CN105327355A - 一种肠胃外注射用肽药物的稳定制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种肠胃外注射用肽药物的稳定制剂及其制备方法。所述肠胃外注射用肽药物的稳定制剂包括：在非挥发性缓冲剂中干燥并保持在所述非挥发性缓冲剂中的pH记忆的肽或其盐；和二甲基亚砜和乙酸乙酯的混合物；其中所述制剂的水分含量小于5％，并且其中当在所述混合物中重构所述干燥的肽时，所述干燥的肽保持在所述非挥发性缓冲剂中的pH记忆。本发明的制剂通过肠胃外注射后能够维持较长时间的胰高血糖素的高浓度。

Description

一种肠胃外注射用肽药物的稳定制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及肽药物技术领域，尤其涉及一种肠胃外注射用肽药物的稳定制剂及其制备方法。

背景技术

糖尿病是现代社会中的严重健康问题。胰岛素对于I型和II型糖尿病都是关键的治疗剂。过去二十年的研究证实通过使用胰岛素对葡萄糖的严格代谢控制不仅降低了发生率，而且延迟患有I型和II型糖尿病的人的并发症的发展。不幸地，实现严格葡萄糖控制所需要的密集的胰岛素治疗带来低血糖症或“低血糖”风险的显著增加。

低血糖症的症状在患者之间有很大不同，但是一般包括震颤、心悸、易激动、焦虑、神经质、饥饿、心动过速、头痛和苍白。一旦血糖恢复到正常水平，症状一般就会消退。如果低血糖症没有逆转，血糖的进一步降低会导致中枢神经系统中与神经低糖症状，例如难以集中精神、口齿不清、视力模糊、体温降低、行为改变以及如果未治疗导致的失去知觉、癫痫甚至死亡。

通常，低血糖症有以下类型：较轻的至中等的低血糖症：患者可以自我治疗，不管症状的严重程度，其中血糖水平低于70mg/dL(3.9毫摩尔/升)或任何无症状的血糖浓度。严重的低血糖症：患者不能自我治疗而需要外部帮助。一般地，神经低糖症状和认知损伤在血糖水平大约为50mg/dL(2.8毫摩尔/升)时开始。较轻至中等的低血糖症的大部分发作可以通过摄取快速作用的糖类例如葡萄糖片或食物(果汁、软饮料或甜的零食)相对容易地自我治疗。按照定义，严重的低血糖症不能自我治疗，从而需要外部介入。如果患者可以吞咽并且是合作的，那么适合使用凝胶剂或产品例如蜂蜜或果冻放置到面颊内部。如果患者不能吞咽，那么使用皮下或肌内注射的胰高血糖素来治疗严重的低血糖症。

胰高血糖素是天然存在的29个氨基酸长并由胰腺的α细胞分泌的肽激素。胰高血糖素的主要功能是通过糖原分解和糖原异生两者维持葡萄糖产生，主要由肝介导。胰高血糖素是主要的胰岛素反调节激素，并用作糖尿病的患者的严重低血糖症的一线治疗剂。

已经进行了许多尝试以开发用于治疗紧急情况下的严重低血糖症的胰高血糖素救护药物。当前，目前可用的有两种胰高血糖素试剂盒，由EliLilly(GlucagonEmergencyKit)和NovoNordisk(GlucaGenHypoKit)制造。两种产品都将冷冻干燥的胰高血糖素的小瓶与预装满水稀释液的注射器组合。冷冻干燥的胰高血糖素必须采用复杂步骤来重构，因此在紧急情况下难以使用。这些产品还提供大体积注射，这是因为胰高血糖素难溶于水。最近，已经有尝试改进胰高血糖素在水溶液中的稳定性，以开发更稳定的胰高血糖素类似物和/或改进经粉末注射的胰高血糖素的递送。

尽管已经取得了一些进展，但是仍然需要用于治疗紧急情况下的严重低血糖症的胰高血糖素救护药物，实现用户友好操作。这种胰高血糖素救护药物会需要由糖尿病患者和/或其照顾者连续携带，从而会需要在非冷冻温度(25-30℃)下是长时间(>2年)稳定性。理想地，其还会需要对于普通人群易于施用，并且在施用于低血糖症患者之前不需要过多的处理或重构。胰高血糖素救护药物还会需要在一定温度范围内，包括从0℃至30℃的温度范围内可以使用。

WO2012/122535公开了一种肠胃外注射用肽药物的稳定制剂，包含：(a)肽或其盐，其中所述肽已经被干燥在非挥发性缓冲剂中，并且其中干燥的肽具有约等于所述肽在所述非挥发性缓冲剂中的pH的pH记忆；和(b)非质子极性溶剂；其中所述制剂的水分含量小于5％，并且其中当在所述非质子极性溶剂中重构所述干燥的肽时，所述干燥的肽保持约等于所述肽在所述非挥发性缓冲剂中的pH的所述pH记忆。所述肠胃外注射用肽药物的稳定制剂适合紧急情况下严重的低血糖症的应用，但是其肠胃外注射用肽药物的稳定制剂虽然能够迅速提升胰高血糖素的血液浓度，但是其在血液中的浓度迅速降低，一般半小时内胰高血糖素的浓度就降低到注射前的水平，不能较长时间的持续较高浓度。

发明内容

针对现有技术的缺陷，本发明人在WO2012/122535的基础上，经过深入研究发现以二甲基亚砜和乙酸乙酯的混合物作为非质子极性溶剂能够取得较好的效果。

本发明提供以下方案：

本发明提供一种肠胃外注射用肽药物的稳定制剂，包括：在非挥发性缓冲剂中干燥并保持在所述非挥发性缓冲剂中的pH记忆的肽或其盐；和二甲基亚砜和乙酸乙酯的混合物；其中所述制剂的水分含量小于5％，并且其中当在所述混合物中重构所述干燥的肽时，所述干燥的肽保持在所述非挥发性缓冲剂中的pH记忆。

优选地，所述二甲基亚砜和乙酸乙酯的混合物中，二甲基亚砜和乙酸乙酯的体积比为(1-3):(1-3)，优选1:1。

优选地，所述肽具有的pH记忆为2-8，优选3-7，更优选4-6。

优选地，所述肽在所述制剂中存在的浓度为0.5mg/mL至100mg/mL，优选2mg/mL至50mg/mL。

优选地，所述非挥发性缓冲剂选自甘氨酸缓冲剂、柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂及它们的混合物。

优选地，所述肽或其盐选自胰高血糖素、普兰林肽、胰岛素、亮丙瑞林、LHRH激动剂、甲状旁腺素、糊精、肉毒杆菌毒素、淀粉样肽、缩胆囊素、芋螺毒素、胃抑制肽、胰岛素样生长因子、生长激素释放因子、抗微生物因子、格拉默、胰高血糖素样肽-1、胰高血糖素样肽-1激动剂、艾塞那肽或它们的混合物，优选胰高血糖素。

优选地，所述制剂还包含共溶剂，其中所述共溶剂选自乙醇、丙二醇、甘油及它们的混合物。其中，所述共溶剂在所述制剂中的存在量为10％(w/v)-50％(w/v。

优选地，所述制剂还包含稳定化赋形剂，其中所述稳定化赋形剂选自糖、淀粉或它们的混合物；其中，所述稳定化赋形剂在所述制剂中的存在量为1％(w/v)-40％(w/v)。

本发明还提供一种上述方案所述的稳定制剂的制备方法，包括：

(1)将肽或其盐溶于非挥发性缓冲剂中，然后干燥成干燥的肽粉，其中所述干燥的肽粉具有所述肽在所述非挥发性缓冲剂中的pH记忆；和

(2)在二甲基亚砜和乙酸乙酯的混合物中重构所述干燥的肽粉；

其中所述制剂的水分含量小于5％，并且其中当在所述混合物中重构所述干燥的肽时，所述干燥的肽保持在所述非挥发性缓冲剂中的pH记忆。

优选地，所述二甲基亚砜和乙酸乙酯的混合物中，二甲基亚砜和乙酸乙酯的体积比为(1-3):(1-3)，优选1:1。

优选地，所述肽具有的pH记忆为2-8，优选3-7，更优选4-6。

优选地，所述肽在所述制剂中存在的浓度为0.5mg/mL至100mg/mL，优选2mg/mL至50mg/mL。

作为本发明的优选实施方案，所述方法包括：

(1)将肽或其盐溶于非挥发性缓冲剂中，然后干燥成干燥的肽粉，其中所述干燥的肽粉具有所述肽在所述非挥发性缓冲剂中的pH记忆；

(2)在二甲基亚砜和乙酸乙酯的混合物中重构所述干燥的肽粉；

其中所述制剂的水分含量小于5％，并且其中当在所述混合物中重构所述干燥的肽时，所述干燥的肽保持在所述非挥发性缓冲剂中的pH记忆；和

(3)加入选自乙醇、丙二醇、甘油及它们的混合物的共溶剂和选自糖、淀粉或它们的混合物的稳定化赋形剂。

本发明的有益效果为：

在本发明的制剂中胰高血糖素是稳定化的，使得能够长期存储和/或长时间递送。同样地，本发明的胰高血糖素制剂在非冷冻温度下长时间稳定，易于施用而不需要重构，以及在一定温度范围内，包括从0℃至30℃的温度范围内可以使用。更重要的是，本发明的制剂通过肠胃外注射后能够维持较长时间的胰高血糖素的高浓度，通过肠胃外注射后胰高血糖素的浓度在5分钟内迅速升至峰值，30分钟时还能维持峰值浓度的一半以上，45分钟时还未完全降至注射前的水平，因此相比WO2012/122535公开的方案具有长足的进步。

附图说明

图1为本发明实施例1中稳定制剂注射低血糖症患者后胰高血糖素浓度的变化曲线。

具体实施方式

本发明的配制技术可以普遍适用于如胰高血糖素一样在水环境中具有差的或有限的稳定性和溶解度的许多其他的肽的递送。实际上，目前清楚的是利用非质子极性溶剂，例如DMSO、NMP、乙酸乙酯或其混合物将肽配制成高浓度的非水溶液对于这类重要的肽疗法是有价值的递送平台。此外，本发明的配制技术可以普遍适用于在同一溶液中两种或更多种肽的递送。

在本发明的一些制剂中，肽与非挥发性缓冲剂和稳定化赋形剂混合，然后干燥成干燥的肽粉。合适的稳定化赋形剂包括但不限于糖、淀粉及其混合物。在一些实施方案中，糖是海藻糖。在一些实施方案中，淀粉是羟乙基淀粉(HES)。在一些实施方案中，稳定化赋形剂以约1％(w/v)到约60％(w/v)、从约1％(w/v)到约50％(w/v)、从约1％(w/v)到约40％(w/v)、从约1％(w/v)到约30％(w/v)、从约1％(w/v)到约20％(w/v)、从约5％(w/v)到约60％(w/v)、从约5％(w/v)到约50％(w/v)、从约5％(w/v)到约40％(w/v)、从约5％(w/v)到约30％(w/v)、从约5％(w/v)到约20％(w/v)、从约10％(w/v)到约60％(w/v)、从约10％(w/v)到约50％(w/v)、从约10％(w/v)到约40％(w/v)、从约10％(w/v)到约30％(w/v)、从约10％(w/v)到约20％(w/v)的量存在于制剂中。

在一些实施方案中，共溶剂使制剂的凝固点降低到约3℃、约2℃、约1℃或约0℃或更低。在一些实施方案中，共溶剂是极性质子溶剂。在优选的实施方案中，共溶剂选自乙醇、丙二醇(PG)、甘油及其混合物。在一些实施方案中，共溶剂以约10％(w/v)到约50％(w/v)、从约10％(w/v)到约40％(w/v)、从约10％(w/v)到约30％(w/v)、从约10％(w/v)到约25％(w/v)、从约15％(w/v)到约50％(w/v)、从约15％(w/v)到约40％(w/v)、从约15％(w/v)到约30％(w/v)、从约15％(w/v)到约25％(w/v)的量存在于制剂中。

重要地，本发明的制剂具有非常少的残留水分，因此这类制剂中的肽长时间保持稳定。在优选的实施方案中，本发明制剂的水分含量小于约4％、优选小于约3％、优选小于约2％，甚至更优选小于约1％、优选小于约0.5％、优选小于约0.25％、优选小于约0.2％、优选小于约0.15％或优选小于约0.1％。在其他优选的实施方案中，本发明制剂的水分含量为从约0.01％到约4％、优选从约0.01％到约3％、优选从约0.01％到约2％、优选从约0.01％到约1％、优选从约0.1％到约4％、优选从约0.1％到约3％、优选从约0.1％到约2％、优选从约0.1％到约1％、优选从约0.25％到约4％、优选从约0.25％到约3％、优选从约0.25％到约2％、优选从约0.25％到约1％或优选从约0.5％到约1％。

当肽与非挥发性缓冲剂混合时，非挥发性缓冲剂选择为使得肽在水环境中具有最大稳定性、最大溶解度和最小降解的pH。一旦被干燥，肽就会具有最大稳定性、最大溶解度和最小降解的pH记忆，并且当在非质子极性溶剂中溶解或重构时会保留该pH记忆。同样地，在优选实施方案中，制剂中的肽会具有约2.0到约3.0的pH记忆以确保最大稳定性、最大溶解度和最小降解。在其他实施方案中，制剂中的肽会具有约3.0到约5.0的pH记忆以确保最大稳定性、最大溶解度和最小降解。在其他实施方案中，制剂中的肽会具有约4.0到约5.0的pH记忆以确保最大稳定性、最大溶解度和最小降解。在又一其他实施方案中，肽会具有约4.0到约6.0的pH记忆以确保最大稳定性、最大溶解度和最小降解。在又一其他实施方案中，肽会具有约6.0到约8.0的pH记忆以确保最大稳定性、最大溶解度和最小降解。如何确定用于获得具有最大稳定性、最大溶解度和最小降解的肽的最佳pH对本领域技术人员会是显而易见的。

可以在本发明的稳定制剂中配制任何合适剂量的一种或更多种肽。通常地，肽(或在包含两种或更多种肽的实施方案中的每种肽)以约0.5mg/mL到约100mg/mL的量存在于制剂中。在一些实施方案中，肽以约10mg/mL到约60mg/mL的量存在于制剂中。在其他实施方案中，肽以约20mg/mL到约50mg/mL的量存在于制剂中。在再一其他实施方案中，肽以约5mg/mL到约15mg/mL的量存在于制剂中。在又一其他实施方案中，肽以约0.5mg/mL到约2mg/mL的量存在于制剂中。在又一其他实施方案中，肽以约1mg/mL到约50mg/mL的量存在于制剂中。此外，肽的剂量可以根据所用的肽以及待治疗的疾病、病况或病症改变对技术人员会是显而易见的。

肽的“pH记忆”是在缓冲水溶液中(例如在非挥发性缓冲剂中)干燥肽之后产生的电荷分布(质子化状态)。在非常低水分或零水分的非水溶剂中肽的质子化状态、和由此产生的溶解度和稳定性受到干燥前肽的水溶液的pH和所采用的干燥条件的影响。当肽在其中酸性和碱性组分都是非挥发性的缓冲物质中被干燥时，干燥的肽的pH记忆会约等于肽在非挥发性缓冲剂中的pH。参见例如EnzymaticReactionsinOrganicMedia，Koskinen，A.M.P.和Klibanov，A.M.，eds.，Springer(1996)。此外，在其中干燥肽的缓冲水溶液(例如非挥发性缓冲剂)的pH可以优化以产生用于在干燥的肽之后在非质子极性溶剂中重构时导致最佳肽稳定性、最大溶解度和最小降解的肽的pH记忆。因为非质子极性溶剂没有可交换的质子，所以当干燥的肽重构到非质子极性溶剂中时，重构的制剂会保持最佳pH记忆的溶解度和稳定性特性。

对于包含两种、三种、四种或更多种肽的稳定制剂，干燥每种肽以使得其具有为了最大溶解度、最大稳定性和最小降解而优化了的其自身的pH记忆。在制剂中存在两种或更多种肽的实施方案中，第一肽的pH记忆范围可以与第二肽的pH记忆范围部分重叠(例如第一肽的pH记忆可以从约4.0到约6.0，第二肽的pH记忆可以从约6.0到约8.0)，或第一肽的pH记忆范围可以不与第二肽的pH记忆范围重叠(例如第一肽的pH记忆可以从约4.0到约5.0，第二肽的pH记忆可以从约6.0到约8.0)。

肽的pH记忆可以以几种方式进行测量。在一个方法中，肽的pH记忆通过将干燥的肽重构到非缓冲的水中并利用pH指示剂，例如pH试纸或校准的pH电极测量重构的肽的pH来测量。或者，对于已经在非质子极性溶剂(例如DMSO)中重构的肽，肽的pH记忆可以通过向非质子极性溶剂(例如DMSO)中加入至少20％的水并利用pH指示剂测量pH来确定。参见例如Baughman和Kreevoy，“DeterminationofAcidityin80％DimethylSulfoxide-20％Water,”JournalofPhysicalChemistry，78(4):421-23(1974)。非质子极性溶剂-水溶液中的pH的测量可能需要小的校正(即根据上述的Baughman和Kreevoy不超过0.2pH单位)。

在一些实施方案中，当肽在非质子极性溶剂中重构时肽的pH记忆相对于在其中干燥肽的非挥发性缓冲剂中肽的pH的偏差在一个pH单位范围内的情况下，干燥的肽具有约等于在其中干燥肽的非挥发性缓冲剂中肽的pH(因此，例如对于在在其中干燥肽的非挥发性缓冲剂中pH为3.0的肽，当肽在非质子极性溶剂中重构时，从2.0到4.0的肽的pH记忆会是在一个pH单位内，从而干燥的肽的pH记忆会是约等于非挥发性缓冲剂中肽的pH)。

在一些实施方案中，当肽在非质子极性溶剂中重构时肽的pH记忆相对于在其中干燥肽的非挥发性缓冲剂中肽的pH的偏差在半个pH单位范围内的情况下，干燥的肽具有约等于在其中干燥肽的非挥发性缓冲剂中肽的pH(因此，例如对于在在其中干燥肽的非挥发性缓冲剂中pH为3.0的肽，当肽在非质子极性溶剂中重构时，从2.5到3.5的肽的pH记忆会是在半个pH单位内，从而干燥的肽的pH记忆会是约等于非挥发性缓冲剂中肽的pH)。

在前述方法中，肽化合物与非挥发性缓冲剂(以及任选的稳定化赋形剂)的干燥使用喷雾干燥技术、冷冻干燥技术或冻干技术来实现。喷雾干燥技术对本领域技术人员是众所周知的。喷雾干燥包括溶剂在从液滴挥发之后包含一种或更多种固体(例如治疗剂)的溶液经由喷嘴转盘或其他装置雾化的步骤。生成的粉末的性质是包括初始溶质浓度、所产生的液滴的尺寸分布和溶质移除速率的几个变量的函数。所产生的颗粒根据溶剂移除的速率和条件可以包括由晶体和/或非晶固体组成的一次颗粒的聚集体。

用于制备生物大分子，例如蛋白质、寡肽、高分子量的多糖和核酸的超细粉末的喷雾干燥的方法例如在美国专利6,051,256号中进行描述。冷冻干燥程序在本领域中是众所周知的，并且例如在美国专利4,608,764号和美国专利4,848,094号中进行描述。喷雾-冷冻干燥的方法例如在美国专利5,208,998号中进行描述。其他喷雾干燥技术例如在美国专利6,253,463、6,001,336、5,260,306号和PCT国际公开WO91/16882和WO96/09814号中进行描述。

冻干技术对本领域技术人员是众所周知的。冻干是产品在冷冻状态(真空条件下的冰升华)和在真空条件下(通过微热干燥)进行的脱水技术。这些条件使产品稳定，最小化氧化和其他降解过程。冷冻干燥的条件允许在低温下实施方法，因此可以保护热不稳定的产品。冷冻干燥的步骤包括预处理、冷冻、一次干燥和二次干燥。预处理包括在冷冻之前处理产品的任何方法。这可以包括浓缩产品、制剂修正(即加入组分以增加稳定性和/或改进加工)、减少高蒸气压溶剂或增加表面积。预处理的方法包括：冷冻浓缩、溶液相浓缩和特别地配制以保持产品外观或为反应性产品提供冻干保护，并且例如在美国专利6,199,297号中进行描述。“标准的”冻干条件例如在美国专利5,031,336号和“FreezeDryingofPharmaceuticals”(DeLuca，PatrickP.,J.Vac.Sci.Technol.，卷14,No.1，1977年一月/二月)和“TheLyophilizationofPharmaceuticals:ALiteratureReview”(Williams，N.A.和G.P.Polli，JournalofParenteralScienceandTechnology，卷38，No.2，1984年三月/四月)中进行描述。

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述。本领域技术人员将会理解，以下实施例仅为本发明的优选实施例，以便于更好地理解本发明，因而不应视为限定本发明的范围。对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所用的实验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂厂商购买得到的。

实施例1

将胰高血糖素溶于pH4-5的柠檬酸盐缓冲剂，制备包含浓度为10mg/mL的胰高血糖素的溶液，溶液还包含浓度为50mg/mL的糖醇甘露醇。将溶液混合至基本均匀。溶液在FTSDurastop冷冻干燥机(Stoneridge，NY)中进行冻干：样品在-40℃以2.5℃/分钟的梯度进行冷冻，并保持2小时以使得能够充分冷冻。然后，样品温度以2℃/分钟的梯度升高到-5℃，并保持2h作为复性步骤。然后，温度以1.5℃/分钟的梯度降低到30℃，并打开真空至60豪托。一次干燥设置为24h。温度以0.5℃/分钟的梯度逐渐升高到40℃，并再保持10h。在干燥完成后，小瓶在真空下使用来自WestPharmaceutical公司的XX塞子(产品#10123524)盖上。所有制剂在冷冻干燥后都不显示结块塌陷的任何迹象。最终干燥的产品的水分含量小于1％w/w。将干粉溶解到二甲基亚砜和乙酸乙酯的混合物(V:V＝1:1)中，至胰高血糖素浓度为10mg/mL，甘露醇浓度为50mg/mL。

对比例1

将胰高血糖素溶于pH4-5的柠檬酸盐缓冲剂，制备包含浓度为10mg/mL的胰高血糖素的溶液，溶液还包含浓度为50mg/mL的糖醇甘露醇。将溶液混合至基本均匀。溶液在FTSDurastop冷冻干燥机(Stoneridge，NY)中进行冻干：样品在-40℃以2.5℃/分钟的梯度进行冷冻，并保持2小时以使得能够充分冷冻。然后，样品温度以2℃/分钟的梯度升高到-5℃，并保持2h作为复性步骤。然后，温度以1.5℃/分钟的梯度降低到30℃，并打开真空至60豪托。一次干燥设置为24h。温度以0.5℃/分钟的梯度逐渐升高到40℃，并再保持10h。在干燥完成后，小瓶在真空下使用来自WestPharmaceutical公司的XX塞子(产品#10123524)盖上。所有制剂在冷冻干燥后都不显示结块塌陷的任何迹象。最终干燥的产品的水分含量小于1％w/w。将干粉溶解到二甲基亚砜中，至胰高血糖素浓度为10mg/mL，甘露醇浓度为50mg/mL。

对比例2

将胰高血糖素溶于pH4-5的柠檬酸盐缓冲剂，制备包含浓度为10mg/mL的胰高血糖素的溶液，溶液还包含浓度为50mg/mL的糖醇甘露醇。将溶液混合至基本均匀。溶液在FTSDurastop冷冻干燥机(Stoneridge，NY)中进行冻干：样品在-40℃以2.5℃/分钟的梯度进行冷冻，并保持2小时以使得能够充分冷冻。然后，样品温度以2℃/分钟的梯度升高到-5℃，并保持2h作为复性步骤。然后，温度以1.5℃/分钟的梯度降低到30℃，并打开真空至60豪托。一次干燥设置为24h。温度以0.5℃/分钟的梯度逐渐升高到40℃，并再保持10h。在干燥完成后，小瓶在真空下使用来自WestPharmaceutical公司的XX塞子(产品#10123524)盖上。所有制剂在冷冻干燥后都不显示结块塌陷的任何迹象。最终干燥的产品的水分含量小于1％w/w。将干粉溶解到乙酸乙酯中，至胰高血糖素浓度为10mg/mL，甘露醇浓度为50mg/mL。

实施例2

将胰高血糖素溶于pH3的甘氨酸缓冲剂，制备包含浓度为20mg/mL的胰高血糖素的溶液，溶液还包含浓度为10mg/mL的糖醇甘露醇。将溶液混合至基本均匀。溶液在FTSDurastop冷冻干燥机(Stoneridge，NY)中进行冻干：样品在-40℃以2.5℃/分钟的梯度进行冷冻，并保持2小时以使得能够充分冷冻。然后，样品温度以2℃/分钟的梯度升高到-5℃，并保持2h作为复性步骤。然后，温度以1.5℃/分钟的梯度降低到30℃，并打开真空至60豪托。一次干燥设置为24h。温度以0.5℃/分钟的梯度逐渐升高到40℃，并再保持10h。在干燥完成后，小瓶在真空下使用来自WestPharmaceutical公司的XX塞子(产品#10123524)盖上。所有制剂在冷冻干燥后都不显示结块塌陷的任何迹象。最终干燥的产品的水分含量小于0.5％w/w。将干粉溶解到二甲基亚砜和乙酸乙酯的混合物(V:V＝1:1)中，至胰高血糖素浓度为20mg/mL，甘露醇浓度为10mg/mL。

实施例3

将胰高血糖素溶于pH3的柠檬酸缓冲剂，制备包含浓度为30mg/mL的胰高血糖素的溶液，溶液还包含浓度为20mg/mL的糖醇甘露醇。将溶液混合至基本均匀。溶液在FTSDurastop冷冻干燥机(Stoneridge，NY)中进行冻干：样品在-40℃以2.5℃/分钟的梯度进行冷冻，并保持2小时以使得能够充分冷冻。然后，样品温度以2℃/分钟的梯度升高到-5℃，并保持2h作为复性步骤。然后，温度以1.5℃/分钟的梯度降低到30℃，并打开真空至60豪托。一次干燥设置为24h。温度以0.5℃/分钟的梯度逐渐升高到40℃，并再保持10h。在干燥完成后，小瓶在真空下使用来自WestPharmaceutical公司的XX塞子(产品#10123524)盖上。所有制剂在冷冻干燥后都不显示结块塌陷的任何迹象。最终干燥的产品的水分含量小于0.2％w/w。将干粉溶解到二甲基亚砜和乙酸乙酯的混合物(V:V＝2:1)中，至胰高血糖素浓度为30mg/mL，甘露醇浓度为20mg/mL。

实施例4

将胰高血糖素溶于pH3的柠檬酸缓冲剂，制备包含浓度为50mg/mL的胰高血糖素的溶液，溶液还包含浓度为10mg/mL的糖醇甘露醇。将溶液混合至基本均匀。溶液在FTSDurastop冷冻干燥机(Stoneridge，NY)中进行冻干：样品在-40℃以2.5℃/分钟的梯度进行冷冻，并保持2小时以使得能够充分冷冻。然后，样品温度以2℃/分钟的梯度升高到-5℃，并保持2h作为复性步骤。然后，温度以1.5℃/分钟的梯度降低到30℃，并打开真空至60豪托。一次干燥设置为24h。温度以0.5℃/分钟的梯度逐渐升高到40℃，并再保持10h。在干燥完成后，小瓶在真空下使用来自WestPharmaceutical公司的XX塞子(产品#10123524)盖上。所有制剂在冷冻干燥后都不显示结块塌陷的任何迹象。最终干燥的产品的水分含量小于0.1％w/w。将干粉溶解到二甲基亚砜和乙酸乙酯的混合物(V:V＝1:2)中，至胰高血糖素浓度为50mg/mL，甘露醇浓度为10mg/mL。

实施例5

将甲状旁腺素溶于pH7.2的磷酸盐缓冲剂，制备包含浓度为100mg/mL的甲状旁腺素的溶液，溶液还包含浓度为0.5mg/mL的糖醇甘露醇。将溶液混合至基本均匀。溶液在FTSDurastop冷冻干燥机(Stoneridge，NY)中进行冻干：样品在-40℃以2.5℃/分钟的梯度进行冷冻，并保持2小时以使得能够充分冷冻。然后，样品温度以2℃/分钟的梯度升高到-5℃，并保持2h作为复性步骤。然后，温度以1.5℃/分钟的梯度降低到30℃，并打开真空至60豪托。一次干燥设置为24h。温度以0.5℃/分钟的梯度逐渐升高到40℃，并再保持10h。在干燥完成后，小瓶在真空下使用来自WestPharmaceutical公司的XX塞子(产品#10123524)盖上。所有制剂在冷冻干燥后都不显示结块塌陷的任何迹象。最终干燥的产品的水分含量小于0.2％w/w。将干粉溶解到二甲基亚砜和乙酸乙酯的混合物(V:V＝3:2)中，至甲状旁腺素浓度为100mg/mL，甘露醇浓度为0.5mg/mL。

试验例1

将实施例1、对比例1和对比例2的胰高血糖素制剂，在大鼠的药代动力学和药效动力学研究中进行试验，并与含水制剂进行比较。大鼠都以10mg胰高血糖素/大鼠的速率用药。非水胰高血糖素溶液以10μL的皮下注射给予，如同含水的对照溶液一样。实验结果如图1所示，实施例1的胰高血糖素制剂通过肠胃外注射后胰高血糖素的浓度在5分钟内迅速升至峰值，30分钟时还能维持峰值浓度的一半以上，45分钟时还未完全降至注射前的水平，而对比例1和对比例2的胰高血糖素制剂通过肠胃外注射后胰高血糖素的浓度在5-10分钟内迅速升至峰值，但是30分钟时就降低到基本上注射前的水平，证明本发明实施例1的胰高血糖素制剂相比现有技术在效果上有显著进步。

申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细特征以及详细方法，但本发明并不局限于上述详细特征以及详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细特征以及详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明选用组分的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (10)

1.一种肠胃外注射用肽药物的稳定制剂，包括：在非挥发性缓冲剂中干燥并保持在所述非挥发性缓冲剂中的pH记忆的肽或其盐；和二甲基亚砜和乙酸乙酯的混合物；其中所述制剂的水分含量小于5％，并且其中当在所述混合物中重构所述干燥的肽时，所述干燥的肽保持在所述非挥发性缓冲剂中的pH记忆。

2.根据权利要求1所述的稳定制剂，其特征在于，所述二甲基亚砜和乙酸乙酯的混合物中，二甲基亚砜和乙酸乙酯的体积比为(1-3):(1-3)，优选1:1。

3.根据权利要求1或2所述的稳定制剂，其特征在于，所述肽具有的pH记忆为2-8，优选3-7，更优选4-6。

4.根据权利要求1-3任一项所述的稳定制剂，其特征在于，所述肽在所述制剂中存在的浓度为0.5mg/mL至100mg/mL，优选2mg/mL至50mg/mL。

5.根据权利要求1-4任一项所述的稳定制剂，其特征在于，所述非挥发性缓冲剂选自甘氨酸缓冲剂、柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂及它们的混合物。

6.根据权利要求1-5任一项所述的稳定制剂，其特征在于，所述肽或其盐选自胰高血糖素、普兰林肽、胰岛素、亮丙瑞林、LHRH激动剂、甲状旁腺素、糊精、肉毒杆菌毒素、淀粉样肽、缩胆囊素、芋螺毒素、胃抑制肽、胰岛素样生长因子、生长激素释放因子、抗微生物因子、格拉默、胰高血糖素样肽-1、胰高血糖素样肽-1激动剂、艾塞那肽或它们的混合物，优选胰高血糖素。

7.根据权利要求1-6任一项所述的稳定制剂，其特征在于，所述制剂还包含共溶剂，其中所述共溶剂选自乙醇、丙二醇、甘油及它们的混合物；

优选地，所述共溶剂在所述制剂中的存在量为10％(w/v)-50％(w/v；

优选地，所述制剂还包含稳定化赋形剂，其中所述稳定化赋形剂选自糖、淀粉或它们的混合物；

优选地，所述稳定化赋形剂在所述制剂中的存在量为1％(w/v)-40％(w/v)。

8.一种根据权利要求1-7任一项所述的稳定制剂的制备方法，包括：

(1)将肽或其盐溶于非挥发性缓冲剂中，然后干燥成干燥的肽粉，其中所述干燥的肽粉具有所述肽在所述非挥发性缓冲剂中的pH记忆；和

(2)在二甲基亚砜和乙酸乙酯的混合物中重构所述干燥的肽粉；

其中所述制剂的水分含量小于5％，并且其中当在所述混合物中重构所述干燥的肽时，所述干燥的肽保持在所述非挥发性缓冲剂中的pH记忆。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述二甲基亚砜和乙酸乙酯的混合物中，二甲基亚砜和乙酸乙酯的体积比为(1-3):(1-3)，优选1:1；

优选地，所述肽具有的pH记忆为2-8，优选3-7，更优选4-6；

优选地，所述肽在所述制剂中存在的浓度为0.5mg/mL至100mg/mL，优选2mg/mL至50mg/mL。

10.根据权利要求8或9所述的制备方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)将肽或其盐溶于非挥发性缓冲剂中，然后干燥成干燥的肽粉，其中所述干燥的肽粉具有所述肽在所述非挥发性缓冲剂中的pH记忆；

(2)在二甲基亚砜和乙酸乙酯的混合物中重构所述干燥的肽粉；

其中所述制剂的水分含量小于5％，并且其中当在所述混合物中重构所述干燥的肽时，所述干燥的肽保持在所述非挥发性缓冲剂中的pH记忆；和

(3)加入选自乙醇、丙二醇、甘油及它们的混合物的共溶剂和选自糖、淀粉或它们的混合物的稳定化赋形剂。