CN105670975B - 一种高产胞外多糖的假单胞菌株及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种高产细菌胞外多糖的假单胞菌株及其应用，该菌株为假单胞菌(Pseudomonas sp.)SFEP‑01，菌株已于2016年1月14日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No:M2016035；该菌株所产胞外多糖主要含有两种成分：EPS Ⅰ和EPS Ⅱ，EPS Ⅰ为杂多糖，单糖残基为葡萄糖、甘露糖和鼠李糖，EPS Ⅱ为均一多糖，单糖残基为葡萄糖；本发明假单胞菌可转化甘油、葡萄糖、蔗糖、淀粉等产生凝胶型胞外多糖,经发酵条件适当优化后，SFEP‑01菌株发酵胞外多糖产率可达8‑12g/L，具有良好研究开发前景。

Description

一种高产胞外多糖的假单胞菌株及其应用
技术领域
本发明涉及微生物多糖领域，涉及一种高产胞外多糖的假单胞菌株及其应用，具体涉及一种高产胞外多糖的假单胞菌(Pseudomonas sp.)SFEP-01及其培养方法以及在发酵制备微生物胞外多糖中的应用。
背景技术
微生物多糖在细胞内主要有三种存在形式:①黏附在细胞表面上,即胞壁多糖；②分泌到培养基中,即胞外多糖；③构成微生物细胞的成分,即胞内多糖；而其中的胞外多糖具有产生量大、易于与菌体分离、可通过深层发酵实现工业化生产优势。
微生物胞外多糖(Extracellular polysaccharides，EPS)是微生物在生长过程中为适应周围环境的变化产生的一种对自身具有保护作用的生物高聚物。微生物胞外多糖和植物多糖相比较具有以下优势:①生产周期短,不受季节、地域、病虫害等条件的限制；②具有较强的市场竞争力和广阔的发展前景；③应用广泛。目前已有多种微生物胞外多糖已经发展成为一类新型的发酵产品，作为增稠剂、稳定剂、乳化剂、保湿剂、胶凝剂、悬浮剂等广泛应用于石油、化工、食品和制药等多个领域。近年来有关海洋微生物和乳酸菌微生物胞外多糖研究活跃，不断有新型多糖结构被鉴定。微生物多糖作为天然活性大分子，在生物医药领域的潜在应用价值也日益受到人们的广泛关注。新菌种的进一步探索成为新型胞外多糖的一个重要来源。
CN102816724B公开了一株放射形根瘤菌，其产生主要由半乳糖和葡萄糖组成的胞外多糖，其胞外多糖水溶性好，且在低浓度下具有良好的粘度、表面活性、蛋白质可混性以及良好的稳定性和乳化性。
CN102965318B公开了一种产胞外多糖的嗜热链球菌，该菌株在42℃条件下用M17培养液发酵30小时产胞外多糖148mg/L,胞外多糖可明显提高发酵乳的粘度和凝胶强度。
CN104232548A公开了一株假单胞菌，其合成的凝胶多糖为胞外多糖，将发酵条件优化，凝胶多糖产量可达5.94g/L。
如何开发生产胞外多糖的新菌种、开发新型的胞外多糖以及提高胞外多糖的产量，是微生物多糖领域技术人员面临的问题。
发明内容
在现有技术已有开发微生物多糖的基础上，本发明提供一株高产细菌胞外多糖的假单胞菌。该菌株能够转化甘油、葡萄糖、淀粉、柠檬酸钠等产生凝胶型胞外多糖。
本发明的一个目的是提供一株高产胞外多糖的假单胞菌(Pseudomonas sp.)SFEP-01，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏日期为2016年1月14日，保藏编号为CCTCC No:M2016035，保藏地址：中国武汉武汉大学。
本发明所述假单胞菌SFEP-01是从海洋真菌发酵生产DHA的发酵培养污染物中采用常规方法分离筛选得到,其具有如下生物学特征：
菌株SFEP-01菌落及形态特征：固体培养菌落圆形，凸起，边缘整齐，表面光滑，淡黄色、半透明状；30℃培养24小时，菌落直径约1mm，培养48小时，菌落直径约3-5mm(菌落形态见附图1，附图2)；菌株SFEP-01为杆菌，不形成芽胞，菌体形态直或稍弯、两端形状不规则，大小0.5～0.8μm×1.5～3.0μm(菌体形态见附图3)，液体培养12小时染色可见菌体外多糖物质(见附图4)。
菌株SFEP-01生理生化特征是：革兰氏染色阴性，好氧，最适生长温度28-30℃，在25℃生长良好；利用葡萄糖、果糖、柠檬酸盐，接触酶阳性；生理生化实验结果详见表1。
表1菌株SFEP-01的部分生理生化特征
注：“+”生长良好或呈阳性；“-”不生长或呈阴性。
上述用于菌体形态观察的液体培养基组成(g/L)：蛋白胨10，牛肉膏5，氯化钠3，pH7.0-7.2，蒸馏水配制。
上述用于菌落形态观察的固体培养基组成(g/L)：蛋白胨10，牛肉膏5，氯化钠3，琼脂15-20，pH7.0-7.2，蒸馏水配制。
上述形态特征观测的实验方法参考东秀珠、蔡妙英等编著的《常见细菌系统鉴定手册》，科学出版社，2001，第一版，p353-363。
上述生理生化试验培养基及实验方法参考东秀珠、蔡妙英等编著的《常见细菌系统鉴定手册》，科学出版社，2001，第一版，p364-398。
以本发明的菌株SFEP-01的全基因组DNA为模板，采用细菌16SrDNA通用引物PCR扩增该菌株16S rRNA基因序列，扩增产物测序得到长度为1399bp的序列(如序列表SEQ IDNO:1所示)，使用美国生物工程信息中心(National Center for BiotechnologyInformation，NCBI)BLASTN程序比对，发现本发明的菌株SFEP-01 16S rRNA的基因序列与NCBI注册的多株浅黄色假单胞杆菌(Pseudomonas luteola)和一些未被完全鉴定的假单胞菌的16S rRNA的基因序列具有99％的同源性，生理生化试验结果与《常见细菌系统鉴定鉴定手册》中浅黄色假单胞杆菌的特征符合度较高(参考东秀珠、蔡妙英等编著的《常见细菌系统鉴定手册》科学出版社，2001，第一版，p172)，系统发育树表明该菌株与已知浅黄色假单胞杆菌亲缘关系与其他未鉴定假单胞杆菌菌株(Pseudomonas sp.)没有显著区别，因此，将该菌株初步鉴定为假单胞菌菌种(Pseudomonas sp.)。
本发明的另一目的是提供假单胞菌(Pseudomonas sp.)SFEP-01在制备细菌胞外多糖中的应用。
本发明另一目的是提供一种假单胞菌(Pseudomonas sp.)SFEP-01发酵胞外多糖的方法，步骤如下：
(1)将假单胞菌SFEP-01接种于新鲜斜面菌种培养基上，25-30℃培养1-2天得活化菌体；
(2)将步骤(1)制得的活化菌体接种于液体种子培养基中，25-30℃培养8-24小时，得种子液；
(3)将步骤(2)制得的种子液接种至发酵培养基，25-30℃发酵48－72小时至发酵液呈凝胶状，得胞外多糖发酵液。
上述假单胞杆菌(Pseudomonas sp.)SFEP-01斜面菌种培养基为(g/L)：葡萄糖20-50，酵母浸粉2-5，氯化钠2-5,琼脂粉15-20,pH值调至7.0-7.2。
上述假单胞杆菌(Pseudomonas sp.)SFEP-01液体种子培养基为(g/L)：碳源10-60，酵母浸粉3-6，氯化钠2-5，玉米浆粉3-5,硫酸铵1-2，调整pH值7.0-7.2。
上述假单胞杆菌(Pseudomonas sp.)SFEP-01发酵培养基为(g/L)：碳源40-80，酵母浸粉3-6，氯化钠5-8，玉米浆粉3-5，硫酸铵1-2，调整pH值7.0-7.2。
上述假单胞杆菌(Pseudomonas sp.)SFEP-01液体种子培养基和产胞外多糖发酵培养基中，碳源可选甘油、葡萄糖、蔗糖、淀粉、乳糖、柠檬酸盐等，优选为甘油。
上述假单胞杆菌(Pseudomonas sp.)SFEP-01产胞外多糖发酵的培养温度优选为28±2℃。
上述假单胞杆菌(Pseudomonas sp.)SFEP-01液体种子培养时间优选为12-14小时。
上述假单胞杆菌(Pseudomonas sp.)SFEP-01产胞外多糖发酵培养时间优选为60-70小时。
本发明对于假单胞菌(Pseudomonas sp.)SFEP-01胞外多糖进行了组分分离及初步定性：
假单胞菌(Pseudomonas sp.)SFEP-01发酵得到的发酵液加水稀释，离心取上清浓缩至原体积，加乙醇沉淀，收集沉淀干燥即获得胞外多糖粗品。取的SFEP-01菌株胞外多糖粗品，加适量Tris-HCl缓冲液溶解分散，经DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱分离，经检测得到两个分离组分：EPSⅠ和EPSⅡ。EPSⅠ和EPSⅡ再分别用葡聚糖凝胶G-100柱进行层析分离，均只检测到单一组分。
按上述分离方法收集足够量的EPSⅠ和EPSⅡ，分别进行酸水解，水解产物通过纸层析和HPLC分析显示，EPSⅠ水解产物含有葡萄糖、甘露糖、鼠李糖三种成分(见附图6)，EPSⅡ水解产物中只有葡萄糖(见附图7)。
本发明取得了以下有益效果：
(1)本发明提供了一株高产细菌胞外多糖的假单胞菌SFEP-01，其特征在于：该菌株为假单胞菌(Pseudomonas sp.)，菌株已于2016年1月20日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC No:M2016035；该菌株其中所述细菌胞外多糖经分析鉴定主要含有两种成分：EPSⅠ和EPSⅡ，EPSⅠ为杂多糖，单糖残基为葡萄糖、甘露糖和鼠李糖，EPSⅡ为均一多糖，单糖残基为葡萄糖。
(2)本发明提供的假单胞菌(Pseudomonas sp.)SFEP-01可转化甘油、葡萄糖、蔗糖、淀粉等产生凝胶型胞外多糖,经发酵条件适当优化后，SFEP-01菌株发酵胞外多糖产率可达8-12g/L，是一株极具研究开发价值的菌株。
附图说明
图1假单胞杆菌SFEP-01菌株在平板上的培养24小时的菌落特征。
图2假单胞杆菌SFEP-01菌株在平板上的培养48小时的菌落特征。
图3假单胞杆菌SFEP-01菌株在液体培养基中培养12小时的菌体特征。
图4假单胞杆菌SFEP-01菌株在液体培养基中培养24小时的菌体特征。
图5假单胞杆菌SFEP-01菌株产胞外多糖经DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱分离洗脱曲线。
图6假单胞杆菌SFEP-01菌株所产胞外多糖EPSⅠ水解后HPLC谱图。
图7假单胞杆菌SFEP-01菌株所产胞外多糖EPSⅡ水解后HPLC谱图。
具体实施方式
实施例1菌株的分离
发明人在进行海洋真菌发酵生产DHA的过程中发现染菌现象，逐进行污染菌种分离，获得SFEP-01菌株，进一步研究发现该菌株可以利用常见碳源产生大量胞外多糖，经生理生化鉴定和16S rDNA测序分析，鉴定该菌株为假单胞菌(Pseudomonas sp.)。
实施例2假单胞菌SFEP-01发酵胞外多糖的研究
利用SFEP-01菌株发酵生产细菌胞外多糖的方法：
取25-30℃培养1-2天的新鲜斜面接种液体种子培养基，25-30℃培养8-24小时，接种摇瓶发酵培养基，25-30℃摇瓶发酵48－72小时至发酵液呈凝胶状。适量称取发酵产物(因为发酵结束时，发酵液呈凝胶状，因此取样采用称重方式)，采用苯酚硫酸法测定其多糖含量。
SFEP-01菌株产细菌胞外多糖的粗多糖的制取：
发酵结束后，发酵液(呈凝胶状)加水稀释10-50倍，8000-10000r/min离心10min，收集上清液然后再浓缩至原发酵液体积，加入3倍95％的乙醇，充分混匀，静置沉淀，然后再经3000-5000r/min离心或过滤收集沉淀，低温干燥或冷冻干燥即得SFEP-01菌株胞外多糖粗品。
假单胞杆菌(Pseudomonas sp.)SFEP-01斜面菌种培养基为(g/L)：葡萄糖20-50，酵母浸粉2-5，氯化钠2-5,琼脂粉15-20。pH值调至7.0-7.2。
假单胞杆菌(Pseudomonas sp.)SFEP-01液体种子培养基为(g/L)：碳源10-60，酵母浸粉3-6，氯化钠2-5，玉米浆粉3-5,硫酸铵1-2，调整pH值7.0-7.2。
假单胞杆菌(Pseudomonas sp.)SFEP-01产胞外多糖发酵培养基为(g/L)：碳源40-80，酵母浸粉3-6，氯化钠5-8，玉米浆粉3-5，硫酸铵1-2，调整pH值7.0-7.2。
假单胞杆菌(Pseudomonas sp.)SFEP-01液体种子培养基和产胞外多糖发酵培养基中，碳源可选甘油、葡萄糖、蔗糖、淀粉、乳糖、柠檬酸盐等，优选为甘油。
假单胞杆菌(Pseudomonas sp.)SFEP-01所产细菌胞外多糖定性鉴定：
取按上述方法制取的SFEP-01菌株所产细菌胞外多糖粗品，加300-500倍缓冲液溶解溶解分散形成胶体溶液，经DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱分离，得到两个组分EPSⅠ和EPSⅡ(见附图5)，分别收集EPSⅠ和EPSⅡ适当浓缩后再分别用葡聚糖凝胶G-100柱进行层析分离，结果仍为单一组分。收集足够量的EPSⅠ和EPSⅡ，分别进行酸水解，水解产物通过纸层析和HPLC分析显示，EPSⅠ水解产物含有葡萄糖、甘露糖、鼠李糖三种成分(见附图6)，EPSⅡ水解产物中只有葡萄糖(见附图7)。
SFEP-01菌株发酵液中多糖含量以及柱层析收集液中的多糖含量的采用苯酚硫酸法测定，具体操作方法参考《复合多糖生化研究技术》(张惟杰.复合多糖生化研究技术[M].上海：上海科学技术出版社.1987.)p6。
EPSⅠ和EPSⅡ酸水解方法参考《复合多糖生化研究技术》(张惟杰.复合多糖生化研究技术[M].上海：上海科学技术出版社.1987.)p157
水解产物纸层析分析方法参考《复合多糖生化研究技术》(张惟杰.复合多糖生化研究技术[M].上海：上海科学技术出版社.1987.)p10
水解产物HPLC分析方法：进样浓度110-50g/L。色谱柱：Hypersil APS-2(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：乙腈:水＝80:20(V/V)；流速：0.5mL/min；进样量：10uL；柱温：30℃。
实施例3碳源对假单胞菌SFEP-01菌株产细菌胞外多糖的影响
将28℃培养1-2天的菌种斜面接种液体种子培养基，28℃培养14小时，按体积比5％的接种量接入到添加不同碳源的摇瓶发酵培养基中，28℃培养68小时，结束发酵。称取1g发酵产物，加水适当稀释，稀释液采用苯酚硫酸法测定的多糖含量。SFEP-01菌株利用不同碳源胞外多糖的产率见表2。
表2碳源对SFEP-01菌株产胞外多糖的影响
斜面培养基组成为(g/L)：葡萄糖2，蛋白胨10，牛肉膏5，氯化钠3，琼脂20，调整pH7.0-7.2，蒸馏水配制。
发酵用液体种子培养基组成(g/L)葡萄糖20，酵母浸粉5，氯化钠3，玉米浆粉6，硫酸铵2，调整pH值7.0-7.2，自来水配制。
发酵培养基组成(g·L-1)：碳源60，酵母浸粉5，氯化钠3，玉米浆粉3，硫酸铵2，调整pH值7.0-7.2，自来水配制。
实施例4假单胞菌(Pseudomonas sp.)SFEP-01产胞外多糖的定性分析
将28℃培养1-2天的菌种斜面接种液体种子培养基，28℃培养14小时，按体积比5％的接种量接入到添加不同碳源的摇瓶发酵培养基中，28℃培养68小时，结束发酵。收集发酵液(凝胶状)约1L，苯酚硫酸法测多糖含量为10.85g/L，加水稀释50倍，8000-10000r/min离心10min，收集上清液然后再浓缩至原发酵液体积约1L，加入3倍95％的乙醇，充分混匀，静置沉淀，然后再经3000-5000r/min离心，收集沉淀，冷冻干燥，得胞外多糖粗品8.32g。
取上述制取的细菌胞外多糖粗品1g，加300倍缓冲液溶解分散，分次(每次上样量20ml)上样过DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱分离(3.5×40)，用1.2mol/L的氯化钠溶液进行线性梯度洗脱，洗脱的流速为1.5BV/hr，5ml收集1管，检测收集管中的多糖含量，绘制洗脱曲线，得到两个洗脱峰，峰Ⅰ和峰Ⅱ，分别收集，将收集液浓缩至多糖含量大约1g/L，再用葡聚糖凝胶G-100柱层析，峰Ⅰ和峰Ⅱ浓缩物过葡聚糖凝胶G-100柱后，均得到一个洗脱峰。单独收集后对应峰Ⅰ和峰Ⅱ命名多糖组分为EPSⅠ和EPSⅡ。收集足够量的EPSⅠ和EPSⅡ，浓缩至多糖含量10-20g/L，分别进行酸水解，水解产物通过纸层析和HPLC分析，EPSⅠ水解产物含有葡萄糖、甘露糖、鼠李糖三种成分(见附图6)，EPSⅡ水解产物中只有葡萄糖(见附图7)。
斜面培养基组成为(g/L)：葡萄糖20，蛋白胨10，牛肉膏5，氯化钠3，琼脂20，调整pH7.0-7.2，蒸馏水配制。
发酵用液体种子培养基组成(g/L)甘油20，酵母浸粉5，氯化钠3，玉米浆粉6，硫酸铵2，调整pH值7.0-7.2，自来水配制。
发酵用培养基组成(g·L-1)：甘油60，酵母浸粉5，氯化钠3，玉米浆粉3，硫酸铵2，调整pH值7.0-7.2，自来水配制。。
实施例5假单胞菌(Pseudomonas sp.)SFEP-01发酵产胞外多糖
将30℃培养2天的菌种斜面接种液体种子培养基，30℃培养12小时，按体积比10％的接种量接入到摇瓶发酵培养基中，30℃培养68小时，结束发酵。称取1g发酵产物，加水稀释150倍，苯酚硫酸法测定的胞外多糖产率为8.75g/L。
斜面培养基组成为(g/L)：葡萄糖20，蛋白胨10，牛肉膏5，氯化钠3，琼脂20，调整pH7.0-7.2，蒸馏水配制。
发酵用液体种子培养基组成(g/L)甘油20，酵母浸粉5，氯化钠3，玉米浆粉6，硫酸铵2，调整pH值7.0-7.2，自来水配制。
发酵用培养基组成(g·L-1)：甘油60，酵母浸粉5，氯化钠3，玉米浆粉3，硫酸铵2，调整pH值7.0-7.2，自来水配制。。
实施例6假单胞菌(Pseudomonas sp.)SFEP-01发酵产胞外多糖
将28℃培养1天的菌种斜面接种液体种子培养基，25℃培养16小时，按体积比10％的接种量接入到摇瓶发酵培养基中，30℃培养68小时，结束发酵。称取1g发酵产物，加水稀释150倍，苯酚硫酸法测定的胞外多糖含量为11g/L。
斜面培养基组成为(g/L)：葡萄糖20，蛋白胨10，牛肉膏5，氯化钠3，琼脂20，调整pH7.0-7.2，蒸馏水配制。
发酵用液体种子培养基组成(g/L)甘油20，酵母浸粉5，氯化钠3，玉米浆粉6，硫酸铵2，调整pH值7.0-7.2，自来水配制。
发酵用培养基组成(g·L-1)：甘油60，酵母浸粉5，氯化钠3，玉米浆粉3，硫酸铵2，调整pH值7.0-7.2，自来水配制。
实施例7假单胞菌(Pseudomonas sp.)SFEP-01发酵产胞外多糖
将28℃培养1-2天的菌种斜面接种液体种子培养基，25℃培养18小时，按体积比10％的接种量接入到摇瓶发酵培养基中，25℃培养72小时，结束发酵。称取1g发酵产物，加水稀释150倍，苯酚硫酸法测定的胞外多糖产量为9.87g/L。
发酵用液体种子培养基组成(g/L)甘油20，酵母浸粉5，氯化钠3，玉米浆粉6，硫酸铵2，调整pH值7.0-7.2，自来水配制。
发酵用培养基组成(g·L-1)：甘油70，酵母浸粉5，氯化钠3，玉米浆粉5，硫酸铵2，调整pH值7.0-7.2，自来水配制。
实施例8假单胞菌(Pseudomonas sp.)SFEP-01发酵产胞外多糖
将28℃培养1天的菌种斜面接种液体种子培养基，30℃培养14小时，按体积比8％的接种量接入到摇瓶发酵培养基中，30℃培养60小时，结束发酵。称取1g发酵产物，加水稀释150倍，苯酚硫酸法测定的胞外多糖产量为8.62g/L。
发酵用液体种子培养基组成(g/L)：甘油20，酵母浸粉5，氯化钠3，玉米浆粉6，硫酸铵2，调整pH值7.0-7.2，自来水配制。
发酵用培养基组成(g·L-1)：甘油60，酵母浸粉5，氯化钠3，玉米浆粉5，硫酸铵1，调整pH值7.0-7.2，自来水配制。
实施例9假单胞菌(Pseudomonas sp.)SFEP-01发酵产胞外多糖
将28℃培养1.5天的菌种斜面接种液体种子培养基，28℃培养10小时，按体积比10％的接种量接入到摇瓶发酵培养基中，28℃培养72小时，结束发酵。称取1g发酵产物，加水稀释150倍，苯酚硫酸法测定的胞外多糖产率为11.85g/L。
发酵用液体种子培养基组成(g/L)甘油20，酵母浸粉5，氯化钠3，玉米浆粉6，硫酸铵2，调整pH值7.0-7.2，自来水配制。
发酵用培养基组成(g·L-1)：甘油80，酵母浸粉5，氯化钠3，玉米浆粉5，硫酸铵1，调整pH值7.0-7.2，自来水配制。
应当理解的是，本发明的上述具体实施方式仅仅用于示例性说明或解释本发明的原理，而不构成对本发明的限制。因此，在不偏离本发明的精神和范围的情况下所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。此外，本发明所附权利要求旨在涵盖落入所附权利要求范围和边界、或者这种范围和边界的等同形式内的全部变化和修改例。

Claims (6)

1.一种高产胞外多糖的假单胞菌(Pseudomonas sp.)SFEP-01，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2016年1月14日，保藏编号为CCTCCNo:M2016035，保藏地址：中国武汉武汉大学。
2.权利要求1所述假单胞菌(Pseudomonas sp.)SFEP-01在制备细菌胞外多糖中的应用。
3.一种利用权利要求1所述假单胞菌(Pseudomonas sp.)SFEP-01发酵胞外多糖的方法，步骤如下：(1)将假单胞菌SFEP-01接种于新鲜斜面菌种培养基上，25-30℃培养1-2天得活化菌体；
(2)将步骤(1)制得的活化菌体接种于液体种子培养基中，25-30℃培养8-24小时，得种子液；
(3)将步骤(2)制得的种子液接种至发酵培养基，25-30℃发酵48－72小时至发酵液呈凝胶状，得胞外多糖发酵液。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述液体种子培养基和发酵培养基中，碳源为甘油、葡萄糖、蔗糖、淀粉、乳糖、柠檬酸盐中的一种或几种。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述液体种子培养基和发酵培养基中，碳源为甘油。
6.根据权利要求3-5任一项所述的方法，其特征在于，斜面菌种培养基为：葡萄糖20-50，酵母浸粉2-5，氯化钠2-5,琼脂粉15-20,pH值调至7.0-7.2；
液体种子培养基为：碳源10-60，酵母浸粉3-6，氯化钠2-5，玉米浆粉3-5,硫酸铵1-2，调整pH值7.0-7.2；
发酵培养基为：碳源40-80，酵母浸粉3-6，氯化钠5-8，玉米浆粉3-5，硫酸铵1-2，调整pH值7.0-7.2；
上述培养基各组分的含量以g/L计。
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