可通过具有其它生物活性，例如减轻与以下疾病有关的临床症状的能力进一步表征：例如神经原性炎症、疼痛、瘙痒、炎症性疼痛、神经性疼痛、慢性疼痛、病理性疼痛、变应性接触性皮炎、异常性疼痛、痛觉过敏、阵发性剧痛症和遗传性红斑性肢痛症。抗体还可通过抑制或减轻病理性咳嗽的其它生物活性表征。
与神经原性炎症有关的疾病可包括但不限于哮喘、关节炎、湿疹、银屑病和偏头痛或头痛。
在一些实施方案中，疼痛可为炎症性疼痛、神经性疼痛、痛觉过敏、慢性疼痛、病理性疼痛、异常性疼痛、癌症相关疼痛、非典型疼痛、神经炎症相关疼痛状况、神经原性炎症相关疼痛、阵发性剧痛症、遗传性红斑性肢痛症或其组合。炎症性疼痛可为关节炎疼痛、牙疼、腰痛、炎性肠病相关疼痛、颞下颌关节(TMJ)或其组合。神经性疼痛可以是与以下有关的疾病：糖尿病性神经病、化疗、人免疫缺陷病毒(HIV)感染、疱疹后神经痛(PHN；亦称为带状疱疹)、手术(例如截肢术、开胸术、乳房切除术、疝手术等)、脊髓损伤、中风或其组合。带状疱疹可在被水痘-带状疱疹病毒(VZV)感染后发生。非典型疼痛可以是纤维肌痛或镰状细胞病相关疼痛。神经炎症相关疼痛状况可以是复杂性区域性疼痛综合征(CRPS)、头痛、偏头痛或其组合。神经原性炎症相关疼痛可以是复杂性区域性疼痛综合征(CRPS)、头痛、偏头痛或其组合。
疼痛可与瘙痒，例如但不限于急性瘙痒、慢性瘙痒、依赖组胺的瘙痒、不依赖组胺的瘙痒或其组合有关。慢性瘙痒可与特应性皮炎、变应性接触性皮炎、银屑病、肾病、肝病、带状疱疹病毒、湿疹或其组合有关。急性瘙痒可以是胃泌素释放肽(GRP)诱导或介导的急性瘙痒。急性瘙痒可由浅层背角神经元中的GRP介导。
(1)抗体特性
所述抗体可与人NaV1.7(SEQIDNO:22；图1A)、SEQIDNO:21(表1)、SEQIDNO:23(图1B和表1)、SEQIDNO:50(表1)、SEQIDNO:51(表1)、其片段或其变体免疫特异性地结合，其Kd为至少0.10nM、至少0.20nM、至少0.30nM、至少0.40nM、至少0.50nM、至少0.60nM、至少0.70nM、至少0.80nM、至少0.90nM、至少1.00nM、至少1.50nM、至少2.00nM、至少2.50nM、至少3.00nM、至少3.50nM、至少4.00nM、至少4.50nM、至少5.00nM、至少5.50nM、至少6.00nM、至少6.50nM、至少7.00nM、至少7.50nM、至少8.00nM、至少8.50nM、至少9.00nM、至少9.50nM、至少10.00nM、至少10.50nM、至少11.00nM、至少11.50nM、至少12.00nM、至少12.50nM、至少13.00nM，至少13.50nM、至少14.00nM、至少14.50nM、至少15.00nM、至少15.50nM、至少16.00nM、至少16.50nM、至少17.00nM、至少17.50nM、至少18.00nM、至少18.50nM、至少19.00nM、至少19.50nM、至少20.00nM、至少20.50nM、至少21.00nM、至少21.50nM、至少22.00nM、至少22.50nM、至少23.00nM、至少23.50nM、至少24.00nM、至少24.50nM、至少25.00nM、至少25.50nM、至少26.00nM、至少26.50nM、至少27.00nM、至少27.50nM、至少28.00nM、至少28.50nM、至少29.00nM、至少29.50nM、至少30.00nM、至少30.05nM、至少31.00nM、至少31.50nM、至少32.00nM、至少32.50nM、至少33.00nM、至少33.50nM、至少34.00nM、至少34.50nM或至少35.00nM。抗体可具有以下范围的Kd：约0.10nM-约35.00nM、约0.20nM-约35.00nM、约0.30nM-约35.00nM、约0.40nM、约35.00nM、约0.50nM-约35.00nM、约0.10nM-约34.00nM、约0.20nM-约34.00nM、约0.30nM-约34.00nM、约0.40nM-约34.00nM、约0.50nM-约34.00nM、约0.10nM-约33.00nM、约0.20nM-约33.00nM、约0.30nM-约33.00nM、约0.40nM-约33.00nM、约0.50nM-约33.00nM、约0.10nM-约32.00nM、约0.20nM-约32.00nM、约0.30nM-约32.00nM、约0.40nM-约32.00nM、约0.50nM-约32.00nM、约0.10nM-约31.00nM、约0.20nM-约31.00nM、约0.30nM-约31.00nM、约0.40nM-约31.00nM、约0.50nM-约31.00nM、约0.10nM-约30.00nM、约0.20nM-约30.00nM、约0.30nM-约30.00nM、约0.40nM-约30.00nM或约0.50nM-约30.00nM。片段可以是SEQIDNO:21、SEQIDNO:23、SEQIDNO:50或SEQIDNO:51。
抗体可显著降低峰值钠电流。特别是可通过抑制NaV1.7的抗体降低峰值钠电流。抗体可通过稳定NaV1.7的关闭状态来抑制NaV1.7。可以较高的频率脉冲提高NaV1.7抑制的最大程度，例如从84%抑制到99%抑制。另外，可以较高的频率脉冲提高或加大抗体的IC50，例如从约106nM到约17nM。因此，抗体的IC50可为约200nM-约1nM。IC50可为约150nM-约5nM、约140nM-约5nM、约130nM-约5nM或约120nM-约5nM。IC50还可为约5nM、约6nM、约7nM、约8nM、约9nM、约10nM、约11nM、约12nM、约13nM、约14nM、约15nM、约16nM、约17nM、约18nM、约19nM、约20nM、约21nM、约22nM、约23nM、约24nM、约25nM、约30nM、约35nM、约40nM、约45nM、约50nM、约55nM、约60nM、约65nM、约70nM、约75nM、约80nM、约85nM、约90nM、约95nM、约96nM、约97nM、约98nM、约99nM、约100nM、约101nM、约102nM、约103nM、约104nM、约105nM、约106nM、约107nM、约108nM、约109nM、约110nM、约115nM或约120nM。IC50可为约17nM。
抗体可稳定NaV1.7的关闭状态(即孔结构域关闭，钠阳离子不能跨膜运输)。抑制NaV1.7的封闭状态的这种稳定可通过不同于电压门控离子通道的已知抑制剂(例如Hanatoxin和Pro-Tx-II)所用机制的机制而发生。抗体可通过不同于毒素Pro-Tx-II稳定NaV1.7的关闭状态来稳定NaV1.7的关闭状态，抑制NaV1.7。
相对于NaV通道亚型，抗体对NaV1.7是特异性的(选择性的)。抗体可显示约50倍-约2500倍、约100倍-约2200倍、约200倍-约2000倍、约300倍-约1800倍或约400倍-约1500倍的选择性。抗体可显示约400倍-约1500倍的选择性。抗体还可显示约50倍、约100倍、约200倍、约300倍、约325倍、约350倍、约375倍、约400倍、约425倍、约450倍、约475倍、约500倍、约525倍、约550倍、约575倍、约600倍、约625倍、约650倍、约675倍、约700倍、约725倍、约750倍、约775倍、约800倍、约825倍，约850倍、约875倍、约900倍、约975倍、约1000倍、约1025倍、约1050倍、约1075倍、约1100倍、约1125倍、约1150倍、约1175倍、约1200倍、约1225倍、约1250倍、约1275倍、约1300倍、约1375倍、约1400倍、约1425倍、约1450倍、约1475倍、约1500倍、约1525倍、约1575倍、约1600倍、约1700倍、约1800倍、约1900倍、约2000倍、约2100倍、约2200倍、约2300倍、约2400倍或约2500倍的选择性。
抗体可抑制患有以下疼痛的受试者的疼痛感觉：例如炎症性疼痛、神经性疼痛、痛觉过敏、慢性疼痛、病理性疼痛、异常性疼痛、痛觉过敏、阵发性剧痛症和遗传性红斑性肢痛症。在一些实施方案中，疼痛可为炎症性疼痛、神经性疼痛、慢性疼痛、病理性疼痛、异常性疼痛、癌症相关疼痛、非典型疼痛、神经炎症相关疼痛状况、神经原性炎症相关疼痛、阵发性剧痛症、遗传性红斑性肢痛症或其组合。炎症性疼痛可为关节炎疼痛、牙疼、腰痛、炎性肠病相关疼痛、颞下颌关节(TMJ)或其组合。神经性疼痛可以是与以下有关的疾病：糖尿病性神经病、化疗、人免疫缺陷病毒(HIV)感染、疱疹后神经痛(PHN；亦称为带状疱疹)、手术(例如截肢术、开胸术、乳房切除术、疝手术等)、脊髓损伤、中风或其组合。带状疱疹可在被水痘带状疱疹病毒(VZV)感染之后发生。非典型疼痛可以是纤维肌痛或镰状细胞病相关疼痛。神经炎症相关疼痛状况可以是复杂性区域性疼痛综合征(CRPS)、头痛、偏头痛或其组合。神经原性炎症相关疼痛可以是复杂性区域性疼痛综合征(CRPS)、头痛、偏头痛或其组合。
疼痛可与瘙痒，例如但不限于急性瘙痒、慢性瘙痒、依赖组胺的瘙痒、不依赖组胺的瘙痒或其组合有关。急性瘙痒可以是胃泌素释放肽(GRP)诱导或介导的急性瘙痒。急性瘙痒可由浅层背角神经元中的GRP介导。慢性瘙痒可与特应性皮炎、变应性接触性皮炎、银屑病、肾病、肝病、带状疱疹病毒、湿疹或其组合有关。
抗体可中枢、系统、外周和/或局部地抑制疼痛感觉。抗体可抑制受试者的疼痛感觉约35%-约85%、约40%-约80%、约42%-约78%、约44%-约76%或约46%-约74%。抗体还可抑制疼痛感觉约35%、约40%、约45%、约46%、约47%、约48%、约49%、约50%、约51%、约52%、约53%、约54%、约55%、约60%、约65%、约66%、约67%、约68%、约69%、约70%、约71%、约72%、约73%、约74%、约75%、约80%或约85%。抗体还可抑制受试者的疼痛感觉达约50%或约70%。
抗体可抑制变应性接触性皮炎。抗体可抑制神经原性炎症。与神经原性炎症有关的疾病可包括但不限于哮喘、关节炎、湿疹、银屑病和偏头痛或头痛。
抗体可减轻或抑制例如神经原性炎症、疼痛、瘙痒、炎症性疼痛、神经性疼痛、慢性疼痛、病理性疼痛、变应性接触性皮炎、异常性疼痛、痛觉过敏、阵发性剧痛症和遗传性红斑性肢痛症等疾病相关的临床症状。与神经原性炎症有关的疾病可包括但不限于哮喘、关节炎、湿疹、银屑病和偏头痛或头痛。在一些实施方案中，疼痛可为炎症性疼痛、神经性疼痛、痛觉过敏、慢性疼痛、病理性疼痛、异常性疼痛、癌症相关疼痛、非典型疼痛、神经炎症相关疼痛状况、神经原性炎症相关疼痛、阵发性剧痛症、遗传性红斑性肢痛症或其组合。炎症性疼痛可为关节炎疼痛、牙疼、腰痛、炎性肠病相关疼痛、颞下颌关节(TMJ)或其组合。神经性疼痛可以是与以下有关的疾病：糖尿病性神经病、化疗、人免疫缺陷病毒(HIV)感染、疱疹后神经痛(PHN；亦称为带状疱疹)、手术(例如截肢术、开胸术、乳房切除术、疝手术等)、脊髓损伤、中风或其组合。带状疱疹可在被水痘带状疱疹病毒(VZV)感染之后发生。非典型疼痛可以是纤维肌痛或镰状细胞病相关疼痛。神经炎症相关疼痛状况可以是复杂性区域性疼痛综合征(CRPS)、头痛、偏头痛或其组合。神经原性炎症相关疼痛可以是复杂性区域性疼痛综合征(CRPS)、头痛、偏头痛或其组合。疼痛可为相关瘙痒，例如但不限于急性瘙痒、慢性瘙痒、依赖组胺的瘙痒、不依赖组胺的瘙痒或其组合。慢性瘙痒可与特应性皮炎、变应性接触性皮炎、银屑病、肾病、肝病、带状疱疹病毒、湿疹或其组合有关。急性瘙痒可以是胃泌素释放肽(GRP)诱导或介导的急性瘙痒。急性瘙痒可由浅层背角神经元中的GRP介导。
抗体可提高患有例如炎症性疼痛、神经性疼痛、痛觉过敏、慢性疼痛、病理性疼痛、异常性疼痛、痛觉过敏、阵发性剧痛症和遗传性红斑性肢痛症等疼痛的受试者的疼痛阈值。在一些实施方案中，疼痛可为炎症性疼痛、神经性疼痛、痛觉过敏、慢性疼痛、病理性疼痛、异常性疼痛、癌症相关疼痛、非典型疼痛、神经炎症相关疼痛状况、神经原性炎症相关疼痛、阵发性剧痛症、遗传性红斑性肢痛症或其组合。炎症性疼痛可为关节炎疼痛、牙疼、腰痛、炎性肠病相关疼痛、颞下颌关节(TMJ)或其组合。神经性疼痛可以是与以下有关的疾病：糖尿病性神经病、化疗、人免疫缺陷病毒(HIV)感染、疱疹后神经痛(PHN；亦称为带状疱疹)、手术(例如截肢术、开胸术、乳房切除术、疝手术等)、脊髓损伤、中风或其组合。带状疱疹可在被水痘带状疱疹病毒(VZV)感染之后发生。非典型疼痛可以是纤维肌痛或镰状细胞病相关疼痛。神经炎症相关疼痛状况可以是复杂性区域性疼痛综合征(CRPS)、头痛、偏头痛或其组合。神经原性炎症相关疼痛可以是复杂性区域性疼痛综合征(CRPS)、头痛、偏头痛或其组合。疼痛可与瘙痒，例如但不限于急性瘙痒、慢性瘙痒、依赖组胺的瘙痒、不依赖组胺的瘙痒或其组合有关。急性瘙痒可以是胃泌素释放肽(GRP)诱导或介导的急性瘙痒。急性瘙痒可由浅层背角神经元中的GRP介导。慢性瘙痒可与特应性皮炎、变应性接触性皮炎、银屑病、肾病、肝病、带状疱疹病毒、湿疹或其组合有关。
抗体可中枢、系统、外周和/或局部性地提高受试者的疼痛阈值。抗体可提高受试者的疼痛阈值达约1.2倍-约4倍、约1.5倍-约3倍或约2倍。抗体可提高受试者的疼痛阈值达约1.2倍、约1.3倍、约1.4倍、约1.5倍、约1.6倍、约1.7倍、约1.8倍、约1.9倍、约2.0倍、约2.1倍、约2.2倍、约2.3倍、约2.4倍、约2.5倍、约2.6倍、约2.7倍、约2.8倍、约2.9倍、约3.0倍、约3.1倍、约3.2倍、约3.3倍、约3.4倍、约3.5倍、约3.6倍、约3.7倍、约3.8倍、约3.9倍或约4倍。抗体可提高受试者的疼痛阈值达约2倍或约3倍。
抗体可提高受试者的疼痛阈值达约125%-约400%、约150%-约300%或约200%。抗体可提高受试者的疼痛阈值达约125%、约130%、约135%、约140%、约145%、约150%、约155%、约160%、约165%、约170%、约175%、约180%、约185%、约190%、约195%、约200%、约205%、约210%、约215%、约220%、约225%、约230%、约235%、约240%、约245%、约250%、约255%、约260%、约265%、约270%、约275%、约280%、约285%、约290%、约295%、约300%、约305%、约310%、约315%、约320%、约325%、约330%、约335%、约340%、约345%、约350%、约355%、约360%、约365%、约370%、约375%、约380%、约385%、约390%、约395%或约400%。抗体可提高受试者的疼痛阈值达约200%或约300%。
抗体可抑制或缓解受试者的瘙痒，例如但不限于急性瘙痒、慢性瘙痒、依赖组胺的瘙痒、不依赖组胺的瘙痒、变应性接触性皮炎或其组合。急性瘙痒可以是胃泌素释放肽(GRP)诱导或介导的急性瘙痒。急性瘙痒可由浅层背角神经元中的GRP介导。慢性瘙痒可与特应性皮炎、变应性接触性皮炎、银屑病、肾病、肝病、带状疱疹病毒、湿疹或其组合有关。抗体可抑制受试者的瘙痒达至少约40%、50%、60%或70%。抗体可用来控制患有急性瘙痒、慢性瘙痒、依赖组胺的瘙痒、不依赖组胺的瘙痒、变应性接触性皮炎或其组合的受试者的瘙痒。
抗体可抑制或缓解神经原性炎症。与神经原性炎症有关的疾病可包括但不限于哮喘、关节炎、湿疹、银屑病和偏头痛或头痛。
抗体可抑制或减轻病理性咳嗽。抗体可抑制或减轻慢性咳嗽。
(2)抗体结构
(a)重链和轻链CDR
抗体可与NaV1.7(SEQIDNO:22；图1A)、其片段(SEQIDNO:21(表1)、SEQIDNO:23(图1B和表1)、SEQIDNO:50(表1)或SEQIDNO:51(表1))或其变体免疫特异性地结合，并包含表2和图3A和3B所示可变重链(VH)和/或可变轻链(VL)。可变重链和/或可变轻链可由表3和图2A和2B所示核酸序列编码。抗体可与NaV1.7、其片段或其变体免疫特异性地结合，并包含也在表2和图3A和3B中显示的重链或轻链CDR序列的一个或多个(CDR以下划线显示)。重链或轻链CDR序列的一个或多个可由表3和图2A和2B所示核酸序列编码(CDR以下划线显示)。
本文提供编码与NaV1.7、其片段或其变体免疫特异性结合的抗体的分离的核酸。分离的核酸可包含在严格条件下与编码包含表2所示重链或轻链CDR序列的抗体的核酸分子杂交的核苷酸序列。
表2
表3
抗体或其变体或衍生物可含有与SEQIDNO:4-11的一个或多个有大于99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、90%、85%、80%、75%、70%、65%、60%、55%或50%同一性的一个或多个氨基酸序列。抗体或其变体或衍生物可由与SEQIDNO:12-19的一个或多个有大于99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、90%、85%、80%、75%、70%、65%、60%、55%或50%同一性的一个或多个核酸序列编码。多肽同一性和同源性可通过例如以下报告中描述的算法确定：Wilbur,W.J.和Lipman,D.J.Proc.Natl.Acad.Sci.USA80,726-730(1983)。本文所述抗体、其变体或衍生物可由在严格条件下与SEQIDNO:12-19的一个或多个的互补序列杂交的核酸编码。
抗体可以是IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY分子类别(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚类。
c.抗体制备/产生
抗体可通过各种技术的任一种制备。一般而言，抗体可通过细胞培养技术产生，包括如下产生单克隆抗体：通过常规技术或通过将抗体基因、重链和/或轻链转染至合适的细菌或哺乳动物细胞宿主中以允许用于抗体产生，其中抗体可以是重组的。术语“转染”的不同形式欲包括常用于将外源DNA导入原核或真核宿主细胞的各种技术，例如电穿孔、磷酸钙沉淀、DEAE-葡聚糖转染等。虽然可能在原核或真核宿主细胞中表达本发明的抗体，但是优选在真核细胞中、最优选在哺乳动物宿主细胞表达抗体，因为所述真核细胞(特别是哺乳动物细胞)比原核细胞更适宜装配并分泌正确折叠的免疫活性抗体。
用于表达本发明的重组抗体的示例性哺乳动物宿主细胞包括与例如Kaufman和Sharp,J.Mol.Biol.,159:601-621(1982)所述的DHFR选择标记一起使用的中国仓鼠卵巢(CHO细胞)(包括dhfr-CHO细胞；描述于Urlaub和Chasin,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,77:4216-4220(1980))；NS0骨髓瘤细胞、COS细胞和SP2细胞。当将编码抗体基因的重组表达载体导入哺乳动物宿主细胞中时，通过将宿主细胞培养足以允许抗体在宿主细胞中表达，或更优选抗体分泌到宿主细胞生长于其中的培养基中一段时间，来产生抗体。可采用标准蛋白质纯化方法从培养基中回收抗体。
宿主细胞也可用来产生功能抗体片段，例如Fab片段或scFv分子。应了解，上述程序的变化在本发明的范围内。例如，可能需要将宿主细胞用编码本发明抗体的轻链和/或重链的功能片段的DNA转染。还可采用重组DNA技术以去除编码对与目标抗原结合不是必需的轻链和重链任一个或两个的DNA的一些或全部。本发明的抗体还包括从所述截短的DNA分子表达的分子。另外，可通过标准化学交联方法使本发明的抗体与第二抗体交联，产生其中一条重链和一条轻链是本发明的抗体(即结合Nav1.7)，另一个重链和轻链对NaV1.7以外的抗原有特异性的双功能抗体。
在用于本发明的抗体或其抗原结合部分的重组表达的优选系统中，通过磷酸钙介导的转染将编码抗体重链和抗体轻链两者的重组表达载体导入dhfr-CHO细胞中。在重组表达载体内，使抗体重链和轻链基因各自与CMV增强子/AdMLP启动子调节元件有效连接以驱动高水平的基因转录。重组表达载体还携带DHFR基因，其允许使用甲氨蝶呤选择/扩增，选出已被载体转染的CHO细胞。将选出的转化子宿主细胞培养以允许抗体重链和轻链表达，并从培养基中回收完整抗体。采用标准分子生物学技术以制备重组表达载体，转染宿主细胞，选择转化子，培养宿主细胞，并从培养基中回收抗体。更进一步地，本发明提供如下合成本发明的重组抗体的方法：通过在合适的培养基中培养本发明的宿主细胞直到合成本发明的重组抗体。所述方法可进一步包括从培养基中分离重组抗体。
制备单克隆抗体的方法包括制备能够产生具有所需特异性的抗体的永生细胞系。所述细胞系可从获自已免疫动物的脾细胞产生。可用NaV1.7或其片段和/或变体使动物免疫。例如，SEQIDNO:21-23、50和/或51的任一个可用来使动物免疫。用于使动物免疫的肽可包含编码人Fc(例如人抗体的片段可结晶区或尾区)的氨基酸。然后可通过例如与骨髓瘤细胞融合配偶体融合，使脾细胞永生化。可采用各种融合技术。例如，可将脾细胞和骨髓瘤细胞与非离子型去污剂混合几分钟，然后以低密度接种在支持杂交细胞但非骨髓瘤细胞生长的选择培养基中。一种这样的技术使用次黄嘌呤、氨基蝶呤、胸苷(HAT)选择。另一种技术包括电融合。在充足的时间后，常常约1-2周，观察到杂交细胞的集落。选出单个集落，测试其培养上清液针对多肽的结合活性。可使用具有高反应性和特异性的杂交瘤。
可从生长的杂交瘤集落的上清液中分离单克隆抗体。另外，可采用各种技术提高产量，例如将杂交瘤细胞系注射至合适的脊椎动物宿主(例如小鼠)的腹膜腔。然后可从腹水液体或血液中收获单克隆抗体。可通过常规技术，例如层析法、凝胶过滤、沉淀和提取，从抗体中除去污染物。亲和层析法是可用于纯化抗体的过程中的方法的一个实例。
蛋白水解酶木瓜蛋白酶优先切割IgG分子以得到几个片段，其中两个(F(ab)片段)各自包含包括完整抗原结合部位的共价异二聚体。酶即胃蛋白酶能够切割IgG分子以提供几个片段，包括F(ab’)2片段，其包含两个抗原结合部位。
Fv片段可通过IgM和很少IgG或IgA免疫球蛋白分子的优先蛋白水解切割产生。Fv片段可采用重组技术获得。Fv片段包括非共价VH::VL异二聚体，其包括保留天然抗体分子的大部分抗原识别和结合能力的抗原结合部位。
抗体、抗体片段或衍生物可包含分别插入重链和轻链构架(“FR”)组之间的重链和轻链互补决定区(“CDR”)组，所述构架组为CDR提供支持并界定CDR相对于彼此之间的空间关系。DR组可含有重链或轻链V区的3个超变区。从重链或轻链的N端开始，这些区分别命名为“CDR1”、“CDR2”和“CDR3”。因此，抗原结合部位可包括6个CDR，包含来自重链和轻链V区的CDR组。包含单个CDR的多肽(例如CDR1、CDR2或CDR3)可称为“分子识别单元”。抗原-抗体复合体的晶体学分析表明，CDR的氨基酸残基与结合的抗原形成广泛接触，其中最广泛的抗原接触是与重链CDR3一起。因此，分子识别单元可能主要负责抗原结合部位的特异性。一般而言，CDR残基直接且最充分地参与影响抗原结合。
可以采用产生或分离所需特异性的抗体的其它合适方法，包括但不限于采用本领域已知方法，从例如可获自例如CambridgeAntibodyTechnologies(Cambridgeshire,UK)、MorphoSys(Martinsreid/Planegg,Del.)、Biovation(Aberdeen,Scotland,UK)BioInvent(Lund,Sweden)等不同的商业厂商的肽或蛋白质文库(例如但不限于噬菌体、核糖体、寡核苷酸、RNA、cDNA、酵母等展示文库)中选择重组抗体的方法。参见美国专利号4,704,692、5,723,323、5,763,192、5,814,476、5,817,483、5,824,514、5,976,862。备选方法依赖于能够产生本领域已知和/或本文所述人抗体库的转基因动物的免疫(例如SCID小鼠，Nguyen等(1997)Microbiol.Immunol.41:901-907；Sandhu等(1996)Crit.Rev.Biotechnol.16:95-118；Eren等(1998)Immunol.93:154-161)。这类技术包括但不限于核糖体展示(Hanes等(1997)Proc.Natl.Acad.Sci.USA,94:4937-4942；Hanes等(1998)Proc.Natl.Acad.Sci.USA,95:14130-14135)；单细胞抗体生产技术(例如选择淋巴细胞抗体方法(“SLAM”)(美国专利号5,627,052，Wen等(1987)J.Immunol.17:887-892；Babcook等(1996)Proc.Natl.Acad.Sci.USA93:7843-7848)；凝胶微滴和流式细胞术(Powell等(1990)Biotechnol.8:333-337；OneCellSystems,(Cambridge,Mass).；Gray等(1995)J.Imm.Meth.182:155-163；Kenny等(1995)Bio/Technol.13:787-790)；B细胞选择(Steenbakkers等(1994)Molec.Biol.Reports19:125-134(1994))。
亲和力成熟抗体可通过本领域已知的多种方法的任一种产生。例如，参见Marks等，BioTechnology,10:779-783(1992)描述了通过VH和VL结构域改组的亲和力成熟。Barbas等,Proc.Nat.Acad.Sci.USA,91:3809-3813(1994)；Schier等,Gene,169:147-155(1995)；Yelton等,J.Immunol.,155:1994-2004(1995)；Jackson等,J.Immunol.,154(7):3310-3319(1995)；Hawkins等,J.Mol.Biol.,226:889-896(1992)描述了CDR和/或构架残基的随机诱变。在选择性诱变位置和在具有提高活性的氨基酸残基的接触或超突变位置处的选择性突变描述于美国专利号6,914,128B1。
还可将编码本发明抗体的多核苷酸递送至合适的宿主例如以提供在其乳中产生所述抗体的转基因动物或哺乳动物(例如山羊、牛、马、绵羊等)，来制备本发明的抗体变体。这些方法是已知的，描述于例如美国专利号5,827,690、5,849,992、4,873,316、5,849,992、5,994,616、5,565,362和5,304,489。
还可通过递送本发明的多核苷酸以提供在植物部分或在从其培养的细胞中产生所述抗体、特定部分或变体的转基因植物和培养的植物细胞(例如但不限于烟草、玉米和浮萍)，来制备抗体变体。例如，Cramer等(1999)Curr.Top.Microbol.Immunol.240:95-118和其中引述的参考文献，描述了例如使用诱导型启动子产生表达大量重组蛋白质的转基因烟草叶。转基因玉米已用于以大批生产水平表达哺乳动物蛋白质，其生物活性等同于在其它重组系统中产生或从天然来源纯化的活性。参见例如Hood等,Adv.Exp.Med.Biol.(1999)464:127-147和其中引述的参考文献。已从包括抗体片段(例如单链抗体(scFv))的转基因植物种子(包括烟草种子)和马铃薯块茎大量产生抗体变体。参见例如Conrad等(1998)PlantMol.Biol.38:101-109和其中引述的参考文献。因此，还可按照已知方法，使用转基因植物产生本发明的抗体。
例如，可通过加入外源序列以改进免疫原性或降低、提高或改进结合、亲和力、结合速率、解离速率、亲合力、特异性、半寿期或任何其它合适的特性，来产生抗体衍生物。一般保留非人或人CDR序列的部分或全部，而可变区和恒定区的非人序列用人或其它氨基酸置换。
小的抗体片段可以是具有两个抗原结合部位的双抗体，其中片段包含在同一多肽链(VHVL)中与轻链可变结构域(VL)连接的重链可变结构域(VH)。参见例如EP404,097、WO93/11161和Hollinger等(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:6444-6448。通过使用太短以致不允许在同一链中的2个结构域之间配对的接头，迫使结构域与另一链的互补结构域配对，产生两个抗原结合部位。另参见Chen等人的美国专利号6,632,926，其通过引用以其整体结合到本文中，并公开了具有插入亲本抗体超变区的一个或多个氨基酸且对靶抗原的结合亲和力是亲本抗体对抗原的结合亲和力的至少约2倍的抗体变体。
抗体可以是线性抗体。制备线性抗体的方法是本领域已知的，描述于Zapata等(1995)ProteinEng.8(10):1057-1062。简单地说，这些抗体包含一对串联Fd区段(VH-CH1-VH-CH1)，其形成一对抗原结合区。线性抗体可以是双特异性或单特异性的。
可通过已知方法，包括但不限于蛋白A纯化、硫酸铵或乙醇沉淀、酸提取、阴离子或阳离子交换层析法、磷酸纤维素层析法、疏水相互作用层析法、亲和层析法、羟磷灰石层析法和凝集素层析法，从重组细胞培养物中回收并纯化抗体。高效液相层析法(“HPLC”)也可用于纯化。
可检测地或治疗性地标记抗体可能是有用的。将抗体与这些作用剂缀合的方法是本领域已知的。仅出于说明目的，抗体可用可检测部分例如放射性原子、生色团、荧光团等标记。所述标记的抗体可在体内或在分离的试验样品中用于诊断技术。例如，还可将抗体与药剂(例如化学治疗药或毒素)缀合。它们可与细胞因子、配体、另一抗体连接。与抗体偶联以实现抗肿瘤作用的合适的作用剂包括细胞因子，例如白介素2(IL-2)和肿瘤坏死因子(TNF)；用于光动力疗法的光敏剂，包括四磺酸铝(III)酞菁、血卟啉和酞菁；放射性核素，例如碘-131(131I)、钇-90(90Y)、铋-212(212Bi)、铋-213(213Bi)、锝-99m(99mTc)、铼-186(186Re)和铼-188(188Re)；抗生素，例如多柔比星、阿霉素、柔红霉素、甲氨蝶呤、道诺霉素、新制癌菌素和卡铂；细菌、植物和其它毒素，例如白喉毒素、假单胞菌外毒素A、葡萄球菌肠毒素A、相思豆毒蛋白-A毒素、蓖麻毒蛋白A(去糖基化蓖麻毒蛋白A和天然蓖麻毒蛋白A)、TGF-α毒素、中华眼镜蛇(najanajaatra)的细胞毒素和多花白树毒蛋白(一种植物毒素)；来自植物、细菌和真菌的核糖体失活蛋白，例如局限曲菌素(一种由局限曲霉(Aspergillusrestrictus)产生的核糖体失活蛋白)、肥皂草蛋白(一种来自肥皂草(Saponariaofficinalis)的核糖体失活蛋白)和RNA酶；酪氨酸激酶抑制剂；ly207702(一种二氟化嘌呤核苷)；脂质体含有anticysticagents(例如反义寡核苷酸、编码毒素的质粒、甲氨蝶呤等)；和其它抗体或抗体片段，例如F(ab)。
抗体可通过重组或合成方法测序和复制。还可对其进一步测序直到编码它们的核苷酸的线性序列。因此，本发明提供单独或与上述载体(carrier、vector)或宿主细胞组合的编码本发明抗体的序列的这些多核苷酸。
下面更详细描述通过使用杂交瘤技术、选择淋巴细胞抗体方法(SLAM)、转基因动物和重组抗体文库的抗体生产。
(1)采用杂交瘤技术的抗Nav1.7单克隆抗体
单克隆抗体可采用本领域已知的各种技术包括使用杂交瘤、重组和噬菌体展示技术或其组合制备。例如，可采用杂交瘤技术，包括本领域已知的和例如Harlow等,Antibodies:ALaboratoryManual,第2版,(ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,1988)；Hammerling等,载于MonoclonalAntibodiesandT-CellHybridomas,(Elsevier,N.Y.,1981)中教导的技术，制备单克隆抗体。还要注意，本文所用术语“单克隆抗体”不限于通过杂交瘤技术产生的抗体。术语“单克隆抗体”是指来源于包括任何真核、原核或噬菌体克隆在内的单一克隆的抗体，而非其产生的方法。
在一个实施方案中，本发明提供产生单克隆抗体的方法以及通过所述方法产生的抗体。所述方法可包括培养分泌本发明的抗体的杂交瘤细胞，其中优选如下产生杂交瘤：通过将从用Nav1.7免疫的动物(例如大鼠或小鼠)分离的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，然后筛选产生于分泌能够结合本发明多肽的抗体的杂交瘤克隆的融合的杂交瘤。简单地说，可用Nav1.7抗原免疫大鼠。在一个优选的实施方案中，与刺激免疫应答的佐剂一起给予Nav1.7抗原。所述佐剂包括完全或不完全弗氏佐剂、RIBI(胞壁酰二肽)或ISCOM(免疫刺激复合体)。所述佐剂可通过在局部沉积物将其隔离来保护多肽免于快速分散，或它们可含有刺激宿主分泌对巨噬细胞和免疫系统的其它组分是趋化性的因子的物质。优选，如果给予多肽，则免疫接种方案可包括在延伸几周的时间内两次或更多次给予多肽；然而，也可采用单次给予多肽。
在动物用NaV1.7抗原免疫后，可从动物中获取抗体和/或产抗体细胞。通过给动物放血或处死动物，从动物中获得含有抗NaV1.7抗体的血清。可使用血清，因为它获自动物，免疫球蛋白流分可获自血清，或可从血清纯化抗NaV1.7抗体。以这种方式获得的血清或免疫球蛋白为多克隆，因此具有多种性质。
一旦检出免疫应答，例如在大鼠血清中检出对抗原Nav1.7有特异性的抗体，则收获大鼠脾，并分离脾细胞。然后通过众所周知的技术，使脾细胞与任何合适的骨髓瘤细胞(例如可获自美国典型培养物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection，ATCC，Manassas，Va.，US)的细胞系SP20的细胞)融合。通过有限稀释选择杂交瘤并克隆。然后通过本领域已知方法针对分泌能够结合Nav1.7的抗体的细胞，测定杂交瘤克隆。可通过用阳性杂交瘤克隆免疫大鼠，来产生通常含有高水平抗体的腹水液体。
在另一个实施方案中，可从已免疫动物制备产生抗体的永生化杂交瘤。在免疫后，处死动物，如本领域众所周知的一样，使脾B细胞与永生化骨髓瘤细胞融合。参见例如Harlow和Lane，同上。在一个优选的实施方案中，骨髓瘤细胞不分泌免疫球蛋白多肽(一种非分泌细胞系)。在融合和抗生素选择后，使用NaV1.7或其部分或表达NaV1.7的细胞，筛选杂交瘤。在一个优选的实施方案中，采用酶联免疫测定法(ELISA)或放射免疫测定法(RIA)，优选ELISA，进行初步筛选。PCT公布号WO00/37504中提供ELISA筛选的实例。
选出产生抗NaV1.7抗体的杂交瘤、克隆，针对所需特性(包括稳健的杂交瘤生长、高抗体产量和所需抗体特性)进一步筛选。可培养杂交瘤，并且在体内同基因动物中、在缺乏免疫系统的动物(例如裸小鼠)中或在体外细胞培养物中扩增。选择、克隆和扩增杂交瘤的方法是本领域普通技术人员所熟知的。
在一个优选的实施方案中，杂交瘤是大鼠杂交瘤。在另一个实施方案中，杂交瘤在非人、非大鼠物种例如小鼠、绵羊、猪、山羊、牛或马中产生。在又一个优选的实施方案中，杂交瘤是人杂交瘤，其中使人非分泌骨髓瘤与表达抗NaV1.7抗体的人细胞融合。
识别特定表位的抗体片段可通过已知技术产生。例如，可使用酶例如木瓜蛋白酶(以产生2个相同的Fab片段)或胃蛋白酶(以产生F(ab')2片段)，通过免疫球蛋白分子的蛋白水解性切割，产生本发明的Fab和F(ab')2片段。IgG分子的F(ab')2片段保留包括亲本IgG分子的两个轻链(含有可变轻链和恒定轻链区)、重链的CH1结构域和形成二硫键的铰链区的较大(“亲本”)IgG分子的两个抗原结合部位。因此，F(ab')2片段仍然能够像亲本IgG分子一样交联抗原分子。
(2)采用SLAM的抗Nav1.7单克隆抗体
本发明的另一个方面，采用本领域提及的方法，如美国专利号5,627,052、PCT公布号WO92/02551和Babcook等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,93:7843-7848(1996)中描述的选择淋巴细胞抗体方法(SLAM)，从单个分离的淋巴细胞产生重组抗体。在该方法中，采用抗原特异性溶血蚀斑试验，筛选分泌目标抗体的单细胞，例如来源于任一种已免疫动物的淋巴细胞，其中使用接头(例如生物素)使抗原NaV1.7、NaV1.7的亚基或其片段与绵羊红细胞偶联，并用来鉴定分泌对NaV1.7有特异性的抗体的单细胞。在鉴定目标抗体分泌细胞后，通过反转录酶-PCR(RT-PCR)从细胞中拯救重链和轻链可变区cDNA，然后可在合适的免疫球蛋白恒定区(例如人、牛、狗、马、猫或猪恒定区)的情况下，在哺乳动物宿主细胞(例如COS或CHO细胞)中表达这些可变区。然后，可对用来源于体内选择的淋巴细胞的扩增的免疫球蛋白序列转染的宿主细胞进行进一步体外分析和选择，例如通过淘选转染的细胞以分离表达抗NaV1.7抗体的细胞。可在体外，例如通过体外亲和力成熟方法，对扩增的免疫球蛋白序列进一步操作。参见例如PCT公布号WO97/29131和PCT公布号WO00/56772。
(3)使用转基因动物的抗Nav1.7单克隆抗体
在本发明的另一个实施方案中，通过用NaV1.7抗原免疫包含人免疫球蛋白基因座的一些或全部的非人动物来产生抗体。在一个实施方案中，非人动物是XENOMOUSE?转基因小鼠，一种包含人免疫球蛋白基因座的大的片段且在小鼠抗体产生中有缺陷的工程改造小鼠品系。参见例如Green等,NatureGenetics,7:13-21(1994)和美国专利号5,916,771、5,939,598、5,985,615、5,998,209、6,075,181、6,091,001、6,114,598和6,130,364。另参见PCT公布号WO91/10741、WO94/02602、WO96/34096、WO96/33735、WO98/16654、WO98/24893、WO98/50433、WO99/45031、WO99/53049、WO00/09560和WO00/37504。XENOMOUSE?转基因小鼠产生成人一样的人的完全人抗体库，并形成抗原特异性人单克隆抗体。通过引入兆碱基大小的人重链基因座和x轻链基因座的种系构型YAC片段，XENOMOUSE?转基因小鼠含有约80%的人抗体库。参见Mendez等,NatureGenetics,15:146-156(1997),GreenandJakobovits,J.Exp.Med.,188:483-495(1998)，其公开内容通过引用结合到本文中。
(4)使用重组抗体文库的抗Nav1.7单克隆抗体
也可采用体外方法制备本发明的抗体，其中筛选抗体文库以鉴定具有所需NaV1.7-结合特异性的抗体。筛选重组抗体文库的方法是本领域众所周知的，包括描述于以下的方法：例如美国专利号5,223,409(Ladner等)；PCT公布号WO92/18619(Kang等)；PCT公布号WO91/17271(Dower等)；PCT公布号WO92/20791(Winter等)；PCT公布号WO92/15679(Markland等)；PCT公布号WO93/01288(Breitling等)；PCT公布号WO92/01047(McCafferty等)；PCT公布号WO92/09690(Garrard等)；Fuchs等,Bio/Technology,9:1369-1372(1991)；Hay等,Hum.Antibod.Hybridomas,3:81-85(1992)；Huse等,Science,246:1275-1281(1989)；McCafferty等,Nature,348:552-554(1990)；Griffiths等,EMBOJ.,12:725-734(1993)；Hawkins等,J.Mol.Biol.,226:889-896(1992)；Clackson等,Nature,352:624-628(1991)；Gram等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:3576-3580(1992)；Garrard等,Bio/Technology,9:1373-1377(1991)；Hoogenboom等,Nucl.AcidsRes.,19:4133-4137(1991)；Barbas等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,88:7978-7982(1991)；美国专利申请公布号2003/0186374和PCT公布号WO97/29131，其每一个的内容通过引用结合到本文中。
重组抗体文库可获自用Nav1.7或NaV1.7的一部分免疫的受试者。或者，重组抗体文库可来自幼稚受试者，即未用NaV1.7免疫的受试者，例如来自未用人NaV1.7免疫的人受试者的人抗体文库。如下选择本发明的抗体：通达用包含人NaV1.7的肽筛选重组抗体文库，从而选出识别NaV1.7的那些抗体。用于进行所述筛选和选择的方法是本领域众所周知的，例如描述于前面段落的参考文献。为了选择对Nav1.7具有特殊结合亲和力的本发明抗体，例如以特定Koff速率常数自NaV1.7解离的抗体，可采用本领域已知的表面等离子共振方法选择具有所需Koff速率常数的抗体。为了选择对NaV1.7具有特定中和活性的本发明抗体，例如具有特定IC50的本发明抗体，可采用本领域已知的用于评价NaV1.7活性抑制的标准方法。
一方面，本发明涉及结合人NaV1.7的分离的抗体或其抗原结合部分。优选，抗体是中和抗体。在不同的实施方案中，抗体是重组抗体或单克隆抗体。
例如，本发明的抗体也可采用本领域已知的各种噬菌体展示方法产生。在噬菌体展示方法中，使功能抗体结构域在携带其编码多核苷酸序列的噬菌体颗粒的表面展示。所述噬菌体可用来展示自库或组合抗体文库(例如人或鼠或牛、狗、马、猫或猪)表达的抗原结合结构域。可用抗原，例如使用标记的抗原或结合或俘获至固体表面或珠粒的抗原，选择或鉴定表达结合目标抗原的抗原结合结构域的噬菌体。用于这些方法的噬菌体通常是丝状噬菌体，其包括自含与噬菌体基因III或基因VIII蛋白重组融合的Fab、Fv或二硫键稳定的Fv抗体结构域的噬菌体表达的fd和M13结合结构域。可用于制备本发明抗体的噬菌体展示方法的实例包括公开于以下的方法：Brinkmann等,J.Immunol.Methods,182:41-50(1995)；Ames等,J.Immunol.Methods,184:177-186(1995)；Kettleborough等,Eur.J.Immunol.,24:952-958(1994)；Persic等,Gene,187:9-18(1997)；Burton等,AdvancesinImmunology,57:191-280(1994)；PCT公布号WO92/01047、PCT公布号WO90/02809、WO91/10737、WO92/01047、WO92/18619、WO93/11236、WO95/15982、WO95/20401和美国专利号5,698,426、5,223,409、5,403,484、5,580,717、5,427,908、5,750,753、5,821,047、5,571,698、5,427,908、5,516,637、5,780,225、5,658,727、5,733,743和5,969,108。
如上述参考文献所述，在噬菌体选择后，可分离来自噬菌体的抗体编码区，并用来产生完整抗体，包括人抗体或任何其它所需抗原结合片段，并按例如下文详述，在任何所需宿主(包括哺乳动物细胞、昆虫细胞、植物细胞、酵母和细菌)中表达。例如，还可采用本领域已知方法，例如公开于以下的方法，采用重组产生Fab、Fab'和F(ab')2片段的技术：PCT公布号WO92/22324；Mullinax等,BioTechniques,12(6):864-869(1992)；Sawai等,Am.J.Reprod.Immunol.,34:26-34(1995)；以及Better等,Science,240:1041-1043(1988)。可用来产生单链Fv和抗体的技术的实例包括描述于以下技术：美国专利号4,946,778和5,258,498；Huston等,MethodsinEnzymology,203:46-88(1991)；Shu等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:7995-7999(1993)；以及Skerra等,Science,240:1038-1041(1988)。
代替通过噬菌体展示筛选重组抗体文库，本领域已知的用于筛选大的组合文库的其它方法可用于鉴定本发明的抗体。备选表达系统的一个类型是其中重组抗体文库作为RNA-蛋白质融合物表达的类型，如PCT公布号WO98/31700(Szostak和Roberts)和Roberts和Szostak,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,94:12297-12302(1997)中所述。在这个系统中，通过体外翻译在其3'端携带嘌罗霉素(一种肽基接纳体抗生素)的合成mRNA，在mRNA和它编码的肽或蛋白质之间产生共价融合物。因此，可根据所编码的肽或蛋白质(例如抗体或其部分)的性质，例如抗体或其部分与双重特异性抗原的结合，从mRNA的复杂混合物(例如组合文库)中富集特定的mRNA。从所述文库筛选中回收的编码抗体或其部分的核酸序列可通过上述重组方法(例如在哺乳动物宿主细胞中)表达，此外，可通过其中已将突变引入最初选择的序列中的mRNA-肽融合物的额外几轮筛选或通过如上所述的用于重组抗体的体外亲和力成熟的其它方法，进行进一步的亲和力成熟处理。该方法的优选实例是PROfusion展示技术。
在另一种方法中，本发明的抗体还可采用本领域已知的酵母展示方法产生。在酵母展示方法中，采用遗传方法将抗体结构域与酵母细胞壁连接，并使其在酵母表面展示。具体地讲，可利用所述酵母展示从库或组合抗体文库(例如人或鼠或牛、犬、马、猫或猪)表达的抗原结合结构域。可用于制备本发明抗体的酵母展示方法的实例包括公开于通过引用结合到本文中的美国专利号6,699,658(Wittrup等)的方法。
d.重组Nav1.7抗体的产生
本发明的抗体可通过本领域已知的多种技术的任一种产生。例如，自宿主细胞表达，其中通过标准技术将编码重链和轻链的表达载体转染至宿主细胞中。术语“转染”的各种形式旨在包括常用于将外源DNA导入原核或真核宿主细胞的各种技术，例如电穿孔、磷酸钙沉淀、DEAE-葡聚糖转染等。虽然可在原核或真核宿主细胞中表达本发明的抗体，但优选在真核细胞、最优选在哺乳动物宿主细胞中的抗体表达，因为所述真核细胞(特别是哺乳动物细胞)比原核细胞更可能装配并分泌正确折叠的和有免疫活性抗体。
用于表达本发明的重组抗体的示例性哺乳动物宿主细胞包括与例如Kaufman和Sharp,J.Mol.Biol.,159:601-621(1982)所述DHFR选择标记一起使用的中国仓鼠卵巢(CHO细胞)(包括dhfr-CHO细胞；描述于Urlaub和Chasin,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,77:4216-4220(1980))；NS0骨髓瘤细胞、COS细胞和SP2细胞。当将编码抗体基因的重组表达载体导入哺乳动物宿主细胞中时，通过将宿主细胞培养足以允许抗体在宿主细胞中表达，或更优选抗体分泌到宿主细胞生长于其中的培养基中一段时间，来产生抗体。可采用标准蛋白质纯化方法从培养基中回收抗体。
宿主细胞还可用来产生功能抗体片段，例如Fab片段或scFv分子。应了解，上述程序的变化在本发明的范围内。例如，可能需要将宿主细胞用编码本发明抗体的轻链和/或重链的功能片段的DNA转染。还可采用重组DNA技术以去除编码对与目标抗原结合不是必需的轻链和重链任一个或两个的DNA的一些或全部。本发明的抗体还包括从所述截短的DNA分子表达的分子。另外，可通过标准化学交联方法使本发明的抗体与第二抗体交联，产生其中一条重链和一条轻链是本发明的抗体(即结合Nav1.7)，另一个重链和轻链是对NaV1.7以外的抗原有特异性的双功能抗体。
在用于本发明的抗体或其抗原结合部分的重组表达的优选系统中，通过磷酸钙介导的转染将编码抗体重链和抗体轻链两者的重组表达载体导入dhfr-CHO细胞中。在重组表达载体内，使抗体重链和轻链基因各自与CMV增强子/AdMLP启动子调节元件有效连接以驱动高水平的基因转录。重组表达载体还携带DHFR基因，其允许使用甲氨蝶呤选择/扩增，选出已被载体转染的CHO细胞。将选出的转化子宿主细胞培养以允许抗体重链和轻链表达，并从培养基中回收完整抗体。采用标准分子生物学技术以制备重组表达载体，转染宿主细胞，选择转化子，培养宿主细胞，并从培养基中回收抗体。更进一步地，本发明提供如下合成本发明的重组抗体的方法：通过在合适的培养基中培养本发明的宿主细胞直到合成本发明的重组抗体。所述方法可进一步包括从培养基中分离重组抗体。
(1)人源化抗体
人源化抗体可以是与目标抗原免疫特异性结合且包含主要具有人抗体的氨基酸序列的构架(FR)区和主要具有非人抗体的氨基酸序列的互补决定区(CDR)的抗体或其变体、衍生物、类似物或部分。人源化抗体可以是来自结合所需抗原、具有来自非人物种的一个或多个互补决定区(CDR)和来自人免疫球蛋白分子的构架区的非人物种抗体。
本文所用术语“基本上”在CDR的情况下是指具有与非人抗体CDR的氨基酸序列有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%同一性的氨基酸序列的CDR。人源化抗体包含至少一个、通常两个可变结构域(Fab、Fab'、F(ab')2、FabC、Fv)的基本全部，其中全部或基本全部的CDR区相当于非人免疫球蛋白(即供体抗体)的CDR区，全部或基本全部的构架区是人免疫球蛋白共有序列的构架区。按照一个方面，人源化抗体还包含免疫球蛋白恒定区(Fc)、通常人免疫球蛋白的恒定区的至少一部分。在一些实施方案中，人源化抗体含有轻链以及至少重链的可变结构域两者。该抗体还可包括重链的CH1、铰链CH2、CH3和CH4区。在一些实施方案中，人源化抗体只含人源化轻链。在一些实施方案中，人源化抗体只含人源化重链。在具体的实施方案中，人源化抗体只含轻链和/或重链的人源化可变结构域。
人源化抗体可选自免疫球蛋白的任何类别，包括IgM、IgG、IgD、IgA和IgE和任何同种型，包括而不限于IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。人源化抗体可包含来自一个以上类别或同种型的序列，可采用本领域众所周知的技术，选择特定的恒定结构域使所需效应子功能优化。
人源化抗体的构架和CDR区不必与亲本序列精确一致，例如，供体抗体CDR或共有构架可通过至少一个氨基酸残基的取代、插入和/或缺失而诱变，使得该位点的CDR或构架残基与供体抗体或共有构架不一致。在一个实施方案中，然而，所述突变将不是广泛的。通常，至少90%、至少95%、至少98%或至少99%的人源化抗体残基应与亲本FR和CDR序列的残基一致。本文所用术语“共有构架”是指共有免疫球蛋白序列中的构架区。本文所用术语“共有免疫球蛋白序列”是指由相关免疫球蛋白序列家族中最频繁出现的氨基酸(或核苷酸)形成的序列(参见例如Winnaker,FromGenestoClones(Verlagsgesellschaft,Weinheim,Germany1987))。在免疫球蛋白家族中，共有序列中的每个位置被在家族中在该位置上最频繁出现的氨基酸占据。如果2个氨基酸同等频繁地出现，则任一个均包括在共有序列中。
可设计人源化抗体使得对啮齿动物抗人抗体的不良免疫应答减到最小，所述不良免疫应答限制了这些部分在人类接受者中的治疗应用的待续时间和有效性。人源化抗体可具有引入其中的来自是非人来源的一个或多个氨基酸残基。这些非人残基常称为“输入”残基，其通常取自可变结构域。可通过用超变区序列取代人抗体的相应序列来进行人源化。因此，所述“人源化”抗体是其中基本上少于完整人可变结构域被来自非人物种的相应序列取代的嵌合抗体。例如参见美国专利号4,816,567，其内容通过引用结合到本文中。人源化抗体可以是其中一些超变区残基和可能一些FR残基被来自啮齿动物抗体中的类似位点的残基取代的人抗体。本发明抗体的人源化或工程改造可采用任何已知方法进行，例如但不限于描述于以下的方法：美国专利号5,723,323、5,976,862、5,824,514、5,817,483、5,814,476、5,763,192、5,723,323、5,766,886、5,714,352、6,204,023、6,180,370、5,693,762、5,530,101、5,585,089、5,225,539和4,816,567。
人源化抗体可对NaV1.7保持高亲和力和其它有利的生物学性质性质。可采用亲本和人源化序列的三维模型，通过亲本序列和各种概念人源化产物的分析过程，制备人源化抗体。三维免疫球蛋白模型是市购可获得的。可获得说明和显示所选的候选免疫球蛋白序列可能的三维构象结构的计算机程序。检查这些显示允许分析残基在候选免疫球蛋白序列的功能中的可能作用，即分析影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力的残基。这样，可从接受体和输入序列选择并合并FR残基，使得达到所需的抗体特性，例如对NaV1.7的亲和力提高。一般而言，超变区残基可直接和最充分地参与影响抗原结合。
作为人源化的备选，可产生人抗体(在本文亦称为“完全人抗体”)。例如，可通过PROfusion和/或酵母相关技术从文库中分离人抗体。还可在内源免疫球蛋白产生不存在时产生能够在免疫时产生整个人抗体库的转基因动物(例如小鼠)。例如，嵌合和种系突变型小鼠中抗体重链连接区(JH)基因的纯合性缺失导致内源抗体生产的完全抑制。在抗原攻击时，在这类种系突变型小鼠中人种系免疫球蛋白基因阵列的转移将导致产生人抗体。人源化或完全人抗体可按照描述于美国专利号5,770,429、5,833,985、5,837,243、5,922,845、6,017,517、6,096,311、6,111,166、6,270,765、6,303,755、6,365,116、6,410,690、6,682,928和6,984,720的方法制备，其每一个的内容均通过引用结合到本文中。
(2)牛源化抗体
牛源化抗体可以是与目标抗原免疫特异性结合且包含主要具有牛抗体的氨基酸序列的构架(FR)区和主要具有非牛抗体的氨基酸序列的互补决定区(CDR)的抗体或其变体、衍生物、类似物或部分。牛源化抗体可以是来自结合所需抗原、具有来自非牛物种的一个或多个互补决定区(CDR)和来自牛免疫球蛋白分子的构架区的非牛物种抗体。
本文所用术语“基本上”在CDR的情况下是指具有与非牛抗体CDR的氨基酸序列有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%同一性的氨基酸序列的CDR。牛源化抗体包含至少一个、通常两个可变结构域(Fab、Fab'、F(ab')2、FabC、Fv)的基本全部，其中全部或基本全部的CDR区相当于非牛免疫球蛋白(即供体抗体)的CDR区，全部或基本全部的构架区是牛免疫球蛋白共有序列的构架区。按照一个方面，牛源化抗体还包含免疫球蛋白恒定区(Fc)、通常牛免疫球蛋白的恒定区的至少一部分。在一些实施方案中，牛源化抗体含有轻链以及至少重链的可变结构域两者。该抗体还可包括重链的CH1、铰链CH2、CH3和CH4区。在一些实施方案中，牛源化抗体只含有牛源化轻链。在一些实施方案中，牛源化抗体只含有牛源化重链。在具体的实施方案中，牛源化抗体只含有轻链和/或重链的牛源化可变结构域。
牛源化抗体可选自免疫球蛋白的任何类别和任何同种型。牛源化抗体可包含来自一个以上类别或同种型的序列，可采用本领域众所周知的技术，选择特定的恒定结构域使所需效应子功能优化。
牛源化抗体的构架区和CDR区不必与亲本序列精确一致，例如，供体抗体CDR或共有构架可通过至少一个氨基酸残基的取代、插入和/或缺失而诱变，使得该位点的CDR或构架残基与供体抗体或共有构架不一致。然而，在一个实施方案中，所述突变将不是广泛的。通常，至少90%、至少95%、至少98%或至少99%的牛源化抗体残基应与亲本FR和CDR序列的残基一致。本文所用术语“共有构架”是指共有免疫球蛋白序列中的构架区。本文所用术语“共有免疫球蛋白序列”是指由相关免疫球蛋白序列家族中最频繁出现的氨基酸(或核苷酸)形成的序列(参见例如Winnaker,FromGenestoClones(Verlagsgesellschaft,Weinheim,Germany1987))。在免疫球蛋白家族中，共有序列中的每个位置被在家族中在该位置上最频繁出现的氨基酸占据。如果2个氨基酸同等频繁地出现，则任一个均包括在共有序列中。
可设计牛源化抗体使得对啮齿动物抗牛抗体的不良免疫应答减到最小，所述不良免疫应答限制了这些部分在牛接受者中的治疗应用的待续时间和有效性。牛源化抗体可具有引入其中的来自是非牛来源的一个或多个氨基酸残基。这些非牛残基常称为“输入”残基，其通常取自可变结构域。牛源化可通过用超变区序列取代牛抗体的相应序列来进行。因此，所述“牛源化”抗体是其中基本上小于完整牛可变结构域被来自非牛物种的相应序列取代的嵌合抗体。牛源化抗体可以是其中一些超变区残基和可能一些FR残基被来自啮齿动物抗体中的类似位点的残基取代的牛抗体。
牛源化抗体可对NaV1.7保持高亲和力和其它有利的生物学性质性质。可采用亲本和牛源化序列的三维模型，通过亲本序列和各种概念牛源化产物的分析过程，制备牛源化抗体。三维免疫球蛋白模型是市购可获得的。可获得说明和显示所选的候选免疫球蛋白序列可能的三维构象结构的计算机程序。检查这些显示允许分析残基在候选免疫球蛋白序列的功能中的可能作用，即分析影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力的残基。这样，可从接受体和输入序列选择并合并FR残基，使得实现所需的抗体特性，例如对NaV1.7的亲和力提高。一般而言，超变区残基可直接和最充分地参与影响抗原结合。
(3)犬源化抗体
犬源化抗体可以是与目标抗原免疫特异性结合并包含主要具有犬抗体的氨基酸序列的构架(FR)区和主要具有非犬抗体的氨基酸序列的互补决定区(CDR)的抗体或其变体、衍生物、类似物或部分。犬源化抗体可以是来自结合所需抗原、具有来自非犬物种的一个或多个互补决定区(CDR)和来自犬免疫球蛋白分子的构架区的非犬物种抗体。
本文所用术语“基本上”在CDR的情况下是指具有与非犬抗体CDR的氨基酸序列有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%同一性的氨基酸序列的CDR。犬源化抗体包含至少一个、通常两个可变结构域(Fab、Fab'、F(ab')2、FabC、Fv)的基本全部，其中全部或基本全部的CDR区相当于非犬免疫球蛋白(即供体抗体)的CDR区，全部或基本全部的构架区是犬免疫球蛋白共有序列的构架区。按照一个方面，犬源化抗体还包含免疫球蛋白恒定区(Fc)、通常是犬免疫球蛋白的免疫球蛋白恒定区的的至少一部分。在一些实施方案中，犬源化抗体含有轻链以及至少重链的可变结构域两者。该抗体还可包括重链的CH1、铰链CH2、CH3和CH4区。在一些实施方案中，犬源化抗体只含有犬源化轻链。在一些实施方案中，犬源化抗体只含有犬源化重链。在具体的实施方案中，犬源化抗体只含有轻和/或重链链的犬源化可变结构域。
犬源化抗体可选自免疫球蛋白的任何类别和任何同种型。犬源化抗体可包含来自一个以上类别或同种型的序列，可采用本领域众所周知的技术，选择特定的恒定结构域使所需效应子功能优化。
犬源化抗体的构架区和CDR区不必与亲本序列精确一致，例如，供体抗体CDR或共有构架可通过至少一个氨基酸残基的取代、插入和/或缺失而诱变，使得该位点的CDR或构架残基与供体抗体或共有构架不一致。然而，在一个实施方案中，所述突变将不是广泛的。通常，至少90%、至少95%、至少98%或至少99%的犬源化抗体残基应与亲本FR和CDR序列的残基一致。本文所用术语“共有构架”是指共有免疫球蛋白序列中的构架区。本文所用术语“共有免疫球蛋白序列”是指由相关免疫球蛋白序列家族中最频繁出现的氨基酸(或核苷酸)形成的序列(参见例如Winnaker,FromGenestoClones(Verlagsgesellschaft,Weinheim,Germany1987))。在免疫球蛋白家族中，共有序列中的每个位置被在家族中在该位置上最频繁出现的氨基酸占据。如果2个氨基酸同等频繁地出现，则任一个均包括在共有序列中。
可设计犬源化抗体使得对啮齿动物抗犬抗体的不良免疫应答减到最小，所述不良免疫应答限制了这些部分在犬接受者中的治疗应用的待续时间和有效性。犬源化抗体可具有引入其中的来自是非犬来源的一个或多个氨基酸残基。这些非犬残基常称为“输入”残基，其通常取自可变结构域。犬源化可通过用超变区序列取代犬抗体的相应序列来进行。因此，所述“犬源化”抗体是其中基本上小于完整犬可变结构域被来自非犬物种的相应序列取代的嵌合抗体。犬源化抗体可以是其中一些超变区残基和可能一些FR残基被来自啮齿动物抗体中的类似位点的残基取代的犬抗体。
犬源化抗体可对NaV1.7保持高亲和力和其它有利的生物学性质性质。可采用亲本和犬源化序列的三维模型，通过亲本序列和各种概念犬源化产物的分析过程，制备犬源化抗体。三维免疫球蛋白模型是市购可获得的。可获得说明和显示所选的候选免疫球蛋白序列可能的三维构象结构的计算机程序。检查这些显示允许分析残基在候选免疫球蛋白序列的功能中的可能作用，即分析影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力的残基。这样，可从接受体和输入序列选择并合并FR残基，使得实现所需的抗体特性，例如对NaV1.7的亲和力提高。一般而言，超变区残基可直接和最充分地参与影响抗原结合。
(4)马源化抗体
马源化抗体可以是与目标抗原免疫特异性结合并包含主要具有马抗体的氨基酸序列的构架(FR)区和主要具有非马抗体的氨基酸序列的互补决定区(CDR)的抗体或其变体、衍生物、类似物或部分。马源化抗体可以是来自结合所需抗原、具有来自非马物种的一个或多个互补决定区(CDR)和来自马免疫球蛋白分子的构架区的非马物种抗体。
本文所用术语“基本上”在CDR的情况下是指具有与非马抗体CDR的氨基酸序列有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%同一性的氨基酸序列的CDR。马源化抗体包含至少一个、通常两个可变结构域(Fab、Fab'、F(ab')2、FabC、Fv)的基本全部，其中全部或基本全部的CDR区相当于非马免疫球蛋白(即供体抗体)的CDR区，全部或基本全部的构架区是马免疫球蛋白共有序列的构架区。按照一个方面，马源化抗体还包含免疫球蛋白恒定区(Fc)、通常是马免疫球蛋白的恒定区的至少一部分。在一些实施方案中，马源化抗体含有轻链以及至少重链的可变结构域两者。该抗体还可包括重链的CH1、铰链CH2、CH3和CH4区。在一些实施方案中，马源化抗体只含有马源化轻链。在一些实施方案中，马源化抗体只含有马源化重链。在具体的实施方案中，马源化抗体只含有轻链和/或重链的马源化可变结构域。
马源化抗体可选自免疫球蛋白的任何类别和任何同种型。马源化抗体可包含来自一个以上类别或同种型的序列，可采用本领域众所周知的技术，选择特定的恒定结构域使所需效应子功能优化。
马源化抗体的构架区和CDR区不必与亲本序列精确一致，例如，供体抗体CDR或共有构架可通过至少一个氨基酸残基的取代、插入和/或缺失而诱变，使得该位点的CDR或构架残基与供体抗体或共有构架不一致。然而，在一个实施方案中，所述突变将不是广泛的。通常，至少90%、至少95%、至少98%或至少99%的马源化抗体残基应与亲本FR和CDR序列的残基一致。本文所用术语“共有构架”是指共有免疫球蛋白序列中的构架区。本文所用术语“共有免疫球蛋白序列”是指由相关免疫球蛋白序列家族中最频繁出现的氨基酸(或核苷酸)形成的序列(参见例如Winnaker,FromGenestoClones(Verlagsgesellschaft,Weinheim,Germany1987))。在免疫球蛋白家族中，共有序列中的每个位置被在家族中在该位置上最频繁出现的氨基酸占据。如果2个氨基酸同等频繁地出现，则任一个均包括在共有序列中。
可设计马源化抗体使得对啮齿动物抗马抗体的不良免疫应答减到最小，所述不良免疫应答限制了这些部分在马接受者中的治疗应用的待续时间和有效性。马源化抗体可具有引入其中的来自是非马来源的一个或多个氨基酸残基。这些非马残基常称为“输入”残基，其通常取自可变结构域。人源化可通过用超变区序列取代马抗体的相应序列来进行。因此，所述“马源化”抗体是其中基本上小于完整马可变结构域被来自非马物种的相应序列取代的嵌合抗体。马源化抗体可以是其中一些超变区残基和可能一些FR残基被来自啮齿动物抗体中的类似位点的残基取代的马抗体。
马源化抗体可对NaV1.7保持高亲和力和其它有利的生物学性质性质。可采用的三维模型亲本和马源化序列，通过亲本序列和各种概念马源化产物的分析过程，制备马源化抗体。三维免疫球蛋白模型是市购可获得的。可获得说明和显示所选的候选免疫球蛋白序列可能的三维构象结构的计算机程序。检查这些显示允许分析残基在候选免疫球蛋白序列的功能中的可能作用，即分析影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力的残基。这样，可从接受体和输入序列选择并合并FR残基，使得实现所需的抗体特性，例如对NaV1.7的亲和力提高。一般而言，超变区残基可直接和最充分地参与影响抗原结合。
(5)猫源化抗体
猫源化抗体可以是与目标抗原免疫特异性结合并包含主要具有猫抗体的氨基酸序列的构架(FR)区和主要具有非猫抗体的氨基酸序列的互补决定区(CDR)的抗体或其变体、衍生物、类似物或部分。猫源化抗体可以是来自结合所需抗原、具有来自非猫物种的一个或多个互补决定区(CDR)和来自猫免疫球蛋白分子的构架区的非猫物种抗体。
本文所用术语“基本上”在CDR的情况下是指与非猫抗体CDR的氨基酸序列有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%同一性的氨基酸序列的CDR。猫源化抗体包含至少一个、通常两个可变结构域(Fab、Fab'、F(ab')2、FabC、Fv)的基本全部，其中全部或基本全部的CDR区相当于非猫免疫球蛋白(即供体抗体)的CDR区，全部或基本全部的构架区是猫免疫球蛋白共有序列的构架区。按照一个方面，人源化抗体还包含免疫球蛋白恒定区(Fc)，通常猫免疫球蛋白的恒定区的至少一部分。在一些实施方案中，猫源化抗体含有轻链以及至少重链的可变结构域两者。该抗体还可包括重链的CH1、铰链CH2、CH3和CH4区。在一些实施方案中，猫源化抗体只含有猫源化轻链。在一些实施方案中，猫源化抗体只含有猫源化重链。在具体的实施方案中，猫源化抗体只含有轻链和/或重链的猫源化可变结构域。
猫源化抗体可选自免疫球蛋白的任何类别和任何同种型。猫源化抗体可包含来自一个以上类别或同种型的序列，可采用本领域众所周知的技术，选择特定的恒定结构域使所需效应子功能优化。
猫源化抗体的构架区和CDR区不必与亲本序列精确一致，例如，供体抗体CDR或共有构架可通过至少一个氨基酸残基的取代、插入和/或缺失而诱变，使得该位点的CDR或构架残基与供体抗体或共有构架不一致。然而，在一个实施方案中，所述突变将不是广泛的。通常，至少90%、至少95%、至少98%或至少99%的猫源化抗体残基应与亲本FR和CDR序列的残基一致。本文所用术语“共有构架”是指共有免疫球蛋白序列中的构架区。本文所用术语“共有免疫球蛋白序列”是指由相关免疫球蛋白序列家族中最频繁出现的氨基酸(或核苷酸)形成的序列(参见例如Winnaker,FromGenestoClones(Verlagsgesellschaft,Weinheim,Germany1987))。在免疫球蛋白家族中，共有序列中的每个位置被在家族中在该位置上最频繁出现的氨基酸占据。如果2个氨基酸同等频繁地出现，则任一个均包括在共有序列中。
可设计猫源化抗体使得对啮齿动物抗猫抗体的不良免疫应答减到最小，所述不良免疫应答这限制了这些部分在猫接受者中的治疗应用的待续时间和有效性。猫源化抗体可具有引入其中的来自是非猫来源的一个或多个氨基酸残基。这些非猫残基常称为“输入”残基，其通常取自可变结构域。猫源化可通过用超变区序列取代猫抗体的相应序列来进行。因此，所述“猫源化”抗体是其中基本上小于完整猫可变结构域被来自非猫物种的相应序列取代的嵌合抗体。猫源化抗体可以是其中一些超变区残基和可能一些FR残基被来自啮齿动物抗体中的类似位点的残基取代的猫抗体。
猫源化抗体可对NaV1.7保持高亲和力和其它有利的生物学性质性质。可采用的三维模型亲本和猫源化序列，通过亲本序列和各种概念猫源化产物的分析过程，制备猫源化抗体。三维免疫球蛋白模型是市购可获得的。可获得说明和显示所选的候选免疫球蛋白序列可能的三维构象结构的计算机程序。检查这些显示允许分析残基在候选免疫球蛋白序列的功能中的可能作用，即分析影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力的残基。这样，可从接受体和输入序列选择并合并FR残基，使得实现所需的抗体特性，例如对NaV1.7的亲和力提高。一般而言，超变区残基可直接和最充分地参与影响抗原结合。
(6)猪源化抗体
猪源化抗体可以是与目标抗原免疫特异性结合并包含主要具有猪抗体的氨基酸序列的构架(FR)区和主要具有非猪抗体的氨基酸序列的互补决定区(CDR)的抗体或其变体、衍生物、类似物或部分。猪源化抗体可以是来自结合所需抗原、具有来自非猪物种的一个或多个互补决定区(CDR)和来自猪免疫球蛋白分子的构架区的非猪物种抗体。
本文所用术语“基本上”在CDR的情况下是指具有与非猪抗体CDR的氨基酸序列有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%同一性的氨基酸序列的CDR。猪源化抗体包含至少一个、通常两个可变结构域(Fab、Fab'、F(ab')2、FabC、Fv)的基本全部，其中全部或基本全部的CDR区相当于非猪免疫球蛋白(即供体抗体)的CDR区，全部或基本全部的构架区是猪免疫球蛋白共有序列的构架区。按照一个方面，猪源化抗体还包含免疫球蛋白恒定区(Fc)，通常是猪免疫球蛋白的恒定区的至少一部分。在一些实施方案中，猪源化抗体含有轻链以及至少重链的可变结构域两者。该抗体还可包括重链的CH1、铰链CH2、CH3和CH4区。在一些实施方案中，猪源化抗体只含有猪源化轻链。在一些实施方案中，猪源化抗体只含有猪源化重链。在具体的实施方案中，猪源化抗体只含有轻链和/或重链的猪源化可变结构域。
猪源化抗体可选自免疫球蛋白的任何类别和任何同种型。猪源化抗体可包含来自一个以上类别或同种型的序列，可采用本领域众所周知的技术，选择特定的恒定结构域使所需效应子功能优化。
猪源化抗体的构架区和CDR区不必与亲本序列精确一致，例如，供体抗体CDR或共有构架可通过至少一个氨基酸残基的取代、插入和/或缺失而诱变，使得该位点的CDR或构架残基与供体抗体或共有构架不一致。然而，在一个实施方案中，所述突变将不是广泛的。通常，至少90%、至少95%、至少98%或至少99%的猪源化抗体残基应与亲本FR和CDR序列的残基一致。本文所用术语“共有构架”是指共有免疫球蛋白序列中的构架区。本文所用术语“共有免疫球蛋白序列”是指由相关免疫球蛋白序列家族中最频繁出现的氨基酸(或核苷酸)形成的序列(参见例如Winnaker,FromGenestoClones(Verlagsgesellschaft,Weinheim,Germany1987))。在免疫球蛋白家族中，共有序列中的每个位置被在家族中在该位置上最频繁出现的氨基酸占据。如果2个氨基酸同等频繁地出现，则任一个均包括在共有序列中。
可设计猪源化抗体使得对啮齿动物抗猪抗体的不良免疫应答减到最小，所述不良免疫应答限制了这些部分在猪接受者中的治疗应用的待续时间和有效性。猪源化抗体可具有引入其中的来自是非猪来源的一个或多个氨基酸残基。这些非猪残基常称为“输入”残基，其通常取自可变结构域。猪源化可通过用超变区序列取代猪抗体的相应序列来进行。因此，所述“猪源化”抗体是其中基本上小于完整猪可变结构域被来自非猪物种的相应序列取代的嵌合抗体。猪源化抗体可以是其中一些超变区残基和可能一些FR残基被来自啮齿动物抗体中的类似位点的残基取代的猪抗体。
猪源化抗体可对NaV1.7保持高亲和力和其它有利的生物学性质性质。可采用的三维模型亲本和猪源化序列，通过亲本序列和各种概念猪源化产物的分析过程，制备猪源化抗体。三维免疫球蛋白模型是市购可获得的。可获得说明和显示所选的候选免疫球蛋白序列可能的三维构象结构的计算机程序。检查这些显示允许分析残基在候选免疫球蛋白序列的功能中的可能作用，即分析影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力的残基。这样，可从接受体和输入序列选择并合并FR残基，使得实现所需的抗体特性，例如对NaV1.7的亲和力提高。一般而言，超变区残基可直接和最充分地参与影响抗原结合。
e.抗NaV1.7抗体
抗NaV1.7抗体可采用上述技术产生。抗NaV1.7抗体可以是1E16单克隆抗体(在本文亦称为SVmab1)或其抗体片段。
(1)1E16抗体
本文所用“1E16”或“1E16mAb”或“SVmab1”是指由杂交瘤细胞系产生的单克隆抗体。使用用SEQIDNO:21或23免疫的Balb/C小鼠品系制备1E16抗体。将小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系SP2/0融合。使用HAT培养基中的单细胞分选，克隆杂交瘤细胞。然后采用ELISA，针对其结合抗原的能力测定由不同克隆分泌的抗体。选出最有生产能力和最稳定的克隆。使选择的杂交瘤在补充新生牛血清(20%)和谷氨酰胺的RPMI-1640培养基中生长，并在同一培养基中冷冻。
1E16与NaV1.7上的表位(SEQIDNO:21或23)结合，并识别全长NaV1.7。1E16具有由SEQIDNO:12的核苷酸序列编码的重链SEQIDNO:4的氨基酸序列和由SEQIDNO:16编码的轻链SEQIDNO:8的氨基酸序列。1E16包括CDR-H1(SEQIDNO:5)、CDR-H2(SEQIDNO:6)、CDR-H3(SEQIDNO:7)、CDR-L1(SEQIDNO:9)、CDR-L2(SEQIDNO:10)和CDR-L3(SEQIDNO:11)，其分别由SEQIDNO:13-15和17-19核苷酸序列编码。
3.药物组合物
抗体可以是药物组合物中的组分。药物组合物还可含有药学上可接受的载体。包含本发明的抗体的药物组合物用于但不限于诊断、检测或监测病症；用于预防、治疗、控制或缓解病症或其一个或多个症状和/或用于研究。在一个具体的实施方案中，组合物包含本发明的一种或多种抗体。在另一个实施方案中，药物组合物包含本发明的一种或多种抗体和本发明抗体以外用于治疗其中靶中的Nav1.7的活性是有害的病症的一种或多种预防剂或治疗剂。在进一步的实施方案中，已知预防剂或治疗剂将用于或已用于或正用于预防、治疗、控制或缓解病症或其一个或多个症状。按照这些实施方案，组合物可进一步包含载体、稀释剂或赋形剂。
可将本发明的抗体掺入适于给予受试者的药物组合物中。通常，药物组合物包含本发明的抗体和药学上可接受的载体。本文所用“药学上可接受的载体”包括生理上相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣材料、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和延迟吸收剂等。药学上可接受的载体的实例包括水、盐水、磷酸缓冲盐水、葡萄糖、甘油、乙醇等合的一种或多种及其组。在许多情况下，优选在组合物中可包括等渗剂，例如糖、多元醇例如甘露糖醇、山梨糖醇或氯化钠。药学上可接受的载体可进一步包含少量的辅助物质例如润湿剂或乳化剂、防腐剂或缓冲剂，其延长/提高抗体的保存限期或有效性。
不同的递送系统是已知的，可用于给予本发明的一种或多种抗体或本发明的一种或多种抗体和可用于预防、控制、治疗或改善病症或其一个或多个症状的预防剂或治疗剂的组合，例如脂质体中的包封剂、微粒剂、微囊剂、能够表达抗体或抗体片段的重组细胞、受体介导的胞吞(参见例如Wu和Wu,J.Biol.Chem.262:4429-4432(1987))、构建作为反转录病毒或其它载体的一部分的核酸等。给予本发明的预防剂或治疗剂的方法包括但不限于胃肠外给药(例如皮内、肌内、腹膜内、静脉内和皮下)、硬膜外给药、肿瘤内给药和粘膜给药(例如鼻内和口服途径)。另外，可利用例如通过使用吸入器或喷雾器并用雾化剂配制的肺部给药。参见例如美国专利号6,019,968、5,985,320、5,985,309、5,934,272、5,874,064、5,855,913、5,290,540和4,880,078；和PCT公布号WO92/19244、WO97/32572、WO97/44013、WO98/31346和WO99/66903，其每一个通过引用以其整体结合到本文中。在一个实施方案中，本发明的抗体或本发明的组合物采用AlkermesAIR?肺部递药技术(Alkermes,Inc.,Cambridge,Mass.)给予。在一个具体的实施方案中，肌内、静脉内、肿瘤内、口服、鼻内、经肺或皮下给予本发明的预防剂或治疗剂。预防剂或治疗剂可通过任何合适的途径，例如通过输注或推注、通过经上皮或粘膜皮肤膜(例如口腔粘膜、直肠和肠粘膜等)吸收给予，并可与其它生物活性剂一起给予。给药可以是全身的或局部的。
在一个具体的实施方案中，可能需要将本发明的抗体局部给予需要治疗的部位；例如但绝非限制，这可通过局部输注、通过注射或通过植入物实现，所述植入物为多孔或无孔材料，包括膜和基质，例如硅橡胶膜、聚合物、纤维基质(例如Tissuel?)或胶原基质。在一个实施方案中，将有效量的本发明的一种或多种抗体局部给予受试者的受累部位以预防、治疗、控制和/或改善病症或其症状。
在另一个实施方案中，可以控释或缓释系统递送抗体。在一个实施方案中，可使用泵以实现控释或缓释(参见Langer,同上；Sefton,1987,CRCCrit.Ref.Biomed.Eng.14:20；Buchwald等,1980,Surgery88:507；Saudek等,1989,N.Engl.J.Med.321:574)。在另一个实施方案中，可使用聚合材料以实现本发明疗法的控释或缓释(参见例如MedicalApplicationsofControlledRelease,Langer和Wise(编辑),CRCPres.,BocaRaton,Fla.(1974)；ControlledDrugBioavailability,DrugProductDesignandPerformance,Smolen和Ball(编辑),Wiley,NewYork(1984)；Ranger和Peppas,1983,J.,Macromol.Sci.Rev.Macromol.Chem.23:61；另参见Levy等,1985,Science228:190；During等,1989,Ann.Neurol.25:351；Howard等,1989,J.Neurosurg.71:105)；美国专利号5,679,377；美国专利号5,916,597；美国专利号5,912,015；美国专利号5,989,463；美国专利号5,128,326；PCT公布号WO99/15154和PCT公布号WO99/20253。用于缓释制剂的聚合物的实例包括但不限于聚(2-羟基乙基甲基丙烯酸酯)、聚甲基丙烯酸甲酯、聚丙烯酸、乙烯乙酸乙烯酯共聚物、聚甲基丙烯酸、聚乙交酯(PLG)、聚酐、聚(N-乙烯基吡咯烷酮)、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、聚乙二醇、聚丙交酯(PLA)、丙交酯乙交酯共聚物(PLGA)和聚原酸酯。在一个具体的实施方案中，用于缓释制剂的聚合物是惰性的，不含可滤出杂质，贮存时是稳定的，无菌的且可生物降解的。在又一个实施方案中，可将控释或缓释系统放置在预防靶或治疗靶附近，因此只需要全身剂量的一部分(参见例如Goodson,载于MedicalApplicationsofControlledRelease,同上,第2卷,第115-138页(1984))。
控释系统论述于Langer的综述中(1990，Science249:1527-1533)。本领域技术人员已知的任何技术都可用于产生包含本发明的一种或多种抗体的缓释制剂。参见例如美国专利号4,526,938、PCT公开文本WO91/05548、PCT公开文本WO96/20698、Ning等,1996,"IntratumoralRadioimmunotheraphyofaHumanColonCancerXenograftUsingaSustained-ReleaseGel(使用缓释凝胶的人结肠癌异种移植物的肿瘤内放射免疫疗法),"Radiotherapy&Oncology39:179-189；Song等,1995,"AntibodyMediatedLungTargetingofLong-CirculatingEmulsions(长期循环乳剂的抗体介导的肺打靶),"PDAJournalofPharmaceuticalScience&Technology50:372-397；Cleek等,1997,"BiodegradablePolymericCarriersforabFGFAntibodyforCardiovascularApplication(用于心血管应用的bFGF抗体的可生物降解的聚合载体),"Pro.Int'l.Symp.Control.Rel.Bioact.Mater.24:853-854；以及Lam等,1997,"MicroencapsulationofRecombinantHumanizedMonoclonalAntibodyforLocalDelivery(用于局部递送的重组人源化单克隆抗体的微囊化),"Proc.Int'l.Symp.ControlRel.Bioact.Mater.24:759-760，其每一个通过引用以其整体结合到本文中。
在一个具体的实施方案中，在本发明的组合物是编码抗体的核酸时，可通过构建核酸作为合适的核酸表达载体的一部分，并通过例如使用反转录病毒载体(参见美国专利号4,980,286)，或通过直接注射，或通过使用微粒轰击(例如基因枪；Biolistic，Dupont)，或用脂质或细胞表面受体或转染剂包覆，或通过与已知进入核的同源框样肽的连接给予(参见例如Joliot等,1991,Proc.Natl.Acad.Sci.USA88:1864-1868)，并给予核酸使之成为胞内的，来体内给予核酸以促进其编码抗体的表达。或者，可胞内引入核酸，并通过同源重组掺入宿主细胞DNA中用于表达。
配制本发明的药物组合物以与其既定给药途径相容。给药途径的实例包括但不限于胃肠外，例如静脉内、皮内、皮下、口服、鼻内(例如吸入)、经皮(例如局部)、跨粘膜和直肠给药。在一些实施方案中，吸入可包括使用蒸发器将药物组合物给予受试者。在一个具体的实施方案中，按照例行程序配制组合物作为适于静脉内、皮下、肌内、口服、鼻内或局部给予人类的药物组合物。通常，对于静脉内给药的组合物为无菌等渗水性缓冲液中的溶液剂。必要时，组合物还可包括增溶剂和局部麻醉药，例如舒缓注射部位疼痛的利多卡因。
如果本发明的组合物局部给予，则可以软膏剂、乳膏剂、经皮贴剂、洗剂、凝胶剂、洗发剂、喷雾剂、气雾剂、溶液剂、乳剂的形式或本领域技术人员熟知的其它形式给予组合物。参见例如Remington'sPharmaceuticalSciencesandIntroductiontoPharmaceuticalDosageForms,第19版,MackPub.Co.,Easton,Pa.(1995)。对于不可喷雾的局部剂型，通常使用包含与局部应用相容的载体或一种或多种赋形剂且具有大于水的动态粘滞度的粘性至半固体或固体形式。合适的制剂包括而不限于溶液剂、混悬剂、乳剂、乳膏剂、软膏剂、散剂、搽剂、油膏剂等，如有需要，将其灭菌或与助剂(例如防腐剂、稳定剂、润湿剂、缓冲剂或盐)混合以影响不同性质，例如渗透压。其它合适的局部剂型包括可喷射气雾制剂，其中例如与固体或液体惰性载体组合的活性成分与加压挥发成分(例如气体抛射剂，例如氟里昂)混合包装或在塑料挤瓶中包装。如有需要，还可将增湿剂或保湿剂加入药物组合物和剂型中。所述其它成分的实例是本领域众所周知的。
如果本发明的方法包括鼻内给予组合物，则组合物可配制成气雾剂形式、喷雾剂、薄雾剂或滴剂的形式。具体地讲，在使用合适的抛射剂(例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合适的气体)时，可以从喷雾器或雾化器提供的喷雾剂的形式，方便地递送按照本发明使用的预防剂或治疗剂。在压缩气雾剂的情况下，可通过提供递送定量的阀来决定剂量单位。可配制装有化合物和合适的粉末基料(例如乳糖或淀粉)的粉末混合物用于吸入器或吹入器的药囊和药筒(由例如明胶组成)。
如果本发明的方法包括口服给药，则可将组合物配成片剂、胶囊剂、扁囊剂、软胶囊剂、溶液剂、混悬剂等口服形式。片剂或胶囊剂可通过常规方法与药学上可接受的赋形剂一起制备，所述赋形剂例如粘合剂(例如预胶化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素)；填充剂(例如乳糖、微晶纤维素或磷酸氢钙)；润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石或二氧化硅)；崩解剂(例如马铃薯淀粉或羟基乙酸淀粉钠)；或润湿剂(例如十二烷基硫酸钠)。片剂可通过本领域众所周知的方法包衣。用于口服给药的液体制剂可呈溶液剂、糖浆剂或混悬剂的形式但不限于这些，或它们可作为干制品提供，在用前用水或其它合适的溶媒配制。所述液体制剂可通过常规方法与以下药学上可接受的添加剂一起制备：例如助悬剂(例如山梨糖醇糖浆、纤维素衍生物或氢化食用脂肪)；乳化剂(例如卵磷脂或阿拉伯树胶)；无水溶媒(例如杏仁油、油性酯、乙醇或分馏植物油)和防腐剂(例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸乙酯或山梨酸)。适当时，所述制剂还可含有缓冲盐、矫味剂、着色剂和甜味剂。对于口服给药的制剂可适宜地配制用于预防剂或治疗剂的慢释、控释或缓释。
本发明的方法可包括例如通过使用吸入器或喷雾器肺部给予用雾化剂配制的组合物。参见例如美国专利号6,019,968、5,985,320、5,985,309、5,934,272、5,874,064、5,855,913、5,290,540和4,880,078；和PCT公布号WO92/19244、WO97/32572、WO97/44013、WO98/31346和WO99/66903，其每一个通过引用以其整体结合到本文中。在一个具体的实施方案中，本发明的抗体和/或本发明的组合物采用AlkermesAIR肺部递药技术(Alkermes,Inc.,Cambridge,Mass.)给予。
本发明的方法可包括给予配制用于通过注射(例如通过推注或连续输注)胃肠外给予的组合物。用于注射的制剂可以与添加的防腐剂一起的单位剂型(例如在安瓿或多容量容器中)提供。组合物可呈例如油性或水性溶媒中的混悬剂、溶液剂或乳剂形式，并可含有调配剂，例如助悬剂、稳定剂和/或分散剂。或者，活性成分可呈粉末形式，在用前用合适的溶媒(例如无菌无热原水)配制。本发明的方法另外可包括给予作为贮库制剂配制的组合物。所述长效制剂可通过植入(例如皮下或肌内)或通过肌内注射给予。因此，例如，组合物可与合适的聚合材料或疏水材料(例如作为可接受油中的乳剂)或离子交换树脂一起配制，或作为微溶衍生物(例如作为微溶盐)配制。
本发明的方法包括给予作为中性形式或盐形式配制的组合物。药学上可接受的盐包括与阴离子(如来源酸、盐酸、磷酸、乙酸、草酸、酒石酸等的阴离子)形成的盐和与阳离子(例如来源于钠、钾、铵、钙、氢氧化铁、异丙胺、三乙胺、2-乙基氨基乙醇、组氨酸、普鲁卡因等的阳离子)形成的盐。
组合物的成分一般单独供应或在单位剂型中混合在一起，例如作为密封容器(例如表明活性剂的量的安瓿或小袋)中的干冻干粉或无水浓缩物。在给药方式是输注时，组合物可用装有无菌医药级水或盐水的输注瓶分装。在给药方式是通过注射时，可提供注射用无菌水或盐水的安瓿，使得在给药前将成分混合。
具体地讲，本发明还提供包装在标明抗体的量的密封容器(例如安瓿或小袋)中的本发明的一种或多种抗体或药物组合物。在一个实施方案中，本发明的一种或多种抗体或药物组合物作为密封容器中的干的灭菌冻干粉或无水浓缩物供应，并且可重配(例如用水或盐水)成合适的浓度用于给予受试者。在一个实施方案中，本发明的一种或多种抗体或药物组合物作为干的无菌冻干粉在密封容器中按以下单位剂量供应：至少5mg、例如至少10mg、至少15mg、至少25mg、至少35mg、至少45mg、至少50mg、至少75mg或至少100mg。本发明的冻干抗体或药物组合物可在其原有容器中保存在2℃和8℃之间，且应在重配后1周内，例如在5天内、在72小时内、在48小时内、在24小时内、在12小时内、在6小时内、在5小时内、在3小内或在1小时内给予。在备选的实施方案中，本发明的一种或多种抗体或药物组合物在表明抗体的量和浓度的密封容器中以液体形式供应。在进一步的实施方案中，所给予的组合物的液体形式在密封容器中以至少0.25mg/ml、例如至少0.5mg/ml、至少1mg/ml、至少2.5mg/ml、至少5mg/ml、至少8mg/ml、至少10mg/ml、至少15mg/ml、至少25mg/ml、至少50mg/ml、至少75mg/ml或至少100mg/ml给予。液体形式可在其原有容器中保存在2℃和8℃之间。
可将本发明的抗体掺入适于胃肠外给药的药物组合物中。一方面，可将抗体制备成含有0.1-250mg/ml抗体的可注射溶液。可注射溶液可包括无色玻璃小瓶或琥珀色小瓶、安瓶或载药注射器中的液体或冻干剂型。缓冲剂可为在pH5.0-7.0(最好为pH6.0)下的L-组氨酸(1-50mM)，最好为5-10mM。其它合适的缓冲剂包括但不限于琥珀酸钠、柠檬酸钠、磷酸钠或磷酸钾。可使用氯化钠以改进0-300mM浓度(对于液体剂型最好为150mM)下溶液的张度。对于冻干剂型，可包括冷冻保护剂，主要为0-10%蔗糖(最好为0.5-1.0%)。其它合适的冷冻保护剂包括海藻糖和乳糖。对于冻干剂型可包括膨胀剂，主要为1-10%甘露糖醇(最好为2-4%)。在液体和冻干剂型两者中可使用稳定剂，主要为1-50mML-甲硫氨酸(最好为5-10mM)。其它合适的膨胀剂包括甘氨酸、精氨酸，可以0-0.05%聚山梨醇酯-80(最好为0.005-0.01%)包括。其它表面活性剂包括但不限于聚山梨醇酯20和BRIJ表面活性剂。作为可注射溶液剂制备的用于胃肠外给药的包含本发明抗体的药物组合物，可进一步包含可用作佐药的作用剂，例如用于提高抗体的吸收或分散的作用剂。特别有用的佐药为透明质酸酶，例如Hylenex?(重组人透明质酸酶)。在可注射溶液剂中加入透明质酸酶生改进在胃肠外给药(特别是皮下给药)后的人生物利用度。它还允许较大的注射部位体积(即大于1ml)、较少的疼痛和不适以及最低发生的注射部位反应。(参见国际申请公布号WO04/078140和美国专利申请公布号US2006104968，通过引用结合到本文中)。
本发明的组合物可呈多种形式。这些包括例如液体、半固体和固体剂型，例如液体溶液剂(例如注射溶液剂和输注溶液剂)、分散剂或混悬剂、片剂、丸剂、散剂、脂质体和栓剂。优选的形式取决于既定给药方式和治疗应用。组合物可呈注射溶液剂和输注溶液剂的形式，例如类似于用于人或哺乳动物(例如牛、犬、马、猫和猪)被其它抗体被动免疫的组合物。在一个实施方案中，通过静脉内输注或注射给予抗体。在另一个实施方案中，通过肌内或皮下注射给予抗体。
治疗组合物在生产和贮存条件下通常必需是无菌的和稳定的。可将组合物配制为溶液剂、微乳剂、分散剂、脂质体或适于高药物浓度的其它有序结构。可通过将活性化合物(即本发明的结合蛋白，例如抗体)以所需要的量按需要与上文例举的一种成分或成分的组合一起掺入合适的溶剂中，接着过滤除菌，来制备无菌可注射溶液剂。一般通过将活性化合物掺入含有基础分散介质和所需的来自上文例举的其它成分的无菌溶媒中，来制备分散剂。在用于制备无菌可注射溶液剂的无菌冻干粉的情况下，制备方法包括真空干燥和喷雾干燥，这从其之前除菌过滤溶液中得到活性成分加任何其它所需成分的粉末。可通过例如使用包衣材料(例如卵磷脂)、在分散剂的情况下通过保持所需粒径和通过使用表面活性剂，来维持溶液的适当流动性。可通过在组合物中包括延迟吸收的物质(例如单硬脂酸盐和明胶)，引起可注射组合物的吸收延迟。
可通过本领域已知的各种方法给予本发明的抗体。对于许多治疗应用，给药的途径/方式可以是皮下注射、静脉内注射、吸入或输注。正如技术人员应认识到的，给药的途径和/或方式应取决于所需结果。在某些实施方案中，活性化合物可用保护化合物免于快速释放的载体制备，例如控释制剂，包括植入物、经皮贴剂和微胶囊化递送系统。可使用可生物降解的生物相容的聚合物，例如乙烯乙酸乙酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。用于制备所述制剂的许多方法被授予专利或本领域技术人员普遍已知的。参见例如SustainedandControlledReleaseDrugDeliverySystems,J.R.Robinson编辑,MarcelDekker,Inc.,NewYork,1978。
在某些实施方案中，本发明的抗体可与例如惰性稀释剂或可同化可食用载体一起口服给予。抗体(和其它成分，如有需要)还可包封在硬壳和软壳明胶胶囊中、压制成片剂或直接掺入受试者的饮食中。对于口服治疗给药，抗体可与赋形剂一起掺入，并以可摄食片剂、口含片剂、锭剂、胶囊剂、酏剂、混悬剂、糖浆剂、糯米纸囊剂等形式使用。为了通过非胃肠外给药给予本发明的抗体，可能需要将抗体用防止其失活的材料包衣或与所述材料一起共给予抗体。
在某些实施方案中，将本发明的抗体与本领域已知的延长半寿期的载体连接。所述载体包括但不限于Fc结构域、聚乙二醇和葡聚糖。所述载体描述于例如美国申请顺序号09/428,082和已公开的PCT申请号WO99/25044，其通过引用结合到本文中用于任何目的。
在一个具体的实施方案中，给予包含编码本发明抗体的核苷酸序列的核酸序列以治疗、预防、控制或改善病症或其一个或多个症状作为基因疗法。基因疗法是指通过给予受试者表达的或可表达的核酸所进行的疗法。在本发明的这个实施方案中，核酸产生本发明的其编码抗体，所述抗体介导预防或治疗作用。
可按照本发明使用本领域可获得的用于基因疗法的任何方法。有关基因疗法方法的一般性综述参见Goldspiel等,1993,ClinicalPharmacy12:488-505；Wu和Wu,1991,Biotherapy3:87-95；Tolstoshev,1993,Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.32:573-596；Mulligan,Science260:926-932(1993)；以及Morgan和Anderson,1993,Ann.Rev.Biochem.62:191-217；May,1993,TIBTECH11(5):155-215。可采用的重组DNA技术的本领域普遍已知的方法描述于Ausubel等(编辑),CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWiley&Sons,NY(1993)；以及Kriegler,GeneTransferandExpression,ALaboratoryManual,StocktonPress,NY(1990)。基因疗法各种方法的详细描述公开于US20050042664A1，其通过引用结合到本文中。
本发明的抗体可单独或组合使用以治疗与疼痛有关的疾病或病况或与NaV1.7有关的任何其它疾病或病况。应进一步了解，组合是可用于其既定目的的那些组合。
药物组合物可包括“治疗有效量”或“预防有效量”的抗体。“治疗有效量”是指在为实现所需治疗结果所需的剂量下持续一段时间是有效的量。治疗有效量的抗体可由本领域技术人员确定，可随例如个体的疾病状态、年龄、性别和体重及抗体在个体中引起所需反应的能力等因素而变化。治疗有效量是其中抗体的治疗有益作用超过毒性或有害作用(如有的话)的量。“预防有效量”是指在为实现所需预防结果所需的剂量下持续一段时间是有效的量。通常，因为在疾病的早期阶段之前或在疾病的早期阶段将预防剂量用于受试者，所以预防有效量应小于治疗有效量。
可调节剂量方案以提供最适所需反应(例如治疗或预防反应)。例如，可给予单次推注，可随时间推移给予几个分剂量或可根据治疗情况的急迫性按比例减少或增加剂量。特别有利的是以剂量单位形式配制胃肠外组合物以易于剂量的给予和均匀。本文所用剂量单位形式是指适于作为单位剂量用于待治疗的哺乳动物受试者的物理离散单位；每个单位含有经计算产生所需治疗作用的预定量的活性化合物以及所需药用载体。剂量单位形式的规格由以下指定并直接取决于：(a)活性化合物的独特性质和待实现的具体治疗或预防作用，和(b)混配所述活性化合物的本领域对个体治疗敏感性的固有限制。
抗体的治疗或预防有效量的示例性非限制性范围为介于0.1和200mg/kg之间、例如介于0.1和10mg/kg之间的剂量。抗体的治疗或预防有效量可介于1和200mg/kg、10和200mg/kg、20和200mg/kg、50和200mg/kg、75和200mg/kg、100和200mg/kg、150和200mg/kg、50和100mg/kg、5和10mg/kg或1和10mg/kg之间。注意，剂量值可随待缓解的病况的类型和严重程度而变化。另外，抗体剂量可由本领域技术人员确定，并可随例如个体的疾病状态、年龄、性别和体重及抗体在个体中引起所需反应的能力等因素而变化。剂量也是其中抗体的治疗有益作用超过毒性或有害作用(如有的话)的剂量。要进一步了解对于任何特定的受试者，具体的剂量方案应根据个体需要和给予组合物的执行或监督人员的职业判断随时间推移进行调整，本文给出的剂量范围只是示例性的，无意限制所要求保护的组合物的范围或实践。
4.NaV1.7检测
本发明还涉及使用与不同NaV1.7表位结合的上述NaV1.7抗体检测和测量来自受试者样品中的NaV1.7的方法。所述方法包括(a)从受试者中获得生物样品，(b)使生物样品与俘获抗体接触，所述俘获抗体与NaV1.7或NaV1.7片段上的表位结合形成俘获抗体-NaV1.7抗原复合体，(c)使俘获抗体-NaV1.7抗原复合体与包括可检测标记并结合不被俘获抗体结合的NaV1.7或NaV1.7片段上的表位的检测抗体接触，形成俘获抗体-NaV1.7抗原-检测抗体，和(d)根据俘获抗体-NaV1.7抗原-检测抗体复合体中可检测标记产生的信号，测定生物样品中NaV1.7或NaV1.7片段的存在、量或浓度。
可检出生物样品中至少0.05ng/mL、0.06ng/mL、0.07ng/mL、0.08ng/mL、0.09ng/mL、0.10ng/mL、0.11ng/mL、0.12ng/mL、0.13ng/mL、0.14ng/mL、0.15ng/mL、0.16ng/mL、0.17ng/mL、0.18ng/mL、0.19ng/mL、0.20ng/mL、0.25ng/mL、0.30ng/mL、0.35ng/mL、0.40ng/mL、0.45ng/mL、0.50ng/mL、0.55ng/mL、1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、15ng/mL、20ng/mL、21ng/mL、22ng/mL、23ng/mL、24ng/mL、25ng/mL、26ng/mL、27ng/mL、28ng/mL、29ng/mL或30ng/mL的Nav1.7的水平。与其它可获得的NaV1.7免疫测定法相比，Nav1.7检测的范围具有至少5%、10%、25%、50%、75%、100%、110%、120%、130%、140%、150%、160%、170%、180%、190%、200%、210%、220%、230%、240%、250%、260%、270%、280%、290%、300%、400%或500%改进的范围大小。可检出约0ng/mL-约30ng/mL、约0.05ng/mL-约30ng/mL、约0.06ng/mL-约30ng/mL、约0.07ng/mL-约30ng/mL、约0.08ng/mL-约30ng/mL、约0.09ng/mL-约30ng/mL、约0.095ng/mL-约30ng/mL、约0.10ng/mL-约30ng/mL、约0.105ng/mL-约30ng/mL、约0.11ng/mL-约30ng/mL、约0.12ng/mL-约30ng/mL、约0.13ng/mL-约30ng/mL、约0.14ng/mL-约30ng/mL、约0.15ng/mL-约30ng/mL、约0.20ng/mL-约30ng/mL、约1.00ng/mL-约30、约0ng/mL-约27.5ng/mL、0.05ng/mL-约27.5ng/mL、0.06ng/mL-约27.5ng/mL、0.07ng/mL-约27.5ng/mL、0.08ng/mL-约27.5ng/mL、0.09ng/mL-约27.5ng/mL、0.095ng/mL-约27.5ng/mL、0.10ng/mL-约27.5ng/mL、0.105ng/mL-约27.5ng/mL、0.11ng/mL-约27.5ng/mL、0.12ng/mL-约27.5ng/mL、0.13ng/mL-约27.5ng/mL、0.14ng/mL-约27.5ng/mL、0.15ng/mL-约27.5ng/mL、0.20ng/mL-约27.5ng/mL、1.00ng/mL-约27.5ng/mL、约0ng/mL-约26ng/mL、约0.05ng/mL-约26ng/mL、0.06ng/mL-约26ng/mL、0.07ng/mL-约26ng/mL、0.08ng/mL-约26ng/mL、0.09ng/mL-约26ng/mL、0.095ng/mL-约26ng/mL、0.10ng/mL-约26ng/mL、0.105ng/mL-约26ng/mL、0.11ng/mL-约26ng/mL、0.12ng/mL-约26ng/mL、0.13ng/mL-约26ng/mL、0.14ng/mL-约26ng/mL、0.15ng/mL-约26ng/mL、0.20ng/mL-约26ng/mL、1.00ng/mL-约26ng/mL、约0ng/mL-约25ng/mL、0.05ng/mL-约25ng/mL、0.06ng/mL-约25ng/mL、0.07ng/mL-约25ng/mL、0.08ng/mL-约25ng/mL、0.09ng/mL-约25ng/mL、0.095ng/mL-约25ng/mL、0.10ng/mL-约25ng/mL、0.105ng/mL-约25ng/mL、0.11ng/mL-约25ng/mL、0.12ng/mL-约25ng/mL、0.13ng/mL-约25ng/mL、0.14ng/mL-约25ng/mL、0.15ng/mL-约25ng/mL、0.20ng/mL-约25ng/mL、1.00ng/mL-约25ng/mL、约0ng/mL-约24ng/mL、0.05ng/mL-约24ng/mL、0.06ng/mL-约24ng/mL、0.07ng/mL-约24ng/mL、0.08ng/mL-约24ng/mL、0.09ng/mL-约24ng/mL、0.095ng/mL-约24ng/mL、0.10ng/mL-约24ng/mL、0.105ng/mL-约24ng/mL、0.11ng/mL-约24ng/mL、0.12ng/mL-约24ng/mL、0.13ng/mL-约24ng/mL、0.14ng/mL-约24ng/mL、0.15ng/mL-约24ng/mL、0.20ng/mL-约24ng/mL、1.00ng/mL-约24ng/mL、约0ng/mL-约22.5ng/mL、0.05ng/mL-约22.5ng/mL、0.06ng/mL-约22.5ng/mL、0.07ng/mL-约22.5ng/mL、0.08ng/mL-约22.5ng/mL、0.09ng/mL-约22.5ng/mL、0.0950ng/mL-约22.5ng/mL、0.10ng/mL-约22.5ng/mL、0.105ng/mL-约22.5ng/mL、0.11ng/mL-约22.5ng/mL、0.12ng/mL-约22.5ng/mL、0.13ng/mL-约22.5ng/mL、0.14ng/mL-约22.5ng/mL、0.15ng/mL-约22.5ng/mL、0.20ng/mL-约22.5ng/mL、1.00ng/mL-约22.5ng/Ml、约0ng/mL-约20ng/mL、0.05ng/mL-约20ng/mL、0.06ng/mL-约20ng/mL、0.07ng/mL-约20ng/mL、0.08ng/mL-约20ng/mL、0.09ng/mL-约20ng/mL、0.095ng/mL-约20ng/mL、0.10ng/mL-约20ng/mL、0.105ng/mL-约20ng/mL、0.11ng/mL-约20ng/mL、0.12ng/mL-约20ng/mL、0.13ng/mL-约20ng/mL、0.14ng/mL-约20ng/mL、0.15ng/mL-约20ng/mL、0.20ng/mL-约20ng/mL或1.00ng/mL-约20ng/mL的Nav1.7的范围。
a.免疫测定法
可在免疫测定法中使用上述抗体分析Nav1.7和/或其肽或片段，即NaV1.7片段。可使用抗体和检测与NaV1.7或NaV1.7片段的特异性结合，测定NaV1.7或NaV1.7片段的存在或量。例如，抗体或其抗体片段可与NaV1.7或NaV1.7片段特异性结合。如有需要，一种或多种抗体可与一种或多种市购可获得的单克隆/多克隆抗体联用。所述抗体可获自例如R&DSystems,Inc.(Minneapolis,MN)和EnzoLifeSciencesInternational,Inc.(PlymouthMeeting,PA)等公司。
存在于机体样品中的NaV1.7或NaV1.7片段的存在或量可容易地采用免疫测定法测定，例如夹心免疫测定法(例如单克隆-多克隆夹心免疫测定法，包括放射性同位素检测(放射免疫测定法(RIA))和酶检测(酶免疫测定法(EIA)或酶联免疫测定法(ELISA)(例如QuantikineELISA测定法，R&DSystems，Minneapolis，MN))。化学发光微粒免疫测定法是优选的免疫测定法的实例。其它方法包括例如使用针对Nav1.7的Nav1.7抗体(单克隆、多克隆、嵌合、人源化、人等)或其抗体片段的质谱法和免疫组织化学(例如用来自组织活检的切片)。其它检测方法包括描述于例如美国专利号6,143,576、6,113,855、6,019,944、5,985,579、5,947,124、5,939,272、5,922,615、5,885,527、5,851,776、5,824,799、5,679,526、5,525,524和5,480,792中的那些，其每一个通过引用以其整体结合到本文中。可通过直接标记(例如荧光或发光标签)、与抗体连接的金属和放射性核素或通过间接标记(例如碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶)，检测与抗NaV1.7的抗体的特异性免疫结合。
固定化抗体或其抗体片段的使用可整合到免疫测定法中。可将抗体固定在例如磁性或层析基质颗粒、测定板的表面(例如微量滴定孔)、固体基质材料块等各种支持体上。可通过将抗体或多种抗体包被在固相支持体的阵列上来制备测定条(assaystrip)。然后可将该条浸入试验生物样品中，通过洗涤和检测步骤进行快速处理以产生可测量的信号，例如有色斑点。
可使用异质形式。例如，在从受试者中获得试验样品后，制备第一混合物。混合物含有针对NaV1.7或NaV1.7片段评价的试验样品和第一特异性结合配偶体，其中第一特异性结合配偶体和试验样品中所含的任何NaV1.7形成第一特异性结合配偶体-NaV1.7抗原复合体。第一特异性结合配偶体可以是与具有SEQIDNO:21、22、23、50和/或51的至少3个连续(3)氨基酸的氨基酸序列的表位结合的抗NaV1.7抗体。其中加入试验样品和第一特异性结合配偶体以形成混合物的顺序不是关键的。可将第一特异性结合配偶体固定在固相上。用于免疫测定法的固相(对于第一特异性结合配偶体，任选第二特异性结合配偶体)可以是本领域已知的任何固相，例如但不限于磁性粒子、珠粒、试管、微量滴定板、杯、膜、支架分子、膜、滤纸、圆盘和芯片。
在形成含有第一特异性结合配偶体-NaV1.7抗原复合体的混合物后，采用本领域已知的任何技术从复合体中除去任何未结合的NaV1.7。例如，可通过洗涤除去未结合的NaV1.7。然而理想的是，存在的第一特异性结合配偶体超过试验样品中存在的任何NaV1.7，使得试验样品中存在的所有NaV1.7被第一特异性结合配偶体结合。
在除去任何未结合的NaV1.7后，将第二特异性结合配偶体加入混合物中形成第一特异性结合配偶体-NaV1.7抗原-第二特异性结合配偶体复合体。第二特异性结合配偶体可以是与具有SEQIDNO:21、22、23、50和/或51的至少3个连续(3)氨基酸的氨基酸序列的表位结合的抗NaV1.7抗体。此外，第二特异性结合配偶体用上述可检测标记标记或含有上述可检测标记。
固定化抗体或其抗体片段的使用可整合至免疫测定法中。可将抗体固定在例如磁性或层析基质颗粒、测定板的表面(例如微量滴定孔)、固体基质材料块等多种支持体上。可通过将抗体或多种抗体包被在固相支持体的阵列上来制备测定条。然后可将该条浸入试验生物样品中，通过洗涤和检测步骤进行快速处理以产生可测量的信号，例如有色斑点。
(1)夹心ELISA
夹心ELISA测量抗体(即至少一种俘获抗体)和检测抗体(即至少一种检测抗体)两层之间的抗原的量。俘获抗体和检测抗体与抗原(例如NaV1.7)上的不同表位结合。理想的是，俘获抗体与表位的结合不干扰检测抗体与表位的结合。单克隆或多克隆抗体可在夹心ELISA中用作俘获和检测抗体。
一般使用至少2种抗体以分离并定量测定试验样品中的NaV1.7或NaV1.7片段。更具体地讲，至少2种抗体与NaV1.7或NaV1.7片段的特定表位结合形成称为“夹心”的免疫复合体。一种或多种抗体可用于俘获试验样品中的NaV1.7或NaV1.7片段(这些抗体通常称为“俘获”抗体或多种“俘获”抗体)，一种或多种抗体则用于使可检测(即可定量的)标记与夹心结合(这些抗体一般称为“检测”抗体或多种“检测”抗体)。在夹心测定法中，抗体与其表位的结合适宜不被在该测定中任何其它抗体与其各自表位的结合减少。选择抗体使得与疑似含有NaV1.7或NaV1.7片段的试验样品接触的一种或多种第一抗体不与被第二抗体或随后的抗体识别的表位的全部或部分结合，从而干扰一种或多种第二检测抗体与NaV1.7或NaV1.7片段结合的能力。
在所述免疫测定法中，抗体可用作第一抗体。抗体与NaV1.7上的表位免疫特异性结合。除本发明的抗体以外，所述免疫测定法可包含与不被第一抗体识别或结合的表位免疫特异性结合的第二抗体。
疑似含有NaV1.7或NaV1.7片段的试验样品可与至少一种第一俘获抗体(或抗体)和至少一种第二检测抗体同时或序贯接触。在夹心测试方式中，首先使疑似含有NaV1.7或NaV1.7片段的试验样品在允许第一抗体-NaV1.7抗原复合体形成的条件下与特定表位特异性结合的至少一种第一俘获抗体接触。如果使用一种以上的俘获抗体，则形成第一多种俘获抗体-NaV1.7抗原复合体。在夹心测定法中，使用超过试验样品中预期最大量的NaV1.7或NaV1.7片段的摩尔过量的抗体(优选至少一种俘获抗体)。例如，可使用约5μg/mL-约1mg/ml的抗体/ml微粒包被缓冲液。
(a)抗NaV1.7俘获抗体
任选在使试验样品与至少一种第一俘获抗体接触之前，可使至少一种第一俘获抗体与促进从试验样品中分离第一抗体-NaV1.7抗原复合体的固相支持体结合。可使用本领域已知的任何固相支持体，包括但不限于由聚合材料构成呈孔、管或珠粒的形式的固相支持体。可通过吸附、通过使用化学偶联剂的共价结合或通过本领域已知的其它手段使抗体(或抗体)与固相支持体结合，条件是所述结合不干扰抗体结合NaV1.7或NaV1.7片段的能力。此外，如有必要，可使固相支持体衍生化以允许与抗体上的各种官能团反应。所述衍生化要求使用某些偶联剂，例如但不限于马来酐、N-羟基琥珀酰亚胺和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺。
在使疑似含有NaV1.7或NaV1.7片段的试验样品与至少一种第一俘获抗体接触后，将试验样品温育以允许形成第一俘获抗体(或多种抗体)-NaV1.7抗原复合体。温育可在约4.5-约10.0的pH、约2℃-约45℃的温度下进行至少约一(1)分钟-约十八(18)小时、约2-6分钟或约3-4分钟的一段时间。
(b)检测抗体
在形成第一/多种俘获抗体-NaV1.7抗原复合体后，然后使复合体与至少一种第二检测抗体(在允许形成第一/多种抗体-NaV1.7抗原-第二抗体复合体的条件下)接触。如果第一抗体-NaV1.7抗原复合体与一种以上的检测抗体接触，则形成第一/多种俘获抗体-NaV1.7抗原-多种抗体检测复合体。如同第一抗体一样，当使至少第二(和随后的)抗体与第一抗体-NaV1.7抗原复合体接触时，需要类似于上述条件下的温育时间以形成第一/多种抗体-NaV1.7抗原-第二/多种抗体复合体。优选至少一种第二抗体含有可检测标记。可检测标记可在形成第一/多种抗体-NaV1.7抗原-第二/多种抗体复合体之前、同时或之后与至少一种第二抗体结合。可以使用本领域已知的任何可检测标记。
可按照Adamczyk等,Anal.Chim.Acta579(1):61-67(2006)描述的方法，进行化学发光测定法。虽然可采用任何合适的测试方式，但微量板化学发光仪(MithrasLB-940,BertholdTechnologiesU.S.A.,LLC,OakRidge,TN)使得能够快速测定小体积的多种样品。化学发光仪可配备使用96孔黑色聚苯乙烯微量板(Costar#3792)的多道试剂注射器。可将各样品加入各个孔中，接着同时/依次加入根据所用测定类型确定的其它试剂。理想的是，例如通过酸化，避免在使用吖啶芳基酯的中性或碱性溶液中形成假碱。然后逐孔记录化学发光反应。在这一方面，记录化学发光反应的时间部分取决于在加入试剂之间的延迟和所用的特定吖啶。
其中加入试验样品和特异性结合配偶体以形成用于化学发光测定的混合物的顺序不是关键的。如果第一特异性结合配偶体用吖啶化合物可检测标记，则形成可检测标记的第一特异性结合配偶体-NaV1.7抗原复合体。或者，如果使用第二特异性结合配偶体，且第二特异性结合配偶体用吖啶化合物可检测标记，则形成可检测标记的第一特异性结合配偶体-NaV1.7抗原-第二特异性结合配偶体复合体。不论是标记的或未标记的，任何未结合的特异性结合配偶体都可采用本领域已知的任何技术(例如洗涤)从混合物中除去。
可在加入上述吖啶化合物之前、同时或之后，在混合物中原位产生过氧化氢或向混合物中提供或供应过氧化氢。可以例如对本领域技术人员将是显而易见的多种方式，原位产生过氧化氢。
或者，可只是简单地向混合物中加入过氧化氢的来源。例如，过氧化氢的来源可为已知含有过氧化氢的一种或多种缓冲液或其它溶液。在这一方面，可只是加入过氧化氢溶液。
在将至少一种碱性溶液同时或相继加入样品中时，产生表明NaV1.7或NaV1.7片段存在的可检测信号，即化学发光信号。碱性溶液含有至少一种碱，具有大于或等于10、优选大于或等于12的pH。碱性溶液的实例包括但不限于氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化铵、氢氧化镁、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化钙、碳酸钙和碳酸氢钙。加到样品中的碱性溶液的量取决于碱性溶液的浓度。根据所用的碱性溶液的浓度，本领域的技术人员可容易的决定加到样品中的碱性溶液的量。
产生的化学发光信号可采用本领域技术人员已知的常规技术检测。根据产生的信号强度，可定量测定样品中NaV1.7或NaV1.7片段的量。具体地讲，样品中NaV1.7的量与产生的信号的强度成比例。可通过将产生的光的量与NaV1.7的标准曲线进行比较或通过与参比标准比较，定量测定存在的NaV1.7的量。可通过质谱法、比重测定法和本领域已知的其它技术，使用已知NaV1.7浓度的连续稀释或溶液，产生标准曲线。
(2)使用抗NaV1.7抗体的方法
本发明涉及使用公开的抗NaV1.7抗体或其抗体片段用于测定试验样品中的NaV1.7或NaV1.7片段的存在、量或浓度的方法。所述方法包括以下步骤：(a)使试验样品与结合与NaV1.7或NaV1.7片段上的表位结合的俘获抗体接触，使得形成俘获抗体-NaV1.7抗原复合体；(b)使俘获抗体-NaV1.7抗原复合体与包含可检测标记并结合不被俘获抗体结合的NaV1.7或NaV1.7片段上的表位的至少一种检测抗体接触，形成俘获抗体-NaV1.7抗原-检测抗体复合体；和(c)根据俘获抗体-NaV1.7抗原-检测抗体复合体中可检测标记产生的信号，测定试验样品中NaV1.7或NaV1.7片段的存在、量或浓度，于是测定试验样品中NaV1.7或NaV1.7片段的存在、量或浓度。
俘获抗体和检测抗体可以是上述抗Nav1.7抗体。例如，俘获抗体可包括1E16抗体或以下的结构域或区：包含SEQIDNO:4的氨基酸序列的可变重链结构域；包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的可变轻链结构域；包含SEQIDNO:4的氨基酸序列的可变重链结构域和包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的可变轻链结构域；含有包含SEQIDNO:5的氨基酸序列的互补决定区(CDR)1、包含SEQIDNO:6的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:7的氨基酸序列的CDR3的可变重链；含有包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的CDR1，包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:11的氨基酸序列的CDR3的可变轻链；或含有包含SEQIDNO:5的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:6的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:7的氨基酸序列的CDR3的可变重链和含有包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:11的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。
b.对照
包括对照样品将是合乎需要的。可如上所述与来自受试者的样品一起同时分析对照样品。可将获自受试者样品的结果与获自对照样品的结果进行比较。可提供标准曲线，对其与生物样品的测定结果进行比较。所述标准曲线表示随测定单位(即荧光信号强度，如果使用荧光标记的话)而变化的标记的水平。使用取自多个供体的样品，可针对正常健康组织中NaV1.7的对照水平，以及针对取自可能具有上文给出的一个或多个特性的供体的组织中NaV1.7的“有风险”水平，提供标准曲线。
因此，由此看来，提供用于测定试验样品中的NaV1.7或NaV1.7片段的存在、量或浓度的方法。所述方法包括通过免疫测定法针对NaV1.7测定试验样品，例如，使用与NaV1.7或aNaV1.7的片段上的表位结合的至少一种俘获抗体和与NaV1.7上的表位(其不同于所述俘获抗体的表位)结合并任选包括可检测标记的至少一种检测抗体，包括对作为试验样品中NaV1.7的存在、量或浓度的直接或间接指示的由可检测标记产生的信号与作为校准物中NaV1.7的存在、量或浓度的直接或间接指示所产生的信号进行比较。校准物任选，并优选为一系列校准物的部分，其中校准物的每一个因NaV1.7的浓度不同于该系列中的其它校准物。
5.治疗方法
本发明还涉及治疗有需要的受试者的疼痛和/或瘙痒的方法。所述方法包括将上述NaV1.7抗体或其抗体片段给予受试者，因此，可中枢、局部、外周和/或全身性给予抗体。随时间推移和/或在将抗体重复给予(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10次或更多次给予)受试者后，抗体的全身给药不会引起受试者的适应性反应(即对抗体的作用的敏感性降低)。在一些实施方案中，可通过吸入(例如用蒸发器)给予抗体。
在一些实施方案中，疼痛可为炎症性疼痛、神经性疼痛、痛觉过敏、慢性疼痛、病理性疼痛、异常性疼痛、痛觉过敏、阵发性剧痛症、遗传性红斑性肢痛症、癌症相关疼痛、非典型疼痛、神经炎症相关疼痛状况、神经原性炎症相关疼痛或其组合。炎症性疼痛可为关节炎疼痛、牙疼、腰痛、炎性肠病相关疼痛、颞下颌关节(TMJ)或其组合。神经性疼痛可为与以下相关的疼痛：糖尿病性神经病、化疗、人免疫缺陷病毒(HIV)感染、疱疹后神经痛(PHN；亦称为带状疱疹)、手术(例如截肢术、开胸术、乳房切除术、疝手术等)、脊髓损伤、中风或其组合。带状疱疹可在被水痘带状疱疹病毒(VZV)感染之后发生。非典型疼痛可以是纤维肌痛或镰状细胞病相关疼痛。神经炎症相关疼痛状况可以是复杂性区域性疼痛综合征(CRPS)、头痛、偏头痛或其组合。神经原性炎症相关疼痛病况可以是复杂性区域性疼痛综合征(CRPS)、头痛、偏头痛或其组合。
疼痛可与例如而不限于以下瘙痒有关：急性瘙痒、慢性瘙痒、依赖组胺的瘙痒、不依赖组胺的瘙痒或其组合。急性瘙痒可以是胃泌素释放肽(GRP)诱导或介导的急性瘙痒。急性瘙痒可由浅层背角神经元中的GRP介导。慢性瘙痒可与特应性皮炎、变应性接触性皮炎、银屑病、肾病、肝病、带状疱疹病毒、湿疹或其组合有关。疼痛可能由NaV1.7的功能获得突变和/或过量表达引起。
瘙痒可为急性瘙痒、慢性瘙痒、依赖组胺的瘙痒、不依赖组胺的瘙痒或其组合。急性瘙痒可以是胃泌素释放肽(GRP)诱导或介导的急性瘙痒。急性瘙痒可由浅层背角神经元中的GRP介导。慢性瘙痒可与特应性皮炎、变应性接触性皮炎、银屑病、肾病、肝病、带状疱疹病毒、湿疹或其组合有关。
所述方法还可包括抑制受试者的疼痛。在一些实施方案中，疼痛可为炎症性疼痛、神经性疼痛、痛觉过敏、慢性疼痛、病理性疼痛、异常性疼痛、痛觉过敏、阵发性剧痛症、遗传性红斑性肢痛症、癌症相关疼痛、非典型疼痛、神经炎症相关疼痛状况、神经原性炎症相关疼痛或其组合。炎症性疼痛可为关节炎疼痛、牙疼、腰痛、炎性肠病相关疼痛、颞下颌关节(TMJ)或其组合。神经性疼痛可以是与以下有关的疾病：糖尿病性神经病、化疗、人免疫缺陷病毒(HIV)感染、疱疹后神经痛(PHN；亦称为带状疱疹)、手术(例如截肢术、开胸术、乳房切除术、疝手术等)、脊髓损伤、中风或其组合。带状疱疹可在被水痘带状疱疹病毒(VZV)感染之后发生。非典型疼痛可以是纤维肌痛或镰状细胞病相关疼痛。神经炎症相关疼痛状况可以是复杂性区域性疼痛综合征(CRPS)、头痛、偏头痛或其组合。神经原性炎症相关疼痛病况可以是复杂性区域性疼痛综合征(CRPS)、头痛、偏头痛或其组合。疼痛可与例如而不限于以下瘙痒有关：急性瘙痒、慢性瘙痒、依赖组胺的瘙痒、不依赖组胺的瘙痒或其组合。急性瘙痒可以是胃泌素释放肽(GRP)诱导或介导的急性瘙痒。急性瘙痒可由浅层背角神经元中的GRP介导。慢性瘙痒可与特应性皮炎、变应性接触性皮炎、银屑病、肾病、肝病、带状疱疹病毒、湿疹或其组合有关。疼痛可能由NaV1.7的功能获得突变和/或过量表达引起。
可抑制疼痛约35%-约85%、约40%-约80%、约42%-约78%、约44%-约76%或约46%-约74%。抗体还可抑制疼痛感觉约35%、约40%、约45%、约46%、约47%、约48%、约49%、约50%、约51%、约52%、约53%、约54%、约55%、约60%、约65%、约66%、约67%、约68%、约69%、约70%、约71%、约72%、约73%、约74%、约75%、约80%或约85%。还可抑制疼痛达约50%或约70%。
所述方法可进一步包括提高受试者的疼痛阈值。在一些实施方案中，疼痛可为炎症性疼痛、神经性疼痛、痛觉过敏、慢性疼痛、病理性疼痛、异常性疼痛、痛觉过敏、阵发性剧痛症、遗传性红斑性肢痛症、癌症相关疼痛、非典型疼痛、神经炎症相关疼痛状况、神经原性炎症相关疼痛或其组合。炎症性疼痛可为关节炎疼痛、牙疼、腰痛、炎性肠病相关疼痛、颞下颌关节(TMJ)或其组合。神经性疼痛可以是与以下有关的疾病：糖尿病性神经病、化疗、人免疫缺陷病毒(HIV)感染、疱疹后神经痛(PHN；亦称为带状疱疹)、手术(例如截肢术、开胸术、乳房切除术、疝手术等)、脊髓损伤、中风或其组合。带状疱疹可在被水痘带状疱疹病毒(VZV)感染之后发生。非典型疼痛可以是纤维肌痛或镰状细胞病相关疼痛。神经炎症相关疼痛状况可以是复杂性区域性疼痛综合征(CRPS)、头痛、偏头痛或其组合。神经原性炎症相关疼痛病况可以是复杂性区域性疼痛综合征(CRPS)、头痛、偏头痛或其组合。疼痛可与例如而不限于以下瘙痒有关：急性瘙痒、慢性瘙痒、依赖组胺的瘙痒、不依赖组胺的瘙痒或其组合。急性瘙痒可以是胃泌素释放肽(GRP)诱导或介导的急性瘙痒。急性瘙痒可由浅层背角神经元中的GRP介导。慢性瘙痒可与特应性皮炎、变应性接触性皮炎、银屑病、肾病、肝病、带状疱疹病毒、湿疹或其组合有关。疼痛可能由NaV1.7的功能获得突变和/或过量表达引起。
可提高疼痛阈值达约1.2倍-约4倍、约1.5倍-约3倍或约2倍。可提高疼痛阈值达约1.2倍、约1.3倍、约1.4倍、约1.5倍、约1.6倍、约1.7倍、约1.8倍、约1.9倍、约2.0倍、约2.1倍、约2.2倍、约2.3倍、约2.4倍、约2.5倍、约2.6倍、约2.7倍、约2.8倍、约2.9倍、约3.0倍、约3.1倍、约3.2倍、约3.3倍、约3.4倍、约3.5倍、约3.6倍、约3.7倍、约3.8倍、约3.9倍或约4倍。可提高疼痛阈值达约2倍或约3倍。
还可提高疼痛阈值达约125%-约400%、约150%-约300%或约200%。可提高疼痛阈值达约125%、约130%、约135%、约140%、约145%、约150%、约155%、约160%、约165%、约170%、约175%、约180%、约185%、约190%、约195%、约200%、约205%、约210%、约215%、约220%、约225%、约230%、约235%、约240%、约245%、约250%、约255%、约260%、约265%、约270%、约275%、约280%、约285%、约290%、约295%、约300%、约305%、约310%、约315%、约320%、约325%、约330%、约335%、约340%、约345%、约350%、约355%、约360%、约365%、约370%、约375%、约380%、约385%、约390%、约395%或约400%。可提高疼痛阈值达约200%或约300%。
所述方法还可包括抑制或减轻受试者的瘙痒。瘙痒可以是但不限于急性瘙痒、慢性瘙痒、依赖组胺的瘙痒、不依赖组胺的瘙痒、变应性接触性皮炎或其组合。急性瘙痒可以是胃泌素释放肽(GRP)诱导或介导的急性瘙痒。急性瘙痒可由浅层背角神经元中的GRP介导。慢性瘙痒可与特应性皮炎、变应性接触性皮炎、银屑病、肾病、肝病、带状疱疹病毒、湿疹或其组合有关。可抑制瘙痒达至少约40%、50%、60%或70%。所述方法可进一步包括控制受试者的瘙痒。
本发明还涉及治疗有需要的受试者的变应性接触性皮炎的方法。所述方法包括将本文所述抗体或抗体片段给予受试者。
本发明进一步涉及治疗有需要的受试者的神经原性炎症的方法。所述方法包括将上述NaV1.7抗体或抗体片段给予受试者。受试者中的神经原性炎症可以是局部性、外周或全身性的，因此，可中枢、局部、外周和/或全身性给予抗体。在一些实施方案中，神经原性炎症可与例如但不限于哮喘、关节炎、湿疹、银屑病和偏头痛或头痛等疾病有关。
所述方法还可包括抑制或减轻受试者的神经原性炎症。在一些实施方案中，神经原性炎症可与哮喘、关节炎、湿疹、银屑病和偏头痛或头痛有关。
本发明还涉及治疗有需要的受试者的咳嗽的方法。所述方法可包括将本文所述抗体或其抗体片段给予受试者。所述方法可减轻或抑制受试者的咳嗽。咳嗽可以是病理性咳嗽。咳嗽可以是慢性咳嗽。因此，所述方法可减轻或抑制病理性受试者的咳嗽。
6.用于检测NaV1.7的试剂盒
本文提供可用于针对NaV1.7或NaV1.7片段测定试验样品的试剂盒。试剂盒包含针对NaV1.7或NaV1.7片段测定试验样品的至少一种组分和针对NaV1.7或NaV1.7片段测定试验样品的说明书。例如，试剂盒可包含通过免疫测定法(例如化学发光微粒免疫测定法)针对NaV1.7或NaV1.7片段测定试验样品的说明书。试剂盒中包括的说明书可附在包装材料上或可作为包装说明书包括在内。虽然说明书通常是书面或印刷材料，但它们不限于这些。本公开内容预期能够存储所述说明书并将其传达给最终用户的任何介质。所述介质包括但不限于电子存储介质(例如磁盘、磁带、盒式磁盘、芯片)、光学介质(例如CDROM)等。本文所用术语“说明书”可包括提供说明书的互联网址的地址。
至少一种组分可包括包含与NaV1.7或Nav1.7片段特异性结合的一种或多种分离的抗体或其抗体片段的至少一种组合物。抗体可以是NaV1.7俘获抗体和/或NaV1.7检测抗体。抗体可包括1E16抗体或其抗体片段。抗体任选为可检测标记的。
备选或另外，试剂盒可包含校准物或对照例如纯化和任选冻干的NaV1.7或NaV1.7片段和/或用于进行测定的至少一个容器(例如已包被抗NaV1.7单克隆抗体的管、微量滴定板或条和/或缓冲液，例如测定缓冲液或洗涤缓冲液，其任一种可作为浓缩溶液、用于可检测标记(例如酶标记)的底物溶液或终止溶液提供。优选试剂盒包含进行测定是必需的所有组分，即试剂、标准品、缓冲液、稀释剂等。说明书还可包括用于生成标准曲线的说明书。
剂盒可进一步包含用于定量测定NaV1.7的参比标准。可使用参比标准以建立用于内推和/或外推NaV1.7浓度的标准曲线。参比标准可包括高的NaV1.7浓度水平，例如约100ng/mL、约125ng/mL、约150ng/mL、约175ng/mL、约200ng/mL、约225ng/mL、约250ng/mL、约275ng/mL或约300ng/mL；中等的NaV1.7浓度水平，例如约25ng/mL、约40ng/mL、约45ng/mL、约50ng/mL、约55ng/mL、约60ng/mL、约75ng/mL或约100ng/mL；和/或低的Nav1.7浓度水平，例如约1ng/mL、约5ng/mL、约10ng/mL、约12.5ng/mL、约15ng/mL、约20ng/mL或约25ng/mL。
试剂盒中提供的任何抗体，例如对Nav1.7有特异性的重组抗体可掺入可检测标记，例如荧光团、放射性部分、酶、生物素/抗生物素蛋白标记、生色团、化学发光标记等，或试剂盒可包括用于标记抗体的试剂或用于检测抗体(例如检测抗体)和/或用于标记分析物的试剂或用于检测分析物的试剂。抗体、校准物和/或对照可在单独的容器中提供或预分配到合适的测试方式中，例如预分配到微量滴定板中。
任选试剂盒包括质量控制组分(例如灵敏度板、校准物和阳性对照)。质量控制试剂的制备是本领域众所周知的，并描述于插页上用于各种免疫诊断产物。灵敏度板成员任选用于建立测定性能特性，并进一步任选为免疫测定试剂盒试剂完整性和测定标准化的有用指示物。
试剂盒还可任选包括进行诊断测定或促进质量控制评价所需要的其它试剂，例如缓冲液、盐、酶、酶辅因子、底物、检测试剂等。试剂盒中还可包括其它组分，例如用于试验样品分离和/或处理的缓冲液和溶液(例如预处理试剂)。试剂盒可另外包括一种或多种其它对照。可将试剂盒的一个或多个组分冻干，在这种情况下，试剂盒可进一步包含适于冻干组分复溶的试剂。
需要时，任选在合适的容器(例如微量滴定板)中提供试剂盒的各种组分。试剂盒可进一步包括保持或贮存样品的容器(例如用于尿液、血浆或血清样品的容器或筒)。适当时，试剂盒任选还可含有反应容器、混合容器和便于试剂或试验样品制备的其它组分。试剂盒还可包括有助于获得试验样品的一个或多个装置，例如注射器、移液管、钳、量匙等。
如果可检测标记是至少一种吖啶化合物，则试剂盒可包含至少一种吖啶-9-甲酰胺、至少一种吖啶-9-甲酸芳基酯或其任何组合。如果可检测标记为至少一种吖啶化合物，则试剂盒还可包含过氧化氢来源，例如缓冲液、溶液和/或至少一种碱性溶液。如有需要，试剂盒可含有固相，例如磁性粒子、珠粒、试管、微量滴定板、杯、膜、支架分子、膜、滤纸、盘或芯片。
如有需要，试剂盒可进一步包含单独或与说明书进一步组合的一个或多个组分，用于针对另一分析物(可为生物标志物，例如肝疾病或病症的生物标志物)测定试验样品。
a.试剂盒的改变
可修改试剂盒(或其组分)以及用于如本文所述通过免疫测定法测定试验样品中NaV1.7的浓度的方法用于各种自动化和半自动化系统(包括其中固相包含微粒的系统)。自动化或半自动化系统与非自动化系统(例如ELISA)相比的一些差异包括第一特异性结合配偶体(例如分析物抗体或俘获抗体)与之连接的底物(其可影响夹心形成和分析物反应性)和俘获、检测和/或任何任选的洗涤步骤的长度和时机。虽然非自动化形式(例如ELISA)可能需要与样品和俘获试剂的相对较长的温育时间(例如约2小时)，但自动化或半自动化形式可能具有相对较短的温育时间(例如约18分钟)。同样，虽然非自动化形式(例如ELISA)可温育检测抗体(例如缀合试剂)持续相对较长的温育时间(例如约2小时)，但自动化或半自动化形式可具有相对较短的温育时间(例如约4分钟)。
本发明具有通过下列非限制性实施例说明的多个方面。
7.NaV1.7抑制的对照抗体
本发明还涉及NaV1.7抑制的对照抗体。对照抗体可结合NaV1.7，但不抑制NaV1.7。对照抗体可能不稳定NaV1.7的关闭状态，因此不抑制NaV1.7。对照抗体可能不影响NaV1.7的门控。因此，对照抗体可用于研究NaV1.7的功能或生物学的方法中和被这些方法用户用作阴性对照。
对照抗体可与NaV1.7的表位结合。这个表位可为在NaV1.7DII的S1和S2之间的环。这个表位可具有氨基酸序列HHPMTEEFKN(SEQIDNO:20)。该对照抗体可以是1I5，这在本文亦称为CTmab。
8.实施例
对本领域技术人员是极显而易见的是，本文所述本公开内容的方法的其它合适的修改和改写是极适当的和可预见的，并且可在不偏离本公开内容的范围或本文公开的方面和实施方案的情况下使用合适的等同内容进行。现已详细描述了本公开内容，参考下列实施例将更清楚了解本公开内容，所述实施例仅仅旨在说明本公开内容的一些方面和实施方案，不应视为对本公开内容的限制。本文提及的所有期刊参考文献、美国专利和出版物的公开内容均通过引用以其整体结合到本文中。
实施例1
实施例2-12的材料和方法
抗体产生和纯化。使用具有下列序列的肽，通过Abmart产生小鼠单克隆抗体：HHPMTEEFKN(1I5(在本文亦称为CTmab)；SEQIDNO:20)和VELFLADVEG(1E16(在本文亦称为SVmab1)；SEQIDNO:21)。两种抗体均为IgG1。在收到杂交瘤后，进行多轮的有限稀释克隆，以选择稳定的单克隆细胞群。使用重组NaV1.7DIIVSD的酶联免疫测定(ELISA)测定法用作筛选。将1E16和1I5的杂交瘤细胞在中空纤维生物反应器(FibercellSystemsInc，US)中温育，然后每两天收集上清液。按照生产商的方案(Invitrogen，US)，通过ELISA测定法筛选各收获的上清液，并在蛋白G琼脂糖柱上纯化。
HEK293细胞的全细胞膜片钳记录。使用脂质转染胺2000(Invitrogen)，以6孔板1μgDNA/孔，将HEK293细胞用与含有GFP的质粒混合的含有NaV通道cDNA的质粒转染。具体地讲，NaV通道cDNA为hNaV1.7、rNaV1.8、hNaV1.3、hNaV1.4、hNaV1.1、rNaV1.2、mNaV1.5和mNaV1.6cDNA。
在转染后约24小时，在室温下，对在荧光显微镜下鉴定的单个分离的绿色细胞进行全细胞记录。使用垂直拉晶器(SutterinstrumentCo.)制备玻璃移液管(SutterinstrumentCo.)(2–3MΩ)。通过Digidata1440A数据采集系统(AxonInstruments)，用被Clampex控制的Axopatch200B放大器获取数据。电流以10kHz发生率抽样检查，并以3kHz过滤。移液管溶液含有(单位mM)：10NaCl、110CsCl、20TEA、2.5MgCl2、5EGTA、3ATP、5HEPES，pH7.0(用CsOH调节)，用葡萄糖调节摩尔渗透压浓度至300mOsmol/L。胞外槽液含有(单位mM)：100NaCl、5CsCl、30TEA、1.8CaCl2、1MgCl2、0.1CdCl2、5HEPES、25葡萄糖、54-氨基吡啶，pH7.4(用CsOH调节)，用葡萄糖调节摩尔渗透压浓度至300mOs-mol/L。
为了记录电流-电压关系，在建立全细胞配置后，将细胞保持在?120mV下，以10mV增量通过?80和+60mV之间的30ms电压阶跃诱导电流迹线。通过对归一化峰值电流(I/Imax)随去极化电位的变化作图，生成I-V曲线。
通过以从?120mV的膜钳制电位以5mV增量产生的范围为?90mV至+10mV的试验电位测量峰值电流，计算NaV通道活化的电压依赖。按照方程式GNa=INa/(Vg–Vr)，计算电导系数(GNa)，其中INa为Na+电流的峰值振幅，Vg为试验电位，Vr为Na+的逆转电位。按照方程式GNa/maxGNa=1/{1+exp[(Vg0.5–Vg)/kg]}，绘制电导系数-电压曲线，其中maxGNa为GNa的最大值，Vg0.5为GNa是0.5maxGNa时的电位，kg为斜率因子(e倍变化所需的电位)。使用以5mV增量自–120mV的膜钳制电位起从?110mV到?30mV范围的500ms调节预脉冲，接着到–10mV的试验脉冲持续30ms，测定Nav通道失活的电压依赖。使峰值INa归一化至其相应的最大值(maxINa)，并作为预脉冲电位的函数作图。按照方程式INa/maxINa=1/{1+exp[(Vh–Vh0.5)/kh]}，绘制稳态失活曲线，其中Vh为预脉冲电位，Vh0.5为INa是0.5maxINa时的电位，kh为斜率因子。用OrignPro(OriginLabCorp)进行数据分析和曲线拟合。
动物和疼痛模型。成年CD1小鼠(雄性，25-35g)被用于所有的行为研究。幼小鼠(4-6周)被用于脊髓切片的电生理研究。为了产生炎症性疼痛，将稀福尔马林(5%，20μl)注射到后爪足跖面。神经性疼痛通过坐骨神经的慢性压迫损伤(CCI)产生。将小鼠用异氟烷麻醉，用7-0聚丙烯纺织纤维在接近三根分叉部的神经周围结扎3次(结扎之间1mm)。将结扎线松松地打结直到观察到同侧后肢短暂抽动。对于脊柱鞘内注射，用30G针在L5和L6水平之间进行脊髓穿孔以将试剂(10μl)递送至脑脊髓液。
疼痛的行为测试。在测试前使动物习惯于环境至少2天。以盲法测试所有行为。通过每5分钟测量小鼠花费在舔舐或退缩受累爪上的时间(秒钟)45分钟，来评价福尔马林引发的自发性炎症性疼痛。为了测试神经损伤后的机械灵敏度，把小鼠关在置于升高的金属网底上的箱中，用垂直于足跖面中部呈现的具有对数递增刚度的一系列vonFrey毛(0.02-2.56g，Stoelting)刺激其后爪。通过Dixon上下方法，测定50%爪缩回阈值。热灵敏度用Hargreaves辐射热仪器(IITCLifeScience)测试，并表示为缩爪潜伏期(PWL)。调节辐射热强度，使得基础PWL介于9和12s之间，防止组织损伤的截断值为20s。
为了测试运动功能，使用转棒系统。测试小鼠以10分钟间隔分开的3次踪迹，在试验期间，在3分钟内转速从2转/分钟加快到20转/分钟(r.p.m.)，记录跌落潜伏期。
脊髓切片制备和膜片钳记录。在乌拉坦麻醉(1.5-2.0g/kg，i.p.)下，从小鼠(4-7周龄)中取出腰脊髓的一部分(L4-L5)，保持在预先氧化的冰冷Krebs溶液中。在振动微型切片机上切取横切片(400-600μm)。将切片用Kreb溶液(8-10ml/分钟)灌注，Kreb溶液在实验前至少1-3小时在36±℃下用95%O2和5%CO2饱和。Kreb溶液含有(单位mM)：NaCl117、KCl3.6、CaCl22.5、MgCl21.2、NaH2PO41.2、NaHCO325和葡萄糖11。
以电压钳方式从laminaIIo神经元中进行全细胞膜片钳记录。膜片吸液管(Patchpipette)由薄壁的硼硅酸盐玻璃毛细管管材(1.5mm外径，WorldPrecisionInstruments)生产。在建立全细胞配置后，将神经元保持在-70mV电位下以记录sEPSC。典型膜片吸液管的电阻为5-10M?。内部溶液含有(单位mM)：葡糖酸钾135、KCl5、CaCl20.5、MgCl22、EGTA5、HEPES5和ATP-Mg5。用Axopatch200B放大器(AxonInstruments)以电压钳方式放大膜电流。信号以2kHz过滤，并以5kHz数字化。应用pCLAMP10软件，用个人计算机存储数据并用MiniAnalysis(SynaptosoftInc.)分析。
数据分析。为了获得描述1E16对NaV通道电流的作用的浓度反应曲线，绘制不同的1E16浓度下的峰值振幅。然后应用Origin软件(Origin,Northampton,MA,USA)将该图拟合至Hill方程式，y/ymax=[A]nH/([A]nH+[IC50]nH)，其中y为指定的1E16浓度下的峰值电流，ymax为最大峰值电流，IC50为产生半最大作用的1E16的浓度，[A]为1E16的浓度，nH为Hill系数。应用Origin软件获得IC50值。所有值表示为均值±S.E.M。应用非配对t检验测定对照值和处理值的均值间的差异。p<0.05的值视为统计显著性。所有数据表示为均值±S.E.M。对于脊髓的电生理学，显示在药物灌注期间自基线水平变化大于5%的切片记录为有反应的切片。收集基线记录2分钟，分析未配对双尾斯氏t检验，应用药物处理的前2分钟的记录。应用斯氏t检验(2组)或单因素ANOVA，接着事后Bonferroni检验，分析行为数据。统计显著性的标准为P<0.05。
电压传感器结构域(VSD)表达、纯化和ELISA测定法。将相当于人NaV1.7DIIVSD的NaV1.7基因的一部分克隆至pFastbac1载体中，并按照生产商的方法(Bac-to-Bac表达系统，Invitrogen)获得重组杆状病毒。对于蛋白质表达，将sf9细胞用重组杆状病毒感染，在72小时感染后通过离心收获。通过均质化使细胞破裂，然后在补充1g十二烷基麦芽糖苷(DDM，Affymetrix)/10g细胞重量的再悬浮缓冲液(150mMNaCl，50mMTris，pH8.0)中搅拌的同时温育。通过离心(30,000g×20分钟)除去去污剂不溶材料，将上清液与Co2+树脂(TALONMetalAffinityResins，Clontech)一起温育。树脂用含有1mMDDM的再悬浮缓冲液洗涤，然后电压传感器结构域用补充400mM咪唑的洗脱缓冲液(300mMNaCl、20mMTris、1mMDDM，pH8.0)洗脱。将VSD蛋白(1μg)加入MaxiSorp96孔板(MAXISORP平底96孔板，Nunc)的各孔中，然后在4℃下温育过夜。各孔用含0.5mMDDM的PBS洗涤3次，然后在室温下在振荡的同时用封闭缓冲液(0.5%BSA和含0.5mMDDM的PBS)封闭。将1I5和1E16(各2μg)两者在室温下温育1小时。将第二Ab(1ng过氧化物酶缀合的抗小鼠)在室温下温育1小时，板用TMB(3,3′,5,5′-四甲基联苯胺)过氧化物酶底物系统(SUREBLUERESERVETMBMicrowellPeroxidaseSubstrate，KPL)显色，用1N硫磺酸停止，然后在405nm下测量所得吸光度。
肽封闭实验。在用NaV1.7cDNA瞬时转染的HEK293细胞中使用全细胞膜片钳记录进行肽-封闭实验。一旦建立全细胞配置，便先在1E16和肽两者不存在时记录电流-电压关系，然后在加入1E16(100nM)和肽(1μM)两者后记录。在洗出后，只加入1E16(100nM)，然后记录电流-电压关系。为了记录电流-电压关系，把细胞保持在?120mV下，以10mV增量在?80和+60mV之间通过30ms电压阶跃引发电流迹线。通过对归一化峰值电流(I/Imax)随去极化电位的变化作图，生成I-V曲线。
DRG电物理记录。将小鼠(6-8周)用乌拉坦(50mg/kg，i.p.)麻醉，从脊柱取出L4-L5背根节(DRG)，并置于冷的充氧ACSF中。ACSF含有(单位mM)：NaCl125、KCl2.5、NaH2PO41.2、MgCl21.0、CaCl22.0、NaHCO325和D-葡萄糖10。在显微镜下轻轻去除结缔组织，在通过用95%O2和5%CO2轻轻充气搅拌的同时，使神经节用1.0mg/ml蛋白酶(Sigma)和1.6mg/ml胶原酶(Sigma)的混合物在37摄氏度下消化30分钟。将玻璃记录移液管充满基于Cs+的溶液(其含有(单位mM)：Cs2SO4110、MgCl23、CaCl21、EGTA3、HEPES40和NaCl5)，同时将K+和Ca2+通道阻断剂加入浴液中(该溶液含有(单位mM)：NaCl100、KCl3、NaH2PO41.2、MgCl21.0、CaCl21.0、TEA-Cl40、BaCl21、CsCl1、4-AP2、CdCl20.1、HEPES10和D-葡萄糖100)。在-60mV的膜钳制电位下，通过施加从-80mV到0mV的去极化缓变电流3秒钟，在小型DRG神经元中记录持续钠电流(INaP)。
瘙痒模型和瘙痒的行为测试。化合物48/80和氯喹购自Sigma-Aldrich。在分析前使小鼠每天习惯于测试环境至少2天。在注射前一日给小鼠颈背部剃毛。把小鼠留在升高的金属网底上的小塑料室(14×18×12cm)中，允许在检查前习惯30分钟。为了诱发急性瘙痒，将50μl瘙痒剂化合物48/80(100μg)或氯喹(200μg)皮内注射到颈背，或鞘内注射GRP(1nmol)，在注射后每5分钟统计搔抓次数30分钟。当小鼠抬起其后爪搔抓剃毛区并将爪放回地面或放到口中以舔舐时统计搔抓。
为了引起慢性瘙痒，依次给颈皮肤一天两次涂抹丙酮和乙醚(1:1)及水(AEW)为期4天，通过在第5天统计搔抓数60分钟，来检查自发性瘙痒。为了测定慢性瘙痒诱导的腰浅表脊髓中突触可塑性，还给后爪涂抹AEW。
通过将半抗原1-氟-2,4-二硝基苯(DNFB)施于背部皮肤，产生慢性瘙痒的变应性接触性皮炎(ACD)模型。将DNFB溶于丙酮:橄榄油(4:1)的混合物中用于敏化和攻击。通过局部施用于剃毛腹部皮肤约2cm2面积，用0.5%DNFB溶液(50μl)使小鼠敏化。5天后，通过涂抹剃毛的颈区，用0.2%DNFB溶液(30μl)攻击小鼠，然后每隔一天攻击达1周。在每次攻击后24小时，拍摄自发性搔抓行为1小时。
以盲法进行行为试验。
脊髓药物递送。对于脊柱鞘内注射，用30G针在L5和L6水平之间进行脊髓穿孔以将试剂(10μl)递送至脑脊髓液中。
在离解的DRG神经元和整个固定DRG中的全细胞膜片钳记录。从小鼠(4-6周)中无菌取出解离的DRG，与胶原酶(1.25mg/ml，Roche)/分散酶-II(2.4单位/ml，Roche)一起在37℃下温育90分钟，然后在37℃下用0.25%胰蛋白酶消化8分钟，接着是0.25%胰蛋白酶抑制剂。在0.05%DNA酶I(Sigma)存在下，用过火焰的巴氏吸管将细胞机械解离。将DRG细胞铺于玻璃盖玻片上，在含5μMAraC和5%二氧化碳的neurobasal成分确定的培养基(具有2%B27补充剂，Invitrogen)中在36.5℃下生长。用前使DRG神经元生长24小时。
从脊柱仔细地取出L4-L5整个固定DRG，放入冷的加氧ACSF中。在显微镜下轻轻去除结缔组织，将神经节用1.0mg/ml蛋白酶和1.6mg/ml胶原酶(Sigma)的混合物在37℃下消化30分钟。在室温下将神经节转移到储备室中，该室含有用95%O2和5%CO2充气的正常无的Mg2+ACSF与CNQX(2μM)。
用Axopatch-200B放大器(AxonInstruments)和Digidata1440A数据采集系统(AxonInstruments)，在室温下(28℃)进行全细胞电压和电流钳记录以分别测量瞬时钠和持续钠电流和动作电位。从硼硅酸盐毛细管(ChaseScientificGlassInc.)拉出膜片吸液管。当注满移液管溶液时，移液管的电阻为4-5MΩ。连续灌注记录室(300μl)(3-4ml/分钟)。补偿串联电阻(>80%)，进行漏电减法。以2KHz对数据进行低通滤波，以10KHz抽样调查。在实验和分析期间应用pClamp10(AxonInstruments)软件。
对于钠电流记录，移液管溶液含有(单位mM)：CsCl100、L-谷氨酸钠5、TEACl30、CaCl20.1、MgCl22、EGTA11、HEPES10、用CsOH调节于pH7.4。外部溶液由以下组成(单位mM)：NaCl90、氯化胆碱30、TEACl20、CaCl20.1、MgCl25、CoCl25、HEPES10、葡萄糖10，用NaOH调节至pH7.4。在电压钳实验中，从膜钳制电位-70mV通过试验脉冲至+0mV引起瞬时钠电流(INa)。在-60mV膜钳制电位下通过从-80至-10mV施加3s去极化缓变电流，记录持续钠电流(INaP)(Xie等，2011)。应用Origin软件(Origin,Northampton,MA,USA)，将图拟合。电流钳实验的移液管溶液由以下组成：(单位mM)：葡糖酸钾145、MgCl22、CaCl21、EGTA10、HEPES5、K2ATP5，用KOH调节至pH7.4。外部溶液含有(单位mM)：NaCl140、KCl5、MgCl21、CaCl22、HEPES10、葡萄糖10，用NaOH调节至pH7.4。在电流钳实验中，以具有200pA振幅的1秒钟去极化电流脉冲，在电流钳(-60mV)下记录动作电位。
实施例2
单克隆抗体(mAb)产生
根据细菌NaV通道NaVAb的晶体结构，选择相当于NaV1.7的DII电压传感器开关的尖端(环)(即S3-S4环)的肽，而不是使用完整通道作为用于产生抗体的抗原(图4B)。还选择相当于NaV1.7的DIIS1-S2环的肽作为阴性对照，因为在膜电位变化时S1-S2环不移动，因此与S1-S2环结合的mAb不会显著影响NaV1.7通道的门控(图4C)。针对以下各区产生一种mAb：1E16单克隆抗体(即钠通道电压传感器单克隆抗体(因此在本文亦称为SVmab1))识别NaV1.7的S3-S4环，和对照1I5单克隆抗体(在本文亦称为CTmab)识别NaV1.7的S1-S2环。两种抗体属于同一亚型，并且对重组DII电压传感器结构域显示阳性ELISA反应，证实这些mAb识别完整电压传感器结构域中其各自的靶环(图5)。
实施例3
1E16mAb以应用(状态)依赖性方式稳定NaV1.7的关闭状态
为了测试1E16和1I5mAb对NaV1.7的作用，使用全细胞电压钳配置，对瞬时表达NaV1.7的HEK293细胞进行电生理记录(即膜片钳记录)。通过从?120mV的膜钳制电位起以10mV增量在?80和+60mV之间的30ms电压阶跃引发电流迹线。当将1μM1I5mAb加入胞外侧时，在峰值钠电流上未观察到显著变化(图6A和6B)。然而，100nM1E16mAb产生峰值钠电流的显著减少(图6C和6D)。在加入100nM1E16mAb时，对照1I5mAb-和1E16mAb改进的电流的电导系数-电压关系的比较显示去极化移位(约20mV)(图6E)。相比之下，在加入1E16mAb时，稳态失活曲线的比较显示半失活电压无变化(图6F)。
靶向NaV通道的现有药物显示针对状态(应用)依赖性抑制的适度选择性。因此，为了测试1E16mAb对NaV1.7的作用是否是依赖于状态的，在含或不含100nM1E16mAb的情况下，在3种不同的频率(0.1、2和10Hz)下，在自?120mV的膜钳制电位起30ms去极化脉冲至?10mV期间引发电流(图7A和16)。当施加较高频率脉冲时，通道抑制的速率提高。出乎意料的是，通过1E16mAb的通道抑制的最大程度也随较高频率加大(图7A和16)。上述频率下的浓度反应关系显示在频率从0.1到10Hz增加时，效能(IC50自106nM到16.7nM)和功效(最大抑制程度从84%到99%)两者提高(图7B)。
通过1E16mAb降低NaV1.7的电流-电压关系中的电流振幅和去极化移位表明1E16mAb至少部分通过稳定NaV1.7的关闭状态抑制NaV1.7。封闭状态的这种稳定类似于肽毒素Hanatoxin对KV2.1或ProTx-II对NaV通道的作用。然而，与Hanatoxin或ProTx-II不同，1E16mAb显示NaV1.7的状态依赖性抑制，因此NaV1.7受1E16mAb的抑制通过不同机制产生。
实施例4
1E16mAb对NaV1.7有特异性
为了测试1E16mAb对NaV1.7的作用是否是亚型特异性的，对在HEK293细胞中瞬时表达的不同的NaV亚型(NaV1.1-NaV1.8)进行了电生理记录。当绘制电流-电压曲线时，将10μM1E16mA加入胞外侧显示对大多数NaV亚型无可观的抑制(除对NaV1.6的部分作用以外)(图7C)。鉴于NaV1.6和NaV1.7的S3和S4环之间的序列相似性，预期在1E16mAb的较高浓度下，1E16mAb对NaV1.6的部分抑制作用(图4B和8)。虽然未测试NaV1.9，但是鉴于NaV1.7和NaV1.9之间S3-S4环的氨基酸序列显著不同，1E16mAb会对NaV1.9具有显著作用是不可能的(图4B)。当绘制剂量反应曲线时，就效能和功效而言，观察到1E16mAb对NaV1.7是高度特异性的(图7D)。1E16mAb以约1/200倍较低的效能和约1/2倍较低的功效(约44%最大抑制)影响NaV1.6。1E16mAb对其余的NaV亚型没有显著作用，因为甚至在30μM的1E16mAb下观察到约10-20%的最大抑制作用，1/数百倍较低的效能。如果同时考虑效能和功效，1E16mAb对NaV1.7的选择性是对其它的NaV亚型的400倍-1500倍(表4)。
表4
最大抑制(%) IC50 (μM)* 对NaV1.7的选择性
Nav1.1 20.7 ± 9.2 6.3 ± 4.4 861.5
Nav1.2 18.7 ± 9.9 9.0 ± 9.8 1362.3
Nav1.3 16.2 ± 7.6 8.7 ± 4.8 1520.1
Nav1.4 21.5 ± 9.4 7.9 ± 6.6 1040.1
Nav1.5 19.1 ± 7.5 5.6 ± 7.7 829.9
Nav1.6 44.2 ± 5.9 6.3 ± 2.2 403.5
Nav1.7 86.9 ± 2.9 0.0307 ± 0.0019 1
Nav1.8 22.1 ± 7.8 5.2 ± 6.9 666.1
选择性=(MaxNav1.7/MaxNav1.x)X(IC50Nav1.x/IC50Nav1.7)
*IC50值在2Hz下测量，并表示为均值±SEM，n=6-10/各亚型。
实施例5
1E16mAb与NaV1.7的电压传感器开关的环相互作用以抑制NaV1.7
为了测试所观察到的1E16mAb的作用是否产生于与NaV1.7的电压传感器开关的尖端(环)特异性相互作用，在1E16mAb和用作产生1E16mAb的抗原的肽(即SEQIDNO:21)两者存在时进行Nav1.7的电生理记录(图9)。1μM肽的存在基本上阻断100nM1E16mAb对NaV1.7的抑制作用，证实所观察到的抑制作用是由NaV1.7的电压传感器开关的尖端(环)和1E16之间的相互作用所致。
实施例6
1E16mAb减轻炎症性疼痛
福尔马林模型(即小鼠炎症性疼痛模型)中，第1期和第2期疼痛在DRG神经元缺失NaV1.7后被抑制。检查福尔马林模型以确定在福尔马林模型中1E16mAb是否可通过抑制NaV1.7，来减轻或阻断疼痛感觉(即提供疼痛缓解)。具体来说，通过腰穿孔经脊柱鞘内(i.t.)途径给予1E16mAb以靶向脊髓和背根节(DRG)初级感觉神经元两者以确定1E16mAb是否可减轻福尔马林诱导的炎症性疼痛。用于产生1E16mAb的肽(SEQIDNO:21)在人和小鼠之间具有是相同的氨基酸序列，因此，至于小鼠NaV1.7(mNaV1.7)和人NaV1.7(hNaV1.7)，预期通过1E16mAb引起类似的抑制作用。
通过足跖内注射给予稀福尔马林(5%)的足跖内注射，这引起2期炎症性疼痛达45分钟(代表性数据见图10A和22A)。鞘内给予的1E16mAb(1和10μg，即0.006和0.06nmol)产生第2期疼痛的可观抑制和第1期疼痛的中等抑制(代表性数据见图10A、10B、22A和22B)。具体来讲，1E16mAb(1和10μg)的脊柱注射在疼痛的第2期中产生剂量依赖性抑制(图10A、10B)。还观察到在疼痛的第1期中通过1E16mAb(10μg)引起的中等抑制。在该模型中，在第1期和第2期两期中，对照抗体(1I5)显示对炎症性疼痛无作用(代表性数据见图10A、10B、22A和22B)。因此，对NaV1.7有特异性的1E16mAb抑制炎症性疼痛。
1E16mAb(SVmab1)通过静脉内(i.v.)途径的全身注射(10和50mg/kg，即0.06和0.3μmol/kg)也在疼痛的两期中剂量依赖性地抑制福尔马林诱导的疼痛(图22D和E)。如所预期的，足跖内注射1E16mAb(50μg，i.pl.)也有效地减轻第1期和第2期的疼痛(图24)。
1E16mAb的止痛剂量(0.06nmol，i.t.和0.3μmol/kg，i.v.)低于吗啡(一种广泛使用的镇痛药)的止痛剂量(0.1-1nmol，i.t.和0.3-3μmol/kg，i.v.)。
另外，福尔马林诱导的爪水肿被全身1E16mAb抑制(SVmab1，图22F)，表明NaV1.7也对神经原性炎症起作用。
实施例7
1E16mAb减轻神经性疼痛
神经性疼痛对镇痛药可能有更多的抗性，因此，检查了1E16mAb在神经性疼痛小鼠模型中的功效。所述神经性疼痛模型由坐骨神经的慢性压迫损伤(CCI)诱导。
在CCI手术后3天明显的爪缩回阈值降低(代表性数据见图10C和22G)表明机械性异常性疼痛，一种神经性疼痛的主要特征。通过1E16mAb(50μg，即约0.3nmol)的鞘内注射，这种异常性疼痛被短暂逆转几小时(代表性数据见图10C和22G)。此外，1E16mAb通过i.v.途径(10mg/kg)的全身注射，在神经损伤后7天给予，也有效减轻机械性异常性疼痛(图10D)。另外，1E16mAb(SVmab1)通过i.v.途径(10和50mg/kg)的全身注射在逆转已建立的机械性异常性疼痛中也是有效的，且在注射后止痛作用持续24小时(图22H)。1E16mAb的多次注射显示无抗伤害感受耐受性的迹象(图22H)。因此，用1E16mAb靶向NaV1.7通过中枢机制(鞘内/脊柱途径)和外周机制(全身途径)缓解炎性(如上所述)和神经性疼痛两者。
还研究了神经性疼痛中抗体对突触传递的作用。laminaIIo神经元中的sEPSC在CCI后在神经性疼痛中增加(代表性数据见图14A、14B、23K和23L)。引人注目的是，在神经性疼痛中1E16mAb(SVmab1)在抑制sEPSC时更有效(约50%)，并且在TTX(1μM)和1E16mAb(300nM)治疗组之间无差异(代表性数据见图14A、14B、23K和23L)。因此，NaV1.7在脊髓伤害感受突触传递起主要作用，并且在神经性疼痛中主要促进由TTX-敏感性钠通道介导的突触传递。
因为DRG位于外周神经系统，并且NaV1.7由小的伤害感受DRG神经元表达，所以还在小型DRG神经元中测试了1E16mAb对NaV1.7介导的持续钠电流的作用。整个固定DRG记录显示DRG神经元中的持续钠电流(INaP)被1E16mAb(300nM，图11A和11B和图17)部分抑制(分别约42%和约37%，图11B和17，其显示了代表性数据)。通过CCI的神经损伤增加INaP电流，且在这种神经性疼痛情况下，1E16mAb(300nM)产生电流的较大抑制(约51%和约50%)(分别为图11B和17，其显示代表性数据)。在神经性疼痛情况下通过1E16mAb对电流的这种较高抑制与上述HEK293细胞中观察到的通过1E16mAb对NaV1.7的状态依赖性抑制一致。
实施例8
1E16mAb以剂量依赖性方式降低sEPSC频率并抑制脊髓背角中的伤害感受突触传递
为了测定脊柱给予1E16mAb(SVmab1)诱导疼痛缓解的突触机制，在脊髓切片中进行了膜片钳记录以测量对于疼痛传递是关键的laminaIIo神经元中的自发性兴奋性突触后电流(sEPSC)。LaminaIIo中间神经元形成以C-纤维作为输入和laminaI投射神经元作为输出的疼痛回路。用1E16mAb(7、70和300nM)灌注脊髓切片以剂量依赖性方式降低sEPSC频率(代表性数据见图10E、10F、23I和23J)，且不影响sEPSC的振幅。在300nM的剂量下，1E16mAb抑制sEPSC的频率达48%。1E16mAb还延迟在C-纤维强度下由背根刺激诱导的laminaII0神经元中动作电位的传导(图20)。相比之下，对照mAb1I5(300nM)对sEPSC频率没有作用(代表性数据见图10E、10F、23I和23J)。
出于比较，河豚毒素(TTX)(1μM)降低sEPSC频率达60%(图10F)。这显著高于300nM1E16mAb(图23J)。TTX是一种抑制钠通道的亚类(包括NaV1.7)的小分子毒素。这些通道被称为TTX敏感型通道。该数据显示在促进sEPSC的TTX敏感型通道中，Nav1.7起主要作用，因为1E16抗体大大降低sEPSC。因此，这些数据还表明，NaV1.7在由TTX敏感型钠通道介导的脊髓伤害感受突触传递中起作用。总之，1E16mAB通过抑制DRG神经元中的NaV1.7介导的钠电流(如上文实施例6和7所述)和脊髓神经元中的突触传递两者，来减轻急性和慢性疼痛。
实施例9
1E16mAb的鞘内注射不影响小鼠的运动协调和平衡
如上所述，1E16mAb通过稳定NaV1.7的关闭状态抑制NaV1.7。通过1E16mAb对NaV1.7的这种抑制减少持续钠电流并抑制sEPSC的频率。另外，1E16mAb，通过其对NaV1.7的抑制，通过中枢机制(鞘内/脊柱途径)和外周机制(全身途径)两者缓解炎症性疼痛和神经性疼痛。为了确定给予1E16mAb是否导致上述作用以外的作用(即副作用)，在注射对照mAb1I5和1E16mAb之前和之后检测了小鼠的运动协调和平衡。
具体地讲，在鞘内注射1I5(50μg)和1E16(50μg)之前(即图12和22C中的BL(基线))和之后，测量小鼠的跌落潜伏期(即在转棒上的时间)。在注射各抗体后2.5小时(h)，测量跌落潜伏期，各组中所研究的小鼠数为5只。如图12和22C的代表性数据所示，1E16mAb(在高剂量下通过i.t.途径)对运动功能没有作用(P>0.05)，因此，1E16mAb的作用对NaV1.7是特异性的，并减轻疼痛。这些数据表明，1E16mAb可缓解疼痛，同时不影响其它功能，例如运动协调和平衡。
实施例10
与人NaV1.7结合的1E16抗体的表观KD
通过从电生理学记录获得解离常数(KD)，来检查1E16抗体对人NaV1.7(hNaV1.7)的亲和力。具体地讲，使hNaV1.7在HEK293细胞中表达，并使用全细胞电压钳配置获得电生理记录。在不同浓度的1E16抗体存在下，在以10Hz的频率从-120mV的膜钳制电位起到-10mV的30毫秒(ms)去极化脉冲期间，引发电流。
应用一部位(one-site)结合方程式：Y=Bmax ●X/(KD+X)，获得KD值。Y为结合的分数或特异性结合。Bmax为结合部位的最大数目。KD为表观解离常数。X为1E16抗体的浓度。另外，Y=1-I/IO。I为加入1E16抗体后的峰值钠电流。IO为加入1E16抗体前的钠电流。
图13显示E16抗体的浓度与结合的分数。数据表示为均值±S.E.M.(n=10)。Bmax的拟合值为1.2±0.1，KD的拟合值为22.9±5.7nM。
实施例11
1E16mAb减轻急性和慢性瘙痒和慢性瘙痒相关突触传递
为了研究NaV1.7在瘙痒感中的作用，在将依赖组胺的瘙痒剂(化合物48/80)和不依赖组胺的瘙痒剂(氯喹，CQ)皮内注射至颈背后，通过观察小鼠中的搔抓行为，检查1E16mAb对急性瘙痒的作用。1E16mAb(50μg)的鞘内注射不仅抑制化合物48/80诱导的搔抓(代表性数据见图15A、18A和21)，而且还显著抑制CQ诱导的搔抓(代表性数据见图15B、18B和21)，表明NaV1.7是诱导依赖组胺和不依赖组胺的瘙痒两者所必需的。
为了解1E16mAb对急性瘙痒感的抑制机制，1E16mAb是否减轻鞘内引入的胃泌素释放肽(GRP)诱导的急性瘙痒。GRP通过结合并激活浅层背角神经元中的GRP受体(GRPR)而介导瘙痒。1E16mAb(50μg)的鞘内注射有效抑制GRP(1nmol，i.t.)介导的急性瘙痒(即搔抓)，因此表明NaV1.7在瘙痒反应性神经元中表达，在急性瘙痒感中起作用，并参与脊柱GRPR介导的瘙痒传递(代表性数据见图15C和18C)。
为了确定NaV1.7在慢性瘙痒中的作用，给小鼠背部皮肤涂抹丙酮和乙醚，接着涂抹水(AEW)持续5天以诱导干燥皮肤损害。在AEW处理后5天，小鼠显示自发性搔抓，并且这种AEW引发的自发性瘙痒也被通过鞘内途径(50μg，代表性数据见图15D和18D)或i.v.途径(10mg/kg，代表性数据见图15E和18E)的1E16mAb抑制。
在脊髓切片的laminaIIo神经元中，检查了1E16mAb是否还调节瘙痒相关突触传递。AEW处理增加laminaII神经元的sEPSC(代表性数据见图15F、15G、18I和18J)，表明慢性瘙痒增加兴奋性突触传递。在慢性瘙痒中，1E16mAb还有效抑制sEPSC达约25%(图15F和15G)。
通过半抗原2,4-二硝基氟苯(DNFB)产生慢性瘙痒的变应性接触性皮炎(ACD)模型。背部皮肤用DNFB处理诱导逐渐增加的搔抓(图18F)，其被i.t.1E16mAb(50μg)和i.v.1E16mAb(50mg/kg)(图18G和18H)两者减少。
实施例12
天然DRG神经元中1E16mAb调节钠电流和动作电位
因为NaV1.7通过小型伤害感受DRG神经元大量表达，所以在离解的小型DRG神经元中，通过记录瞬时钠电流(INas)，检查了1E16mAb是否也可调节天然神经元的NaV1.7。电流-电压关系显示1E16mAb(7、70和300nM)剂量依赖性地抑制峰值INa，但1I5mAb(300nM)没有作用(图23A)。进一步的分析显示，1E16mAb在300nM下抑制INa达70%(图23B和23C)。相比之下，INa在大型DRG神经元中只被TTX(1μM)但非1E16mAb(300nM)抑制，表明了1E16mAb对小型神经元的特异性作用(图23D)。在电流注入之后，1E16mAb还抑制离解的小型DRG神经元的动作电位(图23E、23F和19A)。
还在小型DRG神经元中测试了1E16mAb(SVmab1)对NaV1.7介导的持续钠电流(INaP)的作用。1E16mAb，而非1I5(300nM)大大抑制INaP(62%、图19B)。还使用整个固定DRG，记录在离体条件下INaP。在该制备下，小型神经元中的INaP被1E16mAb部分(约37%)抑制(300nM，图23G和23H)。在离解的DRG神经元(约62%)和整个固定DRG神经元(约37%)中INaP抑制的差异反映了在整个固定记录中有限的抗体接近。由CCI引起的神经损伤增加INaP，且在这种神经性疼痛情况下1E16mAb(300nM)产生对电流的较大抑制(约50%)，与HEK293细胞中所示其状态依赖性抑制性质一致(图23G和23H)。1E16mAb(300nM)还抑制整个固定DRG神经元中的动作电位和INa(图19C和19D)。
总的来说，以上实施例证实在疼痛和瘙痒的情况下，NaV1.7在调节脊髓突触传递中的作用。IIo神经元中的sEPSC频率(即兴奋性突触传递)在慢性疼痛和瘙痒两种情况下被大大加强。在正常情况下，NaV1.7促进TTX敏感型钠通道介导的兴奋性突触传递。在神经性疼痛中，NaV1.7在兴奋性突触传递中起作用，因为因TTX引起的sEPSC抑制被1E16mAb完全阻止。因此，除所证实的NaV1.7在疼痛开始时的外周机制以外(图23A-23H)，本文提供的结果还证实在脊髓疼痛回路中NaV1.7在调节兴奋性突触传递中的中枢机制(图25)。
上文的实施例还证实，鞘内1E16mAb不仅抑制疼痛和瘙痒，而且还在正常和慢性疼痛和瘙痒情况下抑制浅层背角中laminaIIo神经元内的兴奋性突触传递。上文的实施例进一步证实，在laminaIIo中记录的sEPSC表现基础上的谷氨酸传递的部分是疼痛和瘙痒的传递所必需的(图25)。因此，1E16mAb可通过谷氨酸能神经传递的抑制阻断GRP诱导的瘙痒。
上文的实施例还证实，1E16mAb在完整的laminaIIo和DRG神经元中改变NaV1.7通道功能，并提供治疗作用而不损害运动功能。这些治疗作用包括抑制炎症性和神经性疼痛。治疗作用还包括抑制急性和慢性瘙痒。
实施例13
1E16mAb的Fab片段的晶体结构
采用x-射线晶体学测定1E16mAb的Fab片段(在本文亦称为SVmab1)的结构。结构见图26A和26B。具体来讲，图26A显示1E16mAb的表位结合区的棒状图。图26B显示Fab片段作为带状图的整体图。
将结构精修至1.8?。Rwork/Rfree=19.9/24.0。空间群为P21，其晶胞参数如下：a=43.1，b=71.9，c=67.8?，α=90°，β=97.8°，γ=90°。
要理解，前面的详述和随附实施例只是说明性的，不得视为对本发明范围的限制，本发明的范围只由随附权利要求书及其等同内容限定。
公开的实施方案的各种变化和修改对本领域技术人员而言将是显而易见的。可在不偏离其精神和范围的情况下，进行所述变化和修改，包括而不限于与本发明的化学结构、取代基、衍生物、中间体、合成、组合物、制剂或方法有关的变化和修改。

Claims (87)

1.一种与NaV1.7的电压传感器开关(VSP)结合的分离的抗体或其抗体片段。
2.权利要求1的分离的抗体或抗体片段，其中所述VSP位于NaV1.7的结构域II(DII)上。
3.权利要求2的分离的抗体或抗体片段，其中所述VSP包含SEQIDNO:23所示氨基酸序列。
4.权利要求3的分离的抗体或抗体片段，其中所述分离的抗体或抗体片段与VSP的环结合，且其中所述环包含SEQIDNO:21所示氨基酸序列。
5.权利要求1的分离的抗体或抗体片段，其中所述VSP位于NaV1.7的结构域IV(DIV)上。
6.权利要求5的分离的抗体或抗体片段，其中所述VSP包含SEQIDNO:50所示氨基酸序列。
7.权利要求6的分离的抗体或抗体片段，其中所述分离的抗体或抗体片段与VSP的环结合，且其中所述环包含SEQIDNO:51所示氨基酸序列。
8.权利要求1的分离的抗体或抗体片段，其中所述VSP包含选自以下的氨基酸序列：SEQIDNO:23和SEQIDNO:50。
9.权利要求8的分离的抗体或抗体片段，其中所述VSP包含SEQIDNO:23所示氨基酸序列。
10.权利要求8的分离的抗体或抗体片段，其中所述VSP包含SEQIDNO:50所示氨基酸序列。
11.权利要求1的分离的抗体或抗体片段，其中所述分离的抗体或其抗体片段与VSP的环结合。
12.权利要求11的分离的抗体或抗体片段，其中所述环包含选自以下的氨基酸序列：SEQIDNO:21和SEQIDNO:51。
13.权利要求12的分离的抗体或抗体片段，其中所述环包含SEQIDNO:21所示氨基酸序列。
14.权利要求12的分离的抗体或抗体片段，其中所述环包含SEQIDNO:51所示氨基酸序列。
15.权利要求1的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段抑制NaV1.7。
16.权利要求15的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段以约0.03μM的IC50抑制NaV1.7。
17.权利要求1的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段以约23nM的KD自NaV1.7解离。
18.权利要求1的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体选自：人抗体、免疫球蛋白分子、二硫键连接的Fv、单克隆抗体、亲和力成熟抗体、scFv、嵌合抗体、单结构域抗体、CDR移植抗体、双抗体、人源化抗体、牛源化抗体、犬源化抗体、马源化抗体、猫源化抗体、猪源化抗体、多特异性抗体、Fab、双重特异性抗体、DVD、Fab’、二特异性抗体、F(ab’)2和Fv。
19.权利要求1的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段是人的、牛的、犬的、马的、猫的或猪的。
20.权利要求1的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含选自以下的重链免疫球蛋白恒定结构域：人IgM恒定结构域、人IgG4恒定结构域、人IgG1恒定结构域、人IgE恒定结构域、人IgG2恒定结构域、人IgG3恒定结构域和人IgA恒定结构域。
21.权利要求1的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含重链牛免疫球蛋白恒定结构域、重链犬免疫球蛋白恒定结构域、重链马免疫球蛋白恒定结构域、重链猫免疫球蛋白恒定结构域或重链猪免疫球蛋白恒定结构域。
22.权利要求1的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含轻链牛免疫球蛋白恒定结构域、轻链犬免疫球蛋白恒定结构域、轻链马免疫球蛋白恒定结构域、轻链猫免疫球蛋白恒定结构域或轻链猪免疫球蛋白恒定结构域。
23.权利要求1的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体是单克隆抗体。
24.权利要求1的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含：
(a)包含与SEQIDNO:4所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的可变重链结构域；
(b)包含与SEQIDNO:8所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的可变轻链结构域；
(c)含有包含与SEQIDNO:5所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的互补决定区(CDR)1、包含与SEQIDNO:6所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:7所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或
(d)含有包含与SEQIDNO:9所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:10所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:11所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。
25.权利要求24的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含：
(a)包含与SEQIDNO:4所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的可变重链结构域；
(b)包含与SEQIDNO:8所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的可变轻链结构域；
(c)含有包含与SEQIDNO:5所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:6所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:7所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或
(d)含有包含与SEQIDNO:9所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR1、包含与SEQIDNO:10所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR2和包含与SEQIDNO:11所示氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。
26.权利要求25的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含：
(a)包含SEQIDNO:4的氨基酸序列的可变重链结构域；
(b)包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的可变轻链结构域；
(c)含有包含SEQIDNO:5的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:6的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:7的氨基酸序列的CDR3的可变重链；或
(d)含有包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:11的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。
27.权利要求26的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段含有包含SEQIDNO:5、SEQIDNO:6和SEQIDNO:7的可变重链结构域。
28.权利要求26的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段含有包含SEQIDNO:9、SEQIDNO:10和SEQIDNO:11的可变轻链结构域。
29.权利要求26的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段含有包含SEQIDNO:5、SEQIDNO:6和SEQIDNO:7的可变重链结构域和包含SEQIDNO:9、SEQIDNO:10和SEQIDNO:11的可变轻链结构域。
30.权利要求26的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段含有包含SEQIDNO:4的氨基酸序列的可变重链结构域和包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的可变轻链结构域。
31.权利要求26的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含含有包含SEQIDNO:5的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:6的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:7的氨基酸序列的CDR3的可变重链和含有包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的CDR1、包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的CDR2和包含SEQIDNO:11的氨基酸序列的CDR3的可变轻链。
32.权利要求24、25或26中任一项的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段与NaV1.7结构域II的跨膜螺旋S3和S4之间的环结合。
33.权利要求32的分离的抗体或抗体片段，其中NaV1.7结构域II的跨膜螺旋S3和S4之间的环包含SEQIDNO:21所示氨基酸序列。
34.权利要求24、25或26中任一项的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段抑制NaV1.7。
35.权利要求34的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段通过稳定NaV1.7的关闭状态抑制NaV1.7。
36.权利要求24、25或26中任一项的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体选自人抗体、免疫球蛋白分子、二硫键连接的Fv、单克隆抗体、亲和力成熟抗体、scFv、嵌合抗体、单结构域抗体、CDR移植抗体、双抗体、人源化抗体、牛源化抗体、犬源化抗体、马源化抗体、猫源化抗体、猪源化抗体、多特异性抗体、Fab、双重特异性抗体、DVD、Fab’、二特异性抗体、F(ab’)2和Fv。
37.权利要求24、25或26中任一项的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段是人的、牛的、犬的、马的、猫的或猪的。
38.权利要求24、25或26中任一项的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体是单克隆抗体。
39.权利要求24、25或26中任一项的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含选自以下的重链免疫球蛋白恒定结构域：人IgM恒定结构域、人IgG4恒定结构域、人IgG1恒定结构域、人IgE恒定结构域、人IgG2恒定结构域、人IgG3恒定结构域和人IgA恒定结构域。
40.权利要求24、25或26中任一项的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含重链牛免疫球蛋白恒定结构域、重链犬免疫球蛋白恒定结构域、重链马免疫球蛋白恒定结构域、重链猫免疫球蛋白恒定结构域或重链猪免疫球蛋白恒定结构域。
41.权利要求24、25或26中任一项的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含轻链牛免疫球蛋白恒定结构域、轻链犬免疫球蛋白恒定结构域、轻链马免疫球蛋白恒定结构域、轻链猫免疫球蛋白恒定结构域或轻链猪免疫球蛋白恒定结构域。
42.一种分离的核酸，其编码权利要求1、24、25或26中任一项的抗体或抗体片段。
43.权利要求42的分离的核酸，其中所述核酸编码SEQIDNO:4-11的至少一个氨基酸序列。
44.权利要求42的分离的核酸，其中所述核酸包含SEQIDNO:12-19的至少一个核苷酸序列。
45.一种载体，其包含权利要求42的核酸。
46.一种宿主细胞，其包含权利要求45的载体。
47.一种药物组合物，其包含权利要求1、24、25或26中任一项的抗体或抗体片段。
48.权利要求47的药物组合物，其进一步包含药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
49.权利要求47的药物组合物，其中所述药物组合物包含治疗有效量的权利要求1、24、25或26中任一项的抗体或抗体片段。
50.一种治疗有需要的受试者的疼痛的方法，所述方法包括将权利要求1、24、25或26中任一项的抗体或抗体片段给予受试者。
51.权利要求50的方法，其中所述疼痛是炎症性疼痛、神经性疼痛、痛觉过敏、异常性疼痛、阵发性剧痛症、遗传性红斑性肢痛症、癌症相关疼痛、非典型疼痛、神经原性炎症相关疼痛、慢性疼痛或病理性疼痛或其组合。
52.权利要求51的方法，其中所述炎症性疼痛是关节炎疼痛、牙疼、腰痛、炎性肠病相关疼痛或颞下颌关节(TMJ)相关疼痛或其组合。
53.权利要求51的方法，其中所述神经性疼痛与糖尿病性神经病、化疗、人免疫缺陷病毒(HIV)感染、疱疹后神经痛(PHN)、手术、脊髓损伤或中风或其组合有关。
54.权利要求53的方法，其中所述手术是截肢术、开胸术、疝手术或乳房切除术。
55.权利要求51的方法，其中所述神经原性炎症相关疼痛病况是复杂性区域性疼痛综合征(CRPS)、头痛或偏头痛或其组合。
56.权利要求51的方法，其中所述疼痛与瘙痒有关。
57.权利要求56的方法，其中所述瘙痒是急性瘙痒、慢性瘙痒、依赖组胺的瘙痒或不依赖组胺的瘙痒或其组合。
58.权利要求57的方法，其中所述急性瘙痒由胃泌素释放肽(GRP)介导。
59.权利要求58的方法，其中所述急性瘙痒由浅层背角神经元中的GRP介导。
60.权利要求57的方法，其中所述慢性瘙痒与特应性皮炎、变应性接触性皮炎、银屑病、肾病、肝病、带状疱疹病毒或湿疹或其组合有关。
61.权利要求50的方法，其进一步包括抑制受试者的疼痛。
62.权利要求50的方法，其进一步包括提高受试者的疼痛阈值。
63.权利要求50的方法，其中所述受试者是人、牛、犬、马、猫或猪。
64.一种治疗有需要的受试者的瘙痒的方法，所述方法包括将权利要求1、24、25或26中任一项的抗体或抗体片段给予受试者。
65.权利要求64的方法，其中所述瘙痒是急性瘙痒、慢性瘙痒、依赖组胺的瘙痒或不依赖组胺的瘙痒或其组合。
66.权利要求65的方法，其中所述急性瘙痒由胃泌素释放肽(GRP)介导。
67.权利要求66的方法，其中所述急性瘙痒由浅层背角神经元中的GRP介导。
68.权利要求65的方法，其中所述慢性瘙痒与特应性皮炎、变应性接触性皮炎、银屑病、肾病、肝病、带状疱疹病毒或湿疹或其组合有关。
69.权利要求68的方法，其中所述瘙痒与变应性接触性皮炎有关。
70.权利要求64的方法，其中所述受试者是人、牛、犬、马、猫或猪。
71.一种治疗有需要的受试者的神经原性炎症的方法，所述方法包括将权利要求1、24、25或26中任一项的抗体或抗体片段给予受试者。
72.权利要求71的方法，其中所述神经原性炎症与哮喘、关节炎、湿疹、头痛、偏头痛或银屑病或其组合有关。
73.权利要求71的方法，其中所述受试者是人、牛、犬、马、猫或猪。
74.一种治疗有需要的受试者的咳嗽的方法，所述方法包括将权利要求1、24、25或26中任一项的抗体或抗体片段给予受试者。
75.权利要求74的方法，其中所述咳嗽是病理性咳嗽或慢性咳嗽。
76.权利要求74的方法，其中所述受试者是人、牛、犬、马、猫或猪。
77.一种用于检测NaV1.7的试剂盒，其中所述试剂盒包含权利要求1、24、25或26中任一项的抗体或抗体片段。
78.一种与NaV1.7结合的分离的抗体或其抗体片段，其中所述抗体或抗体片段与SEQIDNO:20所示氨基酸序列结合。
79.权利要求78的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段不抑制NaV1.7。
80.一种肽，其包含
(a)与SEQIDNO:21所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列；
(b)与SEQIDNO:23所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列；
(c)与SEQIDNO:50所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列；或
(d)与SEQIDNO:51所示氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列。
81.权利要求80的肽，其中所述肽包含
(a)与SEQIDNO:21所示氨基酸序列具有至少95%同一性的氨基酸序列；
(b)与SEQIDNO:23所示氨基酸序列具有至少95%同一性的氨基酸序列；
(c)与SEQIDNO:50所示氨基酸序列具有至少95%同一性的氨基酸序列；或
(d)与SEQIDNO:51所示氨基酸序列具有至少95%同一性的氨基酸序列。
82.权利要求81的肽，其中所述肽包含
(a)SEQIDNO:21所示氨基酸序列；
(b)SEQIDNO:23所示氨基酸序列；
(c)SEQIDNO:50所示氨基酸序列；或
(d)SEQIDNO:51所示氨基酸序列。
83.权利要求82的肽，其中所述肽包含SEQIDNO:21所示氨基酸序列。
84.权利要求82的肽，其中所述肽包含SEQIDNO:23所示氨基酸序列。
85.权利要求82的肽，其中所述肽包含SEQIDNO:50所示氨基酸序列。
86.权利要求82的肽，其中所述肽包含SEQIDNO:51所示氨基酸序列。
87.一种分离的核酸，其编码权利要求80-85或86中任一项的肽。
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