CN105530941A

CN105530941A - 抗糖尿病组合物

Info

Publication number: CN105530941A
Application number: CN201480051853.6A
Authority: CN
Inventors: G.巴纳吉; N.巴拉拉姆辛格
Original assignee: Unilever NV
Current assignee: Unilever NV
Priority date: 2013-09-20
Filing date: 2014-08-05
Publication date: 2016-04-27
Also published as: WO2015039798A1; EP3046562A1; US20160193269A1

Abstract

本发明提供包含总状土木香提取物和西他列汀的抗糖尿病组合物，和用于制备所述组合物的方法。所述组合物降低血糖水平并同时缓解由药物造成的负面化感作用。

Description

抗糖尿病组合物

发明领域

本发明涉及抗糖尿病组合物。更具体地，本发明涉及包含总状土木香（Inula racemosa）提取物和西他列汀（sitagliptin）的抗糖尿病组合物及用于制备该组合物的方法。

发明背景

贯穿本说明书的任何对现有技术的讨论绝不应该被认为是承认这样的现有技术是公知的或形成本领域内的部分公知常识。

糖尿病是当今社会的一个主要并且普遍发生的健康问题。当糖尿病从父母遗传而来时，它称为1-型糖尿病，而当由于不健康的生活方式和代谢紊乱而后天获得时，它称为2-型糖尿病。2-型糖尿病是其中由于身体不正常产生或使用胰岛素导致的血糖太高的情况。无论是1-型还是2-型，长期看来在缺乏任何早期行动以控制糖尿病的情况下，可以证明它是危害生命的疾病。

糖尿病提高二肽基肽酶-4（DPPIV）活性水平，由此减少循环中功能性胰高血糖素样肽-1（GLP-1）和葡萄糖依赖性促胰岛素多肽（GIP）激素的量。GLP-1的一个主要作用是保持血液葡萄糖水平。由于提高的DPPIV活性引起的降低的GLP-1水平引发不平衡并由此提高血糖水平。DPPIV活性降低GLP-1的水平并提高血糖水平（Holst等，1998；Inhibition of the activity of dipeptidyl-peptidase IV as a treatment for type 2 diabetes；Diabetes，第47卷，1663-1670和 Karagiannis等，2012；Dipeptidyl peptidase-4 inhibitors for treatment of type 2 diabetes mellitus in the clinical setting: systematic review and meta-analysis. British Medical Journal 344）。

制药公司在该领域非常积极开发用于控制糖尿病的新药品。市场上存在一些用于治疗糖尿病的可得的药品。制药公司已经提出许多DPPIV活性抑制剂，即列汀类（gliptins）（西他列汀、维达列汀等）作为潜在解决方案。然而，关于糖尿病的一个问题是人们通常不认为糖尿病是严重的疾病，因为该疾病不存在直接视觉影响。因此，大多数人们不关心采用任何行动以控制它。服用涉及具有负面化感作用的化感物质（alelochemical）的药物也是人们的主要担忧，并且由于糖尿病本身不被认为是严重的疾病，保持身体糖水平处于控制之下的药物经常被忽视。

如果未治疗，高的血液葡萄糖水平可以导致严重的并发症，包括肾脏损伤（肾病）、眼损伤（视网膜病）、对脚和身体其它部位的神经损伤（神经病）、心脏疾病（例如心绞痛或心脏病发作）、中风和腿的循环问题、性行为困难，包括勃起功能障碍，由循环问题和神经损伤造成的脚溃疡或感染等。患有不受控制的糖尿病使人处在发展出许多医疗病症（medical conditions）的增加的风险之中，如果不对其进行治疗可导致死亡。

WO 2012094636 (Elcelyx Therapeutics)公开了用于治疗与化学感应受体有关的病症，包括糖尿病、肥胖和其它代谢疾病、失调或病症的方法，其通过给药包含化学感应受体配体，例如苦味受体配体的组合物进行。该申请还公开了化学感应受体配体组合物，包括苦味受体配体组合物，和用于制备其的方法和包含二甲双胍及其盐的组合物和使用方法。

论文“Evaluation of anti-diabetic effect of methanolic extract of Inula racemosa root in rats”(Pharmacologyonline 3: 118-129 (2009)，2009年3月8日)评估了总状土木香根的甲醇提取物在大鼠中的抗糖尿病效果。基于该论文的发现，得出的结论是可以假定总状土木香根的甲醇提取物在大鼠中的阿脲引发的高血糖症模型中具有显著的降血糖和抗氧化特性。

通常，已知口服抗糖尿病药剂具有副作用并且它们中的一些是DPPIV活性抑制剂，例如西他列汀。因此，越来越需要提供解决降低身体血糖水平并同时缓解由药物造成的负面化感作用的问题的解决方案。这已经通过降低药物的剂量并将其与特定的天然植物提取物组合，同时提供相似的抗糖尿病效果而变得可能。

因此，本发明的一个目的是提供有效的抗糖尿病组合物，由此显著降低药物西他列汀的有效剂量。

本发明的另一目的是提供用于制备包含较低剂量水平的西他列汀的抗糖尿病组合物的方法。

发明概述

本发明涉及用于抗糖尿病益处的组合物和用于生产所述组合物的方法。

根据本发明的一个方面，提供包含0.5 wt%至2 wt%的总状土木香提取物和0.000005 wt%至0.005 wt%的西他列汀的抗糖尿病组合物。

根据本发明的另一方面，提供生产抗糖尿病组合物的方法，其包括共混总状土木香提取物和西他列汀的步骤。

本发明一个方面的任何特征可以用于本发明的任何其它方面。词语“包含”意在表示“包括”，但不必然是“由…组成”或“由…构成”。换言之，列出的步骤或选项不需要是穷举的。除在操作例和比较例中，或另外明确说明之处外，本说明书中表示材料的量或反应条件、材料的物理特性和/或使用的所有数字应该理解为由词语“约”修饰。以“由x至y”格式表示的数值范围理解为包括x和y。当对于特定特征，以“由x至y”格式描述多个优选范围时，理解为也考虑组合不同端点的所有范围。

除在操作例和比较例中，或另外明确说明之处外，本说明书中表示材料的量的所有数字应该理解为由词语“约”修饰。

应该注意的是在指定浓度或量的任何范围时，任何具体上限浓度可以与任何具体下限浓度或量相关联。

为了更彻底理解本发明的以上和其它特征和优点，应该参考以下优选实施方案的详细说明。

发明详述

可以通过参考以下对本发明的详细说明和其中包括的实施例更容易地理解本发明。

在公开和描述本发明的化合物、组合物、制品、体系、装置和/或方法之前，将理解的是它们不限于特定合成方法（除非另有说明），或不限于具体试剂（除非另有说明），其本身当然可以改变。还将理解的是本文使用的术语仅是出于描述具体方面的目的，并且不意图是限制性的。尽管与本文描述的方法和材料相似或等同的任何方法和材料可以用于本发明的实践或测试中，但现在描述的是实例方法和材料。

除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解相同的含义。尽管与本文描述的方法和材料相似或等同的任何方法和材料可以用于本发明的实践或测试中，但现在描述的是实例方法和材料。

如说明书和所附权利要求书中所用的，除非上下文另外清楚指明，单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数指示对象。因此，例如提及“一种金属”包括两种或更多种金属的混合物。

本发明涉及抗糖尿病组合物和用于生产所述组合物的方法。根据本发明，0.5 wt%至2 wt%的总状土木香提取物和0.000005 wt%至0.005 wt%的西他列汀形成抗糖尿病组合物的必要部分。根据本发明的另一方面，提供生产所述组合物的方法，其包括共混总状土木香提取物和西他列汀的步骤。

西他列汀

本文的“西他列汀”涉及如下文所陈述的分子结构，并且化学上称为(R)-4-氧代-4-[3-(三氟甲基)-5,6-二氢[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-7(8H)-基]-1-(2,4,5-三氟苯基)丁-2-胺（化学式：C₁₆H₁₅F₆N₅O, Mw = 407.314 g/mol），包括其可食用盐。

西他列汀与节食和锻炼，并且有时与其它药物一起使用以降低患有糖尿病的患者的血糖水平。西他列汀通过抑制降低胰高血糖素样肽-1（GLP-1）和葡萄糖依赖性促胰岛素多肽（GIP）激素的DPPIV酶活性，使GLP-1和GIP二者能够更有效地起作用来奏效。西他列汀是一类称为二肽基肽酶-4（DPPIV）活性抑制剂的药物。DPPIV抑制剂的机理是提高肠促胰岛素（GLP-1和GIP）水平，抑制肠高血糖素释放，这进而增加胰岛素分泌，降低胃排空和降低血液葡萄糖水平。

西他列汀在所述组合物中的浓度为组合物重量的0.000005%至0.005%，并优选组合物重量的0.00005%至0.01%。

总状土木香

总状土木香是菊科观赏植物。总状土木香生长在温带和阿尔卑斯山西部的喜马拉雅山脉，并在克什米尔（Kashmir)是常见的，并且也称为“Pushkarmool”。本文的“总状土木香提取物”将理解为可通过用溶剂并更优选用水优选提取植物的根或优选根的部分获得的组合物。本文中“总状土木香的提取物”与“总状土木香提取物”相同。

总状土木香提取物在所述组合物中的浓度为0.5 wt%至2 wt%，并优选0.005 wt%至0.2 wt%。

本发明提供包含总状土木香提取物和西他列汀的抗糖尿病组合物。所述组合物降低血糖水平，并同时缓解由药物造成的负面化感作用。

本发明的一个实施方案提供包含0.5 wt%至2 wt%的总状土木香提取物和0.000005 wt%至0.005 wt%的西他列汀的组合物。

本发明的另一个实施方案提供包含0.005 wt%至0.2 wt%的总状土木香提取物和0.00005 wt%至0.01 wt%的西他列汀的组合物。

本发明的另一个实施方案提供其中所述西他列汀与所述总状土木香提取物的重量比在1:1000至1:40000范围内变化的组合物。

本发明的另一个实施方案提供其中所述西他列汀与所述总状土木香提取物的重量比在1:20000至1:40000范围内变化的组合物。

本发明的另一个实施方案提供其中所述西他列汀与所述总状土木香提取物的重量比为1:40000的组合物。

本发明的一个实施方案提供其中总状土木香提取物是总状土木香根或根的部分的提取物的组合物。

本发明的一个实施方案提供其中总状土木香提取物是根的溶剂提取物，并优选根的水提取物，并更优选根的经干燥的水提取物的组合物。

根据本发明的组合物可以优选包含其它常规成分，例如赋形剂、调味剂、增甜剂等。

根据本发明的组合物优选配制为可食用食品组合物，例如汤、面条、面包、果酱/番茄酱、饮料、冰淇淋和制药产品，如胶囊/片剂或糖浆。

在本发明的一个实施方案中提供生产组合物的方法，其包括共混总状土木香提取物和西他列汀的步骤。

在本发明的一个优选实施方案中提供生产组合物的方法，其包括共混0.5 wt%至2 wt%的总状土木香提取物和0.000005 wt%至0.005 wt%的西他列汀的步骤。进一步优选的是并入其它常规成分，例如可接受的赋形剂、调味剂、增甜剂等以得到所述组合物。

本发明的一个实施方案提供其中所述西他列汀与所述总状土木香提取物的重量比在1:1000至1:40000范围内，优选在1:20000至1:40000范围内变化，并更优选为1:40000的比率的方法。

在一个实施方案中，本发明的组合物提供抗糖尿病益处。

在一个实施方案中，本发明的组合物提供对2型糖尿病的抗糖尿病益处。

在一个实施方案中，本发明的组合物用于抑制DPPIV活性。

在一个实施方案中，本发明的组合物用于提升GLP-1活性。

在一个实施方案中，本发明的组合物用作药剂。

在一个实施方案中，本发明的组合物用于治疗糖尿病。

在一个实施方案中，本发明的组合物用于抑制或降低二肽基肽酶-4（DPPIV）水平。

在一个实施方案中提供治疗糖尿病的方法，所述方法通过采用本发明的组合物治疗需要其的人来进行。

在一个实施方案中提供抑制或降低二肽基肽酶-4（DPPIV）水平的方法，所述方法通过采用本发明的组合物治疗需要其的人来进行。

在一个实施方案中，本发明的组合物用于制备用于治疗糖尿病的药剂。

在一个实施方案中，本发明的组合物用于制备用于抑制或降低二肽基肽酶-4（DPPIV）水平的药剂。

西他列汀是已知的DPPIV活性抑制剂，并且用于制药领域。总状土木香是被广泛消费用于心血管益处的食品材料。观察到总状土木香还具有抗糖尿病益处。本发明的一个令人惊讶的发现是通过组合总状土木香提取物和西他列汀，西他列汀的剂量可以显著降低，而不改变疗效水平。

在一个实施方案中，出乎意料地发现当以组合物形式使用而不是单独使用西他列汀时，在较低的西他列汀浓度下，本发明的组合物表现出协同活性，并显示出对DPPIV活性的抑制。

在一个实施方案中，本发明的一个令人惊讶的发现是对DPPIV活性的抑制仅在总状土木香水提取物中，并且还在特定范围的浓度下是可检测的，而总状土木香乙醇提取物不显示可检测的对DPPIV活性的抑制。

在本发明的另一个实施方案中，发明人成功将开处方用于降低血糖水平的西他列汀的正常推荐有效剂量降低至显著较低的剂量，并得到相似的所需的抗糖尿病效果。

本发明的一个实施方案提供包含本发明的组合物和制药上可接受的载体或赋形剂的制药组合物。

在一个实施方案中，提供本发明的组合物作为基于茶的饮料，其包括基于红茶的饮料、基于绿茶的饮料和基于乌龙茶的饮料。优选的形式可以是热和/或冷泡制（brew）二者的液体茶饮品、即饮式茶、茶汁等。

本发明的可食用组合物还可以是固体或粉末状食品增补剂的形式。

在本发明的一个实施方案中提供生产可食用组合物的方法，所述方法包括将总状土木香提取物和西他列汀与其它成分混合和/或共混以得到可食用组合物的步骤。

在本发明的一个优选实施方案中提供生产可食用组合物的方法，所述方法包括将0.5 wt%至2 wt%的总状土木香提取物，和0.000005 wt%至0.005 wt%的西他列汀与其它成分混合和/或共混以得到可食用组合物。

在另一个更优选的实施方案中提供生产可食用组合物的方法，所述方法包括将0.005 wt%至0.2 wt%的总状土木香提取物，和0.00005 wt%至0.01 wt%的西他列汀与其它成分混合和/或共混以得到可食用组合物。

如上所提到的术语“其它成分”表示制备目标可食用产品所需要的组成成分，例如在制备汤组合物（目标可食用产品）的情况下，术语“其它成分”优选是淀粉、盐、糖、酵母提取物、脂肪粉、蔬菜块、调味剂、色素（colour）等。

为了制备本发明的可食用组合物，可以通过优选用水在70℃至100℃的温度下提取（煮）总状土木香的根2至6小时，然后冷却来制备总状土木香提取物。之后优选将溶液过滤和浓缩。浓缩阶段优选在旋转蒸发器中进行。

或者，也可以使用市售的总状土木香水提取物粉末。

不希望受理论束缚，阐述了2-型糖尿病与提高DPPIV活性，并由此降低GLP-1和GIP活性有关。GLP-1通常通过控制血糖水平保持平衡。提高的DPPIV活性水平抑制GLP-1和GIP的活性。优选研发本发明以抑制DPPIV活性，并由此保持GLP-1的活性，其进而控制血糖水平。

参考以下非限制性实施例，在下文对本发明的进一步细节、其目的和优点进行更详细的说明。对本领域技术人员将明显的是许多这样的实施例是可能的，并且以下给出的实施例仅出于举例说明的目的。这些不应解释为以任何方式限制本发明的范围。

实施例

实施例1：不同浓度的西他列汀对DPPIV酶的活性的影响

在体外测定中测试不同浓度的西他列汀对DPPIV活性的影响。通过DPPIV酶分裂显色底物甘氨酰-脯氨酰对硝基苯胺（Gly-Pro-p-nitro anilide）的能力测量DPPIV活性。在酶标仪中在405 nm下测量分裂的产物对-硝基苯胺。

在96孔板（NEST Biotechnology Co. Ltd, Cat No 701001）的不同孔中，按照表1添加10 μl的0.000005%至0.005%的各种浓度的西他列汀。在每个孔中，还添加含有DPPIV酶的10 μl的人血清。使用pH-8的TRIS-HCl缓冲液将最终体积补足至200 μl/孔。通过在900 ml的压热处理的milli-Q水（Millipore® India）中添加2.42 g的TRIS（三羟甲基氨基甲烷；供应商：Sisco Research Laboratory ltd, Cat No 2044122）碱、0.372 g的EDTA（SIGMA, Cat No E6758）和5.644 g的NaCl并搅拌直至其溶解来制备TRIS-HCl缓冲液。之后，使用HCl酸将溶液的pH调整至8.0，然后用压热处理的milli-Q水将溶液的体积补足至1000 ml。

使用酶标仪（BIO-RAD LAB INDIA，型号680）将血清和各种浓度下的西他列汀溶液混合1 min，并在37℃下的培养器（Thermo Scientific，型号3111）中培养10分钟。之后，通过添加10 μl/孔的19 mM的底物甘氨酰-脯氨酰对硝基酰苯胺（Gly-Pro p-NA）（其等同于GLP-1）引发酶促反应。Gly-Pro p-NA是对于酶DPPIV的普遍接受和市售的底物（Yogisha等，Journal of Natural Products，第3卷(2010):76-79）。

将以上反应混合物在37℃下的培养器中培养1小时。然后通过添加100 μl/孔的pH 4的柠檬酸盐缓冲液抑止（arrest）酶活性。通过在90 ml的压热处理的milli-Q水（Millipore® India）中添加2.1 g的一水合柠檬酸（Sisco Research laboratory ltd, Cat No 0348216）和2.94 g的柠檬酸三钠盐二水合物（Sisco Research laboratory ltd, Cat No 1949110）来制备柠檬酸盐缓冲液。之后，使用HCl酸将溶液的pH调整至4.0，然后用压热处理的milli-Q水将溶液的体积补足至100 ml。之后，使用酶标仪（BIO-RAD LAB INDIA，型号680）在405 nm波长下测量吸光度。

保持以上使用的在相同的各自浓度下的Gly-Pro p- NA和血清的组合作为对照。

使用以下公式计算样品的DPPIV的活性%：

样品的 O.D ×100=活性%

对照的O.D

然后通过从100减去活性%计算由样品的抑制%。实验结果总结在下表1中。

表1：

西他列汀(重量%)	对DPPIV活性的抑制%
		0.000001	未检出
0.000005	12.57
		0.00001	32.24
0.00002	47.15
		0.00005	64.14
0.0005	80.50
		0.005	86.32

表1中呈现的数据显示DPPIV酶活性的抑制以剂量依赖方式增加。

实施例2：不同溶剂中的总状土木香提取物对DPPIV酶活性的影响

通过使用以下步骤制备总状土木香提取物：

从当地（班加罗尔，印度）市场购买总状土木香（pushkarmool）植物。其以3 cm至6 cm茎尺寸的形式可得，其是pushkarmool的根和茎的组合。通过使用连接至200 μm尺寸筛的剪切磨（Retsch SM 100）粉碎材料来制备仅使用根的经干燥的总状土木香粉末。

由经干燥的总状土木香粉末制备总状土木香提取物。将100 g的干总状土木香根粉末浸在水或乙醇中约14小时，然后在80℃下煮4小时以分别得到水或乙醇提取物。然后将其冷却至约35℃，然后将溶液过滤以得到透明溶液。然后使用旋转蒸发器（Heidolph Laborota 4002）将溶液浓缩至干燥（含湿量约3%）。该提取物用于如下所述的实验。

在如实施例1中公开的体外测定中测试如表2中所示的各种浓度的总状土木香的水和乙醇提取物对DPPIV活性的影响。

表2：

表2中呈现的结果显示总状土木香水提取物在较低浓度下不显示可检测的DPPIV抑制活性，而从0.005%开始观察到可检测的抑制水平。在0.2%的总状土木香水提取物下观察到最高的抑制。然而，乙醇提取物在测试的总状土木香提取物的所有浓度下未显示任何可检测的DPPIV抑制活性。

还测试了更高浓度（高于0.2%）的总状土木香的水和乙醇提取物二者对DPPIV活性的抑制，但发现这导致反应混合物的酸化，这表明DPPIV酶的自失活。因此，在表中未提及那些浓度。

实施例3：总状土木香提取物和西他列汀的组合对DPPIV酶的活性的影响

如实施例2中所述制备总状土木香水提取物。

通过使用对实施例1描述的步骤，以单独和与西他列汀组合的形式使用如表3中所示的各种浓度的总状土木香水提取物进行体外DPPIV酶测定。还评估单独的西他列汀用于比较。基于实施例1的结果，西他列汀的浓度选择为0.000005%。所选的西他列汀的浓度是检测到对DPPIV活性的抑制的最小浓度。基于实施例2的结果选择总状土木香水提取物的不同浓度，所述浓度开始于对DPPIV活性的抑制是可检测的总状土木香提取物的最小浓度。有关对DPPIV活性的抑制%的数据呈现于表3中。

表3：

表3中呈现的数据显示相比于总状土木香或西他列汀的个体效应，总状土木香提取物和西他列汀的组合展示出对DPPIV活性的抑制方面的协同效应。

因此本发明提供包含总状土木香提取物和西他列汀的协同组合物，其是有效的抗糖尿病组合物，其中药品西他列汀的剂量显著降低。

Claims

1.抗糖尿病组合物，其包含：

i. 0.5 wt% 至2 wt%的总状土木香提取物，和

ii. 0.000005 wt%至0.005 wt%的西他列汀。

2.如权利要求1中所述的组合物，其中所述总状土木香提取物为组合物重量的0.005%至0.2%。

3.如权利要求1或权利要求2中所述的组合物，其中所述西他列汀为组合物重量的0.00005%至0.01%。

4.如在前权利要求任一项中所述的组合物，其中所述西他列汀与所述总状土木香提取物的重量比在1:1000至1:40000的范围内变化。

5.如权利要求1-3任一项中所述的组合物，其中所述西他列汀与所述总状土木香提取物的重量比在1:20000至1:40000的范围内变化。

6.如在前权利要求任一项中所述的组合物，其中所述总状土木香提取物是总状土木香根或根的部分的提取物。

7.如在前权利要求任一项中所述的组合物，其中所述总状土木香提取物是水提取物。

8.生产根据在前权利要求任一项的组合物的方法，所述方法包括共混总状土木香提取物和西他列汀的步骤。

9.根据权利要求1-7任一项的组合物，其用作药剂。

10.根据权利要求1-7任一项的组合物，其用于治疗糖尿病。

11.根据权利要求1-7任一项的组合物，其通过抑制或降低二肽基肽酶-4（DPPIV）水平以用于疗糖尿病。

12.治疗糖尿病的方法，其通过采用根据权利要求1-7任一项的组合物来治疗需要其的人来进行。

13.通过抑制或降低二肽基肽酶-4（DPPIV）水平来治疗糖尿病的方法，其通过采用根据权利要求1-7任一项的组合物来治疗需要其的人来进行。

14.根据权利要求1-7任一项的组合物在制备用于治疗糖尿病的药剂中的用途。

15.根据权利要求1-7任一项的组合物在制备用于通过抑制或降低二肽基肽酶-4（DPPIV）水平来治疗糖尿病的药剂中的用途。