CN105726349A

CN105726349A - 一种具有抑制酪氨酸酶作用的组合物及应用

Info

Publication number: CN105726349A
Application number: CN201610107376.1A
Authority: CN
Inventors: 王艳; 叶柳青; 刘园园; 庄朋伟; 王丽峰; 宋春敬; 胡静; 郑琳
Original assignee: Tianjin University of Traditional Chinese Medicine
Current assignee: Tianjin University of Traditional Chinese Medicine
Priority date: 2016-02-26
Filing date: 2016-02-26
Publication date: 2016-07-06

Abstract

本发明公开了一种具有抑制酪氨酸酶作用的组合物及应用，该组合物按质量比为0.33～3的比例由光甘草定和白藜芦醇组成。实验证明，本发明的组合物具有协同抑制酪氨酸酶的作用，可用于治疗黄褐斑、痤疮愈合、雀斑、老年斑、晒后修复及抗氧化。

Description

一种具有抑制酪氨酸酶作用的组合物及应用

技术领域

本发明涉及一种组合物，特别是涉及一种具有抑制酪氨酸酶作用的组合物及应用。

背景技术

色素沉着是人体皮肤由于种种原因而致皮肤呈现不同颜色、不同范围及不同深浅的色素变化。常见有黄褐斑、痤疮愈合、雀斑、老年斑。

以黄褐斑为例，它是最常见的黑色素沉着性疾病,多发于中青年妇女脸部裸露的部位,影响美观,同时又难以治疗,是医学领域较难解决的一大疾病问题。其特点有：发病受多种因素影响(紫外线刺激、炎症反应等)、顽固、易复发。现在针对黄褐斑的治疗技术和祛斑产品繁多，但大多费用昂贵，疗效差强人意，且几乎都伴有不良反应。因此，亟需一种成本低、疗效确切、无不良反应的抑制酪氨酸酶作用的药物组合物。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种具有抑制酪氨酸酶作用的药物组合物。

本发明的第二个目的是提供上述组合物在制备抑制酪氨酸酶化妆品或药物的用途。

一种具有抑制酪氨酸酶作用的组合物，按质量比为0.33～3的比例由光甘草定和白藜芦醇组成。

优选的，光甘草定和白藜芦醇的质量比为1。

上述组合物在制备具有抑制酪氨酸酶的药物或化妆品的用途。

实验证明，本发明的组合物具有协同抑制酪氨酸酶的作用，可用于治疗黄褐斑、痤疮愈合、雀斑、老年斑、晒后修复及抗氧化。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，本发明的实施例是为了使本领域的技术人员能够更好地理解本发明，但并不对本发明作任何限制。

实施例1

一种具有抑制酪氨酸酶作用的组合物，按质量比为0.33:1的比例由光甘草定和白藜芦醇组成。

实施例2

一种具有抑制酪氨酸酶作用的组合物，按质量比为1:1的比例由光甘草定和白藜芦醇组成。

实施例3

一种具有抑制酪氨酸酶作用的组合物，按质量比为3:1的比例由光甘草定和白藜芦醇组成。

实施例4、抑制酪氨酸酶作用的实验

1仪器与试剂

1.1实验仪器见表1

表1实验所用仪器一览表

1.2实验试剂见表2

表2实验所用试剂一览表

2样品制备

PBS(pH＝8.0)：分别精确称取磷酸氢二钾5.590g、磷酸二氢钾0.410g，加入少量水溶解后定容至1000ml，0～4℃保存备用。

PBS(pH＝6.8)：分别精确称取磷酸氢二钠1.186g、磷酸二氢钠1.000g，加入少量水溶解后定容至500ml，0～4℃保存备用。

酪氨酸溶液(底物)：准确称取酪氨酸4.500mg加入100μl盐酸(2％)，用pH＝8的PBS稀释到10ml，备用。

20％DMSO溶液：取2ml二甲基亚砜(DMSO)，用pH＝6.8的PBS稀释至10ml，备用。

供试品溶液的配制：分别准确称取光甘草定和白藜芦醇各10mg，用体积浓度为20％DMSO溶液溶解，pH＝6.8的PBS定容到10ml容量瓶中，得到1mg/ml的母液，备用。

光甘草定样品的配置：取光甘草定1mg/ml的母液稀释10倍得到100μg/mL的储备液，将100μg/mL的储备液分别稀释8倍、10倍、16倍、80倍、320倍得到12.5、10、6.25、1.25、0.625和0.313μg/mL的样品溶液。

白藜芦醇样品的配置同光甘草定样品的配置。

实施例1组合物样品的配置：用光甘草定和白藜芦醇稀释至8倍、10倍、16倍、80倍、320倍的溶液，分别取相同浓度的光甘草定溶液1份和白藜芦醇溶液3份混合均匀，即得到光甘草定和白藜芦醇质量比为0.33:1的样品溶液。

实施例2组合物样品的配置：用光甘草定和白藜芦醇稀释至8倍、10倍、16倍、80倍、320倍的溶液，分别取相同浓度的取光甘草定溶液1份和白藜芦醇溶液1份混合均匀，即得到光甘草定和白藜芦醇质量比为1:1的样品溶液。

实施例3组合物样品的配置：用光甘草定和白藜芦醇稀释至8倍、10倍、16倍、80倍、320倍的溶液，分别取相同浓度的光甘草定溶液3份和白藜芦醇溶液1份混合均匀，即得到光甘草定和白藜芦醇质量比为3:1的样品溶液。

3实验方法

按下述内容进行配制：

A：20％DMSO30μL+110μLpH＝6.8的PBS+50μL酪氨酸

B：20％DMSO30μL+160μLpH＝6.8的PBS

C：样品(20％DMSO)30μL+110μLpH＝6.8的PBS+50μL酪氨酸

D：样品(20％DMSO)30μL+160μLpH＝6.8的PBS

完成上述操作，将96孔板37℃水浴恒温10min，然后每孔加入561U/mL的酪氨酸酶50μL，反应40min后迅速置于酶标仪中，测475nm处吸光度值。

4实验数据

表3光甘草定和白藜芦醇单味药对酪氨酸酶抑制作用

表4组合物(光甘草定与白藜芦醇不同比例)对酪氨酸酶的抑制作用

光甘草定随着质量浓度的增加，对酪氨酸酶的抑制率随之增加，实验结果见表3。光甘草定的IC50为1.72μg/mL。

白藜芦醇随着质量浓度的增加，对酪氨酸酶的抑制率随之增加，实验结果见表3。白藜芦醇的IC50为7.50μg/mL。

实施例1组合物(0.33:1)，IC₅₀值为1.096μg/mL，实验结果见表4。

实施例2组合物(1:1)，IC₅₀值为0.239μg/mL，实验结果见表4。

实施例2组合物(3:1)IC₅₀值为0.146μg/mL，实验结果见表4。

5.统计方法

I C 50 a d d = \frac{{IC}_{50 A}}{P_{1} + R \times P_{2}}

R＝IC_50A/IC_50B

γ = \frac{{IC}_{50 A m i x}}{{IC}_{50 A}} + \frac{{IC}_{50 B m i x}}{{IC}_{50 B}}

IC_50Amix、IC_50Bmix分别为组合物中A(光甘草定)、B(白藜芦醇)两种酪氨酸酶抑制剂的IC₅₀值；

IC_50A和IC_50B分别为A、B单独作用时的IC₅₀值。

P₁和P₂分别为A、B两种占总物质的比例。

若γ＝1，表示相互作用为相加；若γ<1，表示相互作用为协同作用，并且γ值越小说明协同作用越强；若γ>1，表示相互作用为拮抗作用。

6统计结果

表5光甘草定和白藜芦醇对酪氨酸酶的抑制率统计分析结果

*：P<0.01

7结果

光甘草定和白藜芦醇的组合物比为0.33:1时，IC_50mix值小于IC_50add，并且相互作用指数γ<1，表明光甘草定和白藜芦醇有协同作用，实验结果见表5。

光甘草定和白藜芦醇的组合物比为1:1时，IC_50mix值小于IC_50add，并且相互作用指数γ<1，表明光甘草定和白藜芦醇有协同作用，实验结果见表5。

光甘草定和白藜芦醇的组合物比为3:1时，IC_50mix值小于IC_50add，并且相互作用指数γ<1，表明光甘草定和白藜芦醇有协同作用，实验结果见表5。

IC_50mix值均小于IC_50add，并且相互作用指数γ均<1，表明光甘草定和白藜芦醇有协同作用，并且光甘草定与白藜芦醇的复配组合中协同作用强弱为：3:1>1:1>0.33:1。

将本发明的组合物按常规方法制备成乳膏、凝胶剂、膜剂用于黄褐斑、痤疮愈合、雀斑、老年斑的治疗。

Claims

1.一种具有抑制酪氨酸酶作用的组合物，其特征是按质量比为0.33～3的比例由光甘草定和白藜芦醇组成。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征是光甘草定和白藜芦醇的质量比为1。

3.权利要求1或2的组合物在制备具有抑制酪氨酸酶的药物或化妆品的用途。