CN105359815A - 鉴定棉花萌发期抗冷性的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了鉴定棉花萌发期抗冷性的方法。本发明所提供的方法，包括：检测棉花的子叶平展率，获得棉花的相对子叶平展率，根据棉花的相对子叶平展率鉴定或辅助鉴定棉花抗冷性，相对子叶平展率高的棉花的抗冷性高于相对子叶平展率低的棉花；棉花的相对子叶平展率＝冷处理子叶平展率/对照培养子叶平展率×100％；冷处理子叶平展率按照如下方法获得：将待鉴定棉花的种子在清水中浸泡使种子吸胀后，进行冷处理1至7天，得到冷处理的种子；所述冷处理在0-15℃下进行；将冷处理的种子在25-30℃下恢复培养3至7天，统计所述待测棉花子叶平展率，将该待测棉花的子叶平展率称为冷处理子叶平展率。

Description

鉴定棉花萌发期抗冷性的方法

技术领域

本发明涉及生物技术领域中鉴定棉花萌发期抗冷性的方法。

背景技术

世界人口已超过70多亿，而且还在持续增长中，然而可利用的土地数量却因诸如气候原因等一系列因素导致处于持续下降中，因此需要在不扩大耕地面积和破坏环境的情况下大幅度提高作物产量。在自然界中，温度是影响植物生长、代谢的重要环境因子。植物在生长发育过程中不可避免地遭受各种环境因子的胁迫，其中低温是影响植物生存的主要环境胁迫因子之一。低温胁迫使作物的生存能力、农作物的产量、生长发育情况、光合速率和矿质元素吸收速率等受到显著的抑制，严重的导致植株的死亡。据统计，世界上每年因冷害造成的农业损失高达数千亿美元，低温冷害是限制我国农业生产的主要农业气象灾害之一。作物遭受了低于其生育适温的连续和短期低温的影响，使生育延迟，甚至发生生理障碍造成减产、品质降低，这种自然灾害称为低温冷害。冷害发生在作物生育的温暖季节，并不像霜冻及其它灾害那样引起作物枯萎、死亡等明显症状，它对作物的危害主要有三种情况：一是低温延缓发育速度，二是低温引起作物的生长量降低，三是低温使作物的生殖器官直接受害。棉花等重要农作物，对冷胁迫都比较敏感，而且冷适应能力差。低温冷害与霜冻是威胁棉花的重要灾害之一，尤其对在早春季节播种的棉花危害更为严重。棉花是喜温热作物，我国种植区域辽阔，但各地热量条件差异很大，尤其是北方棉区和西北内陆棉区热量条件较差，经常由于春、秋季气温很不稳定，以致棉花播种出苗期及苗期(4月中下旬-5月中旬)常常遭受霜冻的危害，其中萌发出苗期和苗期冷害冻发生较频繁。低温使棉花生育期育延迟、落花落蕾，品质和产量严重下降。

种子在农业生产工作中有着非常重要的作用，发芽率的高低直接影响着农作物的生产和效益。种子发芽率的高低是由种子之中胚所具有的活力及贮存足够的胚乳决定的。一般来说，具有高活力的胚加上足够的胚乳营养作保证的种子发芽率高，相反发芽率则较低。棉花播种时出苗不齐、成苗难一直是棉花种植的一大问题，严重制约着棉花的推广与发展，限制棉花产业化的进程。非生物胁迫因子(如干旱、盐渍、冷害等)更是制约棉花生长、产量与质量的重要因素。目前我国棉花主产区向新疆、内蒙转移，这些地区无霜期短，早春回暖缓慢，更易遭遇低温冷害，而利用抗冷品系是开发利用高纬度地区、西北内陆地区最根本、最经济和最有效的方法。对棉花种质材料和育种材料及品系进行耐低温性鉴定是培育抗冷性品种的基本保证。同时播种前对棉花品种(系)抗冷性进行鉴定，可以降低优良种子的播种量，降低生产成本，也可促进种质资源有目的的发放，促进品系的合理安排布局。目前对棉花抗冷性鉴定工作重视的不够，特别是萌发期的抗冷性鉴定，没有引起研究人员的足够重视。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何快速鉴定棉花萌发期的耐低温特性(即抗冷性)。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了鉴定或辅助鉴定棉花抗冷性的方法。

本发明所提供的鉴定或辅助鉴定棉花抗冷性的方法，包括：检测棉花的子叶平展率，获得棉花的相对子叶平展率，根据棉花的相对子叶平展率鉴定或辅助鉴定棉花抗冷性，相对子叶平展率高的棉花的抗冷性高于相对子叶平展率低的棉花；

棉花的相对子叶平展率＝冷处理子叶平展率/对照培养子叶平展率×100％；

所述冷处理子叶平展率按照如下方法获得：将待鉴定棉花的种子在液体中浸泡使种子吸胀后，进行冷处理X天，得到冷处理的种子；所述冷处理在0-15℃下进行；将冷处理的种子在25-30℃下恢复培养Y天，统计所述待测棉花子叶平展率(子叶平展率＝平展的子叶数/处理的总种子数×100％)，将该待测棉花的子叶平展率称为冷处理子叶平展率；X为1至7中的一个自然数，Y为3至7中的一个自然数；

所述对照培养子叶平展率按照如下方法获得：将所述鉴定棉花的种子在所述液体中浸泡使种子吸胀后，在25-30℃下培养所述Y天，Y为3至7中的一个自然数将该培养称为对照培养，统计所述待测棉花的子叶平展率(子叶平展率＝平展的子叶数/处理的总种子数×100％)，将该待测棉花的子叶平展率称为对照培养子叶平展率。

所述待鉴定棉花为两个以上的棉花品种或品系，每个棉花品种或品系的子叶平展率由满足生物统计学要求的样本数获得，如每个棉花品种或品系的每一个处理检测100粒以上种子。

上述方法可按照如下方法挑选所述待测棉花的种子进行棉花抗冷性的鉴定：

第一次种子挑选：挑选有活力的种子，饱满的、均匀一致的，无破损的所述待测棉花种子，毛子或光子均可；

第二次种子挑选：将所述待测棉花种子在清水中揉搓，然后将浸透种子均匀摆放在培养皿中平铺的湿润滤纸上，种子间留有缝隙，种子与种子间不能积压，再用一张浸湿但不滴水的滤纸盖在种子上，然后28℃、黑暗下培养2小时；挑选健壮的、饱满、优质、活力有保证的种子。

上述方法中，所述冷处理可在0-4℃下进行。所述X可为1-7，如4。所述冷处理可在黑暗下进行。

上述方法中，所述浸泡的时间可为12小时；所述液体可为清水、营养液或药物水溶液。所述浸泡可在28℃下进行。

所述浸泡可按照如下方法进行：将上述待测棉花种子均匀摆放在培养皿中平铺的湿润滤纸上，种子间留有缝隙，种子与种子间不能积压，再用一张浸湿但不滴水的滤纸盖在种子上，使种子紧贴上下两层滤纸利于充分吸水，同时要有一定的空隙，盖上培养皿盖子，有利于保湿，然后于28℃下浸泡10-12小时。

上述方法中，所述恢复培养可在28℃下进行。所述Y可为7。所述恢复培养的条件可为光照14小时/黑暗10小时，温度28℃。

上述方法中，所述恢复培养可在沙子(如河沙)中或土壤中进行。所述沙子可按照如下方法制备得到：将河沙洗净，在160℃-180℃条件下烘干灭菌6小时以上，并在自然状态下放凉，称重，按重量比加上清水(自来水、蒸馏水或纯净水均可)，水和沙子充分混匀，得到湿润沙子，湿润沙子的含水量为23％左右。

进行所述恢复培养时，所述待测棉花的种子可按照如下方法播种至所述沙子中：将所述沙子均匀平铺于长19.2cm、宽14cm、深5cm的长方型有机发芽盒中，沙子的厚度约为2cm，取出所述待测棉花的冷处理后的种子，均匀平铺在沙子上，种子摆放分散开；再盖上3cm厚的拌匀后的沙子，将沙子铺平压紧。之后再盖上长19cm、宽13.8cm、深7cm的有机发芽盒盖子。

上述方法中，所述方法可为鉴定或辅助鉴定萌发期棉花的抗冷性。

为解决上述技术问题，本发明还提供了所述鉴定或辅助鉴定棉花抗冷性的方法在棉花育种或棉花种质资源创新中的应用。

上述应用中，所述棉花育种可按照如下方法进行：按照所述方法选择相对子叶平展率高的棉花品种或品系，将其作为亲本进行棉花抗冷育种或直接在生产中应用。

本发明中，所述棉花可为陆地棉，如豫2067、光籽1、中棉所44、冀棉616、冀棉228、sGK958、GK50、邯242、衡棉3号、中棉所50、新研96-48、鲁棉研16或中404A。

本发明利用棉花萌发期在不同温度和不同冷处理时间下的棉花幼苗的子叶平展率建立了一种鉴定鉴定棉花抗冷性的方法：1)4个材料在对照(28℃)处理中差异不显著。2)15℃以下的低温处理的子叶平展率平均值均低于对照(28℃)处理，说明15℃以下的低温处理对种子萌发期均造成了伤害，但4℃、10℃、15℃低温处理时，4个棉花材料间的子叶平展率只达到显著差异，而0℃低温处理下的子叶平展率平均值与其它低温条件处理的子叶平展率的平均值均达到极显著差异，且在0℃处理条件下，4个棉花材料间的子叶平展率均达到极显著差异，另外，冰箱控制的0℃条件容易获得，温度变幅稳定，可将0℃作为鉴定棉花萌发期抗冷性的温度条件。3)0℃处理条件下，随着对棉花低温处理的天数的增加，棉花材料间的子叶平展率呈下降趋势，说明低温处理的时间越长，对棉花萌发的危害越大。0℃处理4天时，棉花材料间的子叶平展率差异达极显著。可将0℃处理4天作为陆地棉萌发期抗冷性鉴定的条件。

利用本发明的鉴定棉花萌发期抗冷性的方法得到的相对子叶平展率(冷处理子叶平展率与正常处理子叶平展率的比值)与与田间得到的相对出苗率(冷处理出苗率与正常处理出苗率的比值)的相关系数为R＝0.8157，表明利用本发明的鉴定棉花抗冷性的方法鉴定萌发期棉花的抗冷性是可行的。说明本发明的鉴定棉花萌发期抗冷性的方法以及鉴定标准可以用于棉花萌发期抗冷性鉴定。

本发明利用种子低温发芽鉴定材料的耐低温性，不仅简便、可靠，而且周期短，可以有效进行耐低温种质资源以及品种的抗冷性筛选。棉花种质资源存在规模大、数量多、且材料来源于不同生态区的各种变异类型的特点，所以选择适宜的抗冷性鉴定方法尤为重要，而抗冷性评价指标的确定则是衡量抗冷性鉴定方法是否有成效的关键，本发明不仅提供了简便、可靠的棉花萌发期抗冷性的鉴定方法，还给出了利用本发明的方法鉴定棉花萌发期抗冷性标准：

如果所述待测棉花相对子叶平展率≥90％，所述待测棉花高抗冷或候选高抗冷；

如果所述待测棉花相对子叶平展率≥75％且＜90％，所述待测棉花抗冷或候选抗冷；

如果所述待测棉花相对子叶平展率≥50％且＜75％，所述待测棉花耐冷或候选耐冷；

如果所述待测棉花相对子叶平展率≥30％且＜50％，所述待测棉花不耐冷或候选不耐冷；

如果所述待测棉花相对子叶平展率＜30％，所述待测棉花冷敏感或候选冷敏感。

附图说明

图1为不同温度下各棉花材料的子叶平展率。

图2为冷处理不同时间时各棉花材料的子叶平展率。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

下述实施例中每次每个处理的棉花种子均不少于100粒。

下述实施例中的光籽1、冀棉616、冀棉228、sGK958、GK50、鲁棉研16和邯242(王俊娟，叶武威，王德龙，樊伟莉，王帅.PEG胁迫条件下41份陆地棉种质资源萌发特性研究及其抗旱性综合评价，植物遗传资源学报，2011，12(6)：840-846.)公众可从申请人处获得该生物材料，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。

实施例1、棉花抗冷性鉴定

一、棉花抗冷性鉴定方法的建立

1)材料的选择

选当前大面积推广的4个陆地棉花品种(系)，在田间、苗期、提前播种等初步筛选中，其抗冷性差异显著，且田间农艺性状等综合性状优异，抗病、抗虫，产量能保证后续室内实验的顺利进行(表1)。

表1萌发期抗冷鉴定筛选所需品种(系)名称与来源

2)不同处理温度的设置及调查结果

冷处理，实验重复三次，具体方法如下：将表1中的各棉花种子在清水中揉搓后在28℃生长箱中吸胀12h后分别在0℃、4℃、10℃和15℃条件下冷处理7天，0℃和4℃的温度条件通过冰箱进行，10℃和15℃的温度条件由生长箱获得，每个处理设3个重复，每个温度处理条件均无光照。棉花种子冷处理后在28℃条件下恒温生长箱中恢复生长7天，恢复培养的条件为光照14小时/黑暗10小时、温度为28℃，统计子叶平展率(％)。冷处理时冰箱或生长箱中放入EL-USB-2USBDataLogger数据记录仪，持续对冰箱或生长箱温度进行测量和监控。注意放培养皿时要错开放，不要贴冰箱或生长箱壁放置，这样有利于温度的均匀分布。结果表2和图1所示。

棉花种子的播种至沙子中的方法为：将湿润沙子均匀平铺于长19.2cm、宽14cm、深5cm的长方型有机发芽盒中，沙子的厚度约为2cm，取出各棉花种子冷处理后的种子，均匀平铺在沙子上，种子摆放分散开；再盖上3cm厚的拌匀后的沙子，将沙子铺平压紧。之后再盖上长19cm、宽13.8cm、深7cm的有机发芽盒盖子。

对照(CK)处理，实验重复三次，具体方法如下：将表1中的各棉花种子在清水中揉搓后在28℃无光照生长箱中吸胀12h后，在光照14小时/黑暗10小时、温度28℃的生长箱条件下恒温沙子中培养7天至发芽出苗，统计对照处理子叶平展率(％)。对照处理中棉花吸胀种子及播种方法同上述棉花播种方法。结果表2和图1所示。

上述步骤中用到的沙子均为湿润沙子，按照如下方法制备：将河沙洗净，160℃-180℃烘干灭菌6小时以上，并在自然状态下放凉，称重，按重量比加上清水(自来水、蒸馏水或纯净水均可)，水和沙子充分搅拌混匀，得到湿润沙子，湿润沙子的含水量为23％左右。

冷处理与对照处理的种子经过两次挑选后进行吸胀，注意事项如下：

第一次种子挑选：挑选有活力的种子，饱满的、均匀一致的，无破损的棉花种子100-120粒，毛子或光子均可；

第二次种子挑选：将各棉花材料的种子在清水中揉搓，便于水分充分渗透到种皮内，然后将浸透种子均匀摆放在培养皿中平铺的打湿了的滤纸上，保证种子一层铺于滤纸上，种子间留有缝隙，种子与种子间不能积压，最后再用一张浸湿但不滴水的滤纸盖在种子上，使种子紧贴上下两层滤纸利于充分吸水，同时要有一定的空隙，便于种子充分接触到氧气，然后放入型号为HZGZ-4-B的恒温生长箱2小时，生长箱温度设置为28℃，光照设置为黑暗状态。吸水2小时的后的种子后可看到部分种子发软，发黄的、或呈半黄半黑色泽的，手轻轻拿捏，可感觉到其发软，将其剔除；最终挑选出健壮的、饱满、优质的种子100粒。

种子吸胀：将保证有活力的种子100粒，均匀摆放在培养皿中平铺的打湿但不滴水的滤纸上，保证种子一层铺于滤纸上，种子间留有缝隙，种子与种子间不能积压，最后再用一张浸湿但不滴水的滤纸盖在种子上，使种子紧贴上下两层滤纸利于充分吸水，同时要有一定的空隙，便于种子充分接触到氧气，盖上培养皿盖子。然后放入温度设置为28℃、型号为HZGZ-4-B的恒温生长箱10小时(包括前期挑选种子时吸胀了2小时，一共吸胀12小时)。

将棉花种子播至沙子中时，盖种子的沙子压紧保证棉花不带壳出苗。出苗标准为以下胚轴伸出沙士表面，子叶平展。

表2不同温度处理后子叶平展率的方差分析

表2中，大、小写字母表示Duncan's新复极差测验α＝0.01和α＝0.05。标有不同小写字母的表示两个平均数间达差异显著水平，标有不同大写字母的表示两个平均数间达差异极显著水平。

由表2和图1可以看出，15℃以下的低温处理7d的子叶平展率平均值均低于对照(28℃)处理，且达显异极显著水平，说明15℃以下的低温处理对种子萌发期均造成了伤害，但4℃、10℃、15℃低温处理时，4个棉花材料间的子叶平展率只达到显著差异，而0℃低温处理下的子叶平展率平均值与其它低温温度处理的子叶平展率的平均值均达到极显著差异，且在0℃处理条件下，4个棉花材料间的子叶平展率均达到极显著差异，另外，冰箱控制的0℃条件容易获得，温度变幅稳定，可将0℃作为鉴定棉花萌发期抗冷性的温度条件。但由于0℃低温处理7天时，4个棉花材料中子叶平展率最高为28％左右，最低不足10％，可将低温处理的时间进行进一步调整，以便更好的鉴定出不同抗冷程度的棉花。

3)0℃低温处理天数的确定及结果调查

按照步骤2)的方法进行冷处理，实验重复三次，具体方法如下：将表1中的各棉花种子在清水中揉搓后在28℃生长箱中吸胀12h后在0℃条件下分别冷处理0天、1天、2天、3天、4天、5天、6天和7天，每个处理设3个重复，每个温度处理条件均无光照。其他条件均同步骤2)的冷处理方法。结果如图2和表3所示。

按照步骤2)的方法进行对照处理，实验重复三次，具体方法如下：将表1中的各棉花种子在清水中揉搓后在28℃无光照生长箱中吸胀12h后，马上在光照14小时/黑暗10小时、温度为28℃的生长箱条件下湿润沙子中培养7天后，统计对照处理子叶平展率(％)(注：对照即相当于在0℃条件下冷处理0天，即不处理)。

表3冷处理不同时间的子叶平展率

表3中，大、小写字母表示Duncan's新复极差测验α＝0.01和α＝0.05，比较不同处理时间下，13L-1、13L-6、13L-7、13L-9间的子叶平展率的差异。每行中，标有不同小写字母的表示两个平均数间达差异显著水平，标有不同大写字母的表示两个平均数间达差异极显著水平。

表4冷处理不同时间的各棉花子叶平展率均值及差异分析

表4中，大、小写字母表示Duncan's新复极差测验α＝0.01和α＝0.05。“5％差异”列中，标有不同小写字母的表示两个平均数间达差异显著水平；“1％差异”列中，标有不同大写字母的表示两个平均数间达差异极显著水平。

结果显示，随着0℃低温处理的天数的增加，4个棉花材料的子叶平展率呈下降趋势，说明低温处理的时间越长，对棉花萌发的危害越大。0℃处理1-3天时，4个材料子叶平展率间达差异显著水平或没有差异，处理4天时，4个棉花材料的子叶平展率差异达极显著，所以，可将0℃处理4天作为陆地棉萌发期抗冷性鉴定的条件。

二、棉花抗冷性的鉴定

为了进一步验证所筛选出的棉花萌发期抗冷鉴定的温度条件，同时也为了筛选萌发期抗冷性强的资源材料，用于棉花抗冷育种中去，挑选了选当前大面积推广的综合性状好的13个陆地棉材料(表5)做为种质资源抗冷性筛选材料进行萌发期抗冷鉴定。每个材料设3个生物学重复，以3个重复的平均值计算汇总到结果中。

表5萌发期抗冷种质资源筛选品种(系)名称与来源

按照步骤一中2)的方法进行冷处理，实验重复三次，具体方法如下：将表5中的各棉花种子在清水中揉搓后在28℃生长箱中吸胀12h后在0℃、黑暗下冷处理4天。其他条件均同步骤一中2)的冷处理方法，统计冷处理子叶平展率(％)。

按照步骤一中2)的方法进行对照处理，实验重复三次，具体方法如下：将表5中的各棉花种子在清水中揉搓后在28℃无光照生长箱中吸胀12h后，在光照14小时/黑暗10小时、温度为28℃的生长箱条件下湿润沙子中培养7天后直接统计对照处理子叶平展率(％)。其他条件均同步骤一中2)的对照处理方法。

计算相对子叶平展率，相对子叶平展率＝冷处理子叶平展率/对照处理子叶平展率×100％。不同棉花品种(系)的平均相对子叶平展率结果如表5所示。

表6不同棉花品种(系)的平均相对子叶平展率及其差异分析

表6中，大、小写字母表示Duncan's新复极差测验α＝0.01和α＝0.05。“5％差异”列中，标有不同小写字母的表示两个平均数间达差异显著水平；“1％差异”列中，标有不同大写字母的表示两个平均数间达差异极显著水平。

利用Stata7.0分析软件对13个棉花品种(系)的相对子叶平展率分析如表5。由表5可以看出，13个棉花品种(系)萌发期抗冷性差异极显著(F值＝4.58>F0.01＝3.03)。这13个棉花品种(系)的抗冷性从高至低依次为：冀棉616、鲁棉研16、中404A、中棉所44、中棉所50、衡棉3号、sGK958、新研96-48、豫2067、邯242、光籽1、冀棉228和GK50。说明棉花种子经0℃冷处理4d后恢复生长7d后的相对子叶平展率作为棉花萌发期抗冷性的鉴定指标是可行的。

发明人根据相对子叶平展率将棉花萌发期的抗冷性定为五级：

棉花相对子叶平展率≥90％，棉花高抗冷；

棉花相对子叶平展率≥75％且＜90％，棉花抗冷；

棉花相对子叶平展率≥50％且＜75％，棉花耐冷；

棉花相对子叶平展率≥30％且＜50％，棉花不耐冷；

棉花相对子叶平展率＜30％，棉花冷敏感。

由表5可以看出，萌发期期达到抗冷水平的棉花品种(系)有1个(冀棉616)，占7.69％；萌发期耐冷的棉花品种(系)有7个，分别为鲁棉研16、中404A、中棉所44、中棉所50、衡棉3号、sGK958和新研96-48，占53.85％，说明这些棉花品种(系)中超过一半的材料萌发期抗冷水平达到耐冷水平；其余的5份棉花品种(系)中有2份材料(豫2067和邯242)为萌发期不抗冷材料，3份材料(光籽1、冀棉228和GK50)为冷敏感材料。

三、棉花抗冷性的鉴定结果与田间试验结果对比

对本发明的13个棉花品种(系)分别比棉花的正常播种期提前10天播种，播种10天(播种后10天的平均气温为21℃-22℃)后统计各棉花品种(系)的出苗率，即冷处理出苗率，对这13个棉花品种(系)分别在正常播种期播种，播种10天(播种后10天的平均气温为25-26℃)后统计各棉花品种(系)的出苗率，即对照出苗率，根据“相对出苗率＝冷处理出苗率/对照出苗率×100％”计算各棉花品种(系)的相对出苗率(表7)，确定这13个棉花品种(系)的抗冷性。

表7不同棉花品种(系)的田间相对出苗率

利用该方法确定的这13个棉花品种(系)的抗冷性从高至低依次为：冀棉616、鲁棉研16、豫2067、中404A、中棉所44、中棉所50、衡棉3号、sGK958、新研96-48、光籽1、GK50、冀棉228、邯242。

分析这13个棉花品种(系)的相对出苗率与相对子叶平展率的相关性，方程为：y＝0.5105x+21.379，其中x为相对子叶平展率，y为田间的相对出苗率，两者相关系数为R＝0.8157，表明利用本发明的鉴定棉花抗冷性的方法鉴定萌发期棉花的抗冷性是可行的。

Claims (10)

1.鉴定或辅助鉴定棉花抗冷性的方法，包括：检测棉花的子叶平展率，获得棉花的相对子叶平展率，根据棉花的相对子叶平展率鉴定或辅助鉴定棉花抗冷性，相对子叶平展率高的棉花的抗冷性高于相对子叶平展率低的棉花；

棉花的相对子叶平展率＝冷处理子叶平展率/对照培养子叶平展率×100％；

所述冷处理子叶平展率按照如下方法获得：将待鉴定棉花的种子在液体中浸泡使种子吸胀后，进行冷处理X天，得到冷处理的种子；所述冷处理在0-15℃下进行；将冷处理的种子在25-30℃下恢复培养Y天，统计所述待测棉花子叶平展率，将该待测棉花的子叶平展率称为冷处理子叶平展率；X为1至7中的一个自然数，Y为3至7中的一个自然数；

所述对照培养子叶平展率按照如下方法获得：将所述鉴定棉花的种子在所述液体中浸泡使种子吸胀后，在25-30℃下培养所述Y天，将该培养称为对照培养，统计所述待测棉花的子叶平展率，将该待测棉花的子叶平展率称为对照培养子叶平展率。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述冷处理在0-4℃下进行；和/或，所述X为3-5。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述冷处理在0℃下进行；和/或，所述X为4。

4.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：所述浸泡的时间为12小时；所述液体为清水、营养液或药物水溶液。

5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于：所述恢复培养在28℃下进行；和/或，所述Y为7。

6.根据权利要求1-5任一所述的方法，其特征在于：所述方法为鉴定或辅助鉴定萌发期棉花的抗冷性。

7.权利要求1-6任一所述的方法在棉花育种中或棉花种质资源创新的应用。

8.根据权利要求7所述应用，其特征在于：所述棉花育种按照如下方法进行：按照权利要求1-6中任一所述的方法选择相对子叶平展率高的棉花品种或品系，将其作为亲本进行棉花抗冷育种。

9.根据权利要求1-6任一所述的方法或权利要求8或9所述的应用，其特征在于：所述棉花为陆地棉。

10.根据权利要求9所述的方法或应用，其特征在于：所述陆地棉为豫2067、光籽1、中棉所44、冀棉616、冀棉228、sGK958、GK50、邯242、衡棉3号、中棉所50、新研96-48、鲁棉研16或中404A。