CN105582210A - 一种治疗牙鲆淋巴囊肿病的中药组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗牙鲆淋巴囊肿病的中药组合物及其制备方法，由川芎、马钱子、千年健、藏红花、沙参、杜仲、防风、牛膝、赤芍、厚朴和胆南星制备而成。取上述各原料，清洗干净后，自然晾干，粉碎过筛；按配比将各原料混合，加入水，加热煮沸提取两次，合并两次过滤液，用乙醇为溶剂进行温浸提取，滤过，收集提取液；将提取液减压浓缩过滤，灌装，即得。本发明中药组合物选用的药材价廉易得，可以有效降低鱼苗的治疗成本。本发明中药组合物制得的制剂可以提前用药以预防牙鲆的淋巴囊肿病，且不会因为免疫应激反应而降低生长速率；也可以得病后给药用于治疗，从而提高牙鲆的养殖成功率，降低渔民的损失。

Description

一种治疗牙鲆淋巴囊肿病的中药组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及鱼类药物技术领域，具体是一种治疗牙鲆淋巴囊肿病的中药组合物及其制备方法。

背景技术

牙鲆属冷温性大型底栖经济鱼类，俗称牙偏、偏口或左口。牙鲆不仅饵料系数小，生长速度快，而且肉质肥厚细嫩，美味可口，营养极为丰富，深受国内外消费者青睐，是一种品质优良的生产高效目适应性较强的增养殖品种。目前，牙鲆作为人工养殖鱼类的主要品种，在山东、福建、广东、浙江等地区进行人工育苗和养成生产，极大地丰富了国内外鲜活水产品市场。然而，随着我国沿海养鱼业的迅猛发展，养殖规模的扩大，养殖环境的变化，防治疾病的技术水平低等诸多原因致使鱼类病毒侵害的几率大大增加，鱼类病毒病的发生越来越多，严重制约着鱼类养殖业的稳定健康发展。

淋巴囊肿病是发现最早的鱼类病毒性疾病之一，目前己知有100多种养殖和自然水域中的鱼类受其感染。我国养殖的牙鲆、鲈鱼、真鲷、石斑鱼以及牙鲆等鱼类都曾发现过。此病在10月至翌年5月，水温10-25℃时为流行的高峰期，在我国全年均可发生。网箱养殖的感染率高达60％以上，池塘为20-27％。此病在2龄以上的鱼，一般不引起死亡，但鱼体较瘦，外表难看，失去商品价值；而且有的病鱼囊肿可脱落自愈。对1龄的幼鱼可引起死亡，发病后两个月内死亡率可达30％。淋巴囊肿病可导致工厂化养殖大面积暴发流行，感染率高，损失惨重，因此加强病害综合防治非常重要。

目前水产养殖中对鱼类疾病的预防与治疗主要的是使用各种化学药物和抗生素。鱼类养殖过程中长期用药使得病菌耐药性增强，大量抗生素的使用还会使鱼类的免疫能力下降，同时水产品中残留的药物也严重影响食品的安全和人类的健康。

应用中草药来治疗牙鲆的淋巴囊肿病，复方应用，在抗病毒的同时增强了牙鲆的免疫力，符合发展无公害渔业、生产绿色水产品的需求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种绿色环保、成本低且无污染的治疗牙鲆淋巴囊肿病的中药组合物及其制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种治疗牙鲆淋巴囊肿病的中药组合物，由以下重量份的原料制备而成：川芎40～60份，马钱子20～24份，千年健50～60份，藏红花30～40份，沙参20～30份，杜仲50～60份，防风15～25份，牛膝6～8份，赤芍12～18份，厚朴18～24份，胆南星6～8份。

作为本发明进一步的方案：具体由以下重量份的原料制备而成：川芎50份，马钱子22份，千年健55份，藏红花35份，沙参25份，杜仲55份，防风20份，牛膝7份，赤芍15份，厚朴21份，胆南星7份。

一种所述的治疗牙鲆淋巴囊肿病的中药组合物的制备方法，具体步骤如下：

(1)取上述各原料，清洗干净后，自然晾干，粉碎，过30～40目筛；

(2)按配比将各原料混合，加入原料药总重量10～12倍的水，加热煮沸2～3h，过滤；再次加入原料药总重量8～10倍的水，加热煮沸1.5～2.5h，再次过滤；

(3)合并两次过滤液，用浓度90～95％乙醇为溶剂，在70～80℃温浸提取，提取次数为3～5次，每次提取时间为2～3h，每次溶剂用量为原料总重量的10～12倍，滤过，收集提取液；

(4)将提取液减压浓缩至相对密度为1.20～1.30，压力控制在0.3～0.5个大气压，过滤，灌装，即得。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明中药组合物选用的药材价廉易得，可以有效降低牙鲆鱼苗的治疗成本。本发明中药组合物制得的制剂可以提前用药以预防牙鲆的淋巴囊肿病，且不会因为免疫应激反应而降低生长速率；也可以得病后给药用于治疗，从而提高牙鲆的养殖成功率，降低渔民的损失，绿色环保。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

治疗牙鲆淋巴囊肿病的中药组合物，由以下重量份的原料制备而成：川芎40份，马钱子20份，千年健50份，藏红花30份，沙参20份，杜仲50份，防风15份，牛膝6份，赤芍12份，厚朴18份，胆南星6份。

上述实施例中，治疗牙鲆淋巴囊肿病的中药组合物的制备步骤如下：

(1)取上述各原料，清洗干净后，自然晾干，粉碎，过40目筛；

(2)按配比将各原料混合，加入原料药总重量10倍的水，加热煮沸2h，过滤；再次加入原料药总重量8倍的水，加热煮沸1.5h，再次过滤；

(3)合并两次过滤液，用浓度95％乙醇为溶剂，在75℃温浸提取，提取次数为3次，每次提取时间为2h，每次溶剂用量为原料总重量的10倍，滤过，收集提取液；

(4)将提取液减压浓缩至相对密度为1.20～1.30，压力控制在0.3个大气压，过滤，灌装，即得。

实施例2

治疗牙鲆淋巴囊肿病的中药组合物，具体由以下重量份的原料制备而成：川芎50份，马钱子22份，千年健55份，藏红花35份，沙参25份，杜仲55份，防风20份，牛膝7份，赤芍15份，厚朴21份，胆南星7份。

上述实施例中，治疗牙鲆淋巴囊肿病的中药组合物的制备步骤如下：

(1)取上述各原料，清洗干净后，自然晾干，粉碎，过40目筛；

(2)按配比将各原料混合，加入原料药总重量11倍的水，加热煮沸2.5h，过滤；再次加入原料药总重量9倍的水，加热煮沸2h，再次过滤；

(3)合并两次过滤液，用浓度95％乙醇为溶剂，在75℃温浸提取，提取次数为4次，每次提取时间为2.5h，每次溶剂用量为原料总重量的11倍，滤过，收集提取液；

(4)将提取液减压浓缩至相对密度为1.20～1.30，压力控制在0.4个大气压，过滤，灌装，即得。

实施例3

治疗牙鲆淋巴囊肿病的中药组合物，由以下重量份的原料制备而成：川芎60份，马钱子24份，千年健60份，藏红花40份，沙参30份，杜仲60份，防风25份，牛膝份，赤芍18份，厚朴24份，胆南星8份。

上述实施例中，治疗牙鲆淋巴囊肿病的中药组合物的制备步骤如下：

(1)取上述各原料，清洗干净后，自然晾干，粉碎，过40目筛；

(2)按配比将各原料混合，加入原料药总重量12倍的水，加热煮沸3h，过滤；再次加入原料药总重量10倍的水，加热煮沸2.5h，再次过滤；

(3)合并两次过滤液，用浓度95％乙醇为溶剂，在75℃温浸提取，提取次数为5次，每次提取时间为3h，每次溶剂用量为原料总重量的12倍，滤过，收集提取液；

(4)将提取液减压浓缩至相对密度为1.20～1.30，压力控制在0.5个大气压，过滤，灌装，即得。

实施例4：考察本发明药物对淋巴囊肿病毒感染牙鲆鳍细胞的影响

试验药物：使用本发明实施例2中的药物，取100mL加水稀释至10L。

试验方法：

将淋巴囊肿病毒原液lmL添加9mLL-15进行10倍稀释到10mL作为病毒液。取对数生长期TF细胞以0.8×10⁵个/mL接种于96孔板，于22℃，5％C0₂培养箱中培养，观察；当细胞约长成单层时，用无血清L-15培养液清洗二遍；添加80μL病毒液，22℃吸附2h后，去除病毒液，加入10％胎牛血清-L-15培养液180μL，22℃培养，观察。设对照组，添加PBS吸附2h后，去除PBS，加入10％胎牛血清-L-15培养液180μL培养。对照组设3个孔。每12h照相。

取80μL病毒液与本发明药物溶液(终浓度为0.02g生药/mL)，22℃作用2h。以此混合物感染对数生长期的TF细胞，22℃吸附2h后，去除混合物，加入新鲜细胞培养液继续培养，每日观察细胞病变程度。每1组分重复4孔，同时设置不添加任何提取物组分或病毒液的正常细胞对照和仅添加淋巴囊肿病毒吸附2h的细胞对照。

试验结果:

通过用本发明药物预处理淋巴囊肿病毒，然后再感染TF细胞的方法来检测对淋巴囊肿病毒的直接灭活作用。结果见表1.

表1TF细胞经本发明药物处理的淋巴囊肿病毒感染后的细胞病变程度

注：细胞病变程度：-，0％；±，1～9％；+，10～19％；++，20～39％；+++，40～60％；++++，＞60％。

结果显示，淋巴囊肿病毒感染细胞在72h后，TF细胞出现了皱缩、脱落和死亡等细胞病变现象；而用本发明药物与淋巴囊肿病毒的混合物分别感染的TF细胞，其细胞病变程度较低。此外，随着培养时间的延长，淋巴囊肿病毒感染细胞，其细胞病变程度逐渐加剧，而用本发明药物与淋巴囊肿病毒的混合物分别感染的TF细胞，其细胞病变程度没有出现显著加剧的现象。可见，本发明药物对淋巴囊肿病毒具有较强的抑制作用。

实施例5

浙江省台州市某鱼类养殖场有大菱虾鱼苗4.2万尾。从2014年开始进行本发明构建的中药组合物的效果检测。在预防效果检测时，在幼苗时期给予实施例2中的药物预防，采用药浴的方式浸泡给药(l-100ml)作为实验组；同时，在同一批幼苗，同样的养殖条件下用目前已有的免疫制剂作为阳性对照组，共进行了5组平行试验；在养殖4-6个月后检测，实验组和阳性对照组的抗病力上没有统计学意义上的差别。但由于本发明的中药制剂在配制过程中考虑到应激反应对幼苗生长上的影响，兼顾了免疫力与生长率；因此，实验组的生长速率明显高于阳性对照组。

而在发病鱼的治疗上，用淋巴囊肿病毒进行感染实验，实验组约有30％的牙鲆出现囊肿症状(如：病鱼的头、皮肤、鳍、尾部及鳃上有单个或成群的珠状肿物，大多数分布在血管附近，小如念珠，大如菜花；颜色有乳白色、粉红色和淡灰色，成熟的肿物可轻微出血)。将病鱼给予实施例2中的药物治疗，采用药浴的方式浸泡给药(19-10Oml稀释)。结果，最终仅有约1.5～2.5％的牙鲆病鱼感染淋巴囊肿病毒死亡，未给养殖户造成大的损失。

经多个实施例表明本发明制备的中药组合物能够有效预防和治疗牙鲆的淋巴囊肿病，而不是因为个体或治疗方法上的差异造成的个案。本发明中药组合物具有很好的应用推广价值。

对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。

Claims (3)

1.一种治疗牙鲆淋巴囊肿病的中药组合物，其特征在于，由以下重量份的原料制备而成：川芎40～60份，马钱子20～24份，千年健50～60份，藏红花30～40份，沙参20～30份，杜仲50～60份，防风15～25份，牛膝6～8份，赤芍12～18份，厚朴18～24份，胆南星6～8份。

2.根据权利要求1所述的治疗牙鲆淋巴囊肿病的中药组合物，其特征在于，具体由以下重量份的原料制备而成：川芎50份，马钱子22份，千年健55份，藏红花35份，沙参25份，杜仲55份，防风20份，牛膝7份，赤芍15份，厚朴21份，胆南星7份。

3.一种如权利要求1或2所述的治疗牙鲆淋巴囊肿病的中药组合物的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

(1)取上述各原料，清洗干净后，自然晾干，粉碎，过30～40目筛；

(2)按配比将各原料混合，加入原料药总重量10～12倍的水，加热煮沸2～3h，过滤；再次加入原料药总重量8～10倍的水，加热煮沸1.5～2.5h，再次过滤；

(3)合并两次过滤液，用浓度90～95％乙醇为溶剂，在70～80℃温浸提取，提取次数为3～5次，每次提取时间为2～3h，每次溶剂用量为原料总重量的10～12倍，滤过，收集提取液；

(4)将提取液减压浓缩至相对密度为1.20～1.30，压力控制在0.3～0.5个大气压，过滤，灌装，即得。