CN105363041B - Ge11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种GE11多肽修饰的冬凌草甲素‑纳米硒复合物及其制备方法和应用。该复合物的制备方法包括如下步骤：(1)将硒化合物、冬凌草甲素、还原剂、稳定剂分别配制成溶液后混合，于0‑37℃反应5‑20h，得到冬凌草甲素‑纳米硒溶液；(2)将GE11多肽与羧基活化剂分别配制成溶液后，加入至所述冬凌草甲素‑纳米硒溶液中，于0‑37℃反应5‑20h，即得GE11多肽修饰的冬凌草甲素‑纳米硒复合物溶液。该GE11多肽修饰的冬凌草甲素‑纳米硒复合物，粒径分布均匀、水溶性好、稳定性佳，经药理研究证明，具有良好的EGFR靶向功能，且能够有效抑制抑制癌细胞和血管内皮细胞的增殖。
Description
技术领域
本发明涉及营养保健医疗领域，特别是涉及GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物及其制备方法和应用。
背景技术
冬凌草属于唇形科香茶菜属，学名又叫碎米亚，主产于河南济源县、信阳县、山西太行山鹤壁地区、陕西太白山区、四川南川县、贵州施秉县、习水县和遵义地区凤岗县等地区。冬凌草味苦、甘、微寒，具有清热解表和消炎止痛的功效，因此可被用于咽喉肿痛、扁桃体炎、蛇虫咬伤和风湿骨痛的治疗。同时，冬凌草还有很好的抗肿瘤作用，在河南济源县等地区被广泛用于食道癌的治疗。
大量研究表明，含有冬凌草甲素是冬凌草具有抗癌活性和抗炎活性的主要原因。冬凌草甲素属贝壳杉烯二萜类化合物，为无色棱柱状结晶，味道极苦，不溶于水，可溶于乙醚、甲醇、乙醇等有机溶剂，分子式为C20H28O6。冬凌草甲素具有良好的抗癌活性，对食管癌、贲门癌、原发性肝癌及乳癌等有明显缓解症状作用，有稳定和缩小瘤体及延长病人生命的效果。同时冬凌草甲素对白血病也具有很好的疗效，可以选择性地杀伤t(8:21)白血病细胞。如果跟化疗药物合用，冬凌草甲素可减轻化疗药物的不良反应，提高疗效，对食管上皮重度增生也有一定的疗效。
冬凌草甲素具有很好的生物活性，但由于水溶性差，生物利用度低，靶向性差，限制其临床应用，而通过应用纳米给药系统的原理改进剂型，能够克服这种缺陷，同时还能提高药效，提高药物靶向性。
硒是人体必需的微量元素，对人体的很多生理功能有非常重要的作用。硒被称为化学元素中的抗癌之王，能很好的抑制癌症的发生，且其对肿瘤病人的放化疗也有明显的辅助治疗作用。近年来，纳米药物的制备及其抗癌效果的研究逐渐成为新的研究热点。低毒性却拥有良好生物可利用性和生物活性的纳米硒近年来成为纳米药物研究领域的热点。纳米硒既可作为一类抗癌材料，也可作为药物载体，借助于纳米硒良好的生物可利用性，将药物运送到作用位置，提高药物的生物利用率。
目前，现有技术中已有关于褪黑素纳米硒、葡苷聚糖纳米硒和甲壳素纳米硒、液相多聚糖纳米硒的相关报道，但采用GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物迄今仍无专利和文献报道。
发明内容
基于此，有必要提供一种GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物及其制备方法和应用。
一种GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物，该复合物由冬凌草甲素-纳米硒溶液与GE11多肽和羧基活化剂反应制备而成，制备方法包括如下步骤：
(1)将硒化合物、冬凌草甲素、还原剂、稳定剂分别配制成溶液后混合，控制混合体系中硒化合物、冬凌草甲素、还原剂、稳定剂的浓度分别为0.1-10mM、0.1-10mM、0.1-50mM、0.01-10wt％，于0-37℃反应5-20h，得到冬凌草甲素-纳米硒溶液；
(2)将GE11多肽与羧基活化剂分别配制成溶液后，加入至所述冬凌草甲素-纳米硒溶液中，控制反应体系中GE11多肽和羧基活化剂的浓度分别为0.1-10mg/mL和0.1-10mM，于0-37℃反应5-20h，即得GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物溶液。
在其中一个实施例中，步骤(1)所述混合体系中硒化合物、冬凌草甲素、还原剂、稳定剂的浓度分别为0.5-2mM、0.1-2mM、5-10mM、0.01-0.1wt％；步骤(2)所述反应体系中GE11多肽和羧基活化剂的浓度分别为0.1-2mg/mL和1-5mM。
在其中一个实施例中，所述GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物的平均ZETA电位为30-60mV，平均粒径为50-90nm。
在其中一个实施例中，所述羧基活化剂为1-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)。
在其中一个实施例中，所述硒化合物为亚硒酸钠；所述还原剂为抗坏血酸；所述稳定剂为壳聚糖。
在其中一个实施例中，
将硒化合物配制成溶液的方法为：将硒化合物溶于水中，配制成1-100mM的亚硒酸钠溶液；
将冬凌草甲素配制成溶液的方法为：将冬凌草甲素溶于甲醇中，配制成40-60mM的冬凌草甲素溶液；
将还原剂配制成溶液的方法为：将还原剂溶于水中，配制成1-100mM的还原剂溶液；
将稳定剂配制成溶液的方法为：将稳定剂溶于体积分数为0.1-1％的醋酸水溶液中，配制成浓度为0.1-20wt％的稳定剂溶液；
将GE11多肽配制成溶液的方法为：将GE11多肽溶于水中，配制成1-100mg/mLGE11多肽溶液；
将羧基活化剂配制成溶液的方法为：将羧基活化剂溶于水中，配制成10-1000mM的羧基活化剂溶液。
本发明还提供所述的GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物的制备方法，包括如下步骤：
(1)将硒化合物、冬凌草甲素、还原剂、稳定剂分别配制成溶液后混合，按所述硒化合物、冬凌草甲素、还原剂、稳定剂的浓度控制混合体系中硒化合物、冬凌草甲素、还原剂、稳定剂的量，于0-37℃反应5-20h，得到冬凌草甲素-纳米硒溶液；
(2)将GE11多肽与羧基活化剂分别配制成溶液后，加入至所述冬凌草甲素-纳米硒溶液中，按所述GE11多肽和羧基活化剂的浓度控制反应体系中GE11多肽和羧基活化剂的量，于0-37℃反应5-20h，即得GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物溶液。
在其中一个实施例中，对步骤(1)得到的所述冬凌草甲素-纳米硒溶液和/或步骤(2)得到的所述GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物溶液进行纯化，纯化的方法为：用水进行透析，去除未反应的原料。
本发明还提供所述的GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物在制备具有EGFR靶向、抑制癌细胞增殖或抑制血管内皮细胞增殖功能的药物中的应用。
本发明还提供具有EGFR靶向、抑制癌细胞增殖、抑制血管内皮细胞增殖中一种或多种功能的药物，其活性成分包括所述的GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明采用GE11多肽对冬凌草甲素-纳米硒复合物进行修饰，制备得到的GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物，粒径分布均匀、水溶性好、稳定性佳，经药理研究证明，具有良好的EGFR靶向功能，且能够有效抑制抑制癌细胞和血管内皮细胞的增殖，故该复合物在食品保健以及医疗卫生领域有着潜在的应用前景；另外，所述制备方法还具有简便易行，适宜工业化生产的优点。
附图说明
图1为GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物制备过程的图解；
图2为GE11多肽、冬凌草甲素、冬凌草甲素-纳米硒复合物和GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物的紫外吸收结果；
图3为GE11多肽、冬凌草甲素、纳米硒、冬凌草甲素-纳米硒复合物和GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物的红外吸收结果；
图4为冬凌草甲素-纳米硒复合物和GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物的(A)平均粒径和(B)zeta电位；
图5为GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物的透射电镜形貌图；
图6为GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物对肝癌HepG2细胞、乳腺癌MCF-7细胞和脐静脉血管内皮细胞的IC50值；
图7为GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物对食道癌KYSE150细胞周期分布的影响，(A)对照组，(B)8μMGE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物作用组，(C)16μMGE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物作用组，(D)32μMGE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物作用组；
图8为GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物对食道癌KYSE150细胞线粒体膜电位的影响，(A)对照组，(B)8μMGE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物作用组，(C)16μMGE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物作用组，(D)32μMGE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物作用组；
图9为(A)装载香豆素-6的GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物的制备过程的图解和(B)装载香豆素-6的GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物作用食道癌KYSE150细胞后细胞内复合物的浓度(结果为每108个细胞内硒的含量)；
图10为游离的GE11多肽分子对食道癌KYSE150细胞摄取装载香豆素-6的GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物的影响。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明的GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物及其制备方法和应用作进一步详细的说明。
实施例1
本实施例一种GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物的制备方法，包括如下步骤：
(1)将亚硒酸钠溶于水中，配制成50mM的亚硒酸钠溶液；
(2)将冬凌草甲素溶于甲醇中，配制成50mM的冬凌草甲素溶液；
(3)将抗坏血酸溶于水中，配制成50mM的抗坏血酸溶液；
(4)将壳聚糖溶于体积分数为0.1-1％的醋酸水溶液中，配制成浓度为0.5wt％的壳聚糖溶液；
(5)将GE11多肽溶于水中，配制成50mg/mLGE11多肽溶液；
(6)将1-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)溶于水中，配制成500mM的EDC溶液；
(7)将200μL的亚硒酸钠溶液与100μL的冬凌草甲素溶液、600uL的壳聚糖溶液混合，随后加入1600μL的抗坏血酸溶液，加入蒸馏水稀释到10mL后，静置于4℃反应12h；将反应得到的溶液用蒸馏水进行透析，除去体系中多余的反应物即可得到冬凌草甲素-纳米硒复合物；
(8)将40μL的EDC溶液与80μL的GE11多肽溶液与透析后得到的冬凌草甲素-纳米硒复合物在4℃静置反应12h；将反应得到的溶液用蒸馏水进行透析，除去体系中多余的反应物即可得到GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物，所得到的GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物既可直接以溶液形式保存在4℃，也可以经过离心或冷冻/真空干燥后以粉末形式保存。
如图1所示，在反应过程中，抗坏血酸将亚硒酸钠还原形成单质的硒，单质的硒聚集到一起形成纳米硒颗粒，该过程中，壳聚糖分子和冬凌草甲素分子将纳米硒颗粒包裹住，最终形成冬凌草甲素-纳米硒复合物。随后在EDC的作用下，GE11多肽被进一步修饰到冬凌草甲素-纳米硒复合物表面，形成GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物。
实施例2
本实施例一种GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物的制备方法，包括如下步骤：
(1)将亚硒酸钠溶于水中，配制成40mM的亚硒酸钠溶液；
(2)将冬凌草甲素溶于甲醇中，配制成40mM的冬凌草甲素溶液；
(3)将抗坏血酸溶于水中，配制成40mM的抗坏血酸溶液；
(4)将壳聚糖溶于体积分数为0.1-1％的醋酸水溶液中，配制成浓度为20wt％的壳聚糖溶液；
(5)将GE11多肽溶于水中，配制成40mg/mLGE11多肽溶液；
(6)将1-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)溶于水中，配制成400mM的EDC溶液；
(7)将25μL的亚硒酸钠溶液与25μL的冬凌草甲素溶液、100uL的壳聚糖溶液混合，随后加入250μL的抗坏血酸溶液，加入蒸馏水稀释到10mL后，静置于0℃反应20h；将反应得到的溶液用蒸馏水进行透析，除去体系中多余的反应物即可得到冬凌草甲素-纳米硒复合物；
(8)将2.5μL的EDC溶液与25μL的GE11多肽溶液与透析后得到的冬凌草甲素-纳米硒复合物静置于0℃反应20h；将反应得到的溶液用蒸馏水进行透析，除去体系中多余的反应物即可得到GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物。
实施例3
本实施例一种GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物的制备方法，包括如下步骤：
(1)将亚硒酸钠溶于水中，配制成60mM的亚硒酸钠溶液；
(2)将冬凌草甲素溶于甲醇中，配制成60mM的冬凌草甲素溶液；
(3)将抗坏血酸溶于水中，配制成60mM的抗坏血酸溶液；
(4)将壳聚糖溶于体积分数为0.1-1％的醋酸水溶液中，配制成浓度为20wt％的壳聚糖溶液；
(5)将GE11多肽溶于水中，配制成60mg/mLGE11多肽溶液；
(6)将1-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)溶于水中，配制成600mM的EDC溶液；
(7)将1667μL的亚硒酸钠溶液与1667μL的冬凌草甲素溶液、5000uL的壳聚糖溶液混合，随后加入3333μL的抗坏血酸溶液，静置于37℃反应5h；将反应得到的溶液用蒸馏水进行透析，除去体系中多余的反应物即可得到冬凌草甲素-纳米硒复合物；
(8)将166.7μL的EDC溶液与1667μL的GE11多肽溶液与透析后得到的冬凌草甲素-纳米硒复合物静置于37℃反应5h；将反应得到的溶液用蒸馏水进行透析，除去体系中多余的反应物即可得到GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物。
实施例4
本实施例通过紫外分光光度计对实施例1所制得的GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物的结构进行表征。分别检测GE11多肽、冬凌草甲素、冬凌草甲素-纳米硒复合物和GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物的紫外吸收。
如图2所示，冬凌草甲素-纳米硒复合物和GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物在265nm处有强的紫外吸收，且GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物在222nm处显示了GE11多肽的特征吸收峰。以上结果说明GE11多肽被成功修饰到了冬凌草甲素-纳米硒复合物上。
实施例5
本实施例通过红外光谱检测仪对实施例1所制得的GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物的结构进行表征。分别检测GE11多肽、冬凌草甲素、纳米硒、冬凌草甲素-纳米硒复合物和GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物的红外吸收。
如图3所示，冬凌草甲素在1709.86cm-1和1457.06cm-1处有特征吸收峰，而GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物在1689.41cm-1和1456.36cm-1处也有特征吸收峰。GE11多肽在1517.03cm-1处有特征吸收峰，而GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物在1523.78cm-1处也有特征吸收峰。以上结果说明冬凌草甲素和GE11多肽都被成功修饰到了纳米硒上形成了GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物。
实施例6
本实施例通过激光纳米粒度仪对实施例1所制得的GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物的结构进行表征。分别检测冬凌草甲素-纳米硒复合物和GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物的粒径和zeta电位分布。
如图4所示，冬凌草甲素-纳米硒复合物的平均粒径大概为60nm，而GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物的平均粒径为70nm，说明GE11多肽的表面修饰GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物的粒径增大。冬凌草甲素-纳米硒复合物的平均zeta电位为47mV，而GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物的平均zeta电位为48mV，说明GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物表面带正电，且十分稳定。
实施例7
本实施例通过透射电子显微镜对实施例1所制得的GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物的结构进行表征。检测GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物的形貌和粒径。
如图5所示，GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物为球形的颗粒，平均粒径为70nm左右。
实施例8
本实施例通过MTT法对实施例1所制得的GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物的结构进行表征抗癌活性进行表征。检测GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物对癌细胞和血管内皮细胞的增殖抑制作用。
如图6所示，GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物对HepG2细胞、HUVECs细胞和MCF-7细胞的IC50值分别为33.2±8.7μM、38.6±5.4μM和50.3±11.9μM。以上结果说明GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物能有效抑制癌细胞和血管内皮细胞的增殖。
实施例9
本实施例通过流式细胞仪对实施例1所制得的GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物的结构进行抗癌活性表征。检测GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物对KYSE150细胞周期分布的影响。
如图7所示，GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物作用KYSE-150细胞48h后，分布在S期的细胞由对照组的15.2％分别增加到29％(8μM)、35.6％(16μM)和41.3％(32μM)。以上结果说明GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物可以将KYSE-150细胞的周期阻滞在S期。
实施例10
本实施例通过流式细胞仪对实施例1所制得的GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物的结构进行抗癌活性表征。检测GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物对KYSE150细胞线粒体膜电位的影响。
如图8所示，GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物作用KYSE-150细胞48h后，线粒体膜电位由对照组的85.1％分别降低到80.6％(8μM)、75.1％(16μM)和62.4％(32μM)。以上结果说明GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物可以破坏KYSE-150细胞的线粒体，引起线粒体膜电位的降低。
实施例11
本实施例一种装载有香豆素6的GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物的制备方法，包括如下步骤：
按实施例1的方法分别配置50mM的亚硒酸钠溶液、50mM的抗坏血酸溶液、50mM的冬凌草甲素溶液、0.5％的壳聚糖溶液、500mM的EDC溶液和50mg/ml的GE11多肽溶液，再配制2mg/mL的香豆素6溶液(溶剂为DMSO)。将200μL的亚硒酸钠溶液与100μL的冬凌草甲素溶液、100μL的香豆素6溶液、600uL的壳聚糖溶液混合，随后加入1600μL的亚硒酸钠溶液，加入蒸馏水稀释到10mL后，静置于4℃反应12h；将反应得到的溶液用蒸馏水进行透析，除去体系中多余的反应物，即可得到冬凌草甲素-纳米硒复合物；将40μL的EDC溶液与80μL的GE11多肽溶液与透析后得到装载有香豆素6的冬凌草甲素-纳米硒复合物静置于4℃反应12h；将反应得到的溶液用蒸馏水进行透析，除去体系中多余的反应物即可得到装载有香豆素6的GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物。随后通过检测细胞内的荧光强度来计算细胞对GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物的摄取和内吞。
如图9所示，KYSE150细胞对于GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物的摄取随时间的增多而增大，随剂量的增大而增大，说明KYSE150细胞对于GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物的摄取呈时间和剂量依赖。
实施例12
本实施例通过对细胞内荧光的检测来计算游离GE11多肽对细胞摄取GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物的影响。通过检测细胞对实施例11中制得的装载有香豆素6的GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物的摄取来检测游离GE11多肽对细胞摄取GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物的影响。
如图10所示，随着游离的GE11多肽量的增加，KYSE150细胞对装载有香豆素6的GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物的摄逐渐降低，说明游离GE11多肽可以一直被KYSE150细胞对GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物摄取，也说明KYSE150细胞对GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物的摄取是受EGFR介导的内吞。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (8)
1.一种GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物，其特征在于，该复合物由冬凌草甲素-纳米硒溶液与GE11多肽和羧基活化剂反应制备而成，制备方法包括如下步骤：
(1)将硒化合物、冬凌草甲素、还原剂、稳定剂分别配制成溶液后混合，控制混合体系中硒化合物、冬凌草甲素、还原剂、稳定剂的浓度分别为0.1-10mM、0.1-10mM、0.1-50mM、0.01-10wt％，于0-37℃反应5-20h，得到冬凌草甲素-纳米硒溶液，所述硒化合物为亚硒酸钠，所述还原剂为抗坏血酸，所述稳定剂为壳聚糖；
(2)将GE11多肽与羧基活化剂分别配制成溶液后，加入至所述冬凌草甲素-纳米硒溶液中，控制反应体系中GE11多肽和羧基活化剂的浓度分别为0.1-10mg/mL和0.1-10mM，于0-37℃反应5-20h，即得GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物溶液；
所述GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物的平均ZETA电位为30-60mV，平均粒径为50-90nm。
2.根据权利要求1所述的GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物，其特征在于，步骤(1)所述混合体系中硒化合物、冬凌草甲素、还原剂、稳定剂的浓度分别为0.5-2mM、0.1-2mM、5-10mM、0.01-0.1wt％；步骤(2)所述反应体系中GE11多肽和羧基活化剂的浓度分别为0.1-2mg/mL和1-5mM。
3.根据权利要求1所述的GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物，其特征在于，所述羧基活化剂为1-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐。
4.根据权利要求1-3任一项所述的GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物，其特征在于，
将硒化合物配制成溶液的方法为：将硒化合物溶于水中，配制成1-100mM的亚硒酸钠溶液；
将冬凌草甲素配制成溶液的方法为：将冬凌草甲素溶于甲醇中，配制成40-60mM的冬凌草甲素溶液；
将还原剂配制成溶液的方法为：将还原剂溶于水中，配制成1-100mM的还原剂溶液；
将稳定剂配制成溶液的方法为：将稳定剂溶于体积分数为0.1-1％的醋酸水溶液中，配制成浓度为0.1-20wt％的稳定剂溶液；
将GE11多肽配制成溶液的方法为：将GE11多肽溶于水中，配制成1-100mg/mLGE11多肽溶液；
将羧基活化剂配制成溶液的方法为：将羧基活化剂溶于水中，配制成10-1000mM的羧基活化剂溶液。
5.权利要求1-4任一项所述的GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将硒化合物、冬凌草甲素、还原剂、稳定剂分别配制成溶液后混合，按所述硒化合物、冬凌草甲素、还原剂、稳定剂的浓度控制混合体系中硒化合物、冬凌草甲素、还原剂、稳定剂的量，于0-37℃反应5-20h，得到冬凌草甲素-纳米硒溶液，所述硒化合物为亚硒酸钠，所述还原剂为抗坏血酸，所述稳定剂为壳聚糖；
(2)将GE11多肽与羧基活化剂分别配制成溶液后，加入至所述冬凌草甲素-纳米硒溶液中，按所述GE11多肽和羧基活化剂的浓度控制反应体系中GE11多肽和羧基活化剂的量，于0-37℃反应5-20h，即得GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物溶液。
6.根据权利要求5所述的GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物的制备方法，其特征在于，对步骤(1)得到的所述冬凌草甲素-纳米硒溶液和/或步骤(2)得到的所述GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物溶液进行纯化，纯化的方法为：用水进行透析，去除未反应的原料。
7.权利要求1-4任一项所述的GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物在制备具有EGFR靶向、抑制癌细胞增殖或抑制血管内皮细胞增殖功能的药物中的应用。
8.具有EGFR靶向、抑制癌细胞增殖、抑制血管内皮细胞增殖中一种或多种功能的药物，其特征在于，其活性成分包括权利要求1-4任一项所述的GE11多肽修饰的冬凌草甲素-纳米硒复合物。
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