CN105497026B - 苯丁酸联合三唑类抗真菌药物的应用及其产品 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种苯丁酸联合三唑类抗真菌药物的应用及其产品。本发明研究三唑类抗真菌药物和苯丁酸联用对耐药白色念珠菌的静态与动态联合抗真菌作用。PBA分别与FLC、ITC、VRC联合应用时，可以增强三唑类抗真菌药物对耐药CA的抗菌活性，可以产生协同抗真菌作用，并能够逆转耐药CA对三唑类抗真菌药物的耐药性，为新药的开发及老药新用提供了研究方向。对FLC、ITC、VRC共同耐药的白色念珠菌(MIC≥512μg/ml)，联合用药可使其最低抑菌浓度明显降低，32μg/ml的PBA与1μg/ml的FLC合用及32μg/ml的PBA与0.125μg/ml的ITC联用和16μg/ml的PBA与0.25μg/ml的VRC联合应用均可以杀灭80％以上的真菌，浓度再增大，效果更强。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及苯丁酸联合三唑类抗真菌药物的应用及其产品。
背景技术
随着获得性免疫缺陷综合征患者的增多以及广谱抗菌药物的广泛应用，器官移植技术和导管技术等医疗技术的开展，侵袭性真菌感染的发病率和病死率也在逐年上升，侵袭性念珠菌的发病率和致死率到达40％，在医院获得性血流感染中占据第四位。其中，白色念珠菌(Candida albicans，CA)是临床真菌感染中常见的分离菌，通常用唑类抗真菌药氟康唑氟康唑(Fluconazole，FLC)、伏立康唑(Voriconazole，VRC)、伊曲康唑(Itraconazole，ITC)治疗。FLC作为安全、有效、价廉的唑类抗真菌药物，临床应用非常广泛，使得真菌的耐药率不断增加，真菌感染的治疗越来越困难。新药研究与联合用药研究均是解决真菌耐药的途径。其中，联合用药其前期投入少、效果显著，受到国内外的关注。联合用药研究包括两种抗真菌药联合及非抗真菌药与抗真菌药联合，由于抗真菌药物品种有限，新的抗真菌作用价格昂贵且副作用明显，使得非抗真菌药物与抗真菌药物的联合应用研究备受关注。因此，选择非抗真菌药物与FLC的联用成为近年来研究的热点。
组蛋白去乙酰化酶抑制剂具有多种药理作用，其研究目前备受关注。组蛋白去乙酰化酶抑制剂按照其结构分为四类：脂肪酸，如丙戊酸，临床用作抗癫痫药物；氧肟酸盐，曲古抑菌素A；环肽，如天然产物缩酚酸肽FK-228、制蚜菌素和环氧肟酸；苯酰胺类，如MS-275、MGCD0103。各类组蛋白去乙酰化酶抑制剂来源不同，结构相差较大，药理作用不同。其中，曲古抑菌素A来源于链霉菌属的抗生素，是一种有效的、非竞争性可逆的组蛋白去乙酰化酶抑制剂，用于抗肿瘤研究；制蚜菌素是镰刀菌代谢产物，属环四肽类分子，具有广谱抗顶复亚门原虫和广谱抗肿瘤作用；丁酸钠广泛用于畜禽饲料添加剂。Smith,W.L.,and Edlind,T.D.2002.Histone deacetylase inhibitors enhance Candida albicans sensitivityto azoles and related antifungals:correlation with reduction in CDR and ERGupregulation.Antimicrob Agents Chemother 46(11):3532-3539.，公开了组蛋白去乙酰化酶抑制剂(曲古抑菌素A、制蚜菌素与丁酸钠)与唑类联用(氟康唑、伊曲康唑和咪康唑)合用，可增强抗敏感白色念珠菌的作用。
苯丁酸(Phenylbutyric acid，PBA)的钠盐苯丁酸钠，是一种I和IIa组蛋白去乙酰化酶抑制剂，属于含有苯环的脂肪酸盐，已被FDA批准用于治疗所有新生儿酶缺乏(出生后28d内表现为完全酶缺乏的)、有高血氨性脑病家族史的迟发性酶缺乏(出生的第一个月后表现为部分酶缺乏)的患者。可辅助治疗因氨基甲酰磷酸合成酶(CPS)、鸟氨酸氨甲酰基转移酶(OTC)或精氨基琥珀酸合成酶(AS)缺乏而致的慢性尿素循环紊乱导致的高氨血症。关于其抗肿瘤研究是现在研究的热点，脑肿瘤研究处于II期临床试验中，苯丁酸钠还被用于探索在卵巢癌，胰岛素抵抗，囊性纤维化及枫糖浆尿病治疗中的作用。
苯丁酸钠是前体药物，在体内可迅速代谢成苯乙酸盐，苯乙酸盐是相对无毒的抗肿瘤药物。目前的研究多集中在其作为一种组蛋白去乙酰化抑制剂诱导癌细胞调亡、抑制癌细胞增殖等方面。另外研究表明，苯丁酸(Phenylbutyric acid，PBA)具有抗革兰氏阳性菌和阴性菌作用，对于其是否具有抗真菌作用，尚无报道。
虽然已有研究表明曲古抑菌素A、制蚜菌素和丁酸钠可增强抗敏感白色念珠菌的作用，但由于不同的组蛋白去乙酰化酶抑制剂药理作用相差较大，且尚无抗真菌耐药研究报道，因此，从上述文献中不能推断出苯丁酸是否能逆转唑类抗真菌药对耐药白色念珠菌的敏感性。
发明内容
本发明的目的就是为了克服目前真菌感染和三唑类抗真菌药物耐药率增加问题，提供一种苯丁酸联合三唑类抗真菌药物的应用及其产品。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
苯丁酸联合三唑类抗真菌药物在制备抗真菌产品中的应用，所述产品为药品。
所述应用为苯丁酸联合氟康唑、伊曲康唑或伏立康唑中的两种或三种在制备抗真菌产品中的应用。
优选：所述应用为苯丁酸联合氟康唑、伊曲康唑或伏立康唑在制备抗真菌产品中的应用。
优选：所述真菌为白色念珠菌。
优选：联合应用时苯丁酸与氟康唑的最低抑菌浓度为：32μg/ml与1μg/ml；
联合应用时苯丁酸与伊曲康唑的最低抑菌浓度为：32μg/ml与0.125μg/ml；
联合应用时苯丁酸与伏立康唑的最低抑菌浓度为：16μg/ml与0.25μg/ml。
结果表明，大于32μg/ml的苯丁酸与大于1μg/ml的氟康唑联合应用或者大于32μg/ml的苯丁酸与大于0.125μg/ml的伊曲康唑联合应用或者大于16μg/ml的苯丁酸与大于0.25μg/ml的伏立康唑联合应用均有强的协同抗耐药白色念珠菌作用。
一种抗真菌产品，以苯丁酸联合氟康唑、伊曲康唑或伏立康唑为主要活性成分，所述苯丁酸与氟康唑联合时的有效浓度配比为氟康唑：苯丁酸＝1:32，所述苯丁酸与伊曲康唑联合时的有效浓度配比为伊曲康唑：苯丁酸＝1:256，所述苯丁酸与伏立康唑联合时的有效浓度配比为伏立康唑：苯丁酸＝1:64；苯丁酸与氟康唑联合时的最低抑菌浓度为：32μg/ml与1μg/ml，苯丁酸与伊曲康唑联合时的最低抑菌浓度为：32μg/ml与0.125μg/ml，苯丁酸与伏立康唑联合时的最低抑菌浓度为16μg/ml与0.25μg/ml。
本研究系统评价了苯丁酸与三唑类抗真菌药物的联合抗真菌作用，受试菌株是耐药白色念珠菌，测定方法采用微量稀释法与动态杀菌曲线法，其微量稀释法测得的结果以基于两种理论即Loewe additivity(LA)理论与BI理论的最低抑菌浓度分数法(FICI)与生长率差值法(ΔE)进行评价。由此可见，研究苯丁酸联合三唑类抗真菌药物对耐药白色念珠菌的作用，不仅具有创新性，且经过多种方法的系统评价，能够明确二者联合在抗真菌耐药中的作用，以期发现对抗耐药真菌感染的方法与手段，并且PBA是重要的药物合成中间体，来源广泛，价格低廉，若有抗真菌作用，将具有重要的意义。且苯丁酸单用具有抗念珠菌作用。
本发明采用耐药白色念珠菌细胞进行研究，利用棋盘肉汤微量稀释法，分别评价不同联合用药组合的联合抗真菌作用。具体内容如下：
A：苯丁酸与三唑类抗真菌药物联合抗耐药CA作用：采用棋盘肉汤微量稀释法测定联合用药时最低有效浓度，以FICI法选择最佳药物组合浓度及评价药物联合用药的作用。此外，为更直观地表现联合用药对耐药CA作用的程度，将联合药敏测定数据用生长百分数差值模型(ΔE)进行了进一步分析。
B：苯丁酸现在越来越多的用于临床研究，如果能在抗真菌方面发挥作用，特别是对耐药真菌感染的治疗，意义重大。本研究表明，苯丁酸联合应用三唑类抗真菌药物可产生协同抗耐药CA作用，可扩大其应用范围，具有良好的应用前景。
总之，本发明包含苯丁酸与三唑类抗真菌药物联合应用产生协同抗耐药CA的作用。上述发现为临床联合用药作为治疗耐药真菌感染的方案提供了思路。
发明人从文献阅读中发现，苯丁酸具有抗革兰氏阳性菌和阴性菌的作用，发明人通过实验研究发现苯丁酸也具有抗真菌的作用，特别是与三唑类抗真菌药物联用时具有明显的协同抗真菌作用。苯丁酸与三唑类抗真菌药物联合应用在体外均具有协同抗耐药CA作用，且效果明显。低剂量的苯丁酸可使氟康唑对耐药CA的MIC值从512μg/ml以上降至1μg/ml，使伊曲康唑对耐药CA的MIC值从8μg/ml降到0.125μg/ml，使伏立康唑的MIC值从8μg/ml降到0.25μg/ml，因此，苯丁酸除具有抗革兰氏阳性菌和阴性菌作用，还能对增强三唑类抗真菌药物对真菌细胞的抗菌作用、使其在抗感染领域有新的用途。
本发明与现有技术相比，具有以下优点与效果：
1.本发明表明，苯丁酸与三唑类抗真菌药物联合应用时，可以增强三唑类抗真菌药物对耐药CA的抗菌活性，可以产生协同抗真菌作用，并能够逆转耐药CA对氟康唑的耐药性，为新药的开发及老药新用提供了研究方向。对FLC、ITC、VRC共同耐药的CA(MIC≥512μg/ml)，联合用药可使其最低抑菌浓度明显降低，32μg/ml的PBA与1μg/ml的FLC合用，32μg/ml的PBA与0.125μg/ml的ITC合用，及16μg/ml的PBA与0.25μg/ml的VRC联合应用，均可以杀灭80％以上的真菌，浓度再增大，效果更强。
2.苯丁酸在临床上的广泛应用，苯丁酸对三唑类抗真菌药物的抗真菌的增效作用，可扩大其应用范围，并且降低FLC、ITC、VRC的最低有效抑菌浓度，降低抗真菌药物的用药量，从而降低药物的不良反应的发生，克服临床上真菌耐药问题。
3.真菌耐药机制及其复杂，尚有许多机制仍不是很清楚，如能将苯丁酸对三唑类抗真菌药物的增敏机制研究透彻，必定能为克服真菌耐药问题提供新的思路。
附图说明
图1为ΔE法评价氟康唑联合苯丁酸应用协同抗耐药白色念珠菌作用结果的三维图；FLC：氟康唑，PBA：苯丁酸，X轴代表FLC的浓度，Y轴代表苯丁酸的浓度，Z轴代表的是各个药物组合下的ΔE值，高于或低于平面(ΔE＝0)的值分别表示协同或拮抗作用，平面周围的值表示无关作用，图右侧的彩色编码条中，越靠近上端说明协同作用越强；
图2为ΔE法评价伊曲康唑联合苯丁酸应用协同抗耐药白色念珠菌作用结果的三维图；ITC：伊曲康唑，PBA：苯丁酸，X轴代表ITC的浓度，Y轴代表苯丁酸的浓度，Z轴代表的是各个药物组合下的ΔE值，高于或低于平面(ΔE＝0)的值分别表示协同或拮抗作用，平面周围的值表示无关作用，图右侧的彩色编码条中，越靠近上端说明协同作用越强；
图3为ΔE法评价伏立康唑联合苯丁酸应用协同抗耐药白色念珠菌作用结果的三维图；VRC：伏立康唑，PBA：苯丁酸，X轴代表VRC的浓度，Y轴代表苯丁酸的浓度，Z轴代表的是各个药物组合下的ΔE值，高于或低于平面(ΔE＝0)的值分别表示协同或拮抗作用，平面周围的值表示无关作用，图右侧的彩色编码条中，越靠近上端说明协同作用越强；
图4为氟康唑联合PBA应用时的抗耐药白色念珠菌CA的时间-杀菌曲线；FLC：氟康唑，PBA：苯丁酸，X轴代表取样时间点，Y轴代表用XTT方法测定的OD值；
图5为伊曲康唑联合PBA应用时的抗耐药白色念珠菌CA的时间-杀菌曲线；ITC：伊曲康唑，PBA：苯丁酸，X轴代表取样时间点，Y轴代表用XTT方法测定的OD值；
图6为伏立康唑联合PBA应用时的抗耐药白色念珠菌CA的时间-杀菌曲线；VRC：伏立康唑，PBA：苯丁酸，X轴代表取样时间点，Y轴代表用XTT方法测定的OD值。
具体实施方式
下面结合附图与实施例对本发明作进一步说明。
实施例苯丁酸与三唑类抗真菌药物联合抗真菌作用测定
1.材料
1.1药品与试剂
氟康唑(Fluconazole，FLC)，美仑生物有限公司；
伏立康唑(Voriconazole,VRC)，美仑生物有限公司；
伊曲康唑(Itraconazole,ITC)，美仑生物有限公司；
苯丁酸(Phenylbutyric acid，PBA)：韶远化学科技(上海)有限公司；
科玛嘉念珠菌显色培养基，郑州博赛生物工程有限公司；
TTC-沙保罗琼脂，杭州天和微生物试剂有限公司；
酵母膏，北京奥博星生物技术有限责任公司；
蛋白胨，北京奥博星生物技术有限责任公司；
葡萄糖，国药集团化学试剂有限公司；
琼脂粉，北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司；
氢氧化钠，国营山东单县有机化工厂，批号940420；
磷酸二氢钾，上海新宝精细化工厂，批号200602132；
二甲基亚砜(DMSO)，国药集团化学试剂有限公司；
RPMI 1640原料药粉，美国GIBCO公司；
3-(N-吗啉代)丙磺酸(MOPS)，济南朋远生物技术有限公司；
甲萘醌(Menadione)，美国Sigma公司；
XTT(二甲氧唑黄)，南京旋光科技有限公司；
乳酸林格氏液(复方氯化钠溶液)，山东鲁抗辰欣药业有限公司；
丙酮，上海振兴化工一厂，批号200209510；
XTT(3,3'-[1-(苯氨酰基)-3,4-四氮唑]-二(4-甲氧基-6-硝基)苯磺酸钠)-甲萘醌溶液的配制：用分析天平称取XTT粉末0.0500g，溶解于100ml已灭菌的林格氏液配成0.5mg/ml的溶液，用0.22μm滤膜针头滤过灭菌；加入10μl的10mmol/L的甲萘醌丙酮溶液(取甲萘醌0.0860g溶解于5ml丙酮)，使其终浓度为1μmol/L，摇匀，4℃避光保存。
药物溶液：氟康唑用无菌蒸馏水溶解，伊曲康唑、伏立康唑、与苯丁酸用二甲基亚砜(DMSO)溶解，分别配成2,560μg/ml的储备液，用0.22μm微孔滤膜针头过滤，分装到1.5ml的无菌EP管中。所有药液于-20℃冰箱保存，备用。
PBS(磷酸盐缓冲液)：用北京鼎国昌盛生物技术有限公司的PBS磷酸盐缓冲剂(粉剂)，小包装一袋溶于1L蒸馏水中，即配成0.01M，PH7.4的PBS磷酸盐缓冲液，可常温状态下长期保存，用前121℃高温高压湿热灭菌30min，冷却备用。
RPMI(Roswell Park Memorial Institute)1640液体培养液：用天平称取RPMI1640(含L-谷氨酰胺，不含碳酸氢钠)粉末4.16g，加入8.00g分析纯葡萄糖(含糖终浓度2％)及MOPS(3-(N-吗啉基)丙磺酸)粉13.16g，加蒸馏水至400ml，混合均匀后，加入8.00g的碳酸氢钠，在22℃用1mol/l的氢氧化钠溶液调节pH为7.0±0.1，，放入4℃的冰箱中，用前用无菌的0.22μm混合纤维膜过滤灭菌。
1.2仪器
1.3实验菌株
质控菌株：白念珠菌ATCC10231，山东大学药理教研室惠赠；
实验菌株：省立医院、千佛山医院临床分离的白色念珠菌；
菌株鉴定：实验用菌株在科玛嘉念珠菌显色培养基35℃下培养48小时，菌落呈绿色或翠绿色的所有菌株再经山东省疾病预防控制中心微生物研究室以标准微生物学方法鉴定为白色念珠菌。
菌液制备：-20℃下保存的白色念珠菌室温下解冻，接种到TTC-沙保罗琼脂培养基上，35℃培养24～48h，取发育良好的单一菌落再次接种，35℃培养24h，以保证菌株处于生长期。选取若干单个较大菌落，PBS配制成菌悬液，经涡旋器振荡均匀后以中国细菌浊度标准管比浊，调整样品管与标准管浊度一致，此时白色念珠菌的菌浓度约为5×106CFU/ml，系列稀释即得到工作菌液，并以活菌计数进行浓度验证。
2.内容与方法
2.1氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑单用抗白色念珠菌作用测定(MIC值测定)
根据CLSI M27-A2方案的棋盘法，以RPMI-1640液体培养基稀释药液使其成为4倍工作浓度，筛选FLC浓度应用范围。用无菌水溶解的FLC终浓度为512-2μg/ml，用DMSO溶解的ITC、VRC的终浓度为16-0.06μg/ml。按浓度从低到高的顺序吸取FLC、ITC、VRC药液50μl，分别加入96孔平板的第2～10列，第1列加入50μl RPMI1640，然后加入96孔平板的第C～A行各50μl RPMI1640培养液。最后除第11、12列外各孔再分别加100μl菌液。第12列加入200μlRPMI1640培养液作为空白对照。将96孔平板置35℃恒温培养箱中培养24h后，用XTT负载后2h，以酶标仪测定OD值并记录结果。所有实验重复三次。
用上述方法测定苯丁酸单用抗白色念珠菌作用。
2.2氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑与苯丁酸联合抗白色念珠菌作用测定
根据CLSI M27-A2方案的棋盘法，以RPMI-1640液体培养基稀释药液使其成为4倍工作浓度，筛选PBA与FLC浓度应用范围，即PBA的终浓度分别为64～1μg/ml，FLC、ITC、VRC的终浓度分别为64～0.125μg/ml，4～0.007μg/mL、4～0.007μg/mL。按浓度从低到高的顺序吸取FLC、ITC、VRC药液50μl，分别加入96孔平板的第2～11列，按浓度从低到高的顺序吸取PBA药液50μl，分别加入96孔平板的第G～A行，除A12外各孔再分别加100μl菌液，其余不足200μl的孔用RPMI-1640培养液补足。其中H1为生长对照，只含菌液不含药物，第12列为空白对照，只含药液不含菌液200μl RPMI1640培养液。将96孔平板置35℃恒温培养箱中培养24h后，用XTT负载后2h，以酶标仪测定OD值并记录结果。所有实验重复三次。
2.2.1时间-杀菌曲线法
将浓度为2,560μg/ml的氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑和PBA储备液以RPMI 1640液体培养基稀释成10倍工作浓度。
取TTC-沙保罗琼脂培养基上传代两次的实验菌株，挑取单个较大菌落，以PBS制成菌悬液，采用中国细菌浊度标准进行比浊，当标准管与样品管浓度一致时，菌液初始浓度约为5×106CFU/ml，以RPMI-1640稀释菌液为10倍工作浓度，并通过活菌计数法进行浓度验证。
取上述制备的药液500μl加入到10ml无菌的EP管内，再加入RPMI 1640液体培养基至液体总体积为4.5ml；此时取按上述方法制备的菌液500μl加入到此4.5ml含(或不含)药物的培养基内，震荡混匀。本实验分为四组，即：生长对照组(不加药)、PBA药物单用组、氟康唑单用组、PBA与氟康唑联合用药组，共4个体系。每个体系总体积为5ml，体系内氟康唑、PBA的终浓度分别为1μg/ml和32μg/ml，体系内伊曲康唑、PBA终浓度分别0.125μg/ml和32μg/ml，体系内伏立康唑、PBA终浓度分别0.125μg/ml和32μg/ml，菌液终浓度约为5×104CFU/ml。将制备完毕的体系于35℃静置培养，于药物作用的第0、12、18、24、36、48h的时间点取样测定。
2.3评价方法与结果判定
2.3.1Loewe additivity(LA)理论
Loewe additivity(LA)理论的基本思想认为药物不可能和它本身发生相互作用，因此将药物单用或联用产生相同药效的浓度(等效位点)进行比较。其分析方法分数抑菌浓度指数法(fractional inhibitory concentration index,FICI)，表述如下：
ΣFIC＝FICA+FICB＝CA/MICA+CB/MICB
MICA和MICB分别是药物A和B单用时的最小抑菌浓度，CA与CB为两药联用时达到相同药效时各自的浓度。FICI>4为拮抗作用，FICI在0.5与4之间为相加或无关作用，FICI≤0.5定义为协同作用。
2.3.2BI理论
BI理论是以ΔE(药物各浓度下真菌生长百分率的理论值与实验值之差)为数据分析模型。ΔE模型表述如下：
△E＝EA×EB-Ecomb
其中，EA为A药单用时真菌的生长率，EB为B药单用时真菌的生长率，Ecomb为A药和B药联用时真菌的生长率。结果分析时，通过ΣSYN与ΣANT，即96孔板中所有正值△E和负值△E的加和为指标来判断两种药物的相互作用。当ΔE的绝对值<100％时，表示为弱协同或弱拮抗作用；当绝对值介于100％与200％之间时，表示为中等协同或拮抗作用，当绝对值大于200％时，表示为为强协同或拮抗作用。
3.结果
3.1苯丁酸单用抗白色念珠菌作用测定(MIC值测定)
各孔中真菌生长百分数的计算方法为：
真菌生长百分数＝(各孔OD值-空白对照孔OD值)/生长对照孔OD值
按上述公式计算平板中各孔真菌生长百分数，取能够抑制真菌生长80％的最低联用药物浓度为判读终点，如果真菌生长率不恰好等于20％，取与之最接近的药物联合孔为判读终点。
氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑的浓度分别为512μg/ml，8μg/ml，8μg/ml时，真菌生长率小于20％，因此FLC单用抗白色念珠菌的MIC≥512μg/ml，ITC和VRC单用抗白色念珠菌的MIC≥8μg/ml。苯丁酸抗白色念珠菌的浓度值为128μg/ml，此时真菌生长率小于20％，因此PBA单用抗白色念珠菌的MIC≥128μg/ml。
3.2氟康唑、伊曲康唑、或伏立康唑与抗菌药物的联合抗真菌作用结果
3.2.1氟康唑、伊曲康唑、或伏立康唑与苯丁酸联合的最低有效菌浓度
各孔中真菌生长百分数的计算方法为：
真菌生长百分数＝(各孔OD值-空白对照孔OD值)/生长对照孔OD值
按上述公式计算平板中各孔真菌生长百分数，取能够抑制真菌生长80％的最低联用药物浓度为判读终点，如果真菌生长率不恰好等于20％，取与之最接近的药物联合孔为判读终点。
FLC、ITC、VTC与PBA的联合抗真菌作用，对耐药白色念珠菌，则呈现强协同作用。其中耐药株CA10平板中的生长百分数实验结果如表1，表2，表3，表4所示；由表5、6、7可知，唑类与PBA的联合，对敏感型白色念珠菌，不起作用。
表1用棋盘表示FLC与PBA的联合用药抗白色念珠菌CA10生长百分率(以FICI法换算的药物最佳作用组合用灰色标出)
表2用棋盘表示ITC与PBA的联合用药抗白色念珠菌CA10生长百分率(以FICI法换算的药物最佳作用组合用灰色标出)。
表3用棋盘表示VRC与PBA的联合用药抗白色念珠菌CA10生长百分率(以FICI法换算的药物最佳作用组合用灰色标出)。
3.2.2FICI法评价FLC、ITC、VRC与苯丁酸联用的抗菌作用
表4以FICI法和ΔE法评价唑类与PBA联合用药抗真菌作用
注解：MIC：最低抑菌浓度；FLC：氟康唑；VRC，伏立康唑；ITC，伊曲康唑；PBA:苯丁酸；MICA：药物单用三唑类抗真菌药物的最低抑菌浓度；MICB：药物单用时苯丁酸的最低抑菌浓度；CA：药物联用时三唑类抗真菌药物的最低抑菌浓度；CB：药物联用时苯丁酸的最低抑菌浓度。
表5用棋盘表示FLC与PBA的联合用药抗敏感性的白色念珠菌CA137生长百分率(以FICI法换算的药物最佳作用组合用灰色标出)。
表6用棋盘表示ITC与PBA的联合用药抗敏感性的白色念珠菌CA137生长百分率(以FICI法换算的药物最佳作用组合用灰色标出)。
表7以FICI法评价唑类与PBA联合用药抗敏感性的白色念珠菌CA137作用
注解：MIC：最低抑菌浓度；FLC：氟康唑；ITC，伊曲康唑；PBA:苯丁酸；MICA：药物单用三唑类抗真菌药物的最低抑菌浓度；MICB：药物单用时苯丁酸的最低抑菌浓度；CA：药物联用时唑类抗真菌药物的最低抑菌浓度；CB：药物联用时苯丁酸的最低抑菌浓度；IND:无关或相加作用。
3.2.3ΔE法评价评价氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑与苯丁酸的联合抗白色念珠菌的协同作用
ΔE模型的评价指标为ΣSYN与ΣANT，由表4可以看出，各组∑SYN和∑ANT的总和均远远大于200％，表现为强的协同作用，其中苯丁酸和三唑类抗真菌药物联合抗白色念珠菌的三维图如图1-3所示。以Matlab软件处理氟康唑和苯丁酸联合应用对耐药白色念珠菌协同作用结果做三维效果图。
从图中可以直观的看出不同药物组合均具有强烈的协同作用。此图片与上述数值分析具有一致性。
3.2.4时间杀菌曲线法评价三唑类抗真菌药物与苯丁酸协同作用结果
将各个时间点联合抗真菌作用的结果连接成曲线，可观察联合用药后的动态作用效果，如图4-6所示：在5×104的菌液中在12h之前加药组和对照组OD值的变化不大，与对照组相比，12h之后含有氟康唑的各组开始出现生长延迟，其中FLC与PBA联用组处理的真菌生长延迟更明显。与氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑单用组相比，联用组在作用48h内对真菌的抑制效果最好。
上述虽然结合附图对本发明的具体实施方式进行了描述，但并非对本发明保护范围的限制，所属领域技术人员应该明白，在本发明的技术方案的基础上，本领域技术人员不需要付出创造性劳动即可做出的各种修改或变形仍在本发明的保护范围以内。
Claims (7)
1.一种苯丁酸联合三唑类抗真菌药物在制备抗真菌产品中的应用，其特征是：
所述三唑类抗真菌药物为氟康唑、伊曲康唑或伏立康唑中的一种或多种，所述真菌为白色念珠菌。
2.如权利要求1所述的应用，其特征是：所述苯丁酸与氟康唑联合应用时的最低抑菌浓度为：32μg/ml与1μg/ml。
3.如权利要求1所述的应用，其特征是：所述苯丁酸与伊曲康唑联合应用时的最低抑菌浓度为：32μg/ml与0.125μg/ml。
4.如权利要求1所述的应用，其特征是：所述苯丁酸与伏立康唑联合应用时的最低抑菌浓度为：16μg/ml与0.25μg/ml。
5.如权利要求1所述的应用，其特征是：所述苯丁酸与氟康唑联合时的有效浓度配比为氟康唑：苯丁酸=1:32，所述苯丁酸与伊曲康唑联合时的有效浓度配比为伊曲康唑：苯丁酸=1:256，所述苯丁酸与伏立康唑联合时的有效浓度配比为伏立康唑：苯丁酸=1:64。
6.一种抗真菌产品，其特征是：以苯丁酸联合氟康唑、伊曲康唑或伏立康唑为主要活性成分。
7.如权利要求6所述的抗真菌产品，其特征是：所述苯丁酸与氟康唑联合应用时的最低抑菌浓度为：32μg/ml与1μg/ml；苯丁酸与伊曲康唑联合应用时的最低抑菌浓度为：32μg/ml与0.125μg/ml；苯丁酸与伏立康唑联合应用时的最低抑菌浓度为：16μg/ml与0.25μg/ml。
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