CN105477635A

CN105477635A - 一种治疗持续性慢性疼痛的靶点和药物

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Publication number: CN105477635A
Application number: CN201410468494.6A
Authority: CN
Inventors: 章卫平; 任安经; 汪凯; 麻献华; 曹冬梅; 谢志芳
Original assignee: Second Military Medical University SMMU
Current assignee: Second Military Medical University SMMU
Priority date: 2014-09-15
Filing date: 2014-09-15
Publication date: 2016-04-13

Abstract

本发明一种治疗持续性慢性疼痛的靶点和药物属于医药技术领域，本发明提供了锌指蛋白ZBTB20在制备预防或治疗慢性疼痛药物中的应用，由于锌指蛋白ZBTB20可以同时调控多种TRP通道的表达，并可影响多种伤害性刺激引起的疼痛反应，因此可以作为开发预防或治疗慢性疼痛药物的很好的干预靶点。

Description

一种治疗持续性慢性疼痛的靶点和药物

技术领域：

本发明属于医药技术领域，具体的说，涉及一种治疗持续性慢性疼痛的靶点，和根据该靶点设计的药物。

背景技术：

疼痛是机体对损伤组织或潜在的损伤产生的一种不愉快的反应，是一种复杂的生理心理活动，很多疾病或病症都会出现疼痛症状。疼痛可分为急性痛和慢性疼痛两大类，急性痛是正常情况下对于伤害性热、机械和化学刺激的急性感觉和反应，慢性疼痛是机体在病理情况下产生的痛觉，它可持续数周或数月、甚至数年。慢性疼痛是当今危害人类健康和降低人们生活质量的最常见临床病症之一，已成为临床和基础科学研究的热点问题。

现有的镇痛药物，如阿片类药物吗啡，虽可在短时间内产生止痛效果，但有便秘、恶心、呕吐等副作用，并且由于突然中止给药或减少给药而带来戒断症状，成瘾性带来的社会问题尤为突出。另外，在吗啡慢性给药时，胆囊收缩素或神经肽等抗阿片类物质增强，致使吗啡的镇痛效果下降，形成镇痛耐药性，因此，需要开发新型的镇痛药或镇痛措施来替代吗啡类药物，以减轻疼痛患者的痛苦。

中枢神经元如脊髓、背根神经节(dorsalrootganglion,DRG)和三叉神经节中的神经元是调控慢性疼痛发生的重要部位，这些神经元可塑性改变导致中枢敏化是慢性疼痛形成的关键。DRG中瞬时感受器电位(transientreceptorpotential，TRP)家族的TRPV1、TRPA1和TRPM8通道与疼痛密切相关，而且在慢性疼痛中上述通道表达增加，是痛觉过敏的重要原因(BredersonJD,KymPR,SzallasiA.TargetingTRPchannelsforpainrelief.EurJPharmacol.2013；716(1-3):61-76.)。如果能够同时抑制TRPV1、TRPA1和TRPM8通道的表达，就有望对慢性疼痛起到很好的预防和长期的镇痛效果，并且不会产生抗药性及成瘾性，或其它不良副作用。

目前在国内外尚未见利用抑制上述TRP通道表达进行疼痛预防和治疗的文献报道。

锌指蛋白ZBTB20(GeneBank号AL050276)，是从人树突状细胞中发现的BTB/POZ锌指蛋白家族新成员，广泛表达于肝脏、脂肪、肌肉等正常组织(ZhangW,MiJ,LiN,etal.IdentificationandcharacterizationofDPZF,anovelhumanBTB/POZzincfingerproteinsharinghomologytoBCL-6.BiochemBiophysResCommun.2001；282(4):1067-73.)，研究发现ZBTB20对个体发育和血糖代谢具有重要的调节作用(SutherlandAP,ZhangH,ZhangY,etal.ZincfingerproteinZbtb20isessentialforpostnatalsurvivalandglucosehomeostasis.MolCellBiol.2009；29(10):2804-15.)，而且ZBTB20是调控甲胎蛋白基因表达的关键分子(XieZ,ZhangH,TsaiW,etal.ProcNatlAcadSciUSA.2008；105(31):10859-64.)。此外，ZBTB20在神经系统高表达，在调控海马CA1神经元的细胞命运决定和海马发育中起重要作用(XieZ,MaX,JiW,etal.Zbtb20isessentialforthespecificationofCA1fieldidentityinthedevelopinghippocampus.ProcNatlAcadSciUSA.20106；107(14):6510-5.)。

目前，ZBTB20与疼痛的关系尚未见文献报道。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种治疗持续性慢性疼痛的靶点，和根据该靶点设计的药物。本发明的另一目的在于提供锌指蛋白ZBTB20的新的医药用途。本发明的另一目的还在于提供一种治疗持续慢性疼痛的新方法。

本发明人发现锌指蛋白ZBTB20在DRG中与疼痛相关的伤害性感受神经元中特异性高表达，并且伤害性感受神经元特异性敲除ZBTB20后TRPV1、TRPA1和TRPM8通道表达均明显降低，本发明人推测锌指蛋白ZBTB20可能为慢性疼痛的治疗提供了很好的靶点。

本发明提供一种治疗持续性慢性疼痛的靶点，即锌指蛋白ZBTB20。

本发明还提供了根据该该靶点设计的药物，该药物是抑制或沉默锌指蛋白ZBTB20表达的药物。

进一步地，本发明提供了锌指蛋白ZBTB20在制备预防或治疗慢性疼痛药物中的应用。

本发明涉及的锌指蛋白ZBTB20在制备预防或治疗慢性疼痛药物中的应用，具体的是锌指蛋白ZBTB20可作为预防或治疗疼痛的药物的干预靶点。

本发明涉及的锌指蛋白ZBTB20在制备预防或治疗慢性疼痛药物中的应用，具体的是锌指蛋白ZBTB20可以同时调控多种TRP通道(TRPV1、TRPA1和TRPM8)的表达，并可影响多种伤害性刺激引起的疼痛反应。

进一步地，本发明还提供一种治疗持续慢性疼痛的新方法。

所述的治疗持续慢性疼痛的新方法，是给予患者有效量的抑制锌指蛋白ZBTB20表达或活性的药物。所述的ZBTB20的抑制剂是指任何可以抑制ZBTB20的活性、破坏ZBTB20的稳定性、降低ZBTB20有效作用时间、或起到阻碍ZBTB20的转录和翻译的物质，这些物质可以用于本发明中。所述抑制剂包括(但不限于)：拮抗剂，阻断剂等。

具体的给药方式，可采取RNA干扰、直接裸DNA注射法、脂质体包裹DNA直接注射法、金包被DNA基因枪轰击法、繁殖缺陷细菌携带质粒DNA法、复制缺陷腺病毒携带目的DNA法、PEG修饰蛋白药物注射法、脂质体包裹蛋白静脉注射法、蛋白微球制剂皮下注射法等。

本发明的实验证明：锌指蛋白ZBTB20在伤害性感受神经元中高表达(图1)，在建立的伤害性感受神经元ZBTB20特异性敲除(peripheralnociceptor-specificZBTB20knockout,PN-ZB20KO)小鼠(图2，3)，DRG神经元的发育和分化并未受影响，但多种TRP通道如TRPV1、TRPA1、TRPM8表达均明显降低(图4)。行为学检测显示，PN-ZB20KO小鼠运动能力与对照小鼠无明显差别(图5),但是对热刺激(图6)、冷刺激(图7)、机械刺激(图8)和免疫刺激(图9)引起的疼痛反应减弱。这说明ZBTB20可以同时调控TRPV1、TRPA1、TRPM8的表达，并在疼痛中起着很重要的作用。ZBTB20可以作为开发预防或治疗慢性疼痛的药物的重要干预靶点。

根据本发明，锌指蛋白ZBTB20，其氨基酸序列如GENBANK号AL050276所示，可以是天然存在的，比如其可被分离纯化自哺乳动物。此外，所述的ZBTB20可以也可以是人工制备的，比如可以根据常规的基因工程技术来产生重组的ZBTB20。(ZhangW,MiJ,LiN,etal.IdentificationandcharacterizationofDPZF,anovelhumanBTB/POZzincfingerproteinsharinghomologytoBCL-6.BiochemBiophysResCommun.2001；282(4):1067-73)。

术语“慢性疼痛”，是相对于急性疼痛而言的，具体是指机体在病理情况下产生的痛觉，它可持续数周或数月、甚至数年。本领域在预防或治疗“疼痛”的药物筛选中，通常选用的热刺激(热板实验、甩尾实验)、冷刺激(双相温度实验、冷板实验)、机械刺激(弗莱毛实验、电子压痛实验)、免疫刺激(福尔马林实验、芥子油实验)引起的疼痛反应。

术语“伤害性感受神经元”，是指将伤害性刺激转换成神经冲动的初级感觉神经元。钠通道Na_V1.8在85％以上的伤害性感受神经元均有表达，本发明人通过ZBTB20^flox小鼠和Nav1.8-Cre小鼠交配获得伤害性感受神经元ZBTB20特异性敲除小鼠。本发明中，ZBTB20^flox小鼠是本发明人构建的，Nav1.8-Cre小鼠从美国Jackson实验室购买获得。

相比于现有镇痛药作用靶点，本发明的有益效果如下：本发明提供了锌指蛋白ZBTB20在制备预防或治疗慢性疼痛药物中的应用，由于锌指蛋白ZBTB20可以同时调控多种TRP通道的表达，并可影响多种伤害性刺激引起的疼痛反应，因此可以作为开发预防或治疗慢性疼痛药物的很好的干预靶点。

目前，全世界约有三分之一的人群患有疼痛，疼痛不仅是一个严重的医学问题，也已经成为一个日益严重的社会问题，每年用于治疗疼痛的费用大大增加，使社会的经济负担更沉重，因此有效地治疗疼痛是一个迫切需要解决的问题，所以针对抑制TRP表达来减轻慢性疼痛的方法将有广阔的市场应用前景。

附图说明：

图1.ZBTB20在成年小鼠DRG中的表达,

其中a为ZBTB20在neurofilament标记阳性的神经元几乎不表达，b为ZBTB20在peripherin标记阳性的神经元高表达，c为ZBTB20在Nav1.8标记阳性的神经元高表达；

图2.基因型鉴定，

常规方法提取小鼠尾巴基因组DNA，用ZBTB20等位基因的P1和P2引物，以及Cre基因的引物进行PCR扩增，将扩增产物进行电泳，得到的700bp代表ZBTB20野生型等位基因，800bp条带表示含有Loxp位点的ZBTB20等位基因，400bp条带表示Cre基因。图中从左到右的基因型依次为F/F/Cre，+/+，F/+和F/+/Cre。

图3.PN-ZB20KO小鼠模型的建立，

其中a为Real-timePCR检测显示PN-ZB20KO小鼠DRG中ZBTB20mRNA表达明显低于对照小鼠，而脊髓和大脑组织与对照小鼠无明显差别，b为WesternBlot检测显示PN-ZB20KO小鼠DRG中ZBTB20蛋白水平明显低于对照小鼠，c为Nav1.8与ZBTB20免疫双标检测显示对照小鼠DRG中大部分Nav1.8阳性神经元表达ZBTB20，而PN-ZB20KO小鼠Nav1.8阳性神经元中几乎无ZBTB20表达，上述结果表明PN-ZB20KO小鼠模型成功建立，**P<0.01vs对照小鼠；

图4.WesternBlot检测显示PN-ZB20KO小鼠DRG中TRPV1、TRPA1、TRPM8蛋白表达明显降低，

其中a为WesternBlot条带图，b为WesternBlot条带灰度量化值柱状图，**P<0.01vs对照小鼠；

图5.PN-ZB20KO小鼠与对照小鼠运动能力无明显差别，

转棒实验检测显示PN-ZB20KO小鼠与对照小鼠从转棒中跌落潜伏期无差别，说明两者运动能力无明显差别；

图6.PN-ZB20KO小鼠对热刺激引起的疼痛反应明显减弱，

其中a为热板实验检测显示PN-ZB20KO小鼠对热刺激引起的疼痛反应明显减弱，b为甩尾实验检测显示PN-ZB20KO小鼠对热刺激引起的疼痛反应明显减弱，*P<0.05vs对照小鼠，**P<0.01vs对照小鼠；

图7.PN-ZB20KO小鼠对冷刺激引起的反应明显减弱，

其中a为双相温度选择实验检测显示PN-ZB20KO小鼠对15-25℃之间温度的回避程度减弱，b-d为冷板(0℃)实验检测显示PN-ZB20KO小鼠对冷刺激的反应次数(b)、跳跃次数(c)和跳跃比率(d)均明显少于对照小鼠，*P<0.05vs对照小鼠，**P<0.01vs对照小鼠；

图8.PN-ZB20KO小鼠对机械刺激引起的疼痛反应明显减弱，

其中a为PN-ZB20KO小鼠对弗莱毛机械刺激引起的疼痛反应明显减弱，b为PN-ZB20KO小鼠对Randall-Selitto压痛仪引起的疼痛反应明显减弱，**P<0.01vs对照小鼠；

图9.PN-ZB20KO小鼠对免疫刺激引起的疼痛反应明显减弱，

其中a为小鼠足底注射0.5％福尔马林各时间点对免疫刺激引起的疼痛反应,b为小鼠足底注射0.5％福尔马林后0-10min和10-60min两个时间段对免疫刺激引起的疼痛反应，PN-ZB20KO小鼠对足底注射0.5％福尔马林引起的免疫痛反应明显减弱，c为PN-ZB20KO小鼠对足底注射mustardoil引起的免疫痛反应明显减弱，*P<0.05vs对照小鼠，**P<0.01vs对照小鼠。

具体实施方式：

以下结合附图和具体实施例，对本发明作进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。

实施例1.ZBTB20在DRG中的表达特点

取DRG得常规石蜡切片，经煮沸法修复抗原后，用兔抗ZBTB20多克隆抗体(ZhangW,MiJ,LiN,etal.IdentificationandcharacterizationofDPZF,anovelhumanBTB/POZzincfingerproteinsharinghomologytoBCL-6.BiochemBiophysResCommun.2001；282(4):1067-73)、羊抗peripherin多克隆抗体(1:200,SantaCruzBiotechnology,Inc,CA,USA)、兔抗neurofilament多克隆抗体(1:1000,Sigma-Aldrich,MO,USA),兔抗Nav1.8抗体(1:1,000；AlomoneLabsLtd,Jerusalem,Israel)，然后用相应的荧光素标记的二抗(Alexa594或Alexa488标记的抗兔或抗羊单抗，购自Vector公司)孵育，漂洗后封片，在荧光显微镜下观察染色结果。结果显示ZBTB20在neurofilament抗体标记阳性的大神经元几乎不表达(图1a)，而在peripherin抗体标记阳性的小神经元高表达(图1b)，同时ZBTB20在Nav1.8抗体标记阳性的伤害性感受神经元高表达(图1c)。

实施例2.伤害性感受神经元ZBTB20小鼠(PN-ZB20KO)小鼠模型的建立

(1)构建PN-ZB20KO小鼠模型

选择ZBTB20的第6个外显子作为基因打靶的靶点，构建第6个外显子两侧翼内含子含有loxp位点的打靶载体，转染小鼠胚胎干细胞(ES)，筛选同源重组克隆，将重组的阳性克隆ES细胞注射至小鼠的囊胚内，然后移植至假孕小鼠宫内，发育为嵌合鼠，经过交配得到携带loxp位点的ZBTB20等位基因小鼠，将此小鼠与精蛋白(protamine)启动子Cre转基因小鼠交配，筛选通过同源重组去除新霉素抗性基因Neo但仍保留完整的ZBTB20第6外显子及其侧翼Loxp位点的lox小鼠；再将这种小鼠与携带Nav1.8启动子Cre转基因小鼠交配，在表达Nav1.8的神经元通过Cre介导的同源重组特异性剔除ZBTB20基因的第6外显子。

(2)基因型鉴定

提取小鼠尾巴基因组DNA，用ZBTB20等位基因的P1和P2引物，序列分别是5’GGCACCCTTTAAATCCAATCAT3’和CTCTCCCCTCCTCCCTCTG3’,以及Cre基因的引物(分别是5’GGCGGATCCGAAAAGAAAA3’和5’CAGATGGCGCGGCAACACC3’)进行PCR扩增，将扩增产物进行电泳，得到的700bp代表ZBTB20野生型等位基因，800bp条带表示含有Loxp位点的ZBTB20等位基因，400bp条带表示Cre基因，从而对小鼠的基因型进行综合判断。图2中从左到右的基因型依次为F/F/Cre，+/+，F/+和F/+/Cre。

(3)ZBTB20敲除效率和特异性检测

提取F/F/Cre小鼠DRG、脊髓和大脑皮层的基因组DNA，进行PCR扩增，分析在各神经组织中ZBTB20基因剔除的特异性及效率，图3a显示PN-ZB20KO小鼠DRG中ZBTB20mRNA表达明显低于对照小鼠，而脊髓和大脑组织与对照小鼠无明显差别。

提取DRG中的蛋白，用BCA试剂盒进行蛋白定量。取适量样品，加入等体积的2×上样缓冲液混匀，在100℃沸水中煮5min，各组取15μg样品进行SDS一聚丙烯酰胺凝胶(5％浓缩胶、12％分离胶)电泳分离，先用100V电泳待溴酚至浓缩胶底后改用120V电泳，当溴酚蓝距离分离胶底1cm时停止电泳。分离的蛋白在250mA条件下转膜150min，将目的蛋白转移到NC膜上，用TBST洗膜，室温下用新配的5％脱脂奶粉封闭作用3h，TBST洗膜后分别加入TBST稀释的1抗[anti-ZBTB20antibody9A10(1:1000)和anti-α-Tubulinantibody(1:8000,Sigma-Aldrich,MO,USA)]4℃过夜；TBST洗涤3×20min，加入TBST稀释的辣根过氧化物酶标记的2抗(1:2000)室温孵育2h，TBST洗涤2×20min，用化学发光剂避光反应3min，将NC膜在暗室中曝光。以α-Tubulin作为内参照，统计各组蛋白与α-Tubulin值的比值。WesternBlot检测显示KO小鼠DRG中ZBTB20表达显著降低(图3b)。

免疫双标检测证实KO小鼠DRG中伤害性感受神经元中ZBTB20几乎全部被敲除(图3c)。上述结果说明PN-ZB20KO模型成功建立。

实施例3.运动能力和疼痛的评价

(1)转棒实验

实验动物：实施例2得到的PN-ZB20KO小鼠(n＝10)；对照小鼠(n＝10)。

实验方法：将小鼠置于转棒装置的旋转杆上，测定其从旋转杆上滑落的时间，即潜伏期。

本实验测定动物在不同旋转速度(4-40r/min)下的潜伏期，测试2次，在计算时取其平均值。

实验结果：PN-ZB20KO小鼠(n＝10)与对照小鼠(n＝10)转棒实验中潜伏期无明显差别(图5)，提示两者运动能力无显著差异。

(2)热板实验

实验动物：实施例2得到的PN-ZB20KO小鼠(n＝17)；对照小鼠(n＝17)。

实验方法：将动物置于可以加热的平板上，动物感受到一定热度后，即会舔它的脚爪或跳起来，记录从刺激开始到动物反应的时间，即潜伏期。

实验结果：PN-ZB20KO小鼠(n＝17)在52.5℃和55℃的热板中潜伏期明显长于对照小鼠(n＝17)(图6a)，提示PN-ZB20KO小鼠对热刺激引起的疼痛反应减弱。

(3)甩尾实验

实验动物：实施例2得到的PN-ZB20KO小鼠(n＝13)；对照小鼠(n＝8)。

实验方法：将小鼠尾巴末端浸入热水(46℃,48℃,50℃,52℃)中，当其尾部受到伤害性刺激时会产生明显的甩尾反应，记录从刺激开始到动物反应的时间，即潜伏期。

实验结果：PN-ZB20KO小鼠(n＝13)在50℃和52℃的甩尾反应中潜伏期明显长于对照小鼠(n＝8)(图6b)，提示PN-ZB20KO小鼠对热刺激引起的疼痛反应减弱。

(4)双相温度实验

实验动物：实施例2得到的PN-ZB20KO小鼠(n＝11)；对照小鼠(n＝11)，。

实验方法：将小鼠置于可调控温度的两块相连平板中温度设为30℃的平板上，另一块平板温度分别设为30℃,27℃,25℃,20℃,15℃,10℃和5℃，小鼠在平板上自由活动5min，记录小鼠在30℃平板一侧的停留时间，计算所占时间百分比。

实验结果：当其中一块平板温度为15℃-25℃时,PN-ZB20KO小鼠(n＝11)停留在30℃平板上的时间明显短于对照小鼠(n＝11)(图7a)，提示PN-ZB20KO小鼠对非伤害性低温刺激引起的反应减弱。

(5)冷板实验

实验动物：实施例2得到的PN-ZB20KO小鼠(n＝22)；对照小鼠(n＝22)。

实验方法：将小鼠置于0℃平板上2min，记录小鼠抬腿和跳跃的次数，以及第一次跳跃的潜伏期。

实验结果：PN-ZB20KO小鼠(n＝22)抬腿次数(图7b)和跳跃次数(图7c)明显少于对照小鼠(n＝22)，第一次跳跃潜伏期明显长于对照小鼠(图7d),提示PN-ZB20KO小鼠对伤害性低温刺激引起的反应减弱。

(6)弗莱毛实验

实验动物：实施例1得到的PN-ZB20KO小鼠(n＝18)；对照小鼠(n＝18)。

实验方法：将小鼠置于独立的金属笼子里自由活动1h后，分别用不同规格(0.04g、0.16g、0.6g、1.0g、2.0g和4g)的弗莱毛刺激小鼠足底刺激10次，记录小鼠出现反应的次数，计算10次刺激中出现5次反应的刺激强度作为阈值。

实验结果：PN-ZB20KO小鼠(n＝20)的阈值明显高于对照小鼠(n＝18)(图8a)，提示PN-ZB20KO小鼠对机械刺激引起的疼痛反应明显减弱。

(7)电子压痛实验

实验动物：实施例2得到的PN-ZB20KO小鼠(n＝11)；对照小鼠(n＝11)。

实验方法：用YLS-3E电子压痛仪(济南益延科技发展有限公司)给小鼠尾部逐步施加压力，直到小鼠出现撕咬装置、挣扎等反应，每只动物重复3次，每次检测间隔至少15min以上，计算平均压力。

实验结果：PN-ZB20KO小鼠(n＝11)出现上述反应的阈值明显高于对照小鼠(n＝11)(图8b)，提示PN-ZB20KO小鼠对机械刺激引起的疼痛反应明显减弱。

(8)福尔马林实验

实验动物：实施例2得到的PN-ZB20KO小鼠(n＝6)；对照小鼠(n＝6)。

实验方法：小鼠右后肢足底皮下注射20μl0.5％的福尔马林后观察60min，统计0-10min和10-60min两个阶段小鼠舔或咬右足的时间。

实验结果：PN-ZB20KO小鼠(n＝6)在两个阶段小鼠舔或咬右足的时间均低于于对照小鼠(n＝6)(图9a,b)，提示PN-ZB20KO小鼠对免疫刺激引起的疼痛反应明显减弱。

(9)芥子油实验

实验方法：小鼠右后肢足底皮下注射20μl0.75％的芥子油后观察5min，统计小鼠舔或咬右足的时间。

实验结果：PN-ZB20KO小鼠(n＝6)在两个阶段小鼠舔或咬右足的时间均低于于对照小鼠(n＝6)(图9c)，提示PN-ZB20KO小鼠对免疫刺激引起的疼痛反应明显减弱。

以上已对本发明创造的较佳实施例进行了具体说明，但本发明创造并不限于所述实施例，熟悉本领域的技术人员在不违背本发明创造精神的前提下还可作出种种的等同的变型或替换，这些等同的变型或替换均包含在本申请权利要求所限定的范围内。

Claims

1.一种治疗持续性慢性疼痛的靶点，该靶点是锌指蛋白ZBTB20。

2.锌指蛋白ZBTB20在制备预防或治疗慢性疼痛药物中的应用。

3.根据权利要求2所述的锌指蛋白ZBTB20在制备预防或治疗慢性疼痛药物中的应用，其特征在于，所述的药物是抑制或沉默锌指蛋白ZBTB20表达的药物。

4.根据权利要求2所述的锌指蛋白ZBTB20在制备预防或治疗慢性疼痛药物中的应用，其特征在于，所述的应用是将锌指蛋白ZBTB20作为预防或治疗疼痛的药物的干预靶点。

5.根据权利要求2所述的锌指蛋白ZBTB20在制备预防或治疗慢性疼痛药物中的应用，其特征在于，所述的应用是指锌指蛋白ZBTB20同时调控TRPV1、TRPA1和TRPM8通道的表达。

6.根据权利要求2所述的锌指蛋白ZBTB20在制备预防或治疗慢性疼痛药物中的应用，其特征在于，所述的应用是指抑制或沉默锌指蛋白ZBTB20表达的动物对热刺激、冷刺激、机械刺激或免疫刺激引起的疼痛反应减弱。