CN105404920B - 一种果蝇繁殖力的统计方法及专用统计器具 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种果蝇繁殖力的统计方法，包括成蛹计数和成蝇计数：使用专用的成蛹计数器，用底部的硅胶弯铲依次将蛹移至羽化瓶内，计数器同时进行计数，直至培养瓶中没有蛹形成；将羽化瓶放入培养箱中每天定时观察，当有成蝇出现时，使用专用的成蝇计数器每天在同一时间统计日成蝇数：将所有日成蛹数和日成蝇数分别进行加合，即为该培养瓶中果蝇的成蛹数和成蝇数；两者的比值即为果蝇的成蝇率。本发明统计方法简单、准确，可精确计算出反映果蝇繁殖力的三个重要的生物学效应指标。本发明专用的成蛹计数器和成蝇计数器操作简单，减少了研究者的工作量，并且还不会对果蝇造成任何损伤，保证了试验结果的准确性。

Description

一种果蝇繁殖力的统计方法及专用统计器具

技术领域

本发明涉及遗传学和发育生物学研究，尤其是涉及一种果蝇繁殖力的统计方法，本发明还涉及该统计方法专用的统计器具—成蝇计数器。

背景技术

果蝇是遗传学和发育生物学科研中重要的实验材料，它是完全变态昆虫，生活周期可分为4个时期：卵、幼虫、蛹和成蝇。成蝇受精后将卵产在培养瓶内的培养基表面，卵孵化成幼虫，幼虫靠觅食培养基中的营养物长大，长成三龄幼虫时就会爬上瓶壁化成蛹，在蛹中幼虫进一步发育出成蝇的各种组织器官，最后从蛹的一端破蛹而出，即为处女蝇，约八小时后，雌雄蝇会交配，产生下一代，此即果蝇的一个生活周期。因为果蝇的体积小、饲养简便、成本低廉、生命周期短、繁殖能力强、子代数量多、对实验条件敏感等特点，常常作为药品、保健食品等功能检测的试验对象。果蝇的繁殖力是一项重要的生物学效应指标，繁殖力的大小主要通过成蛹数、成蝇数和成蝇率三个指标来反应。目前，关于繁殖力的统计方法十分不规范，有时只用这三个指标中的一个或两个来说明，不能准确反映繁殖力的大小。最常见的统计方法是每天定时手持果蝇培养瓶观察，数取培养瓶瓶壁上蛹的个数和瓶中成蝇的数量。由于果蝇的繁殖力强，每天新形成的蛹数目很大，统计时极易出错，并且有的蛹会从瓶壁上脱落掉在培养基上或结在培养基表面，不易被发现。而成蝇的活动力强，又总是处于运动状态，当数量多时计数十分困难，如果采用现有的乙醚麻醉法或低温麻醉法进行计数，则极易对果蝇造成损伤，影响果蝇的寿命及繁殖能力。因此，需要设计果蝇成蛹和成蝇专用的统计器具，使果蝇繁殖力的统计即准确又方便。

发明内容

本发明的目的在于提供一种方便、准确的统计果蝇繁殖力的方法，本发明还提供该统计方法中专用的统计器具--成蝇计数器。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的果蝇繁殖力的统计方法，包括成蛹计数和成蝇计数，所述成蛹计数时采用专用的成蛹计数器，包括末端为硅胶弯铲的手持杆，所述手持杆上固定有按压式计数器，以及通过上、下卡扣活动连接在手持杆上的按压杆；所述按压杆包括顶帽和位于所述顶帽下方的第一压杆和第二压杆；所述第一压杆末端和所述按压式计数器的按压件相接，所述第二压杆向下延伸至所述硅胶弯铲的上方，在所述第二压杆上套设有回位弹簧，所述回位弹簧上端与第二压杆上设置的定位卡相接触，下端与固定在手持杆上的限位卡相接触；所述第二压杆末端设置有软毛刷；

首先按常规方法在培养瓶中培养果蝇，当培养瓶瓶壁上出现棕色成型蛹时，放飞亲本果蝇，从当天开始按下述方法进行成蛹数的计数：

第一步，准备羽化瓶，并在瓶内底部铺垫洁净滤纸备用；

第二步，使用专用的成蛹计数器，首先按压计数器上的复位键，使计数器数字显示为零；

第三步，打开培养瓶的瓶塞，用成蛹计数器底部的硅胶弯铲轻轻挑取一个蛹移至羽化瓶内，按压成蛹计数器顶部的顶帽，第二压杆下端的软毛刷将蛹拨落到羽化瓶底部的滤纸上，同时计数器进行一次计数；

第四步，重复第三步，直至将培养瓶中的蛹全部挑出，记录下计数器上的数值，即为日成蛹数；以后每天同一时间均按上述步骤挑取新形成的蛹并作记录；

盖上羽化瓶的瓶塞，将其放入25℃培养箱中培养,每天定时观察，当有羽化了的成蝇出现时，使用专用的成蝇计数器按下述方法每天在同一时间统计日成蝇数：

在成蝇计数器的集蝇瓶中放置果蝇引诱物，将当日所得羽化瓶中的全部成蝇移至成蝇计数器的透明成蝇瓶中，并在透明成蝇瓶外包覆不透光织物，当成蝇按顺序沿透明过蝇管从透明成蝇瓶飞或爬往集蝇瓶中时即可进行计数；由于透明过蝇管的管径所限，每次仅允许一只果蝇通过，故可以准确统计果蝇的日成蝇数；

最后，当培养瓶中没有蛹形成，羽化瓶中没有成蝇形成时，将所有日成蛹数和日成蝇数分别进行加合，即为该培养瓶中果蝇的成蛹数和成蝇数；所得成蝇数与成蛹数的比值即为该培养瓶中果蝇的成蝇率。

本发明统计方法中专用的成蝇计数器，包括透明成蝇瓶，在所述透明成蝇瓶的出口处活动连接有透明过蝇管，所述透明过蝇管的过蝇通道内径略大于单只果蝇的体宽；在所述透明过蝇管的出蝇口处活动连接有集蝇瓶，所述集蝇瓶的顶部为筛网结构。

为便于准确计量并观察成蝇的体态特征，所述透明过蝇管的出蝇口处沿周向对称设置有2~4个放大镜，与所述放大镜位置相对应的透明过蝇管的管壁上设置有刻度线。

如果将透明过蝇管设计为由一根进蝇管和两根出蝇管组成的Y形结构，在两根出蝇管的出口处分别活动连接有雌性集蝇瓶和雄性集蝇瓶，在与所述进蝇管相衔接的两出蝇管管口处设置有柔性拨蝇板。与照相机和计算机联网后，则可以直接计算出成蝇中的雌雄果蝇数并记录统计各果蝇的体态资料。

本发明的统计方法简单、准确，可精确计算出反映果蝇繁殖力的三个重要的生物学效应指标，即果蝇的成蛹数、成蝇数和成蝇率。采用本发明专用的成蛹计数器和成蝇计数器分别统计果蝇的成蛹数和成蝇数的方法，操作简单，减少了研究者的工作量，并且还不会对果蝇造成任何损伤，保证了试验结果的准确性，科学的反映出待测物对果蝇繁殖力的影响。

附图说明

图1是本发明所用成蛹计数器的结构示意图。

图2、图3是发明所用成蝇计数器的结构示意图。

具体实施方式

如图1所示，本发明所用的果蝇成蛹计数器，包括末端为硅胶弯铲1a的手持杆2a，手持杆2a上固定有按压式计数器3a，以及通过上卡扣4a-1、下卡扣4a-2活动连接在手持杆2a上的按压杆；按压杆包括顶帽5a和位于顶帽5a下方的第一压杆6a和第二压杆7a；第一压杆6a末端和按压式计数器3a的按压件相接，第二压杆7a向下延伸至硅胶弯铲1a的上方，在第二压杆7a上套设有回位弹簧8a，回位弹簧8a上端与第二压杆7a上设置的定位卡9a相接触，下端与固定在手持杆2a上的限位卡10a相接触；第二压杆7a末端设置有软毛刷11a。

如图2所示，本发明统计方法中专用的成蝇计数器，包括透明成蝇瓶1b，在透明成蝇瓶1b的出口处活动连接有透明过蝇管2b，透明过蝇管2b的过蝇通道内径上下一致，略大于单只果蝇的体宽，每次仅允许一只果蝇通过；在透明过蝇管2b的出蝇口处活动连接有集蝇瓶3b，集蝇瓶3b的顶部为筛网结构,可保证空气和光线进入集蝇瓶3b中，利用食物的引诱和果蝇的趋光性，使果蝇依次顺利的从透明成蝇瓶1b中飞入或爬入集蝇瓶3b，进行准确的计量。

为便于准确计量并观察成蝇的体态特征，在透明过蝇管2b的出蝇口处沿周向对称设置有四个放大镜4b，与放大镜4b位置相对应的透明过蝇管的管壁上设置有用于测量果蝇体长的刻度线5b。当在四个放大镜外侧对应设置四个照相机镜头，并与计算机联网后，可从四个角度对依次通过的果蝇逐个进行放大拍照，记录并统计每个果蝇的体态特征（如雌雄、体长、体色、刚毛、眼睛形态、翅膀形态等等），为进行下一步的遗传学分析做准备。

如果将透明过蝇管设计为由一根进蝇管2b-1和两根出蝇管2b-2、2b-3组成的Y形结构，如图3所示，在两根出蝇管2b-2、2b-3的出口处分别设置有雌性集蝇瓶3b-1和雄性集蝇瓶3b-2，在与进蝇管相衔接的两出蝇管管口处设置有柔性拨蝇板6b。将本计数器与照相机和计算机联网后，则可以根据照相机拍出的果蝇体征判断雌雄，再通过控制拨蝇板6b的左右开合将果蝇分别拨入雌性集蝇瓶3b-1和雄性集蝇瓶3b-2中，计算机软件可直接统计出成蝇的雌雄数以及雌雄比，该方法方便、准确且果蝇无损伤。

本发明果蝇繁殖力的统计方法包括成蛹计数和成蝇计数，首先按常规方法在培养瓶中培养果蝇，当培养瓶瓶壁上出现棕色成型蛹时，放飞亲本果蝇，从当天开始按下述方法进行成蛹数的计数：

第一步，准备羽化瓶，并在瓶内底部铺垫洁净滤纸备用；

第二步，使用如图1所示的专用成蛹计数器，首先按压计数器上的复位键12a，使计数器数字显示为零；

第三步，打开培养瓶的瓶塞，用成蛹计数器底部的硅胶弯铲1a轻轻挑取一个蛹移至羽化瓶内，按压成蛹计数器顶部的顶帽5a，第二压杆下端的软毛刷11a将蛹拨落到羽化瓶底部的滤纸上，同时计数器进行一次计数；

第四步，重复第三步，直至将培养瓶中的蛹全部挑出，记录下计数器上的数值，即为日成蛹数；以后每天同一时间均按上述步骤挑取新形成的蛹并作记录；采用此方法统计成蛹时，不会出现漏记和损坏成蛹的情况，统计结果更加准确；

当天的成蛹挑取完后，盖上羽化瓶的瓶塞，将其放入25℃培养箱中培养,每天定时观察（正常情况下，培养三天后成蛹即可转化为成蝇），当有羽化了的成蝇出现时，再使用如图2所示的专用的成蝇计数器按下述方法每天在同一时间统计日成蝇数：

首先将成蝇计数器倾斜或水平放置（便于成蝇转移），在成蝇计数器的集蝇瓶3b中放置果蝇引诱物7b(如香蕉、葡萄等，可将其与固体培养基混合均匀，置于集蝇瓶3b的底部)，将当日所得羽化瓶中的全部成蝇移至成蝇计数器的透明成蝇瓶1b中，并在透明成蝇瓶1b外包覆不透光织物（黑布），利用果蝇的趋光性和敏锐的嗅觉，成蝇会按顺序沿透明过蝇管2b从透明成蝇瓶1b飞或爬往集蝇瓶3b中，由于透明过蝇管2b的管径所限，每次仅允许一只果蝇通过，在透明过蝇管2b的出蝇口处沿周向对称设置的四个放大镜4b可以将经过的果蝇放大，便于人工准确的进行果蝇日成蝇数的统计和体长的测量；当将该计数器与照相机和计算机联网后，在四个放大镜外侧对应设置四个照相机镜头，即可从四个角度对依次通过的果蝇逐个进行放大拍照，记录每个果蝇的性别和体态特征（如雌雄、体长、体色、刚毛、眼睛形态、翅膀形态等等），统计出雌雄数、雌雄比和变异率等，为进行下一步的遗传学分析做准备。

最后，当培养瓶中没有蛹形成，羽化瓶中也没有成蝇形成时，该培养瓶中的果蝇繁殖力实验结束，将所有的日成蛹数和日成蝇数分别进行加合，即为该培养瓶中果蝇的成蛹数和成蝇数；所得成蝇数与成蛹数的比值即为该培养瓶中果蝇的成蝇率。

如果选择使用如图3所示的专用成蝇计数器进行成蝇数计数，同时将该计数器与照相机和计算机进行联网，在四个放大镜外侧对应设置四个照相机镜头，成蝇按顺序沿透明过蝇管2b-1从透明成蝇瓶1b飞或爬时，在途径放大镜处时通过镜头拍照并智能分辨出雌雄性别，控制柔性拨蝇板6b的位置可使该只果蝇往雌性集蝇瓶3b-1或雄性集蝇瓶3b-2中爬行并分别予以收集，方便进行后续的杂交等试验研究。

Claims (4)

1.一种果蝇繁殖力的统计方法，包括成蛹计数和成蝇计数，其特征在于：所述成蛹计数时采用专用的成蛹计数器，包括末端为硅胶弯铲的手持杆，所述手持杆上固定有按压式计数器，以及通过上、下卡扣活动连接在手持杆上的按压杆；所述按压杆包括顶帽和位于所述顶帽下方的第一压杆和第二压杆；所述第一压杆末端和所述按压式计数器的按压件相接，所述第二压杆向下延伸至所述硅胶弯铲的上方，在所述第二压杆上套设有回位弹簧，所述回位弹簧上端与第二压杆上设置的定位卡相接触，下端与固定在手持杆上的限位卡相接触；所述第二压杆末端设置有软毛刷；

按常规方法在培养瓶中培养果蝇，当培养瓶瓶壁上出现棕色成型蛹时，放飞亲本果蝇，从当天开始按下述方法进行成蛹数的计数：

第一步，准备羽化瓶，并在瓶内底部铺垫洁净滤纸备用；

第二步，取上述专用的成蛹计数器，首先按压计数器上的复位键，使计数器数字显示为零；

第三步，打开培养瓶的瓶塞，用成蛹计数器底部的硅胶弯铲轻轻挑取一个蛹移至羽化瓶内，按压成蛹计数器顶部的顶帽，第二压杆下端的软毛刷将蛹拨落到羽化瓶底部的滤纸上，同时计数器进行一次计数；

第四步，重复第三步，直至将培养瓶中的蛹全部挑出，记录下计数器上的数值，即为日成蛹数；以后每天同一时间均按上述步骤挑取新形成的蛹并作记录；

盖上羽化瓶的瓶塞，将其放入25℃培养箱中培养,每天定时观察，当有羽化了的成蝇出现时，使用专用的成蝇计数器按下述方法每天在同一时间统计日成蝇数：

在成蝇计数器的集蝇瓶中放置果蝇引诱物，将当日所得羽化瓶中的全部成蝇移至成蝇计数器的透明成蝇瓶中，并在透明成蝇瓶外包覆不透光织物，由于透明过蝇管的管径所限，每次仅允许一只果蝇通过，当成蝇按顺序沿透明过蝇管从透明成蝇瓶飞或爬往集蝇瓶中时即可进行日成蝇数计数；

最后，当培养瓶中没有蛹形成，羽化瓶中没有成蝇形成时，将所有日成蛹数和日成蝇数分别进行加合，即为该培养瓶中果蝇的成蛹数和成蝇数；所得成蝇数与成蛹数的比值即为该培养瓶中果蝇的成蝇率。

2.权利要求1统计方法中专用的成蝇计数器，其特征在于：包括透明成蝇瓶，在所述透明成蝇瓶的出口处活动连接有透明过蝇管，所述透明过蝇管的过蝇通道内径略大于单只果蝇的体宽；在所述透明过蝇管的出蝇口处活动连接有集蝇瓶，所述集蝇瓶的顶部为筛网结构。

3.根据权利要求2所述的成蝇计数器，其特征在于：所述透明过蝇管的出蝇口处沿周向对称设置有4个放大镜，与所述放大镜位置相对应的透明过蝇管的管壁上设置有刻度线。

4.根据权利要求2所述的成蝇计数器，其特征在于：所述透明过蝇管为由一根进蝇管和两根出蝇管组成的Y形结构，在两根出蝇管的出口处分别活动连接有雌性集蝇瓶和雄性集蝇瓶，在与所述进蝇管相衔接的两出蝇管管口处设置有柔性拨蝇板。