CN105567662B - 一种嗜热β-葡萄糖苷酶突变体-M36N及其编码基因和应用 - Google Patents
一种嗜热β-葡萄糖苷酶突变体-M36N及其编码基因和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105567662B CN105567662B CN201610060528.7A CN201610060528A CN105567662B CN 105567662 B CN105567662 B CN 105567662B CN 201610060528 A CN201610060528 A CN 201610060528A CN 105567662 B CN105567662 B CN 105567662B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- glucosidase
- catalytic efficiency
- high catalytic
- mutants
- glucosidase mutants
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2434—Glucanases acting on beta-1,4-glucosidic bonds
- C12N9/2445—Beta-glucosidase (3.2.1.21)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01021—Beta-glucosidase (3.2.1.21)
Abstract
本发明涉及基因工程和遗传工程领域,具体地,本发明涉及一种嗜热β‑葡萄糖苷酶突变体M36N及其编码基因和应用。本发明提供的突变体是通过改变酶蛋白的催化口袋loop特殊氨基酸残基的极性构建自嗜热真菌篮状菌Talaromyces leycettanus JCM12802的高温酸性β‑葡萄糖苷酶BGL3A。在此改造条件下,突变体的对纤维二糖的亲和力比野生型(突变前)提高2.2倍,催化效率提高2.3倍,且最适反应pH值和温度不变。
Description
技术领域
本发明涉及基因工程和遗传工程领域,具体地,本发明涉及一种嗜热β-葡萄糖苷酶突变体M36N及其编码基因和应用。
背景技术
当今,以木质纤维素为原料、用纤维素酶水解纤维素生成葡萄糖,进而发酵为燃料乙醇成为应对当今世界能源危机、环境污染等问题的重要出路。纤维素的降解是三类酶协同作用的结果,包括:内切纤维素酶(endo-1,4-β-D-glucanase,EC 3.2.1.4,简称EG),这类酶首先作用于纤维素分子内部的非结晶区,随机水解β-1,4-糖苷键,将长链纤维素分子切割产生大量带非还原性末端的小分子纤维素;外切纤维素酶(exo-1,4-β-D-glucanase或cellobiohydrolase,EC3.2.1.91,简称CBH),这类酶作用于纤维素线状分子末端,水解β-1,4糖苷键,每次降解产生一个纤维二糖分子;β-葡糖苷酶(β-D-glucosidase,EC 3.2.1.21,简称BG),这类酶作用于纤维二糖或纤维寡糖的非还原端,产生葡萄糖分子。其中BG通常不直接作用于纤维素,但是它可以降解对纤维素降解起抑制作用的纤维二糖,所以它是快速降解纤维素过程中所必须的酶类。因此对β-葡萄糖苷酶的深入研究受到人们越来越多的关注,特别是β-葡萄糖苷酶的分子改良研究。
本发明针对酶分子具体结构进行分析和改良,以达到提高催化效率的目的。本发明所提供的高温酸性β-葡萄糖苷酶突变体对于纤维二糖底物的催化效率得到了极大地提高。
发明内容
本发明的目的是提供了一种高催化效率β-葡萄糖苷酶突变体M36N。
本发明的再一目的是提供编码上述高催化效率β-葡萄糖苷酶突变体M36N的基因。
本发明的再一目的是提供包含上述突变体基因的重组载体。
本发明的另一目的是提供包含上述基因的重组菌株。
本发明以来源于嗜热真菌篮状菌Talaromyces leycettanus JCM12802的酸性β-葡萄糖苷酶为母本,采用分子生物学技术对酸性β-葡萄糖苷酶序列进行区域替换后表达。
根据本发明的高催化效率β-葡萄糖苷酶突变体,是β-葡萄糖苷酶的催化活性通道loop区域替换后得到的突变体,即β-葡萄糖苷酶的36位氨基酸由甲硫氨酸“M”突变为天冬酰胺“N”
所述高催化效率β-葡萄糖苷酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
YGFGGSGWDAAYGRAKAALNKLNQTEKVGIVTGVKWNGGPCVGNTYKPSSIDYPSLCLQDSPLGVRFANPVTAFPAGINAGATWDRSLINARGAAMGAEAKGLGVNVQLGPVAGPLGKNPNSGRIWEGFSNDPYLSGVAMEETIAGMQGSGVQACAKHYIGNEQEHNRETISSNIDDRTLHELYVWPFMNAVKANVASVMCSYNEVNGSWSCENDALLNGLLKTELGFPGYIMSDWNAQHTTVNSANSGLDMTMPGSDFNNPPGSIYWGPNLEAAVANGSVPQSRLDDMVTRILASWYLVGQDEGYPPVAFSSWNGGKANVDVTGDHKSVVRAVARDSIVLLKNDNNALPLRKPKSLAIIGQDATVNPAGPNACSDRGCDTGTLAMGWGSGTAQFPYIVGPLDAIQSQAAADGTNITTSTTDDTTAAASAAASAGTAIVFINSDSGEGYITVEGNAGDRNNLDPWHNGNELVQAVAAVNKNVIVVVHSVGPVILEAILAQPNVKAIVWPGLPGQESGNALVDVLYGSTSPSGKLPYTIAKQFSDYGTTWTTSLVDDFTEGLFIDYRHFDENNITPRYEFGYGLSYTTFKYSDLDVNVQARPGAAEGPIVPGGVKELFDTVGTVTVTVQNSGKVAGAEVAQLYIGLPDSAPSTPPKQLRGFQKLHLAPGQREGATFELTRRDISYWDVQQQKWVVPSGTFKVYVGSSSRDIREQGSFRI
所述高催化效率β-葡萄糖苷酶突变体的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
TATGGCTTCGGCGGCTCTGGCTGGGACGCCGCTTATGGCAGAGCAAAGGCTGCGCTGAACAAGCTCAACCAGACCGAGAAGGTTGGTATCGTCACCGGTGTCAAGTGGAACGGCGGCCCTTGTGTTGGCAACACCTACAAGCCCAGTTCGATTGACTACCCTTCTCTGTGTTTGCAAGACTCTCCTCTCGGGGTGCGTTTTGCCAACCCTGTGACTGCCTTCCCGGCTGGTATCAACGCCGGCGCCACATGGGATAGATCTCTCATCAACGCCCGTGGTGCGGCCATGGGCGCTGAGGCCAAGGGCCTCGGTGTGAACGTCCAGCTTGGCCCCGTCGCTGGTCCTCTCGGCAAGAATCCCAATAGTGGCAGAATCTGGGAAGGGTTCTCGAATGATCCCTATCTCAGCGGTGTTGCGATGGAGGAAACCATCGCCGGAATGCAAGGATCTGGTGTGCAGGCCTGCGCCAAGCACTATATTGGTAACGAGCAAGAGCACAACCGTGAAACCATCAGCTCCAACATCGATGACCGCACTCTGCACGAGCTCTACGTCTGGCCGTTCATGAACGCCGTCAAGGCCAACGTCGCCTCCGTCATGTGCTCGTACAACGAGGTCAATGGTTCCTGGTCCTGTGAGAATGATGCTCTTCTCAACGGTCTGTTGAAGACTGAGCTCGGATTCCCCGGATACATCATGAGCGATTGGAACGCGCAGCACACCACGGTCAACAGCGCCAACTCGGGTCTCGATATGACCATGCCTGGCAGTGACTTCAACAACCCTCCTGGCAGCATCTACTGGGGGCCCAACCTCGAAGCCGCCGTCGCCAATGGCTCCGTTCCGCAGTCCCGTTTGGACGACATGGTCACTCGTATCCTTGCGTCTTGGTACTTGGTTGGCCAGGATGAGGGCTACCCACCGGTCGCCTTCAGCTCCTGGAATGGCGGCAAGGCCAATGTTGACGTGACGGGCGATCACAAGAGCGTCGTCAGAGCTGTGGCTCGTGACTCTATCGTTCTTCTGAAGAACGACAATAACGCTTTGCCTCTGCGCAAGCCCAAGAGCCTCGCGATCATCGGCCAGGATGCAACTGTCAACCCTGCCGGGCCCAACGCTTGCTCTGATCGCGGCTGCGACACCGGTACTCTCGCCATGGGTTGGGGCAGTGGTACCGCTCAGTTCCCATACATCGTCGGCCCTCTCGATGCTATCCAGTCTCAGGCTGCCGCTGATGGCACTAACATCACCACCAGCACGACCGATGATACCACCGCGGCAGCTTCTGCAGCCGCCTCCGCCGGAACCGCCATCGTCTTCATCAACTCCGACTCTGGTGAAGGTTACATCACCGTCGAGGGCAACGCTGGTGACCGCAACAACCTCGACCCCTGGCACAACGGCAACGAGCTCGTCCAGGCCGTTGCGGCTGTGAACAAGAATGTCATTGTCGTTGTCCACAGCGTCGGTCCCGTGATCTTGGAGGCTATCCTTGCACAGCCCAACGTCAAGGCCATTGTGTGGCCCGGTCTCCCTGGACAAGAGAGCGGCAATGCCCTGGTCGATGTTCTGTACGGCTCCACCTCCCCCAGCGGCAAGTTGCCCTATACCATTGCCAAGCAGTTCAGCGACTATGGCACCACCTGGACGACCTCCCTGGTCGATGACTTCACCGAGGGTCTGTTCATTGACTACCGCCACTTTGACGAGAACAACATTACTCCCAGATACGAGTTCGGATACGGCTTGTCTTACACCACCTTCAAATACTCCGACCTGGACGTCAACGTCCAGGCCCGCCCCGGCGCAGCCGAAGGCCCCATCGTCCCCGGCGGCGTCAAGGAACTTTTCGACACCGTCGGCACCGTCACCGTCACCGTCCAGAACAGCGGCAAGGTTGCCGGCGCGGAAGTTGCCCAGCTGTACATCGGCCTTCCCGACTCTGCCCCGTCGACCCCTCCCAAGCAGCTCAGAGGATTCCAGAAGTTGCACCTCGCGCCCGGCCAGAGAGAGGGCGCCACTTTCGAACTCACCCGCCGAGACATCAGCTACTGGGACGTTCAGCAGCAGAAGTGGGTTGTTCCTAGCGGTACGTTCAAGGTCTATGTTGGAAGCTCGAGCAGGGACATTAGGGAGCAGGAATCTTTCCGTATTTGA
本发明还是提供一种制备高催化效率β-葡萄糖苷酶的方法:
1)采用over-lap PCR的方法扩增高催化效率β-葡萄糖苷酶突变体基因序列;
2)将催化效率β-葡萄糖苷酶突变体序列片段克隆到表达载体pPIC 9r上,重组载体命名pPIC9r-A-M36N;
3)将突变体重组载体转化毕赤酵母GS115,诱导表达,获得突变株,优选为GS115/A-M36N。
本发明还提供了包含上述β-葡萄糖苷酶突变体基因的重组载体,优选为pPIC9r-A-M36N。将本发明的β-葡萄糖苷酶突变体基因插入到表达载体合适的限制性酶切位点之间,使其核苷酸序列可操作的与表达调控序列相连接。作为本发明的一个最优选的实施方案,优选为将β-葡萄糖苷酶基因插入到质粒pPIC9r上的EcoR I和Not I限制性酶切位点之间,得到重组表达质粒pPIC9r-A-M36N。
本发明还提供了包含上述β-葡萄糖苷酶基因的重组菌株,优选为重组菌株GS115/A-M36N。
本发明还提供了上述高催化效率β-葡萄糖苷酶突变体的应用,例如在果蔬汁工业中的应用。
本发明首先所要解决的技术问题是克服现有技术的不足,提供一种性质优良的、适合于在食品工业中应用新的β-葡萄糖苷酶。本发明的重组高催化效率β-葡萄糖苷酶突变体最适pH为4.5,最适温度为75℃,与野生型的一致,但是亲和力比野生型提高2.2倍,催化效率提高2.3倍。
附图说明
图1:高催化效率β-葡萄糖苷酶突变体与野生型的最适pH。
图2:高催化效率β-葡萄糖苷酶突变体与野生型的最适温度。
具体实施方式
试验材料和试剂
1、菌株及载体:表达宿主Pichiapastoris GS115,表达质粒载体pPIC9r为本实验室保存。
2、酶类及其它生化试剂:内切酶购自Fermentas公司,连接酶购自Promaga公司,纤维二糖购自Sigma公司。其它都为国产分析纯试剂(均可从普通生化试剂公司购买得到)。
3、培养基:
(1)LB培养基:0.5%酵母提取物,1%蛋白胨,1%NaCl,pH 7.0
(2)YPD培养基:1%酵母提取物,2%蛋白胨,2%葡萄糖
(3)MD固体培养基:2%葡萄糖,1.5%琼脂糖,1.34%YNB,0.00004%Biotin
(4)MM固体培养基:1.5%琼脂糖,1.34%YNB,0.00004%Biotin,0.5%甲醇
(5)BMGY培养基:1%酵母提取物,2%蛋白胨,1%甘油(V/V),1.34%YNB,0.00004%Biotin
(6)BMMY培养基:1%酵母提取物,2%蛋白胨,1.34%YNB,0.00004%Biotin,0.5%甲醇(V/V)
实施例1高催化效率β-葡萄糖苷酶突变体编码基因A-M36N的克隆
本发明以来源于嗜热真菌篮状菌Talaromyces leycettanus JCM12802的酸性β-葡萄糖苷酶(其氨基酸序列如SEQ ID NO.3)为母本,采用分子生物学技术对酸性β-葡萄糖苷酶序列进行区域替换后表达。
SEQ ID NO.3如下所示:
YGFGGSGWDAAYGRAKAALNKLNQTEKVGIVTGVKWMGGPCVGNTYKPSSIDYPSLCLQDSPLGVRFANPVTAFPAGINAGATWDRSLINARGAAMGAEAKGLGVNVQLGPVAGPLGKNPNSGRIWEGFSNDPYLSGVAMEETIAGMQGSGVQACAKHYIGNEQEHNRETISSNIDDRTLHELYVWPFMNAVKANVASVMCSYNEVNGSWSCENDALLNGLLKTELGFPGYIMSDWNAQHTTVNSANSGLDMTMPGSDFNNPPGSIYWGPNLEAAVANGSVPQSRLDDMVTRILASWYLVGQDEGYPPVAFSSWNGGKANVDVTGDHKSVVRAVARDSIVLLKNDNNALPLRKPKSLAIIGQDATVNPAGPNACSDRGCDTGTLAMGWGSGTAQFPYIVGPLDAIQSQAAADGTNITTSTTDDTTAAASAAASAGTAIVFINSDSGEGYITVEGNAGDRNNLDPWHNGNELVQAVAAVNKNVIVVVHSVGPVILEAILAQPNVKAIVWPGLPGQESGNALVDVLYGSTSPSGKLPYTIAKQFSDYGTTWTTSLVDDFTEGLFIDYRHFDENNITPRYEFGYGLSYTTFKYSDLDVNVQARPGAAEGPIVPGGVKELFDTVGTVTVTVQNSGKVAGAEVAQLYIGLPDSAPSTPPKQLRGFQKLHLAPGQREGATFELTRRDISYWDVQQQKWVVPSGTFKVYVGSSSRDIREQGSFRI
以Talaromyces leycettanus JCM12802基因组DNA为模板,在β-葡萄糖苷酶的催化活性通道loop区域处设计区域替换引物,采用over-lap PCR的方法扩增高催化效率β-葡萄糖苷酶突变体编码基因A-M36N。
表1.高催化效率β-葡萄糖苷酶突变体PG63X特异性引物
实施例2高催化效率β-葡萄糖苷酶突变体的制备。
将表达载体pPIC9r进行双酶切(EcoR I+Not I),同时将编码高催化效率β-葡萄糖苷酶突变体的基因A-M36N双酶切(EcoR I+Not I),切好的编码成熟高催化效率β-葡萄糖苷酶突变体的基因片段与表达载体pPIC9r连接,获得含有高催化效率β-葡萄糖苷酶突变体基因A-M36N的重组质粒pPIC9r-A-M36N并转化毕赤酵母GS115,获得重组酵母菌株GS115/A-M36N。
取含有重组质粒的GS115菌株,接种于300mL BMGY培养基的1L三角瓶中,置于30℃,220rpm摇床培养48h;后将培养液3000g离心5min,弃上清,沉淀用100mL含有0.5%甲醇的BMMY培养基重悬,并再次置于30℃,220rpm条件下诱导培养。每隔12h补加0.5mL甲醇,使菌液中的甲醇浓度保持在0.5%,同时取上清用于酶活性检测。
重组高催化效率β-葡萄糖苷酶突变体最适pH为4.5,最适温度为75℃,与野生型的一致,但是亲和力比野生型提高2.2倍,催化效率提高2.3倍。
实施例3重组高催化效率β-葡萄糖苷酶突变体和野生型的活性分析
β-葡萄糖苷酶活性的测定:在405nm下测定酶水解底物pNPG所生成的产物对硝基苯酚(pNP)的量。
反应步骤:125μl 2mM pNPG底物与125μl缓冲液混匀,加入250μl适当稀释的酶液,于75℃反应10min,加入1.5mL 1M的Na2CO3终止反应,使用分光光度计测定OD405值。
酶活单位的定义:1个β-葡萄糖苷酶活性单位(U)定义为在给定反应条件下,每分钟分解底物pNPG生成1μmol对硝基苯酚(pNP)所需的酶量。
实施例4重组β-葡萄糖苷酶高催化效率突变体的性质测定
1、重组高催化效率β-葡萄糖苷酶突变体和野生型的最适pH测定方法如下:
将实施例2纯化的重组高催化效率β-葡萄糖苷酶突变体和野生型在不同的pH下进行酶促反应以测定其最适pH。底物多聚半乳糖醛酸用不同pH的0.1mol/L柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液中75℃下进行β-葡萄糖苷酶活力测定。结果(图1)表明,重组高催化效率β-葡萄糖苷酶突变体和野生型的最适反应pH一致,且在pH3.0-6.0范围内有相同的作用趋势。符合不改变最适pH值提高催化效率的目的。
2、重组高催化效率β-葡萄糖苷酶突变体和野生型的最适温度测定方法如下:
重组高催化效率β-葡萄糖苷酶突变体和野生型的最适温度的测定为在0.1mol/L柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液(pH 4.5)缓冲液体系及不同温度下进行酶促反应。酶反应最适温度测定结果(图2)表明,重组高催化效率β-葡萄糖苷酶突变体的最适温度与野生型保持一致(75℃)。
3、重组高催化效率β-葡萄糖苷酶突变体和野生型的动力学参数测定方法如下:
测定反应的一级反应时间。确定测定Km及Vmax的反应时间为5min。用不同浓度的纤维二糖为底物,在柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液(pH4.5)缓冲液体系中,75℃下测定酶活性,计算出其在75℃下的Km值。突变体及野生酶动力学参数如表2所示:
表2.突变体及野生型对纤维二糖酶催化反应动力学参数
结果显示,重组高催化效率β-葡萄糖苷酶突变体最适pH为4.5,与野生型的一致,但是亲和力比野生型提高2.2倍,催化效率提高2.3倍。
Claims (9)
1.一种高催化效率β-葡萄糖苷酶突变体,其特征在于,所述β-葡萄糖苷酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.高催化效率β-葡萄糖苷酶突变体基因,其特征在于,编码权利要求1所述高催化效率β-葡萄糖苷酶突变体。
3.根据权利要求2所述的高催化效率β-葡萄糖苷酶突变体基因,其特征在于,其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
4.包含权利要求2所述高催化效率β-葡萄糖苷酶突变体基因的重组载体。
5.包含权利要求2所述高催化效率β-葡萄糖苷酶突变体基因的重组载体pPIC9r-A-M36N,将所述高催化效率β-葡萄糖苷酶突变体基因插入到质粒pPIC9r上的EcoR I和Not I限制性酶切位点之间,得到重组载体pPIC9r-A-M36N。
6.包含权利要求2所述高催化效率β-葡萄糖苷酶突变体基因的重组菌株。
7.根据权利要求6所述的重组菌株,其特征在于,所述重组菌株为重组毕赤酵母GS115。
8.一种制备高催化效率β-葡萄糖苷酶的方法,包括以下步骤:
1)用权利要求4所述重组载体转化宿主细胞,得重组菌株;
2)培养重组菌株,诱导重组β-葡萄糖苷酶的表达;
3)回收并纯化所表达的高催化效率β-葡萄糖苷酶。
9.权利要求1所述高催化效率β-葡萄糖苷酶突变体用于降解纤维二糖的应用。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201610060528.7A CN105567662B (zh) | 2016-01-28 | 2016-01-28 | 一种嗜热β-葡萄糖苷酶突变体-M36N及其编码基因和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201610060528.7A CN105567662B (zh) | 2016-01-28 | 2016-01-28 | 一种嗜热β-葡萄糖苷酶突变体-M36N及其编码基因和应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN105567662A CN105567662A (zh) | 2016-05-11 |
CN105567662B true CN105567662B (zh) | 2018-09-07 |
Family
ID=55878292
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201610060528.7A Active CN105567662B (zh) | 2016-01-28 | 2016-01-28 | 一种嗜热β-葡萄糖苷酶突变体-M36N及其编码基因和应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN105567662B (zh) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107988190B (zh) * | 2018-01-08 | 2020-01-21 | 中国农业科学院饲料研究所 | 一种酸性蛋白酶及其编码基因和应用 |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2004099228A2 (en) * | 2003-05-02 | 2004-11-18 | Novozymes Inc. | Variants of beta-glucosidases |
CN102358898A (zh) * | 2011-10-28 | 2012-02-22 | 武汉新华扬生物股份有限公司 | 一种中温β-葡萄糖苷酶BglA1及其基因和应用 |
CN104357429A (zh) * | 2014-12-01 | 2015-02-18 | 中国农业科学院饲料研究所 | 一种高温中性β-葡萄糖苷酶HiBgl3A及其基因和应用 |
CN104450651A (zh) * | 2014-12-09 | 2015-03-25 | 青岛蔚蓝生物集团有限公司 | 一种β-葡萄糖苷酶突变体及其应用 |
CN104498456A (zh) * | 2014-12-01 | 2015-04-08 | 中国农业科学院饲料研究所 | 一种酸性β-葡萄糖苷酶Bgl3B及其基因和应用 |
CN104531743A (zh) * | 2014-12-22 | 2015-04-22 | 江苏大学 | 一种C型β-葡萄糖苷酶突变体及其表达质粒和重组菌 |
-
2016
- 2016-01-28 CN CN201610060528.7A patent/CN105567662B/zh active Active
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2004099228A2 (en) * | 2003-05-02 | 2004-11-18 | Novozymes Inc. | Variants of beta-glucosidases |
CN102358898A (zh) * | 2011-10-28 | 2012-02-22 | 武汉新华扬生物股份有限公司 | 一种中温β-葡萄糖苷酶BglA1及其基因和应用 |
CN104357429A (zh) * | 2014-12-01 | 2015-02-18 | 中国农业科学院饲料研究所 | 一种高温中性β-葡萄糖苷酶HiBgl3A及其基因和应用 |
CN104498456A (zh) * | 2014-12-01 | 2015-04-08 | 中国农业科学院饲料研究所 | 一种酸性β-葡萄糖苷酶Bgl3B及其基因和应用 |
CN104450651A (zh) * | 2014-12-09 | 2015-03-25 | 青岛蔚蓝生物集团有限公司 | 一种β-葡萄糖苷酶突变体及其应用 |
CN104531743A (zh) * | 2014-12-22 | 2015-04-22 | 江苏大学 | 一种C型β-葡萄糖苷酶突变体及其表达质粒和重组菌 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN105567662A (zh) | 2016-05-11 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Hong et al. | Cloning of a gene encoding thermostable cellobiohydrolase from Thermoascus aurantiacus and its expression in yeast | |
de Castro et al. | Trichoderma harzianum IOC-4038: a promising strain for the production of a cellulolytic complex with significant β-glucosidase activity from sugarcane bagasse cellulignin | |
Chang et al. | Characterization of a bifunctional xylanase/endoglucanase from yak rumen microorganisms | |
Amore et al. | Cloning and recombinant expression of a cellulase from the cellulolytic strain Streptomyces sp. G12 isolated from compost | |
Larue et al. | Directed evolution of a fungal β-glucosidase in Saccharomyces cerevisiae | |
Joo et al. | Purification and characterization of a β-1, 4-glucosidase from a newly isolated strain of Fomitopsis pinicola | |
CN112708608B (zh) | 木聚糖酶突变体及其制备方法与应用 | |
Jagtap et al. | Characterization of a novel endo-β-1, 4-glucanase from Armillaria gemina and its application in biomass hydrolysis | |
Jagtap et al. | Characterization of a β-1, 4-glucosidase from a newly isolated strain of Pholiota adiposa and its application to the hydrolysis of biomass | |
Colabardini et al. | Expression of two novel β-glucosidases from Chaetomium atrobrunneum in Trichoderma reesei and characterization of the heterologous protein products | |
Todaka et al. | Heterologous expression and characterization of an endoglucanase from a symbiotic protist of the lower termite, Reticulitermes speratus | |
Qin et al. | One-step purification of two novel thermotolerant β-1, 4-glucosidases from a newly isolated strain of Fusarium chlamydosporum HML278 and their characterization | |
CN105567662B (zh) | 一种嗜热β-葡萄糖苷酶突变体-M36N及其编码基因和应用 | |
Lin et al. | Advances in the study of directed evolution for cellulases | |
CN105524902B (zh) | 一种高催化效率β-葡萄糖苷酶突变体M36E及其编码基因和应用 | |
CN109929855B (zh) | 多糖裂解单加氧酶lpmo 9d编码基因及酶与制备和应用 | |
Mao et al. | Engineering of a thermostable β‐1, 3‐1, 4‐glucanase from Bacillus altitudinis YC‐9 to improve its catalytic efficiency | |
CN105567663B (zh) | 一种催化效率提高的β-葡萄糖苷酶突变体F67Y及其编码基因和应用 | |
CN105524903B (zh) | 一种β-葡萄糖苷酶改良突变体E168Q及其编码基因和应用 | |
Han et al. | Optimizing cellulase production of Penicillium waksmanii F10-2 with response surface methodology | |
Haq et al. | Enhanced production of a recombinant multidomain thermostable GH9 processive endo-1, 4-β-glucanase (CenC) from Ruminiclostridium thermocellum in a mesophilic host through various cultivation and induction strategies | |
Lee et al. | Characterization of cellobiohydrolase from a newly isolated strain of Agaricus arvencis | |
CN105176949B (zh) | 一种纤维二糖水解酶突变体 | |
Shin et al. | Purification and characterization of a thermostable cellobiohydrolase from Fomitopsis pinicola | |
CN102358898B (zh) | 一种中温β-葡萄糖苷酶BglA1及其基因和应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant | ||
TR01 | Transfer of patent right | ||
TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20200821 Address after: 100193 Beijing Old Summer Palace West Road, Haidian District, No. 2 Patentee after: Beijing Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Chinese Academy of Agricultural Sciences Address before: 100081 Beijing, Zhongguancun, South Street, No. 12, No. Patentee before: FEED Research Institute CHINESE ACADEMY OF AGRICULTURAL SCIENCES |