CN105461604B - 一种高纯度大蒜素的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种高纯度大蒜素的制备方法，具体步骤如下：将大蒜素提取物用冷水溶解，静置、离心、过膜；随后用固相萃取法纯化制备，并用HPLC法进行纯度鉴定和浓度测定。本发明采用特有的固相萃取法制备高纯度大蒜素；进一步选择确定固相萃取中合适的洗脱剂，使大蒜素从水相溶液置换到有机溶剂中，提高了大蒜素的稳定性；而且本发明还可以间接浓缩终产物，提高了大蒜素的回收率和纯度。通过采用本发明的技术方案，大大简化了大蒜素制备的操作工艺，降低了工艺成本；制备的大蒜素纯度较高，且能以较高的浓度被洗脱下来。可进一步制备标准品或作为药品制剂的有效成分。
Description
技术领域
本发明涉及一种大蒜提取物中有效成分的制备方法，特别涉及一种高纯度大蒜素的制备方法。
背景技术
大蒜素(Allicin)是从葱科葱属植物大蒜(Allium Sativum L.)的鳞茎(大蒜头)中提取的一种有机硫化合物，也存在于洋葱和其他葱科植物中。大蒜素为淡黄色油状液体，性质很不稳定，对热、酸、碱不稳定，在极性溶剂(如水)中易分解。大蒜素具有较强的抑菌杀菌作用，对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌等病原菌都有抑制作用；且能降低血脂，并对胆固醇有较好的降低作用。大蒜素多应用于食品添加剂和生物医药方面，可以增加食品的风味，并用于一些病症的防治。
目前市场上的大蒜素制品多为大蒜素肠溶胶丸、大蒜素胶囊和大蒜素片。大蒜素有较好的市场应用前景，现在高纯度大蒜素的供应还远远跟不上需求。市面上的大蒜素提取物产品多为一定比例的大蒜素提取物粉末等，可作为制备纯品大蒜素的良好材料。
目前，关于纯品大蒜素制备的发明专利并不多，其中昝向明的发明专利《一种提取高纯度大蒜素的方法及其装置》(201110437285.1)中提到了大蒜素的纯化制备方法，得到了较高纯度的大蒜素。现在关于制备高纯度大蒜素的专利中，天然来源的操作都较为繁琐，提取制备工艺成本较高；而且纯度不高。
发明内容
针对上述问题，为降低成本，简化工艺，本发明提供了一种高纯度大蒜素的制备方法。
为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案予以实现：
一种高纯度大蒜素的制备方法，它包括以下步骤：
(1)冷水溶解大蒜素提取物，并离心，过滤，获得含有大蒜素的水溶液；
(2)选用反相固相萃取柱，用甲醇和双蒸水对萃取柱进行活化；
(3)将所述含有大蒜素的水溶液上样，用甲醇淋洗萃取柱；
(4)再用甲醇洗脱萃取柱，接收洗脱液；
(5)用HPLC法对制备的大蒜素纯品进行纯度鉴定和浓度检测；
(6)冻干所述洗脱液，得大蒜素成品。
进一步的：所述步骤(1)中大蒜素提取物选用1％-5％大蒜素提取物。
进一步的：所述步骤(1)中大蒜素提取物与冷水的质量比为2：25-3：25。
进一步的：所述步骤(1)中过滤为使用0.22μm水系滤膜进行过滤。
进一步的：所述步骤(2)中反相固相萃取柱为BAKERBOND spe-1g C-18小柱。
进一步的：所述步骤(2)用10-15mL甲醇和10-15mL双蒸水对萃取柱进行活化，流速均为1mL/min。
进一步的：所述步骤(3)中淋洗柱子同时用真空泵抽吸柱子获得流速。
进一步的：所述步骤(3)中上样量为1.0-2.0mL，用体积比为30％的甲醇水溶液7.2-7.5mL淋洗萃取柱，流速为1mL/min。
进一步的：所述步骤(4)用体积比为90％的甲醇水溶液2.0-2.5mL洗脱萃取柱。
进一步的：所述步骤(5)中HPLC的条件为：
色谱柱：ODS C18 4.6×250mm，5μm；
流动相：甲醇：1％甲酸水溶液＝60:40(V/V)；
流速：0.8mL/min；
柱温：30℃；
进样量：20μL；
检测波长：254nm。
与现有技术相比，本发明的优点和技术效果是：本发明采用市场上已有的大蒜素比例提取物作为原料，采用特有的固相萃取法制备高纯度大蒜素；进一步选择确定固相萃取中合适的洗脱剂，使大蒜素从大极性的溶液置换到小极性的有机溶剂中，利用极性跨度大的洗脱剂，可以用其最小的溶剂量，获得最大的溶质，使得获得的大蒜素更加稳定，从而提高了大蒜素的回收率和纯度；而且本发明还可以浓缩终产物，因为通过上样步骤可以使柱子满载，然后淋洗掉杂质，使产物尽可能保留，最重要在于洗脱步骤，用较少的溶剂洗下绝大部分的产物，从而使最后产物浓度高于上样时的浓度。
大蒜素作为食品添加剂和药物制剂活性成分，具有独特的药理活性，在降血脂、提高自身免疫力、杀菌抑菌、抗感冒、抗衰老、防癌等方面都有显著的功效，在生物医药领域有广泛的研究。通过采用本发明的技术方案，大大简化了大蒜素制备的操作工艺，降低了工艺成本；制备的大蒜素纯度较高，且能以较高的浓度被洗脱下来。可进一步制备标准品或作为药品制剂的有效成分。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明的技术方案做进一步详细的说明。
实施例1
本实施例所述的高纯度大蒜素的制备方法包括以下步骤：
(1)称取2％大蒜素提取物(市售商品，前面的比例代表大蒜素的质量含量)400mg，5mL冷水溶解，并剧烈震荡30s，静置10min，3000rpm离心5min，过0.22μm水系滤膜，获得含有大蒜素的水溶液；
(2)选用BAKERBOND spe-1g C-18小柱，用10mL甲醇和10mL双蒸水对柱子进行活化，流速为1mL/min；
(3)将所述含有大蒜素的水溶液上样1.5mL，用体积比为30％的甲醇水溶液7.5mL淋洗萃取柱，流速为1mL/min；
(4)用体积比为90％的甲醇水溶液2mL洗脱萃取柱，流速为1mL/min，10mL刻度试管接洗脱液；
(5)用HPLC方法检测洗脱液中大蒜素的纯度及浓度；
HPLC的检测条件为：
色谱柱：ODS C18 4.6×250mm，5μm；
流动相：甲醇：1％甲酸水溶液＝60:40(V/V)；
流速：0.8mL/min；
柱温：30℃；
进样量：20μL；
检测波长：254nm。
(6)冻干洗脱液，得到本发明所述大蒜素成品。
实施例2
本实施例所述的高纯度大蒜素的制备方法包括以下步骤：
(1)称取2％大蒜素提取物400mg，5mL冷水溶解，并剧烈震荡30s，静置10min，3000rpm离心5min，过0.22μm水系滤膜，获得含有大蒜素的水溶液；
(2)选用BAKERBOND spe-1g C-18小柱，用10mL甲醇和10mL双蒸水对柱子进行活化，流速为1mL/min；
(3)将所述含有大蒜素的水溶液上样1mL，用体积比为30％的甲醇水溶液7.2mL淋洗萃取柱，流速为1mL/min；
(4)用体积比为80％的甲醇水溶液2mL洗脱萃取柱，流速为1mL/min，10mL刻度试管接洗脱液；
(5)用HPLC方法检测洗脱液中大蒜素的纯度及浓度，检测条件同实施例1；
(6)冻干洗脱液，得到本发明所述大蒜素成品。
实施例3
本实施例所述的高纯度大蒜素的制备方法包括以下步骤：
(1)称取2％大蒜素提取物500mg，5mL冷水溶解，并剧烈震荡30s，静置10min，3000rpm离心5min，过0.22μm水系滤膜，获得含有大蒜素的水溶液；
(2)选用BAKERBOND spe-1g C-18小柱，用15mL甲醇和15mL双蒸水对柱子进行活化，流速为1mL/min；
(3)将所述含有大蒜素的水溶液上样2.0mL，用如上30％的甲醇溶液7.5mL淋洗萃取柱，流速为1mL/min，抽干柱子(具体步骤就是用真空泵抽吸柱子获得流速，抽干即为把柱子里的溶剂抽干流尽)；
(4)用如上90％的甲醇溶液2.5mL洗脱萃取柱，流速为1mL/min，10mL刻度试管接洗脱液；
(5)用HPLC方法检测洗脱液中大蒜素的纯度及浓度，检测条件同实施例1；
(6)冻干洗脱液，得到本发明所述大蒜素成品。
本发明通过固相萃取方法制备得到的高纯度大蒜素，结果见表1。
表1本发明制得的所述大蒜素的测定结果
| 实施例 | 洗脱液大蒜素浓度 | 大蒜素纯度 | 回收率 |
| 1 | 1.19mg/mL | 90.89％ | 79.23％ |
| 2 | 0.74mg/mL | 92.34％ | 76.36％ |
| 3 | 1.60mg/mL | 96.23％ | 80.83％ |
实验结果如表1所示，本发明提供的高纯度大蒜素的制备方法，洗脱液中大蒜素浓度达到1mg/mL左右，纯度在90％以上，回收率也较高(﹥76％)。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其进行限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的普通技术人员来说，依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。
Claims (3)
1.一种大蒜素的制备方法，其特征在于：它包括以下步骤：
(1) 称取2%大蒜素提取物400mg，5mL冷水溶解，并剧烈震荡30s，静置10min，3000rpm离心5min，过0.22μm水系滤膜，获得含有大蒜素的水溶液；
(2) 选用BAKERBOND spe-1g C-18小柱，用10mL甲醇和10mL双蒸水对柱子进行活化，流速为1mL/min；
(3) 将所述含有大蒜素的水溶液上样1.5mL， 用体积比为30%的甲醇水溶液7.5mL淋洗萃取柱，流速为1mL/min；
(4) 用体积比为90%的甲醇水溶液2mL洗脱萃取柱，流速为1mL/min，10mL刻度试管接洗脱液；
(5) 用HPLC方法检测洗脱液中大蒜素的纯度及浓度；
HPLC的检测条件为：
色谱柱：ODS C18 4.6×250mm，5μm；
流动相：甲醇：1%甲酸水溶液=60:40 ，以V/V计；
流速：0.8mL/min；
柱温：30℃；
进样量：20μL；
检测波长：254nm；
(6) 冻干洗脱液，得到大蒜素成品。
2.一种大蒜素的制备方法，其特征在于：它包括以下步骤：
(1) 称取2%大蒜素提取物400mg，5mL冷水溶解，并剧烈震荡30s，静置10min，3000rpm离心5min，过0.22μm水系滤膜，获得含有大蒜素的水溶液；
(2) 选用BAKERBOND spe-1g C-18小柱，用10mL甲醇和10mL双蒸水对柱子进行活化，流速为1mL/min；
(3) 将所述含有大蒜素的水溶液上样1mL， 用体积比为30%的甲醇水溶液7.2mL淋洗萃取柱，流速为1mL/min；
(4) 用体积比为80%的甲醇水溶液2mL洗脱萃取柱，流速为1mL/min，10mL刻度试管接洗脱液；
(5) 用HPLC方法检测洗脱液中大蒜素的纯度及浓度；
HPLC的检测条件为：
色谱柱：ODS C18 4.6×250mm，5μm；
流动相：甲醇：1%甲酸水溶液=60:40 ，以V/V计；
流速：0.8mL/min；
柱温：30℃；
进样量：20μL；
检测波长：254nm；
(6) 冻干洗脱液，得到大蒜素成品。
3.一种大蒜素的制备方法，其特征在于：它包括以下步骤：
(1) 称取2%大蒜素提取物500mg，5mL冷水溶解，并剧烈震荡30s，静置10min，3000rpm离心5min，过0.22μm水系滤膜，获得含有大蒜素的水溶液；
(2) 选用BAKERBOND spe-1g C-18小柱，用15mL甲醇和15mL双蒸水对柱子进行活化，流速为1mL/min；
(3) 将所述含有大蒜素的水溶液上样2.0mL， 用如上30%的甲醇溶液7.5mL淋洗萃取柱，流速为1mL/min，抽干柱子；
(4) 用如上90%的甲醇溶液2.5mL洗脱萃取柱，流速为1mL/min，10mL刻度试管接洗脱液；
(5) 用HPLC方法检测洗脱液中大蒜素的纯度及浓度；
HPLC的检测条件为：
色谱柱：ODS C18 4.6×250mm，5μm；
流动相：甲醇：1%甲酸水溶液=60:40 ，以V/V计；
流速：0.8mL/min；
柱温：30℃；
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| 超临界二氧化碳法提取大蒜素工艺研究;张民等;《食品科技》;20070320(第03期);参见第114页摘要，1.2 主要仪器设备，1.3.1大蒜素的检测方法 * |
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