CN105503744A

CN105503744A - 一种含有喹唑啉酮的联苯脲化合物及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN105503744A
Application number: CN201610019207.2A
Authority: CN
Inventors: 贺浪冲; 张�杰; 张彦民; 潘晓艳; 代秉玲; 王金凤; 苏萍; 张琳
Original assignee: Xian Jiaotong University
Current assignee: Xian Jiaotong University
Priority date: 2016-01-12
Filing date: 2016-01-12
Publication date: 2016-04-20
Anticipated expiration: 2036-01-12
Also published as: CN105503744B

Abstract

本发明提供了一种含有喹唑啉酮的联苯脲化合物及其制备方法和应用，该化合物的结构式为其中R₁、R₂为氢、异丙基或卤素基团。该化合物其对VEGFR-2激酶有很好的抑制活性，能够通过抑制VEGFR-2激酶的活性，阻断其诱导的信号通路，抑制肿瘤细胞的增生和迁移，从而可应用于抗肿瘤药物的制备。且该化合物的制备方法具有原料易得，反应条件温和，反应过程操作简单，所用试剂便宜的优点。

Description

一种含有喹唑啉酮的联苯脲化合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，涉及一种抗肿瘤的化合物，特别涉及一种含有喹唑啉酮的联苯脲化合物及其制备方法和应用。

背景技术

恶性肿瘤作为全球较大的公共卫生问题之一，极大地危害人类的健康，并将成为新世纪人类的第一杀手。恶性肿瘤已不再只是发达工业国家的严重疾病，发展中国家面临着更大的疾病负担。化学药物治疗作为治疗肿瘤的重要手段之一，在近三十年已经有了巨大的发展和进步，得到了一大批具有不同作用机制的临床抗肿瘤药物。但是抗肿瘤药也存在许多不良反应，比如脱发，呕吐，产生骨髓抑制，快速产生耐药性等等，这些都导致化学药物无法达到预期的治疗效果。因此新的抗肿瘤药物的研究与开发是目前药学领域的热点和难点问题之一。

发明内容

本发明的目的在于提供一种含有喹唑啉酮的联苯脲化合物及其制备方法和应用，该化合物在体外体现出很好的抗肿瘤活性，能够应用于抗肿瘤药物的制备。

为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种含有喹唑啉酮的联苯脲化合物，其化学结构式如下：

其中，R₁、R₂为氢、异丙基或卤素基团。

所述的卤素基团为氟原子、氯原子、三氟甲基或三氟甲氧基。

所述的含有喹唑啉酮的联苯脲化合物的制备方法，包括以下步骤：

1)2-氨基-4-溴苯甲酸与甲酰胺通过环合反应制备7-溴喹唑啉-4(3H)-酮；

2)单取代或双取代的苯胺与双(三氯甲基)碳酸酯形成异氰酸酯，再与4-氨基苯硼酸频哪醇酯缩合反应得到脲类化合物；其中脲类化合物中的取代基由苯胺中苯环上的取代基引入；

3)在四(三苯基膦)钯反应催化下，脲类化合物与7-溴喹唑啉-4(3H)-酮通过Suzuki偶联反应得到含有喹唑啉酮的联苯脲化合物。

所述步骤1)的具体操作为：将2-氨基-4-溴苯甲酸溶于甲酰胺中，在氮气保护下进行微波反应，反应结束后，将反应液加入冰水中，用乙酸乙酯萃取，萃取的有机相经洗涤、干燥后减压蒸去溶剂，得粗品，再用层析柱分离粗品，得到7-溴喹唑啉-4(3H)-酮。

所述步骤2)的具体操作为：在冰浴条件下，用重蒸二氯甲烷将双(三氯甲基)碳酸酯溶解并搅拌均匀，再滴加单取代或双取代的苯胺的二氯甲烷溶液，滴加完毕后搅拌均匀，继续滴加三乙胺的二氯甲烷溶液，滴加完毕后继续搅拌均匀，然后滴加4-氨基苯硼酸频哪醇酯和三乙胺的二氯甲烷溶液，滴加完毕后继续搅拌均匀，将得到的反应液洗涤、干燥后减压蒸去溶剂，得粗品，再用层析柱分离粗品，得到脲类化合物。

所述步骤3)的具体操作为：将脲类化合物，7-溴喹唑啉-4(3H)-酮，无水碳酸钾，四(三苯基膦)钯溶于1,4-二氧六环和水的混合溶剂中，在氮气保护下反应，反应结束后冷却至室温，用乙酸乙酯萃取，萃取的有机相经洗涤、干燥后减压蒸去溶剂，得粗品，再用层析柱分离粗品，得到含有喹唑啉酮的联苯脲化合物。

所述的含有喹唑啉酮的联苯脲化合物在制备抑制VEGFR-2激酶活性的药物中的应用。

所述的含有喹唑啉酮的联苯脲化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。

所述的抗肿瘤药物是以VEGFR-2激酶为靶点的药物。

所述的抗肿瘤药物包括抗肝癌、抗结肠癌、抗乳腺癌、抗肺癌、抗皮肤癌和抗宫颈癌的药物。

与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：

本发明提供的含有喹唑啉酮的联苯脲化合物，是一种新型的具有抗肿瘤活性的化合物，其对VEGFR-2激酶有很好的抑制活性，可用于抗肿瘤药物的制备。具体的，本发明提供的含有喹唑啉酮的联苯脲化合物，能够抑制VEGFR-2激酶的活性。而血管生成与肿瘤的发生、发展和迁移都有密切关系，抑制新生血管的形成可以有效的抑制肿瘤的生长和迁移，许多生长因子调控新生血管生成，其中VEGFR-2是已知的最强的正调控因子。因此本发明提供的含有喹唑啉酮的联苯脲化合物通过抑制VEGFR-2激酶的活性，阻断其诱导的信号通路，抑制肿瘤细胞的增生和迁移，从而可应用于抗肿瘤药物的制备。

本发明提供的含有喹唑啉酮的联苯脲化合物的制备方法，通过带有取代基的苯胺与双(三氯甲基)碳酸酯形成异氰酸酯，再与4-氨基苯硼酸频哪醇酯缩合反应得到脲类化合物，将苯胺中的取代基引入到脲类化合物上，然后该脲类化合物与由2-氨基-4-溴苯甲酸与甲酰胺环合反应制得的7-溴喹唑啉-4(3H)-酮进行Suzuki偶联反应，即得到含有喹唑啉酮的联苯脲化合物，该方法具有原料易得，反应条件温和，反应过程操作简单，所用试剂便宜的优点。

进一步的，通过实验发现，本发明提供的含有喹唑啉酮的联苯脲化合物，能够对包括内皮细胞(ECV304)、乳腺癌细胞(ZR-75-30)、乳腺癌细胞(MCF-7)、人结肠癌细胞(LOVO)、肺癌细胞(A549)、肝癌细胞(SMCC-7721)、肝癌细胞(Hep3B)、肝癌细胞(BEL-7402)、宫颈癌细胞(HeLa)和人表皮癌细胞(A431)在内的肿瘤细胞抑制其细胞增殖活性，可应用于抗肿瘤药物的制备，尤其是以VEGFR-2激酶为靶点的抗肿瘤药物，包括抗肝癌、抗结肠癌、抗乳腺癌、抗肺癌、抗皮肤癌和抗宫颈癌的药物。

附图说明

图1为本发明提供的具有抗肿瘤活性的含有喹唑啉酮的联苯脲化合物的合成路线图；

其中，化合物1为4-氨基苯硼酸频哪醇酯，化合物2为单取代或双取代的苯胺，化合物3为苯胺取代的脲类化合物，化合物4为2-氨基-4-溴苯甲酸；化合物为5为7-溴喹唑啉-4(3H)-酮，化合物6为含有喹唑啉酮基团的联苯脲化合物；

图中标注的具体为：a.BTC,Et₃N,DCM,0℃tort；b.HCONH₂,MW,150℃,1.45h；c.Pd(PPh₃)₄,K₂CO₃,H₂O,dioxane,100℃,12h。

具体实施方式

下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。

本发明提供了一种具有抗肿瘤活性的含有喹唑啉酮的联苯脲化合物，该化合物在体外具有抗肿瘤活性，可应用于抗肿瘤药物的制备，其化学结构式为：

其中，R₁、R₂为氢、异丙基或卤素基团。所述的卤素基团为氟原子，氯原子，三氟甲基，三氟甲氧基。而且本发明提供的含有喹唑啉酮的联苯脲化合物中的喹唑啉酮基团中含有杂原子N原子和O原子。

下面结合图1中所示的合成路线和具体的合成实施例来详细说明具有本发明的抗肿瘤候选药物含有喹唑啉酮的联苯脲化合物的制备和活性筛选方法。

实施例1

该含有喹唑啉酮的联苯脲化合物的结构式中，R₁为氢，R₂为CF₃，通过以下步骤制备(参见图1)：

1)4-氨基苯硼酸频哪醇酯(化合物1)与间三氟甲基苯胺(化合物2)制备化合物1-(3三氟甲基)苯基)-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)苯基)脲(化合物3)

在冰浴条件下，用20mL重蒸二氯甲烷将0.80g(2.74mmol)双(三氯甲基)碳酸酯(BTC)溶解并搅拌5min，再缓慢滴加1.1g(6.85.mmol)间三氟甲基苯胺(化合物2)的二氯甲烷溶液，滴加完毕搅拌15min，向浑浊液中继续滴加1.1mL(8.22mmol)三乙胺的二氯甲烷溶液10mL，滴加完毕后继续搅拌15min，然后向反应溶液中滴加1.50g(6.85mmol)4-氨基苯硼酸频哪醇酯(化合物1)和1.1mL(8.22mmol)三乙胺的二氯甲烷溶液10mL，滴加完毕后继续搅拌20min，将反应液依次用饱和碳酸氢钠溶液，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干得到红色残留物，用层析柱分离得到白色固体1-(3三氟甲基)苯基-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)苯基)脲(化合物3)1.57g，产率58.4％；

2)2-氨基-4-溴苯甲酸(化合物4)与甲酰胺通过环合反应制备7-溴喹唑啉-4(3H)-酮(化合物5)

将2-氨基-4-溴苯甲酸(化合物4)5.0g(23.14mmol)溶于80ml(2.01mmol)甲酰胺中，氮气保护下在150℃，功率300W微波条件下反应1.45h，反应结束后，将反应液加入冰水中，用乙酸乙酯萃取3-4次，萃取的有机相依次用饱和碳酸氢钠溶液，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干得到红棕色残留物，用层析柱分离得到红棕色固体7-溴喹唑啉-4(3H)-酮(化合物5)1.89g，产率36.3％；

3)化合物1-(3三氟甲基)苯基)-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)苯基)脲(化合物3)与7-溴喹唑啉-4(3H)-酮(化合物5)通过Suzuki偶联反应制备1-(4-(4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-7-基)苯基)-3-(3-(三氟甲基)苯基)脲(化合物6)。

将1-(3三氟甲基)苯基)-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)苯基)脲(化合物3)1.40g(3.45mmol)，7-溴喹唑啉-4(3H)-酮(化合物5)0.78g(3.45mmol)，碳酸钾1.43g(10.35mmol)，四(三苯基膦)钯0.39g(0.34mmol)溶于90mL1,4-二氧六环和30ml水中，在氮气保护下于100℃反应过夜。冷却至室温，用乙酸乙酯萃取3-4次，萃取的有机相依次用饱和碳酸氢钠溶液，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干，经过层析柱分离得到白色固体1-(4-(4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-7-基)苯基)-3-(3-(三氟甲基)苯基)脲(化合物6)0.19g，产率13.0％。

所得的含有喹唑啉酮的联苯脲化合物的结构如下式所示：

理化性质：mp:>300℃。

氢谱核磁共振数据为：¹HNMR(400MHz,DMSO)δ12.25(s,1H),9.15(s,1H),9.05(s,1H),8.17(d,J＝8.3Hz,1H),8.13(s,1H),8.05(s,1H),7.91(d,J＝1.5Hz,1H),7.84(m,J＝8.4,1.7Hz,1H),7.80(d,J＝8.7Hz,2H),7.64(d,J＝8.8Hz,2H),7.60(s,1H),7.54(t,J＝7.9Hz,1H),7.34(d,J＝7.6Hz,1H)。

碳谱核磁共振数据为：¹³CNMR(101MHz,DMSO)δ161.03,152.89,149.83,146.26,145.91,140.95,140.50,132.55,130.43,128.16,127.00,125.34,124.31,122.40,121.46,119.26,66.81。

实施例2

含有喹唑啉酮的联苯脲化合物中R₁、R₂均为氟。

步骤1～2与实施例1中步骤1～2相同，即由起始化合物4-氨基苯硼酸频哪醇酯(化合物1)与3,4-二氟苯胺(化合物2)制备化合物1-(3,4-二氟)苯基)-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)苯基)脲(化合物3)。同时2-氨基-4-溴苯甲酸(化合物4)与甲酰胺通过环合反应制备7-溴喹唑啉-4(3H)-酮(化合物5)。

步骤3：1-(3,4-二氟)苯基)-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)苯基)脲(化合物3)与化合物7-溴喹唑啉-4(3H)-酮(化合物5)通过Suzuki偶联反应制备1-(4-(4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-7-基)苯基)-3-(3,4-二氟)苯基)脲(化合物6)。具体的操作步骤为：

将1-(3,4-二氟)苯基)-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)苯基)脲(化合物3)1.40g(3.74mmol)，7-溴喹唑啉-4(3H)-酮(化合物5)0.84g(3.74mmol)，碳酸钾1.55g(11.22mmol)，四(三苯基膦)钯0.43g(0.37mmol)溶于90mL1,4-二氧六环和30ml水中，在氮气保护下于100℃反应过夜。冷却至室温，用乙酸乙酯萃取3-4次，萃取的有机相依次用饱和碳酸氢钠溶液，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干，经过层析柱分离得到白色固体1-(4-(4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-7-基)苯基)-3-(3,4-二氟)苯基)脲(化合物6)0.4g，产率27.2％。

所得的含有喹唑啉酮的联苯脲化合物的结构如下式所示：

理化性质：mp:>300℃。

氢谱核磁共振数据为：¹HNMR(400MHz,DMSO)δ12.25(s,1H),8.98(s,2H),8.16(d,J＝8.3Hz,1H),8.12(s,1H),7.90(d,J＝1.1Hz,1H),7.86–7.81(m,1H),7.78(d,J＝8.6Hz,2H),7.70(m,J＝13.3,7.4,2.4Hz,1H),7.61(d,J＝8.7Hz,2H),7.36(m,J＝19.5,9.3Hz,1H),7.19–7.12(m,1H)。

碳谱核磁共振数据为：¹³CNMR(101MHz,DMSO)δ161.03,152.83,149.83,146.24,145.91,143.85,143.72,140.54,137.24,137.14,132.49,128.15,126.98,125.31,124.29,121.45,119.18,117.96,117.78,114.91,107.82,107.61。

实施例3

含有喹唑啉酮的联苯脲化合物中R₁为氢，R₂为OCF₃。

步骤1～2与实施例1中步骤1～2相同，即由起始化合物4-氨基苯硼酸频哪醇酯(化合物1)与对三氟甲氧基苯胺(化合物2)制备化合物1-(4-三氟甲氧基)苯基)-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)苯基)脲(化合物3)。同时2-氨基-4-溴苯甲酸(化合物4)与甲酰胺通过环合反应制备7-溴喹唑啉-4(3H)-酮(化合物5)。

步骤3：1-(4-三氟甲氧基)苯基)-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)苯基)脲(化合物3)与化合物7-溴喹唑啉-4(3H)-酮(化合物5)通过Suzuki偶联反应制备1-(4-(4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-7-基)苯基)-3-(4-三氟甲氧基)苯基)脲(化合物6)。具体的操作步骤为：

将1-(4-三氟甲氧基)苯基)-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)苯基)脲(化合物3)1.40g(3.32mmol)，7-溴喹唑啉-4(3H)-酮(化合物5)0.82g(3.32mmol)，碳酸钾1.37g(9.96mmol)，四(三苯基膦)钯0.38g(0.33mmol)溶于90mL1,4-二氧六环和30ml水中，在氮气保护下于100℃反应过夜。冷却至室温，用乙酸乙酯萃取3-4次，萃取的有机相依次用饱和碳酸氢钠溶液，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干，经过层析柱分离得到白色固体1-(4-(4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-7-基)苯基)-3-(4-三氟甲氧基)苯基)脲(化合物6)0.23g，产率14.3％。

所得的含有喹唑啉酮的联苯脲化合物的结构如下式所示：

理化性质：mp:>300℃。

氢谱核磁共振数据为：¹HNMR(400MHz,DMSO)δ12.27(s,1H),9.47(s,1H),9.44(s,1H),8.16(d,J＝8.3Hz,1H),8.13(s,1H),7.90(s,1H),7.83(d,J＝8.3Hz,1H),7.79(d,J＝8.5Hz,2H),7.63(d,J＝8.6Hz,2H),7.59(d,J＝8.9Hz,2H),7.30(d,J＝8.4Hz,2H)。

碳谱核磁共振数据为：¹³CNMR(101MHz,DMSO)δ161.04,152.98,149.84,146.25,145.96,143.02,140.80,139.51,132.24,128.16,126.98,125.30,124.24,122.25,121.40,119.69,119.40,118.89。

实施例4

含有喹唑啉酮的联苯脲化合物中R₁为氯，R₂为三氟甲基。

步骤1～2与实施例1中步骤1～2相同，即由起始化合物4-氨基苯硼酸频哪醇酯(化合物1)与4-氯-3-三氟甲基苯胺(化合物2)制备化合物1-(4-氯-3-三氟甲基)苯基)-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)苯基)脲(化合物3)。同时2-氨基-4-溴苯甲酸(化合物4)与甲酰胺通过环合反应制备7-溴喹唑啉-4(3H)-酮(化合物5)。

步骤3：1-(4-氯-3-三氟甲基)苯基)-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)苯基)脲(化合物3)与化合物7-溴喹唑啉-4(3H)-酮(化合物5)通过Suzuki偶联反应制备1-(4-(4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-7-基)苯基)-3-(4-氯-3-三氟甲基)苯基)脲(化合物6)。具体的操作步骤为：

将1-(4-氯-3-三氟甲基)苯基)-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)苯基)脲(化合物3)1.40g(3.18mmol)，7-溴喹唑啉-4(3H)-酮(化合物5)0.79g(3.49mmol)，碳酸钾1.32g(9.54mmol)，四(三苯基膦)钯0.37g(0.32mmol)溶于90mL1,4-二氧六环和30ml水中，在氮气保护下于100℃反应过夜。冷却至室温，用乙酸乙酯萃取3-4次，萃取的有机相依次用饱和碳酸氢钠溶液，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干，经过层析柱分离得到白色固体1-(4-(4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-7-基)苯基)-3-(4-氯-3-三氟甲基)苯基)脲(化合物6)0.18g，产率12.7％。

所得的含有喹唑啉酮的联苯脲化合物的如下式所示：

理化性质：mp:>300℃。

氢谱核磁共振数据为：¹HNMR(400MHz,DMSO)δ12.26(s,1H),9.64(s,1H),9.39(s,1H),8.16(d,J＝8.4Hz,1H),8.13(s,2H),7.90(s,1H),7.83(d,J＝8.4Hz,1H),7.79(d,J＝8.5Hz,2H),7.65(d,J＝4.1Hz,2H),7.63(d,J＝6.5Hz,2H)。

碳谱核磁共振数据为：¹³CNMR(101MHz,DMSO)δ161.03,152.87,149.83,146.26,145.89,140.41,139.81,132.51,128.17,126.98,125.32,124.31,123.38,122.73,121.46,119.20,66.81。

下面对本发明制得的含有喹唑啉酮的联苯脲化合物的药用活性进行筛选并予以说明。

一、含有喹唑啉酮的联苯脲化合物对VEGFR-2激酶的抑制活性筛选

用HTRFKinEASE试剂盒测定本发明制得的含有喹唑啉酮的联苯脲化合物对VEGFR-2的抑制活性：

采用Lance实验检测含有喹唑啉酮的联苯脲化合物对VEGFR-2的抑制活性，操作方法按照试剂盒说明进行。将2μL激酶和2μL的底物加入384孔板中，VEGFR-2浓度为0.09ng/μL，底物浓度为180nM。然后加入不同浓度的底物多肽和4μL待测化合物，加入2μLATP启动反应，在37℃下反应30min后，加入EDTA终止反应。反应结束后向反应液中分别加入Eu³⁺-穴状化合物标记的抗体和抗生蛋白链菌素-XL665，在室温下孵育1h，采用Perkin-ElmerVictor5在665nm和615nm波长下分别测定吸光度，激酶活性用A665/A615×10⁴表征，计算含有喹唑啉酮的联苯脲化合物对VEGFR-2的抑制率和IC₅₀。

含有喹唑啉酮的联苯脲化合物对VEGFR-2激酶的抑制活性的结果如表1所示。

表1含有喹唑啉酮的联苯脲化合物的VEGFR-2抑制率(％)

由表1可以看出，本发明制备的含有喹唑啉酮的联苯脲化合物对VEGFR-2激酶具有抑制活性，可用于制备抑制VEGFR-2激酶活性的药物。

二、含有喹唑啉酮的联苯脲化合物的抗肿瘤活性筛选

采用MTT法检验本发明制得的含有喹唑啉酮的联苯脲化合物对肿瘤细胞的生长抑制活性：

本发明提供的含有喹唑啉酮的联苯脲化合物具有抗肿瘤作用，对肿瘤细胞有体外抑制增殖活性，能够对包括内皮细胞(ECV304)，乳腺癌细胞(ZR-75-30)，乳腺癌细胞(MCF-7)，人结肠癌细胞(LOVO)，肺癌细胞(A549)，肝癌细胞(SMCC-7721)，肝癌细胞(Hep3B)，肝癌细胞(BEL-7402)，宫颈癌细胞(HeLa)，人表皮癌细胞(A431)在内的肿瘤细胞抑制其细胞增殖活性，可应用于抗肿瘤药物的制备中，具有抑制肿瘤细胞的增殖活性，可以用于对这些癌症的治疗；与阳性药苏尼替尼和索拉菲尼相比，个别化合物显示了更高的抑制肿瘤细胞增殖活性。因此本发明提供的含有喹唑啉酮的联苯脲化合物可用于抗肿瘤药物的制备，尤其是以VEGFR-2激酶为靶点的抗肿瘤药物，包括抗肝癌、抗结肠癌、抗乳腺癌、抗肺癌、抗皮肤癌和抗宫颈癌的药物。

具体实验方法为：将处于对数生长期的肺癌细胞(A549)，乳腺癌细胞(MCF7)，内皮细胞(ECV304)，乳腺癌细胞(ZR-75-30)，肝癌细胞(SMCC-7721)，肝癌细胞(Hep3B)，用0.25％的胰酶消化3～5分钟，吹打均匀后稀释成浓度为1×10⁴～2×10⁴个/mL的单细胞悬液，平行接种于96孔培养板中，每孔接种体积为200μL；于37℃，5％CO₂培养箱中培养24个小时；

以含0.25％DMSO(N,N-二甲基亚砜)的水溶液为阴性对照，以苏尼替尼和索拉菲尼为阳性对照，待测样品加入4个不同浓度的含有喹唑啉酮的联苯脲化合物(1×10^-7mol/L；1×10^-6mol/L；1×10^-5mol/L；5×10^-5mol/L)，每个浓度设5个复孔，继续培养48个小时；

然后每孔加入5mg/mL的MTT工作液10μL，混匀，37℃培养箱孵育4小时后取出，小心吸弃培养液，每孔加入150μLDMSO，振荡10min，酶联免疫法检测仪测量各孔490nm处紫外吸收值(OD值)，然后计算细胞抑制率，并根据抑制率求出IC₅₀值；细胞抑制率的计算公式为：

抑制率％＝(阳性对照组OD值-用药组OD值)/阴性对照细胞OD值×100％

检测结果显示：与阴性对照组相比，含有喹唑啉酮的联苯脲化合物对上述6种肿瘤细胞具有不同程度的体外抑制作用。

含有喹唑啉酮的联苯脲化合物对上述6种肿瘤细胞的体外抑制作用具体结果见表3-8所示。

另外，表1和表3-10中的含有喹唑啉酮的联苯脲化合物的具体结构如表2所示。

表2含有喹唑啉酮的联苯脲化合物的结构：

表3含有喹唑啉酮的联苯脲化合物及两种阳性药对A549(肺癌)的抑制率(％)

表4含有喹唑啉酮的联苯脲化合物及两种阳性药对Hep3B(肝癌)的抑制率(％)

表5含有喹唑啉酮的联苯脲化合物及两种阳性药对ECV304(血管内皮细胞)的抑制率(％)

表6含有喹唑啉酮的联苯脲化合物及两种阳性药对MCF-7(乳腺癌)的抑制率(％)

表7含有喹唑啉酮的联苯脲化合物及两种阳性药对ZR-75-30(乳腺癌)的抑制率(％)

表8含有喹唑啉酮的联苯脲化合物及两种阳性药对SMMC-7721(肝癌)的抑制率(％)

上述结果显示化合物B10对肿瘤细胞的抑制和阳性对照药舒尼替尼和索拉菲尼相当，甚至有一些活性要高于阳性对照。因此又单独对化合物B10进行人结肠癌细胞(LOVO)，肝癌细胞(Hep3B)，人表皮癌细胞(A431)，肝癌细胞(BEL-7402)4种肿瘤细胞的MTT实验。结果如表9-10所示。

表9化合物B10及两种阳性药对Hela(结肠癌)和LOVO(宫颈癌)的抑制率(％)

表10化合物B10及两种阳性药对A431(人表皮癌)和BEL-7402(肝癌)的抑制率(％)

检测结果显示：与阴性对照组相比，化合物B10对上述10种肿瘤细胞均有很好的体外抑制作用。

Claims

1.一种含有喹唑啉酮的联苯脲化合物，其特征在于，其化学结构式如下：

其中，R₁、R₂为氢、异丙基或卤素基团。

2.根据权利要求1所述的含有喹唑啉酮的联苯脲化合物，其特征在于：所述的卤素基团为氟原子、氯原子、三氟甲基或三氟甲氧基。

3.权利要求1或2所述的含有喹唑啉酮的联苯脲化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

4.根据权利要3所述的含有喹唑啉酮的联苯脲化合物的制备方法，其特征在于：所述步骤1)的具体操作为：将2-氨基-4-溴苯甲酸溶于甲酰胺中，在氮气保护下进行微波反应，反应结束后，将反应液加入冰水中，用乙酸乙酯萃取，萃取的有机相经洗涤、干燥后减压蒸去溶剂，得粗品，再用层析柱分离粗品，得到7-溴喹唑啉-4(3H)-酮。

5.根据权利要3所述的含有喹唑啉酮的联苯脲化合物的制备方法，其特征在于：所述步骤2)的具体操作为：在冰浴条件下，用重蒸二氯甲烷将双(三氯甲基)碳酸酯溶解并搅拌均匀，再滴加单取代或双取代的苯胺的二氯甲烷溶液，滴加完毕后搅拌均匀，继续滴加三乙胺的二氯甲烷溶液，滴加完毕后继续搅拌均匀，然后滴加4-氨基苯硼酸频哪醇酯和三乙胺的二氯甲烷溶液，滴加完毕后继续搅拌均匀，将得到的反应液洗涤、干燥后减压蒸去溶剂，得粗品，再用层析柱分离粗品，得到脲类化合物。

6.根据权利要3所述的含有喹唑啉酮的联苯脲化合物的制备方法，其特征在于：所述步骤3)的具体操作为：将脲类化合物，7-溴喹唑啉-4(3H)-酮，无水碳酸钾，四(三苯基膦)钯溶于1,4-二氧六环和水的混合溶剂中，在氮气保护下反应，反应结束后冷却至室温，用乙酸乙酯萃取，萃取的有机相经洗涤、干燥后减压蒸去溶剂，得粗品，再用层析柱分离粗品，得到含有喹唑啉酮的联苯脲化合物。

7.权利要求1或2所述的含有喹唑啉酮的联苯脲化合物在制备抑制VEGFR-2激酶活性的药物中的应用。

8.权利要求1或2所述的含有喹唑啉酮的联苯脲化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的抗肿瘤药物是以VEGFR-2激酶为靶点的药物。

10.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的抗肿瘤药物包括抗肝癌、抗结肠癌、抗乳腺癌、抗肺癌、抗皮肤癌和抗宫颈癌的药物。