CN105659095A

CN105659095A - 在心力衰竭中用于抑制素治疗分层的标记物

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Publication number: CN105659095A
Application number: CN201480058798.3A
Authority: CN
Inventors: D.布洛克; H.布伦纳; T.迪特勒; U-H.温许斯-特伦; C.曹格; A.齐格勒
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG
Priority date: 2013-08-26
Filing date: 2014-08-26
Publication date: 2016-06-08
Anticipated expiration: 2034-08-26
Also published as: WO2015028469A3; JP6625535B2; WO2015028469A2; EP2843414B1; CN110658344A; JP2020046432A; US20160169911A1; US11460474B2; US20220206015A1; JP2016529505A; JP6934508B2; CN105659095B; US10234464B2; HK1225443A1; EP2843414A1; US20190154706A1; EP3441768A3; JP2021185371A; EP3441768A2; CA2920066A1

Abstract

本发明涉及鉴定具有心力衰竭的患者为可能对包括抑制素的治疗应答的方法。所述方法基于在患者的样品中测量选自以下的至少一种标记物的水平：GDF-15(生长分化因子15)、尿素、SHBG(性激素结合球蛋白)、尿酸、PLGF(胎盘生长因子)、IL-6(白介素-6)、转铁蛋白、心肌肌钙蛋白、sFlt-1(可溶性fms-样酪氨酸激酶-1)、前白蛋白、铁蛋白、骨桥蛋白、sST2(可溶性ST2)和hsCRP？(高敏C-反应蛋白)。进一步设想的是预测患者遭受死亡或住院治疗的风险的方法，其中所述患者具有心力衰竭且经历包括抑制素的治疗。所述方法还基于测量上文提及的标记物中至少一种的水平。

Description

在心力衰竭中用于抑制素治疗分层的标记物

本发明涉及鉴定具有心力衰竭的患者为可能对包括抑制素的治疗应答的方法。所述方法是基于在患者的样品中测量选自以下的至少一种标记物的水平：GDF-15(生长分化因子15)、尿素、SHBG(性激素结合球蛋白)、尿酸、PLGF(胎盘生长因子)、IL-6(白介素-6)、转铁蛋白、心肌肌钙蛋白、sFlt-1(可溶性fms-样酪氨酸激酶-1)、前白蛋白、铁蛋白、骨桥蛋白、sST2(可溶性ST2)和hsCRP(高敏C-反应蛋白)。进一步的设想是预测患者遭受死亡或住院治疗的风险的方法，其中所述患者具有心力衰竭且进行包括抑制素的治疗。所述方法还基于测量上文提及的标记物中至少一种的水平。

心力衰竭（HF）是全球许多国家发病率和死亡率的主要原因。除了伊伐布雷定（Ivabradine）和心脏再同步治疗（CRT），近年来没有对心力衰竭的新型疗法。相反，近十年来的大多数药物候选均在开发III期或之前失败。

与此同时，抑制素治疗已成为冠状动脉疾病（CAD）的初级和二级预防中的基础治疗。虽然CAD是许多心力衰竭病例的基础，但是在慢性心力衰竭（CHF）中使用抑制素治疗没有得到主要指导的支持。这是因为抑制素在CHF的大规模III期试验中是不起作用的(neutral)。具体地，CORONA和GISSI-HF试验前瞻性地研究了每日10mg罗苏伐他汀在具有CHF的患者中的用途（JAmCollCardiol2009;54:1850–9;Lancet2008;372:1231–9）。两个试验均没能在它们最初的终点证明抑制素治疗的有益效果。

CORONA和GISSI-HF试验的结果导致将抑制素治疗在HF指南中被排除。然而，可能有HF患者的子集可以从抑制素治疗中受益。HeartProtectionStudy的因果分析（Lancet.2002;360:7–22）和CORONA试验展示在具有更高NT-proBNP水平的患者中抑制素治疗的减少的益处。相似地，抑制素在具有高半乳凝素-3水平的患者中更少有益（EurHeartJ.2012;33:2290-6）。然而，关于半乳凝素-3和抑制素益处的这一发现可能在GISSI-HF研究的分析中未被证实（LatiniR.,个人通讯）。

Bonaca等人2011(ArteriosclerThrombVaseBiol.2011Jan;31(1):203-10)公开了其中分析GDF-15在出院者中是否可以作为死亡、复发性心肌梗死和充血性心力衰竭的风险评价的标记物的研究。其进一步分析了这些风险是否可以由抑制素改善。根据Bonaca，GDF-15不是抑制素治疗的治疗功效的合适的标记物。

WO09/047283公开了决定包括抑制素治疗的哪种治疗或治疗组合被应用于心肌梗死后的患者的重塑过程的方法，其是基于三种标记物的检测：利尿钠肽、心肌肌钙蛋白和炎症标记物如GDF-15。然而，所述文件不涉及使用抑制素的心力衰竭患者的治疗的分层(stratification)。

US2011/0065204公开了用于鉴定患者对心力衰竭治疗的灵敏性的方法，其是基于GDF-15在患有心力衰竭的患者的样品中的定量。抑制素治疗被提及为描述于实例中的研究中登记的患者的可能的治疗，但不是用于心力衰竭的治疗。此外，GDF-15没有被作为标记物公开，所述标记物可以用于鉴定患者为可能对或可能不对抑制素治疗应答。

WO2009/138451公开了决定将哪种抑制素药物用于表面上稳定的患有心力衰竭并经历生理学状态变化的患者的方法，所述方法包括在给定时间间隔内在患者样品中反复地确定肽标记物NT-proANP、NT-proBNP、心肌肌钙蛋白和GDF-15的量。

Sola等人(JCardFail.2005Oct;11(8):607-12)公开了在使用抑制素治疗的心力衰竭患者中，IL-6水平减少显示抑制素对炎症过程发挥正面影响。所述公开没有公开IL-6可以在心力衰竭患者中抑制素的治疗应用之前用于分层。

WO2007/26214公开了预测患者对药物或药物候选的应答的方法。作为数种药物中的一种，提及了抑制素。

在基于本发明的研究的背景下，有利地显示GDF-15(生长分化因子15)、尿素、SHBG(性激素结合球蛋白)、尿酸、PLGF(胎盘生长因子)、IL-6(白介素-6)、转铁蛋白、心肌肌钙蛋白、sFlt-1(可溶性fms-样酪氨酸激酶-1)、前白蛋白、铁蛋白、骨桥蛋白、sST2(可溶性ST2)和hsCRP(高敏c-反应蛋白)可以使用以鉴定对抑制素治疗应答的心力衰竭患者的子集。特别地，血液中的生物标记物水平可以预测心力衰竭患者是否将从抑制素治疗中获益或将受害。

因此，本发明涉及鉴定具有心力衰竭的患者为可能对包括抑制素的治疗应答的方法，其包括

（a）在患者的样品中测量选自以下的至少一种生物标记物的水平：GDF-15(生长分化因子15)、尿素、SHBG(性激素结合球蛋白)、尿酸、PLGF(胎盘生长因子)、IL-6(白介素-6)、转铁蛋白、心肌肌钙蛋白、sFlt-1(可溶性fms-样酪氨酸激酶-1)、前白蛋白、铁蛋白、骨桥蛋白、sST2(可溶性ST2)和hsCRP(高敏c-反应蛋白)，且

（b）将所述至少一种生物标记物的水平与各自参考水平比较。

在实施方案中，所述方法进一步包括步骤（c）：当患者样品中的生物标记物的水平（取决于各自标记物）高于或低于参考水平时，鉴定患者为更可能或更不可能对包括抑制素的治疗进行应答。优选的诊断算法在本文别处公开。

在进一步的实施方案中，所述方法包括步骤（d）：推荐、开始或中止包括抑制素的治疗。

在一个实施方案中，至少一种生物抑制剂的水平通过以下进行测量：将样品与特异性结合各自标记物的试剂接触，从而在试剂和所述标记物之间形成复合体，检测形成的复合体的量，并从而测量所述标记物的水平。这特别适合于如果被测量的生物标记物是多肽(GDF-15、SHBG、PLGFIL-6、转铁蛋白、心肌肌钙蛋白、sFlt-1、前白蛋白、铁蛋白、骨桥蛋白、sST2和hsCRP)。

如果生物标记物是尿酸或尿素，所述生物标记物的水平优选地通过将样品与允许所述生物标记物转换的化合物的酶接触进行测量。

如果被测量生物标记物是尿酸，所述生物标记物的水平优选地通过将样品与允许尿酸氧化的化合物或酶接触进行测量。酶优选地是尿酸酶(EC1.7.3.3)，其催化尿酸氧化为5-羟基异尿酸。化合物优选地是磷钨酸。

如果被测量的生物标记物是尿素，所述生物标记物的水平优选地通过将样品与尿素酶(EC3.5.1.5)接触进行测量，所述尿素酶催化尿素水解为二氧化碳和氨。另外，样品可以随后与谷氨酸脱氢酶（EC1.4.1.2）接触。在第二反应中，2-酮戊二酸在谷氨酸脱氢酶（GLDH）和辅酶NADH存在的情况下与氨反应以产生L-谷氨酸。

本发明的方法优选地是先体外后体内或体外方法。此外，其可以包括除了上文明确提及的以外的步骤。例如，进一步的步骤可以涉及样品预处理或对由所述方法获得的结果的评价。所述方法可以人工地或辅助以自动化实施。优选地，步骤（a）和/或（b）可以全部或部分由自动化辅助，例如，在步骤（a）中通过合适的机器和传感器设备用于确定或在步骤（b）中计算机执行比较和/或基于所述比较进行评价。

在本发明方法的背景中，将对患者鉴定为可能对包括抑制素的治疗即包括一种抑制素施用（或多于一种抑制素的施用）的治疗的应答。优选地，所述抑制素经口施用。

抑制素是本领域熟知的。抑制素（通常还指的是“HMG-CoA还原酶抑制剂”）是用于通过抑制所述酶：HMG-CoA还原酶降低胆固醇水平的一类药物，其在肝中的胆固醇生产中起重要作用。通过抑制HMG-CoA还原酶，抑制素阻断在肝中合成胆固醇的途径。这是重要的，因为大多数循环胆固醇来源于内部制造而非饮食。

抑制素被分为两组，i）发酵衍生的和ii）合成的。在本发明的背景下，抑制素既可以是合成的也可以是发酵衍生的。优选的抑制素选自以下：阿托伐他汀、西立伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、美伐他汀、匹伐他汀、普伐他汀、罗苏伐他汀和辛伐他汀。在特别优选的实施方案中抑制素是阿托伐他汀或普伐他汀。

如本文使用的短语“鉴定患者”优选地指的是使用涉及患者样品中至少一种本文所指的标记物水平生成的信息或数据，以鉴定或选择患者更可能或更不可能从包括抑制素的治疗受益。特别地，如果所述治疗减少了所述患者死亡的风险和/或减少了所述患者住院治疗的风险（优选地，在被测试的样品已获得后18个月或3年的窗口期内），则患者被视为对包括抑制素的治疗应答（且因此，更可能从所述治疗受益）。优选地，上文提及的一种或多种风险减少至少5%、更优选地减少至少10%且最优选地减少20%。而且，如果所述治疗不减少死亡和/或住院治疗的风险，特别地不显著减少所述所述患者死亡和/或住院治疗的风险（优选地，在被测试的样品已获得后18个月或3年的窗口期内），则患者被视为不对包括抑制素的治疗应答（且因此，更不可能从所述治疗受益）。在该情况中，如果不施用所述药物，可以避免不必要的卫生护理成本。进一步地，可以避免由包括抑制素的治疗导致的不良副作用。

术语“死亡”和“住院治疗”定义于本文中。

用于鉴定所使用或生成的信息或数据可以以任何形式，书写的、口头的或电子的。在一些实施方案中，使用生成的信息或数据包括交流、呈现、报道、贮存、发送、传输、提供、传播、分配或其组合。在一些实施方案中，通过计算机设备、分析仪单元或其组合执行交流、呈现、报道、贮存、发送、传输、提供、传播、分配或其组合。在一些进一步的实施方案中，通过实验室或医学专业人员执行交流、呈现、报道、贮存、发送、传输、提供、传播、分配或其组合。在一些实施方案中，信息或数据包括至少一种标记物的水平与参考水平的比较。在一些实施方案中，信息或数据包括指示患者更可能或更不可能对包括抑制素的治疗应答。

术语“更不可能”和“更可能”是技术人员理解的。与患者群体的平均可能性相比，更可能对包括抑制素的治疗应答的患者对所述治疗具有提高的可能性，特别地具有显著提高的可能性，而更不可能对包括抑制素的治疗应答的患者与患者群体的平均可能性相比，对所述治疗的应答具有降低的可能性，特别地具有显著降低的可能性。优选地，患者的群体显示相同的特征。特别地，设想的是患者包括在具有心力衰竭的群体中。此外，如本文别处说明的，患者可以患有或可以不患有冠状动脉疾病（其可以取决于测量的生物标记物）。提高的可能性意为相比于患者群体中的平均可能性，可能性优选地提高至少10%、更优选地至少20%或30%和最优选地至少40%。减少的可能性意为相比于患者群体中的平均可能性，可能性优选地减少至少10%、更优选地至少20%或30%和最优选地至少40%。

如本领域技术人员将理解的，评估患者是否可能对包括抑制素的治疗应答通常不意在对被评估的患者是100%正确的。然而，该术语要求评估对于统计学显著部分的患者（例如，群组研究中的群组）是正确的。一部分是否是统计学显著的可以通过本领域技术人员使用各种熟知的统计评估工具，例如置信区间的确定，p-值确定、学生t-检验、Mann-Whitney检验等而无需进一步费力来确定。详述在Dowdy和Wearden,StatisticsforResearch,JohnWiley&Sons,NewYork1983中发现。优选的置信区间是至少90%、至少95%、至少97%、至少98%或至少99%。p-值是，优选地，0.1、0.05、0.01、0.005或0.0001。更优选地，患者群体的至少60%、至少70%、至少80%或至少90%可以通过本发明的方法适当地鉴定。

术语“患者”和“主体”在本文中可互换地使用。如本文使用的术语，在上述方法背景下涉及动物优选为哺乳动物，且更优选地为人。本文的“患者”或“主体”优选地，是对治疗合格的任何单个人主体，其正在经历或已经历心力衰竭的一种或多种体征、症状或其它指示物。意图包括为主体的是任何涉及临床研究试验的主体，或涉及流行病学研究的主体、或曾经作为对照的主体。患者可以先前已使用抑制素治疗，或没有。因此，被测试的患者可以在获得要被测试的样品之前已使用抑制素治疗，或可以在获得样品之前还没有使用抑制素治疗。

在本发明的背景中设想的是，患者患有心力衰竭（HF），特别是症状性心力衰竭。

如本文使用的术语“心力衰竭”涉及心脏受损的心脏收缩和/或心脏舒张功能，其伴随有本领域技术人员已知的明显的心力衰竭体征。优选地，在本文中心力衰竭也指的是慢性心力衰竭。根据本发明的心力衰竭包括明显心力衰竭和/或晚期心力衰竭。在明显心力衰竭中，患者显示出本领域技术人员已知的心力衰竭症状。

HF可以被分类至严重性的多个程度。

根据NYHA(NewYorkHeartAssociation)分类，心力衰竭患者可以被分类为属于NYHA类型I、II、III和IV。具有心力衰竭的患者已经经历了他的心包、心肌、冠状循环或心瓣膜的结构和功能变化。他将不能完全恢复他的健康，且需要进行治疗性治疗。NYHA类型I的患者没有心血管疾病的明显症状，但已经具有功能损伤的客观证据。NYHA类型II的患者具有身体活动的轻微限制。NYHA类型III的患者显示出身体活动的显著限制。NYHA类型IV的患者不能没有不适地进行任何身体活动。他们显示出静止时心功能不全的症状。

该功能分类由AmericanCollegeofCardiologyandtheAmericanHeartAssociation(ACC/AHA分类,参见J.Am.Coll.Cardiol.2001;38;2101-2113,更新于2005,参见J.Am.Coll.Cardiol.2005;46;e1-e82)的更新的分类补充。定义了4个阶段A、B、C和D。阶段A和B不是HF但是被认为有助于在发展为“真正的”HF前较早鉴定患者。阶段A和B患者最好定义为具有HF发展的风险因素的患者。例如，具有冠状动脉疾病、高血压或糖尿病的还没有证实受损的左心室（LV）功能、肥大或几何室变形的患者将被视为阶段A，而无症状但证实了LV肥大和/或LV功能受损的患者将被指定为阶段B。然后阶段C表示具有目前或过去与潜在的结构性心脏病相关的HF的症状的患者（具有HF的大多数患者），和阶段D指定的是具有真正的难治HF的患者。

如本文使用的，术语“心力衰竭”特别地，指的是上文ACC/AHA分类指出的阶段B、C和D。在这些阶段中，患者显示出心力衰竭的典型症状和/或显示出心脏的结构和/或功能异常。因此，患有心力衰竭的患者，根据ACC/AHA分类患有被分类为阶段B、C和D的心力衰竭。还优选地，患者患有被分类为NYHA类型II、III或IV的心力衰竭。在优选的实施方案中，术语“心力衰竭”指的是上文所指的ACC/AHA分类的阶段B和C，或被分类为NYHA类型II或类型III的心力衰竭。因此，患者优选患有根据ACC/AHA分类被分类为阶段B或C的心力衰竭。还优选地，患者患有被分类为NYHA类型II或III的心力衰竭。

除了心力衰竭，患者可以或可以不患有冠状动脉疾病，取决于被测量的生物标记物。

如果生物标记物是转铁蛋白或铁蛋白，患者优选的患有心力衰竭和冠状动脉疾病。

如果生物标记物是骨桥蛋白或sST2，患者优选的患有心力衰竭但优选地不患有冠状动脉疾病。

如果生物标记物是GDF-15、尿素、尿酸、心肌肌钙蛋白、SHBG、前白蛋白、PlGF、sFlt-1、IL-6或hsCRP，患者可以或可以不患有冠状动脉疾病。然而，在生物标记物是尿素、尿酸、sFlt-1、PlGF或IL-6的情况下，优选地患者还患有CAD。

术语“冠状动脉疾病”，缩写CAD，也经常称为冠心病（CHD）或动脉粥样硬化性心脏病，是本领域技术人员已知的。优选地，术语指的是这样的状况，其中供应血液和氧气至心脏的血管变窄。冠状动脉疾病通常由被称为动脉粥样硬化的状况导致，其在当脂肪物质和被称为斑块的物质在你的动脉壁上堆积时出现。这导致它们的内腔变窄。特别地，CAD是动脉粥样化斑在供给心肌（心脏肌肉）的动脉壁内积累的结果。优选地，具有稳定CAD的患者在至少一条主冠状动脉中具有至少50%狭窄（且因此至少50%阻塞）。如何评价冠状动脉阻塞的程度是本领域熟知的，优选地，所述程度通过冠状动脉造影评价。而冠状动脉疾病的症状和体征在疾病的晚期阶段被注意，很多具有冠状动脉疾病的个体数十年没有显示出疾病的迹象，因为在急性事件的症状（通常是“突发性”心脏病发作）的第一次出现前疾病进展，最终发生。

如果患者还具有冠状动脉疾病，特别考虑患者具有稳定的冠状动脉疾病。在该背景下术语“稳定的”意为患者不患有ACS（急性冠脉综合征），特别是在受测试的样本已经获得时。本领域熟知术语“ACS”且其包括STEMI（ST-抬高型心肌梗死）；NSTEMI（非ST-抬高型心肌梗死）和不稳定心绞痛。进一步预期的是受测试的患者不具有ACS的近期史，且因此应当不在近期患有ACS。特别地，患者应当在实施本发明的方法前一个月内（更精确地，在获得样本前一个月内）不患有ACS。

优选地，在本发明背景下的患者不具有损伤的肾功能。优选地，患者应当不患有肾衰竭，特别是患者不应当患有急性的、慢性的和/或末期肾衰竭。进一步的，患者优选地不应当患有肾性高血压。如何评价患者是否展现出受损的肾功能是本领域熟知的。肾病症可以通过已知的和被认为合适的任何方式进行诊断。特别地，肾功能可以通过肾小球滤过率（GFR）的方式评价。例如，GFR可以通过Cockgroft-Gault或MDRD公式(Levey1999,AnnalsofInternalMedicine,461-470)计算。GFR是每单位时间流体从肾小球毛细管过滤至鲍氏囊的体积。在临床上，这经常被用于确定肾功能。全部衍生自公式，诸如CockgroftGault公式或MDRD公式的计算递送估计值且不是“真实的”GFR，其通过将菊粉注射至血浆进行。因为菊粉在肾小球过滤后不通过肾脏再吸收，其排泄速率直接与通过肾小球滤器的水和溶质的过滤速率成正比。然而，在临床实践中，肌酸酐清除率被用于测量GFR。肌酸酐是内源性分子，其在体内合成，其通过肾小球自由地过滤（但是也通过肾小管以很少的量分泌）。因此肌酸酐清除率（CrCl）是GFR的接近近似值。GFR通常以每分钟毫升(mL/分钟)记录。GFR的正常范围对于男性为97至137mL/分钟，GFR的正常范围对于女性为88至128ml/分钟。因此，特别考虑的是没有展示出受损的肾功能的患者的GFR在该范围内。此外，所述主体优选地具有低于0.9mg/dl，更优选地低于1.1mg/dl且最优选地低于1.3mg/dl的血肌酸酐水平（特别是血清肌酸酐水平）。

术语“样品”指的是体液样品，指的是分离的细胞的样品或来自组织或器官的样品。体液的样品可以通过熟知技术获得，且包括，血液、血浆、血清、尿液、淋巴液、唾液、腹水、支气管灌洗液或其它任何身体分泌物或其衍生物的样品。组织或器官样品可以通过例如活组织检查从任何组织或器官获得。分离的细胞可以通过分离技术诸如离心或细胞分选从体液或组织或器官获得。例如，细胞-、组织-或器官样品可以从表达或产生生物标记物的那些细胞、组织或器官获得。样品可以是冷冻的、新鲜的、固定的（例如福尔马林固定）、离心的和/或包埋的（例如，石蜡包埋）等。细胞样品当然可以在评价样品中标记物的量之前经历多种熟知的收集后制备和储藏技术（例如，核酸和/或蛋白质提取、固定、储藏、冷冻、超滤、浓缩、蒸发、离心等）。同样地，活组织检查也可以经历收集后制备和储藏技术，例如固定。

在本发明优选的实施方案中，样品是血液、血清或血浆样品。特别地，考虑在血浆样品中测量生物标记物的水平。

在本发明的背景下，在患者的样品中测量选自以下的至少一种生物标记物的水平：GDF-15(生长分化因子15)、尿素、SHBG(性激素结合球蛋白)、尿酸、PLGF(胎盘生长因子)、IL-6(白介素-6)、转铁蛋白、心肌肌钙蛋白、sFlt-1(可溶性fms-样酪氨酸激酶-1)、前白蛋白、铁蛋白、骨桥蛋白、sST2(可溶性ST2)和hsCRP(高敏c-反应蛋白)。因此，可以测量单一生物标记物的水平，或生物标记物组合的水平。

在优选的实施方案中，测量了选自GDF-15、尿素、SHBG、PLGF或IL-6的至少一种生物标记物的水平。

在下文中，给出了在本发明背景下使用的生物标记物的定义。

术语“生长分化因子-15”或“GDF-15”涉及作为转化生长因子（TGF）细胞因子超家族的成员的多肽。术语多肽、肽和蛋白质在整个本说明书中可互换地使用。GDF-15最初作为巨噬细胞抑制细胞因子1克隆，并且稍后还被鉴定为胎盘转化生长因子-15、胎盘骨形态形成蛋白、非甾体抗炎症药物活化基因1和前列腺衍生因子（Bootcovloccit;Hromas,1997BiochimBiophysActa1354:40-44;Lawton1997,Gene203:17-26;Yokoyama-Kobayashi1997,JBiochem(Tokyo),122:622-626;Paralkar1998,JBiolChem273:13760-13767）。与其它TGF相关细胞因子相似，GDF-15被作为无活性的前体蛋白合成，其经历了二硫键连接的同源二聚化。在N末端前导肽的蛋白质水解切割后，GDF-15作为~28kDa的二聚体蛋白分泌（Bauskin2000,EmboJ19:2212-2220）。GDF-15的氨基酸序列在WO99/06445、WO00/70051、WO2005/113585、Bottner1999,Gene237:105-111,Bootcovloc.cit,Tanloc.cit.,Baek2001,MolPharmacol59:901-908,Hromasloccit,Paralkarloccit,Morrish1996,Placenta17:431-441或Yokoyama-Kobayashiloccit.中公开。在本文中使用的GDF-15还涵盖上文提及的特定GDF-15多肽的变体。这样的变体至少具有与特定GDF-15多肽基本相同的生物学和免疫学特性。特别地，如果它们可以通过本说明书中指出的相同的特异性测定检测（例如，通过使用特异性识别所述GDF-15多肽的多克隆抗体或单克隆抗体的ELISA测定），它们共享必要的生物学和免疫学特性。优选的测定在所附的实施例中描述。此外，应当理解的是根据本发明指出的变体应当具有不同的氨基酸序列，其由于至少一个氨基酸取代、缺失和/或添加而不同，其中所述变体的氨基酸序列还优选地与特定GDF-15氨基酸序列，优选地与人GDF-15氨基酸序列，更优选地在特定GDF-15，例如人GDF-15的全长上具有至少约50%、至少约60%、至少约70%、至少约80%、至少约85%、至少约90%、至少约92%、至少约95%、至少约97%、至少约98%或至少约99%的同一性。两个氨基酸序列之间的同一性程度可以如上文描述的确定。上文所指的变体可以是等位基因变体或任何其它物种的特定同源物、侧向同源物或直向同源物。此外，本文所指的变体包括特定GDF-15多肽或上文提及的变体的类型的片段，只要这些片段具有上文所指的必要免疫学和生物学特性。这样的片段可以是，例如，GDF-15多肽的降解产物。进一步包括的是由于翻译后修饰诸如磷酸化作用或十四烷基化而不同的变体。

术语“心肌肌钙蛋白”还涵盖上文提及的特定肌钙蛋白的变体，即优选地，肌钙蛋白I，和更优选地肌钙蛋白T。这样的变体至少具有与特定心肌肌钙蛋白相同的必要生物学和免疫学特性。特别地，如果它们可以通过本说明书中指出的相同的特定测定检测（例如，通过使用特异性识别所述心肌肌钙蛋白的多克隆抗体或单克隆抗体的ELISA测定），它们共享相同的必要生物学和免疫学特性。此外，应当理解的是根据本发明指出的变体应当具有由于至少一个氨基酸的取代、缺失和/或添加而不同的氨基酸序列，其中所述变体的氨基酸序列还优选地与特定肌钙蛋白的氨基酸序列具有至少约50%、至少约60%、至少约70%、至少约80%、至少约85%、至少约90%、至少约92%、至少约95%、至少约97%、至少约98%或至少约99%同一性。变体可以是等位基因变体或任何其它物种的特定同源物、侧向同源物或直向同源物。此外，本文所指的变体包括特定心肌肌钙蛋白或上文提及的变体的类型的片段，只要这些片段具有上文所指的必要免疫学和生物学特性。优选地，心肌肌钙蛋白变体具有与人肌钙蛋白T或肌钙蛋白I的那些相当的免疫学特性（即表位组合物）。因此，变体应当可以通过上文提及的方法或用于确定心肌肌钙蛋白浓度的配体识别。因此，变体应当可以通过上文提及的方法或用于确定心肌肌钙蛋白浓度的配体识别。这样的片段可以是，例如，肌钙蛋白的降解产物。进一步包括的是由于翻译后修饰，诸如磷酸化作用或十四烷基化而不同的变体。优选地肌钙蛋白I和其变体的生物学特性是抑制肌动球蛋白ATP酶或在体内和体外抑制血管生成的能力，其可以基于例如通过Moses等人1999PNASUSA96(6):2645-2650)描述的测定进行检测。优选地肌钙蛋白T和其变体的生物学特性是与肌钙蛋白C和I形成复合体的能力，以结合钙离子或结合原肌球蛋白，优选地以肌钙蛋白C、I和T的复合体或由肌钙蛋白C、肌钙蛋白T和肌钙蛋白T的变体形成的复合体存在。已知的是低浓度的循环心肌肌钙蛋白可以在多种条件下在主体内检测，但是需要进一步的研究以理解他们各自的作用和比率（Masson等人,CurrHeartFailRep(2010)7:15–21）。

骨桥蛋白（OPN），也被称为骨唾液蛋白I（BSP-1或BNSP），早期T-淋巴细胞活化（ETA-1）、分泌型磷蛋白质1（SPP1）、2ar和立克次氏体抗性（Ric），其是作为高度带阴性电荷的、胞外基质蛋白的多肽，其缺乏广泛的二级结构。其由约300个氨基酸（在小鼠中297、在人中314）构成，且表达为33-kDa初生蛋白；还有功能重要的切割位点。OPN可以经历翻译后修饰，这增加其表观分子量至约44kDa。骨桥蛋白的序列是本领域熟知的(人骨桥蛋白:UniProtP10451,GenBankNP_000573.1)，骨桥蛋白在正常血浆、尿液、乳和胆汁中被发现(US6,414,219;US5,695,761;Denhardt,D.T.和Guo,X.,FASEBJ.7(1993)1475-1482;Oldberg,A.,等人,PNAS83(1986)8819-8823;Oldberg,A.,等人.,J.Biol.Chem.263(1988)19433-19436;Giachelli,CM.,等人,TrendsCardiovasc.Med.5(1995)88-95)。人OPN蛋白和cDNA已被分离并测序（KieferM.C,等人,Nucl.AcidsRes.17(1989)3306）。OPN在细胞粘附、趋化性、巨噬细胞指向的白介素-10中起作用。OPN已知与数种整联蛋白受体相互作用。增加的OPN表达已经在数种人癌症中报导，且已经鉴定了它的同源受体（av-b3、av-b5和av-bl整联蛋白和CD44）。通过Irby,R.B.,等人,Clin.Exp.Metastasis21(2004)515-523的体外研究指示内源性OPN表达（通过稳定转染）以及外源性OPN（添加至培养基）均在体外增加人结肠癌细胞的移动性和侵袭能力。

如本文使用的术语“可溶性Flt-1”或“sFlt-1”指的是多肽，其是VEGF受体Flt1的可溶形式。其在人脐带静脉内皮细胞的条件性培养基中鉴定。内源可溶性Flt1(sFlt1)受体在层析和免疫学上与重组人sFlt1相似且以相当高的亲和性结合[125I]VEGF。人sFlt1显示与KDR/Flk-1的胞外结构域在体外形成VEGF-稳定复合体。优选地，sFlt1指的是人sFlt1。更优选地，人sFlt1可以从Genbank登录号P17948,GI:125361中显示的Flt-1的氨基酸序列推出。小鼠sFlt-1的氨基酸序列在Genbank登录号BAA24499.1,GI:2809071中显示。

如本文使用的术语“sFlt-1”还涵盖上文提及的特定sFlt-1多肽的变体。这样的变体至少具有与特定sFlt-1多肽相同的必要生物学和免疫学特性。特别地，如果它们可以通过本说明书中指出的相同的特定测定检测（例如，通过使用特异性识别所述sFlt-1多肽的多克隆抗体或单克隆抗体的ELISA测定），它们共享相同的必要生物学和免疫学特性。对术语“变体”的更详细的解释，请参见上文。

如本文使用的术语“PlGF”（胎盘生长因子）指的是胎盘衍生的生长因子，其是149个氨基酸长的多肽，且与人血管内皮细胞生长因子（VEGF）的血小板衍生的生长因子样区域高度同源（53%同一性）。如VEGF，PlGF在体外和体内具有血管生成活性。例如，衍生自转染的COS-1细胞的PlGF的生化和功能表征展示其是能够在体外刺激内皮细胞生长的糖基化二聚分泌蛋白（Maqlione1993,Oncogene8(4):925-31）。优选地，PlGF指的是人PlGF，更优选地指的是具有在Genbank登录号P49763,GI:17380553中显示的氨基酸序列的人PlGF。

ST2，频繁地还指的是“白介素1受体样1”，是IL-1受体家族的成员，其通过心肌成纤维细胞和心肌细胞在机械应力状况下产生。ST2是白介素-1受体家族成员且以膜结合同种型和可溶性同种型（sST2）两者存在。在本发明的背景下，可溶性ST2的量应当被确定（参见Dieplinger等人(ClinicalBiochemistry,43,2010:1169至1170）。ST2也被称为白介素1受体样1或IL1RL1，其在人中通过IL1RL1基因编码。人ST2多肽的序列是本领域熟知的，且例如可以通过GenBank,参见NP_003847.2GI:27894328获得。可溶性ST2（sST2）被认为通过结合IL-33作为诱饵受体作用，且通过ST2的细胞膜结合形式消除IL-33信号传导的另外的心脏保护效果。

白介素-6(缩写为IL-6)是通过T细胞和巨噬细胞分泌的白介素以刺激免疫应答，例如在感染期间和创伤后，特别是烧伤或其它导致炎症的组织受损。其作为促炎性和抗炎性细胞因子作用。在人中，其通过IL6基因编码。人IL-6的序列可以通过GenBank(参见NM_000600.3对于多核苷酸序列，和NP_000591.1对于氨基酸序列）评价。IL-6通过由配体结合IL-6Rα链(CD126)和信号转导组分gp130(也被称为CD130)组成的细胞表面I类细胞因子受体复合体传递信号。CD130是用于数种细胞因子包括白血病抑制因子（LIF）、睫状神经营养因子、制瘤素M、IL-11和心肌营养素-1的常见信号转导蛋白，且其几乎无所不在地在大多数组织中表达。相反，CD126的表达限制于某些组织。因为IL-6与其受体相互作用，其触发gp130和IL-6R蛋白以形成复合体，从而活化受体。这些复合体连同gp130的胞内区域起始通过某些转录因子、酪氨酸激酶（Januskinases，JAK）和信号转导蛋白和转录激活物的信号转导级联。

CRP，本文中也被称为C反应蛋白，其是急性期蛋白，在多于75年前作为结合肺炎球菌（pneumococci）的C多糖的血液蛋白被发现。已知CRP作为反应性炎症标记物，且通过远端器官（即肝）产生，以应答或对源自主要病变部位的趋化因子或白介素反应。CRP由五个信号亚基组成，其是非共价连接的，且组装为环形五聚体，具有大约110-140kDa的分子量。优选地，如本文使用的CRP涉及人CRP。人CRP的序列是熟知的，且被公开在例如Woo等人(J.Biol.Chem.1985.260(24),13384-13388)。CRP的水平通常在正常个体中较低，但由于炎症、感染或受伤可以提高100-200倍或更高(Yeh(2004)Circulation.2004;109:II-11-II-14)。已知CRP是用于心血管风险预测的独立因子。特别地，已显示CRP适合作为心肌梗死、中风、外周动脉疾病和心脏性猝死的预测物。此外，提升的CRP量还可以预测具有急性冠脉综合征（ACS）的患者和经历冠状动脉介入的患者中的复发性局部缺血和死亡。CRP的确定推荐通过专家组（例如，通过AmericanHeartAssociation）在具有冠心病风险的患者中进行（还参见Pearson等人(2003)MarkersofInflammationandCardiovascularDisease.Circulation,107:499-511）。术语CRP也涉及其变体。

优选地，在患者样品中CRP的量通过使用具有高灵敏性的CRP测定进行确定。通过这样的测定确定CRP还经常称为高敏感CRP（hsCRP）。hsCRP测定，例如用于预测心脏病的风险。合适的hsCRP测定是本领域已知的。在本发明背景下特别优选的hsCRP测定是具有0.1mg/l检测限值的Roche/HitachiCRP(Latex)HS测试。

铁蛋白是铁储存蛋白。铁蛋白是具有至少440kDa分子量的大分子，其取决于铁含量，且由24个亚基的蛋白壳（去铁铁蛋白）和含有平均大约2500Fe³⁺离子的铁核组成（在肝和脾铁蛋白中）。在脊椎动物中，这些亚基是轻（L)和重（H)型两者，分别具有19kDA或21kDA的表观分子量。铁蛋白趋于形成寡聚物。至少有20种异铁蛋白可以使用等电聚焦帮助进行区分。这些微观不均一性是由于酸性H和弱碱性L亚基含量的差异。碱性异铁蛋白负责长期铁储存功能，且主要在肝、脾和骨髓中发现。

前白蛋白是色氨酸富集蛋白，其在肝细胞中合成且具有55kDa的摩尔质量。由于其向阳极更大的分散速率，在pH8.6在白蛋白前以<2.5%的相对量出现一条电泳带。其功能是结合和运输低分子量的视黄醇结合蛋白（小于21kDa的摩尔质量），防止它们的肾小球过滤。30-50%的循环前白蛋白与视黄醇结合蛋白形成复合体。此外，其结合和运输甲状腺素（T4）。经常地，前白蛋白也被称为甲状腺素运载蛋白。

性激素结合球蛋白(SHBG)是睾酮和雌二醇的血液运输蛋白。其是具有约95kD分子量的大型糖蛋白，且以由两个相同亚基构成的同源二聚体存在。每个亚基含有两个二硫键。SHBG大多通过肝产生且被释放至血流中。产生SHBG的其它位点包括脑、子宫、睾丸和胎盘。SHBG的序列是本领域熟知的，参见，例如GenBank登录号NP_001031.2GI:7382460)。

转铁蛋白是具有约80kDa分子量的糖蛋白。其包含具有两个N-糖苷连接的寡糖链的多肽链，且以多种同种型存在。在肝中合成的速率可以根据体内的铁需求和铁存量进行改变。转铁蛋白是血清中的铁运输蛋白。在铁缺乏的情况下，转铁蛋白饱和的程度似乎是功能性铁缺乏的非常灵敏的指示物。多种方法可用于确定转铁蛋白，其包括放射免疫扩散、浊度测定法和比浊法。

在本发明的方法的背景下，特别设想的是确定人肽或多肽的量。

尿酸是主体生物体中嘌呤代谢的终产物。IUPAC名称为7,9-二氢-3H-嘌呤-2,6,8-三酮。所述化合物经常被称为尿酸(urate)、尿酸(Lithicacid)、2,6,8-三氧基嘌呤、2,6,8-三羟基嘌呤、2,6,8-三氧代嘌呤、1H-嘌呤-2,6,8-三醇(化学式C₅H₄N₄O₃,PubChemCID1175,CAS号69-93-2)。

尿酸测量被用于诊断和治疗多种肾和代谢病症，包括肾衰竭、痛风、白血病、银屑病、饥饿或其它消耗状况，和接受细胞毒性药物的患者。尿酸的氧化提供了定量确定这一嘌呤代谢的两种方法的依据。一种方法是在碱溶液中还原磷钨酸至钨蓝，其通过光度测定进行测量。第二种方法由Praetorius和Poulson描述，其利用酶尿酸酶氧化尿酸；该方法消除了化学氧化固有的干扰（PraetoriusE,PoulsenH.EnzymaticDeterminationofUricAcidwithDetailedDirections.ScandinavJClinLabInvestigation1953;3:273-280）。可以将尿酸酶用于涉及尿酸消耗的UV测量的方法中或与其它酶组合以提供比色测定。另一种方法是由Town等人(TownMH,GehmS,HammerB,ZiegenhornJ.JClinChemClinBiochem1985;23:591)开发的比色法。开始将样品与含有抗坏血酸氧化酶和透明体系的试剂混合物孵育。在该测试系统中重要的是在样品中存在的任何抗坏血酸在初期反应中被消除；这排除了任何抗坏血酸干扰后续的POD指示物反应。在添加初始试剂后，开始通过尿酸酶氧化尿酸。

在本发明的背景下，尿酸可以通过任何被认为合适的方法确定。优选地，生物标记物通过上文提及的方法确定。更优选地，通过应用稍微改变的上文描述的比色法来确定尿酸。在该反应中，在过氧化物酶（POD）、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺(TOOS)和4-氨基比林存在的情况下将过氧化物反应以形成醌二亚胺染料。形成的红色的强度与尿酸浓度成正比且通过光度确定。

尿素是蛋白氮代谢的主要终产物。其具有化学式CO(NH₂)₂且通过肝中的尿素循环从由氨基酸脱氨产生的氨合成。尿素大多通过肾排出，但是少量也通过汗液排出和通过细菌作用在肠道内降解。血液尿素氮的确定是最广泛使用的肾功能筛选测试。

如本文使用的术语“测量”生物标记物的水平指的是生物标记物的定量，例如使用本文别处描述的合适的检测方法在样品中确定生物标记物的水平。术语“测量”、“检测”和“确定”在本文中可互换地使用。

在本文中所指的生物标记物可以使用本领域通常已知的方法进行检测。检测方法通常涵盖在样品中对生物标记物水平定量的方法（定量方法）。以下哪些方法适合于生物标记物的定性和/或定量检测是本领域技术人员通常已知的。样品可以被方便地测定，例如对于蛋白使用蛋白质印迹和免疫测定，如ELISA、RIA、基于荧光的免疫测定，其是可商购获得的。检测生物标记物的进一步的合适的方法包括测量对肽或多肽特定的物理或化学特性，诸如其确切的分子量或NMR谱。所述方法包括，例如，生物传感器、偶联至免疫测定的光学设备、生物芯片、分析设备诸如质谱仪、NMR-分析仪或层析设备。进一步，方法包括基于微孔板ELISA的方法，全自动或机器免疫测定（例如可在Elecsys^TM分析仪获得）、CBA（酶钴结合测定，例如可以在Roche-Hitachi^TM分析仪获得）和胶乳凝集测定（例如可以在Roche-Hitachi^TM分析仪获得）。

对于本文所指的生物标记物蛋白检测，可以获得使用此类测定形式的广范围的免疫测定技术，参见例如U.S.专利号4,016,043、4,424,279和4,018,653。这些包括非竞争型的单位点和双位点或“夹心”测定，以及传统的竞争性结合测定。这些测定可以包括标记抗体与靶生物标记物的直接结合。

其中的夹心测定是最有用且常用的免疫测定。

测量电化学发光现象的方法是熟知的。这样的方法使用特定金属络合物的能力以通过氧化实现激发态，从激发态它们从衰变至基态，发出电化学发光。综述参见Richter,M.M.,Chem.Rev.104(2004)3003-3036。

生物标记物还可以通过通常已知的方法检测，包括磁共振光谱法（NMR光谱法）、气相层析-质谱(GC-MS)、液相层析-质谱(LC-MS)、高和超-HPLCHPLC，诸如反相HPLC，例如，具有双UV波长检测的离子配对HPLC，具有激光诱导荧光检测的毛细管电泳、阴离子交换层析和荧光检测、薄层层析。

优选地，测量肽或多肽水平包括以下步骤：（a）将能够激发细胞应答（其强度指示了肽或多肽的水平）的细胞与所述肽或多肽接触充足的时间，（b）测量细胞应答。对于测量细胞应答，样品或被处理的样品，优选地被添加至细胞培养物中，并测量内部或外部细胞应答。细胞应答可以包括可测量的报告基因的表达或物质例如肽、多肽或小分子的分泌。所述表达或物质应当生成强度信号，其与肽或多肽的水平相关。

还优选地，测量肽或多肽的水平包括测量从样品中的肽或多肽可获得的特定强度信号的步骤。如上文描述的，这样的信号可以是在m/z变量观察到的对肽或多肽特异的信号强度，其在对肽或多肽特异的质谱或NMR谱中观察到。

测量肽或多肽的水平，优选地包括以下步骤，（a）将肽与特异性结合剂接触，（b）（任选地）去除未结合的结合剂，（c）测量结合的结合剂的水平，即在步骤（a）中形成的结合剂的复合体。根据优选的实施方案，接触、去除和测量的所述步骤可以通过本文描述的系统的分析仪单元执行。根据一些实施方案，所述步骤可以通过所述系统的单一分析仪单元或通过彼此可操作通讯的多于一个的分析仪单元执行。例如，根据特定的实施方案，本文公开的所述系统可以包括用于执行接触和去除的所述步骤的第一分析仪单元，和第二分析仪单元，其可操作地与所述第一分析仪单元通过传送单元（例如机械臂）连接，所述第二分析仪单元执行测量的所述步骤。

结合的结合剂，即结合剂或结合剂/肽复合体，将生成强度信号。根据本发明的结合包括共价结合和非共价结合两种。根据本发明的结合剂可以是任何化合物，例如肽、多肽、核酸或小分子，其结合至本文描述的肽或多肽。优选的结合剂包括抗体、核酸、肽或多肽，诸如肽或多肽的受体或结合配偶体和包含所述肽结合结构域的其片段，和适配子，例如核酸或肽适配子。制备这样的结合剂的方法是本领域熟知的。例如，鉴定和生产合适的抗体或适配子也由商业供应商提供。本领域技术人员对开发具有更高亲和力或特异性的这样的结合剂的衍生物的方法是熟悉的。例如，随机突变可以被引入核酸、肽或多肽。这些衍生物随后可以根据本领域已知的筛选程序例如噬菌体展示测试结合。如本文所指的抗体包括多克隆抗体和单克隆抗体两者，以及其片段诸如Fv、Fab和F(ab)2片段，其能够结合抗原或半抗原。本发明还包括单链抗体和人源化杂合抗体，其中展示期望的抗原特异性的非人供体抗体的氨基酸序列与人受体抗体的序列组合。供体序列将通常至少包括供体的抗原结合氨基酸残基，但也可以包括供体抗体的其它结构和/或功能相关氨基酸残基。这样的杂合体可以通过本领域熟知的数种方法制备。优选地，结合剂或试剂特异地结合肽或多肽。根据本发明的特异性结合意为配体或试剂不应当实质上与被分析的样品中存在的另一肽、多肽或物质结合（与之“交叉反应”）。优选地，特异性结合肽或多肽应当以比任何其它相关肽或多肽高至少3倍、更优选地高至少10倍和甚至更优选地高至少50倍的亲和力进行结合。非特异性结合可以是可容许的，如果其仍可以明确区分和测量，例如根据其在蛋白质印迹上的大小，或其在样品中相对更高的丰度。结合剂的结合可以通过本领域已知的任何方法测量。优选地，所述方法是半定量或定量的。用于确定多肽或肽的进一步合适的技术在以下描述。

结合剂的结合可以通过例如NMR或表面等离子体共振直接测量。结合剂的结合的测量，根据优选的实施方案，是通过本文公开的系统的分析仪单元执行的。此后，测量的结合的水平可以通过本文公开的系统的计算机设备进行计算。如果结合剂还作为目的肽或多肽的酶活性的物质提供，可以测量酶反应产物（例如，通过例如在蛋白质印迹上测量被切割底物的水平测量蛋白酶的水平）。可选地，结合剂可以自身展现酶特性，且“结合剂/肽或多肽”复合体或分别被肽或多肽结合的结合剂可以与合适的底物接触，允许通过强度信号生成进行检测。对于测量酶反应产物，优选地底物的水平是饱和的。底物还可以在反应前使用可检测标记进行标记。优选地，将样品与底物接触足够长的时间段。足够长的时间段指的是待产生的产物的水平可检测，优选地可测量的水平所需的时间。除了测量产物的水平，可以测量出现产物的给定（例如可检测的）的水平所需的时间。第三，结合剂可以共价地或非共价地与允许结合剂检测和测量的标记偶联。标记可以通过直接或间接的方法完成。直接标记涉及标记对结合剂的直接（共价地或非共价地）偶联。间接标记涉及第二结合剂与第一结合剂的结合（共价地或非共价地）。第二结合剂应当特异地结合第一结合剂。所述第二结合剂可以与合适的标记偶联和/或是结合第二结合剂的第三结合剂的靶（受体）。第二、第三或更高级的结合剂的使用通常用于增加信号。合适的第二和更高级的结合剂可以包括抗体、二级抗体和熟知的链霉亲和素-生物素系统（VectorLaboratories,Inc.）。结合剂或底物还可以使用本领域已知的一种或多种标签“标签化”。这样的标签可以随后是更高级的结合剂的靶标。合适的标签包括生物素、地高辛、His-标签、谷胱甘肽-S-转移酶、FLAG、GFP、myc-标签、甲型流感病毒血凝素（HA）、麦芽糖结合蛋白等。在肽或多肽的情况中，标签优选地在N-末端和/或C末端。典型的标签是可以通过合适的检测方法检测的任何标签。合适的标签包括金颗粒、乳胶小珠、9,10-二氢吖啶酯、鲁米诺、钌、酶促活性标记、放射性标记、磁性标记（“例如磁珠”，其包括顺磁性和超顺磁性标记），和荧光标记。酶促活性标记包括例如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、荧光素酶及其衍生物。用于检测的合适的底物包括二-氨基-联苯胺(DAB)、3,3'-5,5'-四甲基联苯胺、NBT-BCIP（4-氯化硝基四氮唑蓝和5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸酯，可以作为现成储液从RocheDiagnostics获得）、CDP-Star?(AmershamBio-sciences)、ECF?(AmershamBiosciences)。合适的酶-底物组合可以导致显色反应产物、荧光或化学发光，其可以根据本领已知的方法测量（例如，使用光敏胶片或合适的照相系统）。对于测量酶促反应，相似地应用上文给出的标准。典型荧光标记包括荧光蛋白（诸如GFP及其衍生物）、Cy3、Cy5、德克萨斯红、荧光素和Alexa染料(例如Alexa568)。进一步的荧光标记可以从例如MolecularProbes(Oregon)获得。使用量子点作为荧光标记也是考虑的。放射性标记可以通过任何已知且合适的方法检测，例如光敏胶片或磷光成像仪。

肽或多肽的水平还可以优选地如下确定：（a）将包含用于上文说明的肽或多肽的结合剂的固体支持物与包含肽或多肽的样品接触和（b）测量结合至支持物的肽或多肽水平。结合剂，优选地选自以下：核酸、肽、多肽、抗体和适配子，其优选地以固定形式存在于固体支持物上。用于制备固体支持物的材料是本领域熟知的且包括，尤其包括：商业可获得的柱材料、聚苯乙烯小珠、乳胶小珠、磁性小珠、胶体金属颗粒、玻璃和/或硅芯片和表面、硝酸纤维素带、膜、薄片、duracytes、反应托盘的孔和壁、塑料管等。结合剂或试剂可以结合多种不同载体。熟知载体的实例包括玻璃、聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯、聚乙烯、聚碳酸酯、葡聚糖、尼龙、直链淀粉、天然的和修饰的纤维素、聚丙烯酰胺、琼脂糖和磁铁矿。对于本发明目的，载体的性质可以是可溶的或不可溶的。固定/固定化所述结合剂的合适的方法是熟知的且包括，但不限于离子相互作用、疏水相互作用、共价相互作用等。根据本发明还考虑的是使用“悬浮阵列”作为阵列(Nolan2002,TrendsBiotechnol.20(1):9-12)。在这样的悬浮阵列中，载体例如微珠或微球悬浮存在。阵列由不同微珠或微球组成，其可能被标记，携带不同的结合剂。生产这样的阵列的方法，例如基于固相化学或光不稳定保护基团，是通常已知的(US5,744,305)。

在本发明的方法的实施方案中，本文中所指的生物标记物的水平通过使用实施例部分描述的测定测量。

在本发明方法的另一个实施方案中，步骤a）中的测量可以通过分析仪单元实施，特别地通过如本文别处定义的分析仪。

术语“结合剂”指的是包括特异性结合相应的各自生物标志物的结合部分的分子。

术语“特异性结合”或“特异地结合”指的是结合反应，其中在它们不显著结合其它分子的条件下结合对分子展现出相互的结合。当指的是作为生物标记物的蛋白或肽时，术语“特异性结合”或“特异地结合”指的是结合反应，其中结合剂以至少10^-7M的亲和力结合相应的生物标记物。术语“特异性结合”或“特异地结合”优选地指的是对其靶分子至少10^-8M或甚至更优选地至少10^-9M的亲和力。使用术语“特异性的”或“特异地”以指示存在于样品中的其它分子不显著结合对靶分子特异的结合剂。优选地，结合不是靶分子的分子的水平导致对靶分子的亲和力的仅10%或更少，更优选地仅5%或更少的结合亲和力。

“结合剂”的实例是核酸探针、核酸引物、DNA分子、RNA分子、适配子、抗体、抗体片段、肽、肽核酸（PNA）或化合物。优选的结合剂是抗体，其特异性结合被测量的生物标记物。本文的术语“抗体”在最广泛意义上使用且涵盖多种抗体结构，其包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体（例如双特异性抗体）和抗体片段，只要它们展现出期望的抗原-结合活性。优选地，抗体是多克隆抗体。更优选地，抗体是单克隆抗体。

在一方面中，另一可以应用的结合剂可以是适配子，其特异地结合样品中的至少一种生物标记物。当指的是作为结合剂的核酸适配子时，术语“特异性结合”或“特异地结合”指的是结合反应，其中核酸适配子以低nM至pM范围的亲和力结合相应的靶分子。

在还一个方面中，在测量形成的复合体的量之前，样品从结合剂和至少一种标记物之间形成的复合体移除。因此，在一个方面中，结合剂可以固定在固体支持物上。在还一个方面，样品可以通过应用洗涤溶液从在固体支持物上形成的复合体移除。形成的复合体应当与样品中存在的至少一种标记物的量成比例。应当理解的是待应用的结合剂的特异性和/或灵敏性定义了样品中包含的能够被特异性结合的至少一种标记物的比例的程度。如何实施确定的进一步的细节也可以在本文别处中发现。形成的复合体的量应当转化为反映在样品中实际存在的量的至少一种标记物的量。在一个方面中，这样的量可以基本是样品中存在的量或可以在另一个方面中，是其某一部分的量（由于形成的复合体和原始样品中存在的量之间的关系）。

如本文使用的术语“水平”涵盖了如本文指出的生物标记物的绝对量，所述生物标记物的相对量或浓度，以及与其相关或可以从其衍生的任何值或参数。这样的值或参数包括通过直接测量，从所述肽获得的全部特定物理或化学特性的强度信号值，例如在质谱或NMR谱中的强度值。此外，涵盖了由本说明书中别处说明的直接测量获得的全部值或参数，例如，从对从特定结合配体获得的肽或信号强度应答的生物学读出系统确定的应答量。应理解的是与上文提及的量或参数相关的值还可以通过标准数学操作获得。

如本文使用的术语“比较”指的是将个体或患者的样品中的生物标记物的水平与本说明书中别处说明的生物标记物的参考水平相比较。应当理解的是如本文使用的比较通常指的是相应参数或值的比较，例如绝对值是与绝对参考水平比较，而浓度与参考浓度相比较或从样品生物标记物获得的强度信号是与从参考样品获得的相同类型的强度信号比较。所述比较可以人工地或辅助以计算机执行。因此，比较可以通过（例如本文公开的系统的）计算机设备进行实施。个体或患者样品中的生物标记物的测量或检测水平的值和参考水平可以例如与各自比较且所述比较可以通过执行比较的算法的计算机程序自动实施。实施所述评价的计算机程序将以合适的输出形式提供期望的评估。对于辅以计算机的比较，被确定量的值可以与对应于合适参考的值比较，所述参考通过计算机程序储存于数据库中。计算机程序可以进一步评价比较结果，即以合适的输出形式自动提供期望的评估。对于辅以计算机的比较，被确定量的值可以与对应于合适参考的值比较，所述参考通过计算机程序储存于数据库中。计算机程序可以进一步评价比较结果，即以合适的输出形式自动提供期望的评估。

如本文使用的术语“参考水平”优选指的是预定值。在该背景下“水平”涵盖了绝对量、相对量或浓度，以及与其相关或可以从其衍生的任何值或参数。如本领域技术人员将理解的，参考水平是预定的且被设置在例如特异性和/或灵敏性上符合常规要求。这些要求可以变化，例如，从一个管理部门到另一个管理部门。可以举例的是测定灵敏性或特异性分别必须设置在某些限值，例如分别为80%、90%、95%或98%。这些要求还可以被定义为阳性或阴性预测值。尽管如此，基于本发明给出的教导，技术人员将总是可能达到参考值，满足那些要求。在一个实施方案中，参考水平在健康个体的参考样品中确定。在一个实施方案中参考水平已经在患者所属的独立疾病的参考样品中预先确定。在某些实施方案中，参考水平可以例如被设置为被研究的独立疾病中的值的总体分布的25%和75%之间的任何百分比。在另外的实施方案中，参考水平可以例如被设置为被研究的独立疾病的参考样品中值的总体分布确定的中值、三分位数、四分位数。在一个实施方案中，参考水平可以被设置为被研究的独立疾病的值的总体分布确定的中值。参考水平可以变化，取决于多个生理参数，诸如年龄、性别或亚群，以及用于确定本文所指的生物标记物的方法。在一个实施方案中，参考样品基本来自相同类型的细胞、组织、器官或体液来源，如经历本发明方法的个体或患者的样品，例如，如果根据本发明使用血液作为样品以确定个体中生物标记物水平，则参考水平也在血液或其部分中确定。

如本文使用的术语“参考水平”优选地指的是允许将患者分配至更可能对包括抑制素的治疗应答的患者组，或分配至更不可能对包括抑制素的治疗应答的患者组的水平。这样的参考水平可以是将这些组各自分开的阈值水平。因此，如本文所指的生物标记物的参考水平应当是允许将患者分配至更可能对包括抑制素的治疗应答的患者的组，或分配至更不可能对包括抑制素的治疗应答的患者的组的水平。将两组分开的合适的阈值水平可以无需进一步的麻烦通过本文别处所指的基于来自更可能对包括抑制素的治疗应答的患者（或来自这样的患者的组）或更不可能对包括抑制素的治疗应答的患者（或来自这样的患者的组）的本文所指的标记物的水平的统计检验进行计算。可以来源于上文提及的患者或患者组的优选的参考水平在本文别处中指出。

参考水平可以用于界定和建立阈值水平。阈值水平优选地，允许鉴定患者为更可能或更不可能对包括抑制素的治疗应答。因此，阈值水平优选地，应当允许鉴定患者为更可能或更不可能对包括抑制素的治疗应答。在一个实施方案中，所述参考水平是计算的参考水平。鉴定可以通过基于计算的“水平”与参考或阈值的所述比较的本文公开的系统的计算设备提供。例如，系统的计算设备可以以文字、符号或数值的形式提供指示物，其指示了划入(rule-in)或划出(rule-out)。适用于个体患者的参考水平可以变化，取决于多个生理参数，诸如年龄、性别或亚群，以及用于确定本文所指的肽或多肽的方法。合适的参考水平可以从待分析的参考样品连同测试样品一同（即同时或依次地）确定。

优选地，参考水平是计算的参考水平。优选地，计算的参考水平应当允许在更可能对包括抑制素的治疗应答的患者和更不可能对包括抑制素的治疗应答的患者之间进行区分、原则上，参考水平可以对如上文说明的一群患者基于通过应用标准统计学方法对给定的生物标记物的平均值(averageormeanvalues)计算。特别地，测试的准确性诸如针对诊断事件（或不是）的方法，最好通过其接受者操作特征(ROC)进行描述(特别参见Zweig1993,Clin.Chem.39:561-577)。ROC图是由持续改变对于观察的数据的整体范围的判定阈值而产生的全部灵敏性/特异性配对的图。诊断方法的临床执行取决于其准确性，即，其正确分配患者至某一评价、预后或诊断的能力。ROC图指出了两个分布之间的重叠，其通过将对适用于进行区分的阈值的完整范围的灵敏性相比于1-特异性进行作图。在y轴为灵敏性，或真阳性分数，其定义为真阳性测试结果数与真阳性测试结果数和假阴性测试结果数的乘积(product)的比率。这也指的是在疾病或状况存在下的阳性。其单独从受影响的亚组计算。在x轴为假阳性分数，或1-特异性，其定义为假阳性测试结果数与真阴性结果数和假阳性结果数的乘积的比率。其是特异性的指标且完全从未受影响的亚组计算。因为真和假阳性分数完全分别地通过使用来自两个不同亚组的测试结果计算，所以ROC图独立于群组中事件的普遍率。ROC图中的每个点代表对应于特定决定阈值的灵敏性/-特异性对。具有完美区分的检测（在两个分配结果中没有重叠）具有通过左上角的ROC图，其中真阳性分数为1.0，或100%（完美的灵敏性)，和假阳性分数为0（完美的特异性）。不具有区分的测试的理论图（两个组的结果分布相同）是从左下角至右上角的45°对角线。大多数图落入这两种极端之间。如果ROC图完全落于45°对角线，其可以通过将“阳性”标准从“大于”逆转为“小于”或反之亦然而容易地补救。在质量上，图越接近左上角，测试的总体准确性越高。取决于期望的置信区间，阈值可以来源于ROC曲线，其允许分别使用灵敏性和特异性的合适的平衡诊断或预测给定事件。因此，用于本发明的上文提及的方法的参考可以优选地，是阈值或截止水平且可以优选地如上文所述通过对所述群建立ROC且从中衍生阈值水平而生成。取决于对诊断方法的期望的灵敏性和特异性，ROC图允许衍生合适的阈值。

以下作为诊断算法应用：

骨桥蛋白作为生物标记物

如果将骨桥蛋白用作生物标记物，被测试的心力衰竭患者优选地不患有冠状动脉疾病。优选地，患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者更可能对包括抑制素的治疗应答。还优选地，生物标记物的水平高于参考水平指示了患者更不可能对包括抑制素的治疗应答。

sST2作为生物标记物

如果将sST2用作生物标记物，被测试的心力衰竭患者优选地不患有冠状动脉疾病。优选地，患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者更可能对包括抑制素的治疗应答。还优选地，患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者更不可能对包括抑制素的治疗应答。

GDF-15作为生物标记物

如果将GDF-15用作生物标记物，被测试的心力衰竭患者可以患有或可以不患有冠状动脉疾病。

如果患者不患有冠状动脉疾病，应用以下：优选地，患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者更可能对包括抑制素的治疗应答。还优选地，患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者更不可能对包括抑制素的治疗应答。

如果患者患有冠状动脉疾病，应用以下：优选地，患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者更可能对包括抑制素的治疗应答。还优选地，患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者更不可能对包括抑制素的治疗应答。

尿素作为生物标记物

如果将尿素用作生物标记物，被测试的心力衰竭患者可以患有或可以不患有冠状动脉疾病。然而，特别设想的是患者患有CAD。优选地，患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者更可能对包括抑制素的治疗应答。还优选地，患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者更不可能对包括抑制素的治疗应答。

尿酸作为生物标记物

如果将尿酸用作生物标记物，被测试的患者可以患有或可以不患有冠状动脉疾病。然而，特别设想的是患者患有CAD。优选地，患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者更可能对包括抑制素的治疗应答。还优选地，患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者更不可能对包括抑制素的治疗应答。

转铁蛋白作为生物标记物

如果将转铁蛋白用作生物标记物，被测试的患者优选地还患有冠状动脉疾病。优选地，患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者更可能对包括抑制素的治疗应答。还优选地，患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者更不可能对包括抑制素的治疗应答。

心肌肌钙蛋白作为生物标记物

如果将心肌肌钙蛋白特别是肌钙蛋白T用作生物标记物，被测试的患者可以额外患有或可以不额外患有冠状动脉疾病。

如果患者不患有冠状动脉疾病，应用以下：优选地，患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者更可能对包括抑制素的治疗应答。还优选地，患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者更不可能对包括抑制素的治疗应答。

如果患者患有冠状动脉疾病，应用以下：优选地，患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者更可能对包括抑制素的治疗应答。还优选地，患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者更不可能对包括抑制素的治疗应答。

SHBG作为生物标记物

如果将SHBG用作生物标记物，被测试的患者可以患有或可以不患有冠状动脉疾病。

sFlt-1作为生物标记物

如果将sFlt-1用作生物标记物，被测试的患者可以患有或可以不患有冠状动脉疾病。然而，特别设想的是患者患有CAD。优选地，患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者更可能对包括抑制素的治疗应答。还优选地，患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者更不可能对包括抑制素的治疗应答。

前白蛋白作为生物标记物

如果将前白蛋白用作生物标记物，被测试的患者可以患有或可以不患有冠状动脉疾病。

PlGF作为生物标记物

如果将PlGF用作生物标记物，被测试的患者可以患有或可以不患有冠状动脉疾病。然而，特别设想的是患者患有CAD。优选地，患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者更可能对包括抑制素的治疗应答。还优选地，患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者更不可能对包括抑制素的治疗应答。

IL-6作为生物标记物

如果将IL-6用作生物标记物，被测试的患者可以患有或可以不患有冠状动脉疾病。然而，特别设想的是患者患有CAD。优选地，患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者更可能对包括抑制素的治疗应答。还优选地，患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者更不可能对包括抑制素的治疗应答。

铁蛋白作为生物标记物

如果将铁蛋白用作生物标记物，被测试的患者优选地还患有冠状动脉疾病。优选地，患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者更可能对包括抑制素的治疗应答。还优选地，患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者更不可能对包括抑制素的治疗应答。

hsCRP作为生物标记物

如果将hsCRP用作生物标记物，被测试的患者可以患有或可以不患有冠状动脉疾病。

如上文所述，参考水平可以没有进一步麻烦而确定。优选的参考水平可以是具有心力衰竭患者的组的中值水平。

对各个标记物的优选诊断算法还在“优选的实施方案”的部分公开，参见例如实施方案8。

对GDF-15优选的参考水平优选地在2500pg/mL和4500pg/mL之间的范围内，更优选地在3000pg/mL和4000pg/mL之间的范围内。最优选地，参考水平是3560pg/mL。

对尿素优选的参考水平优选地在8mmol/L和11mmol/L之间的范围内，更优选地在9mmol/L和10mmol/L之间的范围内。最优选地，参考水平是9.4mmol/L。

对SHBG优选的参考水平优选地在25nmol/L和36mmol/L之间的范围内，更优选地在30nmol/L和32mmol/L之间的范围内。最优选地，参考水平是30.8nmol/L。

对尿酸优选的参考水平优选地在6.3mg/dL和8.3mg/dL之间的范围内，更优选地在6.9mg/dL和7.7mg/dL之间的范围内。最优选地，参考水平为7.3mg/dL。

对PLGF优选的参考水平优选地在16pg/mL和26pg/mL之间的范围内，更优选地在20pg/mL和23pg/mL之间的范围内。最优选地，参考水平为21.3pg/mL。

对IL-6优选的参考水平优选地在5.7pg/mL和7.1pg/mL之间的范围内，更优选地在6.1pg/mL和6.7pg/mL之间的范围内。最优选地，参考水平是6.4pg/mL。

对转铁蛋白优选的参考水平优选地在3.7g/L和4.5g/L之间的范围内，更优选地在3.9g/L和4.3g/L之间的范围内。最优选地，参考水平是4.1g/L。

对肌钙蛋白优选的参考水平优选地在20pg/mL和31pg/mL之间的范围内，更优选地在25pg/mL和28pg/mL之间的范围内。最优选地，参考水平是26.5pg/mL。

对sFlt-1优选的参考水平优选地在85pg/mL和115pg/mL之间的范围内，更优选地在93pg/mL和107pg/mL之间的范围内。最优选地，参考水平是99.6pg/mL。

对前白蛋白优选的参考水平优选地在0.18g/L和0.22g/L之间的范围内，更优选地在0.19g/L和0.21g/L之间的范围内。最优选地，参考水平是0.2g/L。

对铁蛋白优选的参考水平优选地在140μg/L和180μg/L之间的范围内，更优选地在150μg/L和170μg/L之间的范围内。最优选地，参考水平是160μg/L。

对骨桥蛋白优选的参考水平优选地在85ng/mL和115ng/mL之间的范围内，更优选地在93ng/mL和107ng/mL之间的范围内。最优选地，参考水平是100ng/mL。

对sST2优选的参考水平优选地在30ng/mL和38ng/mL之间的范围内，更优选地在32ng/mL和36ng/mL之间的范围内。最优选地，参考水平是34ng/mL。

对hsCRP优选的参考水平优选地在4mg/mL和6mg/mL之间的范围内，更优选地在4.8mg/mL和5.4mg/mL之间的范围内。最优选地，参考水平是5.1mg/mL。

上文给出的参考水平，优选地应用于本发明的全部方法和使用中。

在某些实施方案中，术语“高于参考水平”指的是个体或患者的样品中生物标记物的水平高于参考水平或整体增加5%、10%、20%、25%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、90%、95%、100%或更多，其通过本文描述的方法与参考水平比较确定。在某些实施方案中，术语增加指的是在个体或患者样品中的生物标记物水平的增加，其中所述增加相比于参考水平（例如从参考样品预先确定的）为至少高约1.5-、1.75-、2-、3-、4-、5-、6-、7-、8-、9-、10-、15-、20-、25-、30-、40-、50-、60-、70-、75-、80-、90-或100-倍。

在某些实施方案中，本文术语“减少”或“低于”指的是个体或患者的样品中生物标记物的水平低于参考水平或整体减少5%、10%、20%、25%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或更多，其通过本文描述的方法与参考水平比较确定。在某些实施方案中，在个体或患者样品中的生物标记物水平中术语减少，其中所述减少的水平为参考水平（例如从参考样品预先确定的）的至多约0.9-、0.8-、0.7-、0.6-、0.5-、0.4-、0.3-、0.2-、0.1-、0.05-或0.01-倍或更低。

在本发明的一个实施方案中，生物标记物单独测量。然而，还考虑可以一同测量，即本发明的方法可以涵盖多于一种标记物即，两种、三种、四种或五种标记物的确定。如果确定多于一种生物标记物，组合用于各个标记物的诊断算法。

优选的生物标记物组合如下：

·GDF-15和尿素

·GDF-15和SHBG

·GDF-15和PlGF

·GDF-15和IL-6

·PlGF和IL-6

·肌钙蛋白和sST2

·hsCRP和sST2

·PLGF和sFlt1。

在本发明方法的实施方案中，上文提及的方法进一步包括推荐、开始或中止包括抑制素的治疗的步骤（d）。

如本文使用的短语“推荐治疗”指的是使用涉及患者样品中至少一种本文所指的生物标记物水平生成的信息或数据，以鉴定患者为合适或不适合使用包括抑制素的治疗进行处理。如本文使用的短语“推荐治疗”还可以指的是使用生成的信息或数据用于对被鉴定或选择为更可能或更不可能对包括抑制素的治疗应答的患者提出或选择包括抑制素的治疗。使用或生成的信息或数据可以以任何形式，书写的、口头的或电子的。在一些实施方案中，使用生成的信息或数据包括交流、呈现、报道、贮存、发送、传输、提供、传播、分配或其组合。在一些实施方案中，通过计算机设备、分析仪单元或其组合执行交流、呈现、报道、贮存、发送、传输、提供、传播、分配或其组合。在一些进一步的实施方案中，通过实验室或医学专业人员执行交流、呈现、报道、贮存、发送、传输、提供、传播、分配或其组合。在一些实施方案中，信息或数据包括至少一种本文指出的生物标记物的水平与参考水平的比较。

优选地，如果患者更可能对包括抑制素的治疗应答，开始（在患者先前没有使用抑制素治疗的情况下）或继续（在患者先前没有使用抑制素治疗的情况下）包括抑制素的治疗。因此，推荐开始或继续包括抑制素的治疗。

优选地，如果患者更不可能对包括抑制素的治疗应答，不开始（在患者先前没有使用抑制素治疗的情况下）或中止（在患者先前没有使用抑制素治疗的情况下）包括抑制素的治疗。因此，推荐不开始或中止包括抑制素的治疗。

因此，本发明还涉及治疗具有心力衰竭的患者的方法，所述方法包括：

a）在患者的样品中测量选自以下的至少一种生物标记物的水平：GDF-15(生长分化因子15)、尿素、SHBG(性激素结合球蛋白)、尿酸、PLGF(胎盘生长因子)、IL-6(白介素-6)、转铁蛋白、心肌肌钙蛋白、sFlt-1(可溶性fms-样酪氨酸激酶-1)、前白蛋白、铁蛋白、骨桥蛋白、sST2(可溶ST2)和hsCRP(高敏c-反应蛋白)，

b）将在a)中测量的所述至少一种生物标记物的水平与各自参考水平比较。

c）鉴定患者为更可能或更不可能对包括抑制素的治疗应答，且任选地

d）当至少一种生物标记物的水平指示了包括抑制素的应答时，对患者施用抑制素或选择包括抑制素的应答。

通过上文提及的步骤d）治疗心力衰竭

在一个实施方案中，如在步骤c）中描述的将患者鉴定为更可能或更不可能对包括抑制素的治疗应答是基于在步骤b）中进行的比较。用于个别标记物的优选的诊断算法在本文别处中公开。取决于生物标记物，在患者样品中生物标记物的水平高于或低于参考水平对更可能对包括抑制素的治疗应答的患者是指示性的（参见上文所述的诊断算法）。如果生物标记物的水平指示更可能对包括抑制素的治疗应答的患者，则实施步骤d）。如果生物标记物的水平指示更不可能对包括抑制素的治疗应答的患者，则不实施步骤d）。

在本文上文中给出的定义和解释在以下加上必要的变更进行应用（除非另有说明）。

预测患者死亡和/或住院治疗的风险的方法

本发明进一步涉及预测患者死亡和/或住院治疗的风险的方法，其中所述患者具有心力衰竭且其中所述患者正在经历包括抑制素的治疗，所述方法包括：

（a）在患者的样品中测量选自以下的至少一种标记物的水平：GDF-15(生长分化因子15)、尿素、SHBG(性激素结合球蛋白)、尿酸、PLGF(胎盘生长因子)、IL-6(白介素-6)、转铁蛋白、心肌肌钙蛋白、sFlt-1(可溶性fms-样酪氨酸激酶-1)、前白蛋白、铁蛋白、骨桥蛋白、sST2(可溶ST2)和hsCRP(高敏c-反应蛋白)，且

（b）将所述至少一种标记物的水平与各自参考水平比较。

本发明的方法优选地是先体外后体内或体外方法。

优选地，基于步骤（b）预测患者遭受死亡或住院治疗的风险。因此，上文提及的方法可以基于步骤（b）的结果进一步包括预测患者遭受死亡或住院治疗的风险的步骤。在一个实施方案中，方法因此进一步包括预测患者死亡和/或住院治疗的风险的步骤（c），特别是当患者样品中至少一种生物标记物的水平低于或高于参考水平时（关于诊断算法，参见下文）。

在一个实施方案中，至少一种生物标记物的水平通过以下进行测量：将样品与特异性结合各个标记物的试剂结合，从而在试剂和所述标记物之间形成复合体，检测形成的复合体的量，并从而测量所述标记物的水平。这特别适合于如果被测量的生物标记物是多肽(GDF-15、SHBG、PLGFIL-6、转铁蛋白、心肌肌钙蛋白、sFlt-1、前白蛋白、铁蛋白、骨桥蛋白、sST2和hsCRP)。如果被测量的生物标记物是尿素或尿酸，所述生物标记物的水平通过将样品与催化所述生物标记物转化的酶接触进行测量。优选的酶在本文别处公开。

术语“患者”在鉴定主体为可能对包括抑制素的治疗应答的方法的背景下已在上文定义。优选地，被测试的患者具有如上文所述的心力衰竭。取决于测量的生物标记物，患者另外可以具有或不具有冠状动脉疾病（参见上文）。

此外，患者应当经历包括抑制素的治疗。因此，患者应当在获得样品前已使用抑制素治疗。在本发明的背景下，在获得样品前已使用抑制素治疗的患者应当在获得样品前已使用抑制素治疗优选地一个月或更久，更优选地三个月或更久，或最优选地六个月或更久。

本文使用的术语“预测”指的是评估据此未来患者在界定的时间窗口（预测窗口）将要死亡和/或将住院治疗的可能性。预测窗口是患者根据预测可能性将死亡或将住院治疗的区间。预测窗口可以是在通过本发明的方法分析后患者的整个剩余寿命。然而，优选地，预测窗口是在本发明的方法已实施后（更优选和精确地，在通过本发明的方法分析的样品已被获得后）6个月、12个月、18个月、两年、三年或五年的区间。最优选地，所述预测窗口是18个月的区间。如本领域技术人员将理解的，这样的评价通常不意在对100%被分析的患者正确。然而，该术语要求评估将对受分析的患者的统计学上显著的部分有效。一部分是否是统计学显著的可以通过本领域技术人员使用各种熟知的统计评估工具，例如置信区间的确定，p-值确定、学生t-检验、Mann-Whitney检验等而没有进一步的麻烦而确定。详述在Dowdy和Wearden,StatisticsforResearch,JohnWiley&Sons,NewYork1983中发现。优选的置信区间是至少90%、至少95%、至少97%、至少98%或至少99%。p-值是，优选地，0.1、0.05、0.01、0.005或0.0001。优选地，本发明设想的可能性允许预测将对至少60%、至少70%、至少80%或至少90%的给定群体的患者正确。

如本文使用的术语“死亡”优选地涉及任何原因的死亡，且更优选地，涉及由于心脏原因的死亡，且最优选地涉及由于心血管事件的死亡。如本文使用的术语“住院治疗”优选地涉及任何原因的住院治疗，且更优选地，涉及由于心脏原因的住院治疗，且最优选地涉及由于心血管事件的住院治疗。如本文使用的术语“心血管事件”指的是心血管系统的任何病症，包括优选任何急性心血管事件。优选地，术语还包括心力衰竭。急性心血管事件是，优选地，稳定型心绞痛（SAP）或极性冠脉综合征（ACS）。ACS患者可以显示不稳定型心绞痛（UAP）或心肌梗死（MI）。MI可以是ST升高MI（STEMI）或非ST升高MI（NSTEMI）。

本文中使用的NSTE-ACS涵盖UAP和NSTEMI。MI的出现可以随后为左心室功能紊乱（LVD）、心力衰竭的发展或甚至死亡。进一步优选的心血管事件涵盖心脏缓慢型心律失常或快速性心律失常，其包括心脏性猝死和中风（心血管事件或意外）。而且，死亡还可以指的是死亡率或死亡数与给定患者群体的比例。

如本文使用的表达“预测死亡和/或住院治疗的风险”意为将通过本发明的方法分析的患者分配至具有升高的风险的群体的患者组中或具有降低的风险的组中。根据本发明所指的升高的风险优选地意为患者在预定的预测窗口中住院治疗的风险或死亡的风险相对于患者群体住院治疗或死亡的平均风险显著升高（即显著增加）。根据本发明所指的降低的风险优选地意为患者在预定的预测窗口中住院治疗的风险或死亡的风险相对于患者群体住院治疗或死亡的平均风险显著降低。特别地，风险的显著增加或减少是被认为对预后有意义的程度的风险增加或降低，特别是所述增加或降低被认为是统计学显著的。术语“显著的”和“统计学显著的”是本领域技术人员已知的。因此，风险的增加或降低是否是显著的或统计学显著的可以通过本领域技术人员使用多种熟知的统计学评价工具无需一步麻烦而确定。

优选地，对于18个月的预测窗口，提升的且因此增加的本文使用死亡和/或住院治疗的风险，优选地涉及多于20%的风险增加，或更优选地，多于25%，且最优选地，多于30%。如本文使用的死亡或住院治疗的风险的减少，优选地，涉及多于10%的风险减少，更优选地多于15%，最优选地多于20%，优选地是关于18个月的预测窗口（相比于平均风险，参见上段）。

术语“参考水平”已在上文定义。相应地应用所述定义。因此，术语优选地指的是允许将患者分配至具有升高的死亡和/或住院治疗风险的患者组，或具有降低的死亡和/或住院治疗风险的患者组的水平。这样的参考水平可以是将这些组各自分开的阈值水平。因此，在本文中所指的生物标记物的参考水平应当是允许将患者分配至具有升高的死亡和/或住院治疗风险的患者组，或具有降低的死亡和/或住院治疗风险的患者组的水平。将两组分开的合适的阈值水平可以无进一步的麻烦通过本文别处所指的统计检验基于来自具有升高的死亡和/或住院治疗风险的患者（或来自这样的患者的组）或具有降低的死亡和/或住院治疗风险的患者（或来自这样的患者的组）的本文所指的生物标记物的水平进行计算。可以来源于上文提及的患者或患者组的优选的参考水平在本文别处中指出。

骨桥蛋白作为生物标记物

如果将骨桥蛋白用作生物标记物，被测试的患者优选地不患有冠状动脉疾病。优选地，患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示患者具有升高的死亡和/或住院治疗风险。还优选地，生物标记物的水平低于参考水平指示患者具有降低的死亡和/或住院治疗风险。

sST2作为生物标记物

如果将sST2用作生物标记物，被测试的患者优选地不患有冠状动脉疾病。优选地，患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示患者具有升高的死亡和/或住院治疗风险。还优选地，患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示患者具有降低的死亡和/或住院治疗风险。

GDF-15作为生物标记物

如果将GDF-15用作生物标记物，被测试的患者可以患有或可以不患有冠状动脉疾病。

如果患者不患有冠状动脉疾病，应用以下：优选地，患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示患者具有升高的死亡和/或住院治疗风险。还优选地，患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示患者具有降低的死亡和/或住院治疗风险。

如果患者患有冠状动脉疾病，应用以下：优选地，患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示患者具有升高的死亡和/或住院治疗风险。还优选地，患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示患者具有降低的死亡和/或住院治疗风险。

尿素作为生物标记物

如果将尿素用作生物标记物，被测试的患者可以患有或可以不患有冠状动脉疾病。然而，特别设想的是患者患有CAD。优选地，患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示患者具有升高的死亡和/或住院治疗风险。还优选地，患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示患者具有降低的死亡和/或住院治疗风险。

尿酸作为生物标记物

如果将尿酸用作生物标记物，被测试的患者可以患有或可以不患有冠状动脉疾病。然而，特别设想的是患者患有CAD。优选地，患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示患者具有升高的死亡和/或住院治疗风险。还优选地，患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示患者具有降低的死亡和/或住院治疗风险。

转铁蛋白作为生物标记物

如果将转铁蛋白用作生物标记物，被测试的患者优选地还患有冠状动脉疾病。优选地，患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示患者具有升高的死亡和/或住院治疗风险。还优选地，患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示患者具有降低的死亡和/或住院治疗风险。

心肌肌钙蛋白作为生物标记物

如果将心肌肌钙蛋白特别是肌钙蛋白T用作生物标记物，则被测试的患者可以额外患有或可以不额外患有冠状动脉疾病。

如果患者不患有冠状动脉疾病，应用以下：优选地，患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示患者具有升高的死亡和/或住院治疗风险。还优选地，患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示患者具有降低的死亡和/或住院治疗风险。

如果患者患有冠状动脉疾病，应用以下：优选地，患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示患者具有升高的死亡和/或住院治疗风险。还优选地，患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示患者具有降低的死亡和/或住院治疗风险。

SHBG作为生物标记物

sFlt-1作为生物标记物

如果将sFlt-1用作生物标记物，被测试的患者可以患有或可以不患有冠状动脉疾病。然而，特别设想的是患者患有CAD。优选地，患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示患者具有升高的死亡和/或住院治疗风险。还优选地，患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示患者具有降低的死亡和/或住院治疗风险。

前白蛋白作为生物标记物

PlGF作为生物标记物

如果将PlGF用作生物标记物，被测试的患者可以患有或可以不患有冠状动脉疾病。然而，特别设想的是患者患有CAD。优选地，患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示患者具有升高的死亡和/或住院治疗风险。还优选地，患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示患者具有降低的死亡和/或住院治疗风险。

IL-6作为生物标记物

如果将IL-6用作生物标记物，被测试的患者可以患有或可以不患有冠状动脉疾病。然而，特别设想的是患者患有CAD。优选地，患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示患者具有升高的死亡和/或住院治疗风险。还优选地，患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示患者具有降低的死亡和/或住院治疗风险。

铁蛋白作为生物标记物

如果将铁蛋白用作生物标记物，被测试的患者优选地还患有冠状动脉疾病。优选地，患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示患者具有升高的死亡和/或住院治疗风险。还优选地，患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示患者具有降低的死亡和/或住院治疗风险。

hsCRP作为生物标记物

优选的参考水平在鉴定患者为对包括抑制素的治疗易感的方法的背景下公开。对各个标记物的优选诊断算法还在“优选的实施方案”的部分公开，参见例如实施方案10。

本发明还涉及在具有心力衰竭的患者的样品中的i)选自以下的至少一种生物标记物：GDF-15(生长分化因子15)、尿素、SHBG(性激素结合球蛋白)、尿酸、PLGF(胎盘生长因子)、IL-6(白介素-6)、转铁蛋白、心肌肌钙蛋白、sFlt-1(可溶性fms-样酪氨酸激酶-1)、前白蛋白、铁蛋白、骨桥蛋白、sST2(可溶性ST2)和hsCRP(高敏性C-反应蛋白)和/或ii）特异性结合选自以下的生物标记物的结合剂：GDF-15(生长分化因子15)、尿素、SHBG(性激素结合球蛋白)、尿酸、PLGF(胎盘生长因子)、IL-6(白介素-6)、转铁蛋白、心肌肌钙蛋白、sFlt-1(可溶性fms-样酪氨酸激酶-1)、前白蛋白、铁蛋白、骨桥蛋白、sST2(可溶性ST2)和hsCRP(高敏性C-反应蛋白)，或iii）允许将尿酸或尿素转化的酶或化合物用于鉴定患者为可能对包括抑制素的治疗应答的用途。

本发明还涉及在具有心力衰竭的患者的样品中的i)选自以下的至少一种生物标记物：GDF-15(生长分化因子15)、尿素、SHBG(性激素结合球蛋白)、尿酸、PLGF(胎盘生长因子)、IL-6(白介素-6)、转铁蛋白、心肌肌钙蛋白、sFlt-1(可溶性fms-样酪氨酸激酶-1)、前白蛋白、铁蛋白、骨桥蛋白、sST2(可溶性ST2)和hsCRP(高敏性C-反应蛋白)和/或ii）特异性结合选自以下的生物标记物的结合剂：GDF-15(生长分化因子15)、尿素、SHBG(性激素结合球蛋白)、尿酸、PLGF(胎盘生长因子)、IL-6(白介素-6)、转铁蛋白、心肌肌钙蛋白、sFlt-1(可溶性fms-样酪氨酸激酶-1)、前白蛋白、铁蛋白、骨桥蛋白、sST2(可溶性ST2)和hsCRP(高敏性C-反应蛋白)，或iii）允许将尿酸或尿素转化的酶或化合物用于预测所述患者的死亡和/或住院治疗的风险的用途。

本发明还涉及i)选自以下的至少一种生物标记物：GDF-15(生长分化因子15)、尿素、SHBG(性激素结合球蛋白)、尿酸、PLGF(胎盘生长因子)、IL-6(白介素-6)、转铁蛋白、心肌肌钙蛋白、sFlt-1(可溶性fms-样酪氨酸激酶-1)、前白蛋白、铁蛋白、骨桥蛋白、sST2(可溶性ST2)和hsCRP(高敏性C-反应蛋白)和/或ii）特异性结合选自以下的生物标记物的结合剂：GDF-15(生长分化因子15)、尿素、SHBG(性激素结合球蛋白)、尿酸、PLGF(胎盘生长因子)、IL-6(白介素-6)、转铁蛋白、心肌肌钙蛋白、sFlt-1(可溶性fms-样酪氨酸激酶-1)、前白蛋白、铁蛋白、骨桥蛋白、sST2(可溶性ST2)和hsCRP(高敏性C-反应蛋白)，或iii）允许将尿酸或尿素转化的酶或化合物在制备用于鉴定具有心力衰竭的患者为可能对包括抑制素的治疗应答的药物或诊断组合物中的用途。

本发明还涉及i)选自以下的至少一种生物标记物：GDF-15(生长分化因子15)、尿素、SHBG(性激素结合球蛋白)、尿酸、PLGF(胎盘生长因子)、IL-6(白介素-6)、转铁蛋白、心肌肌钙蛋白、sFlt-1(可溶性fms-样酪氨酸激酶-1)、前白蛋白、铁蛋白、骨桥蛋白、sST2(可溶性ST2)和hsCRP(高敏性C-反应蛋白)和/或ii）特异性结合选自以下的生物标记物的结合剂：GDF-15(生长分化因子15)、尿素、SHBG(性激素结合球蛋白)、尿酸、PLGF(胎盘生长因子)、IL-6(白介素-6)、转铁蛋白、心肌肌钙蛋白、sFlt-1(可溶性fms-样酪氨酸激酶-1)、前白蛋白、铁蛋白、骨桥蛋白、sST2(可溶性ST2)和hsCRP(高敏性C-反应蛋白)，或iii）允许将尿酸或尿素转化的酶或化合物在制备用于预测具有心力衰竭和经历包括抑制素的治疗的患者死亡和/或住院治疗的风险的药物或诊断组合物中的用途。

根据本发明优选的实施方案，提供适配于实施本发明的方法的设备，其包括：

a）分析仪单元，其包括至少一种结合剂，所述结合剂特异性结合选自以下的至少一种生物标记物：GDF-15(生长分化因子15)、尿素、SHBG(性激素结合球蛋白)、尿酸、PLGF(胎盘生长因子)、IL-6(白介素-6)、转铁蛋白、心肌肌钙蛋白、sFlt-1(可溶性fms-样酪氨酸激酶-1)、前白蛋白、铁蛋白、骨桥蛋白、sST2（可溶性ST2）和hsCRP（高敏性C-反应蛋白），或允许尿酸或尿素转化的酶或化合物，所述单元适配于在具有心力衰竭的患者的样品中测量一种或多种生物标记物的水平，和

b）用于将测定的水平与参考水平比较的分析仪单元，从而患者被鉴定为更可能或更不可能对包括抑制素的治疗应答，所述单元包括具有一种或多种参考水平的数据库和用于实施比较的计算机执行的算法。

根据本发明另一个优选的实施方案，提供适配于实施本发明的方法的设备，其包括：

a）分析仪单元，其包括一种或多种结合剂，所述结合剂特异性结合选自以下的至少一种生物标记物：GDF-15(生长分化因子15)、尿素、SHBG(性激素结合球蛋白)、尿酸、PLGF(胎盘生长因子)、IL-6(白介素-6)、转铁蛋白、心肌肌钙蛋白、sFlt-1(可溶性fms-样酪氨酸激酶-1)、前白蛋白、铁蛋白、骨桥蛋白、sST2（可溶性ST2）和hsCRP（高敏性C-反应蛋白），或iii)允许尿酸或尿素转化的酶或化合物，所述单元适配于在具有心力衰竭的患者的样品中测量一种或多种生物标记物的水平，和

b）用于将测定的水平与参考水平比较的分析仪单元，从而预测患者死亡和/或住院治疗的风险，所述单元包括具有一种或多种参考水平的数据库和用于实施比较的计算机执行的算法。

优选的参考水平和算法在本文别处公开。

本公开的优选的实施方案包括用于鉴定患者为可能对包括抑制素的治疗应答的系统。系统的实例包括临床化学分析仪、混凝化学分析仪、免疫化学分析仪、尿分析仪、核酸分析仪，其用于检测化学或生物反应的结果或监视化学或生物反应的进程。更具体地，本公开的示例性的系统可以包括RocheElecsys^TMSystems和Cobas^?e免疫测定分析仪、AbbottArchitect^TM和Axsym^TM分析仪、SiemensCentaur^TM和Immulite^TM分析仪和BeckmanCoulterUniCel^TM和Acess^TM分析仪等。

系统的实施方案可以包括用于实践本公开的一种或多种分析仪单元。本文公开的系统的分析仪单元与本文公开的计算设备通过已知的任何有线连接、蓝牙、LANS或无线信号可操作地通信。另外地，根据本公开，分析仪单元包括独立设备，或更大的仪器中的模块，其执行一种或两种检测，例如用于诊断目的的样品的定性和/或定量评价。例如，分析仪单元可以执行或帮助样品和/或试剂的吸取、剂量、混合。分析仪单元可以包括试剂固定单元，其用于固定试剂以执行测定。试剂可以例如以容器或盒的形式安排，其含有各个试剂或试剂组，在贮存间隔或输送机中被安置在合适的容器(receptacle)或位置。检测试剂还可以以固定形式在固体支持物上，其与样品接触。进一步，分析仪单元可以包括对特定分析优化的处理和/或检测组件。

根据一些实施方案，分析仪单元可以被配置用于分析物例如标记物与样品的光学检测。示例性的配置为光学检测的分析仪单元包括配置为将电磁能量转换为电信号的设备，其包括单元件和多元件或阵列光学检测器。根据本公开，光学检测器能够监视光电-磁信号，且提供电输出信号或相对于基线信号的应答信号，其指示位于光路的样品中的分析物存在和/或浓度。这样的设备还可以包括，例如，光电二极管，包括雪崩光电二极管、光电晶体管、光电导探测器、线性传感器阵列、CCD探测器、CMOS探测器，包括CMOS阵列探测器、光电倍增管、和光电倍增管阵列。根据某些实施方案，光学检测器，诸如光电二极管或光电倍增管，可以含有另外的信号调节或处理电子设备。例如，光学检测器可以包括至少一种前置放大器、电子滤波器或集成电路。合适的预前置放大器包括，例如，集成化的、跨阻抗的和电流增益的（电流反射镜）前置放大器。

另外地，根据本公开的一种或多种分析仪单元可以包括用于发光的光源。例如，分析仪的光源可以由用于测量被测试的样品的分析物浓度或用于能够能量转移（例如，通过荧光共振能量转移或催化酶）的至少一个光发射元件（诸如发光二极管、电动辐射源诸如白炽灯、电离发光灯、气体放电灯、高强度气体放电灯、激光）组成。

此外，系统的分析仪单元可以包括一个或多个温育单元（例如，用于维持样品或试剂在特定温度或温度范围）。在一些实施方案中，分析仪单元可以包括热循环仪，包括实时热循环仪，用于使样品经历重复的温度循环且监视样品扩增产物的水平的变化。

另外地，本文公开的系统的分析仪单元可以包括反应容器或小杯加液单元(cuvettefeedingunit)或与其操作上连接。示例性的加液单元包括液体处理单元，诸如吸取单元，以将样品和/或试剂递送至反应容器。吸取单元可以包括可再利用的可洗的针，例如，钢针或一次性吸头。分析仪单元可以进一步包括一种或多种混合单元，例如振动器以振动包含液体的小杯，或搅拌桨以混合小杯或试剂容器中的液体。

跟随上文后的是，根据本公开的一些实施方案，本文公开和描述的方法的一些步骤的部分可以通过计算设备执行。计算设备可以是例如通用计算机或便携式计算设备。应当理解的是，可以一同使用多个计算设备，诸如通过网络或其它数据传输方法，用于执行本文公开的方法的一个或多个步骤。示例性的计算设备包括台式电脑、手提电脑、个人数据助理（“PDA”），诸如BLACKBERRY品牌设备、移动设备、平板电脑、服务器等。通常，计算设备包括能够执行多种指令（诸如软件程序）的处理器。

计算设备访问存储器。存储器是计算机可读介质，且可以包括单一储存设备或多个存储设备，其例如与计算设备本地放置或通过网络可与计算设备连接。计算机可读介质可以是任何可以获得的介质，其可以通过计算设备访问且包括易失性介质和非易失性介质两者。此外，计算机可读介质可以是可移除介质和不可移除介质中的一种或两种。通过示例的方式，且非限制性的，计算机可读介质可以包括计算机储存介质。示例性的计算机储存介质包括，但不限于RAM、ROM、EEPROM、闪存或任何其它存储技术，CD-ROM、数字通用光盘（DVD）或其它光盘存储、磁盒、磁带、磁盘存储或其它磁存储设备，或任何其它介质，其可以用于储存多个指令，所述指令能够被计算设备访问且通过计算设备的处理器执行。

根据本公开的实施方案，软件可以包括指令，当通过计算设备的处理器执行时，所述指令可以执行本文公开的方法的一个或多个步骤。一些指令可以适用于产生信号，所述信号控制其他机器的操作且因此可以通过那些控制信号操作以将远离计算机本身的材料转化。这些说明和代表是数据处理领域技术人员使用的方法，例如，以最有效地将他们工作的内容输送给本领域其他技术人员。

多个指令还可以包括通常构想为导致期望结果的步骤的自相容顺序(self-consistentsequence)的算法。这些步骤是需要物理量的物理操作的那些。通常，虽然不是必需的，这些量采用能够被储存、转移、转化、组合、比较或另外操作的电或磁脉冲或信号的形式。当提及此类信号具体化或表达于其中的物理项或表现时，有时候证明（主要是由于共同使用的原因）指代这些信号为值、特征、显示数据、数量等是方便的。但是，应当牢记的是，全部这些和相似的术语与合适的物理量相关，且此处仅用作应用于这些量的方便标记。根据本公开的一些实施方案，用于实施本文公开的一种或多种标记物的确定水平和合适的参考之间的比较的算法通过执行指令而具体化并进行。这些结果可以作为参数诊断的原始数据的输出或作为绝对或相对水平给出。根据本文公开的系统的多个实施方案，“诊断”可以通过本文公开的系统的计算设备基于经计算的“水平”与参考或阈值的所述比较来提供。例如，系统的计算设备可以提供以指示具体诊断的文字、符号或数值形式的指示符。

计算设备还可以访问输出设备。示例性的输出设备包括例如传真机、显示器、打印机和文件。根据本公开的一些实施方案，计算设备可以执行本文公开的方法的一个或多个步骤，且随后通过输出设备提供关于方法的结果、指示、比例或其它因素的输出。

最后，本发明涉及适用于执行本发明方法的试剂盒，所述试剂盒包含特异性结合选自GDF-15(生长分化因子15)、尿素、SHBG(性激素结合球蛋白)、尿酸、PLGF(胎盘生长因子)、IL-6(白介素-6)、转铁蛋白、心肌肌钙蛋白、sFlt-1(可溶性fms-样酪氨酸激酶-1)、前白蛋白、铁蛋白、骨桥蛋白、sST2（可溶性ST2）和hsCRP（高敏性C-反应蛋白）参考标准品的至少一种生物标记物的结合剂、以及实施所述方法的说明书。

如在本文中使用的术语“试剂盒”指的是优选地以分开地或在单一容器中提供的上文提及的组分的集合。容器还包含用于实施本发明方法的说明书。这些说明书可以以手册的形式或可以通过计算机程序代码（其能够实施关于本发明的方法的比较，且当在计算机或数据处理设备实施时因此建立诊断）提供。计算机程序代码可以在数据存储介质或设备诸如光存储介质（例如光盘）上提供，或直接在计算机或数据处理设备上提供。此外，试剂盒应包含用于上文定义的参考的至少一种标准品，即如本文提及的代表参考水平的具有预定水平的生物标记物的溶液。

在一些实施方案中，本文公开的试剂盒包括至少一种用于实践公开的方法的组分或组分包装的组合。“包装的组合”意为试剂盒提供了含有一种或多种组分的组合的单一包装，所述组分诸如探针（例如抗体）、对照、缓冲液、试剂（例如，缀合物和/或底物）说明书等，如本文公开的。含有单一容器的试剂盒也包括在“包装的组合”的定义中。在一些实施方案中，试剂盒包括至少一种探针，例如抗体（对本文公开的生物标记物的表位具有特定亲和力）。例如，试剂盒可以包括使用荧光素标记的抗体或是融合蛋白成员的抗体。在试剂盒中，探针可以被固定化，且可以以特定构象固定化。例如，固定化的探针可以在试剂盒中提供，以特异性地结合靶蛋白，以检测样品中的靶蛋白和/或去除样品的靶蛋白。

根据一些实施方案，试剂盒包括在至少一个容器中的至少一种探针，其可以是被固定。试剂盒还可以包括在一个或多个容器中的多种探针，优选是被固定的。例如，多种探针可以存在于单一容器中，或在分别的容器中，例如，其中每种容器含有单一探针。

在一些实施方案中，试剂盒可以包括一种或多种非固定化的探针和一个或多个固体支持物，所述支持物可以包括或不包括固定化的探针。一些这样的实施方案可以包括用于固定一种或多种探针至固体支持物上所需的一些或全部的试剂或供应品，或用于将固定化的探针结合至样品中特定蛋白的一些或全部的试剂或供应品。

在某些实施方案中，单一探针（其包括相同探针的多个拷贝）可以被固定于单一固体支持物且在单一容器中提供。在其它实施方案中，各自对不同靶蛋白或单一靶蛋白的不同形式（诸如特定表位）特异的两种或多种探针在单一容器中提供。在一些这样的实施方案中，固定化的探针可以以多个不同容器（例如单次使用形式）提供，或多种固定化探针可以以多个不同容器提供。在进一步的实施方案中，探针可以在多个不同类型的固体支持物上固定。固定化探针和容器的任何组合是本文公开的试剂盒所设想的，且可以选择其任何组合以实现用于期望用途的合适的试剂盒。

试剂盒的容器可以是任何容器，其适合于包装和/或含有本文公开的一种或多种组分，其包括例如探针（例如抗体）、对照、缓冲液和试剂（例如缀合物和/或底物）。合适的材料包括但不限于，玻璃、塑料、硬纸板或其它纸产品、木材、金属或其任何合金。在一些实施方案中，容器可以完全包围固定的探针或可以简单地覆盖探针以最小化由于灰尘、油等的污染和暴露于光。在一些进一步的实施方案中，试剂盒可以包括单一容器或多个容器，且当多个容器存在时，每个容器可以与全部其它容器相同，与其它容器不同，或与一些而非全部其它容器不同。

此外，本发明涉及用于在患者中治疗心力衰竭的抑制素，所述患者具有这样的选自GDF-15(生长分化因子15)、尿素、SHBG(性激素结合球蛋白)、尿酸、PLGF(胎盘生长因子)、IL-6(白介素-6)、转铁蛋白、心肌肌钙蛋白、sFlt-1（可溶性fms-样酪氨酸激酶-1）、前白蛋白、铁蛋白、骨桥蛋白、sST2(可溶性ST2)和hsCRP（高敏性C-反应蛋白）的至少一种生物标记物的水平（优选地在样品中，更优选地在血液、血清或血浆样品中，最优选地，在血浆样品中），所述水平高于或低于各自参考水平。

最后，本发明涉及抑制素在制备用于在患者中治疗心力衰竭的药物中的用途，所述患者具有这样的选自GDF-15(生长分化因子15)、尿素、SHBG(性激素结合球蛋白)、尿酸、PLGF(胎盘生长因子)、IL-6(白介素-6)、转铁蛋白、心肌肌钙蛋白、sFlt-1（可溶性fms-样酪氨酸激酶-1）、前白蛋白、铁蛋白、骨桥蛋白、sST2(可溶性ST2)和hsCRP（高敏性C-反应蛋白）的至少一种生物标记物的水平（优选地在样品中，更优选地在血液、血清或血浆样品中，最优选地，在血浆样品中），所述水平高于或低于（各自标记物的）各自参考水平。

在一个实施方案中，水平是血液、血清或血浆水平，特别是血浆水平。

此外，如上文所述，患者可以另外患有冠状动脉疾病，或可以不患有冠状动脉疾病。

优选的参考水平在本文别处公开。

骨桥蛋白作为生物标记物

如果生物标记物是骨桥蛋白，患者优选地，不患有冠状动脉疾病。优选地，受治疗的患者具有低于该生物标记物参考水平的生物标记物水平。

sST2作为生物标记物

如果生物标记物是sST2，患者优选地，不患有冠状动脉疾病。优选地，受治疗的患者具有低于该生物标记物参考水平的生物标记物水平。

GDF-15作为生物标记物

如果生物标记物是GDF-15，患者可以患有或可以不患有冠状动脉疾病。

如果患者不患有冠状动脉疾病，应用以下：优选地，受治疗的患者具有高于该生物标记物参考水平的生物标记物水平。

如果患者患有冠状动脉疾病，应用以下：优选地，受治疗的患者具有低于该生物标记物参考水平的生物标记物水平。

尿素作为生物标记物

如果生物标记物是尿素，患者可以患有或可以不患有冠状动脉疾病。然而，特别设想的是患者患有CAD。优选地，受治疗的患者具有高于该生物标记物参考水平的生物标记物水平。

尿酸作为生物标记物

如果生物标记物是尿酸，患者可以患有或可以不患有冠状动脉疾病。然而，特别设想的是患者患有CAD。优选地，受治疗的患者具有低于该生物标记物参考水平的生物标记物水平。

转铁蛋白作为生物标记物

如果生物标记物是转铁蛋白，患者优选地，还患有冠状动脉疾病。优选地，受治疗的患者具有高于该生物标记物参考水平的生物标记物水平。

心肌肌钙蛋白作为生物标记物

如果生物标记物是心肌肌钙蛋白，特别是肌钙蛋白T，则患者可以额外患有或可以不额外患有冠状动脉疾病。

如果患者不患有冠状动脉疾病，应用以下：优选地，受治疗的患者具有低于该生物标记物参考水平的生物标记物水平。

如果患者患有冠状动脉疾病，应用以下：优选地，受治疗的患者具有高于该生物标记物参考水平的生物标记物水平。

SHBG作为生物标记物

如果生物标记物是SHBG，患者可以患有或可以不患有冠状动脉疾病。

sFlt-1作为生物标记物

如果生物标记物是sFlt-1，患者可以患有或可以不患有冠状动脉疾病。然而，特别设想的是患者患有CAD。优选地，受治疗的患者具有低于该生物标记物参考水平的生物标记物水平。

前白蛋白作为生物标记物

如果生物标记物是前白蛋白，患者可以患有或可以不患有冠状动脉疾病。

PlGF作为生物标记物

如果生物标记物是PlGF，患者可以患有或可以不患有冠状动脉疾病。然而，特别设想的是患者患有CAD。优选地，患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示患者具有升高的死亡和/或住院治疗风险。还优选地，患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示患者具有降低的死亡和/或住院治疗风险。

IL-6作为生物标记物

如果生物标记物是IL-6，患者可以患有或可以不患有冠状动脉疾病。然而，特别设想的是患者患有CAD。优选地，受治疗的患者具有高于该生物标记物参考水平的生物标记物水平。

铁蛋白作为生物标记物

如果生物标记物是铁蛋白，患者优选地，还患有冠状动脉疾病。优选地，受治疗的患者具有低于该生物标记物参考水平的生物标记物水平。

hsCRP作为生物标记物

如果生物标记物是hsCRP，患者可以患有或可以不患有冠状动脉疾病。

优选的参考水平连同鉴定患者为可能对包括抑制素的治疗应答的方法一同在上文指出。对个体标记物的优选诊断算法还在“优选的实施方案”的以下部分公开，参见实施方案16。

优选的实施方案

以下公开了本发明优选的实施方案。将上文给出的定义加上必要的变更进行应用。

1.鉴定具有心力衰竭的患者为可能对包括抑制素的治疗应答的方法，其包括：

（a）在患者的样品中测量选自以下的至少一种生物标记物的水平：GDF-15(生长分化因子15)、SHBG(性激素结合球蛋白)、PLGF(胎盘生长因子)、IL-6(白介素-6)、尿素、尿酸、转铁蛋白、心肌肌钙蛋白、sFlt-1(可溶性fms-样酪氨酸激酶-1)、前白蛋白、铁蛋白、骨桥蛋白、sST2(可溶ST2)和hsCRP(高敏c-反应蛋白)，且

（b）将所述至少一种标记物的水平与各自参考水平比较。

2.根据实施方案1所述的方法，其中所述主体具有根据ACC/AHA分类被分类为阶段B、C或D的心力衰竭，特别是分类为阶段B或C的心力衰竭，和/或根据NYHA分类被分类为NYHA类型II、III、IV的心力衰竭，特别是所述心力衰竭被分类为NYHA类型II或III。

3.实施方案1和2所述的方法，其中所述患者还具有冠状动脉疾病，特别是其中至少一种生物标记物是转铁蛋白、铁蛋白、尿素、尿酸、sFlt-1、PlGF或IL-6。

4.实施方案1和2所述的方法，其中患者不具有冠状动脉疾病，特别是其中生物标记物是骨桥蛋白或sST2。

5.权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述抑制素选自以下：阿托伐他汀、西立伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、美伐他汀、匹伐他汀、普伐他汀、罗苏伐他汀和辛伐他汀。

6.实施方案1-5中任一项所述的方法，其中在获得样品前所述患者已经使用抑制素治疗。

7.实施方案1-6中任一项所述的方法，其中在获得样品前所述患者还未使用抑制素治疗。

8.实施方案1-7中任一项所述的方法，其中

i）至少一种生物标记物是GDF-15，且

a）其中所述患者不患有冠状动脉疾病，且其中患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者更可能对包括抑制素的治疗应答，和/或其中患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者更不可能对包括抑制素的治疗应答，或

b）其中所述患者患有冠状动脉疾病，且其中患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者更可能对包括抑制素的治疗应答，和/或其中患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者更不可能对包括抑制素的治疗应答，

ii）至少一种生物标记物是SHBG，且

a）其中所述患者不患有冠状动脉疾病，且其中患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者更可能对包括抑制素的治疗应答，和/或其中患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者更不可能对包括抑制素的治疗应答，或

b）其中所述患者患有冠状动脉疾病，且其中患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者更可能对包括抑制素的治疗应答，和/或其中患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者更不可能对包括抑制素的治疗应答，

iii）至少一种生物标记物是PlGF，且其中患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者更可能对包括抑制素的治疗应答，和/或其中患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者更不可能对包括抑制素的治疗应答，

iv）至少一种生物标记物是IL-6，且其中患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者更可能对包括抑制素的治疗应答，和/或其中患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者更不可能对包括抑制素的治疗应答，

v）至少一种生物标记物是尿素，且其中患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者更可能对包括抑制素的治疗应答，和/或其中患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者更不可能对包括抑制素的治疗应答，

vi）至少一种生物标记物是骨桥蛋白，且其中所述患者不患有冠状动脉疾病，且其中患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者更可能对包括抑制素的治疗应答，和/或其中患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者更不可能对包括抑制素的治疗应答，

vii）至少一种生物标记物是sST2，且其中所述患者不患有冠状动脉疾病，且其中患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者更可能对包括抑制素的治疗应答，和/或其中患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者更不可能对包括抑制素的治疗应答，

viii）至少一种生物标记物是尿酸，且其中患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者更可能对包括抑制素的治疗应答，和/或其中患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者更不可能对包括抑制素的治疗应答，

ix）至少一种生物标记物是sFlt-1，且其中患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者更可能对包括抑制素的治疗应答，和/或其中患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者更不可能对包括抑制素的治疗应答，

x）至少一种生物标记物是转铁蛋白，且其中所述患者还患有冠状动脉疾病，且其中患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者更可能对包括抑制素的治疗应答，和/或其中患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者更不可能对包括抑制素的治疗应答，

xi）至少一种生物标记物是铁蛋白，且其中所述患者还患有冠状动脉疾病，且其中患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者更可能对包括抑制素的治疗应答，和/或其中患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者更不可能对包括抑制素的治疗应答，

xii）至少一种生物标记物是心肌肌钙蛋白，且

和/或

xiii）其中至少一种生物标记物是前白蛋白和/或hsCRP，且

b）其中所述患者患有冠状动脉疾病，且其中患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者更可能对包括抑制素的治疗应答，和/或其中患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者更不可能对包括抑制素的治疗应答。

9.预测患者死亡和/或住院治疗的风险的方法，其中所述患者具有心力衰竭且其中所述患者正在经历包括抑制素的治疗，所述方法包括：

（a）在所述患者的样品中测量选自以下的至少一种标记物的水平：GDF-15(生长分化因子15)、尿素、SHBG(性激素结合球蛋白)、尿酸、PLGF(胎盘生长因子)、IL-6(白介素-6)、转铁蛋白、心肌肌钙蛋白、sFlt-1(可溶性fms-样酪氨酸激酶-1)、前白蛋白、铁蛋白、骨桥蛋白、sST2(可溶ST2)和hsCRP(高敏c-反应蛋白)，且

（b）将所述至少一种标记物的水平与各自参考水平比较。

10.根据实施方案9的方法，其中

i）至少一种生物标记物是GDF-15，且

a）其中所述患者不患有冠状动脉疾病，且其中患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者具有减少的死亡和/或住院治疗风险，和/或其中患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者具有增加的死亡和/或住院治疗风险，或

b）其中所述患者患有冠状动脉疾病，且其中患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者具有减少的死亡和/或住院治疗风险，和/或其中患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者具有增加的死亡和/或住院治疗风险，

ii）至少一种生物标记物是SHBG，且

a）其中所述患者不患有冠状动脉疾病，且其中患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者具有减少的死亡和/或住院治疗风险，和/或其中患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者具有增加的死亡和/或住院治疗风险，或

b）其中所述患者患有冠状动脉疾病，且其中患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者具有减少的死亡和/或住院治疗风险，和/或其中患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者具有增加的死亡和/或住院治疗风险，

iii）至少一种生物标记物是PlGF，且其中患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者具有减少的死亡和/或住院治疗风险，和/或其中患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者具有增加的死亡和/或住院治疗风险，

iv）至少一种生物标记物是IL-6，且其中患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者具有减少的死亡和/或住院治疗风险，和/或其中患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者具有增加的死亡和/或住院治疗风险，

v）至少一种生物标记物是尿素，且其中患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者具有减少的死亡和/或住院治疗风险，和/或其中患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者具有增加的死亡和/或住院治疗风险，

vi）至少一种生物标记物是骨桥蛋白，且其中所述患者不患有冠状动脉疾病，且其中患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者具有减少的死亡和/或住院治疗风险，和/或其中患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者具有增加的死亡和/或住院治疗风险，

vii）至少一种生物标记物是sST2，且其中所述患者不患有冠状动脉疾病，且其中患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者具有减少的死亡和/或住院治疗风险，和/或其中患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者具有增加的死亡和/或住院治疗风险，

viii）至少一种生物标记物是尿酸，且其中患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者具有减少的死亡和/或住院治疗风险，和/或其中患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者具有增加的死亡和/或住院治疗风险，

ix）至少一种生物标记物是sFlt-1，且其中患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者具有减少的死亡和/或住院治疗风险，和/或其中患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者具有增加的死亡和/或住院治疗风险，

x）至少一种生物标记物是转铁蛋白，且其中所述患者还患有冠状动脉疾病，且其中患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者具有减少的死亡和/或住院治疗风险，和/或其中患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者具有增加的死亡和/或住院治疗风险，

xi）至少一种生物标记物是铁蛋白，且其中所述患者还患有冠状动脉疾病，且其中患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者具有减少的死亡和/或住院治疗风险，和/或其中患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者具有增加的死亡和/或住院治疗风险，

xii）至少一种生物标记物是心肌肌钙蛋白，且

和/或

xiii）至少一种生物标记物是前白蛋白和/或hsCRP，且

b）其中所述患者患有冠状动脉疾病，且其中患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者具有减少的死亡和/或住院治疗风险，和/或其中患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者具有增加的死亡和/或住院治疗风险。

11.根据实施方案1-10中任一项所述的方法，其中所述样品是血液、血清或血浆样品。

12.根据实施方案1-11中任一项所述的方法，其中所述患者是人。

13.在具有心力衰竭的患者的样品中的i)选自以下的至少一种生物标记物：GDF-15(生长分化因子15)、尿素、SHBG(性激素结合球蛋白)、尿酸、PLGF(胎盘生长因子)、IL-6(白介素-6)、转铁蛋白、心肌肌钙蛋白、sFlt-1(可溶性fms-样酪氨酸激酶-1)、前白蛋白、铁蛋白、骨桥蛋白、sST2(可溶性ST2)和hsCRP(高敏性C-反应蛋白)和/或ii）特异性结合选自以下的生物标记物的至少一种结合剂：GDF-15(生长分化因子15)、尿素、SHBG(性激素结合球蛋白)、尿酸、PLGF(胎盘生长因子)、IL-6(白介素-6)、转铁蛋白、心肌肌钙蛋白、sFlt-1(可溶性fms-样酪氨酸激酶-1)、前白蛋白、铁蛋白、骨桥蛋白、sST2(可溶性ST2)和hsCRP(高敏性C-反应蛋白)用于鉴定患者为可能对包括抑制素的治疗应答的用途。

14.在具有心力衰竭的患者的样品中的i)选自以下的至少一种生物标记物：GDF-15(生长分化因子15)、尿素、SHBG(性激素结合球蛋白)、尿酸、PLGF(胎盘生长因子)、IL-6(白介素-6)、转铁蛋白、心肌肌钙蛋白、sFlt-1(可溶性fms-样酪氨酸激酶-1)、前白蛋白、铁蛋白、骨桥蛋白、sST2(可溶性ST2)和hsCRP(高敏性C-反应蛋白)和/或ii）特异性结合选自以下的生物标记物的至少一种结合剂：GDF-15(生长分化因子15)、尿素、SHBG(性激素结合球蛋白)、尿酸、PLGF(胎盘生长因子)、IL-6(白介素-6)、转铁蛋白、心肌肌钙蛋白、sFlt-1(可溶性fms-样酪氨酸激酶-1)、前白蛋白、铁蛋白、骨桥蛋白、sST2(可溶性ST2)和hsCRP(高敏性C-反应蛋白)用于预测所述患者死亡和/或住院治疗的风险的用途。

15.用于实施根据实施方案1-8中任一项所述的方法的设备，所述设备包括

a)分析仪单元，其包括至少一种结合剂，所述结合剂特异性结合选自以下的至少一种生物标记物：GDF-15(生长分化因子15)、尿素、SHBG(性激素结合球蛋白)、尿酸、PLGF(胎盘生长因子)、IL-6(白介素-6)、转铁蛋白、心肌肌钙蛋白、sFlt-1(可溶性fms-样酪氨酸激酶-1)、前白蛋白、铁蛋白、骨桥蛋白、sST2（可溶性ST2）和hsCRP（高敏性C-反应蛋白），所述单元适配于在具有心力衰竭的患者的样品中测量一种或多种生物标记物的水平，和

b）用于将测定的水平与参考水平比较的分析仪单元，从而患者被鉴定为更可能或更不可能对包括抑制素的治疗应答，所述单元包括具有一种或多种参考水平的数据库，和用于实施比较的计算机执行的诊断算法，具体地，其中所述诊断算法是如权利要求8所述的算法。

16.用于在患者中治疗心力衰竭的抑制素，所述患者具有这样的选自GDF-15(生长分化因子15)、尿素、SHBG(性激素结合球蛋白)、尿酸、PLGF(胎盘生长因子)、IL-6(白介素-6)、转铁蛋白、心肌肌钙蛋白、sFlt-1(可溶性fms-样酪氨酸激酶-1)、前白蛋白、铁蛋白、骨桥蛋白、sST2（可溶性ST2）和hsCRP（高敏性C-反应蛋白）的至少一种生物标记物的水平，尤其是血液、血清或血浆水平，所述水平高于或低于各自参考水平，具体而言，其中

i）至少一种生物标记物是GDF-15，且

a）其中所述患者不患有冠状动脉疾病，且其中所述生物标记物的水平高于参考水平，或

b）其中所述患者患有冠状动脉疾病，且其中所述生物标记物的水平低于参考水平，

ii）至少一种生物标记物是SHBG，且

a）其中所述患者不患有冠状动脉疾病，且其中所述生物标记物的水平低于参考水平，或

b）其中所述患者患有冠状动脉疾病，且其中所述生物标记物的水平高于参考水平，

iii）至少一种生物标记物是PlGF，且其中所述生物标记物的水平高于参考水平，

iv）至少一种生物标记物是IL-6，且其中所述生物标记物的水平高于参考水平，

v）至少一种生物标记物是尿素，且其中所述生物标记物的水平高于参考水平，

vi）至少一种生物标记物是骨桥蛋白，且其中所述患者不患有冠状动脉疾病，且其中所述生物标记物的水平低于参考水平，

vii）至少一种生物标记物是sST2，且其中所述患者不患有冠状动脉疾病，且其中所述生物标记物的水平低于参考水平，

viii）至少一种生物标记物是尿酸，且其中所述生物标记物的水平低于参考水平，

ix）至少一种生物标记物是sFlt-1，且其中所述生物标记物的水平低于参考水平，

x）至少一种生物标记物是转铁蛋白，且其中所述患者还患有冠状动脉疾病，且其中所述生物标记物的水平高于参考水平，

xi）至少一种生物标记物是铁蛋白，且其中所述患者还患有冠状动脉疾病，且其中所述生物标记物的水平低于参考水平，

xii）至少一种生物标记物是心肌肌钙蛋白，且

和/或

xiii）至少一种生物标记物是前白蛋白和/或hsCRP，且

b）其中所述患者患有冠状动脉疾病，且其中所述生物标记物的水平低于参考水平。

在该说明书中引用的全部参考通过引用以其整体公开内容和本说明书中具体提及的公开内容并入本文。

附图显示：

图1由CAD、抑制素治疗（0=无抑制素,n=211，1=处于抑制素治疗,n=288）和基线处的生物标记物中值水平（0=低于中值，1=高于中值；偶尔的1=低于中值，2=高于中值）分离的(split)时间与首次HF住院治疗或死亡的Kaplan-Meier曲线；CAD=0:患者不具有(w/o)冠状动脉疾病，CAD=1，患者具有冠状动脉疾病。

以下实施例将仅说明本发明。它们不应当以任何方式被理解为限制本发明的范围。

实施例1：患者群体

用于抑制素治疗分层的潜在生物标记物候选在499位患有HF(NYHA类别II-IVHF(LVEF≤45%))的患者的血浆样品中测量(PfistererM.等人JAMA.2009;301:383-92)。在基线测量生物标记物，且低于和高于中值的亚群与治疗18个月后的结果相关联。另外地，患者对于抑制素治疗和CAD的存在进行分层（参见附图）。211位患者没有进行抑制素治疗，且288位患者接受了抑制素治疗。此外，212位患者不具有冠状动脉疾病（CAD）且287位具有CAD。

实施例2：测定

使用Roche的电化学发光ELISA夹心测试ElecsysTroponinThs(高敏)STAT(短周转时间)测定确定肌钙蛋白T。测试使用特异性针对人心肌肌钙蛋白T的两种单克隆抗体。所述抗体识别位于心肌肌钙蛋白T蛋白中央部分（其由288个氨基酸组成）的两个表位（氨基酸位置125-131和136-147）。hs-TnT测试允许在3至10000pg/mL的范围内测量肌钙蛋白T水平。

通过电化学发光免疫测定（ECLIA,RocheDiagnostics）测量IL-6（白介素-6）。使用来自RocheDiagnostics的CobasE601分析仪执行测试。测试是基于与生物素化的单克隆IL-6-特异性抗体的第一温育和与使用钌复合体标记的单克隆IL-6特异性抗体和链霉亲和素包被的微粒的第二温育。

使用来自RocheDiagnostics的颗粒增强免疫比浊测定(Tina-quant心脏C-反应蛋白(乳胶)高敏)确定高敏（hs）CRP。在该测试中，乳胶微粒偶联的抗CRP抗体与样品中的抗原反应以形成抗原/抗体复合体。凝集后，将所述复合体进行比浊测量。

使用来自CriticalDiagnostics(SanDiego,CA,USA)的Presage?ST2测定确定sST2。所述测定是以96孔板形式的定量夹心单克隆ELISA，用于在血清或血浆中测量ST2。将稀释的血浆加载于抗ST2抗体包被的板的合适的孔中并温育规定的时间。一系列将试剂从板洗涤的步骤后，将另外的试剂添加并随后洗除，最后将分析物通过比色试剂的添加进行检测，且在450nm下分光光度测量产生的信号。

通过使用Rochecobasc系统在血浆样品中测量前白蛋白。应用的测定是免疫比浊测定。人前白蛋白与特异性的抗血清形成沉淀物，对其进行比浊确定。

使用ELECSYS免疫测定检测PlGF和sFlt1，所述测定使用分别对PlGF和sFlt1特异的抗体。所述测试可以使用不同的Roche分析仪自动实施，其包括ELECSYS2010和cobrae411和cobrae601。所述测试具有对PlGF3pg/ml的灵敏性。sFlt-1量在10-85,000pg/ml之间。

通过体外测试测量尿素，用于在Roche/Hitachicobasc系统上的人血清、血浆和尿液中尿素/尿素氮的定量确定。测试可以使用不同的分析仪自动实施，其包括cobasc311和cobasc501/502。测定是尿素酶和谷氨酸脱氢酶的动力学测定。通过尿素酶将尿素水解以形成铵和碳酸盐。在第二反应中，2-酮戊二酸在谷氨酸脱氢酶（GLDH）和辅酶NADH存在的情况下与铵反应以产生L-谷氨酸盐。在该反应中，对于每摩尔水解的尿素，2摩尔NADH

被氧化为NAD⁺。NADH浓度减少的速率与样本中尿素浓度成正比，且光度测量。

通过使用COBASINTEGRA系统(ROCHE)测量转铁蛋白，用于血清和血浆中人转铁蛋白的定量免疫确定。应用的测定是免疫比浊测定。人转铁蛋白与特异性的抗血清形成沉淀物，对其在340nm进行比浊确定。。

通过电化学发光免疫测定（ECLIA）测量SHBG。所述测试可以使用不同的分析仪自动实施，其包括ELECSYS2010和cobrae411和cobrae601。在第一温育步骤中，将样品与使用钌复合体标记的单克隆SHBG特异性抗体接触，从而形成夹心复合体。在第二温育步骤中，添加链霉亲和素包被的微粒。形成的复合体通过生物素和链霉亲和素的相互作用结合至固相。结果由通过2点校正仪器特异性生成的校正曲线和由经试剂条码提供的主曲线确定。

通过应用酶比色法确定尿酸。在该酶促反应中，过氧化物在过氧化物酶（POD）、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺(TOOS)和4-氨基比林存在的情况下反应以形成醌二亚胺染料。形成的红色的强度与尿酸浓度成正比且通过光度确定。

通过使用Roche/Hitachicobasc系统在血浆样品中测量铁蛋白。应用的测定是颗粒增强的免疫比浊测定。人铁蛋白与用抗铁蛋白抗体包被的乳胶颗粒凝集。在570/800nm比浊确定沉淀。

实施例3：结果

上文描述的分析导致接下来的抑制素治疗应答预测。

·骨桥蛋白（OPN）水平低于（但不高于）中值趋向于预测在没有CAD的HF患者中（但不在具有CAD的患者中）的对抑制素的治疗应答。

·sST2水平低于中值预测在没有CAD的HF患者中的对抑制素的治疗应答(p=0.04)。

·GDF-15水平高于中值预测在没有CAD的HF患者中的对抑制素的治疗应答；相反地，GDF-15水平低于中值预测在具有CAD的HF患者中的对抑制素的治疗应答(均为p=0.04)。

·尿素水平高于（但不低于）中值预测在具有CAD的HF患者中的对抑制素的治疗应答(p=0.02)，且在没有CAD的患者也有趋势(p=0.10)。

·尿酸水平低于（但不高于）中值预测在具有CAD的HF患者中的对抑制素的治疗应答(p=0.03)，但在没有CAD的患者中较少(p=0.09)。

·转铁蛋白水平高于（但不低于）中值趋向于预测在具有CAD的HF患者中的对抑制素的治疗应答（p=0.06）。

·cTnT水平高于中值预测在具有CAD的HF患者中的对抑制素的治疗应答(p=0.03)；相反地，cTnT水平低于中值趋向于预测治疗在没有CAD的HF患者中的对抑制素的治疗应答(p=0.07)。

·SHBG水平低于中值预测在没有CAD的HF患者中的对抑制素的治疗应答(p=0.04)；相反地，SHBG水平高于中值预测在具有CAD的HF患者中的对抑制素的治疗应答(p=0.002)。

·sFLt-1水平低于（但不高于）中值预测在具有CAD的HF患者中的对抑制素的治疗应答(p=0.03)，且在没有CAD的患者中较少(p=0.10)。

·前白蛋白水平高于中值预测在没有CAD的HF患者中的对抑制素的治疗应答(p=0.04)；且前白蛋白水平低于中值趋向于预测治疗在具有CAD的HF患者中的对抑制素的治疗应答(p=0.06)。

·PLGF水平高于中值趋向于预测在具有CAD的HF患者中的对抑制素的治疗应答(p=0.004)，且在没有CAD的患者中较少(p=0.08)。

·IL-6水平高于中值趋向于预测在具有CAD的HF患者中的对抑制素的治疗应答(p=0.06)，且在没有CAD的患者中较少(p=0.15)。

·铁蛋白水平低于中值趋向于预测在具有CAD的HF患者中的对抑制素的治疗应答(p=0.02)，但在没有CAD的患者中没有(p=0.21)。

·hsCRP水平低于中值预测在具有CAD的HF患者中的对抑制素的治疗应答(p=0.03)；相反地，hsCRP水平高于中值趋向于预测在没有CAD的HF患者中的对抑制素的治疗应答(p=0.12)。

对抑制素治疗决定不合适的有半胱氨酸蛋白酶抑制剂C、S100、P1NP和睾酮。

实施例4：确认

另外地，对抑制素类的特定药物，即阿托伐他汀或普伐他汀（分别地n=84和91，参见图1）执行生存分析。在具有冠状动脉疾病的患者中的总生存分析指示这两种抑制素的治疗效果没有区别（p=0.74）。因此，数据显示在全部抑制素中观察到的效果还可以被观察到，如果根据使用的抑制素的类型将患者群体分开。

最后，执行对在研究之前和期间接受抑制素的患者相比于在研究过程期间接受抑制素的患者的分析(分别n=193相比于95；参见图1)。该分析显示抑制素的治疗效果在两组中没有区别（p=0.39），其支持了接受抑制素的患者可以根据生物标记物特异性分析分组（不论他们在研究前或研究期间是否接受抑制素）的概念。因此，数据显示在整个患者群观察到的效果也可以在先前使用抑制素治疗的患者和未使用抑制素治疗的患者（在基线处）中观察到。

实施例5：

具有类型C心力衰竭的90岁龄男性患者接受低剂量的依那普利(5mg/d)和美托洛尔(25mg/d)。患者显示出具有提高的NT-proBNP水平(1235pg/mL)的心力衰竭的体征。患者具有高血压（在抗高血压治疗下血压130/85mmHg）和周围动脉闭塞症，但不具有冠状动脉疾病。治疗医师怀疑是否应当添加抑制素。在得自患者的血浆样品中确定GDF-15。GDF-15值高于3800pg/mL。开始抑制素治疗（阿托伐他汀10mg/d）。在接下来的16个月患者保持稳定具有良好结果（没有死亡或住院治疗）。

具有NYHA类型III心力衰竭的79岁龄女性患者接受由阿司匹林(300mg/d)、氯吡格雷(50mg/d)、氢氯噻嗪(12.5mg/d)、缬沙坦(80mg/d)、阿替洛尔(100mg/d)以及辛伐他汀80mg/d组成的治疗。患者在75岁时已具有心肌梗死且在近期为心力衰竭呼吸困难的事件而住院治疗。在医院由于肌肉疼痛停止辛伐他汀治疗。治疗医师不确定是否重新引入抑制素治疗，因为患者已具有可能由于肌病导致的肌肉疼痛。在得自患者的血浆样品中确定PlGF。PlGF值高于22pg/mL。医生开具了阿托伐他汀20mg/d的处方且密切监控肌酸激酶以排除肌病。在接下来的1.5年患者保持稳定且具有良好结果（没有死亡，没有住院治疗）。

结论：

在慢性心力衰竭（CHF）中使用抑制素治疗没有得到主要指导方针的支持。但是，其显示在本发明的背景下，患有心力衰竭的患者的一些亚组可以从包括抑制素的治疗中获益，而一些亚组不能从所述治疗中获益。所述亚组可以通过在患者样品中测量选自以下的至少一种生物标记物：GDF-15、尿素、SHBG、尿酸、PLGF、IL-6、转铁蛋白、心肌肌钙蛋白、sFlt-1、前白蛋白、铁蛋白、骨桥蛋白、sST2和hsCRP的水平鉴定。特别地，血液中的生物标记物水平可以预测心力衰竭患者是否将从抑制素治疗中获益或将受害。这是有利的，因为本发明的方法允许鉴定应当使用抑制素治疗的那些患者和不应当使用抑制素治疗的那些患者。因此，可以避免非必需的健康护理成本以及不良副作用。

Claims

（a）在患者的样品中测量生物标记物GDF-15的水平，和

（b）将GDF-15水平与参考水平比较。

2.根据权利要求1的方法，其中i)具有心力衰竭的患者不患有冠状动脉疾病，且其中患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者更可能对包括抑制素的治疗应答，和/或其中患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者更不可能对包括抑制素的治疗应答，或

其中ii)具有心力衰竭的患者患有冠状动脉疾病，且其中患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者更可能对包括抑制素的治疗应答，和/或其中患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者更不可能对包括抑制素的治疗应答。

3.鉴定具有心力衰竭的患者为可能对包括抑制素的治疗应答的方法，其包括：

（a）在患者样品中测量选自以下的至少一种生物标记物的水平：SHBG（性激素结合球蛋白）、PLGF（胎盘生长因子）、IL-6（白介素-6）和尿素，和

（b）将所述至少一种标记物的水平与各自参考水平比较。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中主体具有根据ACC/AHA分类被分类为阶段B、C或D的心力衰竭，特别是根据ACC/AHA分类被分类为阶段B或C的心力衰竭，和/或其中主体具有被分类为NYHA类型II、III或IV的心力衰竭，特别是所分类的心力衰竭根据NYHA分类被分类为NYHA类型II或III。

5.根据权利要求3或4所述的方法，其中所述患者还具有冠状动脉疾病，特别是其中至少一种生物标记物是尿素或PlGF。

6.权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述抑制素选自以下：阿托伐他汀、西立伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、美伐他汀、匹伐他汀、普伐他汀、罗苏伐他汀和辛伐他汀。

7.权利要求1-6中任一项所述的方法，其中在获得样品前所述患者已经使用抑制素治疗。

8.权利要求1-7中任一项所述的方法，其中在获得样品前所述患者还未使用抑制素治疗。

9.权利要求3-8中任一项所述的方法，其中

i）至少一种生物标记物是SHBG，且

ii）至少一种生物标记物是PlGF，且其中患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者更可能对包括抑制素的治疗应答，和/或其中患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者更不可能对包括抑制素的治疗应答，

iii）至少一种生物标记物是IL-6，且其中患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者更可能对包括抑制素的治疗应答，和/或其中患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者更不可能对包括抑制素的治疗应答，

和/或

iv）至少一种生物标记物是尿素，且其中患者样品中的生物标记物的水平高于参考水平指示了患者更可能对包括抑制素的治疗应答，和/或其中患者样品中的生物标记物的水平低于参考水平指示了患者更不可能对包括抑制素的治疗应答。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述样品是血液、血清或血浆样品。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述患者是人。

12.在具有心力衰竭的患者的样品中的：i)选自以下的至少一种生物标记物：GDF-15(生长分化因子15)、尿素、SHBG(性激素结合球蛋白)、PLGF(胎盘生长因子)和IL-6(白介素-6)和/或ii)至少一种结合剂，其特异性结合选自以下的生物标记物：GDF-15(生长分化因子15)、尿素、SHBG(性激素结合球蛋白)、PLGF(胎盘生长因子)和IL-6(白介素-6)，用于鉴定患者为可能对包括抑制素的治疗应答的用途。

13.用于实施根据权利要求1-10中任一项所述的方法的设备，所述设备包括

a）分析仪单元，其包括至少一种结合剂，所述结合剂特异性结合选自以下的至少一种生物标记物：GDF-15(生长分化因子15)、尿素、SHBG(性激素结合球蛋白)、PLGF(胎盘生长因子)和IL-6(白介素-6)，所述单元适配于在具有心力衰竭的患者的样品中测量一种或多种生物标记物的水平，和

b）用于将测定的水平与参考水平比较的分析仪单元，从而患者被鉴定为更可能或更不可能对包括抑制素的治疗应答，所述单元包括具有一种（或多种）参考水平的数据库和用于实施比较的计算机执行的诊断算法，具体地，其中所述诊断算法是如权利要求2或9所述的算法。

14.用于在患者中治疗心力衰竭的抑制素，所述患者具有这样的选自GDF-15(生长分化因子15)、尿素、SHBG(性激素结合球蛋白)、PLGF(胎盘生长因子)和IL-6(白介素-6)的至少一种生物标记物的水平，尤其是血液、血清或血浆水平，所述水平高于或低于各自参考水平，具体而言，其中

i）所述至少一种生物标记物是GDF-15，且

ii）所述至少一种生物标记物是SHBG，且

iii）所述至少一种生物标记物是PlGF，且其中所述生物标记物的水平高于参考水平，

iv）所述至少一种生物标记物是IL-6，且其中所述生物标记物的水平高于参考水平，

和/或

v）所述至少一种生物标记物是尿素，且其中所述生物标记物的水平高于参考。