CN105671019B - 一种耐热木聚糖酶及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及木聚糖酶，具体的说是一种耐热木聚糖酶及其应用。(a)，编码具有木聚糖酶活性的多肽的核酸，该核酸编码的蛋白质序列由SEQ ID NO：2中氨基酸序列所示(TM1)；(b)，编码具有木聚糖酶活性的多肽的核酸，其与SEQ ID NO：2中氨基酸序列具有80％以上同源性的序列；或，(c)，(a)或(b)的核酸所编码木聚糖酶的缺少信号序列或碳水化合物结合模块。本发明所示木聚糖酶TM1和TM1‑M将在饲料、食品和制浆造纸工业的应用中显示出巨大的潜在价值。
Description
技术领域
本发明涉及木聚糖酶，具体的说是一种耐热木聚糖酶及其应用。
背景技术
半纤维素是植物细胞壁的重要组成部分，是自然界中第二丰富的多糖，其主要组成是木聚糖。木聚糖成分复杂，主链由β-1,4糖苷键相连的吡喃木糖残基构成，其侧链可以被阿拉伯糖、葡聚糖醛酸、乙酰基团等取代。β-1,4-内切木聚糖酶(Endo-β-1,4-xylanase,EC 3.2.1.8)的主要作用是从木聚糖链内部随机切断β-1,4糖苷键，形成不同聚合度的寡聚木糖。木聚糖酶在自然界中存在广泛，在细菌、真菌、放线菌、藻类、原生动物等中都有发现。根据蛋白质氨基酸序列，可以将其分为不同的糖苷水解酶家族，木聚糖酶主要存在于第5、7、8、10、11和43家族。
木聚糖酶具有重要的应用价值，在食品、饲料、制浆造纸、纺织、能源等领域有着巨大的应用前景。工业用酶要求具有较高的酶活性、良好的热稳定性和pH稳定性。如在纸浆漂白中，需要具备耐碱、耐热和高活性且不具有纤维素酶活性的木聚糖酶。糖苷水解酶11家族的木聚糖酶不具有纤维素酶活性且分子量小，易于穿透纤维素网络水解木聚糖，因此，在造纸工业中应用潜力巨大。工业生产中，木聚糖酶的碳水化合物结合模块与底物产生不可逆结合，降低酶的回收利用率。因此，缺少碳水化合物结合模块的木聚糖酶，可以高效降解高浓度底物、降低酶的使用成本。
发明内容
本发明的目的在于提供一种耐热木聚糖酶及其应用。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：一种耐热木聚糖酶，耐热木聚糖酶为
(a)，编码具有木聚糖酶活性的多肽的核酸，该核酸编码的蛋白质序列由SEQ IDNO：2中氨基酸序列所示(TM1)；
(b)，编码具有木聚糖酶活性的多肽的核酸，其与SEQ ID NO：2中氨基酸序列具有80％以上同源性的序列；
或，(c)，(a)或(b)的核酸所编码木聚糖酶的缺少信号序列或碳水化合物结合模块。
所述(c)中缺少信号序列或碳水化合物结合模块为木聚糖酶XynA的C端碳水化合物结合模块缺失或N端氨基酸突变体，其由SEQ ID NO：4中氨基酸所示(TM1-M)。
所述TM1或TM1-M在酶解催化或热稳定性中的应用。
重组表达载体为含SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列和表达载体。
所述表达载体为pEASY-E1、pEASY-E2、pET-22b、pET28、pET32、pQE-30、pGEX-4T-2、pBR322、pUC18或pPIC9K。
所述TM1或TM1-M的重组表达载体在酶解催化或热稳定性中的应用。
菌株为含SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列的宿主菌株。
所述宿主细胞为大肠杆菌E.coli BL21(DE3)。
本发明的C端碳水化合物结合模块缺失后的截短蛋白TM1具有好的催化活性和热稳定性。
本发明所具有的优点：
本发明提供的木聚糖酶性质优良、适合于饲料、食品、制浆造纸工业中。本发明的木聚糖酶TM1和TM1-M最适温度75℃。本发明的截短蛋白TM1相较于全长蛋白XynA，具有更高的催化效率和更强的热稳定性，而其最适温度和最适pH保持不变；将截短蛋白的N端氨基酸进行突变，获得木聚糖酶TM1-M，其热稳定性得到进一步提高。C端碳水化合物结合模块缺失蛋白TM1及TM1-M不会产生与底物的不可逆结合，是工业生产用酶制剂的有力候选者。
附图说明
图1为本发明实施例提供的重组木聚糖酶的SDS-PAGE分析图，其中，M为分子量标准蛋白；1、3为纯化的木聚糖酶XynA；2为纯化的木聚糖酶TM1；4为纯化的木聚糖酶TM1-M。
图2为本发明实施例提供的重组木聚糖酶酶解1％木聚糖产物分析图。其中，M为木糖及木寡糖标准，X1为木糖，X2为木二糖，X3为木三糖、X4为木四糖、X5为木五糖；X为75℃处理12h的木聚糖；1为木聚糖酶XynA酶解木聚糖12h的产物组成；2为木聚糖酶TM1酶解木聚糖12h的产物组成。
具体实施方式
实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
下述实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法。
实施例1、木聚糖酶XynA、TM1、TM1-M的获得及其原核表达载体的构建
该基因的克隆过程及其原核表达载体的构建过程包括以下步骤：
1、木聚糖酶基因的克隆
木聚糖酶XynA基因设计如下引物：
XynA-F:CAAGCAGCCATAACACTCACAT
XynA-R:TTATTCAATCAACAAATAATCTGCAT
木聚糖酶TM1基因设计如下引物：
TM1-F:CAAGCAGCCATAACACTCACAT
TM1-R:CGTTGTAGTTGGCGTAGTTGAA
木聚糖酶TM1-M基因设计如下引物：
TM1-M-F:CAAACCAGCATAACACTCACATCAAATGCAA
TM1-M-R:CGTTGTAGTTGGCGTAGTTGAA
以保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心(China General MicrobiologicalCulture Collection，CGMCC)保藏编号CGMCC 1.5183，保藏日期为2013年3月的解糖热解纤维素菌的基因组DNA为模板，分别以XynA-F与XynA-R、TM1-F与TM1-R、TM1-M-F与TM1-M-R为引物对，通过PCR的方式扩增得到目的基因片段。
扩增木聚糖酶XynA的PCR反应体系为50μl，包括：细菌基因组DNA：1μl；10×PCRBuffer:5μl；dNTP Mixture(各2.5mM)：4μl；引物XynA-F(20μM)，1μl；引物XynA-R(20μM)，1μl；LA Taq polymerase(5U/μl):0.5μl；加ddH2O至总体系为50μl。PCR扩增条件如下：94℃预变性5min；94℃变性30sec，50℃退火45sec，72℃延伸70sec，循环30次；72℃延伸10min。
扩增木聚糖酶TM1的PCR反应体系为50μl，包括：细菌基因组DNA：1μl；10×PCRBuffer：5μl；dNTP Mixture(各2.5mM)：4μl；引物TM1-F(20μM)，1μl；引物TM1-R(20μM)，1μl；LA Taq polymerase(5U/μl):0.5μl；加ddH2O至总体系为50μl。PCR扩增条件如下：94℃预变性5min；94℃变性30sec，56℃退火45sec，72℃延伸60sec，循环30次；72℃延伸10min。
扩增木聚糖酶TM1基因序列tm1如SEQ ID NO.1所示；SEQ ID NO.1基因序列编码的糖苷水解酶11家族的截短蛋白TM1，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
扩增木聚糖酶TM1-M的PCR反应体系为50μl，包括：细菌基因组DNA：1μl；10×PCRBuffer：5μl；dNTP Mixture(各2.5mM)：4μl；引物TM1-M-F(20μM)，1μl；引物TM1-M-R(20μM)，1μl；LA Taq polymerase(5U/μl):0.5μl；加ddH2O至总体系为50μl。PCR扩增条件如下：94℃预变性5min；94℃变性30sec，56℃退火45sec，72℃延伸60sec，循环30次；72℃延伸10min。
扩增木聚糖酶TM1-M的截短蛋白TM1的N端第2位、第3位氨基酸分别突变为苏氨酸和丝氨酸，该木聚糖酶的基因序列tm1-m如SEQ ID NO.3所示；所述SEQ ID NO.3基因序列编码的糖苷水解酶11家族的突变体蛋白TM1-M，其氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。
2、木聚糖酶基因表达载体的构建
将上述经PCR获得的基因片段分别连接到表达载体pEASY-E1中。经PCR和测序鉴定后将含有木聚糖酶XynA、TM1和TM1-M基因的阳性克隆质粒分别命名为pEASY-E1-xynA、pEASY-E1-tm1和pEASY-E1-tm1-m。
SEQ ID NO.1：
CAAGCAGCCATAACACTCACATCAAATGCAAGTGGTACTTATGACGGTTACTACTACGAATTGTGGAAGGATTCTGGGAACACAACCATGACAGTTGACACAGGAGGAAGGTTTAGTTGTCAATGGAGTAATATCAACAATGCGCTTTTCAGAACAGGTAAAAAATTTAATACAGCATGGAATCAGCTCGGAACAGTGAAGATAACATACTCTGCTACTTACAATCCAAATGGAAATTCATATTTGTGCATCTATGGTTGGTCAAAAAATCCACTTGTTGAATTCTATATTGTTGAAAGCTGGGGTTCGTGGCGTCCACCTGGAGCAACCTCGCTTGGGACTGTAACAATCGATGGAGGAACATATGATATTTACAAGACAACTCGTGTTAATCAACCATCTATCGAAGGAACAACGACATTTGATCAGTACTGGAGTGTTAGAACATCAAAGAGAACCAGCGGTACTGTTACCGTAACTGATCATTTCAAAGCATGGGCTGCAAAAGGTTTGAATCTTGGTACAATTGACCAGATTACTCTTTGTGTTGAAGGTTACCAGAGCAGCGGTTCAGCTAATATAACACAAAATACATTTTCTATAACAAGTGATTCAAGTGGTTCAACTACGCCAACTACAACG
(a)序列特征：
●长度：642
●类型：基因序列
●链型：单链
●拓扑结构：线性
(b)分子类型：DNA
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：解糖热解纤维素菌
所述SEQ ID NO.1基因序列编码的糖苷水解酶11家族的截短蛋白TM1，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
SEQ ID NO.2：
QAAITLTSNASGTYDGYYYELWKDSGNTTMTVDTGGRFSCQWSNINNALFRTGKKFNTAWNQLGTVKITYSATYNPNGNSYLCIYGWSKNPLVEFYIVESWGSWRPPGATSLGTVTIDGGTYDIYKTTRVNQPSIEGTTTFDQYWSVRTSKRTSGTVTVTDHFKAWAAKGLNLGTIDQITLCVEGYQSSGSANITQNTFSITSDSSGSTTPTTT
(a)序列特征：
●长度：214
●类型：氨基酸序列
●链型：单链
●拓扑结构：线性
(b)分子类型：蛋白质
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：解糖热解纤维素菌
结构特点：其理论分子量为23.4kDa，40-220为糖苷水解酶11家族结构域。
本发明的截短蛋白TM1的N端第2位、第3位氨基酸分别突变为苏氨酸和丝氨酸，突变体木聚糖酶TM1-M具有好的热稳定性。具体地，该木聚糖酶的基因序列tm1-m如SEQ IDNO.3所示。
SEQ ID NO.3：
CAAACCAGCATAACACTCACATCAAATGCAAGTGGTACTTATGACGGTTACTACTACGAATTGTGGAAGGATTCTGGGAACACAACCATGACAGTTGACACAGGAGGAAGGTTTAGTTGTCAATGGAGTAATATCAACAATGCGCTTTTCAGAACAGGTAAAAAATTTAATACAGCATGGAATCAGCTCGGAACAGTGAAGATAACATACTCTGCTACTTACAATCCAAATGGAAATTCATATTTGTGCATCTATGGTTGGTCAAAAAATCCACTTGTTGAATTCTATATTGTTGAAAGCTGGGGTTCGTGGCGTCCACCTGGAGCAACCTCGCTTGGGACTGTAACAATCGATGGAGGAACATATGATATTTACAAGACAACTCGTGTTAATCAACCATCTATCGAAGGAACAACGACATTTGATCAGTACTGGAGTGTTAGAACATCAAAGAGAACCAGCGGTACTGTTACCGTAACTGATCATTTCAAAGCATGGGCTGCAAAAGGTTTGAATCTTGGTACAATTGACCAGATTACTCTTTGTGTTGAAGGTTACCAGAGCAGCGGTTCAGCTAATATAACACAAAATACATTTTCTATAACAAGTGATTCAAGTGGTTCAACTACGCCAACTACAACG
(a)序列特征：
●长度：642
●类型：基因序列
●链型：单链
●拓扑结构：线性
(b)分子类型：DNA
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：解糖热解纤维素菌
所述SEQ ID NO.3基因序列编码的糖苷水解酶11家族的突变体蛋白TM1-M，其氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。
SEQ ID NO.4：
QTSITLTSNASGTYDGYYYELWKDSGNTTMTVDTGGRFSCQWSNINNALFRTGKKFNTAWNQLGTVKITYSATYNPNGNSYLCIYGWSKNPLVEFYIVESWGSWRPPGATSLGTVTIDGGTYDIYKTTRVNQPSIEGTTTFDQYWSVRTSKRTSGTVTVTDHFKAWAAKGLNLGTIDQITLCVEGYQSSGSANITQNTFSITSDSSGSTTPTTT
(a)序列特征：
●长度：214
●类型：氨基酸序列
●链型：单链
●拓扑结构：线性
(b)分子类型：蛋白质
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：解糖热解纤维素菌
结构特点：其理论分子量为23.4kDa，40-220为糖苷水解酶11家族结构域。
实施例2、木聚糖酶XynA、TM1、TM1-M的表达、纯化
将实施例1获得的含有木聚糖酶XynA、TM1和TM1-M基因的原核表达载体pEASY-E1-xynA、pEASY-E1-tm1和pEASY-E1-tm1-m分别转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3)，分别挑选阳性单克隆，将获得阳性单克隆分别在37℃下摇菌至OD600为0.5后，加入终浓度1mM的IPTG，16℃下诱导16小时，离心收集各自菌体，将分别得到的含有目的蛋白的菌体按1g菌体加入4ml磷酸盐缓冲液(50mM NaH2PO4,300mM NaCl,pH 8.0)，同时加入0.04ml 100×蛋白酶抑制剂，溶菌酶(终浓度1mg/ml)，使各菌体细胞充分悬浮后采用超声波法破碎细胞。所得细胞破碎液分别经4℃、10000×g离心20min，所得各自的上清经0.22μm滤膜过滤后即为各自菌体的粗酶液。
进行蛋白纯化，具体方法为：Ni-NTA-Sefinose柱中的乙醇流出后，加入总体积为10ml的无菌水，每次加入2ml。加入总体积10ml的磷酸盐缓冲液(50mM NaH2PO4,300mM NaCl,pH8.0)，每次加入2ml。加入粗酶液，并穿透3次。加入磷酸缓冲液(50mM NaH2PO4,300mMNaCl,pH8.0)，直至流出液中无蛋白。然后依次加入咪唑浓度逐渐升高的洗脱缓冲液(50mMNaH2PO4，300mM NaCl，咪唑浓度分别为25mM、50mM、100mM、250mM，pH 8.0)各5mL，并收集蛋白组分，每次收集1mL。将木聚糖酶XynA、TM1和TM1-M的洗脱液分别使用10kDa超滤管置换PC缓冲液(PC缓冲液，50mM磷酸，12mM柠檬酸，pH 6.5)，以去除酶液中的咪唑，分别获得木聚糖酶XynA、TM1和TM1-M酶液。将上述纯化得到的重组蛋白质溶液进行SDS-PAGE电泳，纯化结果如图1所示，所获得的木聚糖酶XynA分子量为36.4kDa，截短蛋白TM1分子量为23.4kDa，突变体蛋白TM1-M分子量为23.4kDa。
实施例3、酶学特性检测
将上述方法获得的木聚糖酶XynA、TM1和TM1-M，分别进行下述反应进行酶学特性鉴定：
1、木聚糖酶的比酶活的测定
利用上述纯化的重组木聚糖酶，进行下述反应：
将上述获得的浓度为0.8μg/ml的木聚糖酶XynA溶液、0.4μg/ml的截短蛋白TM1溶液和0.4μg/ml的突变体蛋白TM1-M溶液各取50μl，分别加入到100μl 1％的木聚糖溶液中，其中木聚糖溶于PC缓冲液(PC缓冲液为50mM磷酸，12mM柠檬酸，pH 6.5)，在75℃下反应10分钟。使用3.5-二硝基水杨酸(DNS)法测定反应结束后还原糖的生成量。
上述反应结束后加入200μl DNS溶液，煮沸5分钟，冷却后加入650μl水并混匀，取200μl加入到酶标板中，测其在540nm的吸收值。以0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1mg/ml的木糖溶液为标准样品，以DNS法测得的吸光度值与糖浓度绘制标准曲线，根据标准曲线计算所得样品还原糖的量。
木糖标准曲线：y＝11.406x-0.0049 R2＝0.9987
其中，x为木糖浓度，mg/ml；y为对应糖浓度下的540nm的吸收值。
一个酶活单位定义为每分钟水解底物产生1μmol还原糖所需的酶量。比酶活力定义为酶活与对应蛋白量的比值。酶活反应体系如表1所示。
表1 酶活反应体系
根据上述实施方式，如表2所示，木聚糖酶XynA、TM1和TM1-M的比酶活分别为2601、9221、5451U/mg。
2、木聚糖酶的最适反应温度、最适反应pH的测定
将实施例2纯化的重组木聚糖酶在不同pH范围(pH 4.5、5、5.5为200mM的乙酸-乙酸钠缓冲液；pH 6、6.5、7、7.5、8为PC缓冲液(50mM磷酸，12mM柠檬酸))中进行酶促反应，测定其最适反应pH。结果表明，重组蛋白XynA和TM1的最适pH均为6.5，突变体蛋白TM1-M的最适pH为5.6(表2)。木聚糖酶在其最适反应pH值条件下测其在不同温度范围(55、60、65、70、75、80℃)的比酶活，确定其最适反应温度。结果如表2所示，重组蛋白XynA、TM1和TM1-M的最适反应温度均为75℃。
3、木聚糖酶的半衰期测定
木聚糖酶XynA、TM1和TM1-M分别置于65、75、85℃，每隔一段时间取出适量蛋白溶液，在75℃下测定残余酶活，残余酶活为50％时的取样时间即为此条件下的半衰期(t1/2)。结果表明，在75℃时，木聚糖酶XynA、TM1和TM1-M的半衰期分别为5.5h、48h和70h(表2)。
表2 木聚糖酶XynA、TM1和TM1-M的酶学特性分析
4、重组木聚糖酶的产物分析
以pH 6.5的1％木聚糖为底物，分别加入上述纯化酶XynA和TM1，75℃反应12h。薄层层析分析其产物组成，以木糖、木二糖、木三糖、木四糖和木五糖作为标准。结果表明，木聚糖酶XynA和TM1酶解木聚糖的产物组成为木二糖、木三糖、木四糖和木五糖(图2)。
实施例4、木聚糖酶XynA和TM1的毕赤酵母表达载体的构建和蛋白纯化
以pEASY-E1-xynA作为模板，PCR扩增获取进行毕赤酵母表达载体构建所需的xynA基因，同时扩增获得pEASY-E1载体所带的6×组氨酸标签。具体的，引物设计如下：
pPIC9K-XynA-F：
AGAGAGGCTGAAGCTTACATACATATGCGGGGTTCTCATCAT
pPIC9K-XynA-R：
GTCATGTCTAAGGCGAATTATTCAATCAACAAATAATCTGCATA
扩增木聚糖酶XynA的PCR反应体系为50μl，包括：已构建的pEASY-E1-xynA载体：1μl；10×PCR Buffer:5μl；dNTP Mixture(各2.5mM)：4μl；引物pPIC9K-XynA-F(20μM)，1μl；引物pPIC9K-XynA-R(20μM)，1μl；LA Taq polymerase(5U/μl):0.5μl；加ddH2O至总体系为50μl。PCR扩增条件如下：94℃预变性1min；94℃变性30sec，55℃退火40sec，72℃延伸90sec，循环30次；72℃延伸5min。
以pEASY-E1-tm1作为模板，PCR扩增获取进行毕赤酵母表达载体构建所需的tm1基因，同时扩增获得pEASY-E1载体所带的6×组氨酸标签。具体的，引物设计如下：
pPIC9K-TM1-F：
AGAGAGGCTGAAGCTTACATACATATGCGGGGTTCTCATCAT
pPIC9K-TM1-R：
GTCATGTCTAAGGCGAATTACGTTGTAGTTGGCGTAGTTGAACCACT
扩增木聚糖酶TM1的PCR反应体系为50μl，包括：已构建的pEASY-E1-tm1载体：1μl；10×PCR Buffer:5μl；dNTP Mixture(各2.5mM)：4μl；引物pPIC9K-TM1-F(20μM)，1μl；引物pPIC9K-TM1-R(20μM)，1μl；LA Taq polymerase(5U/μl):0.5μl；加ddH2O至总体系为50μl。PCR扩增条件如下：94℃预变性1min；94℃变性30sec，55℃退火40sec，72℃延伸60sec，循环30次；72℃延伸5min。
通过PCR扩增在表达载体pPIC9K上引入上述扩增片段xynA、tm1的重叠区域15bp碱基。具体的，引物设计如下：
pPIC9K-F：
TAATTCGCCTTAGACATGACTGTTCC
pPIC9K-R：
GTAAGCTTCAGCCTCTCTTTTCTCGAG
具体的，PCR反应体系为50μl，包括：pPIC9K载体：1μl；10×PCR Buffer:5μl；dNTPMixture(各2.5mM)：4μl；引物pPIC9K-F(20μM)，1μl；引物pPIC9K-R(20μM)，1μl；LA Taqpolymerase(5U/μl):0.5μl；加ddH2O至总体系为50μl。PCR扩增条件如下：94℃预变性1min；94℃变性30sec，55℃退火1sec，72℃延伸7min，循环20次；72℃延伸8min。
通过Gibson连接的方法，将木聚糖酶XynA和TM1的扩增片段分别与含有重叠区域的酵母表达载体pPIC9K的扩增片段连接。具体的，Gibson连接体系为15μl，包括Gibson溶液7.5μl；木聚糖酶XynA或TM1的扩增片段3μl；pPIC9K的扩增片段3μl，加ddH2O至总体系为15μl。上述体系置于50℃连接1h，得到含有目的片段的重组载体。
将含有木聚糖酶XynA的重组载体pPIC9K-xynA和含有木聚糖酶TM1的重组载体pPIC9K-tm1分别转化毕赤酵母GS115，获得重组毕赤酵母菌株。
分别取含有上述重组质粒的GS115菌株，接种于300ml BMGY培养基中，30℃200rpm培养48h后，添加1％甲醇继续诱导表达24h，离心收集上清。经蛋白定量和比酶活测定，结果显示，木聚糖酶XynA的蛋白表达量为507mg/L，比酶活为1867U/mL，经Ni-NTA-Sefinose柱纯化所得蛋白比酶活为2823U/mg；木聚糖酶TM1的蛋白表达量为923mg/L，比酶活为3709U/mL，经Ni-NTA-Sefinose柱纯化所得蛋白比酶活为8625U/mg。
Claims (7)
1.一种耐热木聚糖酶，其特征在于：
（a）所述耐热木聚糖酶的氨基酸序列由SEQ ID NO：2所示；或
（b）所述耐热木聚糖酶的氨基酸序列由SEQ ID NO：4中所示。
2.权利要求1所述的耐热木聚糖酶的应用，其特征在于：权利要求1所述耐热木聚糖酶在酶解催化中的应用。
3.一种重组表达载体，其特征在于：所述重组表达载体为含编码权利要求1所述耐热木聚糖酶的核酸的表达载体。
4.按权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于：所述重组表达载体为将编码权利要求1所述耐热木聚糖酶核酸插入pEASY-E1、pEASY-E2、pET-22b、pET28、pET32、pQE-30、pGEX-4T-2、pBR322、pUC18或pPIC9K的表达载体中所获得的重组表达载体。
5.权利要求3或4所述重组表达载体的应用，其特征在于：所述重组表达载体在酶解催化中的应用。
6.一种重组工程菌，其特征在于：所述重组工程菌为携带权利要求3或4所述重组表达载体的宿主菌。
7.按权利要求6所述的重组工程菌，其特征在于：所述宿主菌为大肠杆菌E. coli BL21(DE3)。
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| CN (1) | CN105671019B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2023225459A2 (en) | 2022-05-14 | 2023-11-23 | Novozymes A/S | Compositions and methods for preventing, treating, supressing and/or eliminating phytopathogenic infestations and infections |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0716702B1 (en) * | 1994-06-14 | 2002-08-28 | Genencor International, Inc. | Thermostable xylanases |
-
2014
- 2014-12-04 CN CN201410736779.3A patent/CN105671019B/zh active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN105671019A (zh) | 2016-06-15 |
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