CN105377284A - 用于治疗视网膜退行性疾病的组合物和方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及用于在视网膜退行性疾病，如年龄相关的黄斑变性的治疗中使用的组合物。所描述的组合物包含用于通过激活诊断患有该种疾病的受试者的视网膜色素上皮细胞中的TAK1而激活p38和/或JNK信号的药剂。还提供了使用所描述的组合物治疗视网膜退行性疾病的方法。

Description

用于治疗视网膜退行性疾病的组合物和方法

相关申请的引用

要求于2013年5月30日提交的美国临时专利申请号61/828,701的权益；其内容以其整体通过引用结合于此。

技术领域

本发明涉及用于在视网膜退行性疾病、如年龄相关的黄斑变性的治疗中使用的组合物。所描述的组合物包含用于激活诊断患有该种疾病的受试者的视网膜色素上皮细胞中的p38和/或JNK信号(信号转导，signaling)的药剂。还提供了使用所描述的组合物治疗视网膜退行性疾病的方法。

背景技术

年龄相关的黄斑变性(AMD)仍然是工业化国家中失明的主要原因(1)。AMD的发生率随年龄增加，影响2％的年龄在50岁的人口以及25％的年龄在80岁的人口；并影响多达150万的美国人以及世界范围内数百万人。AMD有两种形式：“干性的”和“湿性的”。干性AMD影响85-90％的患有AMD的人，并且是一种慢性、无症状的疾病，其在早期阶段可以导致一些程度的视觉损害，并可以在疾病晚期进展到法定盲。在干性AMD的早期阶段，称为玻璃膜疣的不溶性细胞外聚集体在视网膜中积累并与视觉降低相关联(1)。干性AMD的晚期，也称为地图状萎缩(GA)，其特征在于退行性的视网膜色素上皮(RPE)细胞的分散的或汇合的区域以及覆盖性的视网膜感光细胞，其依赖于RPE用于营养支持。

湿性AMD只影响10％-15％的AMD患者，呈现会突然且迅速地进展至失明。湿性AMD的晚期阶段的特征在于脉络膜新生血管化(CNV)，其中新生脉络膜血管从脉络膜朝向视网膜外层显露出来。由于湿性AMD的主要病理学是新血管的形成，已建议用抗血管生成药物治疗受影响的患者来减小失明的风险。因此，通常开具抗血管生成药如贝伐珠单抗、雷珠单抗的处方以治疗湿性AMD，并且其已经证明使视力退化停止并有益于许多湿性AMD患者。

在干性AMD的早期和晚期形式中，对生长因子和微环境介导的病理变化知道的较少。在2001年，年龄相关的眼部疾病研究表明日常高剂量抗氧化剂β-胡萝卜素、维生素C和E、锌和铜降低了患有中间形式的干性AMD的患者从早期进展到晚期AMD的风险(2)。建议用于干性AMD的其他治疗策略包括视觉周期的调节。通过破坏视黄醇至视紫红质的转换，光转导的关键代谢，在RPE中减少了毒性废物如脂褐质和A2E(3)。为此建议的治疗包括ACU-4429和芬维A胺。芬维A胺是合成的类视黄醇衍生物，在循环中通过结合视黄醇结合蛋白与视黄醇竞争。得到的复合物足够小以通过肾脏排泄，从而减少视黄醇用于在RPE吸收的可用的池。另外，国际专利公开号WO2006/127945公开了显示减少A2E形成的化合物和组合物。这些化合物被设计以通过减少可用于在光感受器外段中与PE反应(其是A2E的生物合成途径中的第一步)的游离RAL的量来抑制A2E生物合成。

已建议治疗黄斑变性的其他方法，包括使用神经营养受体激动剂、抗炎化合物包括补体级联抑制剂、抗细胞凋亡的化合物、类固醇和抗氧化剂化合物(1)。然而，这些与其他描述的治疗没有解决与该疾病最密切相关的RPE细胞的病理性细胞变性和衰老。因此，存在对治疗AMD的持续需要，并且其潜在地可以有效用于其他视网膜退行性疾病。

发明内容

本文提供的是这样的药物组合物，其包含治疗有效量的药剂，该药剂激活在受试者中的视网膜色素上皮(RPE)细胞中的转化生长因子β激活激酶1(TAK1)和p38或JNK信号通路中的至少一种，其中该组合物可以用于在受试者中治疗视网膜退行性疾病。示例性组合物包含治疗有效量的茴香霉素或其功能性衍生物。

还提供了通过给予受试者治疗有效量的药剂，如茴香霉素、TAKl结合蛋白或其功能性衍生物来治疗受试者中的视网膜退行性疾病，该药剂激活在受试者中的视网膜色素上皮(RPE)细胞中的TAK1、p38或JNK信号通路中的至少一种。

从下面的详细描述，其参考所附附图而进行，前述和其他的目的、特征和优点将变得更加明显。

附图说明

图1示出TAKl在RPE细胞中参与细胞凋亡和G0/G1细胞周期阻滞。图1A是来自RPE细胞的双染色(膜联蛋白和碘化丙啶(PI))试验的FACS分析的绘图结果，该RPE细胞是未处理的(左)、用H₂O₂处理的(中)或用H₂O₂与TAKl抑制剂5Z-7-oxozeaenol处理的(右)。图1B示出如图A中描述的用TAKl抑制剂、在有或没有H₂O₂的情况下预处理的RPE细胞的FACS分析。通过其DNA含量(FL2A)测定处于每种细胞周期阶段(G1/G0、S和G2/M)中的细胞百分比，如反映在x轴上的。图1C以表格形式呈现图1B中的FACS分析结果。图1D是说明比较用TAKl抑制剂5Z-7-oxozeaenol(1μΜ)预处理的或未处理的1小时的ARPE-19细胞的生活力的XTT试验的结果的图。

图2示出TAKl抑制增加经受氧化应激的RPE细胞中SA-β-gal(衰老标志物)的表达。图2A是显示在指定时间用TAKl抑制剂5Z-7-oxozeaenol处理或未处理的RPE细胞的SA-β-gal染色的代表性照片。图2B是表示在指定天数、在用抑制剂处理或未处理的细胞中SA-β-gal染色呈阳性的细胞的相对量(％细胞/视野)的直方图。图2C是显示在用TAKl抑制剂处理1小时然后用200μΜH₂O₂处理1小时或仅用H₂O₂处理的RPE细胞中的SA-β-gal染色的代表性照片。图2D是显示仅用H₂O₂或用H₂O₂结合TAKl抑制剂的SA-β-gal染色呈阳性的细胞的相对量(％细胞/视野)的直方图。

图3显示在氧化应激期间，TAKl抑制影响p53表达。图3A显示用TAKl抑制剂5Z-7-oxozeaenol(1μΜ)处理或未处理1小时的RPE细胞的蛋白质印迹(Westernblot)分析。用指定抗体分析分离的总蛋白提取物，并归一化至GAPDH。图3B为代表归一化至p38的磷-p38(phospho-p38)水平的图。图3C示出RPE细胞的蛋白质印迹分析，该RPE细胞是未经处理的、用H₂O₂处理的、或用TAK1抑制剂5Z-7-oxozeaenol(1μΜ)处理并且然后用H₂O₂处理、并生长至指定天数的。图3D是代表图3C的蛋白质印迹结果的直方图。p53水平被归一化至GAPDH(结果为2次独立实验的平均值)。

图4示出在氧化应激后的TAK1调节。所显示的是三个独立实验的代表性的照片，其中RPE细胞是用H₂O₂(200μΜ，1小时)处理的或保持未处理的。然后将细胞用TAK1抗体(绿色)、肌动蛋白(红色)和DAPI(蓝色)免疫染色。

图5表示显示TAK1抑制有助于RPE细胞的SASP(导致肥大和功能病症)的照片。RPE细胞与TAK1抑制剂和/或H₂O₂(200mM)一起生长或不处理生长。2周后，离心来自不同处理地细胞的条件培养基(conditionedmedia)，并将上清液应用在新的新鲜细胞上。示出用指定的条件培养基处理72小时的新鲜RPE细胞的代表性照片。比例尺＝50μm。

图6示出氧化应激和TAK1抑制增加RPE细胞中的细胞尺寸和SA-β-gal表达。图6A示出以下条件的代表性照片(从左到右)：未处理的RPE细胞、对于SA-β-gal染色大部分呈阴性、具有正常形态；用氧化应激处理、有或没有TAK1抑制(5z-7oxozeanol)的RPE细胞、用SA-β-gal染色RPE细胞阳性，具有肥大、平扁和异常形状的RPE细胞。图6B示出利用Image软件的不同细胞尺寸的量化。对于每处理组，N＝40个细胞。

图7示出用茴香霉素处理减少RPE细胞中(衰老标志物)的出现。将REP细胞用200mMH₂O₂处理1小时或保持未处理10天。在处理(氧化应激)后，将细胞用或不用茴香霉素10ng/ml处理5min。然后洗涤细胞并生长5天以上。代表性照片显示对照RPE细胞、或者用有或没有茴香霉素氧化应激处理的SA-β-gal染色。

图8说明在低浓度下用茴香霉素处理对于RPE细胞是非毒性的。图8A示出显示用不同茴香霉素浓度处理或保持未处理的RPE细胞的SA-β-gal染色的代表性照片，如图所示出的。图8B：将ARPE-19细胞接种在96孔板(5000细胞/孔)中，在完全培养基中，并用TAK1抑制剂5Z-7-oxozeaenol(1μΜ)、H₂O₂和茴香霉素单独地或是组合地、或保持未处理1小时。然后通过XTT试验测定其生活力。实验一式三份进行。

所描述的序列的简要描述

如在37C.F.R.1.822中所限定的，对于核苷酸碱基使用标准字母缩写，并且对于氨基酸使用三字母编码来显示本文提供的核酸和/或氨基酸序列。只示出每种核酸序列的一条链，但理解为通过对所显示链的任何参考将互补链包括于其中。序列表作为于2014年5月30日创建的、命名为MORR5seqlist.txt的ASCII文本文件提交，其通过引用结合在此。在所附序列表中：

SEQIDNO.1是人类TAK1的氨基酸序列，同种型A。

SEQIDNO.2是人类TAK1的氨基酸序列，同种型B。

SEQIDNO.3是人类TAK1的氨基酸序列，同种型C。

SEQIDNO.4是人类TAK1的氨基酸序列，同种型D。

SEQIDNO.5是人类TAK1结合蛋白的氨基酸序列。

具体实施方式

I.缩写

AMD年龄相关的黄斑变性

RPE视网膜色素上皮细胞

TAK1转化生长因子β激活激酶1

II.术语

除非另有说明，本文中所使用的技术术语和科学术语具有与由本公开所属领域的技术人员所通常理解的相同的含义。除非上下文中明确地另行指出，否则单数术语“一种(a)”、“一个(an)”和“该(the)”包括复数指示物。类似地，除非上下文中明确地另行指出，否则词语“或”旨在包括“和”。虽然与本文中所描述的这些相似或等同的方法和材料可以用在本发明的实践或测试中，但是下面描述了适用的方法和材料。术语“包含(comprise)”意为“包括(include)”。缩写“例如(e.g.)”源自拉丁语exempligratia，而在本文中用于指示非限制性实例。因此，缩写“例如(e.g.)”与术语“例如(forexample)”同义。

在冲突的情况中，以本发明的说明书，包括术语解释为准。此外，所有材料、方法和实例是示例性的而不旨在是限定性的。

异常：偏离正常特征。正常特征可以在对照、针对群体的标准等中找到。例如，其中异常病况是疾病病况，如视网膜退行性疾病，正常特征的一些合适来源可能包括未患有该疾病(例如，干性AMD)的个体、认为不患有该疾病的个体的群体标准等。

同样，异常可以参照与疾病相关联的病况。术语“相关联”包括发展疾病以及疾病本身的增加的风险。例如，某种异常(例如减少的中心视觉)可以描述为与早期AMD的生物学病况相关联并趋向于发展晚期AMD和完全视觉丧失。

给予：通过所选途径将组合物，如经TAK1激活而激活p38和/或JNK信号的药剂引入受试者中。可以通过本领域技术人员已知的任何途径给予活性化合物或组合物。给予可以是局部的或全身的。局部给予的实例包括但不限于，局部给予、皮下给予、肌内给予、鞘内给予、心包内给予、眼内给予、局部眼用给予或通过吸入给予给予鼻粘膜或肺。另外，局部给予包括通常用于全身给予的给予途径，例如通过直接血管内给予到供应特定器官的动脉。因此，在特定实施方式中，当这样的给予靶向供应特定器官的脉管系统时，局部给予包括动脉内给予和静脉内给予。局部给予还包括将活性化合物和药剂引入可植入装置或构造中，如生物相容性眼内植入物，其经延长的时间间隔释放活性药剂和化合物用于持续的治疗效果。

全身给予包括设计用于经由循环系统广泛遍及地在整个身体内分配活性化合物或组合物的任何给予途径。因此，全身给予包括但不限于动脉内和静脉内给予。当这样的给予指向通过循环系统在整个身体内吸收和分布时，全身给予还包括但不局限于，局部给予、皮下给予、肌肉内给予或通过吸入给予。

类似物、衍生物或模拟物：类似物是与母体化合物在化学结构方面不同的分子，例如同系物(不同在于化学结构方面的增量，如烷基链长度的不同)、分子片段、由于一个或多个官能团而不同的结构、离子化方面的变化。利用如这些在Remington(药理学的科学与实践(TheScienceandPracticeofPharmacology)，第19版(1995)，第28章)中公开的技术，利用定量结构活性关系(QSAR)经常发现结构类似物。衍生物是衍生自基础结构的生物活性分子。模拟物是模拟另一种分子，如生物活性分子的活性的分子。生物活性分子可以包括模拟化合物的生物活性的化学结构。公认的是，这些术语在一些情况下可以重叠。如本文所使用的，药剂如茴香霉素的“功能性衍生物”，包括该药剂的类似物、衍生物和模拟物。

抗体：包含至少一种轻链或重链免疫球蛋白可变区的多肽配体，其特异性识别和结合抗原如TAK1、p38或JNK蛋白或其片段的表位。抗体由重链和轻链组成，其每个都具有可变区，称为可变重链(VH)区域和可变轻链(VL)区域。VH区和VL区一起负责结合由抗体识别的抗原。这包括本领域已知的完整免疫球蛋白和它们的变体以及部分，如Fab’片段、F(ab)’2片段、单链Fv蛋白(“scFv”)，以及二硫键稳定的Fv蛋白(“dsFv”)。该术语还包括重组形式，例如嵌合抗体(例如，人源化鼠科抗体)、异源共轭(heteroconjugate)抗体(如，双特异性抗体)。还参见，皮尔斯目录和手册(PierceCatalogandHandbook)，1994-1995(PierceChemicalCo.罗克福德，IL)；库比(Kuby)，免疫学，第3版，W.H.Freeman&Co.，纽约，1997。在本文所描述的组合物和方法的具体实施方式中，活性药剂是激活抗体，其增加p38和/或JNK信号的活性。抗体可以作为靶蛋白活性的模拟物或作为靶蛋白活性的阻断剂来发挥作用，具有衍生于此的治疗作用。

细胞衰老：是指当细胞能够传播停止分裂时出现的基本不可逆的生长停滞，并且通常称为“衰老”。细胞衰老原来描述为减少培养物中正常人细胞增殖(生长)的过程⁴。有许多衰老诱导性刺激。证明了人类细胞在培养物中的受限生长部分是由于端粒侵蚀-在染色体末端的DNA的逐渐丢失(4)。此外，许多衰老细胞在非端粒位点处有基因组损伤，这也产生为衰老生长停滞所需的持久性的DNA损伤信号。DNA双链断裂是特别有力的衰老诱导物。衰老生长停滞并非简单的是细胞增殖方面的停止。衰老细胞在其基因表达模式中显示出显著的并独特的改变(5)。虽然是相对较新的概念，但考虑RPE细胞衰老是AMD的发作和发展方面的风险因子(6)。

诊断：通过其体征、症状和多方面的测试和方法的结果识别疾病或发展疾病(例如，视网膜退行性疾病)的倾向的过程。通过该过程得出的结论也被称为“诊断”。通常执行的光学测试的形式包括但不限于身体检查、视野、成像如光学相干断层摄影术(OCT)和生理测试如视网膜电描记。术语“倾向”是指使得受试者易受病况(condition)、疾病或病症(disorder)，如视网膜退行性疾病影响的一种因子或多种因子的影响，如特定的基因突变。在所公开的方法的一些实例中，测试能够识别倾向于发展病况、疾病或病症例如AMD的受试者。

疗效：是指药剂诱发所需治疗效果的能力。疗效也是指化合物的强度或有效性。如本文所用的，“增强的疗效”是指增加药剂的治疗作用。

化合物的有效量：足以在被治疗的受试者中达到所需效果的化合物的量。在治疗过程中，例如每天，可以以单剂量或以若干剂量给予化合物的有效量。然而，化合物的有效量将取决于所应用的化合物、被治疗的受试者、病痛的严重程度和类型以及该化合物的给予方式。

多肽的功能片段和变体：包括的是保持亲本多肽的一种或多种功能的那些片段和变体，包括产自选择性剪接或转录事件的天然同种型。应该认识到，可以在很大程度上突变编码多肽的基因或cDNA，只要不实质上改变一种或多种多肽的功能即可。首先，众所周知遗传密码是简并的，并且因此不同密码子编码相同氨基酸。第二，即使其中引入氨基酸替换，该突变可以是保守的并对蛋白质的主要功能没有实质性影响。第三，可以删除多肽链的部分，只要不损害或消除其全部功能即可。第四，可以在多肽链中制作插入或增加，例如，增加表位标签，只要不损害或消除其功能即可。可以在不显著影响多肽的一种或多种功能下进行的其他修饰包括，例如，在体内或体外化学和生物化学修饰或加入不常见氨基酸。这样的修饰包括，例如，乙酰化、羧基化、磷酸化、糖基化、泛素化、用例如放射性核素标记以及各种酶修饰，如由本领域熟练技术人员所易于接受的。用于标记多肽的多种方法和可用于该目的标记物(label)是本领域熟知的，并包括放射性同位素如³²P、结合标记的特异性结合伴侣(例如抗体)的配体或由标记的特异性结合伴侣(例如抗体)结合的配体、荧光素、化学发光药剂、酶和抗配体(antiligand)。功能片段和变体可以具有不同的长度。例如，一些片段具有至少10、25、50、75、100或200个氨基酸残基。

提供功能上类似的氨基酸的保守氨基酸替换表是为本领域技术人员所熟知的。以下六组是认为彼此是保守替换的氨基酸的实例：

1)丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)；

2)天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)；

3)天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)；

4)精氨酸(R)，赖氨酸(K)；

5)异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、甲硫氨酸(M)、缬氨酸(V)；和

6)苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)。

引起氨基酸变化(无论是保守的还是非保守的)的cDNA序列中的改变结果，通常是被最小化的以保持所编码蛋白质的功能和免疫同一性。可以通过确定是否由抗体识别来评估蛋白质的免疫同一性；由这样的抗体识别的变体是免疫学上保守的。任何cDNA序列变体将引入优选不超过20、并优选少于10个氨基酸替换到编码的多肽中。变体氨基酸顺序与天然氨基酸序列可以例如是80％、90％或甚至95％或98％的同一性的。

促分裂原激活的蛋白激酶信号：MAPK激酶信号参与细胞事件如生长、分化和应激反应(7)。目前已识别了四种平行的MAPK通路：ERK1/ERK2、JNK、p38和ERK5(8)。这些通路是线性激酶级联的，即MAPKKK磷酸化并激活MAPKK，并且MAPKK磷酸化并激活MAPK。这些通路的激活通过磷酸化调节许多底物的活性。MAPK信号级联参与控制细胞过程，包括增殖、分化、凋亡和应激反应。

药学上可接受的载体：可用于本发明的药学上可接受的载体是常规的。由E.W.Martin所著的Remington’sPharmaceuticalSciences，MackPublishingCo.，Easton，PA，第15版(1975)，描述了适用于药物递送本发明的化合物的组合物和制剂。

通常，载体的性质将取决于要采用的特定的给予模式。例如，非肠道制剂通常包括可注射用液体，其包括药学上以及生理学上可接受的液体如水、生理盐水、平衡的盐溶液、右旋糖(dextrose，葡萄糖)水溶液、甘油或类似的作为媒介物(vehicle)。对于固体组合物(例如，粉剂、丸剂、片剂或胶囊形式)，常规的非毒性固体载体(carrier)可以包括，例如，药物级的甘露醇、乳糖、淀粉或硬脂酸镁。除了生物中性载体，待给予的药物组合物可以包含少量的非毒性辅助物质，如润湿剂或乳化剂、防腐剂和pH缓冲剂等，例如乙酸钠或单月桂酸山梨醇酐酯。

药剂：当适当给予至受试者或细胞时能够诱导所需要的治疗或预防效果的化学化合物或组合物。孵育包括将目标暴露于药剂持续足够的时间用于药剂与细胞相互作用。接触包括将固体或液体形式的药剂与细胞孵育。

预防或治疗疾病：预防疾病是指抑制疾病的发作或完全发展，例如抑制患有早期干性AMD的人中完全视觉丧失的发展。治疗是指改善疾病或病理病况开始发展之后的体征或症状的治疗干预。

视网膜退行性疾病：由视网膜退化引起的疾病，通常与渐进性视觉丧失、并且特别是光感受器退化相关联。视网膜退化可以起因自多种原因。在特定实施方式中，导致视网膜色素上皮(RPE)细胞萎缩的衰老，可以导致光感受器损失。RPE是用于保护并向光感受器体提供营养的细胞层。特别地，视网膜退行性疾病，如但不限于干性AMD、湿性AMD，以及色素性视网膜炎，其是导致渐进性光感受器损失的RPE功能失调。

小分子：一种分子，通常具有小于1000或在一些实例中，小于约500道尔顿的分子量。

受试者：活的多细胞生物体，包括脊椎动物生物，为包括人以及非人哺乳动物的类别。

易患疾病或病症的受试者：能够、倾向于或易于发展疾病或病症的受试者。可以理解的是，认为已经具有或表现出疾病或病症的症状的受试者是“易得病的”，因为他们已经发展了它。

治疗有效量：足以在被治疗的受试者中达到所需效果的化合物的量。在治疗过程中，可以例如每天以单剂量或以若干剂量给予化合物的有效量。然而，化合物的有效量将取决于所应用的化合物、被治疗的受试者、病痛的严重程度和类型以及该化合物的给予方式。例如，可以将活性成分的治疗有效量测定为活性成分(如小分子、肽、蛋白或抗体)在血液(体内)或缓冲液(体外)中的浓度(摩尔每升或摩尔-M)，其产生效果。

转化生长因子-β激活激酶1(TAK1)：TAK1是MAPKKK家族的成员，并作为由TGF-β或氧化应激诱导的MAP激酶信号的调节子首次报导(9)。已知TAK1是被应激信号以及促炎细胞因子激活的，并参与激活p38和JNK信号。TAK1最初已知为MAP3K7。

载体(vector)：引入宿主细胞由此产生转染的宿主细胞的核酸分子。重组DNA载体是具有重组DNA的载体。载体可以包括允许其在宿主细胞中复制的核苷酸序列，如复制起始点。载体还可以包括本领域中已知的一种或多种可选择的标志物基因以及其他遗传元件。病毒载体是具有至少一些衍生自一种或多种病毒的核酸序列的重组DNA载体。

III.几种实施方式的概述

本文提供了药用组合物，其包含治疗有效量的药剂，该药剂激活在受试者中的视网膜色素上皮细胞(RPE)中的TAK1-激活的、p38或JNK信号通路中的至少一种。所描述的组合物可以用于在受试者中治疗视网膜退行性疾病。

在特定的实施方式中，所描述组合物的药剂选自由肽、抗体和小分子所组成的组。在特定的实例中，肽是转化生长因子β激活激酶1(TAK1)或TAK1结合蛋白(TAB1)，其在特定的实例中可以通过表达TAK1或TAB1肽的核酸载体提供至受试者。

在特定的实例中，激活TAK1、p38和/或JNK信号的小分子是茴香霉素或其功能性变体。

在特定的实施方式中，药物组合物可以用于治疗干性年龄相关的黄斑变性(AMD)、湿性AMD或色素性视网膜炎。

在特定的实施方式中，所描述的药用组合物可以配制用于注射到受试者的眼部间隙(ocularspace)、作为眼用软膏剂或作为滴眼剂，用于局部应用。在其他实施方式中，将药物组合物结合至可以植入受试者的至少一只眼睛里的眼内植入物中。

在特定的实施方式中，所描述的药物组合物包括另外的用于治疗视网膜退行性疾病的药剂，包括但不限于抗炎剂和抗氧化剂。

此外，本文描述了通过给予受试者治疗有效量的药剂用于在受试者中治疗视网膜退行性疾病的方法，该药剂激活在受试者中的视网膜色素上皮细胞(RPE)中的TAK1、p38或JNK信号通路中的至少一种。

在特定的实施方式中，该药剂选自由以下所组成的组：肽，例如TAKl或TAB1；抗体，如激活TAKl、p38和/或JNK信号的抗体；以及小分子，例如茴香霉素或其功能性衍生物。

在特定的实施方式中，通过所描述的方法治疗的视网膜退行性疾病选自由干性年龄有关的黄斑变性(AMD)、湿性AMD以及色素性视网膜炎所组成的组。

在所描述方法的特定的实施方式中，药剂被配制在药物组合物中，该药物组合物通过注射给予至受试者的眼部间隙中，制剂配制为用于局部给予的眼用软膏或配制为用于局部给予至受试者的滴眼剂。

在特定的实施方式中，通过植入受试者的至少一只眼睛里的植入物来提供该药剂。

仍在进一步的实施方式中，该方法包括给予受试者用于治疗视网膜退行性疾病的另外的药剂。这种另外的药剂可以包括在药物组合物中，该组合物包括TAKl、p38和/或JNK-信号的激活药剂；并且也可以与在本文中描述的其他活性药剂同时或在不同的时间段单独地给予至受试者。

IV.刺激MAP激酶通路TAK1、p38和/或JNK信号用于治疗或预防视网膜变性的方法。

本文所描述的是这样的发现：抑制参与p38和JNK信号通路的激活的TAKlMAP激酶促进视网膜色素上皮(RPE)细胞的衰老和萎缩。相反地，同样已经发现，TAKl刺激，例如，通过小分子茴香霉素，抑制RPE衰老。RPE功能失调是包括老年黄斑变性(AMD)和色素性视网膜炎(RP)在内的多种视网膜退行性疾病的关键因素。RPE功能失调也是导致与玻璃体内注射和玻璃体内移植相关的病理学的结果。

因此，本文提供的是用于视网膜退行性疾病的治疗和预防的用途和方法的组合物。组合物和方法包括使用如小分子、肽或抗体的活性药剂通过上游激活RPE细胞中的TAK1促进p38和/或JNK信号。

在特定的实施方式中，小分子是茴香霉素或其功能性衍生物。

茴香霉素(乙酸(2R,3S,4S)-4-羟基-2-(4-甲氧基苄基)-吡咯烷-3-基酯、(2R,3S,4S)-4-羟基-2-(4-甲氧基苄基)-吡咯烷-3-基乙酸酯((2R,3S,4S)-4-hydroxy-2-(4-methoxybenzyl)-pyrrolidin-3-ylacetate)；也称为鞭毛菌素)是一种由链霉菌属(Streptomycesspp.)分泌的翻译抑制剂，并强烈激活哺乳动物细胞中应激激活的促分裂原激活蛋白(MAP)激酶和p38/RK，引起通路中的即刻早期基因的快速诱导。茴香霉素的结构如式I所示：

在特定的实施方式中，用于刺激RPE细胞中的TAK1、p38和/或JNK信号的药剂是信号通路的激活肽。已知多种肽激活p38和JNK信号通络，包括但不限于以下中的一种：TAK1同种型(在SEQIDNO:1-4中列出示例性序列)、TAB1(如SEQIDNO:5所列示例性序列)、MKK3/4/6、MLK1、ASK1和MEKK，它们是商业可购买的。在特定的实施方式中，配制肽用于直接给予到受试者的眼部间隙。在其他实施方式中，活性肽表达自这样的核酸载体：其自身被提供至受试者的眼内空间。重组蛋白表达的方法(包括基于肽序列构建表达蛋白质的构建体)是本领域中公知的，并由本公开所包括。本发明还理解，p38和/或JNK刺激蛋白质的功能变体可以通过诱变的标准方法产生，其将保持野生型蛋白的活性，并可用在本文描述的组合物和方法中。这些功能性变体在序列方面可以与野生型肽具有至少98％、至少95％、至少90％、至少85％、至少80％或甚至小于80％的序列同一性。可以理解的是，TAK1先前称为MAP3K7，并且存在若干TAK1同种型，而本公开包括共享p38/JNK激活催化活性的TAK1/MAP3K7的所有同种型和变体。

在其他实施方式中，p38和/或JNK刺激药剂是激活抗体，其结合至p38和/或JNK信号通路中上游的激活性细胞受体。在特定的实例中，激活抗体特异性识别、结合至并激活TGFβ受体1。在其他实例中，TAK1激活抗体结合至TAK1激活的上游的多种应激响应受体(例如，Toll样受体(TLR)家族)中的一种。

本文描述的刺激TAK1、p38和/或JNK通路的药剂可以用于如本文所述的药物组合物中，用于治疗和或预防视网膜退行性疾病。在使用所描述的药剂的方法中，将治疗有效量的药剂给予至需要这种治疗的受试者。这样的受试者包括，诊断患有或易患视网膜病的患者。

在特定的实例中，患者已经被诊断为患有该疾病(例如，通过检测视网膜玻璃膜疣；轻度视觉丧失；损失视野；异常视网膜厚度，如由OCT成像所确定的；和降低的光感受器活性，如由异常ERG结果所确定的)。在这样的实例中，给予包含本文所描述的药剂的组合物可以延缓或暂停疾病的发展。例如，所治疗的诊断患有早期干性AMD的受试者，可能没有视觉能力的进一步破坏并将不会进展到疾病的晚期。

在其他实例中，本文描述的方法可以用于在易于患此病的受试者中预防视网膜退行性疾病的发展。可以通过例如检测与视网膜功能病症相关联的遗传突变确定这种易患病性。给予本文所描述的活性药剂，并且其预防视网膜变性，因此可被理解为预防所述疾病的发展。

联合治疗

在本文所描述的组合物和方法的特定的实施方式中，刺激TAK1、p38和/或JNK信号的药剂与至少一种另外的活性药剂组合以治疗或预防视网膜变性。活性化合物用于治疗或预防视网膜变性的非限制实例，包括但不限于AMD但可以包括RP，以及其他视网膜疾病。

在一些实施方式中，在单组合物中将刺激p38和/或JNK信号的药剂和治疗或预防视网膜变性的至少一种另外的活性药剂联合的组合给予至受试者。在特定的实例中，配制组合的组合物，以使组分活性成分以活性形式在受试者中是同时可用的。在其他实例中，配制组分活性成分以使得组分以活性形式在受试者中是顺序可用的。

在其他实施方式中，可以在多个组合物中将经TAK1激活刺激p38和/或JNK信号的药剂和治疗或预防视网膜变性的至少一种另外的活性药剂的组合给予至受试者，一种包含例如茴香霉素，而至少一种另外的组合物含有至少一种另外的活性药剂。给予这样的多个组合物的时机和顺序可以变化。在特定的实例中，组合物是同时提供的，但在其他实例中，它们是一种在另一种之前或之后提供。可以想到的是，当在单独的时间给予时，在给予至少两种组合物之间可能经过显著的时间，如若干小时，若干天或甚至更长。

药物组合物和给予的模式

预期的是在所描述的治疗中使用的药物药剂可以在任何药学上可接受的组合物中供应。

在药用组合物中，特别是在本公开中预想的是小分子的药学上可接受的酸或碱加成盐，例如但不限于茴香霉素。词语“药学上可接受的酸或碱加成盐”包括茴香霉素能够形成的治疗活性的非毒性酸和非毒性碱加成盐形式。具有碱性性质的这样的化合物可以通过用合适的酸处理所述碱形式而转化为其药学上可接受的酸加成盐。合适的酸包括，例如，无机酸如氢卤酸，例如盐酸或氢溴酸；硫酸；硝酸；磷酸等酸；或有机酸，如，例如，乙酸、丙酸、羟基乙酸、乳酸、丙酮酸、草酸、丙二酸、琥珀酸(即丁二酸)、马来酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、环拉酸、水杨酸、对氨基水杨酸、帕莫酸等酸。

具有酸性性质的小分子如，但不限于茴香霉素，可以通过用合适的有机或无机碱处理所述酸形式转化为其药学上可接受的碱加成盐。合适的碱盐形式包括，例如，铵盐、碱金属盐和碱土金属盐，例如锂盐、钠盐、钾盐、镁盐、钙盐等，带有有机碱的盐，例如苄星青霉素、N-甲基-D-葡糖胺、海巴明盐，以及与氨基酸，如，例如精氨酸、赖氨酸等的盐。

术语酸加成盐或碱加成盐还包括小分子，如但不限于茴香霉素能够形成的水合物和溶剂加成形式。这样的形式实例为，例如，水合物、醇化物等。

也考虑用于在本文中描述的方法和组合物中使用的是小分子如但不限于茴香霉素的立体化学同分异构形式。术语立体化学同分异构形式包括由相同顺序的键键合的相同原子构成的、但具有不可互换的不同的三维结构的所有可能的化合物。除非另有述及或指明，化合物的化学指定包括该化合物可能具有的所有可能的立体化学同分异构形式的混合物。这样的混合物可以包含化合物的基本分子结构的所有的非对映异构体和/或对映异构体。也可以考虑的是以纯形式或以彼此混合的所有立体化学同分异构形式。

多种递送系统是已知的并且可以用来给予本文所描述的肽、抗体和小分子。这些系统包括，例如，包封在脂质体中、微粒、微胶囊、能表达一种或多种治疗性分子的重组细胞(参见，例如，Wuetal.,J.Biol.Chem.262,4429,1987)、构建作为逆转录病毒或其他载体的部分的治疗性核酸(表达所描述的肽或抗体)，等。引入的方法包括但不限于，眼内、鞘内、皮内、肌肉内、腹膜内(ip)、静脉内(iv)、皮下、鼻内、硬膜外以及口服途径。治疗剂可以通过任何方便的途径给予，包括，例如，输液或推注、局部的、通过上皮或粘膜内层吸收(例如，口腔粘膜、直肠和肠粘膜，等)、眼、鼻以及透皮途径，并可以与其他生物活性剂一起给予。

在具体的实施方式中，可以期望通过注射、导管、栓剂或植入物(例如，由多孔、非多孔或凝胶状材料形成的植入物，材料包括膜，如sialastic膜或纤维)等给予所描述的药物治疗。在另一个实施方式中，在囊泡特别是脂质体内递送治疗药剂，(见，例如，Langer,Science249,1527,1990；Treatetal.,inLiposomesintheTherapyofInfectiousDiseaseandCancer,Lopez-BeresteinandFidler(eds.),Liss,N.Y.,pp.353-365,1989)。

还在另一实施方式中，可以在控释系统中递送用于在组合治疗中所使用的任何一种药剂。在一种实施方式中，可使用泵(见，例如，LangerScience249,1527,1990；SeftonCrit.Rev.Biomed.Eng.14,201,1987；Buchwaldetal.,Surgery88,507,1980；Saudeketal.,N.Engl.J.Med.321,574,1989)。在另一实例中，可以使用聚合材料(见，例如，Rangeretal.,Macromol.Sci.Rev.Macromol.Chem.23,61,1983；Levyetal.,Science228,190,1985；Duringetal.,Ann.Neurol.25,351,1989；Howardetal.,J.Neurosurg.71,105,1989)。也可以使用其他控释系统，如在Langer(Science249,15271990)的综述中描述的那些。

在特定的实例中，刺激p38和/或JNK信号的药剂和来自视网膜变性的治疗的至少一种另外的药剂是同时给予的，并通过相同的给予模式。在其他实例中，在不同的时间给予药物化合物，并由相同或不同的给予模式。

其中递送药剂的媒介物可以包括化合物的药学上可接受的组合物，利用本领域技术人员熟知的方法。例如，在一些实施方式中，本文中描述的药剂通常包含在药学上可接受的载体中。术语“药学上可接受的”意指由联邦或州政府的管理机构批准的或列在美国药典或其他普遍公认药典中的用于在动物中，并且更明确地说，用于在人中使用。术语“载体”是指与治疗剂一起给予的稀释剂、佐剂、赋形剂或媒介物。这类药物载体可以为无菌液体，如水和油类，包括那些石油、动物油、植物油或合成来源的油，如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油，等。当药物组合物是静脉内给予时，水是优选载体。盐溶液、血浆介质、右旋糖水溶液和甘油溶液也可用作液体载体，特别是用于可注射溶液。该介质还可以含有常规的药物辅助材料如，例如，药学上可接受的盐以调节渗透压、脂质载体如环糊精、蛋白质如血清白蛋白、亲水性药剂如甲基纤维素、洗涤剂、缓冲剂、防腐剂等。

药物赋形剂的实例包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、大米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石粉、氯化钠、脱脂乳粉、甘油、丙二醇、水、乙醇，等。治疗剂，如果需要，还可以含有少量润湿剂或乳化剂或pH缓冲剂。治疗剂可以采取溶液、悬浮液、乳剂、片剂、丸剂、胶囊剂、粉剂、缓释制剂等形式。治疗剂可制成栓剂，具有传统的粘结剂和载体如甘油三酯。口服制剂可以包含标准载体如药物级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。肠胃外药物载体的更完整的解释可见于Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy(第19版，1995)的第95章。

其他药用组合物的实施方式是用本领域技术人员会知道的常规药学上可接受的反离子制备的。

治疗制剂将包含治疗有效量的至少一种活性成分，优选以纯化形式的，同时含有适量的载体，以向受试者提供适合的给予。剂型应当适合给予模式。

本公开的组合治疗可以按照常规方法配制为适于人类静脉内给予的药物组合物。通常，用于静脉内给予的组合物是无菌等渗水性缓冲液形式的溶液。如果必要，组合物还可以包含增溶剂和局部麻醉剂如利多卡因以缓解注射部位的疼痛。

单独提供或在单元剂型中混合到一起提供在各种实施方式中的成分，例如，在固体、半固体和液体剂型中如片剂、丸剂、粉剂、液体溶液，包括滴眼液、软膏或悬浮液或作为在密封容器如指示活性药剂的量的安瓿瓶或sachette中的干粉或无水浓缩物。

会是有效的每种治疗药剂的量将取决于要治疗的疾病或病症的性质以及疾病或病症的阶段。可以通过标准临床技术确定有效量。制剂中将采用精确剂量也将取决于给予途径，并且应当根据健康护理员的判断和每位病人的情况做出决定。在本文中描述了单独化合物的示例性剂量，但是，极大数量的其他给予方案包括在本公开中。另外的剂量范围的实例是单一或分开剂量中的0.1到200mg/kg体重。另一剂量范围的实例是单一或分开剂量中的1.0到100mg/kg体重。

对于任何特定的受试者的具体剂量水平和频率可以改变，并将取决于各种因素，包括具体化合物的活性、代谢稳定性和该化合物的作用长度、年龄、体重、一般健康病况、性别、饮食、给予模式和时间、排泄速率、药物组合物以及正经历治疗的宿主的病况的严重性。在特定的实例中，将茴香霉素以小于l0ng/ml的浓度给予患者。

在逐渐增加的剂量方案或在负荷剂量方案(例如，其中负荷剂量为维持剂量的约2-5倍)中，可以贯穿治疗期间以大概相同的剂量给予本公开的治疗化合物和组合物。在一些实施方式中，在治疗期间，基于所治疗的受试者的病况、疾病或病况的严重程度、对治疗表观响应和/或由本领域的普通技术人员所判断的其他因素而改变剂量。在一些实施方式中，用药物长期治疗是所计划的。

在一些实施方式中，包含治疗有效量的治疗化合物或组合物的药物制剂的持续的局部释放可以是有益的。缓慢释放制剂为本领域的普通技术人员所已知的。例如，聚合物例如二(对羧基苯氧基)丙烷-癸二酸或卵磷脂悬浮液可用于提供持续的局部释放。

在一些实施方式中具体考虑的是，递送是经由注射和/或植入药物贮存库，例如包括多泡脂质体如在Depofoam中(SkyePharma,Inc,SanDiego,CA)(参见，例如，Chamberlainetal.,Arch.Neuro.50:261-264,1993；Katrietal.,J.Pharm.Sci.87:1341-1346,1998；Yeetal.,J.ControlRelease64:155-166,2000；andHowell,CancerJ.7:219-227,2001)。

提供以下实施例来说明某些特定特征和/或实施方式。这些实施例不应理解为将本公开限制于所描述的特定特征或实施方式。

实施例

实施例1：TAKl抑制增加视网膜色素上皮细胞的衰老

该实施例显示TAKlMAP激酶的抑制促进视网膜色素上皮(RPE)细胞的衰老

方法

RPE细胞的双染色(膜联蛋白和碘化丙啶(PI))测定。将RPE细胞(ARPE-19，可从ATCC获得)用TAKl抑制剂{5Z-7-oxozeaenol(1μM)}处理1小时，然后用200μMH₂O₂处理1小时或保持未处理。然后将细胞用新鲜培养基清洗，并在24小时后进行胰蛋白酶消化、染色，并通过FACS分析。由其DNA含量(FL2A)测定在每种细胞周期阶段(G1/G0、S、G2/M)中的细胞的百分率。

细胞生活力分析将ARPE-19细胞接种在96孔孔板(5000细胞/孔)在全培养基中并用TAKl抑制剂5Z-7-oxozeaenol(1μM)预处理1小时或保持未处理1小时。然后由XTT试验(细胞增殖试剂盒cat#20-300-1000；BeitHaemek，以色列)分析它们的生活力。

按所描述的进行SA-β-gal染色(10)。

通过标准方案(11)进行蛋白质印迹分析，p53、p38、磷酸-p38、GADPH和TAKl；抗体得自Enco，以色列。

结果

表征TAKl在炎性应答中的作用(12，13)，但对其参与RPE细胞对应激的应答知道的较少。在进一步用H₂O₂(200μM)处理之前，将RPE细胞用TAKl抑制剂5Z-7-oxozeaenol(1μM)处理1小时。用膜联蛋白和碘化丙锭染色而FACS分析显示相比于未处理的RPE细胞，其中表示为总数量的百分比的凋亡细胞的数量是1.25％，仅用H₂O₂处理的凋亡细胞数量在相同时间内提高到31％。相反，在其用H₂O₂处理之前用TAKl抑制剂处理的细胞中，凋亡细胞数为24％(图1A)。在每个FACS图的晚期凋亡部分的细胞数量(膜联蛋白和Pi，右上图)具有或不具有TAKl抑制剂是类似的。这些结果暗示TAKl参与细胞凋亡，而其抑制减弱该过程。

为了检查TAK1抑制对RPE细胞周期的影响，用TAK1抑制剂处理RPE细胞，具有或不具有H₂O₂。RPE细胞是静止的并主要处于G0/G1阶段(图1B和图1C)，然而，TAK1抑制后，处于G0/G1阶段的细胞百分比提高到总数量的89％。当细胞经受氧化应激(H₂O₂处理)时，它们表现出高水平的G2/M停滞。在氧化应激之前的TAKl抑制后这一现象减少(图1B和图1C)。在TAKl抑制后在G0/G1的细胞周期停滞进一步由在TAKl抑制剂存在下所观察到的RPE细胞增殖的减少支持(图1D)。未处理的细胞显示出如由其增加的光密度(O.D.)所反映的高增殖速率，其在第4天达到峰值，与显示出较慢的增殖速率的、3天后开始下降的TAKl抑制的细胞相反(图1D)。这些发现提示，TAKl的抑制促进细胞周期停滞和RPE细胞衰老。

为了进一步表征TAKl抑制对RPE细胞衰老的作用，在这些细胞中检测了这种抑制对SA(衰老相关联的)-β-gal表达的影响(10)。相对于未经处理的细胞的数量，表达SA-β-gal的细胞的数量在用TAKl抑制剂处理后显著增加(图2A和图2B)。当TAKl被抑制并且RPE细胞被另外暴露于氧化应激时，这种增加进一步增强(图2C和图2D)。在暴露于氧化应激而没有这样的预处理的细胞中存在广泛的细胞死亡，并到第16天仅有少量存活细胞，其具有很低的SA-β-gal表达。相反，在第13天和16天，在用TAKl抑制剂预处理后已经暴露于氧化应激的细胞中SA-β-gal强烈增加(图2C和D)。这些发现进一步支持TAKl参与RPE细胞中的衰老调节。

已知p53蛋白质在细胞周期调节、DNA修复和程序性细胞死亡中起关键作用(14，15)。鉴于这一知识，并考虑上述TAKl抑制减少凋亡的观察，检查了p53在RPE细胞中的表达。在图3A所示，在氧化应激下p53在RPE细胞中的表达被用TAKl抑制剂预处理细胞严重影响，由p38的磷酸化的抑制所见(图3A和图3B)。在对照细胞(没有这样的预处理)中，p53的表达逐渐增加，在60分钟后达到峰值，然而在预处理的细胞中的，p53表达在10分钟后达到峰值，然后下降(图3A)。在更长时间内，与未经处理的细胞相比，TAKl抑制降低的p53表达水平略微更多(图3C和图3D)。相反，暴露于氧化应激的RPE细胞在4天后表现出高水平的p53，并且其表达逐渐增加(图3C和图3D)。

通过免疫荧光评估了TAKl在RPE细胞中的程度和表达模式。如图4所示，TAKl水平在未处理的细胞中是稳定的，主要位于细胞核内，并且在实验期间没有观察到显著改变。有趣的是，当细胞暴露于氧化应激时，在核中TAKl表达减少，并仅在48小时后返回至正常水平。此发现意味着在氧化应激期间TAKl表达是受调节的，因此证明了其在该过程中的重要性。

衰老最明显的作用是获得衰老相关的分泌表型(SASP)。SASP可以将衰老细胞转换成促炎细胞，其促进分泌趋化因子和细胞因子，这可以影响微环境，包括在人类视网膜中(16，17)。为了检查TAKl在该过程中的作用，用TAKl抑制剂或用H₂O₂，单独地或组合地处理RPE细胞。2周后，从三个独立的处理收集培养基，离心，然后将上清液(条件培养基)施加在新鲜RPE细胞上72小时。如图5所示，接受来自未处理细胞的条件培养基的细胞显示正常表型，而接受收集自用TAKl抑制剂或用H₂O₂处理的RPE细胞的条件培养基的细胞表现出类似于衰老细胞的肥大表型。有趣的是，接受来自用TAKl抑制剂和用H₂O₂两者处理的细胞的条件培养基的细胞表现出类似于萎缩的RPE细胞的异常形态。

RPE衰老的一种标记是细胞肥大。RPE细胞尺寸大约是9-12μM；但在氧化应激或基因突变后，RPE细胞可以经历扩大。如图6所示，在应激后，与正常细胞相比，细胞尺寸增加了4倍。然而，与应激后细胞(没有TAKl抑制)和正常细胞相比，TAKl抑制与氧化应激的组合进一步增加了细胞尺寸。

综上所述，这些结果表明，TAKl抑制促进RPE细胞衰老，并提示促进TAKl-介导的MAP激酶信号通路的药剂可以用于抑制此种衰老并通过扩展，治疗RPE-衰老相关的疾病。

实施例2：用茴香霉素处理降低在RPE细胞中的衰老外观

在实施例1中呈现的结果说明抑制TAK1信号促进RPE细胞衰老。该实施例表明茴香霉素，TAK1信号促进剂产生相反的效果，并降低RPE细胞衰老。

方法

所有方法如前文所述。茴香霉素得自SigmaAldrich，以色列。

结果

显示茴香霉素激活与MAP激酶如TAK1相关联的激酶。为了确定茴香霉素处理对RPE细胞的影响，用H₂O₂处理RPE细胞1小时。在该处理后，细胞在新鲜培养基中生长另外10天直至出现衰老标记。在第10天后，细胞用茴香霉素处理并在新鲜培养基中生长另外5天，针对SA-β-Gal的存在染色并拍照。图7示出说明性的照片。如在图中可以看到的，与暴露于氧化应激的未处理的细胞相比，用茴香霉素处理减少SA-β-Gal阳性细胞的数量。

为了确定茴香霉素对RPE细胞的可能的毒性，用不同浓度的茴香霉素处理RPE细胞5分钟的时间。处理后，更换培养基，并加入新鲜培养基。72小时后处理，将细胞拍照。如在图8A中可以看到的，细胞形态类似于对照细胞，因此证明低水平的茴香霉素是无毒性的。此外，具有氧化应激和茴香霉素的细胞增殖的速率没有显示出在细胞增殖的速率方面的减小。图8B显示用TAK1抑制剂5Z-7-oxozeaenol(1μM)、H₂O₂和茴香霉素单独地或组合地预处理的或保持未处理1小时的ARPE-19细胞。然后由XTT试验测定其生活力。

总之，这些结果表明茴香霉素可以抑制经受氧化应激的RPE细胞中的细胞衰老。

实施例3：用茴香霉素治疗AMD

本实施例描述用包含茴香霉素的药物组合物治疗早期干性AMD

识别受试者已诊断患有干性AMD。诊断标准包括检测以下中的一种或多种：视网膜玻璃膜疣；轻度视觉丧失；视野损失；通过OCT成像确定的视网膜厚度异常；以及由异常ERG结果确定的光感受器活性降低。

向受试者提供配制为滴眼剂的茴香霉素，并在指导下每只眼睛施用一滴，每天一次。在另外的试验中，通过眼内注射给予受试者茴香霉素，每周一次。对于治疗的前6个月的每两个月，检查受试者疾病进展。然后，受试者每六个月进行检查。如果没有检测到疾病状态改变，指导受试者保持治疗。如果检测到玻璃膜疣增加或疾病进展的其他症状，指导受试者增加茴香霉素剂量至每只眼睛中每天两或三滴的或给予另外的注射或注射更大的茴香霉素剂量。

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鉴于许多可应用所公开发明的原理的实施方式，应当认识到所举例说明的实施方式仅是本发明的优选实例，并不应认为是限制本发明的范围。相反，本发明的范围由所附权利要求限定。因此，我们要求的为本发明全部内容在这些权利要求的范围和精神内。

Claims (20)

1.一种药物组合物，包含治疗有效量的药剂，所述药剂激活在受试者的视网膜色素上皮(RPE)细胞中的TAK1、p38或JNK信号通路中的至少一种，用于在治疗所述受试者的视网膜退行性疾病中使用。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述药剂选自由肽、抗体和小分子所组成的组。

3.根据权利要求2所述的药物组合物，其中所述肽是转化生长因子β激活激酶1(TAKl)或TAKl结合蛋白(TBP1)。

4.根据权利要求2所述的药物组合物，包含表达所述TAKl肽或TBP1的核酸载体。

5.根据权利要求2所述的药物组合物，其中所述小分子是茴香霉素。

6.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述药剂激活所述p38信号通路。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的药物组合物，其中所述视网膜退行性疾病选自由干性年龄相关的黄斑变性(AMD)、湿性AMD以及色素性视网膜炎所组成的组。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物被配制用于注射到所述受试者的眼部间隙中、作为眼用软膏或作为滴眼剂。

9.根据权利要求1-7中任一项所述的药物组合物，其中所述药剂被结合至眼内植入物中。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的药物组合物，进一步包括用于治疗所述视网膜退行性疾病的另外的药剂。

11.一种用于在受试者中治疗视网膜退行性疾病的方法，包括：

给予所述受试者治疗有效量的药剂，所述药剂激活在所述受试者的视网膜色素上皮(RPE)细胞中的TAK1、p38或JNK信号通路中的至少一种。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述药剂选自由肽、抗体和小分子所组成的组。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述肽为TAKl或TBP1。

14.根据权利要求3所述的方法，其中由给予至所述受试者的核酸载体表达所述TAKl或TBPl。

15.根据权利要求12所述的方法，其中所述小分子是茴香霉素或其功能性衍生物。

16.根据权利要求11所述的方法，其中所述药剂激活所述p38信号通路。

17.根据权利要求11所述的方法，其中所述视网膜退化性疾病选自由干性年龄相关黄斑变性(AMD)、湿性AMD和色素性视网膜炎所组成的组。

18.根据权利要求11所述的方法，其中所述药剂被配制在注射到所述受试者的眼部间隙中的药物组合物中、配制为眼用软膏或通过滴剂给予至所述受试者。

19.根据权利要求11的方法，其中通过植入到所述受试者的至少一只眼睛里的植入物提供所述药剂。

20.根据权利要求11所述的方法，进一步包括给予所述受试者至少一种用于治疗视网膜退行性疾病的另外的药剂。