CN105324395A - 治疗急性肾损伤的方法 - Google Patents

Abstract

提供了用于在受试者中治疗急性肾损伤特别是缺血诱导的肾损伤和/或低氧诱导的肾损伤的方法。这些方法包括向该受试者给予一种ETA受体拮抗剂，例如阿曲生坦或其一种药学上可接受的盐。也提供了诊断和治疗此类肾损伤的方法。也提供了减少或预防肾功能丧失和/或肾质量损失或体积损失的方法，以及延迟进展为慢性肾脏疾病的方法。

Description

治疗急性肾损伤的方法

关于联邦资助的研究或开发的声明

本发明是根据由美国国立卫生研究院(NationalInstitutesofHealth)授予的资助(DK38432和DK083310)在政府支持下进行。政府在本发明中具有一定权利。

技术领域

本披露是针对用于治疗或预防急性肾损伤的方法。

发明背景

最近的研究已经报道了归因于急性肾损伤(AKI)而住院的情况增加。(韦克尔(Waiker)SS.等人，患有急性肾衰竭的患者的死亡率下降(Decliningmortalityinpatientswithacuterenalfailure)，1988至2002.美国肾病学杂志(JAmSocNephrol)，17：1143-1150，2006；薛(Xue)JL等人，急性肾衰竭在医疗保健受益人中的发病率和死亡率(IncidenceandmortalityofacuterenalfailureinMedicarebeneficiaries)，1992至2001.美国肾病学杂志(JAmSocNephrol)1135-1142，2006)。发病率和死亡率在这些患者中发生率很高，并且对有效的治疗存在着迫切需要。

当一个或两个肾由于一个或多个不同原因损伤时，急性肾损伤发生，并且可以导致肾功能(例如从血液中过滤废物)的快速丧失。AKI的原因包括但不限于(1)暴露于一种肾毒性剂；(2)归因于创伤、烧伤、胰腺炎、败血症、或感染的全身炎症反应综合征；(3)导致低血容量的任何生理病症，包括外周动脉闭塞性疾病、闭塞性动脉硬化、低心输出量、血量再分配、或改变的血管阻力；(4)创伤性横纹肌溶解；(5)炎性细胞因子的持续或恶化；(6)泌尿道阻塞；以及(7)急性肾损伤的其他固有肾病因。使受试者处于AKI风险的其他疾病和病症包括：肾移植手术(作为供体或受体)、双侧动脉闭塞、双侧急性肾静脉血栓症、急性尿酸肾病、血容量不足、心血管衰竭、急性双侧上道阻塞(acutebilateraluppertractobstruction)、高钙性肾病、溶血尿毒症综合征、急性尿潴留、恶性肾硬化症、原发性混合型西罗免疫球蛋白血症(cyroimmunoglobulinemia)、草酸盐肾病、皮层坏死、产后肾小球硬化症、变应性肾病、硬皮病、特发性快速进行性肾小球肾炎、古德帕斯丘综合征(Goodpasture'ssyndrome)、非古德帕斯丘抗GBM疾病、急性细菌性心内膜炎或内脏败血症、微型结节性多动脉炎、韦格纳氏肉芽肿病(Wegener'sgranulomatosis)、变应性肉芽肿病、急性辐射肾炎、链球菌感染后肾小球肾炎、非链球菌感染后肾小球肾炎(nonstreptococcalpost-infectiousglomerulonephritis)、弥漫增生性狼疮肾炎、膜性增生性肾小球肾炎、肾静脉血栓形成、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(Waldenstrom'smacroglobulinemia)、多发性骨髓瘤，贝格尔氏(IgA)肾病(Berger's(IgA)nephropathy)、亨诺-许兰二氏紫癜(purpura)、以及局灶性肾小球硬化症。AKI的结果是废物开始在血流中积聚，这最终可能引起许多并发症，包括代谢性酸中毒、高钾血症、尿毒症、血容量不足、水肿和死亡。

因为AKI的病因是多样的，不存在对AKI的标准药理学治疗。当面对患有AKI的患者时，医师试图用流体调节来管理该疾病并且治疗根本原因以使肾损害最小化。已经研究了大量的不同类型的化合物以治疗急性肾损伤，但成果有限。建议的对AKI的治疗包括利尿剂、胱天蛋白酶抑制剂、米诺环素、鸟苷、皮斐松-α、PARP抑制剂，鞘氨醇1磷酸酯类似物、腺苷2A激动剂、α-MSH、IL-10、贝特类(fibrate)、PPAR-γ激动剂、活化C蛋白、iNOS抑制剂、胰岛素、丙酮酸乙酯、重组EPO、肝细胞生长因子、一氧化碳释放化合物和胆红素、非诺多泮、以及心房钠尿肽。

几种疗法已经显示出临床前的希望，但当在临床设定中研究时已经失败，部分地是因为用于预防AKI的治疗窗可能是窄的，并且延迟的治疗可能是无效的。(乔(Jo)SK，等人，急性肾损伤的药物治疗：为什么药物不起作用并且即将来临的是什么(PharmacologicTreatmentofAcuteKidneyInjury:WhyDrugsHaven’tWorkedandWhatisontheHorizon).美国肾病学临床杂志(ClinJAmSocNephrol)2：356–365，2007)。例如，重组人IGF-1(米勒(Miller)SB等人，胰岛素样生长因子I在大鼠中加速从缺血性急性肾小管坏死恢复(Insulin-likegrowthfactorIacceleratesrecoveryfromischemicacutetubularnecrosisintherat).美国国家科学院院刊(ProcNatlAcadSciUSA)89：11876-11880，1992)和心房钠尿肽(阿尔格伦(Allgren)RL等人，急性肾小管坏死中的阿那立肽(Anaritideinacutetubularnecrosis).心耳素阿那立肽急性肾小管坏死研究组(AuriculinAnaritideAcuteRenalFailureStudyGroup).新英格兰医学期刊(NEnglJMed)336：828-834，1997；以及路易斯(Lewis)J等人，少尿型急性肾衰竭中的心房利钠因子(Atrialnatriureticfactorinoliguricacturerenalfailure).心耳素阿那立肽急性肾小管坏死研究组(AuriculinAnaritideAcuteRenalFailureStudyGroup).美国肾脏病杂志(AmJKidneyDis)36：767-774，2000)在人体试验中都失败了。

AKI可被临床诊断到并且通过评估某些实验室参数(例如，血清肌酸酐(SCr)、肾小球滤过率(GFR)、血尿素氮(BUN)、炎症标记物)来评价。起因自AKI的肾损伤可以进一步经由某些生物标记物评估，这些生物标记物包括肾损伤分子1(KIM-1)、人嗜中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、白细胞介素-18(IL-18)、胱抑素(cystatin)C、丛生蛋白、脂肪酸结合蛋白、以及骨桥蛋白。(克鲁兹(Cruz)DN等人，作为心血管疾病生物标记物的嗜中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白：一个系统性综述(Neutrophilgelatinase-associatedlipocalinasabiomarkerofcardiovasculardisease:asystematicreview).临床化学实验室医学(ClinChemLabMed.)50：1533-1545，2012.)

越来越多的临床文献表明急性肾损伤还可以启动慢性肾脏疾病的发作。(伊莎尼(Ishani)A等人，在老年人中急性肾损伤增加ESRD的风险(AcutekidneyinjuryincreasesriskofESRDamongelderly).美国肾病学杂志(JAmSocNephrol)20：223-228，2009；薛(Xue)JL等人，急性肾衰竭在医疗保健受益人中的发病率和死亡率(IncidenceandmortalityofacuterenalfailureinMedicarebeneficiaries)，1992至2001.美国肾病学杂志(JAmSocNephrol)，17：1135-1142，2006；韦卡尔(Waiker)SS等人，患有急性肾衰竭的患者的死亡率下降(Decliningmortalityinpatientswithacuterenalfailure)，1988至2002.美国肾病学杂志(JAmSocNephrol)17：1143-50，2006；利安戈斯(Liangos)O等人，在住院患者中急性肾衰竭的流行病学和疗效：国家调查(Epidemiologyandoutcomesofacuterenalfailureinhospitalizedpatients:anationalsurvey).美国肾病学临床杂志(ClinJAmSocNephrol)1：43-51，2006；沃尔德(Wald)R等人，在需要透析的急性肾损伤的存活者中的慢性透析和死亡(Chronicdialysisanddeathamongsurvivorsofacutekidneyinjuryrequiringdialysis).JAMA302：1179-85，2009；戈尔德贝尔格(Goldberg)A等人，在急性心肌梗死之后瞬时和持续性急性肾损伤对远期疗效的影响(Theimpactoftransientandpersistentacutekidneyinjuryonlong-termoutcomesafteracutemyocardialinfarction).国际肾脏病杂志(KidneyInt)76：900-910，2009.)例如，一项最近的研究报道了归因于AKI需要透析的患者对于发展慢性肾脏疾病(CKD)具有约28倍增加的风险。(罗(Lo)LJ等人，需要透析的急性肾衰竭增加进行性慢性肾脏疾病的风险(Dialysis-requiringacuterenalfailureincreasestheriskofprogressivechronickidneydisease).国际肾脏病杂志(KidneyInt.)76：893-9，2009.)然而，尚未确定无疑地鉴别出AKI通过其可能引发CKD的发作的机制。

一个突出理论坚持最初缺血损伤可能诱导管周微血管损伤，由此危害肾血流量。这可能以归因于低氧条件的具有进行中的组织损伤的持续性肾缺血而告终。(巴西莱(Basile)DP等人，受损的内皮增殖和间充质转型有助于急性肾损伤后的血管稀疏(Impairedendothelialproliferationandmesenchymaltransitioncontributetovascularrarefactionfollowingacutekidneyinjury).美国生理学杂志(AmJPhysiol)300：F721-733，2011；伦纳德(Leonard)EC等人，VEGF-121保留肾微血管结构并且在急性肾损伤之后改善继发性肾疾病(VEGF-121preservesrenalmicrovesselstructureandamelioratessecondaryrenaldiseasefollowingacutekidneyinjury).美国生理学杂志(AmJPhysiol)295：F1648-1657，2008.)当存在不足以提供充足氧合的血流量时缺血发生，这导致组织低氧(减少的氧)或作为低氧的最严重形式的缺氧症(不存在氧)，并且最终导致组织坏死，并且在较小程度上细胞凋亡。缺血总是导致低氧；然而，例如如果动脉血液的氧含量降低，例如伴随贫血发生，低氧可以在没有缺血情况下发生。因此，在缺血诱导的肾损伤的模型中有效的治疗在低氧诱导的肾损伤的模型中也将是有效的，因为两种模型通过剥夺该组织的必需营养素并且通过引起内皮功能障碍、氧化应激和炎症而引起组织损伤。

已造成在定义起因自缺血的急性肾损害的机制方面的困难的一个因素是以下事实，即缺血性AKI、双侧肾动脉阻塞(RAO)的最常用模型不是可靠地产生进行性肾损害。相反，尽管有RAO产生所谓的“治疗缺陷”(例如持续性管/微血管损害；盐敏感性高血压)的事实，但既不会导致GFR的持续也不导致其进行性损失。(参见，例如，佩奇曼(Pechman)KR等人，从肾缺血再灌注损伤恢复与改变的肾血流动力学、钝化压力尿钠增多、以及钠敏感高血压相关联(Recoveryfromrenalischemia-reperfusioninjuryisassociatedwithalteredrenalhemodynamics,bluntedpressurenatriuresis,andsodium-sensitivehypertension).美国生理学杂志(AmJPhysiol)297：R1358-R1363，2009；斯珀吉翁-佩奇曼(Spurgeon-Pechman)KR等人，响应于升高的钠，从急性肾衰竭恢复倾向于高血压和继发性肾疾病(Recoveryfromacuterenalfailurepredisposeshypertensionandsecondaryrenaldiseaseinresponsetoelevatedsodium).美国生理学杂志(AmJPhysiol)293：F269-F278，2007；芬恩(Finn)WF等人，在大鼠中从缺血后急性肾衰竭恢复(Recoveryfrompostischemicacuterenalfailureintherat).国际肾脏病杂志(KidneyInt)16：113-123，1979；芬恩(Finn)WF等人，归因于单侧肾缺血的损伤的衰减：对侧肾切除的延迟作用(Attenuationofinjuryduetounilateralrenalischemia:delayedeffectsofcontralateralnephrectomy).实验室临床医学杂志(JLabClinMed)103：193-203，1984.)

最近报道了在小鼠中单侧缺血性损伤(而不是双侧)的一个新模型产生进行中的肾小管坏死、间质性炎症、管周微血管损伤、肾纤维化，并且最终经2-3周产生40％-50％的肾质量损失。(萨格尔(Zager)RA等人，急性单侧缺血性肾损伤诱导进行性肾炎、脂质积累、组蛋白修饰、以及“终末期”肾疾病(Acuteunilateralischemicrenalinjuryinducesprogressiverenalinflammation,lipidaccumulation,histonemodification,and"end-stage"kidneydisease).美国生理学杂志(AmJPhysiol)301：F1334-1345，2011.)该模型中一个未损伤的对侧肾的存在改善归因于尿毒症的死亡率，并且可允许研究者更完全地研究急性肾损伤。单侧缺血性肾损伤的模型在几周内导致近‘终末期’的肾疾病。通过使用这种单侧缺血模型，已经报道了某些参与进行性肾损害的若干重要病理生理事件。这些包括血清肌酸酐、BUN、促炎细胞因子产生、选择的抗炎防御的下调(例如，血红素加氧酶1和IL-10)以及累积的脂毒性方面的逐步增加。这些以进行性小管坏死、小管脱落、早期纤维化和最终的肾质量的极大损失而告终。(萨格尔(Zager)RA等人，急性单侧缺血性肾损伤诱导进行性肾炎、脂质积累、组蛋白修饰、以及“终末期”肾疾病(Acuteunilateralischemicrenalinjuryinducesprogressiverenalinflammation,lipidaccumulation,histonemodification,and"end-stage"kidneydisease).美国生理学杂志(AmJPhysiol)301：F1334-1345，2011.)

因此，对用于治疗急性肾损伤的有效且安全的治疗存在需要。

发明概述

本披露是针对用一种内皮素受体拮抗剂(例如阿曲生坦)治疗急性肾损伤的方法。作为本发明的一个方面，提供了在受试者中治疗急性肾损伤的方法。这些方法包括向该受试者给予一种ETA受体拮抗剂，例如阿曲生坦或其一种药学上可接受的盐。特别地，这些方法适合用于治疗肾损伤，该肾损伤是一种缺血诱导的肾损伤或低氧诱导的肾损伤。在该肾损伤之后，例如在该肾损伤之后至少24小时和/或该受试者发展临床急性肾衰竭之后，可以给予该ETA受体拮抗剂。在一些实施例中，在急性肾损伤发作和/或诊断之前，未向该受试者给予该ETA受体拮抗剂，并且在一些实施例中，这些方法排除这种给药。

作为本发明的另一个方面，提供了在受试者中治疗缺血诱导的肾损伤或低氧诱导的肾损伤的方法。作为本发明的又另一个方面，提供了在具有缺血诱导的肾损伤或低氧诱导的肾损伤的受试者中延迟进行到慢性肾脏疾病的方法。作为本发明的仍另一个方面，提供了在受试者中逆转缺血后或低氧后肾损害的方法。在这些方面的每一个中，这些方法包括向该受试者给予一种ETA受体拮抗剂。

作为本发明的又另一个方面，提供了在具有缺血诱导的肾损伤或低氧诱导的肾损伤的受试者中减少肾质量的损失的方法。这些方法包括将该受试者诊断为具有急性肾损伤；进行对一种AKI指示物的第一测量；向该受试者给予一种ETA受体拮抗剂；并且在已向该受试者给予该ETA受体拮抗剂持续一段时间之后进行对该AKI指示物的稍后第二测量。在该AKI指示物的第一测量和第二测量之间的差异是不显著的。在一些实施例中，该AKI指示物是肾质量、肾体积、肾小球滤过率、血清肌酸酐、血尿素氮，或炎症标记物。

作为本发明的另一个方面，提供了在受试者中诊断和治疗急性肾损伤的方法。这些方法包括测量一个水平的缺血诱导的肾损伤或低氧诱导的肾损伤的指示物；确定该测量水平是否指示缺血诱导的肾损伤或低氧诱导的肾损伤；并且向患有缺血诱导的肾损伤或低氧诱导的肾损伤的受试者给予一种ETA受体拮抗剂。例如，缺血诱导的肾损伤或低氧诱导的肾损伤的指示物包括尿肾小管损伤残留物(即，显示肾小管损伤残留物(例如，肾小管细胞管型)的尿液样品)、在肾脏中表达的ET-1mRNA水平、在肾脏中表达的ETA受体mRNA水平、在肾脏中表达的NGALmRNA水平、乳酸盐、或炎症标记物。确切地，mRNA表达可被定位在肾脏的肾皮质中。其他指示物可以是ET-1或NGAL的蛋白质水平或ETA受体表达的或细胞表面上存在的其他测量。

在前述方法中，该ETA受体拮抗剂可以是阿曲生坦或其一种药学上可接受的盐。在该肾损伤之后，例如在该肾损伤之后至少24小时或该受试者发展临床急性肾衰竭之后，可以给予该ETA受体拮抗剂。

附图简要说明

图1描绘了在缺血性肾损伤后的肾皮质和血浆内皮素1mRNA水平。

图2描绘了在缺血性肾损伤后两周肾皮质和血浆内皮素1蛋白水平。

图3说明了在该ET-1基因的外显子1处的PolII结合、组蛋白3甲基化、乙酰化、和组蛋白变体H2.Z交换的ChIP测定评估。

图4描绘了在缺血性损伤24小时和两周后肾皮质ETA和ETB受体mRNA水平。

图5显示在缺血前+后(左图)、或仅缺血后期间(右图)中诱导单侧缺血性损伤+/-阿曲生坦治疗之后两周的肾重量。

图6显示重量显示在图5中的肾脏的照片。

图7描绘了在有和没有阿曲生坦治疗的情况下遵循该单侧缺血方案的肾增殖。左图描绘了来自单侧缺血性损伤实验±阿曲生坦治疗的对侧(非缺血性)肾脏的重量。右图描绘了正常肾(A)、缺血性肾之后2周(左)(B)、以及在缺血性肾之后2周阿曲生坦治疗前+后(C)的KI-67染色。

图8说明了在不同持续时间的缺血后二十四小时阿曲生坦对血尿素氮(BUN)和血浆肌酸酐的影响。

图9说明了在不同持续时间的缺血后二十四小时阿曲生坦对NGAL的影响。

详细说明

如在本节中所用的节标题和在此的整个披露不旨在进行限制。

如在此使用的，单数形式“一种(a)”、“一种(an)”以及“该”包括复数个指示物，除非上下文中另外明确指明。对于此处数值范围的叙述，明确考虑了具有相同程度的精度的介于两者之间的每个数字。例如，对于范围6-9，除了6和9之外还考虑了数字7和8，并且对于范围6.0-7.0，明确考虑了数字6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9和7.0。

如在此所使用的，术语“约(about)”与术语“大约(approximately)”同义使用。说明性地，术语“约”的使用表明值略微在所叙述值的外部，即，加或减10％。因此，叙述术语“约(about)”与术语“大约(approximately)”的权利要求的范围包括了此类剂量。

术语“给予(administer、administering、administered或administration)”是指向受试者或患者提供一种药物(例如阿曲生坦或其一种药学上可接受的盐)的任何方式。给药途径可以通过本领域的普通技术人员已知的任何手段完成。此类手段包括但不限于经口、经颊、静脉内、皮下、肌内、经皮、通过吸入等。

如此处所使用的，术语“活性剂”是指一种试剂，该试剂实现一个希望的生物学效应或其一种药学上可接受的盐。术语“活性剂”和“药物”在此是可互换地使用。在制备本披露的剂型中使用的活性剂的固态形式不是关键性的。例如，用于制备本披露的剂型的活性剂可以是无定形或晶体。最终的剂型包含至少可检测量的晶体活性剂。可以使用粉末X-射线衍射分析，通过差示扫描热量法或本领域已知的任何其他技术来检测活性剂的晶体性质。

术语“阿曲生坦”或“atra”或“ABT-627”是指具有以下所示的结构的(2R,3R,4S)-4-(1,3-苯并间二氧杂环戊烯-5-基)-1-[2-(二丁基氨基)-2-氧代乙基]-2-(4-甲氧基苯基)吡咯烷-3-甲酸：

及其盐，例如阿曲生坦的HCl盐。用于制造阿曲生坦的方法描述于，例如，美国专利号6,380,241、6,946,481、7,365,093、5,731,434、5,622,971、6,462,194、5,767,144、6,162,927和7,208,517，这些的内容通过引用结合在此。

术语BQ-788是指具有以下所示的结构的N-顺式-2,6-二甲基哌啶羰基-L-γ-甲基亮氨酰-D-1-甲氧基羰基色氨酰-D-正亮氨酸：

通过“有效量”或“治疗有效量”的一种活性剂意指无毒但足够提供所希望的效果的量的活性剂。“有效”的活性剂的量在受试者之间是不同的，取决于个体的年龄和一般条件、具体的活性剂或试剂等等。因此，它不总是能够指定精确的“有效量”。然而，通过使用常规实验可在任何个体情况中确定适合的“有效量”。

当然，应当理解，可以利用其他给药方案，如多于每天一次给药，利用延长、受控的、或修饰的释放剂型等，以便实现所希望的结果。在此考虑了该ETA受体拮抗剂可以在检测肾缺血或低氧时或在此类检测之后24小时内给予。可替代地或另外地，该ETA受体拮抗剂可以持续长达一周、或两周、或四周、或八周、或更长时间给予。或可给予该ETA受体拮抗剂，只要该急性肾损伤存在或直到该损伤解决或直到不再检测到缺血或低氧。

术语“内皮素亚型A受体抗剂”或“ETA受体抗剂”或“ETA受体制剂”是指通过该内皮素亚型A受体而抑制ET-1信号传导的作用的任何化合物。ETA受体拮抗剂的实例包括但不限于安倍生坦、阿曲生坦、阿伏生坦、BMS193884，BQ-123、CI-1020、克拉生坦(clazosentan)、达卢生坦、艾多南坦、S-0139，SB-209670、西他生坦(sitaxsentan)、TA-0201、塔拉生坦(tarasentan)、TBC3711、替唑生坦、YM-598、ZD-1611、ZD-4054，及其盐、酯、前药、代谢物、互变异构体、消旋体以及其对映异构体。术语“内皮素抗剂”或“ET-1拮抗剂”或“ET-1抑制剂”是指抑制ET-1的任何化合物。

术语“急性肾损伤”或“急性肾衰竭”典型地是通过足以导致含氮废物在身体中积聚的肾功能的快速衰退鉴定的(参见，例如，安德森(Anderson)和施里尔(Schrier)(1994)，于哈里森内科医学原理(Harrison'sPrinciplesofInternalMedicine)，第13版，伊塞尔巴谢(Isselbacher)等人编著，麦格劳希尔文本(McGrawHillText)，纽约)。在BUN上至少4至8mmol/L/天(10至20mg/dL/天)的增长率，并且血清肌酸酐的至少40至80μmol/L/天(0.5至1.0mg/dL/天)的增长率在急性肾衰竭中是典型的。尿样品还可以包含在患有急性肾损伤的患者中的肾小管损伤残留物。在分解代谢(或分解代谢过度)的受试者中，在BUN上的增长率可以超过100/mg/dL/天。在BUN或血清肌酸酐上的增长率可以通过连续血液测试来确定，并且优选地至少两个血液测试是经6和72小时或，更优选地12和24小时之间的一个时间段进行。有时区别是在“急性”肾衰竭(经几天的一段时间衰退)和“快速进行性”肾衰竭(经几周的一段时间衰退)之间进行的。如在此使用的，然而，短语“急性肾损伤”旨在包括两种综合征。如以上所讨论的，临床医师定期鉴定急性肾损伤。

如此处所使用的，术语“缺血诱导的肾损伤”是指归因于被鉴定的肾缺血或缺血和再灌注的一次或多次发生的肾损伤。术语缺血性肾损伤可以在此可互换地使用。如此处所使用的，术语“低氧诱导的肾损伤”是指归因于缺血、缺血及再灌注、和/或低氧的肾损伤，即使该低氧或缺氧症是归因于未知的或除了缺血外的原因。缺血诱导的肾损伤可通过临床医师例如通过识别缺血性条件或通过参考急性肾损伤的某些固有肾病因来鉴定。低氧诱导的肾损伤可通过临床医师例如通过识别缺氧条件或通过参考急性肾损伤的某些固有肾病因来鉴定。该肾损伤的程度将通过跟踪在BUN和血清肌酸酐上的增加来进行临床上的评估。

如此处所使用的，术语“炎症标记物”是指当患者的身体的某些方面处于炎性状态中时，该患者的身体所产生的肽和化学物质。示例性炎症标记物包括甘油三酯、非高密度脂蛋白(HDL)、脱辅基蛋白B、纤维蛋白原、可溶性肿瘤坏死因子受体(sTNFR-2)、单核细胞趋化蛋白-1、干扰素-γ-诱导蛋白(IP-10)、巨噬细胞炎性蛋白-1δ、血管细胞粘附分子-1(VCAM)、血清淀粉样蛋白A、血红素加氧酶1、可溶性细胞间分子类型1(sICAM-1)、C-反应蛋白(CRP)和白细胞介素家族的成员。这些标记中的某些的升高水平的存在已显示与疾病的发展相关。例如，CRP已经被报道为全身炎症的一个标记(里德科勒(Ridkler)等人，在妇女心血管疾病的预测中的C-反应蛋白和其他炎症标记物(C-ReactiveProteinandOtherMarkersofInflammationinthePredictionofCardiovascularDiseaseinWomen).342(12)：836-43，NEJM，2000.)。炎症标记物可通过收集血液和/或尿液来评估。

如此处所使用的，术语“AKI指示物”是指反映急性肾损伤的存在的一种临床测量。考虑到的AKI指示物包括某些实验室参数，包括但不限于GFR、血清胱抑素C、尿白蛋白分泌物、BUN、血清肌酸酐、尿NGAL、尿KIM-1、炎症标记物和某些形态标记，包括但不限于肾质量和显示肾小管细胞和细胞残留物的尿样品。

如此处所使用的，术语“肾小球滤过率”或“GFR”是指实际的或真实的肾小球滤过率连同肾小球滤过率的估计。肾小球滤过率的估计可以使用某些方程式进行，这些方程式包括在肾病饮食修改(MDRD)研究方程式，床边施瓦兹方程式(BedsideSchwartzequation)、科克罗夫特-高尔特(Cockcroft-Gault)方程式、或任何其他临床上接受的公式或等式。

如此处所使用的，术语“临床急性肾衰竭”是指肾功能的降低，或可以在临床上例如通过全科医师或肾病学家检测到。临床急性肾衰竭可以通过降低的肾小球滤过率、降低的尿产生或不存在尿产生、血液中增加的废物(尤其是肌酸酐或尿)、血尿(尿液中失血)、蛋白尿(尿液中蛋白损失)、或其他临床指示物来评估。

如在此所使用的，术语“急性肾损伤的固有肾病因”包括：

(1)脉管系统的异常，例如血管收缩疾病(例如，恶性高血压、硬皮病、溶血尿毒症综合征、血栓性血小板减少性紫癜)和血管炎(例如，结节性多动脉炎、变应性脉管炎、血清疾病、韦格纳氏肉芽肿病、巨细胞动脉炎、混合型冷球蛋白血症、亨诺-许兰二氏紫癜、系统性红斑狼疮)；

(2)肾小球的异常，例如感染后异常(例如，链球菌、肺炎球菌、淋球菌、葡萄球菌、肠球菌、病毒[例如，乙型肝炎和丙型肝炎、腮腺炎、麻疹、爱泼斯坦巴尔]、疟疾感染后，或涉及布鲁氏菌病、军团杆菌、李斯特菌、分流肾炎、麻风病、细螺旋体病、或内脏脓肿)和非感染性异常(例如，快速进行性肾小球肾炎、膜性增生性肾小球肾炎、古德帕斯丘综合征、系统性红斑狼疮、韦格纳氏肉芽肿病)；

(3)起因自药物相关原因的急性间质性肾炎(例如，青霉素、磺胺类、羧苄西林、头孢菌素、红霉素、萘夫西林、苯唑西林，非甾体抗炎药、利尿剂(呋塞米、依他尼酸、噻嗪、螺内酯、水银剂)、苯妥英、苯巴比妥、丙磺舒(probenicid)、别嘌醇、西咪替丁)、感染相关原因(例如，急性肾盂肾炎、链球菌、葡萄球菌、细螺旋体病、疟疾、沙门氏菌病)、乳头坏死(例如，与糖尿病、镰状细胞疾病、止痛剂滥用、酒精中毒相关)、以及其他混杂原因(例如，类肉瘤病、白血病、淋巴瘤)；

(4)小管内阻塞的结晶沉积(例如，尿酸、草酸盐、甲氨蝶呤)或多发性骨髓瘤和轻链疾病；以及

(5)由肾毒素引起的急性肾小管坏死(例如，抗微生物剂，如氨基糖苷、四环素、两性霉素、多粘菌素、头孢菌素)、重金属(例如，水银、铅、砷、金盐、钡)、以及其他混杂化学试剂(例如，顺钼、多柔比星、链佐星、甲氧氟烷、氟烷、乙二醇、四氯化碳)、或自缺血(例如，出血、低血压、败血症、烧伤、肾梗死、肾动脉剥离、横纹肌溶解、创伤)、或者其他混杂原因(例如，造影剂、输血反应、肌红蛋白血症(myoglobinemia)、热中风、蛇和蜘蛛咬伤)。

通过“药学上可接受的”，如在“药学可接受的赋形剂”或“药学可接受的添加剂”的叙述中，意指一种材料，该材料不是生物学上或另外不希望的，即，该材料可被掺入到给予患者的一种药物组合物而不引起任何不希望的生物效应。

术语“RAAS抑制剂”是指抑制肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)中一个或多个要素的任何化合物。RAAS抑制剂的实例包括ACE抑制剂、ARB、凝乳酶抑制剂、醛固酮拮抗剂和其他。

术语“受试者”是指动物。在一个方面中，该动物是一种哺乳动物，包括人或非人类动物，优选人类受试者。术语患者和受试者可以在此处可互换地使用。

优选地，受试者处于急性肾衰竭或处于进入急性肾衰竭的风险的诊断是基于在其他因素中测量血清肌酸酐以及血尿素氮的循环水平的连续血液测试做出的。此类“连续”血液测试可以在展示急性肾衰竭的症状的未诊断患者准许时立即每隔几小时进行。然而，更典型地，连贯的连续血液测试间隔至少6小时、不高于72小时、并且优选地12-24小时的一个时间段。基于一个24或72小时时间段内的两个或更多个血液测试，可能计算出血清肌酸酐或BUN的增长率。另外地或可替代地，诊断可以通过评估尿样品中的小管损伤残留物的存在。

具有单个肾的受试者，不管另一个肾损失的方式(例如，物理创伤、手术摘除、出生缺陷)，可以被认为处于增加的急性肾衰竭风险。这对于如下那些受试者是特别适用的，其中一个肾归因于可能折磨着剩余的肾的疾病或病症而损失。类似地，已经是肾移植的接受者或接受了慢性透析(例如，慢性血液透析或连续不卧床腹膜透析)的受试者可以被认为处于增加的急性肾衰竭风险。处于增加的发展急性肾损伤风险的其他组包括患有慢性肾脏疾病、糖尿病的那些,以及老人。因此，对于这些受试者，上文所讨论的临床适应症可能需要被更仔细地监测，并且肾治疗剂治疗的较早或更具侵袭性的干预可能是值得推荐的。

术语“治疗(treating)”和“治疗(treatment)”是指降低症状的严重性和/或频率、消除症状和/或潜在病因、预防症状的发生和/或其潜在的病因、以及改善或补救损害。因此，例如，“治疗”患者涉及在易感染的个体中预防一种特定障碍或不良生理学事件连同通过抑制障碍或疾病或引起障碍或疾病的复原来来治疗临床症状个体。

本方法部分地基于以下出人意料的发现：ETA受体拮抗剂对患有急性肾损伤的治疗用途(包括在急性肾损伤发作或诊断为急性肾损伤之后)可以降低死亡率和/或发病率，并且预防、抑制、延迟、或减轻与急性肾损伤相关的肾功能的永久和/或进行性损失。在此考虑了肾损伤可能是低氧诱导的肾损伤或更确切地说是一种缺血诱导的肾损伤。

ETA受体拮抗预防或减少与缺血诱导的和/或低氧诱导的肾损伤相关的物理性肾脏损失连同功能性肾损失。在临床设定下，肾损失可以使用超声波技术或其他适当的可视化技术通过评估肾质量或肾体积来进行评价。

在实施例中，来自所披露的方法的肾脏保护效果可以在最初缺血/再灌注损伤阶段之前、过程中和/或之后发生。在实施例中，该ETA受体拮抗剂被给予以加速AKI后的肾恢复。

在实施例中，来自所披露的方法的肾脏保护效果导致炎症标记物和表明肾胁迫和功能不良的某些实验室参数(例如，血清肌酸酐、GFR、BUN)减少。因此，在本发明的一些实施例中，这些炎症标记物和/或某些实验室参数在给予一种ETA受体拮抗剂一些时间之后进行的测量显示随着时间而减少，其将与肾功能上的增加相关。

由ETA受体拮抗提供的肾脏保护的确切机制是不清楚的。然而，不受限于任何具体理论或机制，应认为肾脏保护可以由以下各项中的一个或多个驱动：直接ETA拮抗、与一氧化氮信号传导相互作用、血管紧张素II系统、以及TGFβ-介导的纤维化。如果在事实上持续性组织缺血是进行性肾损害的介体，如以上所表明的，那么ET-1介导的肾血管收缩潜在地可能起到重要致病作用。看起来在ETA受体拮抗上观察到的一些肾脏保护功效是归因于肾微血管扩张和肾小管细胞结构和功能的保留。因此，在本方法的一些实施例中，可以给予一种ETA受体拮抗剂和RAAS抑制剂的组合以对仅单独的ETA受体拮抗剂或RAAS抑制剂的治疗提供增加的肾脏保护。

在此描述的本披露的方法的其他适宜修饰和调节是明显的并且可以使用合适的等价方案进行，而不脱离本披露或此处披露的实施例的范围。现在已详细描述了本披露，同样将通过参考以下实例更清楚地理解，包括这些实例仅是出于举例说明的目的并且不旨在限制本披露的范围。在此提到的所有期刊参考文献、美国专利和公开的披露是通过引用以其全文结合在此。

实例

所有实验是使用获得自查尔斯河实验室(CharlesRiverLaboratories)，威明顿市，MA的雄性30-45克CD-1小鼠进行的。它们被容纳在常规动物饲养条件下，自由接近食物和水。手术是在深度戊巴比妥麻醉(40-50mg/KgIP)下进行的。在手术完成时术后止痛是以丁丙诺啡(0.1mg/KgIP)提供的。所有程序都根据NIH指导方针被该机构的IACUC批准。

计算和统计：所有值被表示为平均值±1SEM。统计比较是由不成对的学生t检验进行的。该mRNA数据是通过竞争性RT-PCR产生的，针对任何给定的信使的结果被表达为与同时确定的用作持家基因的GAPDH产物的比率。实时PCR(qPCR)产生的ChIP数据表示为ng/mg总施加染色质。如通过研究H和E染色肾切片确定的，组织学损伤的严重性是通过来自5只阿曲生坦处理的(缺血前24小时和缺血后2周)小鼠以及来自5只非阿曲生坦处理的缺血后对照的2周缺血后肾脏的载玻片的不知情评分来评估的。这些评分是以观察到的1+至4+的半定量规模或最小至最大肾损伤(基于近端小管坏死的程度)评级的。连续变量结果是通过学生T检验比较的。该组织学数据是通过威尔科克森秩和检验判断的。显著性是通过<0.05的p值判断的。

实例1

在这个实例中，ET-1和ETA/ETB受体表达是在缺血性肾损伤后定量的，并且评价了ET-1基因染色质重建和RNA聚合酶II(PolII)结合。使10只小鼠经受中线剖腹术，并且使用防止损伤的微血管夹具将左肾蒂暴露并且闭塞x30min。均匀的缺血是通过发展总肾紫绀(指示低氧)确认的。用腹腔内温度计监测体温并用外部加热源维持在37℃。在该缺血期完成后，去除该血管夹具，并且通过肾紫绀的损失确认均匀的再灌注。然后使用3-0铬缝合线将腹部切口以两层缝合。然后允许小鼠从麻醉恢复。使十只另外的小鼠经受相同的手术程序，但不经受肾蒂阻塞，充当假性操作对照。

在手术后24小时或2周，使该单侧缺血后组(N＝5)或假性操作组(N＝5)中的半数小鼠再次麻醉并且将腹部切口打开。从下腔静脉获得一个血液样品并切除两个肾。将肾脏冰冻，并用剃须刀片获得肾皮质样品，并且针对总RNA(RNeasy；凯杰公司(Qiagen))和总蛋白对它们进行萃取。使用这些RNA样品，针对ET-1并且针对ETA和ETB受体测定mRNA。通过ELISA测定肾皮质萃取物和血浆中的ET-1蛋白浓度。

为了探索肾缺血-再灌注是否诱导在ET-1基因上的基因活化组蛋白修饰，从而潜在地增加ET-1转录(例如通过ET-1基因染色质重建和RNA聚合酶II(PolII)结合)，自以下肾制备肾皮质染色质萃取物：来自三个假性操作小鼠(手术后2周)的肾；三个缺血后2周肾；以及三个相应的对侧肾。使用染色质免疫沉淀测定(ChIP)，通过实时PCR评估在该ET-1基因的外显子1处的PolII结合的程度、组蛋白H3三甲基化(H3K4m3)、组蛋白H3乙酰化(H3K9/K14)、和PolII水平，如先前描述(27-30)。此外，还评估了在ET-1外显子1处的组蛋白H2A.Z变体交换的程度(内藤(Naito)M等人，内毒素介导的对RNA聚合酶II的募集以靶向急性肾衰竭中的基因(EndotoxinmediatesrecruitmentofRNApolymeraseIItotargetgenesinacuterenalfailure).美国肾病学杂志(JAmSocNephrol)，19：1321-1330，2008；内藤(Naito)M等人，在肾缺血中BRG1增加促炎基因的转录(BRG1increasestranscriptionofproinflammatorygenesinrenalischemia).美国肾病学杂志(JAmSocNephrol)20：1787-1796，2009；内藤(Naito)M等人，肾缺血诱导的胆固醇载荷：沿着HMGCoA还原酶基因的转录因子募集和染色质重建(Renalischemia-inducedcholesterolloading:transcriptionfactorrecruitmentandchromatinremodelingalongtheHMGCoAreductasegene).美国病理学杂志(AmJPathol.)174：54-62，2008；萨格尔(Zager)RA等人，进行性组蛋白改变和促炎基因活化：血红素蛋白/铁介导的近端肾小管损伤的结果(Progressivehistonealterationsandproinflammatorygeneactivation:consequencesofhemeprotein/iron-mediatedproximaltubuleinjury).美国生理学-肾生理学杂志(AmJPhysiolRenalPhysiol.)2010年3月；298(3)：F827-37.电子出版2009年12月23.)结果表示为每mg探测的染色质蛋白中在外显子1处PolII、H3K4m3、H3K9-14Ac和H2A.Z的量。用于qPCR的引物对呈现在表1中。

表1

如图1中所示的，在单侧缺血性损伤的24小时内，观察到ET-1mRNA的4倍增加，与来自假性操作对照的正常肾脏相比(p<0.01)。通过缺血后两周，观察到标记ET-1mRNA的进一步增加，达到比在24小时时间点观察到的那些高10倍的值。鉴于该对侧(非缺血性)肾脏保留正常ET-1mRNA水平，起因自缺血而不是手术胁迫，这些缺血后ET-1mRNA增加。

肾皮质ET-1mRNA上的显著增加与肾皮质ET-1蛋白水平的大约8倍增加相关(图2)。相比之下，在血浆或对侧肾ET-1水平上未观察到显著增加，而值保持接近于正常小鼠中或假性操作手术对照中看到的那些。这暗示了在缺血后两周的肾中升高的肾皮质ET-1蛋白水平是增加的肾ET-1产生的一个结果，而非从体循环中摄取。

关于在缺血性肾损伤后的ET-1基因处的RNA聚合酶II(PolII)结合和组蛋白修饰，组蛋白修饰的酶系统可以被活化并且诱导在促炎基因处的染色质重建。这些变化包括组蛋白H3三甲基化、乙酰化、和组蛋白H2A.Z交换。内藤(Naito)M等人，内毒素介导的对RNA聚合酶II的募集以靶向急性肾衰竭中的基因(EndotoxinmediatesrecruitmentofRNApolymeraseIItotargetgenesinacuterenalfailure).美国肾病学杂志(JAmSocNephrol)，19：1321-1330，2008；内藤(Naito)M等人，在肾缺血中BRG1增加促炎基因的转录(BRG1increasestranscriptionofproinflammatorygenesinrenalischemia).美国肾病学杂志(JAmSocNephrol)，20：1787-1796，2009；内藤(Naito)M等人，肾缺血诱导的胆固醇载荷：沿着HMGCoA还原酶基因的转录因子募集和染色质重建(Renalischemia-inducedcholesterolloading:transcriptionfactorrecruitmentandchromatinremodelingalongtheHMGCoAreductasegene).美国病理学杂志(AmJPathol.)174：54-62，2008；萨格尔(Zager)RA等人，进行性组蛋白改变和促炎基因活化：血红素蛋白/铁介导的近端肾小管损伤的结果(Progressivehistonealterationsandproinflammatorygeneactivation:consequencesofhemeprotein/iron-mediatedproximaltubuleinjury).美国生理学-肾生理学杂志(AmJPhysiolRenalPhysiol.)2010年3月；298(3)：F827-37.电子出版2009年12月23.)通过松开染色质结构，它们有助于RNA聚合酶II(PolII)募集至受影响基因，并且因此增强基因转录速率。

为了评估此类变化是否可以促成缺血后ET-1基因的进行性活化，ChIP测定被施加到缺血后两周的肾样品，并且观察到H3K4m3、H3K9/14乙酰化和H2A.Z水平的显著增加。PolII(驱动转录的酶)与该ET-1基因的结合的平行增加暗示了这些变化的功能显著性。虽然不能绝对假定在这些组蛋白变化和基因转录速率之间存在因果关系，已知它们是多个生物系统中的基因活化事件的事实无疑表明情况是这样。

如在图3中所示，在缺血后两周，肾皮质ET-1mRNA的增加与PolII结合到该ET-1基因的起始外显子上的大约5倍增加相关，指示基因转录上的显著增加。此外，三个评估的‘基因活化’组蛋白标记(H3K4m3；H3K9Ac，组蛋白变体H2A.Z)中每项的增加水平对应增加的PolII水平。因此，表明缺血诱导的急性肾损伤的这些ChIP数据导致在ET-1基因处的基因活化组蛋白修饰，这可能有助于通过增加PolII募集而增加基因转录。

在缺血后还评估了肾皮质ETA和ETB受体mRNA表达。如在图4中所示，缺血后24小时ETA受体mRNA中的3倍增加是明显的。通过缺血后2周，观察到在ETA受体mRNA上的另外8倍增加。因此，与基底值相比，ETA受体mRNA水平经该实验过程增加～25倍。鲜明对比的是，在缺血后24小时，没有观察到ETB受体mRNA的增加。通过缺血后两周，观察到显著ETB受体mRNA增加，但比较于该ETAmRNA值它在定量上是微不足道的(分别是25x对2x)。

实例2

这个实例研究了在缺血前和后时间段中阿曲生坦治疗是否赋予肾保护。如实例1所描述的，使十八只小鼠经受单侧缺血/再灌注(I/R)方案。九只小鼠接受高度有效且特异的ETA受体拮抗剂，阿曲生坦。阿曲生坦是在饮用水(25μg/mL；设计为等同～5mg/Kg/天的剂量)中给予的。阿曲生坦给药是在手术前一天起始，并且贯穿剩余实验继续。～2-3x/周提供新鲜阿曲生坦持续两周。剩余的九只小鼠仅接受自由的食物和水接近，充当对照。

在缺血后两周恢复期完成时，用戊巴比妥将这些小鼠再次麻醉，将腹部切口重新打开，自下腔静脉获得终末血液样品用于BUN和ET-1分析，并且然后将该左(缺血后)肾脏和右(对侧)肾脏去除并且称重。通过比较来自假性操作的小鼠、对照缺血后小鼠、以及已接受阿曲生坦治疗的缺血后小鼠的肾脏的重量评估肾质量的缺血后损失的程度。最后，自五只对照小鼠和五只阿曲生坦处理的小鼠取得缺血后肾脏的额切面，固定于10％缓冲的福尔马林中，并且用于随后的组织化学分析。

如图5的左图中所示，该单侧I/R损伤方案诱导肾质量(肾重量)上的大约45％减少，相比于提取自假性操作小鼠的肾脏的重量(p<0.0001)。假性手术并不独立地影响肾重量，相比于获得自正常小鼠的那些(未示出)。在肾缺血前开始并且贯穿该缺血后两周时间段继续的阿曲生坦给药赋予显著的保护，如通过以下事实判断的，即该缺血后肾重量不显著不同于正常肾。这个结果的图形描绘呈现在图6中：该单侧缺血/再灌注(I/R)肾(最左)在大小和体积上明显地减少，与正常肾(最右)相比。相比之下，该缺血前和后阿曲生坦处理的肾表现出接近的正常大小。因此，在肾缺血之前和之后给予阿曲生坦可以减少肾体积或质量的损失。

实例3

此实例研究阿曲生坦治疗(局限于缺血后时间段)是否赋予肾保护。本实验被设计用于帮助解决阿曲生坦何时诱导其保护性效应的问题。为此目的，重复在实例2中描述的相同方案，但在诱导缺血性损害之后的24小时着手给予阿曲生坦。在两周的末期，将这些小鼠再次麻醉并且将左和右肾称重。确定缺血后的肾重量减少的程度(上述实验的主要终点)。在单侧缺血性肾±阿曲生坦治疗(N＝4，每组)之间对比这些值，并且与在获得自正常小鼠的五个肾脏中获得的值比较。

如在图5的右图显示的，缺血而不用药物治疗引起肾重量的40％减少。缺血后阿曲生坦完全阻断肾质量的这种损失，由此重演治疗实验前+后所见的保护。这表明阿曲生坦在延迟的(>24小时)缺血期后时间段而不是直接的缺血/再灌注损伤阶段(即，缺血和24小时回流期间)介导其保护性作用。这表明在损伤后24小时或更多时间向患有缺血性肾损伤的受试者给予阿曲生坦在提供免受缺血和低氧的肾保护上是有益的。

实例4

此实例研究独立于缺血性损伤阿曲生坦对肾生长的潜在效应。为了确定独立于对肾缺血/缺血后损伤的作用，阿曲生坦治疗是否可能影响肾生长或大小，评估了来自实例2的对侧(非缺血)肾脏的肾重量并且相比于用和未用阿曲生坦处理的缺血肾脏。

如图7的左图所示的，对侧肾表现出肾大小上的大约25％增加，相比于正常肾。这与响应于缺血后肾功能下降的肾肥大一致，如先前所描述的。(萨格尔(Zager)RA等人，急性单侧缺血性肾损伤诱导进行性肾炎、脂质积累、组蛋白修饰、以及“终末期”肾疾病(Acuteunilateralischemicrenalinjuryinducesprogressiverenalinflammation,lipidaccumulation,histonemodification,and"end-stage"kidneydisease).美国生理学杂志(AmJPhysiol)301：F1334-1345，2011.)鉴于对侧肾重量在无药物对药物处理组中是基本上相同的，阿曲生坦对此肥大响应没有作用。

实例5

此实例在来自实例2的五个对照小鼠和五个阿曲生坦处理的小鼠的肾脏上检查肾组织学。更具体地说，为了证实阿曲生坦对进行中的缺血后损伤的保护作用，在缺血后两周经(组合的前和后)和未经阿曲生坦处理获得的肾脏中进行肾组织学检查。切割四微米切片并且用苏木精和伊红染色用于组织损伤的严重程度的总体评估。此外，通过针对KI-67的免疫组织化学染色评估肾小管细胞增殖，即所有活性细胞周期阶段的一种核蛋白标记物(G1、S、G2、有丝分裂；但不是Go)。(朔尔岑(Scholzen)T等人，Ki-67蛋白：来自已知和未知(TheKi-67protein:fromtheknownandtheunknown).细胞生理学杂志(JCellPhysiol.)182：311-322，2000.)在用ScanScopeAT(阿佩里奥(Aperio)，比斯塔(Vista)，CA)捕获的完整肾切片上确定KI-67细胞的百分比，并且然后用核算法光谱软件进行分析(版本11.1.1.764；阿佩里奥(Aperio))。

该单侧缺血方案引起显著的近端小管脱落、广泛间质性炎症、进行中的近端小管坏死和广泛小管内管型形成。贯穿肾皮质和外髓质条纹(outermedullarystripe)观察到这些变化。阿曲生坦引起这些变化中每个的显著减少。使用半定量评分(1+至4+；观察到的最小至最大损伤)对这些变化的严重性的不知情分级揭示在该阿曲生坦组中损伤评分的显著降低(3.4±0.3对1.7±0.4；p<0.01)。因此，该组织学与阿曲生坦处理的保留的肾质量/肾重量相关。

如在图7的右图中所示，KI-67免疫组织化学染色证明在所有缺血后两周的肾中肾小管细胞增殖上的显著增加，相比于正常肾(p<0.001)。右图描绘了正常肾(A)、缺血性肾之后两周(左)(B)、以及在缺血性肾之后2周阿曲生坦治疗前+后(C)的KI-67染色。这些缺血后肾表现出核KI-67染色上的显著增加，相比于在正常肾中所见到的。阿曲生坦看来没有改变这种增殖性响应，如KI-67核染色的频率表示的(％KI-67核阳性：正常肾，2.4％±0.6％；对照缺血，11.4％±0.8％；缺血+阿曲生坦，10.8％±1.2％)。

实例6

此实例研究阿曲生坦预处理是否针对急性缺血性损伤阶段提供保护。更具体地，该阿曲生坦可能减轻该急性损伤阶段，并且因此引起肾质量的随后保留的可能性是通过在存在或不存在阿曲生坦预处理的情况下诱导肾缺血24小时之前和24小时之后使小鼠经受22.5分钟或25分钟的双侧缺血性肾损伤来研究的。开展以下实验以进一步评估时帧，其中阿曲生坦诱导针对缺血性损伤的保护。将九只小鼠用阿曲生坦预处理24小时并且然后使它们经受22.5min(N＝6)或25min(N＝3)的双侧缺血性损伤。使相同数目的小鼠经受相同的双侧缺血方案而不进行阿曲生坦治疗。在缺血后时期继续阿曲生坦。在二十四小时后，再次麻醉小鼠，将腹部切口重新打开，自下腔静脉获得一个血液样品，并将肾脏切除。

损伤的严重性是在缺血后24小时通过BUN和血浆肌酸酐浓度评估。在任一缺血挑战下阿曲生坦未能减轻AKI的严重程度。如在图8中所示，在22.5min或25min缺血挑战的情况下没有观察到保护(其分别诱导中度和重度氮质血症)。作为肾损伤的第二标记物，也评估了肾皮质NGALmRNA水平。NGALmRNA的测量表示比在图8中测量的BUN和血浆肌酸酐更敏感的肾损伤生物标记物，并且被测量以研究阿曲生坦对缺血性损伤的诱导阶段的作用。如在图9中所示的，两个I/R方案诱导显著的NGALmRNA增加。25min对22.5min的缺血观察到明显更高的NGALmRNA水平，证实其充当肾损伤严重性的半定量标记的能力。然而，在两种情况下都没有出现阿曲生坦降低这些NGALmRNA的增加，进一步支持以下结论：i)阿曲生坦不能阻断该缺血性损伤阶段；以及ii)如在缺血后两周观察到的，在延迟的缺血/进行性肾损伤后阶段中其保护作用受到影响。

实例7

作为阿曲生坦是否阻断早期阶段的近端小管细胞损伤的另一个评估，将培养的来源于正常人肾的近端小管(HK-2)细胞在T24孔板中在角质化细胞无血清介质中进行孵育，如先前详述的。(盘田(Iwata)M等人，鞘氨醇：急性肾小管损伤和随后的细胞耐受的一种介体(Sphingosine:amediatorofacuterenaltubularinjuryandsubsequentcytoresistance).美国国家科学院院刊(ProcNatlAcadSci,USA)92：8970-8974，1995；盘田(Iwata)M等人，蛋白质合成抑制在培养的人近端小管(HK-2)细胞中诱导细胞耐受(Proteinsynthesisinhibitioninducescytoresistanceinculturedhumanproximaltubular(HK-2)cells).美国生理学杂志(AmJPhysiol)268：F1154-1163，1995.)在接种后大约18小时，这些孔被分成四组：(1)对照孵育；(2)用阿曲生坦单独孵育(5μg/mL；通过作为对细胞形态或生存力没有独立作用的最低阿曲生坦剂量的初步实验确定的(通过乳酸脱氢酶，LDH，释放来测定)；(3)ATP耗竭/钙超载损伤，用以下诱导：7.5μM抗霉素A+10μMCa离子载体A23187+20mM2-脱氧葡萄糖，(“CAD”)；和4)CAD+5μg阿曲生坦。在孵育十八个小时后，通过％LDH释放评估致死细胞损伤。

发现ATP耗竭(抗霉素/脱氧葡萄糖/Ca离子载体；“CAD”)向HK-2细胞的添加诱导适度的肾小管细胞死亡，将LDH释放从8.6％±0.1％的对照值升高到22.8％±0.2％。阿曲生坦不改变LDH释放，在基础条件(9.0％±0.1％)下或遵循ATP耗竭方案(23.2％±0.3％)。这又与如下体内数据一致，阿曲生坦不能阻断一个急性ATP耗竭损伤阶段。

实例8

此实例研究BQ-788对缺血后肾损伤的作用。使八只小鼠经受单侧缺血性损伤方案，而一半的小鼠接收ETB特异性受体拮抗剂BQ-788。该药剂是以3mmol/Kg的剂量每天皮下给予的，在手术前1天开始(选择的剂量恰超过ET-1/ETB结合亲和力的K1(100nM)。(库多罗瓦(Khodorova)A等人，选择性内皮素-B受体拮抗剂的局部注射以纳洛酮敏感的方式抑制内皮素-1-诱导的疼痛样行为和损伤感受器的激发(KhodorovaA,etal.,Localinjectionofaselectiveendothelin–Breceptorantagonistinhibitsendothelin-1-inducedpain-likebehaviorandexcitationofnociceptorsinanaloxone-sensitivemanner).神经科学杂志(JNeurosci)22：788-7796，2002；韦伯(Webber)KM等人，内皮素诱导多巴胺自大鼠纹状体经由内皮素-B受体释放(Endothelininducesdopaminereleasefromratstriatumviaendothelin-Breceptors).神经科学(Neuroscience).86：1173-1180，1998.)该对照单侧缺血小鼠接受相等体积的BQ-788运载体(0.1mL盐水注射)。缺血后两周，收获这些肾脏并且称重。通过比较来自假性操作的小鼠、对照缺血后小鼠、以及已接受阿曲生坦治疗的缺血后小鼠的肾脏的重量评估肾质量的缺血后损失的程度。

发现BQ-788未能减少肾损伤的损失，如在两周时间点评估的(对照缺血，0.23克；缺血+BQ-788，0.24克)。因此，这些发现指向ET-1对缺血后肾损伤的作用，如通过ETA受体介导的，尽管有以下暗示：该ETB受体在血管扩张诱导中起作用并且可能具有细胞保护作用。(川锅(Kawanabe)Y等人，内皮素(Endothelin).细胞分子生命科学(CellMolecLifeSci)68：195-203，2011；莫特(Motte)S等人，内皮素受体拮抗剂(Endothelinreceptorantagonists).药理学与治疗学(PharmacolTherapeutics)110：386-414，2006；米诺(Mino)N等人，在大鼠中选择性内皮素受体拮抗剂BQ-123在缺血急性肾衰竭中的保护作用(Protectiveeffectofaselectiveendothelinreceptorantagonist,BQ-123,inischemicacuterenalfailureinrats).欧洲药理学杂志(EurJPharmacol)221：77-83，1992.)如果由阿曲生坦表现的这些肾脏保护作用不归因于直接ETA受体拮抗，而是通过增加ET-1对未阻断的ETB受体的可用性，那么在缺血事件之后通过阻断声称的由ET-1/ETB受体相互作用介导的细胞保护作用并且通过使更多ET-1可用于结合ETA受体，ETB受体拮抗将被预期为加重肾损害。然而，当在缺血前和缺血后给予BQ-788时未观察到增加的肾损害，事实上，BQ-788对所测量的任何肾脏参数没有影响。

这表明该ETA受体的选择性拮抗作用超过ET-1抑制或作为用于治疗急性肾损伤的方法的非选择性ET受体拮抗是希望的，特别是缺血诱导的肾损伤和低氧诱导的肾损伤

本发明的前述说明提供了说明和描述，但不旨在将本发明穷举或限制到所披露的精确的一种情况。修饰和变化鉴于以上传授内容是可能的或可以从实践本发明中获得。因此，应注意本发明的范围由权利要求书和其等同者来限定。

Claims (20)

1.一种在受试者中治疗急性肾损伤的方法，所述方法包括向该受试者给予一种ETA受体拮抗剂。

2.如权利要求1所述的方法，其中该急性肾损伤是一种缺血诱导的肾损伤。

3.如权利要求1所述的方法，其中该急性肾损伤是一种低氧诱导的肾损伤。

4.如权利要求1所述的方法，其中该ETA受体拮抗剂是阿曲生坦或其一种药学上可接受的盐。

5.如权利要求1所述的方法，其中该ETA受体拮抗剂是在该急性肾损伤的发作或诊断之后给予的。

6.如权利要求5所述的方法，其中该ETA受体拮抗剂是在该急性肾损伤后至少24小时给予的。

7.如权利要求5所述的方法，其中该ETA受体拮抗剂是在该受试者发展为临床急性肾衰竭之后给予的。

8.一种在受试者中治疗缺血诱导的肾损伤或低氧诱导的肾损伤的方法，所述方法包括向该受试者给予一种ETA受体拮抗剂。

9.一种在具有缺血诱导的肾损伤或低氧诱导的肾损伤的受试者中延迟进展为慢性肾脏疾病的方法，所述方法包括向该受试者给予一种ETA受体拮抗剂。

10.一种在受试者中逆转缺血后或低氧后肾损害的方法，所述方法包括向该受试者给予一种ETA受体拮抗剂。

11.一种在具有缺血诱导的肾损伤或低氧诱导的肾损伤的受试者中减少肾质量损失或体积损失的方法，所述方法包括向该受试者给予一种ETA受体拮抗剂。

12.一种在受试者中减少急性肾损伤的指示物的方法，所述方法包括：

诊断该受试者为具有一种急性肾损伤；

进行一种急性肾损伤指示物的一个第一测量；

向该受试者给予一种ETA受体拮抗剂；并且

在已经对该受试者给予该ETA受体拮抗剂持续一段时间后，进行该急性肾损伤指示物的一个第二测量，

其中该第一测量和第二测量之间的差异是不显著的。

13.如权利要求12所述的方法，其中该急性肾损伤是缺血诱导的或低氧诱导的。

14.如权利要求12所述的方法，其中该急性肾损伤指示物是肾质量、肾体积、肾小球滤过率、血清肌酸酐、血尿素氮，或炎症标记物。

15.一种在受试者中诊断和治疗急性肾损伤的方法，所述方法包括：

测量缺血诱导的肾损伤或低氧诱导的肾损伤的指示物的水平；

确定该测量水平是否指示缺血诱导的肾损伤或低氧诱导的肾损伤；并且

向患有缺血诱导的肾损伤或低氧诱导的肾损伤的受试者给予一种ETA受体拮抗剂。

16.如权利要求15所述的方法，其中缺血诱导的肾损伤或低氧诱导的肾损伤的指示物是尿肾小管损伤残留物，在肾脏中表达的ET-1mRNA、ETA受体mRNA、NGALmRNA的水平，乳酸盐，或炎症标记物。

17.根据权利要求8-16中任一项所述的方法，其中该ETA受体拮抗剂是阿曲生坦或其一种药学上可接受的盐。

18.根据权利要求8-16中任一项所述的方法，其中该ETA受体拮抗剂是在该肾损伤后给予。

19.根据权利要求8-16中任一项所述的方法，其中该ETA受体拮抗剂是在该肾损伤后至少24小时给予。

20.根据权利要求8-16中任一项所述的方法，其中该ETA受体拮抗剂是在该受试者发展为临床急性肾衰竭之后给予的。