CN105685288A - 一种茶叶组合物及其应用 - Google Patents

一种茶叶组合物及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN105685288A
CN105685288A CN201610038799.2A CN201610038799A CN105685288A CN 105685288 A CN105685288 A CN 105685288A CN 201610038799 A CN201610038799 A CN 201610038799A CN 105685288 A CN105685288 A CN 105685288A
Authority
CN
China
Prior art keywords
camelliae sinensis
folium camelliae
cosmetics
tea
compositions
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201610038799.2A
Other languages
English (en)
Inventor
不公告发明人
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangzhou Danqi Daily Chemical Co Ltd
Original Assignee
Guangzhou Danqi Daily Chemical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangzhou Danqi Daily Chemical Co Ltd filed Critical Guangzhou Danqi Daily Chemical Co Ltd
Priority to CN201610038799.2A priority Critical patent/CN105685288A/zh
Publication of CN105685288A publication Critical patent/CN105685288A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23F—COFFEE; TEA; THEIR SUBSTITUTES; MANUFACTURE, PREPARATION, OR INFUSION THEREOF
    • A23F3/00—Tea; Tea substitutes; Preparations thereof
    • A23F3/06—Treating tea before extraction; Preparations produced thereby
    • A23F3/14—Tea preparations, e.g. using additives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/28—Asteraceae or Compositae (Aster or Sunflower family), e.g. chamomile, feverfew, yarrow or echinacea
    • A61K36/286—Carthamus (distaff thistle)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/46—Eucommiaceae (Eucommia family), e.g. hardy rubber tree
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/48—Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
    • A61K36/484—Glycyrrhiza (licorice)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/82—Theaceae (Tea family), e.g. camellia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Cosmetics (AREA)

Abstract

本发明公开了一种茶叶组合物及其应用，所述茶叶组合物是以杜仲茶、绿茶、红花和甘草通过溶剂浸泡、超声波提取等提取手段制备而得的。本发明所得的茶叶组合物具有促进脂肪细胞凋亡、促进能量代谢和促进淋巴排泄的功效，能作为有效成分添加到瘦腿化妆品中。

Description

一种茶叶组合物及其应用
技术领域
本发明涉及天然植物化学领域和化妆品领域，特别涉及一种茶叶组合物及其应用。
背景技术
肥胖已成为全球最主要的公共健康问题之一，其发生的根本原因是能量的摄入与输出不平衡，导致体内脂肪积累过多，基因、内分泌、生理、营养和社会环境等多种因素都会引起能量失衡。
显然，改变生活方式以及控制脂肪摄入是最好的抗肥胖方法，然而由于现代生活节奏的加快、工作压力的增加以及药物治疗安全性和耐受性的限制，越来越多的人追求具有抗肥胖效果的功能性化妆品。抗肥胖的化妆品作用于需减肥的部位，利用透皮给药的原理，通过按摩、热敷等方式，使抗肥胖药物渗入皮下，抑制脂肪细胞增大，促进多余脂肪的分解和排泄，减少局部脂肪堆积，达到消除肥胖的目的。
目前的抗肥胖化妆品主要通过促使脂肪酶活化、增强淋巴的排泄功能和促进建立新的结缔组织的方式来减少皮下脂肪。长期以来人们认为成年个体脂肪细胞的数量是恒定不变的，近年来的研究显示，脂肪细胞数量也受增殖和凋亡的双重调控，抑制脂肪细胞增殖和诱导脂肪细胞凋亡可望成为肥胖防治的重要手段。
在实现本发明的过程中发现，目前人们有着认为成年个体脂肪细胞的数量恒定不变的技术误区，市面上并没有利用抑制脂肪细胞增殖和诱导脂肪细胞凋亡原理的化妆品产品。
杜仲为杜仲科植物杜仲，具有补中益精气、强筋骨、强志、安胎的功效，有久服轻身耐老之功效，现代研究表明杜仲中富含绿原酸、槲皮素和桃叶珊瑚苷。绿原酸可有效抑制前脂肪细胞的增殖，其抑制作用与抗氧化能力呈显著的线性相关性。槲皮素可明显的抑制前脂肪细胞的增殖，该抑制作用与槲皮素具有强抗氧化作用有关，可直接对淋巴毛细微循环系统发生作用，使淋巴系统具有良好的排泄功能，有利于脂肪的清除，同时对透明质酸酶有明显的抑制作用，能和化妆品中的透明质酸发生协同作用。研究发现桃叶珊瑚苷能促进具有细胞与细胞功能的胶原蛋白质加速新陈代谢，并促进生物中其他蛋白质的合成，建立新的结缔组织，消耗体内的能源，减少积蓄在体内的中性脂肪。同时能促进毛细血管再生，改善局部微循环。
绿茶含多种生物活性成分，如多酚、咖啡因、氨基酸、微量脂质及维生素等。有研究发现富含EGCG(表没食子儿茶素没食子酸酯)的绿茶提取物可升高24小时能量消耗和脂肪氧化、促进人体减重。EGCG能够剂量依赖性地降低分化状态下的前脂肪细胞脂质堆积，并可诱导成熟脂肪细胞凋亡。茶多酚可增强体内脂蛋白酶活性，促进甲肾上腺素诱导脂肪细胞中的脂肪分解，提高激素敏感性脂肪酶的活性，加速体内脂肪组织的氧化分解，刺激产热，达到抗肥胖的目的。
红花是活血通络、祛瘀止痛的良药，能使实验动物的血管扩张，还能使毛细血管网开放数目增加和血细胞聚集程度减轻，有效促进血液循环。红花中富含共轭亚油酸(CLA)，增强EGCG对成熟脂肪细胞的凋亡诱导作用，使EGCG在较低剂量下也能发挥明显的诱导成熟脂肪细胞凋亡的作用。
甘草有调和诸药的作用，加入到化妆品中时能起到表面活性剂的作用，促进有效成分的吸收。
杜仲中的成分能有效抗肥胖，市面上的产品都是口服使用的。杜仲提取物对皮肤具有有益效果，能适用于局部抗肥胖，目前还没有抗肥胖化妆品领域的应用。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于克服长期以来认为成年个体脂肪细胞数量恒定不变的错误观点，提供一种可抑制脂肪细胞增殖和诱导脂肪细胞凋亡的茶叶组合物及其在化妆品中的应用，并提供杜仲在抗肥胖化妆品的新应用。
本发明提供一种茶叶组合物，所述茶叶组合物由杜仲茶、绿茶、红花提取而得，是以如下重量百分比的原料制备的：杜仲茶30-40％，绿茶30-40％，红花10-20％，甘草10-20％。
上述四种成分配伍使用能抑制脂肪细胞的增殖、诱导脂肪细胞凋亡、促进脂肪分解、促进淋巴排泄作用和建立新的结缔组织以增加能量代谢，可作为减肥手段的有效补充。上述原料配比能发挥最佳的协同作用，抗肥胖的功效明显。
在其中一些实施例中，所述杜仲茶是指采取自杜仲树的新叶或芽，未经发酵，经杀青、整形、烘干等工艺而制作的茶叶。
杜仲茶与杜仲皮含有类似化学成分，但杜仲茶中的营养成分和许多功能活性成分的含量比杜仲皮的都要高。多酚类物质易发生酶促反应，杜仲叶在加工初期经过杀青工序钝化了酶的活性，酶促反应被终止，因而杜仲茶中绿原酸和黄酮的留存较多。
本发明提供了一种上述茶叶组合物用于抗肥胖的应用。
上述茶叶组合物可以作为用于抗肥胖的准医药品、化妆品、饮食品、饲料等的有效成分使用。
在其中一些实施例中，所述茶叶组合物作为具有抗肥胖功效的有效成分添加在化妆品中。
上述茶叶组合物经长期实验证明，对皮肤无刺激性，可直接作为有效成分直接添加到化妆品中。
作为化妆品的形态，可以列举乳霜、乳液、油、化妆水、悬浊液、泡沫、凝胶、粉、面膜、贴片、膏贴、粉饼、粉条等化妆品中能够使用的任意形态。
在其中一些实施例中，所述茶叶组合物作为具有抗肥胖的有效成分添加在瘦腿化妆品中。
上述茶叶组合物具有抗肥胖功效外还同时具有促进结缔组织重新建立的作用，能有效的预防、改善或消除橘皮组织，适合使用在最容易产生橘皮组织的腿部上。
本发明提供一种含有上述茶叶提取物的化妆品，所述化妆品中茶叶提取物的含量为2-8wt％，余量为化妆品中允许的载体及其组合。
上述化妆品可以含有本发明所述的茶叶组合物作为有效成分，作为所述的载体，例如可以列举赋形剂、覆膜剂、结合剂、增量剂、崩解剂、稳定剂、抗氧化剂、润滑剂、稀释剂、分散剂、缓冲剂、渗透压调节剂、pH调节剂、乳化剂、防腐剂、表面活性剂、着色剂、紫外线吸收剂、保湿剂、增稠剂、活性增强剂、抗炎症剂、杀菌剂、香料、矫味剂、矫臭剂等。另只要不失去上述茶叶组合物抗肥胖的作用，该化妆品还可以含有其它有效成分或者彩妆成分。
在一些实施例中，所述化妆品包括如下重量百分比的组分：
丙烯酸钠/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物/
聚山梨醇酯-80/异十六烷：0.3-0.7wt％，
甲基异噻唑啉酮：0.06-0.1wt％，
茶叶提取物：2-8wt％，
去离子水：余量。
本发明所述的一种茶叶组合物及其应用有如下有益效果：
(1)能抑制脂肪细胞增殖和诱导脂肪细胞凋亡，有显著的抗肥胖功效。
(2)对皮肤有促进胶原蛋白合成和延缓透明质酸分解的效果。
(3)对皮肤温和，可作为有效成分直接添加到化妆品中，有利于工业生产。
具体实施方式
以下将结合具体实施例对本发明做进一步说明。实施例中所述杜仲茶如无注明，即为杜仲绿茶、杜仲红茶、杜仲乌龙茶任一种。
实施例1
将杜仲茶、绿茶、红花、甘草分别称取350g、350g、150g、150g，分别粉碎至可过60目筛，混合，得到茶叶混合物。在茶叶混合物中加入30％的乙醇水溶液，其中茶叶混合物和乙醇水溶液的料液比g/ml为1:10，浸泡后超声波处理10分钟，料体温度为30℃，过滤，收集滤液。将滤液进行减压蒸馏，蒸馏温度为60℃，蒸馏至滤液体积为原体积的50％，得到茶叶组合物A1。
实施例2
将杜仲茶、绿茶、红花、甘草分别称取350g、350g、150g、150g，分别粉碎至可过60目筛，混合，得到茶叶混合物。在茶叶混合物中加入40％的乙醇水溶液，其中茶叶混合物和乙醇水溶液的料液比g/ml为1:10，浸泡后超声波处理20分钟，料体温度为40℃，过滤，收集滤液。将滤液进行减压蒸馏，蒸馏温度为60℃，蒸馏至滤液体积为原体积的50％，得到茶叶组合物A2。
实施例3
将杜仲绿茶、绿茶、红花、甘草分别称取350g、350g、150g、150g，分别粉碎至可过60目筛，混合，得到茶叶混合物。在茶叶混合物中加入50％的乙醇水溶液，其中茶叶混合物和乙醇水溶液的料液比g/ml为1:10，浸泡后超声波处理30分钟，料体温度为50℃，过滤，收集滤液。将滤液进行减压蒸馏，蒸馏温度为60℃，蒸馏至滤液体积为原体积的50％，得到茶叶组合物A3。
实施例4
将杜仲茶、绿茶、红花、甘草分别称取350g、350g、150g、150g，分别粉碎至可过60目筛，混合，得到茶叶混合物。在茶叶混合物中加入60％的乙醇水溶液，其中茶叶混合物和乙醇水溶液的料液比g/ml为1:10，浸泡后超声波处理40分钟，料体温度为60℃，过滤，收集滤液。将滤液进行减压蒸馏，蒸馏温度为60℃，蒸馏至滤液体积为原体积的50％，得到茶叶组合物A4。
实施例5
将杜仲茶、绿茶、红花、甘草分别称取350g、350g、150g、150g，分别粉碎至可过60目筛，混合，得到茶叶混合物。在茶叶混合物中加入70％的乙醇水溶液，其中茶叶混合物和乙醇水溶液的料液比g/ml为1:10，浸泡后超声波处理50分钟，料体温度为70℃，过滤，收集滤液。将滤液进行减压蒸馏，蒸馏温度为60℃，蒸馏至滤液体积为原体积的50％，得到茶叶组合物A5。
实施例6
将杜仲红茶、绿茶、红花、甘草分别称取350g、350g、150g，150g分别粉碎至可过60目筛，混合，得到茶叶混合物。在茶叶混合物中加入50％的乙醇水溶液，其中茶叶混合物和乙醇水溶液的料液比g/ml为1:10，浸泡后超声波处理30分钟，料体温度为50℃，过滤，收集滤液。将滤液进行减压蒸馏，蒸馏温度为60℃，蒸馏至滤液体积为原体积的50％，得到茶叶组合物A6。
实施例7茶叶组合物中绿原酸含量测定
(1)实验样品：分别取实施例1-6所得的茶叶组合物0.1mL，使用甲醇定容于100mL，取0.1mL再使用甲醇定容于100mL，茶叶组合物A1制得受试物B1，茶叶组合物A2制得受试物B2，茶叶组合物A3制得受试物B3,茶叶组合物A4制得受试物B4，茶叶组合物A5制得受试物B5，茶叶组合物A6制得受试物B6。
(2)实验试剂：绿原酸标准品，购自中国生物制品检定所。
色谱纯甲醇，购自Burcick&Jackson公司。
(3)实验步骤：
①精确称取5.4mg绿原酸标准品，用甲醇定容至10mL备用，分别精密吸取0.1，0.2,0.4，0.6,0.8，1.0和1.2mL，使用甲醇分别再次定容至10mL，摇匀。
②采用HPLC峰面积法，以绿原酸色谱峰面积(Y)对质量浓度(X)
绘制标准曲线。HPLC条件：4.6*250mm，5μm色谱柱；柱温35℃；
流动相A为甲醇，B为0.5％的磷酸水溶液，线性梯度洗脱：0-5min：A＝30％，5-15min：A＝30-40％；流速0.6mL/min；进样量为10μL；在329nm下测定峰面积。
③分别取受试物B1-B5，按步骤②所述的HPLC条件进行HPLC，测定其峰面积，根据标准曲线对应的回归方程计算受试物中的绿原酸的含量。
(4)实验结果：
根据绿原酸色谱峰面积及其质量浓度回归得到标准曲线：
Y＝134.10X+30.01，R2＝0.999，呈良好的线性关系。
提取率(％)＝{(质量浓度μg/mL*稀释倍数)/(原料质量g*106)}*100％
表1受试物B1-B6HPLC实验结果
(5)结果分析
根据表1数据分析可得知，受试物B3中绿原酸的提取率为峰值，呈现出向两边递减的趋势；受试物B1的提取率下降最为明显，说明了受试物B1的提取工艺并不能充分的提取出绿原酸；受试物2-5的提取率变化较为平缓，受试物B5的提取工艺所使用的溶剂量较多，花费的时间也比较长，但提取率并没有明显提高，从提取成本考虑来说，受试物B5的提取工艺并不合理；纵观得知，受试物B2-4所采用的提取工艺是较为合理的。
受试物B3与B6比较得知，受试物B3的绿原酸提取率远高于受试物B6的，而它们的区别仅在于杜仲茶的制备工艺，说明了杜仲绿茶中的绿原酸的留存较多，杜仲红茶的制造工艺并没有及时的终止酶促反应，在晒青以及发酵等工序中酶促反应仍在进行，从而导致杜仲红茶中的绿原酸大量减少。
实施例8茶叶组合物总多酚含量测定
(1)实验样品：分别称取实施例1-6所得茶叶组合物A1-A61mL注入6个10mL容量瓶中，再分别加入4mL酒石酸亚铁溶液，使用pH为7.5的磷酸缓冲溶液至刻度，得受试物C1-C6，茶叶组合物A1制得受试物C1，茶叶组合物A2制得受试物C2，茶叶组合物A3制得受试物C3，茶叶组合物A4制得受试物C4，茶叶组合物A5制得受试物C5，茶叶组合物A,6制得受试物C6。
(2)实验试剂：茶多酚标准品，购自购自中国生物制品检定所
0.1mol/L酒石酸亚铁溶液
pH为7.5的磷酸缓冲溶液
(3)实验步骤：
①称取茶多酚标准品0.1g，加水定容至100mL，摇匀，的茶多酚标准溶液。分别吸取茶多酚标准溶液1.0，2.0,3.0，4.0mL于4个容量瓶中，各加水10mL再加酒石酸亚铁溶液10mL，加入pH为7.5的磷酸缓冲溶液至刻度，摇匀备用。以空白试剂作参比，使用1cm的比色皿，于波长540nm处测定吸光度，绘制出标准曲线。
②以空白试剂作参比，使用1cm的比色皿，于波长540nm处测定受试物C1-C5的吸光度，从标准曲线查得茶多酚的含量。
(4)实验结果：
表2茶多酚标准曲线
根据茶多酚标准溶液体积及其吸光度回归得到标准曲线：
Y＝321.6X+0.003R2＝1
表3受试物C1-C6的吸光度及茶多酚的含量
(5)结果分析：
根据表3数据分析可得知，受试物C3中茶多酚含量为峰值，呈现出向两边递减的趋势；受试物C1的提取率下降最为明显，说明了受试物C1的提取工艺并不能充分的提取出茶多酚；受试物C2-5的提取率变化较为平缓，受试物C5的提取时间最长温度最高，但提取率并没有明显提高，说明了茶多酚的氧化速度和提取时间和温度成正比，在提取时应该保证提取率同时降低提取时间和温度；纵观得知，受试物C2-4的提取工艺是较为合理的。
受试物C3与C6比较得知，受试物C3的茶多酚提取率远高于受试物B6的，而它们的区别仅在于杜仲茶的制备工艺，说明了杜仲绿茶中的茶多酚的留存较多，杜仲红茶的制造工艺并没有及时的终止酶促反应，在晒青以及发酵等工序中酶促反应仍在进行，而且经过一道揉捻的工序使得酶和底物的结合更加紧密，从而导致杜仲红茶中的茶多酚含量远低于杜仲绿茶。
实施例9不同原料配比所制得茶叶组合物对前脂肪细胞增殖的抑制作用测定
(1)实验样品：将杜仲茶、绿茶、红花、甘草分别按表4中的不同配比称取，分别粉碎至可过60目筛，混合，得到茶叶混合物。在茶叶混合物中加入50％的乙醇水溶液，其中茶叶混合物和乙醇水溶液的料液比g/ml为1:10，浸泡后超声波处理30分钟，料体温度为50℃，过滤，收集滤液。将滤液进行减压蒸馏，蒸馏温度为60℃，蒸馏至滤液体积为原体积的50％，得到茶叶组合物D1-D5。
表4茶叶组合物D1-D5的原料配比
所得茶叶组合物分别取1g溶于四蒸水，定容至100mL，配成母液，过滤除菌分装于-20℃储存，临用时用10％血清DMEM/F12培养液稀释为所需浓度的实验处理培养液。五种茶叶组合物分别配置成10mg/L、50mg/L、100mg/L、200mg/L四种不同浓度的实验处理培养液。
(2)实验动物：1-7日龄仔猪，购自杨凌光明猪场。
(3)实验试剂：I型胶原酶、牛血清蛋白、MTT(四唑盐)、DMSO(二甲基亚砜)、DMEM/F12培养基等，均购于上海优思生物技术有限公司。PBS溶液：8.00gNaCl，0.20gKCl，0.20gKH2PO4,3.96gNa2HPO4·12H2O，用四蒸水定容至1L。
无血清DMEM/F12培养液：10g/LDMEM/F12培养基，四蒸水，100u/mL青霉素，100u/mL链霉素，3.7g/LNaHCO3。
I型胶原酶消化液：无血清DMEM/F12培养液，20g/L牛血清蛋白，1g/LI型胶原酶。
10％血清DMEM/F12培养液：10g/LDMEM/F12培养基，四蒸水，100u/mL青霉素，100u/mL链霉素，3.7g/LNaHCO3。
红细胞裂解液：8.219g/LNH4Cl,1.0g/LKHCO3，0.0292g/LEDTA。MTT溶液：250mgMTT溶于50mLPBS溶液，搅拌30min后用0.22um微孔滤器过滤除菌，分装于4℃保存，有效期为两周。
(4)实验步骤：
①处死仔猪，1-5％(v/v)新洁尔灭浸泡消毒，无菌状态下取出颈部脂肪组织，用含高浓度双抗的PBS清洗3次，剪成1mm3大小的组织块；②组织块移入青霉素小瓶，加入2倍体积的I型胶原酶消化液，恒温37℃消化60-90min，振荡频率为40r/min；
③加10％血清DMEM/F12培养液终止消化，然后依次过孔径70目和200目不锈钢细胞筛；
④滤液收集到10mL离心管，2000r/min离心10min，弃上清液；
⑤加5mL红细胞裂解液，用弯头吸管吹打均匀，室温静置10min，1000r/min离心5min，弃上清液；
⑥加5mL无血清DMEM/F12培养液，用弯头吸管吹打均匀，1000r/min离心5min，弃上清液。重复操作两次；
⑦加入适量10％血清DMEM/F12培养液，吹打均匀，制成细胞悬液，吸取少量细胞悬液滴片，在光学显微镜下计计数板四角大方格的细胞数，细胞密度以如下公式计算：细胞数/mL＝(4大格细胞数之和/4)*104；⑧分别以6*104/cm2密度将细胞接种于96孔，各孔分别加200μL10％血清DMEM/F12培养液，置于37℃、5％CO2培养箱培养。96孔培养板接种1天后分别更换为不同的实验处理培养液，之后每2天换培养液。⑨培养10天后，每孔加入10μLMTT，37℃条件下继续培养4小时，终止培养，小心弃去培养液，每孔加入150μLDMSO，恒温摇床上振荡10min，选择波长490，以经过相同处理的空白孔为调零值，使用酶联检测仪测定各孔吸光度A值。
(5)实验结果：
MTT比色是一种检测细胞生长的方法，已广泛应用于检测细胞增殖，吸光度与细胞增殖程度正相关。
表5MTT比色结果
(6)结果分析：
由表5可知，在完成10天培养后，不同茶叶组合物各浓度处理组的光密度值均小于空白对照组，除了10mg/L处理组结果与空白对照组相比差异不显著之外，能明显的观察到其他浓度处理组对脂肪细胞增值的抑制作用，也显示随着浓度的升高对脂肪细胞的增殖抑制作用也加强；从不同茶叶组合物处理组对比可知，茶叶组合物D3各浓度对脂肪细胞增殖的抑制作用皆优于其他茶叶组合物相应浓度，但D2-4之间并没明显差异，说明不同原料配比中，茶叶组合物D2-4的配比是较为合理的。
实施例10多次皮肤刺激测试
(1)试验样品：按照实施例2-4所制得的茶叶组合物A2、A3、A4，分别用等量水稀释后按顺序分为受试物E2、E3、E4；空白对照组为清水；
(2)试验动物：健康、皮肤无损伤的成年白色新西兰家兔，普通级，共24只，体重为2.2-2.5kg，由广东省医学实验动物中心提供(动物生产许可证号：SCXK(粤)2003-0002)，试验动物合格证编号：0003296，实验动物使用许可证号：SYXK(粤)2003-0011，动物房的温度为23℃，湿度为52％RH，饮用水为自来水，实验前进行随机分组，每组4只；
(3)试验步骤：
①试验前将实验动物背部脊柱两侧被毛剪掉，去毛范围各为3cmX3cm，涂抹面积2.5cmX2.5cm；
②取受试物O.5g涂抹在一侧皮肤上，另一侧作为空白对照，每天涂抹1次，连续涂抹14天。从第二天开始，每次涂抹前剪毛，用水或无刺激性溶剂清除残留受试物，一小时后观察结果，按照《化妆品卫生规范》(2007版)规定的评分标准进行评分。
(4)实验结果：
表6受试物E2、E3、E4多次皮肤刺激性反应结果
(5)结果评价
每天每只动物平均积分＝Σ红斑和水肿积分/受试动物数/14，以表7判定皮肤刺激强度；
表7皮肤刺激强度分级
积分均值 强度
0～<0.5 无刺激性
0.5～<2.0 轻刺激性
2.0～<6.0 中刺激性
6.0～8.0 强刺激性
从表6-7可以看出实验组的受试物E2、E3、E4对皮肤均无刺激性，使用本发明所述制备方法制得的茶叶组合物对皮肤相对安全无刺激性。
实施例11含有茶叶组合物的瘦腿霜制备
将实施例3所提供的茶叶组合物A3为有效成分制作瘦腿霜，按不同有效成分浓度分为瘦腿霜F1、F2、F3、F4，F5，空白对照为含有同样赋形剂而不含茶叶组合物组的乳霜。
表8瘦腿霜的配方以及制备流程
实施例12功效评价
(1)实验目的
通过对比分析评价，评价实施例10所制得的瘦腿霜F1-F5、空白对照和市售瘦腿霜对使用部位皮下脂肪的改善情况，同时以体重、体内脂肪率两个指标作为辅助指标。
(2)实验方法
征集BMI＝22-28腿部肥胖的女性210人，随机分为7组，每组30人，平均年龄32.5岁，试验者身体健康，无遗传或过往病史、无不良生活习惯等。以实施例5所得瘦腿霜为例进行疗效观察，观察试用者在测试前、测试后试验区域周径、体重、体内脂肪率的改善情况。
在受试者大腿作为实验区域涂抹，涂抹量约为5g，适当力度按摩2-3min，早晚各一次，连续使用8周，受试者无需增加运动量和节食。同时还要注意观察化妆品的安全性，有无不良反应，如厌食、腹泻和乏力等。
(3)评价方法
分别测量试用者在测试前和测试后试验区域周径、体重、体内脂肪率以作功效评价。大腿最大周径可用皮尺测量，以评价皮下脂肪的改善情况。另测试受试者的体重、体脂率的变化以作辅助评价。体重可用体重计直接测出。采用生物体电电阻法测定体脂率，对受试者必须始终使用同一台测量仪器。
周径变化率＝(测试后最大周径-测试前最大周径)/测试前最大周径*100％
体重变化率＝(测试后体重-测试前体重)/测试前体重*100％
体脂率变化率＝(测试后体脂率-测试前体脂率)/测试前体脂率*100％
(4)实验结果
表9测试后受试者大腿肥胖的改善程度
在测试过程中，无人出现不良反应，如厌食、腹泻和乏力等。
(4)结果分析：
从表9可以看出受试者测试后大腿最大周径均有不同程度的减小。其中空白对照乳霜是不含抗肥胖活性成分的，但空白对照组的大腿最大周径、体重和体脂率都有轻微的改善，可以认为这些改善是按摩促进淋巴排泄的功效表现，而瘦腿霜F1的抗肥胖功效和空白对照比较是类似的，可以认为瘦腿霜F1中的抗肥胖成分的浓度还没达到有效浓度。根据瘦腿霜F1-F5的数据分析，茶叶组合物的抗肥胖功效是有浓度依赖性的，抗肥胖的功效和有效成分的浓度在一定的范围内是呈正相关的关系。当茶叶组合物在配方中的质量百分比达到5％时，其浓度的增加不再能明显地增加其抗肥胖功效。从抗肥胖功效和成本方面的考虑，茶叶组合物的添加量为2-8％较为合理。
根据瘦腿霜F2-F5和市售瘦腿霜的数据比较分析得知，瘦腿霜F3-F5的抗肥胖功效是优于市售瘦腿霜的。瘦腿霜E2减少大腿最大周径的功效是和市售瘦腿霜相接近的，比较得知瘦腿霜E2试用者的体重减小程度轻于市售瘦腿霜，而瘦腿霜E2试用者的体脂率减小程度却重于市售瘦腿霜，说明了添加茶叶组合物的瘦腿霜主要是作用于脂肪，而不是其他非脂质部分。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (7)

1.一种茶叶组合物，其特征在于，所述茶叶组合物是以如下重量百分比的原料制备的：杜仲茶30-40％，绿茶30-40％，红花10-20％，甘草10-20％。
2.根据权利要求1所述的茶叶组合物，其特征在于，所述的杜仲茶是指杜仲树的新叶或芽，未经发酵，经杀青、整形、烘干等工艺而制作的茶叶。
3.一种根据权利要求1或2所述的茶叶组合物用于抗肥胖的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述茶叶组合物作为具有抗肥胖功效的有效成分添加在化妆品中。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述茶叶组合物作为具有抗肥胖功效的有效成分添加在瘦腿化妆品中。
6.一种含有如权利要求1或2所述的茶叶提取物的化妆品，其特征在于，所述化妆品中茶叶提取物的含量为2-8wt％，余量为化妆品中允许的载体及其组合。
7.根据权利要求6所述的化妆品，其特征在于，所述化妆品包括如下重量百分比的组分：
CN201610038799.2A 2016-01-20 2016-01-20 一种茶叶组合物及其应用 Pending CN105685288A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610038799.2A CN105685288A (zh) 2016-01-20 2016-01-20 一种茶叶组合物及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610038799.2A CN105685288A (zh) 2016-01-20 2016-01-20 一种茶叶组合物及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105685288A true CN105685288A (zh) 2016-06-22

Family

ID=56227633

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610038799.2A Pending CN105685288A (zh) 2016-01-20 2016-01-20 一种茶叶组合物及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105685288A (zh)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101361886A (zh) * 2007-08-07 2009-02-11 北京北大维信生物科技有限公司 具有脂肪酶活性抑制作用的中草药提取物及其新用途
CN103735739A (zh) * 2013-12-27 2014-04-23 北京康比特体育科技股份有限公司 一种减肥组合物及其制备方法
CN104397538A (zh) * 2014-12-18 2015-03-11 威海百合生物技术股份有限公司 一种减肥保健食品
CN104435068A (zh) * 2014-11-28 2015-03-25 普正药业股份有限公司 一种具有减肥作用的杜仲组合物及其制剂

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101361886A (zh) * 2007-08-07 2009-02-11 北京北大维信生物科技有限公司 具有脂肪酶活性抑制作用的中草药提取物及其新用途
CN103735739A (zh) * 2013-12-27 2014-04-23 北京康比特体育科技股份有限公司 一种减肥组合物及其制备方法
CN104435068A (zh) * 2014-11-28 2015-03-25 普正药业股份有限公司 一种具有减肥作用的杜仲组合物及其制剂
CN104397538A (zh) * 2014-12-18 2015-03-11 威海百合生物技术股份有限公司 一种减肥保健食品

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
任顺成: "《食品营养与卫生》", 31 January 2011, 中国轻工业出版社 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101452770B1 (ko) 유산균 발효액을 함유하는 항산화, 미백 및 주름개선 효과를 갖는 화장료 조성물
CN107320375A (zh) 生物活性植物化妆品组合物及其生产方法
CN105287341A (zh) 一种美白保湿精华液及其制备方法
CN104739727A (zh) 一种能够舒缓眼部疲劳的化妆组合物及其制备方法和应用
CN103037880A (zh) 含有构树的提取物的组合物
CN110772454A (zh) 亮肤保湿、舒缓、抗衰老的复合精油、其制备方法及应用
CN108703931A (zh) 一种具有保湿作用的组合物及其制备方法
CN115444086A (zh) 一种具有美白亮肤功能的保健饮料及其制备方法和应用
KR20130079220A (ko) 콩뿌리 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물
CN116999374B (zh) 青春双歧杆菌牛奶发酵物，含其产品及其制备和应用
CN109077957A (zh) 一种具有抗污染功效的化妆品用中药组合物发酵液及其制备与应用
CN105147773B (zh) 一种具有抑制痤疮功效的中药组合物及其制备方法和应用
CN115054566B (zh) 一种抗头皮衰老组合物及其制备方法
CN113576970B (zh) 一种抗衰老植物提取组合物及其制备与应用
CN107049866B (zh) 一种抗过敏植物组合物及其应用
CN117257695A (zh) 发酵水油双层组合物及其制备方法与应用
CN109512736A (zh) 一种护肤组合物及具有细致毛孔功效的化妆品
CN109288754A (zh) 一种含有柿叶发酵提取物的精华液及制备方法
CN105685288A (zh) 一种茶叶组合物及其应用
CN101810556B (zh) 具有抗皮肤衰老作用的中药提取物的组合物及制法和用途
CN111407695B (zh) 一种沙棘水及其制备方法和应用
CN106821932A (zh) 一种含有西红花提取液的化妆品
CN106821901A (zh) 一种具有减少眼部周围皮肤皱纹作用的霜剂
CN108245463A (zh) 一种具有保湿功效的组合物以及保湿面霜的制备方法
CN106691904A (zh) 一种组合物及其制备方法和用途、含有该组合物的护肤品及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20160622