CN105324126A - Glp-1受体激动剂在用胰岛素治疗的和/或患有1型糖尿病的患者中的新用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及用于用胰岛素治疗和/或患有1型糖尿病的患者的低血糖或低血糖发作，例如用于减少低血糖或低血糖发作的数量的GLP-1受体激动剂。

Description

GLP-1受体激动剂在用胰岛素治疗的和/或患有1型糖尿病的患者中的新用途

发明领域

本发明涉及用于用胰岛素治疗的和/或患有1型糖尿病的患者的低血糖或低血糖发作，例如用于减少低血糖或低血糖发作的数量的GLP-1受体激动剂。

发明背景

夜间低血糖在大多数1型糖尿病病人引起复发性发病率，并且有时是致命的。其通常发生于胰岛素疗法，并且尽管血糖水平在睡眠期间通常偏低，但是它们很少常规测量。几乎所有重度低血糖发作的50％发生于夜间睡眠期间。这种发作可造成抽搐和昏迷，并已牵连成为导致猝死的心律失常的诱发因素。

低血糖可由单独的外源性或内源性胰岛素过量造成。然而，夜间低血糖一般地是胰岛素过量的结果，并且损害葡萄糖的反调节。胰岛素减少、胰高血糖素和/或肾上腺素增加通常防止或快速纠正低血糖。

在胰岛素缺乏型糖尿病，外源性胰岛素水平不随着葡萄糖水平下降而降低，并且胰高血糖素和肾上腺素反应不足的组合造成有缺陷的葡萄糖反调节。交感神经反应减少造成低血糖未觉察到。低血糖造成有缺陷的葡萄糖反调节和低血糖未觉察到两方面，导致复发性低血糖和进一步损害葡萄糖反调节的恶性循环。

调节胰岛素分泌的激素属于所谓的肠胰岛轴，指定为一组响应营养物质在肠道的存在和吸收自胃肠粘膜释放的激素，其促进胰岛素的早期和强化释放。增强对胰岛素分泌的影响(所谓的肠促胰岛素作用)，对正常葡萄糖耐量可能是必要的。

GLP-1(一种高血糖素原的产物)为促胰液素-VIP肽家族的最年轻成员之一，但是已经确定为重要的肠道激素，其具有葡萄糖代谢和胃肠分泌与代谢的调节功能。胰高血糖素基因在胰腺和肠处理不同。在胰腺，处理导致以下的形成和平行分泌：1)胰高血糖素本身，占据高血糖素原的33-61位；2)30个氨基酸的N-末端肽(高血糖素原(1-30))，通常称为肠高血糖素相关的胰肽(GRPP)；3)对应于高血糖素原(64-69)的六肽；4)以及，最后，所谓主要的高血糖素原片段(高血糖素原(72-158))，其中藏有两个胰高血糖素样序列。胰高血糖素似乎是唯一的生物活性产物。与此相反，在肠粘膜，是胰高血糖素藏在较大的分子中，而两个胰高血糖素样肽分别形成(8)。平行地形成和分泌以下产物：1)肠高血糖素，对应于高血糖素原(1-69)，具有占据33-61号残基的胰高血糖素序列；2)GLP-1(7-36)酰胺(高血糖素原(78-107))酰胺，不是原本认为的高血糖素原(72-107)酰胺或108，其为非活性的)，还形成小量的C-末端甘氨酸延伸但同样生物活性的GLP-1(7-37)、(高血糖素原(78-108))；3)插入肽-2(高血糖素原(111-122)酰胺)(15)；和4)GLP-2(高血糖素原(126-158))。一小部分肠高血糖素进一步裂解为GRPP(高血糖素原(1-30))和胃泌酸调节素(高血糖素原(33-69))。在这些肽中，GLP-1具有最显著的生物活性。

与肠高血糖素/肠高血糖素平行分泌，由此推断肠高血糖素分泌的许多研究在某种程度上也适用于GLP-1分泌，但是GLP-1更快速代谢，人的血浆半衰期为2分钟。碳水化合物或富含脂肪的膳食刺激分泌，大概是由于仍未吸收的营养物质与肠粘膜的开放式L细胞的微绒毛直接相互作用的结果。可能存在促进GLP-1分泌的内分泌或神经机制，但在人中尚未证实。

GLP-1(29-31)的肠促胰岛素功能已在GLP-1受体拮抗剂、毒蜥外泌肽9-39的实验中清晰说明，其显著降低大鼠通过口服葡萄糖引起的肠促胰岛素效应。激素经属于胰高血糖素/VIP/降钙素家族的G蛋白偶联的7次跨膜受体的GLP-1受体与β-细胞直接相互作用。在最近的实验中说明了GLP-1受体在调节胰岛素分泌方面的重要性，其中在小鼠实施了GLP-1受体基因的靶向破坏。用于中断的动物纯合子已大幅度恶化葡萄糖耐量和空腹高血糖症，并且甚至杂合动物(heterozygousanimals)是葡萄糖不耐受的。信号转导机制主要包括激活腺苷酸环化酶，但是细胞内Ca2+的升高也是必要的。激素的作用最好描述为增强葡萄糖刺激的胰岛素释放，但是不知葡萄糖与GLP-1刺激的偶联机制。它可能涉及钙诱导的钙释放。正如已经提及的那样，在糖尿病β-细胞中保持GLP-1的促胰岛素分泌作用。也不知后者与其向孤立的胰岛素分泌细胞传达“葡萄糖反应能力(glucosecompetence)”的能力(其对单独的葡萄糖或GLP-1反应不佳，但是对两者的组合反应充分)的关系。

然而，激素也有效地抑制胰高血糖素分泌。机制尚不清楚，但似乎是旁分泌，经邻近的胰岛素或生长抑素细胞。而且抑胰高血糖素作用是葡萄糖依赖的，使得抑制作用随着血糖下降而降低。因为这种双重效应，如果血浆GLP-1浓度通过增加分泌或通过外源性输注而增大，经门脉循环到达肝脏的血中胰岛素与胰高血糖素的摩尔比大大增加，借以减少肝葡萄糖产生。结果血糖浓度降低。由于促胰岛素分泌和抑胰高血糖素作用的葡萄糖依赖性，降糖作用是自限性的，并且因此激素不引起低血糖而不管剂量。在糖尿病患者保持这种作用，输注略超生理剂量的GLP-1可以完全恢复正常的血糖值，尽管代谢控制不佳和磺酰脲类药物继发性失效。

已知1型糖尿病(IDDM)患者的餐后高血糖素血症是高血糖症的促成因素和实现血糖控制的限制因素。提出了1型糖尿病的高血糖素血症是由于几乎完全缺乏自β-细胞分泌的内源性胰岛素造成，并因此损害餐后状态的胰高血糖素抑制作用。胰高血糖素分泌的抑制剂比如胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体激动剂因此可能能够减轻1型糖尿病的这种影响。

GLP-1的抑胰高血糖素作用关于低血糖的生理防御机制具有重要性。胰高血糖素为低血糖的重要反调节激素，但是在1型糖尿病胰高血糖素反应减弱或不存在，并且与糖尿病病程呈负相关。因此，患有1型糖尿病的受试者在低血糖事件期间依赖除胰高血糖素外的其它反调节激素，比如肾上腺素。然而，肾上腺素也已显示在长期存在的1型糖尿病减弱，导致严重低血糖的风险增加。此外，在低血糖期间也看到交感神经反应减少，导致低血糖的意识受损和行为防御机制(例如碳水化合物摄取)减少。

与患有最近发作糖尿病的受试者相比较，在患有长期存在的1型糖尿病的受试者损害低血糖发作后恢复到血糖正常水平(euglycaemiclevels)，可能与皮质醇和生长激素的反调节反应有关。对低血糖反应减弱的机制尚不清楚。如果用GLP-1受体激动剂治疗进一步损害这种反应，这可能妨碍GLP-1受体激动剂在患有1型糖尿病的受试者治疗1型糖尿病的安全使用，无论是单独还是作为胰岛素治疗的辅助。

因此，持续需要对1型糖尿病提供干预措施，特别是在减少与胰岛素疗法有关的低血糖发作方面。

概述

在备选或另外的实施方案中，本发明涉及一种用于在用胰岛素治疗的受试者减少以下的方法：i)所患的低血糖发作的数量；ii)所患的血糖波动的严重程度；iii)自低血糖发作恢复需要的外源性葡萄糖的量；和/或iv)低血糖发作的持续时间，所述方法包括给予所述受试者分别有效减少i)、ii)、iii)和/或iv)的量的GLP-1受体激动剂。

在备选或另外的实施方案中，本发明涉及一种用于在需要这种治疗的受试者治疗1型糖尿病的方法，所述方法包括给予所述受试者有效治疗1型糖尿病和减少以下的量的GLP-1受体激动剂：i)所述受试者患有的低血糖发作的数量；ii)所述受试者患有的血糖波动的严重程度；iii)所述受试者自低血糖发作恢复需要的外源性葡萄糖的量；iv)所述受试者低血糖发作的持续时间。

在备选或另外的实施方案中，本发明涉及一种在治疗1型糖尿病中应用的GLP-1受体激动剂，其中所述应用包括减少i)低血糖发作的数量；ii)血糖波动的严重程度；iii)自低血糖发作恢复需要的外源性葡萄糖的量；和/或iv)低血糖发作的持续时间。

附图简述

图1显示试验设计。

图2显示治疗期间的每日总胰岛素剂量。

图3显示低血糖的ADA分类。

图4显示治疗4周后的体重变化。

图5显示低血糖性夹钳(hypoglycaemicclamp)设计。

图6显示低血糖性夹钳期间的胰高血糖素浓度。

图7显示低血糖性夹钳期间其它反调节激素的浓度。

图8显示低血糖性夹钳期间的葡萄糖输注速率。

图9显示CGM期间低血糖发作(IG≤3.9mmol/L)的统计分析。

图10显示CGM期间低血糖发作(IG≤3.9mmol/L)持续时间的统计分析。

发明详述

本发明涉及在缺乏时，例如在用胰岛素治疗和/或患有1型糖尿病的患者中，通过给予GLP-1受体激动剂减少低血糖或低血糖发作的频率和/或症状。

在备选或另外的实施方案中，本发明涉及一种用于在用胰岛素治疗的受试者减少以下的方法：i)所患的低血糖或低血糖发作的数量；ii)所患的血糖波动的严重程度；iii)自低血糖恢复需要的外源性葡萄糖的量；和/或iv)低血糖或低血糖发作的持续时间，所述方法包括给予所述受试者分别有效减少i)、ii)、iii)和/或iv)的量的GLP-1受体激动剂。在备选或另外的实施方案中，本发明涉及一种用于在需要这种治疗的受试者治疗1型糖尿病的方法，所述方法包括给予所述受试者有效治疗1型糖尿病和减少以下的量的GLP-1受体激动剂：i)所述受试者患有的低血糖或低血糖发作的数量；ii)所述受试者患有的血糖波动的严重程度；iii)所述受试者自低血糖恢复需要的外源性葡萄糖的量；iv)所述受试者低血糖或低血糖发作的持续时间。

在备选或另外的实施方案中，本发明涉及一种在治疗1型糖尿病中应用的GLP-1受体激动剂，其中所述应用包括减少i)低血糖或低血糖发作的数量；ii)血糖波动的严重程度；iii)自低血糖恢复需要的外源性葡萄糖的量；和/或iv)低血糖或低血糖发作的持续时间。

在备选或另外的实施方案中，本发明涉及GLP-1激动剂在制备在患有1型糖尿病的患者用于以下的药物中的用途：i)减少低血糖发作的数量；ii)减少血糖波动的严重程度；iii)减少自低血糖发作恢复需要的外源性葡萄糖的量；iv)减少低血糖发作的持续时间；和/或v)治疗或预防低血糖或低血糖发作。

在本发明的第一个备选或另外的实施方案中提供一种在治疗或预防患有1型糖尿病的患者的低血糖或低血糖发作中应用的GLP-1受体激动剂。在本发明的第二个备选或另外的实施方案中提供GLP-1激动剂在制备用于在患有1型糖尿病的患者治疗或预防低血糖或低血糖发作的药物中的用途。在本发明的第三个备选或另外的实施方案中提供一种在患有1型糖尿病的患者治疗或预防低血糖或低血糖发作的方法，该方法包括给予需要治疗的个体有效量的GLP-1激动剂。除非另外指明，以下实施方案可为本发明的第一、第二和/或第三个备选或另外的实施方案的实施方案。类似地，本文描述的实施方案可以组合，除非另外指明。

在备选或另外的实施方案中，本文涉及的减少为用GLP-1受体激动剂治疗之前与给予GLP-1受体激动剂的受试者相比较。在备选或另外的实施方案中，本发明的治疗或预防包括除了本发明的GLP-1受体激动剂或其安慰剂外给予胰岛素。在备选或另外的实施方案中，本发明涉及治疗1型糖尿病，其中辅助胰岛素给予GLP-1受体激动剂。

在备选或另外的实施方案中，除非另外指明，本文使用的术语“安慰剂”(特别是当安慰剂属于GLP-1受体激动剂)指的是治疗或预防，相对于本发明的GLP-1受体激动剂包括安慰剂或者包括安慰剂或本发明的GLP-1受体激动剂，即治疗或预防采用与GLP-1受体激动剂的相同的组成并且不包含GLP-1受体激动剂本身。因此，本文使用的“安慰剂”可包括给予在给予GLP-1受体激动剂之前给予受试者的除GLP-1受体激动剂外的其它治疗活性成分。在备选或另外的实施方案中，术语“安慰剂组”和“未经用本发明的GLP-1受体激动剂治疗的安慰剂组或者本发明的GLP-1受体激动剂”(特别是当安慰剂属于GLP-1受体激动剂)指的是用本发明的GLP-1受体激动剂治疗之前给予GLP-1受体激动剂的受试者。

低血糖

术语“低血糖”、“低血糖发作”或“与胰岛素疗法有关的低血糖发作”可包括在糖尿病比如1型糖尿病的胰岛素疗法期间经历的低血糖或低血糖发作。在备选或另外的实施方案中，通过“与1型糖尿病的胰岛素疗法有关的低血糖或低血糖发作”，我们包括在1型糖尿病的胰岛素疗法期间经历的低血糖或低血糖发作。在备选或另外的实施方案中，我们包括由胰岛素疗法造成或加重的低血糖或低血糖发作(即其中与未接受胰岛素疗法的安慰剂组相比较低血糖或低血糖发作不存在、不太频繁或不太明显)。

通过“低血糖”，我们包括这是一种血浆葡萄糖水平低于3.9mmol/L的生理状态。血浆葡萄糖水平可按照本领域已知的任何合适的手段测量。然而，在备选或另外的实施方案中，血浆葡萄糖水平按照在Konig等人：用极性和酶法己糖激酶葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的尿中葡萄糖浓度的比较测定(Comparativedeterminationsofglucoseconcentrationsintheurinewithpolarityandenzymemethodhexokinaseglucose-6-phosphatedehydrogenase)，SchweizMedWochenschr101：860-866，1971中描述的方法测定，其通过引用结合到本文中。

通过“低血糖发作”，我们包括低血糖的物理状态存在一段时间，其从患者到患者不同，取决于其低血糖状态时应答/反应的能力，并提供干预/治疗。在未经治疗的患者，低血糖发作可存在几秒、几分钟或几小时。在备选或另外的实施方案中，低血糖发作存在多于5秒，比如多于10秒、多于20秒或多于30秒。在备选或另外的实施方案中，低血糖发作存在多于1分钟，比如多于5分钟、多于10分钟或多于30分钟。在备选或另外的实施方案中，低血糖发作存在多于1小时，比如多于1.5小时、多于2小时或多于3小时。

因此，在备选或另外的实施方案中，低血糖定义为血浆葡萄糖水平为3.9mmol/L(70mg/dL)或者更少。

在备选或另外的实施方案中，低血糖定义为血浆葡萄糖水平为3.9mmol/L或者更少以及一个或多个低血糖症状。本文使用的术语“低血糖症状”指的是选自思考困难、困惑、疲倦、昏昏欲睡、虚弱和/或衰弱、头晕和癫痫发作和/或昏迷的神经性低血糖症状(neuroglycopenicsymptoms)；和/或选自心跳加速、颤抖、出汗(发汗)、饥饿、刺痛和苍白(面色苍白)的神经源性症状(neuropenicsymptoms)。在备选或另外的实施方案中，低血糖症状为神经性低血糖症状。在备选或另外的实施方案中，低血糖症状为神经源性症状。

在备选或另外的实施方案中，低血糖是重度的(也称为有生命危险的)。在重度低血糖，受影响的受试者无法治疗他/她自己，并且需要来自另一个人的帮助，例如主动给予碳水化合物、胰高血糖素或采取其它纠正措施，以在所述受试者恢复血浆葡萄糖水平。血糖值可能在重度低血糖期间不可得到，但是在血浆葡萄糖恢复至正常后的神经恢复被认为是该事件是由低血浆葡萄糖浓度引起的足够证据。在备选或另外的实施方案中，重度低血糖可进一步定义为i)血浆血糖水平少于3.9mmol/L(70mg/dL)，比如少于2.2mmol/L(40mg/dL)或少于2.8mmol/L(50mg/dL)；ii)在摄入碳水化合物、胰高血糖素或其它纠正措施后受试者自重度低血糖恢复；或iii)受重度低血糖影响的受试者处于昏迷、患癫痫发作或者死亡。术语“受试者自重度低血糖恢复”可定义为受影响的受试者在所述受试者具有大于3.9mmol/L(70mg/dL)的血浆葡萄糖水平。或者，术语“受试者自重度低血糖恢复”可定义为受影响的受试者不再需要来自另一个人的帮助，以例如主动给予碳水化合物、胰高血糖素或采取其它纠正措施，以在所述受试者恢复血浆葡萄糖水平。

在备选或另外的实施方案中，低血糖为非重度的(也称为无生命危险的)。在非重度低血糖，受影响的人可他/她自己治疗低血糖，而不需要来自另一个人的帮助。

在备选或另外的实施方案中，非重度低血糖定义为血浆血糖水平在2.2-3.8mmol/L(40-69mg/dL)的范围内，本文也称为轻度至中度低血糖。

在备选或另外的实施方案中，非重度低血糖为无症状低血糖，其定义为血浆葡萄糖水平为3.9mmol/L(70mg/dL)或者更少并且没有低血糖症状。

在备选或另外的实施方案中，非重度低血糖为证明的症状性低血糖，其定义为血浆葡萄糖水平为3.9mmol/L(70mg/dL)或者更少和一种或多种低血糖症状。

在备选或另外的实施方案中，非重度低血糖为伪低血糖，其定义为血浆葡萄糖水平多于3.9mmol/L(70mg/dL)和一种或多种低血糖症状。在备选或另外的实施方案中，非重度低血糖为可能的症状性低血糖，其定义为没有测量血浆葡萄糖水平和一种或多种低血糖症状。

在备选或另外的实施方案中，术语“低血糖”、“低血糖发作”、“低血糖事件”和/或“低”本文可互换使用。

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂用于与低血糖有关的用途，比如胰岛素引起的低血糖、反应性低血糖、糖尿病低血糖、非糖尿病低血糖、空腹低血糖、药物引起的低血糖、胃旁路引起的低血糖、妊娠低血糖、酒精诱发的低血糖和/或胰岛瘤。

在备选或另外的实施方案中，低血糖或低血糖发作可选自：低血糖、总体低血糖发作、夜间低血糖发作和日间低血糖发作。

通过“总体低血糖发作”，我们包括经过一段时间，例如经过1天、一天一夜(即24小时)、7天、4周、42周或者更多经历的低血糖发作的数量。在备选或另外的实施方案中，总体低血糖发作为经过7天、4周或1年的时间段经历的低血糖发作的数量。术语“总体低血糖发作”包括日间低血糖发作和夜间低血糖发作。

通过“日间低血糖发作”，我们包括睡醒时经历的低血糖。具体地讲，我们包括在白天期间的低血糖经历。具体地讲，我们包括在非空腹清醒期间(即当患者已经禁食少于6小时，例如5、4.5、4、3.5、3、2.5、2、1.5、1、0.5或0小时)的低血糖经历。具体地讲，我们包括在空腹清醒期间(即当患者已经禁食多于6小时，例如5、4.5、4、3.5、3、2.5、2、1.5、1、0.5或0小时)的低血糖经历。

通过“夜间低血糖”，我们包括在睡眠期间经历的低血糖。具体地讲，我们包括在夜间睡眠期间的低血糖经历。具体地讲，我们包括在空腹睡眠期间(即当患者已经禁食6或更多小时，例如7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18小时或者更多)的低血糖经历。具体地讲，我们包括在非空腹睡眠期间(即当患者已经禁食少于6小时，例如5、4.5、4、3.5、3、2.5、2、1.5、1、0.5或0小时)的低血糖经历。

低血糖的数量

在备选或另外的实施方案中，本发明涉及GLP-1受体激动剂用于减少低血糖数量的用途。通过“减少低血糖的数量”，我们包括减少经过一段时间经历的低血糖数量。因此，在备选或另外的实施方案中，本发明涉及GLP-1受体激动剂与不经受用本发明的GLP-1受体激动剂治疗的安慰剂组或者本发明的GLP-1受体激动剂相比较，用于减少经过一段时间，例如经过1天(即24小时)、7天、4周、42周、1年或者更多经历的低血糖数量的用途。

在备选或另外的实施方案中，本发明涉及一种在治疗1型糖尿病中应用的GLP-1受体激动剂，其中所述应用包括减少低血糖或低血糖发作的数量。

在备选或另外的实施方案中，本发明涉及一种用于减少正用胰岛素治疗的受试者患有的低血糖或低血糖发作的数量的方法，所述方法包括给予所述受试者有效减少所述受试者患有的低血糖或低血糖发作的数量的量的GLP-1受体激动剂。

在备选或另外的实施方案中，本发明涉及一种用于在需要这种治疗的受试者治疗1型糖尿病的方法，所述方法包括给予所述受试者有效治疗1型糖尿病和减少所述受试者患有的低血糖或低血糖发作的数量的量的GLP-1受体激动剂。

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂能够减少低血糖的数量至少25％，例如30％、35％或40％。

在备选或另外的实施方案中，当所述GLP-1受体激动剂的剂量在0.5-2.0mg/天的范围内，比如0.6mg/天、1.2mg/天或1.8mg/天时，GLP-1受体激动剂能够减少低血糖的数量至少31％。在备选或另外的实施方案中，当所述GLP-1受体激动剂的剂量为0.6mg/天时，GLP-1受体激动剂能够减少低血糖的数量至少31％。在备选或另外的实施方案中，当所述GLP-1受体激动剂的剂量为1.2mg/天时，GLP-1受体激动剂能够减少低血糖的数量至少35％。在备选或另外的实施方案中，当所述GLP-1受体激动剂的剂量为1.8mg/天时，GLP-1受体激动剂能够减少低血糖的数量至少39％。

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂能够把低血糖的数量减少至每暴露的人天(perpersondaysofexposure)(PDE)1.2或更少，比如1.1或更少的事件。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂能够把低血糖的数量减少至每暴露的人天(PDE)1.0或更少，比如0.9或更少或者0.8或更少的事件。

在备选或另外的实施方案中，当所述GLP-1受体激动剂的剂量在0.5-2.0mg/天的范围内，比如0.6mg/天、1.2mg/天或1.8mg/天时，GLP-1受体激动剂能够把低血糖的数量减少至每暴露的人天(PDE)1.2或更少的事件。

在备选或另外的实施方案中，减少经过一段时间经历的低血糖数量为减少总体低血糖发作。

通过“减少经过一段时间经历的低血糖数量”，我们包括与不经受用本发明的GLP-1受体激动剂治疗的安慰剂组或者本发明的GLP-1受体激动剂相比较，减少经过一段时间，例如经过1天(即24小时)、7天、4周、42周、1年或者更多经历的低血糖数量。在备选或另外的实施方案中，本发明涉及GLP-1受体激动剂用于减少总体低血糖发作(即经过一段时间，例如经过4周、42周或1年的时间段经历的低血糖发作的数量)的用途。

通过“减少总体低血糖发作”，我们包括与不经受用本发明的GLP-1受体激动剂治疗的安慰剂组或者本发明的GLP-1受体激动剂相比较，减少经过一段时间，例如经过1天(即24小时)、7天、4周、42周、1年或者更多经历的低血糖发作的数量。

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂能够减少总体低血糖发作至少25％，例如30％、35％或40％。

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂能够减少低血糖或低血糖发作的数量至少31％。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂能够减少低血糖或低血糖发作的数量至少35％。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂能够减少低血糖或低血糖发作的数量至少39％。

在备选或另外的实施方案中，当所述GLP-1受体激动剂的剂量在0.5-2.0mg/天的范围内，比如0.6mg/天、1.2mg/天或1.8mg/天时，GLP-1受体激动剂能够减少总体低血糖发作至少31％。在备选或另外的实施方案中，当所述GLP-1受体激动剂的剂量为0.6mg/天时，GLP-1受体激动剂能够减少总体低血糖发作至少31％。在备选或另外的实施方案中，当所述GLP-1受体激动剂的剂量为1.2mg/天时，GLP-1受体激动剂能够减少总体低血糖发作至少35％。在备选或另外的实施方案中，当所述GLP-1受体激动剂的剂量为1.8mg/天时，GLP-1受体激动剂能够减少总体低血糖发作至少39％。

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂能够把总体低血糖发作减少至每暴露的人天(PDE)1.2或更少，比如1.1或更少的事件。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂能够把总体低血糖发作减少至每暴露的人天(PDE)1.0或更少，比如0.9或更少或者0.8或更少的事件。

在备选或另外的实施方案中，当所述GLP-1受体激动剂的剂量在0.5-2.0mg/天的范围内，比如0.6mg/天、1.2mg/天或1.8mg/天时，GLP-1受体激动剂能够把总体低血糖发作减少至每暴露的人天(PDE)1.2或更少事件。

血糖波动的严重程度

在备选或另外的实施方案中，本发明涉及减少血糖波动的严重程度。因此，在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂能够减少血糖波动的严重程度。通过“减少血糖波动的严重程度”，我们包括与不经受用本发明的GLP-1受体激动剂治疗的安慰剂组或者本发明的GLP-1受体激动剂相比较，在血糖波动期间把程度减少至血浆水平降至低于3.9mmol/L。

在备选或另外的实施方案中，本发明涉及一种在治疗1型糖尿病中应用的GLP-1受体激动剂，其中所述应用包括减少血糖波动的严重程度。

在备选或另外的实施方案中，本发明涉及一种用于减少正用胰岛素治疗的受试者患有的血糖波动的严重程度的方法，所述方法包括给予所述受试者有效减少所述受试者患有的血糖波动的严重程度的量的

GLP-1受体激动剂。

在备选或另外的实施方案中，本发明涉及一种用于在需要这种治疗的受试者治疗1型糖尿病的方法，所述方法包括给予所述受试者有效治疗1型糖尿病和减少所述受试者患有的血糖波动的严重程度的量的GLP-1受体激动剂。

在备选或另外的实施方案中，当以1.2mg每天一次的剂量给予时，GLP-1受体激动剂能够减少用于低血糖或低血糖发作后恢复需要的外源性葡萄糖的量至少19％。

在备选或另外的实施方案中，当以0.6mg每天一次的剂量给予时，GLP-1受体激动剂能够减少用于低血糖或低血糖发作后恢复需要的外源性葡萄糖的量至少23％。

在备选或另外的实施方案中，相对于不经受用本发明的GLP-1受体激动剂治疗的安慰剂组或者本发明的GLP-1受体激动剂，当以1.8mg每天一次的剂量给予时，GLP-1受体激动剂能够减少用于低血糖或低血糖发作后恢复需要的外源性葡萄糖的量至少约37％。

通过“减少血糖波动的严重程度”，我们包括与不经受用本发明的GLP-1受体激动剂治疗的安慰剂组或者本发明的GLP-1受体激动剂相比较，在血糖波动期间减少程度至血浆水平降至低于3.9mmol/L(即低血糖)和/或升至高于7.8mmol/L(即高血糖)。在备选或另外的实施方案中，血糖波动的严重程度减少至少5％。在备选或另外的实施方案中，血糖波动的严重程度减少至少10％。在备选或另外的实施方案中，血糖波动的严重程度减少至少15％。在备选或另外的实施方案中，血糖波动的严重程度减少至少20％。在备选或另外的实施方案中，血糖波动的严重程度减少至少25％。在备选或另外的实施方案中，血糖波动的严重程度减少至少30％。在备选或另外的实施方案中，血糖波动的严重程度减少至少40％。在备选或另外的实施方案中，血糖波动的严重程度减少至少50％。在备选或另外的实施方案中，血糖波动的严重程度减少至少60％。在备选或另外的实施方案中，血糖波动的严重程度减少至少70％。在备选或另外的实施方案中，血糖波动的严重程度减少至少80％。在备选或另外的实施方案中，血糖波动的严重程度减少至少90％。在备选或另外的实施方案中，血糖波动的严重程度减少至少95％。在备选或另外的实施方案中，血糖波动的严重程度减少至少97.5％。在备选或另外的实施方案中，血糖波动的严重程度减少至少99％。在备选或另外的实施方案中，血糖波动的严重程度减少至少100％。

外源性葡萄糖

在备选或另外的实施方案中，本发明涉及减少用于自低血糖恢复需要的外源性葡萄糖的量。

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂能够减少用于自低血糖发作恢复和/或减少血糖波动的严重程度需要的外源性葡萄糖的量。在备选或另外的实施方案中，本发明涉及一种在治疗1型糖尿病中应用的GLP-1受体激动剂，其中所述应用包括减少用于自低血糖或低血糖发作恢复需要的外源性葡萄糖的量。

在备选或另外的实施方案中，本发明涉及一种用于减少正用胰岛素治疗的受试者自低血糖或低血糖发作恢复需要的外源性葡萄糖的量的方法，所述方法包括给予所述受试者有效减少所述受试者自低血糖或低血糖发作恢复需要的外源性葡萄糖的量的量的GLP-1受体激动剂。在备选或另外的实施方案中，本发明涉及一种用于在需要这种治疗的受试者治疗1型糖尿病的方法，所述方法包括给予所述受试者有效治疗1型糖尿病和减少自所述受试者患有的低血糖或低血糖发作恢复需要的外源性葡萄糖的量的量的GLP-1受体激动剂。

通过“减少自低血糖恢复需要的外源性葡萄糖的量”，我们包括与不经受用本发明的GLP-1受体激动剂治疗的安慰剂组或者本发明的GLP-1受体激动剂相比较，减少把血浆葡萄糖自少于3.9mmol/L恢复至3.9mmol/L或者更大需要的外源性葡萄糖的单位。在备选或另外的实施方案中，自低血糖恢复需要的外源性葡萄糖的量减少至少5％，比如至少10％、至少15％或至少20％。在备选或另外的实施方案中，自低血糖恢复需要的外源性葡萄糖的量减少至少25％，比如至少30％、至少40％或至少50％。在备选或另外的实施方案中，自低血糖恢复需要的外源性葡萄糖的量减少至少60％，比如至少70％、至少80％或至少90％。在备选或另外的实施方案中，自低血糖恢复需要的外源性葡萄糖的量减少至少95％，比如至少97.5％、至少99％或100％。

通过“减少自低血糖发作恢复需要的外源性葡萄糖的量”，我们包括与不经受用本发明的GLP-1受体激动剂治疗的安慰剂组或者本发明的GLP-1受体激动剂相比较，减少把血浆葡萄糖自少于3.9mmol/L恢复至3.9mmol/L或者更大需要的外源性葡萄糖的单位。在备选或另外的实施方案中，自低血糖发作恢复需要的外源性葡萄糖的量减少至少5％。在备选或另外的实施方案中，自低血糖发作恢复需要的外源性葡萄糖的量减少至少10％。在备选或另外的实施方案中，自低血糖发作恢复需要的外源性葡萄糖的量减少至少15％。在备选或另外的实施方案中，自低血糖发作恢复需要的外源性葡萄糖的量减少至少20％。在备选或另外的实施方案中，自低血糖发作恢复需要的外源性葡萄糖的量减少至少25％。在备选或另外的实施方案中，自低血糖发作恢复需要的外源性葡萄糖的量减少至少30％。在备选或另外的实施方案中，自低血糖发作恢复需要的外源性葡萄糖的量减少至少40％。在备选或另外的实施方案中，自低血糖发作恢复需要的外源性葡萄糖的量减少至少50％。在备选或另外的实施方案中，自低血糖发作恢复需要的外源性葡萄糖的量减少至少60％。在备选或另外的实施方案中，自低血糖发作恢复需要的外源性葡萄糖的量减少至少70％。在备选或另外的实施方案中，自低血糖发作恢复需要的外源性葡萄糖的量减少至少80％。在备选或另外的实施方案中，自低血糖发作恢复需要的外源性葡萄糖的量减少至少90％。在备选或另外的实施方案中，自低血糖发作恢复需要的外源性葡萄糖的量减少至少95％。在备选或另外的实施方案中，自低血糖发作恢复需要的外源性葡萄糖的量减少至少97.5％。在备选或另外的实施方案中，自低血糖发作恢复需要的外源性葡萄糖的量减少至少99％。在备选或另外的实施方案中，自低血糖发作恢复需要的外源性葡萄糖的量减少至少100％。

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂以足以减少患者自低血糖或低血糖发作恢复的外源性葡萄糖需求的剂量给予。

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂以足以最大限度地减少患者自潜在低血糖或潜在低血糖发作恢复的外源性葡萄糖需求的剂量给予。

在备选或另外的实施方案中，所给予的GLP-1受体激动剂为利拉糖肽，并且足以最佳地在患者减少自潜在低血糖恢复的外源性葡萄糖需求的剂量为在0.6mg每天-1.8mg每天之间(例如在0.6mg-1.2mg每天之间)。

在备选或另外的实施方案中，所给予的GLP-1受体激动剂为利拉糖肽，并且足以最佳地在患者减少自潜在低血糖发作恢复的外源性葡萄糖需求的剂量为在0.6mg每天-1.8mg每天之间(例如在0.6mg-1.2mg每天之间)。

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂为利拉糖肽，并且足以最佳地在患者减少自潜在低血糖恢复的外源性葡萄糖需求的剂量选自0.6mg每天、1.2mg每天和1.8mg每天。

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂为利拉糖肽，并且足以最佳地在患者减少自潜在低血糖发作恢复的外源性葡萄糖需求的剂量选自0.6mg每天、1.2mg每天和1.8mg每天。

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂以0.6mg每天一次的剂量给予，以减少患者自低血糖或低血糖发作恢复的外源性葡萄糖需求。

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂以1.2mg每天一次的剂量给予，以减少患者自低血糖或低血糖发作恢复的外源性葡萄糖需求。

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂以1.8mg每天一次的剂量给予，以减少患者自低血糖或低血糖发作恢复的外源性葡萄糖需求。

在备选或另外的实施方案中，当以1.2mg每天一次的剂量给予时，GLP-1受体激动剂能够减少低血糖发作后恢复需要的外源性葡萄糖的量至少19％。在备选或另外的实施方案中，当以0.6mg每天一次的剂量给予时，GLP-1受体激动剂能够减少低血糖发作后恢复需要的外源性葡萄糖的量至少23％。在备选或另外的实施方案中，相对于安慰剂组，当以1.8mg每天一次的剂量给予时，GLP-1受体激动剂能够减少低血糖发作后恢复需要的外源性葡萄糖的量至少约37％。

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂以足以减少患者自低血糖发作恢复的外源性葡萄糖需求的剂量给予。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂以足以最大限度地在患者减少自潜在低血糖发作恢复的外源性葡萄糖需求的剂量给予。

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂以0.6mg每天一次的剂量给予，以减少患者自低血糖发作恢复的外源性葡萄糖需求。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂以1.2mg每天一次的剂量给予，以减少患者自低血糖发作恢复的外源性葡萄糖需求。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂以1.8mg每天一次的剂量给予，以减少患者自低血糖发作恢复的外源性葡萄糖需求。

低血糖发作的持续时间

在备选或另外的实施方案中，本发明涉及减少低血糖的持续时间。因此，在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂能够减少低血糖或低血糖发作的持续时间。通过“减少低血糖的持续时间”，我们包括与不经受用本发明的GLP-1受体激动剂治疗的安慰剂组或者本发明的GLP-1受体激动剂相比较，减少经过一段时间，例如经过24小时或者更多的时间段，比如7天、4周或者1年经历的低血糖的持续时间。通过“减少低血糖发作的持续时间”，我们包括与不经受用本发明的GLP-1受体激动剂治疗的安慰剂组或者本发明的GLP-1受体激动剂相比较，减少经过一段时间，例如经过24小时或者更多的时间段，比如7天、4周或者1年经历的低血糖发作的持续时间。

在备选或另外的实施方案中，本发明涉及一种在治疗1型糖尿病中应用的GLP-1受体激动剂，其中所述应用包括减少低血糖或低血糖发作的持续时间。

在备选或另外的实施方案中，本发明涉及一种用于在正用胰岛素治疗的受试者减少低血糖或低血糖发作的持续时间的方法，所述方法包括给予所述受试者有效减少所述受试者患有的低血糖或低血糖发作的持续时间的量的GLP-1受体激动剂。

在备选或另外的实施方案中，本发明涉及一种用于在需要这种治疗的受试者治疗1型糖尿病的方法，所述方法包括给予所述受试者有效治疗1型糖尿病和减少所述受试者患有的低血糖或低血糖发作的持续时间的量的GLP-1受体激动剂。

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂能够减少低血糖的持续时间至少5％，比如至少10％、至少15％或至少20％。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂能够减少低血糖的持续时间至少30％，比如至少40％、至少45％或至少50％。

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂能够减少低血糖的持续时间至少20％，其中所述GLP-1受体激动剂以至少1.0mg每天，比如1.0-3.0mg每天的剂量给予。

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂能够减少低血糖的持续时间至少0.1小时每24小时，比如至少0.2小时每24小时、至少0.3小时每24小时或至少0.4小时每24小时。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂能够减少低血糖的持续时间至少0.5小时每24小时，比如至少0.6小时每24小时、至少0.7小时每24小时或至少0.8小时每24小时。

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂能够减少低血糖的持续时间至少0.5小时每24小时，其中所述GLP-1受体激动剂以至少1.0mg每天，比如1.0-3.0mg每天的剂量给予。

血液或血浆葡萄糖测量

血液或血浆葡萄糖测量可采用本领域已知的任何合适的方法进行。然而，优选地，血液/血浆葡萄糖血液样品采用己糖激酶-UV方法测定。更优选地，血液/血浆葡萄糖采用用于患者自我监测血糖(SMBG)的柳叶刀与葡萄糖监测器实施。关于SMBG的更多信息参见Benjamin，2002，‘自我监测血糖(Self-MonitoringofBloodGlucose)：TheBasics’ClinicalDiabetes；20(1)：45-47，其通过引用结合到本文中。

优选地，所提供的样品为血液样品(优选地为毛细血管血液样品)，但是同样地，所提供的血液样品可为血浆样品。优选地，在每天测量的相同时间，或在所述时间的±5小时内进行空腹血液/血浆葡萄糖测量。在备选或另外的实施方案中，在所述时间的±4.5小时内进行空腹血液/血浆葡萄糖测量。在备选或另外的实施方案中，在所述时间的±4小时内进行空腹血液/血浆葡萄糖测量。在备选或另外的实施方案中，在所述时间的±3.5小时内进行空腹血液/血浆葡萄糖测量。在备选或另外的实施方案中，在所述时间的±3小时内进行空腹血液/血浆葡萄糖测量。在备选或另外的实施方案中，在所述时间的±2.5小时内进行空腹血液/血浆葡萄糖测量。在备选或另外的实施方案中，在所述时间的±2小时内进行空腹血液/血浆葡萄糖测量。在备选或另外的实施方案中，在所述时间的±1.5小时内进行空腹血液/血浆葡萄糖测量。在备选或另外的实施方案中，在所述时间的±1小时内进行空腹血液/血浆葡萄糖测量。在备选或另外的实施方案中，在所述时间的±45分钟内进行空腹血液/血浆葡萄糖测量。在备选或另外的实施方案中，在所述时间的±30分钟内进行空腹血液/血浆葡萄糖测量。在备选或另外的实施方案中，在所述时间的±15分钟内进行空腹血液/血浆葡萄糖测量。在备选或另外的实施方案中，在所述时间的±10分钟内进行空腹血液/血浆葡萄糖测量。在备选或另外的实施方案中，在所述时间的±5分钟内进行空腹血液/血浆葡萄糖测量。在备选或另外的实施方案中，在所述时间的±1分钟内或所述时间的±1分钟进行空腹血液/血浆葡萄糖测量。优选地，在吃完后至少8小时(最优选地吃完后至少9、10、11或12小时)进行空腹血液/葡萄糖测量。优选地，早餐前进行血液/血浆葡萄糖测量。

血液/葡萄糖测量可为空腹或非空腹血液/血浆葡萄糖测量。

两种主要方法已被用于测量葡萄糖。第一种(在一些地方仍在使用)是化学方法，该法利用葡萄糖在与指示剂物质(当还原时改变颜色)的反应中的非特异性还原性。因为其它血液化合物也有还原性(例如脲，其在尿毒症患者可能异常高)，这种技术在一些情况下可能产生错误的读数(已报道5-15mg/dL)。最近的技术(采用对葡萄糖特异性的酶)不易受这种错误的影响。两种最常采用的酶是葡萄糖氧化酶和己糖激酶。

在任一种情况中，化学系统通常包含在测试条上，其插入计量器中，并然后涂抹血液样品。测试条形状及其精确的化学组成在计量器系统之间变化，并且不能互换。以前，一些测试条通过相对于印在瓶标签上的比色图表进行视觉比较来读取(在定时和拭去血液样品后)。这种类型的测试条仍用于尿葡萄糖读数，但是对于血糖水平它们过时了。其错误率在任何情况下高得多。

然而获取的尿葡萄糖读数用处不大。在肾功能正常时，在尿中不出现葡萄糖，直到超过了肾脏葡萄糖阈值。这明显高于任何正常的葡萄糖水平，并且是存在重度高血糖病症的证据。然而，由于尿液储存于膀胱，可能已经自最后一次膀胱排空的任何时间产生其中的任何葡萄糖。因为代谢条件快速变化，作为一些因素中任何一种的结果，这是延迟的消息，并且未给出发展的病症的警告。对于临床和患者家庭监控两方面，血糖监测更为优选。健康的尿葡萄糖水平首先由HansRenschler标准化并发表于1965年。

治疗和/或预防低血糖

在备选或另外的实施方案中，本发明涉及一种在治疗或预防患有1型糖尿病的患者的低血糖或低血糖发作中应用的GLP-1受体激动剂。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂用于治疗与1型糖尿病的胰岛素疗法有关的低血糖或低血糖发作。

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂用于治疗与1型糖尿病的胰岛素疗法有关的低血糖或低血糖发作。

在患有1型糖尿病的患者治疗或预防低血糖或低血糖发作可包括治疗或预防一种或多种选自以下的症状或可由治疗或预防一种或多种选自以下的症状组成：低血糖、总体低血糖发作、夜间低血糖发作和日间低血糖发作。

在备选或另外的实施方案中，在患有1型糖尿病的患者治疗或预防低血糖或低血糖发作包括治疗或预防一种或多种选自以下的症状或由治疗或预防一种或多种选自以下的症状组成：低血糖、总体低血糖发作、夜间低血糖发作和日间低血糖发作。

优选地，重度低血糖(其可定义为血糖水平为40mg/dL(2.2mmol/L)或50mg/dL(2.8mmol/L))得到预防。优选地轻度至中度低血糖(其可定义为40-69mg/dL(2.2-3.8mmol/L))得到预防。

糖尿病

在备选或另外的实施方案中，1型糖尿病呈现完全或部分胰岛素缺乏。通过“呈现部分胰岛素缺乏”，我们包括个体产生至少一些残留的内源性胰岛素。这种残留的内源性胰岛素可由残留的β-细胞功能提供，其功能将随着时间推移进一步下降，导致在1型糖尿病患者的“完全胰岛素缺乏”。内源性胰岛素产生可通过测量血液c-肽来测定。可采用本领域已知的用于测量血液c-肽的任何合适的方法。然而，在备选或另外的实施方案中，血液c-肽按照在HideshiKuzuya，PetraMBlix，DavidLHorwitz，DonaldFSteinerandArthurHRubenstein，胰岛素治疗的糖尿病中的游离和总胰岛素及C-肽的测定(DeterminationofFreeandTotalInsulinandC-PeptideinInsulin-treatedDiabetics)，Diabetes，1977，26(1)：22-29中描述的方法测量，其通过引用结合到本文中。在BonserAMandGarcia-WebbP.，C-肽测量：方法和临床用途(C-peptidemeasurement：methodsandclinicalutility)，CritRevClinLabSci.，1984；19(4)：297-352中讨论了c-肽测量的各种方法及其相对优势，其也通过引用结合到本文中。

在备选或另外的实施方案中，1型糖尿病呈现绝对的或基本上绝对的胰岛素缺乏。通过“呈现绝对的或基本上绝对的胰岛素缺乏”，我们包括个体不产生内源性胰岛素、或产生≤内源性胰岛素的正常水平的1％(例如，如通过测量C-肽水平确定的那样)。如果≥300pmol/L和T1DM患者具有＜300mmol/L的水平则C-肽水平为正常。

通过“糖尿病”，我们包括呈现以下症状中的一种或多种：

i)HbA_1C≥6.5％。测试应采用NGSP认证并合乎DCCT试验标准的方法在实验室实施(在没有明确结果的情况下，结果应通过重复测试证实)；

ii)空腹血浆葡萄糖(FPG)≥126mg/dL(7.0mmol/L)。空腹定义为至少8小时没有热量摄取(在没有明确高血糖的情况下，结果应通过重复测试证实)；

iii)在口服葡萄糖耐量试验(OGTT)期间2-h血浆葡萄糖≥200mg/dL(11.1mmol/L)。测试应如由WHO描述的那样，采用溶于水中的含有相当于75g无水葡萄糖的葡萄糖负荷实施(在没有明确高血糖的情况下，结果应通过重复测试证实)；和

iv)在具有高血糖或高血糖危象的典型症状的患者，随机血浆葡萄糖≥200mg/dL(11.1mmol/L)(在没有明确高血糖的情况下，结果应通过重复测试证实)。

如果在个体可用两种不同的测试并且结果不一致，应重复其结果高于诊断分界点的测试，并且在确认测试的基础上作出诊断。就是说，如果患者满足A1C的糖尿病标准(两个结果≥6.5％)但是不满足FPG(＜126mg/dL或7.0mmol/L)，或者反之亦然，那么应认为该人患有糖尿病。

通过“1型糖尿病”，我们包括呈现以下中的一种或多种的糖尿病：胰岛细胞抗体(ICA，抗β细胞中的胞质蛋白)、谷氨酸脱羧酶抗体(GAD-65)、胰岛素自身抗体(IAA)、蛋白酪氨酸磷酸酶的IA-2A、糖尿病酮症酸中毒、缘于诊断的胰岛素治疗、家族史(1型糖尿病的血亲)以及1型糖尿病的血液C-肽测量指征。优选地，通过“1型糖尿病”，我们包括呈现以下中的一种或多种的糖尿病：糖尿病酮症酸中毒、缘于诊断的胰岛素治疗、家族史(1型糖尿病的血亲)以及1型糖尿病的血液C-肽测量指征。

通过“1型糖尿病的血液C-肽测量指征”，我们包括血液C-肽测量低于非糖尿病患者的正常范围。在备选或另外的实施方案中，通过“1型糖尿病的血液C-肽测量指征”，我们包括血液C-肽测量少于0.51纳克每毫升(ng/mL)(0.17纳摩尔每升(nmol/L))。血液C-肽测量可用技术人员已知的任何合适的手段进行。然而，在备选或另外的实施方案中，血液C-肽测量按照在HideshiKuzuya，PetraMBlix，DavidLHorwitz，DonaldFSteinerandArthurHRubenstein，胰岛素治疗的糖尿病中的游离和总胰岛素及C-肽的测定(DeterminationofFreeandTotalInsulinandC-PeptideinInsulin-treatedDiabetics)，Diabetes，1977，26(1)：22-29中描述的方法进行，其通过引用结合到本文中。在BonserAMandGarcia-WebbP.，C-肽测量：方法和临床用途(C-peptidemeasurement：methodsandclinicalutility)，CritRevClinLabSci.1984；19(4)：297-352中讨论了c-肽测量的各种方法及其相对优势，其也通过引用结合到本文中。

两种主要方法已被用于测量葡萄糖。第一种(在一些地方仍在使用)是化学方法，该法利用葡萄糖在与指示剂物质(当还原时改变颜色)的反应中的非特异性还原性。因为其它血液化合物也有还原性(例如脲，其在尿毒症患者可能异常高)，这种技术在一些情况下可能产生错误的读数(已报道5-15mg/dL)。最近的技术(采用对葡萄糖特异性的酶)不易受这种错误的影响。两种最常采用的酶是葡萄糖氧化酶和己糖激酶。

在任一种情况中，化学系统通常包含在测试条上，其插入计量器中，并然后涂抹血液样品。测试条形状及其精确的化学组成在计量器系统之间变化，并且不能互换。以前，一些测试条通过相对于印在瓶标签上的比色图表进行视觉比较来读取(在定时和拭去血液样品后)。这种类型的测试条仍用于尿葡萄糖读数，但是对于血糖水平它们过时了。其错误率在任何情况下高得多。

然而获取的尿葡萄糖读数用处不大。在肾功能正常时，在尿中不出现葡萄糖，直到超过了肾脏葡萄糖阈值。这显著高于任何正常的葡萄糖水平，并且是存在重度高血糖病症的证据。然而，由于尿液储存于膀胱，可能已经自最后一次膀胱排空的任何时间产生其中的任何葡萄糖。因为代谢条件快速变化，作为一些因素中任何一种的结果，这是延迟的消息，并且未给出发展的病症的警告。对于临床和患者家庭监控两方面，血糖监测更为优选。健康的尿葡萄糖水平首先由HansRenschler标准化并发表于1965年。

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂用于治疗或预防一种或多种另外的与1型糖尿病的胰岛素疗法有关的症状。通过“一种或多种另外的与1型糖尿病的胰岛素疗法有关的症状”，我们包括除低血糖或低血糖发作外，与未接受胰岛素疗法的安慰剂组相比较，在接受胰岛素疗法的1型糖尿病患者见到的任何不良反应。在备选或另外的实施方案中，一种或多种另外的与1型糖尿病的胰岛素疗法有关的症状选自：血糖控制降低、胰岛素缺乏和肥胖。通过“血糖控制降低”，我们包括与安慰剂组相比较HbA_1c水平更高。HbA_1c水平可通过本领域已知的任何合适的方法测量。然而，在备选或另外的实施方案中，HbA_1c采用Bio-Rad高效液相色谱法测量。通过“胰岛素缺乏”，我们包括患者保持目标血糖和/或HbA_1c水平需要的胰岛素的剂量/量。通过“肥胖”，我们意指与胰岛素疗法有关或由胰岛素疗法引起的身体脂肪堆积。

用本发明的衍生物治疗也可与影响葡萄糖水平和/或脂质稳态的手术比如胃囊带术或胃旁路术组合。

夜间低血糖

夜间低血糖在1型糖尿病患者常见并且可能是无症状的。在备选或另外的实施方案中，夜间低血糖在1型糖尿病患者常见并且通常是无症状的。夜间低血糖通常发生于胰岛素疗法，并且尽管血糖水平在睡眠期间通常偏低，但是它们很少常规测量。几乎所有重度低血糖发作的50％发生在夜间睡眠期间。这种发作可造成抽搐和昏迷，并与导致猝死的心律失常-“睡眠中死亡综合征”的诱发因素有关联。夜间低血糖似乎对认知功能没有直接的不利影响，然而第二天，情绪和幸福可能受到不利影响。反复暴露于夜间低血糖可能损害认知功能，其他重大长期发病率包括出现获得性低血糖综合征，比如通过未知的夜间低血糖反复发作的假定影响的低血糖意识受损(参见例如EndocrPract.2003Nov-Dec；9(6)：530-43，夜间低血糖：临床表现和对预防的治疗策略(Nocturnalhypoglycaemia：clinicalmanifestationsandtherapeuticstrategiestowardprevention).AllenKV，FrierBM)。

激素反调节的干扰可能是为什么许多1型糖尿病患者在夜间低血糖期间无症状的主要原因。尽管已知睡眠减弱对低血糖的反调节反应，但是一天的时间对激素反调节的影响仍不清楚(参见例如Metabolism，2004年7月；53(7)：894-8，健康人夜间和白天低血糖反调节之间的差异(Differencesbetweennighttimeanddaytimehypoglycaemiacounterregulationinhealthyhumans)，MerlV，KernW，PetersA，OltmannsKM，GaisS，BornJ，FehmHL，Schultes)。

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂能够减少总体夜间低血糖发作。

通过“减少总体夜间低血糖发作”，我们包括与不经受用本发明的GLP-1受体激动剂治疗的安慰剂组或者本发明的GLP-1受体激动剂相比较，减少经过一段时间，例如经过1天、一夜、一天一夜(即24小时)、7天、4周、42周或者更多经历的夜间低血糖发作的数量。

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂能够减少总体夜间低血糖发作至少25％，例如30％、35％或40％。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂能够减少总体夜间低血糖发作至少31％。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂能够减少总体夜间低血糖发作至少35％。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂能够减少总体夜间低血糖发作至少39％。在备选或另外的实施方案中，当GLP-1受体激动剂的所述剂量为0.6mg/天时，GLP-1受体激动剂能够减少总体夜间低血糖发作至少31％。在备选或另外的实施方案中，当GLP-1受体激动剂的所述剂量为1.2mg/天时，GLP-1受体激动剂能够减少总体夜间低血糖发作至少35％。在备选或另外的实施方案中，当GLP-1受体激动剂的所述剂量为1.8mg/天时，GLP-1受体激动剂能够减少总体夜间低血糖发作至少39％。

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂能够减少夜间低血糖发作的持续时间。通过“减少夜间低血糖发作的持续时间”，我们包括与不经受用本发明的GLP-1受体激动剂治疗的安慰剂组或者本发明的GLP-1受体激动剂相比较，减少所经历的夜间低血糖发作的持续时间。

GLP-1受体激动剂

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂与GLP-1(7-37)相比较包含不多于5个，比如不多于4个或不多于3个已被替换、插入或缺失的氨基酸残基。GLP-1受体激动剂可为GLP-1片段、衍生物或类似物。GLP-1受体激动剂可适合于每天一次给予。GLP-1受体激动剂可适合于每周一次给予。GLP-1受体激动剂可选自：GLP-1(7-37)、GLP-1(7-36)酰胺、艾塞那肽、艾塞那肽LAR、利拉糖肽、索马鲁肽、他司鲁肽、阿必鲁肽、利司那肽和杜拉鲁肽。GLP-1受体激动剂可为利拉糖肽或索马鲁肽。GLP-1受体激动剂可为利拉糖肽。GLP-1受体激动剂可为索马鲁肽。GLP-1受体激动剂可为长效GLP-1衍生物或类似物。长效GLP-1衍生物或类似物可选自：利拉糖肽、索马鲁肽、他司鲁肽、阿必鲁肽、他司鲁肽、杜拉鲁肽和艾塞那肽LAR。长效GLP-1衍生物或类似物可为利拉糖肽。长效GLP-1衍生物或类似物可为索马鲁肽。

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂适合于每天一次给予。通过“适合于每天一次给予”，我们包括GLP-1受体激动剂适合于通过每24小时一次或每约24小时一次给予治疗糖尿病(1型糖尿病和/或2型糖尿病)。通过“适合于每约24小时一次给予”，我们包括GLP-1受体激动剂适合于通过每24小时±6小时或者更少一次给予治疗糖尿病(1型糖尿病和/或2型糖尿病)。因此，GLP-1受体激动剂可适合于每24小时±5小时或者更少给予。因此，GLP-1受体激动剂可适合于每24小时±4小时或者更少给予。因此，GLP-1受体激动剂可适合于每24小时±3小时或者更少给予。因此，GLP-1受体激动剂可适合于每24小时±2小时或者更少给予。因此，GLP-1受体激动剂可适合于每24小时±1小时或者更少给予。因此，GLP-1受体激动剂可适合于每或24小时±30分钟或者更少给予。在备选或另外的实施方案中，本发明的GLP-1受体激动剂在糖尿病(1型糖尿病和/或2型糖尿病)的治疗中具有适合于每天一次给予的作用时间。然而，在备选或另外的实施方案中，通过“GLP-1受体激动剂在糖尿病的治疗中具有适合于每天一次给予的作用时间”，我们包括GLP-1受体激动剂具有30分钟-10小时之间的血浆半衰期(T_1/2)。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂具有1小时-8小时之间的血浆半衰期(T_1/2)。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂具有2小时-6小时之间的血浆半衰期(T_1/2)。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂具有2小时-4小时之间的血浆半衰期(T_1/2)。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂具有2小时-3小时之间的血浆半衰期(T_1/2)。或者，在备选或另外的实施方案中，通过“GLP-1受体激动剂在糖尿病的治疗中具有适合于每天一次给予的作用时间”，我们包括GLP-1受体激动剂在人具有30分钟-20小时之间的血浆半衰期(T_1/2)。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂在人具有8小时-18小时之间，比如9小时-16小时之间或10小时-15小时之间的血浆半衰期(T_1/2)。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂在人具有1小时-8小时之间，比如2小时-6小时之间或2小时-4小时之间的血浆半衰期(T_1/2)。在备选或另外的实施方案中，本发明的GLP-1受体激动剂选自艾塞那肽和利司那肽。

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂适合于每周一次给予。通过“适合于每周一次给予”，我们包括GLP-1受体激动剂适合于通过每168小时一次或每约168小时一次给予治疗糖尿病(1型糖尿病和/或2型糖尿病)。通过“适合于每约168小时一次给予”，我们包括GLP-1受体激动剂适合于通过每168小时±48小时或者更少一次给予治疗糖尿病(1型糖尿病和/或2型糖尿病)。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂适合于通过每168小时±36小时或者更少一次给予治疗糖尿病(1型糖尿病和/或2型糖尿病)。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂适合于通过每168小时±24小时或者更少一次给予治疗糖尿病(1型糖尿病和/或2型糖尿病)。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂适合于通过每168小时±18小时或者更少一次给予治疗糖尿病(1型糖尿病和/或2型糖尿病)。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂适合于通过每168小时±15小时或者更少一次给予治疗糖尿病(1型糖尿病和/或2型糖尿病)。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂适合于通过每168小时±9小时或者更少一次给予治疗糖尿病(1型糖尿病和/或2型糖尿病)。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂适合于通过每168小时±6小时或者更少一次给予治疗糖尿病(1型糖尿病和/或2型糖尿病)。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂适合于通过每168小时±3小时或者更少一次给予治疗糖尿病(1型糖尿病和/或2型糖尿病)。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂适合于通过每168小时±1小时或者更少一次给予治疗糖尿病(1型糖尿病和/或2型糖尿病)。在备选或另外的实施方案中，本发明的GLP-1受体激动剂在糖尿病(1型糖尿病和/或2型糖尿病)的治疗中具有适合于每周一次给予的作用时间。在备选或另外的实施方案中，通过“GLP-1受体激动剂在糖尿病的治疗中具有适合于每周一次给予的作用时间”，我们包括GLP-1受体激动剂具有2天-15天之间的血浆半衰期(T_1/2)。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂具有3天-12天之间的血浆半衰期(T_1/2)。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂具有4天-9天之间的血浆半衰期(T_1/2)。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂具有4天-7天之间的血浆半衰期(T_1/2)。在备选或另外的实施方案中，本发明的GLP-1受体激动剂选自杜拉鲁肽、阿必鲁肽、艾塞那肽LAR和他司鲁肽。

在备选或另外的实施方案中，测定GLP-1受体激动剂在人的血浆半衰期。血浆半衰期可通过本领域已知的的任何合适的手段测定。然而，在备选或另外的实施方案中，采用在DeaconCF，NauckMA，MeierJ，HuckingK，HolstJJ：内源性和外源性抑胃肽在健康和2型糖尿病受试者的降解，如采用新的完整肽测定显示的那样(Degradationofendogenousandexogenousgastricinhibitorypolypeptideinhealthyandintype2diabeticsubjectsasrevealedusinganewassayfortheintactpeptide)，JClinEndocrinolMetab85：3575-3581，2000中描述的方法测定循环半衰期，其通过引用结合到本文中。在备选的实施方案中，半衰期通过在本发明实施例部分(实施例C)中描述的药效学或药代动力学试验测定。术语“半衰期”、“血浆半衰期”、“终末半衰期”、终末血浆半衰期”、“t_1/2”和“T_1/2”本文可互换使用。

作用时间为几个参数的函数，参数包括血浆半衰期、在血浆和目标腔室之间平衡的时间以及药物自其生物靶标的解离速率。

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂为GLP-1片段、衍生物或类似物，例如GLP-1类似物或GLP-1衍生物。

本文使用的术语“GLP-1肽”指的是人胰高血糖素样肽-1(GLP-1(7-37))(其序列包括在SEQIDNO：1的序列表中)或其类似物。具有SEQIDNO：1序列的肽也可指定为人GLP-1或“天然”GLP-1，或者“天然”GLP-1(7-37)。

在备选或另外的实施方案中，本文使用的术语“GLP-1类似物”或“GLP-1的类似物”可指肽或者化合物，其为GLP-1(7-37)(SEQIDNO：1)：HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG[SEQIDNO：1]的变体。在备选或另外的实施方案中，当连同GLP-1使用时，比如GLP-1(7-37)，术语“变体”指的是与人GLP-1(7-37)(SEQIDNO：1)相比较包含一个或多个氨基酸残基变化比如替换、添加或缺失的肽。在序列表中，SEQIDNO：1的第一个氨基酸残基(组氨酸)指定为1号。然而，如本文和下文中使用的那样-根据本领域的惯例-该组氨酸残基称为7号，并且随后的氨基酸残基相应编号，以37号甘氨酸结尾。因此，通常，本文对于GLP-1(7-37)序列的氨基酸残基编号或位置编号的任何提及为在7位His起始和37位Gly结尾的序列。GLP-1受体激动剂，比如本发明的衍生物的GLP-1类似物，可通过提及以下进行描述：i)天然GLP-1(7-37)的氨基酸残基的编号，其对应于变化的氨基酸残基(即天然GLP-1的相应位置)，和ii)实际变化。换句话说，GLP-1类似物可为GLP-1(7-37)肽，其中当与天然GLP-1(7-37)(SEQIDNO：1)比较时氨基酸残基的编号已经变化。这些变化可独立地代表一个或多个氨基酸替换、添加和/或缺失。类似地，在备选或另外的实施方案中，并且除非另外指明，本文使用的术语“类似物”指人GLP-1(7-37)，其中当与天然GLP-1(7-37)(SEQIDNO：1)比较时一个或多个氨基酸残基已经变化(即替换、添加和/或缺失)；t.这些变化可独立地代表一个或多个氨基酸。

以下为GLP-1受体激动剂的合适命名的非限制性实例，比如类似物命名。

GLP-1受体激动剂，比如类似物，“包含”某些特定的变化，当与SEQIDNO：1比较时，可包括进一步的变化。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂，比如类似物，“具有”特定的变化。

如自以上实例显而易见的那样，氨基酸残基可通过其全称、其单字母代码和/或其三字母代码鉴别。这三种方法是完全等价的。

表达“相当于...的位置”或“相应的位置”可用于通过涉及天然GLP-1(7-37)(SEQIDNO：1)表征变体GLP-1(7-37)序列的变化位点。变化的相当或相应位置以及编号，例如通过简单的手写和目测易于推导，和/或可采用基于Needleman-Wunsch算法的标准蛋白或肽比对程序，比如“比对”。这种算法描述于Needleman，S.B.andWunsch，C.D.，(1970)，JournalofMolecularBiology，48：443-453，以及MyersandW.Miller在“线性空间中的最佳比对(OptimalAlignmentsinLinearSpace)”CABIOS(计算机在生物科学中的应用(computerapplicationsinthebiosciences))(1988)4：11-17中的比对程序中。为了比对，可采用默认的评分矩阵BLOSUM62和默认的单位矩阵，并且对第一个残基的空位罚分可设定在-12，或者优选地设定在-10，和对另一个残基的空位罚分设定在-2，或者优选地设定在-0.5。

在非天然氨基酸的情况下，比如序列中包括的Imp和/或Aib，对于比对的目的，这些可用例如X替换。如果需要，X可后来手动校正。

如例如在GLP-1受体激动剂的情况下使用的那样，术语“肽”，比如本发明衍生物的GLP-1类似物，指的是包含一系列通过酰胺(或肽)键相互连接的氨基酸的化合物。本发明的肽包含至少5个通过肽键连接的组成氨基酸。在备选或另外的实施方案中，肽包含至少10个，优选地至少15个，更优选地至少20个，甚至更优选地至少25个，或者最优选地至少28个氨基酸。在备选或另外的实施方案中，肽包含至少5个组成氨基酸，优选地包含至少10个、至少15个、至少20个、至少25个，或者最优选地包含至少28个氨基酸。在备选或另外的实施方案中，肽a)包含或b)由i)29、ii)30、iii)31或iv)32个氨基酸组成。在备选或另外的实施方案中，肽由通过肽键相互连接的氨基酸组成。

氨基酸为含有胺基和羧酸基及任选地一个或多个另外的通常称为侧链的基团的分子。术语“氨基酸”包括生蛋白的(或天然)氨基酸(那些氨基酸当中有20种标准氨基酸)、以及非生蛋白的(或非天然)氨基酸。蛋白氨基酸为天然结合成为蛋白质的那些。标准氨基酸为由遗传密码编码的那些。非蛋白氨基酸或者在蛋白中不存在，或者不是通过标准的细胞机器产生(例如它们可能受到翻译后修饰)。非蛋白氨基酸的非限制性实例为Aib(α-氨基异丁酸)、脱-氨基组氨酸(或者名为咪唑并丙酸，缩写Imp)以及蛋白氨基酸的D-异构体。

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂与GLP-1(7-37)相比较包含不多于5个，比如不多于4个或不多于3个已被取代、插入或缺失的氨基酸残基。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂包含不多于4个没有由遗传密码编码的氨基酸残基。

如本文和下文中使用的那样，GLP-1受体激动剂或GLP-1肽的所有氨基酸(没有指明光学异构体)应理解为意指L-异构体(除非另外指明)。GLP-1受体激动剂，比如本发明的GLP-1衍生物和类似物，具有GLP-1活性。该术语指结合于GLP-1受体并启动信号转导途径，导致促胰岛素分泌(insulinotropic)作用或如本领域已知的其它生理作用的能力。例如，GLP-1受体激动剂，比如本发明的类似物和衍生物，可采用在本文的实施例部分描述的试验测试GLP-1活性。

如本文在GLP-1受体激动剂，比如GLP-1肽或类似物的情况下使用的术语“衍生物”，意指化学修饰的GLP-1受体激动剂或GLP-1肽，其中一个或多个取代基共价连接于肽。取代基也可称为侧链。

在备选或另外的实施方案中，侧链能够与白蛋白形成非共价聚集体，从而促进GLP-1受体激动剂(例如衍生物)随血流的循环，并且由于GLP-1受体激动剂(例如GLP-1衍生物)与白蛋白的聚集体仅缓慢分解以释放活性药用成分，还具有延长GLP-1受体激动剂(例如衍生物)的作用时间的效果。因此，取代基、或侧链，总的来说，优选地称为白蛋白结合部分。

在备选或另外的实施方案中，侧链具有至少10个碳原子，或者至少15、20、25、30、35或至少40个碳原子。在备选或另外的实施方案中，侧链可进一步包括至少5个杂原子，特别是O和N，例如至少7、9、10、12、15、17或至少20个杂原子，比如至少1、2或3个N-原子，和/或至少3、6、9、12或15个O-原子。

在备选或另外的实施方案中，白蛋白结合部分包含对白蛋白结合并且从而对延长特别相关的部分，该部分可因此被称为延长部分。相对于其与肽的连接点，延长部分可接近，优选地在白蛋白结合部分的末(或远或自由)端。

在备选或另外的实施方案中，白蛋白结合部分包含延长部分和与肽的连接点之间的部分，该部分可称为接头、接头部分、间隔基等。接头可为任选的，并因此在这种情况下白蛋白结合部分可与延长部分相同。

在备选或另外的实施方案中，白蛋白结合部分和/或延长部分在生理pH(7.4)下为亲脂性的和/或荷负电的。

白蛋白结合部分、延长部分或接头可通过酰化，即经在其羧酸基(白蛋白结合部分、延长部分或接头的)和赖氨酸残基的氨基之间形成的酰胺键，共价连接于GLP-1受体激动剂或GLP-1肽的赖氨酸残基。另外或备选的缀合化学包括烷基化、酯形成、或酰胺形成、或偶联于半胱氨酸残基，比如通过马来酰亚胺或卤乙酰胺(比如溴-/氟-/碘-)偶联。

在备选或另外的实施方案中，白蛋白结合部分的活性酯(优选地包含延长部分和接头)在酰胺键形成下共价连接于赖氨酸残基的氨基，优选地为其ε-氨基，如以上解释的那样。

除非另外指明，当提及赖氨酸残基的酰化时，应理解为其ε-氨基。

术语“脂肪酸”指的是具有4-28个碳原子的脂肪族一元羧酸，其优选地为非支链的，并且其可为饱和或未饱和的。

术语“脂肪二酸”指的是如以上定义的，但是在ω位具有另外的羧酸基的脂肪酸。因此，脂肪二酸为二羧酸。

在备选或另外的实施方案中，本发明的GLP-1受体激动剂(例如衍生物)的两个接头中的每一个可包含以下第一连接元件：

化学式5：

其中k为1-5范围内的整数，和n为1-5范围内的整数。

在备选或另外的实施方案中，当k＝1和n＝1时，该连接元件可特指OEG、或8-氨基-3，6-二氧杂辛酸的二基，和/或其可由下式表示：

化学式5a：

*-NH-(CH₂)₂-O-(CH₂)₂-O-CH₂-CO-*。

在备选或另外的实施方案中，本发明的GLP-1受体激动剂(例如衍生物)的每个接头可独立地进一步包含第二连接元件，优选地为Glu二基，比如化学式6：

化学式6：

其中Glu二基可包括p次，其中p为1-3范围内的整数。化学式6也可称为γ-Glu，或者简称gGlu，由于其为氨基酸谷氨酸的γ羧基，在此用于连接于另一个连接元件，或连接于赖氨酸的ε-氨基。如以上解释的那样，其它连接元件可例如为另一个Glu残基、或者OEG分子。Glu的氨基转而与延长部分的羧基、或者与例如OEG分子(如果存在)的羧基、或者与例如另一个Glu(如果存在)的γ羧基形成酰胺键。如以上解释的那样，在备选或另外的实施方案中，本发明的GLP-1受体激动剂(例如GLP-1衍生物)被双酰化，即两个白蛋白结合部分共价连接于GLP-1受体激动剂，例如GLP-1肽。在备选或另外的实施方案中，两个白蛋白结合部分(即整个侧链)相似，优选地基本上相同，或者最优选地相同。在备选或另外的实施方案中，两个延长部分相似，优选地基本上相同，或者最优选地相同。在备选或另外的实施方案中，两个接头相似，优选地基本上相同，或者最优选地相同。术语“基本上相同”包括由于以下原因与相同的区别：形成一种或多种盐、酯和/或酰胺；优选地形成一种或多种盐、甲酯和简单的酰胺；更优选地形成不多于两种盐、甲酯和/或简单的酰胺；甚至更优选地形成不多于一种盐、甲酯和/或简单的酰胺；或者最优选地形成不多于一种盐。

在化合物比如白蛋白结合部分、延长部分和接头的情况下，相似和/或相同可采用本领域已知的任何合适的计算机程序和/或算法确定。例如，两个延长部分、两个接头和/或两个整个侧链的相似性可适当地采用分子指纹确定。指纹为一种代表化学结构的数学方法(参见例如化学信息学：一本教科书(Chemoinformatics：Atextbook)，JohannGasteigerandThomasEngel(编辑)，Wiley-VCHVerlag，2003)。合适指纹的实例包括但不限于UNITY指纹、MDL指纹和/或ECFP指纹，比如ECFP_6指纹(ECFP代表扩展连接指纹)。

在备选或另外的实施方案中，两个延长部分、两个接头和/或两个整个侧链表示为a)ECFP_6指纹；b)UNITY指纹；和/或c)MDL指纹。谷本系数(Tanimotocoefficient)优选地用于计算两个指纹的相似性，无论采用a)、b)还是c)。

在备选或另外的实施方案中，无论采用a)、b)还是c)，两个延长部分、两个接头和/或两个整个侧链分别具有至少0.5(50％)；优选地至少0.6(60％)；更优选地至少0.7(70％)，或者至少0.8(80％)；甚至更优选地至少0.9(90％)；或者最优选地至少0.99(99％)的相似性，比如1.0(100％)的相似性。

UNITY指纹可采用程序SYBYL(可得自Tripos，1699SouthHanleyRoad，圣路易斯(St.Louis)，MO63144-2319USA)计算。ECFP_6和MDL指纹可采用程序PipelinePilot(可得自AccelrysInc.，10188TelesisCourt，Suite100，圣地亚哥(SanDiego)，CA92121，USA)计算。对于更多细节，参见例如J.Chem.Inf.Model.2008，48，542-549；J.Chem.Inf.Comput.Sci.2004，44，170-178；J.Med.Chem.2004，47，2743-2749；J.Chem.Inf.Model.2010，50，742-754；及SciTegicPipelinePilotChemistryCollection：基本化学用户指南(BasicChemistryUserGuide)，2008年3月，SciTegicPipelinePilot数据建模集(SciTegicPipelinePilotDataModelingCollection)，2008-两者得自Accelrys软件有限公司(AccelrysSoftwareInc.)，圣地亚哥，US，以及指南：

http://www.tripos.com/tripos_resources/fileroot/pdfs/Unity_111408.pdf，和

http://www.tripos.com/data/SYBYL/SYBYL_072505.pdf。

下文插入一个相似性计算的实例，其中已知GLP-1衍生物的已知整个侧链与其甲酯相比较：

采用a)ECFP_6指纹相似性为0.798，采用b)UNITY指纹相似性为0.957；和采用MDL指纹相似性为0.905。

在两个相同侧链(白蛋白结合部分)的情况下，GLP-1受体激动剂(例如衍生物)可指定为对称的。

在备选或另外的实施方案中，相似系数为至少0.80，优选地为至少0.85，更优选地为至少0.90，甚至更优选地为至少0.95，或者最优选地为至少0.99。

本发明的GLP-1受体激动剂比如衍生物可以具有相同分子式和键合原子序列，但是仅在其原子的空间三维取向不同的不同立体异构形式存在。采用标准命名法，以名称以及结构，在实验部分指明例证性的本发明GLP-1受体激动剂比如衍生物的立体异构现象。除非另外指明，本发明涉及要求的GLP-1受体激动剂(例如衍生物)的所有立体异构形式。

本发明的GLP-1受体激动剂比如GLP-1衍生物的血浆浓度可采用任何合适的方法测定。例如，可采用LC-MS(液相色谱-质谱法)，或者免疫测定比如RIA(放射免疫测定、ELISA(酶联免疫吸附测定)和LOCI(鲁米诺氧通道免疫测定(LuminescenceOxygenChannelingImmunoasssay))。对于合适的RIA和ELISA测定的通用方案存在于例如WO2009/030738第116-118页中。优选的测定为在本文的实施例部分中描述的LOCI测定。

本发明的GLP-1受体激动剂，比如衍生物、类似物和中间产物，可以为药学上可接受的盐、酰胺或酯的形式。盐例如通过碱和酸之间的化学反应形成，例如：2NH₃+H₂SO₄→(NH₄)₂SO₄。盐可为碱式盐、酸式盐，或者其可为两者都不是(即中性盐)。在水中碱式盐产生氢氧根离子和酸式盐产生水合氢离子。本发明的GLP-1受体激动剂比如衍生物的盐可分别用向阴离子或阳离子基团加入阳离子或阴离子形成。这些基团可位于本发明的GLP-1受体激动剂比如衍生物的肽部分，和/或在侧链中。

本发明的GLP-1受体激动剂比如衍生物的阴离子基团的非限制性实例包括侧链(若有的话)以及肽部分中的游离羧酸基。肽部分通常包括C-末端的游离羧酸基，并且其也可在内部酸性氨基酸残基比如Asp和Glu包括游离羧酸基。肽部分的阳离子基的非限制性实例包括N-末端的游离氨基(如果存在)以及内部碱性氨基酸残基比如His、Arg和Lys的任何游离氨基。

本发明的GLP-1受体激动剂比如衍生物的酯可例如通过游离羧酸基与醇或酚的反应来形成，导致至少一个羟基被烷氧基或芳氧基替代。酯的形成可涉及肽的C-末端的游离羧酸基和/或侧链中的任何游离羧酸基。

本发明的GLP-1受体激动剂比如衍生物的酰胺可例如通过游离羧酸基与胺或取代的胺反应、或者通过游离或取代的氨基与羧酸的反应来形成。酰胺的形成可涉及肽和/或侧链中的肽的C-末端的游离羧酸基、侧链中的任何游离羧酸基、肽的N-末端的游离氨基和/或肽的任何游离或取代的氨基。

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂(例如肽或衍生物)为药学上可接受的盐的形式。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂(例如衍生物)为药学上可接受的酰胺的形式，优选地具有肽的C-末端的酰胺基。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂(例如肽或衍生物)为药学上可接受的酯的形式。

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂比如GLP-1衍生物或类似物选自：GLP-1(7-37)、GLP-1(7-36)酰胺、艾塞那肽艾塞那肽LAR利拉糖肽索马鲁肽、他司鲁肽、阿必鲁肽、利司那肽(赛诺菲(Sanofi))和杜拉鲁肽。

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂比如GLP-1衍生物或类似物选自：利拉糖肽和索马鲁肽。

利拉糖肽，一种用于每天一次给予的单酰化的GLP-1衍生物，其由诺和诺德A/S(NovoNordiskA/S)在2009年上市，在WO98/08871实施例37中公开。

WO2006/097537公开了另外的GLP-1受体激动剂，比如GLP-1衍生物，包括索马鲁肽(实施例4)。

艾塞那肽为毒蜥外泌肽(exendin)-4的合成版本，毒蜥外泌肽-4为一种存在于吉拉毒蜥的唾液中的激素。其呈现类似于GLP-1的生物学性质。

杜拉鲁肽为GLP-1-Fc构建物(GLP-1-接头-来自IgG4的Fc)。

利司那肽为基于C-末端用6个Lys残基修饰的毒蜥外泌肽-4(1-39)(参见IDrugs，2009Aug；12(8)：503-13))。

他司鲁肽为人GLP-1的氨基酸序列7-36的8-(2-甲基丙氨酸)-35-(2-甲基丙氨酸)-36-L-精氨酰胺衍生物。

阿必鲁肽为重组人血清白蛋白(HSA)-GLP-1杂合蛋白，很可能是融合于HSA的GLP-1二聚体。组成GLP-1受体激动剂或GLP-1肽为类似物，其中8位的Ala由Gly替换(参见CurrOpinMolTher，2009Oct；11(5)：579-88])。

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂为长效GLP-1受体激动剂。通过“长效GLP-1受体激动剂”，我们包括与野生型蛋白(SEQIDNO：1)相比较具有增加的终末半衰期和/或减少的清除率的GLP-1受体激动剂。在备选或另外的实施方案中，GLP-1衍生物或类似物为长效GLP-1衍生物或类似物。通过“长效GLP-1衍生物或类似物”，我们包括与野生型蛋白(SEQIDNO：1)相比较具有增加的终末半衰期和/或减少的清除率的GLP-1衍生物或类似物。

终末血浆半衰期为达到伪平衡后的血浆浓度除以2需要的时间。当吸收过程不是限制因素时，半衰期为受血浆清除率和分布程度控制的混合参数。与此相反，当吸收过程为限制因素时，终末半衰期反映吸收的速率和程度而不是消除过程。终末半衰期尤其是与多次给药方案有关，因为其控制药物蓄积的程度、浓度波动和达到平衡花费的时间。在备选或另外的实施方案中，长效GLP-1受体激动剂比如长效GLP-1衍生物或类似物选自：利拉糖肽索马鲁肽、他司鲁肽、阿必鲁肽、他司鲁肽、杜拉鲁肽和艾塞那肽LAR。在备选或另外的实施方案中，长效GLP-1受体激动剂比如长效GLP-1衍生物或类似物为利拉糖肽(Victoza^TM)。在备选或另外的实施方案中，长效GLP-1受体激动剂比如长效GLP-1衍生物或类似物为索马鲁肽。

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂为索马鲁肽。索马鲁肽为在WO2006/097537的实施例4中公开的用于每周一次给予的单酰化GLP-1衍生物，其通过引用结合到本文中。

通过“GLP-1受体激动剂”，我们包括能够结合于和/或激活GLP-1受体的任何物质。在备选或另外的实施方案中，术语“GLP-1受体激动剂”和“GLP-1激动剂”本文可互换使用。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体为哺乳动物的，优选地为人。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体为源于GLP-1受体前体蛋白Entrez保藏号NP_002053(例如版本NP_002053.3))的GLP-1受体。受体激动剂可定义为GLP-1受体激动剂，比如类似物，其结合于受体并引起天然配体的典型反应。完全激动剂可定义为引起与天然配体相同幅度的反应的激动剂(参见例如“生物化学原理(PrinciplesofBiochemistry)”，ALLehninger，DLNelson，MMCox，第二版，Worth出版商，1993，第763页)。GLP-1受体结合可通过本领域已知的任何合适的手段确定。然而，优选地，GLP-1受体结合和激活最优选地按照在以下实施例部分中描述的方法，通过在表达克隆的人GLP-1受体的细胞系刺激cAMP形成的能力来确定。“完全”GLP-1受体激动剂可定义为能够引起与天然GLP-1，例如人GLP-1(7-37)相似(例如±5％)或相同幅度的GLP-1受体反应的GLP-1受体激动剂。

功能性质

在第一个功能的备选或另外的实施方案中，本发明的GLP-1受体激动剂比如衍生物具有良好的效力(例如天然蛋白(例如人GLP-1(7-37)的至少50％，例如天然蛋白的至少75％、至少95％、至少100％、至少125％、至少150％或至少175％)。而且，或者，它们在低的白蛋白浓度(≤0.0005％(wt/vol)白蛋白[例如HSA])下很好地结合于GLP-1受体。优选地它们为完全GLP-1受体激动剂，如由其强烈结合于GLP-1受体的能力结合激活受体的能力反映的那样。而且，或者，在第三个功能的备选或另外的实施方案中，它们与SEQIDNO：1相比较具有改善的药代动力学性质。而且，或者，在第四个功能的备选或另外的实施方案中，它们具有高的口服生物利用度(例如与SEQIDNO：1相比较改善的生物利用度)。而且，或者，在第五个功能的备选或另外的实施方案中，它们具有良好的生物物理性质(例如与SEQIDNO：1相比较改善的生物利用度)。

本发明的GLP-1受体激动剂比如衍生物、以及组成GLP-1肽或类似物本身为生物活性的，或者有效的。在备选或另外的实施方案中，效力和/或活性指的是体外效力，即在功能性GLP-1受体测定中的性能，更具体地讲指的是激活人GLP-1受体的能力。体外效力可例如以含有表达人GLP-1受体的膜的介质，和/或以用表达人GLP-1受体的全细胞的试验测定。例如，来自表达人GLP-1受体的稳定转染细胞系的纯化质膜，可用GLP-1受体激动剂比如讨论中的GLP-1类似物或衍生物刺激，并例如基于内源性形成的cAMP和外源性加入的生物素标记的cAMP之间的竞争测量cAMP产生的效力，cAMP可采用特异性抗体捕获，例如如在实施例C中描述的那样。

而且，或者，人GLP-1受体的反应可以报告基因测定，例如以表达人GLP-1受体并含有偶联于启动子的cAMP反应元件(CRE)的DNA和萤火虫荧光素酶(CRE荧光素酶)基因的稳定转染的BHK细胞系测量。当cAMP由于GLP-1受体的激活而产生时，这转而导致荧光素酶的表达。荧光素酶可通过加入荧光素测定，荧光素通过该酶转化为氧化荧光素并产生生物体发光，将其测量并为体外效力的量度。这种测定的一个非限制性实例描述于实施例C中。

术语半数最大有效浓度(EC₅₀)通常指的是通过参照剂量反应曲线在基线与最大值之间诱发一半反应的浓度。EC₅₀用作化合物效力的量度，并且代表观察到其最大效应的50％时的浓度。

本发明的GLP-1受体激动剂比如衍生物的体外效力可如以上描述的那样测定，并且测定所讨论的GLP-1受体激动剂(例如衍生物)的EC₅₀。EC₅₀值越低，效力越好。在备选或另外的实施方案中，本发明的GLP-1受体激动剂(例如衍生物)具有采用实施例C的方法测定的体外效力，该体外效力相当于在或低于10000pM，更优选地低于5000pM，甚至更优选地低于1000pM，或者最优选地低于500pM的EC₅₀。

在备选或另外的实施方案中，本发明的GLP-1受体激动剂比如衍生物以及于此的组成GLP-1肽或类似物本身为体内有效的，其可以任何合适的动物模型以及以临床试验，如本领域已知的那样测定。糖尿病db/db小鼠为合适动物模型的一个实例，并且血糖降低作用可例如如在实施例C中描述的那样，或者如在WO09/030738的实施例43中描述的那样，以这种小鼠体内测定。LYD猪为合适动物模型的另一个实例，并且例如如在实施例C中描述的那样，可在以这种猪的PD研究体内测定食物摄取的减少。本发明的GLP-1受体激动剂比如衍生物体内非常有效，这通过在猪的这种PD研究中的食物摄取减少得到证实。本发明的GLP-1受体激动剂比如衍生物以及于此的组成GLP-1肽或类似物本身在低的白蛋白浓度下很好地结合于GLP-1受体。这可如在实施例C中描述的那样测定。通常，在低的白蛋白浓度下结合于GLP-1受体应尽可能地好，相当于IC₅₀值低。

在备选或另外的实施方案中，在0.005％HSA(低白蛋白)存在下的GLP-1受体结合亲合力(IC₅₀)为低于1000nM，优选地低于600nM，更优选地低于100nM，或者最优选地低于50nM。

在备选或另外的实施方案中，本发明的GLP-1受体激动剂比如衍生物为具有与GLP-1(7-37)(SEQIDNO：1)相似效力的完全GLP-1受体激动剂。完全和有效的GLP-1受体激动剂可例如定义为GLP-1受体激动剂，比如GLP-1肽或GLP-1衍生物，其(i)结合于GLP-1受体，在受体结合亲和力测定(比如本文的实施例C的测定)中具有等于或小于5nM的IC₅₀值；和(ii)激活受体，在报告基因测定(比如本文的实施例C的测定)中具有等于或小于100pM的EC₅₀值，和/或在cAMP测定(比如本文的实施例C的测定)中具有等于或小于500pM的EC₅₀值。

本发明的GLP-1受体激动剂比如衍生物可具有改善的药代动力学性质，比如增加的终末半衰期、减少的清除率和/或提高的口服生物利用度。增加终末半衰期和/或减少清除率意指所讨论的化合物更缓慢地自体内消除。对于本发明的GLP-1受体激动剂比如衍生物，这带来药理作用的持续时间延长。提高的口服生物利用度意指更大部分的口服给予剂量到达其可分布的体循环，以呈现药理作用。

本发明的GLP-1受体激动剂比如衍生物的药代动力学性质可适当地以药代动力学(PK)研究进行体内测定。实施这种研究以评价药用化合物在体内如何吸收、分布和消除，以及这些过程如何影响化合物随着时间推移的体内浓度。

在药物开发的发现和临床前期，动物模型比如小鼠、大鼠、猴、狗或猪，可用于实施这种表征。这些模型中的任何一种可用于测试本发明的GLP-1受体激动剂比如衍生物的药代动力学性质。

在这样的研究中，动物一般地以相关的制剂，用静脉内、皮下(s.c.)或口服(p.o.)给予单剂量的药物。在给药后的预定时间点抽取血液样品，并用相关的定量测定来分析样品的药物浓度。基于这些测量，描绘研究的化合物的时间-血浆浓度曲线，并实施数据的所谓非房室药代动力学分析。

对于大多数化合物，当以半对数图绘制时，血浆浓度曲线的末端部分将为线性的，反映了在初始吸收和分布后，药物以恒定的分级速率自体内去除。这一速率(lambdaZ或λ_z)等于该图的末端部分的负斜率(minustheslope)。自该速率，还可作为t_1/2＝ln(2)/λz计算终末半衰期(参见例如JohanGabrielssonandDanielWeiner：药代动力学和药效学数据分析，概念和应用(PharmacokineticsandPharmacodynamicDataAnalysis.Concepts&Applications)，第3版，瑞典制药出版社，斯德哥尔摩(2000))。

清除率可在静脉注射(i.v.)给予后测定，并且定义为剂量(D)除以血浆浓度相对于时间曲线的曲线下面积(AUC)(Rowland，MandTozerTN：临床药代动力学：概念与应用(ClinicalPharmacokinetics：ConceptsandApplications)，第3版，1995威廉姆斯.威尔金斯(WilliamsWilkins))。终末半衰期和/或清除率的估计与给药方案以及药物开发、新药化合物评价中的重要参数的评价有关。

本发明的GLP-1受体激动剂比如衍生物可具有改善的药代动力学性质。

在备选或另外的实施方案中，药代动力学性质可作为静脉注射(i.v.)给予后大鼠的体内终末半衰期(T_1/2)测定。在备选或另外的实施方案中，半衰期为至少4小时，优选地为至少6小时，甚至更优选地为至少8小时，或者最优选地为至少10小时。

用于静脉注射(i.v.)给予后测定大鼠的体内终末半衰期的合适测定在本文的实施例C中公开。

本发明的GLP-1受体激动剂比如衍生物可具有改善的药代动力学性质。

在备选或另外的实施方案中，药代动力学性质可作为静脉注射(i.v.)给予后小型猪的体内终末半衰期(T_1/2)测定，例如如在本文的实施例C中描述的那样。

在备选或另外的实施方案中，小型猪的终末半衰期为至少8小时，优选地为至少24小时，甚至更优选地为至少40小时，或者最优选地为至少60小时。

本发明的GLP-1受体激动剂比如衍生物可具有高的口服生物利用度。通常，术语生物利用度指的是到达体循环无变化的活性药物成分(API)，比如本发明的GLP-1受体激动剂(例如衍生物)的所给予剂量的分数。按照定义，当静脉内给予API时，其生物利用度为100％。然而，当其经其它途径(比如口服)给予时，其生物利用度降低(由于分解和/或不完全吸收及首过代谢)。当计算用于非静脉内给予途径的剂量时，关于生物利用度的知识是重要的。

在口服和静脉内给予两者后绘制血浆浓度相对于时间的图。绝对生物利用度(F)为(口服AUC除以剂量)除以(静脉内AUC除以剂量)。本发明的GLP-1受体激动剂比如衍生物具有高于a)利拉糖肽，和/或b)索马鲁肽，优选地高至少10％，更优选地高至少20％，甚至更优选地高至少30％，或者最优选地高至少40％的绝对口服生物利用度。

在测试口服生物利用度之前，本发明的GLP-1受体激动剂比如衍生物可适当地如本领域已知的那样配制促胰岛素分泌化合物的口服制剂，例如采用在WO2008/145728中描述的任何一种或多种制剂。

本发明的GLP-1受体激动剂比如衍生物可具有良好的生物物理性质。这些性质包括但不限于物理稳定性和/或溶解性。这些及其它生物物理性质可采用蛋白质化学领域已知的标准方法测量。在备选或另外的实施方案中，这些性质与天然GLP-1(SEQIDNO：1)相比较得到改善。GLP-1受体激动剂(例如衍生物)的改变的低聚性质可能至少部分地是生物物理性质改善的原因。

制备方法

GLP-1受体激动剂比如肽样GLP-1(7-37)和GLP-1类似物的产生为本领域熟知的。

本发明的GLP-1受体激动剂比如衍生物的GLP-1部分(或其片段)，可例如采用t-Boc或Fmoc化学或其它很好建立的技术，通过经典的肽合成，例如固相肽合成产生，参见例如GreeneandWuts，“有机合成中的保护基(ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis)”，JohnWiley&Sons，1999，FlorencioZaragoza，“固相上的有机合成(OrganicSynthesisonsolidPhase)”，Wiley-VCHVerlagGmbH，2000，和“Fmoc固相肽合成(FmocSolidPhasePeptideSynthesis)”，W.C.ChanandP.D.White编辑，牛津大学出版社，2000。在备选或另外的实施方案中，本文使用的术语“GLP-1部分”指的是GLP-1受体激动剂的未支化的肽部分。

而且，或者，本发明的GLP-1受体激动剂比如衍生物的GLP-1部分(或其片段)，可通过重组方法，亦即通过培养宿主细胞来产生，这种宿主细胞含有编码类似物的DNA序列和能够在允许表达肽的条件下于合适的营养培养基中表达肽。适合于表达这些肽的宿主细胞的非限制性实例为：大肠杆菌、酿酒酵母以及哺乳动物的BHK或CHO细胞系。其包括非天然氨基酸和/或共价连接的N-末端一-或二肽拟似物的那些本发明的GLP-1受体激动剂比如衍生物，可例如如在试验部分中描述的那样产生。或者参见例如Hodgson等人：“含有非天然氨基酸的肽和蛋白的合成(Thesynthesisofpeptidesandproteinscontainingnon-naturalaminoacids)”化学会评论(ChemicalSocietyReviews)，第33卷，第7期(2004)，第422-430页；和标题为“GLP-1类似物的半重组制备(Semi-recombinantpreparationofGLP-1analogues)”的WO2009/083549A1。

本文提及制备一些本发明的GLP-1受体激动剂比如衍生物的方法的具体实例。

药用组合物

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂与药学上可接受的载体、媒介物、稀释剂和/或赋形剂一起配制。这种制剂本文可称为药用组合物。

包含本发明的GLP-1受体激动剂比如衍生物或其药学上可接受的盐、酰胺或酯、以及药学上可接受的赋形剂的药用组合物可如本领域已知的那样制备。术语“赋形剂”广泛地指除活性治疗成分外的任何组分。赋形剂可为惰性物质、非活性物质、和/或不是药用活性物质。赋形剂可用于各种目的，例如作为载体、媒介物、稀释剂、片剂助剂、和/或改善活性物质的给予和/或吸收。药用活性成分与各种赋形剂的配制为本领域已知的，参见例如雷明顿：药剂学的科学与实践(Remington：TheScienceandPracticeofPharmacy)(例如第19版(1995)及任何后来的版本)。赋形剂的非限制性实例为：溶剂、稀释剂、缓冲剂、防腐剂、张力调节剂、螯合剂和稳定剂。

制剂的实例包括液体制剂，即包含水的水性制剂。液体制剂可为溶液剂或混悬剂。水性制剂一般地包含至少50％w/w水，或者至少60％、70％、80％或者甚至至少90％w/w的水。或者，药用组合物可为固体制剂，例如冻干或喷雾干燥的组合物，其可在医生或患者于使用前照原来的样子或者向其中加入溶剂和/或稀释剂时使用。水性制剂的pH可为pH3-pH10，例如约7.0-约9.5、或约3.0-约7.0之间的任何值。药用组合物可包含缓冲剂。缓冲剂可例如选自乙酸钠、碳酸钠、枸橼酸盐、双甘氨肽、组氨酸、甘氨酸、赖氨酸、精氨酸、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸钠、和三(羟甲基)-氨基甲烷、N，N-二羟乙基甘氨酸、三甲基甘氨酸、苹果酸、琥珀酸盐、马来酸、富马酸、酒石酸、天冬氨酸及其混合物。

药用组合物可包含防腐剂。防腐剂可例如选自苯酚、邻甲苯酚、间甲苯酚、对甲苯酚、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、2-苯氧基乙醇、对羟基苯甲酸丁酯、2-苯基乙醇、苯甲醇、三氯叔丁醇、和硫汞撒、溴硝丙二醇、苯甲酸、咪脲、氯己定、脱氢醋酸钠、氯甲酚、对羟基苯甲酸乙酯、苄索氯铵、氯苯甘醚(3-对-氯苯氧基丙-1，2-二醇)及其混合物。防腐剂可以0.1mg/ml-20mg/ml的浓度存在。药用组合物可包含等渗剂。等渗剂可例如选自盐(例如氯化钠)、糖或糖醇、氨基酸(例如甘氨酸、组氨酸、精氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、天冬氨酸、色氨酸、苏氨酸)、醛醇(例如甘油(甘油)、1，2-丙二醇(丙二醇)、1，3-丙二醇、1，3-丁二醇)、聚乙二醇(例如PEG400)及其混合物。可使用任何糖比如单-、二-或多糖；或者水溶性葡聚糖，包括例如果糖、葡萄糖、甘露糖、山梨糖、木糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、海藻糖、葡聚糖、普鲁兰多糖、糊精、环糊精、α和β-HPCD、可溶性淀粉、羟乙基淀粉和羧甲基纤维素-Na。糖醇定义为具有至少一个-OH基的C4-C8碳氢化合物，并包括例如甘露醇、山梨醇、肌醇、半乳糖醇、己六醇、木糖醇和阿糖醇。在备选或另外的实施方案中，糖醇添加剂为甘露醇。药用组合物可包含螯合剂。螯合剂可例如选自乙二胺四乙酸(EDTA)、枸橼酸和天冬氨酸的盐及其混合物。

药用组合物可包含稳定剂。稳定剂可例如为一种或多种氧化抑制剂、聚集抑制剂、表面活性剂和/或一种或多种蛋白酶抑制剂。以下公开了这些各种稳定剂的非限制性实例。

术语“聚集体形成”指的是导致形成低聚物的多肽分子之间的物理相互作用，其可保持可溶性的、或自溶液中沉淀的大的可见聚集体。在液体药用组合物的储存期间多肽的聚集体形成可能不利地影响多肽的生物活性，导致药物组合物治疗效果丧失。此外，当采用输注系统给予含有多肽的药用组合物时，聚集体形成可能会造成其它问题，比如管、膜或泵的堵塞。

药用组合物可包含足以在组合物的储存期间减少多肽的聚集体形成的量的氨基酸基质。术语“氨基酸基质”指的是一种或多种氨基酸(比如蛋氨酸、组氨酸、咪唑、精氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、天冬氨酸、色氨酸、苏氨酸)或其类似物。任何氨基酸可以其游离碱形式或以其盐形式存在。可存在氨基酸基质的任何立体异构体(即L、D或其混合物)。可加入蛋氨酸(或其它含硫氨基酸或氨基酸类似物)，以在起治疗剂作用的多肽为包含至少一个易受这种氧化作用影响的蛋氨酸残基的多肽时抑制蛋氨酸残基氧化为蛋氨酸亚砜。可采用蛋氨酸的任何立体异构体(L或D)或其组合。

药用组合物可包含选自高分子量聚合物或低分子化合物的稳定剂。稳定剂可例如选自聚乙二醇(例如PEG3350)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮、羧基-/羟基纤维素或其衍生物(例如HPC、HPC-SL、HPC-L和HPMC)、环糊精、含硫物质像单硫代甘油、巯基乙酸和2-甲基硫代乙醇以及不同的盐(例如氯化钠)。药用组合物可包含另外的稳定剂，比如但不限于蛋氨酸和EDTA(其保护多肽免于蛋氨酸氧化)以及非离子型表面活性剂(其保护多肽免于与解冻或机械剪切有关的聚集)。

药用组合物可包含一种或多种表面活性剂。术语“表面活性剂”指的是包含水溶性(亲水性)部分和脂溶性(亲脂性)部分的任何分子或离子。表面活性剂可例如选自阴离子型表面活性剂、阳离子型表面活性剂、非离子型表面活性剂和/或两性离子表面活性剂。

药用组合物可包含一种或多种蛋白酶抑制剂，比如EDTA(乙二胺四乙酸)和/或盐酸苯甲脒。

药用组合物的另外、任选的成分包括例如润湿剂、乳化剂、抗氧化剂、膨胀剂、金属离子、油性媒介物、蛋白(例如人血清白蛋白、明胶)和/或两性离子(例如氨基酸比如甜菜碱、牛磺酸、精氨酸、甘氨酸、赖氨酸和组氨酸)。

仍然进一步地，药用组合物可如本领域已知的那样配制促胰岛素分泌化合物的口服制剂，例如采用在WO2008/145728中描述的任何一种或多种制剂。

组合物可以几种剂型给予，例如作为溶液剂、混悬剂、乳剂、微乳剂、复合型乳剂、泡沫剂、软膏剂(salve)、糊剂、膏药(plaster)、软膏剂、片剂、包衣片剂、口香糖、冲洗液、胶囊剂比如硬或软明胶胶囊、栓剂、直肠胶囊剂、滴剂、凝胶剂、喷雾剂、粉剂、气雾剂、吸入剂、滴眼剂、眼用软膏、眼用冲洗液、阴道子宫托、阴道环、阴道软膏、注射液；原位转化溶液比如原位胶凝、凝固、沉淀、和原位结晶；输液剂、或作为植入物。组合物可为片剂(任选地为包衣的)、胶囊剂或者口香糖。

组合物可与药物载体或药物递送系统进一步混合，例如以改善稳定性、生物利用度和/或溶解性。在备选或另外的实施方案中，组合物可通过共价、疏水和/或静电相互作用附着于这种系统。这种混合的目的可例如减少不利影响、实现时间疗法和/或提高患者的依从性。

组合物也可用于控制、持续、延长、延迟和/或缓慢释放药物递送系统的制剂。非肠道给予可通过注射器，任选地为笔样注射器，或者通过输液泵，经皮下、肌内、腹膜内或静脉注射实施。组合物可以溶液剂、混悬剂或粉剂的形式经鼻给予，或者其可以液体或粉末喷雾剂的形式肺部给予。经皮给予为仍然进一步任选的，例如通过无针注射，自贴剂比如离子电渗贴剂，或经跨粘膜途径，例如颊。组合物可为稳定化的制剂。术语“稳定化的制剂”指的是增加物理和/或化学稳定性，优选地增加两者的制剂。通常，制剂必须在使用和储存期间是稳定的(按照推荐的使用和储存条件)，直到达到产品有效期。

术语“物理稳定性”指的是多肽由于暴露于热-机械应力和/或与不稳定的界面和表面(比如疏水表面)的相互作用形成无生物活性和/或不溶性聚集体的趋势。水性多肽制剂的物理稳定性可在于不同温度下暴露于机械/物理应力(例如搅动)不同的时间段后，通过肉眼检查和/或通过浊度测量进行评价。或者，物理稳定性可采用多肽构象状态的光谱试剂或探针比如硫黄素T或“疏水贴剂”探针进行评价。

术语“化学稳定性”指的是导致形成化学降解产物的多肽结构的化学(特别是共价)变化，所述化学降解产物与完整的多肽相比较潜在具有减少的生物效力和/或增加的免疫原性影响。化学稳定性可通过例如经SEC-HPLC和/或RP-HPLC，在暴露于不同的环境条件后的不同时间点测量化学降解产物的量进行评价。

给予

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂的剂量为0.6mg/天。

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂的剂量为1.2mg/天。

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂的剂量为1.8mg/天。

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂用于大于1天的治疗期(例如2天或至少2天的时间段、3天或至少3天的时间段、4天或至少4天的时间段、5天或至少5天的时间段、6天或至少6天的时间段、1周或至少1周的时间段、2周或至少2周的时间段、3周或至少3周的时间段、4周或至少4周的时间段、1个月或至少1个月的时间段、2个月或至少2个月的时间段、3个月或至少3个月的时间段、4个月或至少4个月的时间段、5个月或至少5个月的时间段、6个月或至少6个月的时间段、以及连续或不确定的周期)。GLP-1受体激动剂可用于每天治疗。GLP-1受体激动剂可用于每周治疗。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂用于大于1天的治疗期。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂用于2天或至少、至少2天的治疗期。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂用于3天或至少3天的治疗期。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂用于4天或至少4天的治疗期。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂用于5天或至少5天的治疗期。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂用于6天或至少6天的治疗期。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂用于1周或至少1周的治疗期。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂用于2周或至少2周的治疗期。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂用于3周或至少3周的治疗期。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂用于4周或至少4周的治疗期。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂用于1个月或至少1个月的治疗期。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂用于2个月或至少2个月的治疗期。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂用于3个月或至少3个月的治疗期。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂用于4个月或至少4个月的治疗期。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂用于5个月或至少5个月的治疗期。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂用于6个月或至少6个月的治疗期。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂用于连续或不确定的治疗期。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂用于每天治疗。在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂用于每周治疗。通过“治疗期”，我们意指提供给需要治疗的个体治疗有效剂量的GLP-1受体激动剂的一段时间。在备选或另外的实施方案中，术语“每天治疗”指的是每天一个给予GLP-1受体激动剂的治疗方案。在备选的实施方案中，“每天治疗”指的是每天一个给予GLP-1的治疗方案。在备选或另外的实施方案中，术语“每周治疗”指的是每周一个给予GLP-1受体激动剂的治疗方案。在备选的实施方案中，“每周治疗”指的是每周一个给予GLP-1的治疗方案。

所给予的剂量可含有0.01mg-100mg的GLP-1受体激动剂(例如衍生物)、或者0.01-50mg、或0.01-20mg、或0.01-10mg的GLP-1受体激动剂(例如衍生物)。

GLP-1受体激动剂(例如衍生物)可以药用组合物的形式给予。其可在几个部位给予有需要的患者，例如在局部位点比如皮肤或粘膜部位；在绕过吸收的位点比如在动脉、静脉或心脏；和在涉及吸收的位点比如在皮肤、皮下、肌内或在腹部。

给予途径可例如为舌、舌下、颊、嘴、口服、胃、肠、鼻、肺(比如通过细支气管、肺泡或其组合)、非肠道、表皮、真皮、经皮、结膜、输尿管、阴道、直肠和/或眼部。组合物可为口服组合物，并且给予途径为经口。

用本发明的GLP-1受体激动剂比如衍生物治疗也可与一种或多种另外的例如选自以下的药理活性物质组合：抗糖尿病剂、减肥药、食欲调节剂、抗高血压剂、用于治疗和/或预防由糖尿病造成或与糖尿病有关的并发症的物质以及用于治疗和/或预防由肥胖造成或与肥胖有关的并发症和障碍的物质。这些药理活性物质的实例为：胰岛素、磺酰脲类、双胍类、美格列脲类、葡萄糖苷酶抑制剂、胰高血糖素拮抗剂、DPP-IV(二肽基肽酶-IV)抑制剂、参与刺激糖质新生和/或肝糖分解的肝酶抑制剂、葡萄糖摄取调节剂、改变脂质代谢的化合物比如抗高血脂剂像HMGCoA抑制剂(他汀类药物)、抑胃多肽(GIP类似物)、降低食物摄取的化合物、RXR激动剂和作用于β-细胞的ATP-依赖性钾通道的物质；消胆胺、降脂树脂II号、氯贝丁酯、吉非贝齐、洛伐他汀、普伐他汀、辛伐他汀、普罗布考、右旋甲状腺素、那格列奈、瑞格列奈；β-阻滞剂，比如阿普洛尔、阿替洛尔、噻吗洛尔、吲哚洛尔、普萘洛尔和美托洛尔；ACE(血管紧张素转化酶)抑制剂，比如贝那普利、卡托普利、依那普利、福辛普利、赖诺普利、阿曲普利(alatriopril)、喹那普利和雷米普利；钙通道阻滞剂，比如硝苯地平、非洛地平、尼卡地平、伊拉地平、尼莫地平、地尔硫卓和维拉帕米；以及α-阻滞剂，比如多沙唑嗪、乌拉地尔、哌唑嗪和特拉唑嗪；CART(可卡因-苯丙胺调节的转录物(transcript))激动剂、NPY(神经肽Y)拮抗剂、PYY激动剂、Y2受体激动剂、Y4受体激动剂、混合型Y2/Y4受体激动剂、MC4(黑皮质素4)激动剂、阿立新拮抗剂、TNF(肿瘤坏死因子)激动剂、CRF(促肾上腺皮质激素释放因子)激动剂、CRFBP(促肾上腺皮质激素释放因子结合蛋白)拮抗剂、尿皮素激动剂、β3激动剂、胃泌酸调节素及类似物、MSH(黑素细胞刺激激素)激动剂、MCH(黑素细胞聚集激素)拮抗剂、CCK(缩胆囊素)激动剂、5-羟色胺再摄取抑制剂、5-羟色胺和去甲肾上腺素再摄取抑制剂、混合型5-羟色胺和去甲肾上腺素能化合物、5HT(5-羟色胺)激动剂、蛙皮素激动剂、甘丙肽拮抗剂、生长激素、生长激素释放化合物、TRH(促甲状腺激素释放激素)激动剂、UCP2或3(解偶联蛋白2或3)调节剂、瘦素激动剂、DA激动剂(溴隐停、doprexin)、脂肪酶/淀粉酶抑制剂、RXR(视黄醇类X受体)调节剂、TRβ激动剂、组胺H3拮抗剂、抑胃肽激动剂或拮抗剂(GIP类似物)、胃泌素和胃泌素类似物。

在备选或另外的实施方案中，一种或多种其它或另外的药物与GLP-1受体激动剂同时或连续给予。

在备选或另外的实施方案中，GLP-1受体激动剂用于与一种或多种另外的抗糖尿病药物组合使用。

通过“另外的糖尿病药物”，我们包括除GLP-1受体激动剂(或供使用的GLP-1受体激动剂)外用于治疗糖尿病的任何药物。优选地，“另外的糖尿病药物”不是GLP-1受体激动剂。

在备选或另外的实施方案中，一种或多种其它或另外的药物与GLP-1受体激动剂同时或连续给予。

在备选或另外的实施方案中，一种或多种另外的抗糖尿病药物与GLP-1受体激动剂同时或连续给予。

在备选或另外的实施方案中，一种或多种另外的抗糖尿病药物与用于相同制剂的GLP-1受体激动剂同时给予。

在备选或另外的实施方案中，一种或多种另外的抗糖尿病药物选自：胰岛素和敏化剂(比如双胍类和噻唑烷二酮类)。

在备选或另外的实施方案中，一种或多种抗糖尿病药物为或包括胰岛素。本发明的“胰岛素”或“天然存在的胰岛素”本文应理解为人胰岛素或来自另一个物种的胰岛素比如猪或牛胰岛素。本文使用的术语“胰岛素肽”意指一种肽，其为具有胰岛素活性的人胰岛素或其类似物或衍生物。本文使用的术语“母体胰岛素”打算意指向其施加任何修饰之前的胰岛素。本文使用的术语“胰岛素类似物”意指一种修饰的人胰岛素，其中胰岛素的一个或多个氨基酸残基用其它的氨基酸残基替换和/或其中一个或多个氨基酸残基自胰岛素缺失和/或其中向胰岛素添加和/或插入一个或多个氨基酸残基。

在备选或另外的实施方案中，胰岛素类似物相对于人胰岛素包含10个或更少的氨基酸修饰(替换、缺失、添加(包括插入)及其任何组合)。在备选或另外的实施方案中，胰岛素类似物相对于人胰岛素包含9个或更少的氨基酸修饰。在备选或另外的实施方案中，胰岛素类似物相对于人胰岛素包含8个或更少的氨基酸修饰。在备选或另外的实施方案中，胰岛素类似物相对于人胰岛素包含7个或更少的氨基酸修饰。在备选或另外的实施方案中，胰岛素类似物相对于人胰岛素包含6个或更少的氨基酸修饰。在备选或另外的实施方案中，胰岛素类似物相对于人胰岛素包含5个或更少的氨基酸修饰。在备选或另外的实施方案中，胰岛素类似物相对于人胰岛素包含4个或更少的氨基酸修饰。在备选或另外的实施方案中，胰岛素类似物相对于人胰岛素包含3个或更少的氨基酸修饰。在备选或另外的实施方案中，胰岛素类似物相对于人胰岛素包含2个或更少的氨基酸修饰。在备选或另外的实施方案中，胰岛素类似物相对于人胰岛素包含1个修饰。

胰岛素分子中的修饰表示指明所述链(A或B)、位置以及代表替换天然氨基酸残基的氨基酸残基的1或3个字母代码。

“desB30”或“B(1-29)”意味着缺乏B30氨基酸的天然胰岛素B链或其类似物，和“A(1-21)”意指天然胰岛素A链。因此，例如，A21Gly、B28Asp、desB30人胰岛素为人胰岛素的类似物，其中A链21位的氨基酸用甘氨酸替换，B链28位的氨基酸用天冬氨酸替换，和B链30位的氨基酸缺失。

本文术语像“A1”、“A2”和“A3”等分别表明胰岛素A链的1、2和3位等的氨基酸(自N-末端计数)。类似地，术语像B1、B2和B3等分别表明胰岛素B链的1、2和3位等的氨基酸(自N-末端计数)。采用代表氨基酸的1个字母代码，术语像A21A、A21G和A21Q指定A21位的氨基酸分别为A、G和Q。采用代表氨基酸的3个字母代码，相应的表示分别为A21Ala、A21Gly和A21Gln。

本文术语“A(0)”或“B(0)”分别表明A1或B1的N-末端氨基酸的位置。术语A(-1)或B(-1)分别表明A(0)或B(0)的N-末端第一个氨基酸的位置。因此，A(-2)和B(-2)分别表明A(-1)和B(-1)的N-末端氨基酸的位置，A(-3)和B(-3)分别表明A(-2)和B(-2)的N-末端氨基酸的位置，等等。术语A22或B31分别表明A21或B30的C-末端氨基酸的位置。术语A23或B32分别表明A22或B31的C-末端第一个氨基酸的位置。因此A24和B33分别表明A23和B32的C-末端氨基酸的位置，等等。本文中，术语“氨基酸残基”为形式上自羧基去除了羟基和/或形式上自氨基去除了氢原子的氨基酸形式。

胰岛素类似物的实例为这样的，其中B链28位的Pro用Asp、Lys、Leu、Val或Ala替换和/或B29位的Lys用Pro、Glu或Asp替换。此外，B3位的Asn可用Thr、Lys、Gln、Glu或Asp替换。A21位的氨基酸残基可用Gly替换。还可向A-链和/或B-链的C-末端添加一个或多个氨基酸，比如Lys。B1位的氨基酸可用Glu替换。B16位的氨基酸可用Glu或His替换。胰岛素类似物的进一步实例为缺失类似物，例如其中人胰岛素的B30氨基酸缺失的类似物(des(B30)人胰岛素)、其中人胰岛素的B1氨基酸缺失的胰岛素类似物(des(B1)人胰岛素)、des(B28-B30)人胰岛素和des(B27)人胰岛素。其中A-链和/或B-链具有N-末端延伸的胰岛素类似物和其中A-链和/或B-链具有C-末端延伸的胰岛素类似物，比如具有添加到B-链的C-末端的两个精氨酸残基，也为胰岛素类似物的实例。进一步实例为包含所提及突变的组合的胰岛素类似物。其中A14位的氨基酸为Asn、Gln、Glu、Arg、Asp、Gly或His、B25位的氨基酸为His且其任选地进一步包含一个或多个另外的突变的胰岛素类似物为胰岛素类似物的进一步实例。其中A21位的氨基酸残基为Gly且其中胰岛素类似物在C-末端用两个精氨酸残基进一步延伸的人胰岛素的胰岛素类似物也为胰岛素类似物的实例。本文引用的所有参考文献，包括出版物、专利申请和专利，通过引用而全部结合至本文中，且结合至好似每个参考文献单独和具体表明通过引用而结合且在本文以其全部进行陈述的相同程度(至法律允许的最大限度)。

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实施方案的非限制性列表

1.一种在治疗1型糖尿病中应用的GLP-1受体激动剂，其中所述应用包括减少低血糖或低血糖发作的数量。

2.一种在治疗1型糖尿病中应用的GLP-1受体激动剂，其中所述应用包括减少血糖波动的严重程度。

3.一种在治疗1型糖尿病中应用的GLP-1受体激动剂，其中所述应用包括减少自低血糖或低血糖发作恢复需要的外源性葡萄糖的量。

4.一种在治疗1型糖尿病中应用的GLP-1受体激动剂，其中所述应用包括减少低血糖或低血糖发作的持续时间。

5.一种在治疗或预防患有1型糖尿病的患者的低血糖或低血糖发作中应用的GLP-1受体激动剂。

6.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中如在前述实施方案中任一个定义的所述减少为用GLP-1受体激动剂治疗之前与给予GLP-1受体激动剂的受试者相比较。

7.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中如在前述实施方案中任一个定义的所述减少为与不包含GLP-1受体激动剂的安慰剂组相比较。

8.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中如在前述实施方案中任一个定义的所述减少为至少5％，比如至少10％或至少15％。

9.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中经过一段时间受试者患有的低血糖或低血糖发作的所述数量，与给予所述GLP-1受体激动剂之前所述受试者经相同的时间段患有的发作数量相比较得到减少。

10.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中时间段为1年。

11.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂适合于每天一次给予。

12.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂适合于每周一次给予。

13.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂为GLP-1片段、衍生物或类似物。

14.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂与GLP-1(7-37)相比较包含不多于5个，比如不多于4个或不多于3个已被替换、插入或缺失的氨基酸残基。

15.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1衍生物或类似物选自：GLP-1(7-37)、GLP-1(7-36)酰胺、艾塞那肽、艾塞那肽LAR、利拉糖肽、索马鲁肽、他司鲁肽、阿必鲁肽、利司那肽和杜拉鲁肽。

16.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂选自利拉糖肽和索马鲁肽。

17.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂为长效GLP-1衍生物或类似物。

18.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中长效GLP-1衍生物或类似物选自：利拉糖肽、索马鲁肽、他司鲁肽、阿必鲁肽、他司鲁肽、杜拉鲁肽和艾塞那肽LAR。

19.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中长效GLP-1衍生物或类似物为利拉糖肽。

20.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中长效GLP-1衍生物或类似物为索马鲁肽。

21.前述实施方案中任一个的GLP-1受体激动剂，所述GLP-1受体激动剂用于治疗与1型糖尿病的胰岛素疗法有关的低血糖或低血糖发作。

22.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂用于治疗或预防一种或多种另外的与1型糖尿病的胰岛素疗法有关的症状。

23.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中一种或多种另外的与1型糖尿病的胰岛素疗法有关的症状选自：血糖控制降低、胰岛素缺乏和肥胖。

24.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中在患有1型糖尿病的患者治疗或预防低血糖或低血糖发作包括治疗或预防一种或多种选自以下的症状或由治疗或预防一种或多种选自以下的症状组成：低血糖、总体低血糖发作、夜间低血糖发作和日间低血糖发作。

25.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂能够减少总体夜间低血糖发作。

26.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂能够减少夜间低血糖发作的持续时间。

27.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂能够减少总体夜间低血糖发作至少25％，例如30％、35％或40％。

28.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂能够减少总体夜间低血糖发作至少31％。

29.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂能够减少总体夜间低血糖发作至少35％。

30.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂能够减少总体夜间低血糖发作至少39％。

31.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂的剂量为0.6mg/天。

32.前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂的剂量为1.2mg/天。

33.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂的剂量为1.2mg/天。

34.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂能够减少自低血糖发作恢复需要的外源性葡萄糖的量和/或减少血糖波动的严重程度。

35.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中当以1.2mg每天一次的剂量给予时，GLP-1受体激动剂能够减少用于低血糖发作后恢复需要的外源性葡萄糖的量至少19％。

36.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中当以0.6mg每天一次的剂量给予时，GLP-1受体激动剂能够减少用于低血糖发作后恢复需要的外源性葡萄糖的量至少23％。

37.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中相对于安慰剂组，当以1.8mg每天一次的剂量给予时，GLP-1受体激动剂能够减少用于低血糖发作后恢复需要的外源性葡萄糖的量至少约37％。

38.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂以足以减少患者自低血糖发作恢复的外源性葡萄糖需求的剂量给予。

39.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂以足以最大限度地减少患者自潜在低血糖发作恢复的外源性葡萄糖需求的剂量给予。

40.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂为索马鲁肽。

41.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中所给予的GLP-1受体激动剂为利拉糖肽，并且足以最佳地在患者减少自潜在低血糖发作恢复的外源性葡萄糖需求的剂量为在0.6mg每天-1.8mg每天之间(例如在0.6mg-1.2mg每天之间)。

42.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂为利拉糖肽，并且足以最佳地在患者减少自潜在低血糖发作恢复的外源性葡萄糖需求的剂量选自0.6mg每天、1.2mg每天和1.8mg每天。

43.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂以0.6mg每天一次的剂量给予，以减少患者自低血糖发作恢复的外源性葡萄糖需求。

44.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂以1.2mg每天一次的剂量给予，以减少患者自低血糖发作恢复的外源性葡萄糖需求。

45.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂以1.8mg每天一次的剂量给予，以减少患者自低血糖发作恢复的外源性葡萄糖需求。

46.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中1型糖尿病呈现完全或部分胰岛素缺乏。

47.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中1型糖尿病呈现绝对的或基本上绝对的胰岛素缺乏。

48.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂与药学上可接受的载体、媒介物、稀释剂和/或赋形剂一起配制。

49.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂用于大于1天的治疗期(例如2天或至少2天的时间段、3天或至少3天的时间段、4天或至少4天的时间段、5天或至少5天的时间段、6天或至少6天的时间段、1周或至少1周的时间段、2周或至少2周的时间段、3周或至少3周的时间段、4周或至少4周的时间段、1个月或至少1个月的时间段、2个月或至少2个月的时间段、3个月或至少3个月的时间段、4个月或至少4个月的时间段、5个月或至少5个月的时间段、6个月或至少6个月的时间段、以及连续或不确定的时间段)。

50.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂用于每天治疗。

51.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂用于每周治疗。

52.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂用于与一种或多种另外的药物组合使用。

53.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中一种或多种其它或另外的药物与GLP-1受体激动剂同时或连续给予。

54.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂用于与一种或多种另外的抗糖尿病药物组合使用。

55.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中一种或多种另外的抗糖尿病药物与GLP-1受体激动剂同时或连续给予。

56.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中一种或多种另外的抗糖尿病药物与用于相同制剂的GLP-1受体激动剂同时给予。

57.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中一种或多种另外的抗糖尿病药物选自：胰岛素和敏化剂(比如双胍类和噻唑烷二酮类)。

58.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中一种或多种抗糖尿病药物为或包括胰岛素。

59.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中所述应用和/或GLP-1受体激动剂如本文定义的那样。

60.GLP-1激动剂在制备在患有1型糖尿病的患者用于以下的药物中的用途：

i)减少低血糖发作的数量；

ii)减少血糖波动的严重程度；

iii)减少自低血糖发作恢复需要的外源性葡萄糖的量；

iv)减少低血糖发作的持续时间；和/或

v)治疗或预防低血糖或低血糖发作。

61.根据前述实施方案的GLP-1受体激动剂在制备药物中的用途，其中所述用途和/或GLP-1受体激动剂如本文定义的那样。

62.一种用于减少正用胰岛素治疗的受试者患有的低血糖或低血糖发作的数量的方法，所述方法包括给予所述受试者有效减少所述受试者患有的低血糖或低血糖发作的数量的量的GLP-1受体激动剂。

63.一种用于减少正用胰岛素治疗的受试者患有的血糖波动的严重程度的方法，所述方法包括给予所述受试者有效减少所述受试者患有的血糖波动的严重程度的量的GLP-1受体激动剂。

64.一种用于减少正用胰岛素治疗的受试者自低血糖或低血糖发作恢复需要的外源性葡萄糖的量的方法，所述方法包括给予所述受试者有效减少所述受试者自低血糖或低血糖发作恢复需要的外源性葡萄糖的量的量的GLP-1受体激动剂。

65.一种用于在正用胰岛素治疗的受试者减少低血糖或低血糖发作的持续时间的方法，所述方法包括给予所述受试者有效减少所述受试者患有的低血糖或低血糖发作的持续时间的量的GLP-1受体激动剂。

66.前述实施方案中任一个的方法，其中受试者患有1型糖尿病。

67.一种用于在需要这种治疗的受试者治疗1型糖尿病的方法，所述方法包括给予所述受试者有效治疗1型糖尿病和减少所述受试者患有的低血糖或低血糖发作的数量的量的GLP-1受体激动剂。

68.一种用于在需要这种治疗的受试者治疗1型糖尿病的方法，所述方法包括给予所述受试者有效治疗1型糖尿病和减少所述受试者患有的血糖波动的严重程度的量的GLP-1受体激动剂。

69.一种用于在需要这种治疗的受试者治疗1型糖尿病的方法，所述方法包括给予所述受试者有效治疗1型糖尿病和减少自所述受试者患有的低血糖或低血糖发作恢复需要的外源性葡萄糖的量的量的GLP-1受体激动剂。

70.一种用于在需要这种治疗的受试者治疗1型糖尿病的方法，所述方法包括给予所述受试者有效治疗1型糖尿病和减少所述受试者患有的低血糖或低血糖发作的持续时间的量的GLP-1受体激动剂。

71.实施方案62或66的方法，其中所述受试者在一段时间患有的低血糖或低血糖发作的所述数量，与给予所述GLP-1受体激动剂之前所述受试者经相同的时间段患有的低血糖或低血糖发作数量相比较得到减少。

72.实施方案70的方法，其中时间段为1年。

73.前述实施方案中任一个的方法，其中所述减少为与用GLP-1受体激动剂治疗之前的受试者相比较。

74.前述实施方案中任一个的方法，其中所述减少为与不包含GLP-1受体激动剂的安慰剂组相比较。

75.前述实施方案中任一个的方法，其中所述减少为至少5％，比如至少10％或至少15％。

76.前述实施方案中任一个的方法，其中GLP-1受体激动剂为GLP-1片段、衍生物或类似物。

77.前述实施方案中任一个的方法，其中GLP-1受体激动剂与GLP-1(7-37)相比较包含不多于5个，比如不多于4个或不多于3个已被替换、插入或缺失的氨基酸残基。

78.前述实施方案中任一个的方法，其中GLP-1受体激动剂选自：GLP-1(7-37)、GLP-1(7-36)酰胺、艾塞那肽、艾塞那肽LAR、利拉糖肽、索马鲁肽、他司鲁肽、阿必鲁肽、利司那肽和杜拉鲁肽。

79.前述实施方案中任一个的方法，其中GLP-1受体激动剂为利拉糖肽。

80.前述实施方案中任一个的方法，其用于治疗与1型糖尿病的胰岛素疗法有关的低血糖或低血糖发作。

81.前述实施方案中任一个的方法，其中GLP-1受体激动剂用于治疗或预防一种或多种另外的与1型糖尿病的胰岛素疗法有关的症状，其中所述一种或多种另外的与1型糖尿病的胰岛素疗法有关的症状可选自：血糖控制降低、胰岛素缺乏和肥胖。

82.前述实施方案中任一个的方法，其中在患有1型糖尿病的患者治疗或预防低血糖或低血糖发作包括治疗或预防一种或多种选自以下的症状或由治疗或预防一种或多种选自以下的症状组成：低血糖、总体低血糖发作、夜间低血糖发作和日间低血糖发作。

83.前述实施方案中任一个的方法，其中1型糖尿病呈现完全或部分胰岛素缺乏；和/或绝对的或基本上绝对的胰岛素缺乏。

84.前述实施方案中任一个的方法，其中GLP-1受体激动剂与药学上可接受的载体、媒介物、稀释剂和/或赋形剂一起配制。

85.前述实施方案中任一个的方法，其中GLP-1受体激动剂用于与一种或多种另外的抗糖尿病药物比如胰岛素组合使用。

86.前述实施方案中任一个的方法，其中所述方法和/或GLP-1受体激动剂如本文定义的那样。

实施方案的另外非限制性列表

1.一种在治疗或预防患有1型糖尿病的患者的低血糖或低血糖发作中应用的GLP-1受体激动剂。

2.根据实施方案1应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂适合于每天一次给予。

3.根据实施方案1应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂适合于每周一次给予。

4.根据实施方案1应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂为GLP-1片段、衍生物或类似物。

5.根据实施方案1应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1衍生物或类似物选自：GLP-1(7-37)、GLP-1(7-36)酰胺、艾塞那肽艾塞那肽LAR利拉糖肽索马鲁肽、他司鲁肽、阿必鲁肽、利司那肽和杜拉鲁肽。

6.根据实施方案1应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1衍生物或类似物选自：利拉糖肽和索马鲁肽。

7.根据实施方案1应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1衍生物或类似物为长效GLP-1衍生物或类似物。

8.根据实施方案7应用的GLP-1受体激动剂，其中长效GLP-1衍生物或类似物选自：利拉糖肽索马鲁肽、他司鲁肽、阿必鲁肽、他司鲁肽、杜拉鲁肽和艾塞那肽LAR。

9.根据实施方案7应用的GLP-1受体激动剂，其中长效GLP-1衍生物或类似物为利拉糖肽(Victoza^TM)。

10.根据实施方案7应用的GLP-1受体激动剂，其中长效GLP-1衍生物或类似物为索马鲁肽。

11.根据前述实施方案中任一个的GLP-1受体激动剂，所述GLP-1受体激动剂用于治疗与1型糖尿病的胰岛素疗法有关的低血糖或低血糖发作。

12.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂用于治疗或预防一种或多种另外的与1型糖尿病的胰岛素疗法有关的症状。

13.根据实施方案12应用的GLP-1受体激动剂，其中一种或多种另外的与1型糖尿病的胰岛素疗法有关的症状选自：血糖控制降低、胰岛素缺乏和肥胖。

14.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中在患有1型糖尿病的患者治疗或预防低血糖或低血糖发作包括治疗或预防一种或多种选自以下的症状或由治疗或预防一种或多种选自以下的症状组成：低血糖、总体低血糖发作、夜间低血糖发作和日间低血糖发作。

15.根据实施方案14应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂能够减少总体夜间低血糖发作。

16.根据实施方案14应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂能够减少夜间低血糖发作的持续时间。

17.根据实施方案14应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂能够减少总体夜间低血糖发作至少25％，例如30％、35％或40％。

18.根据实施方案14应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂能够减少总体夜间低血糖发作至少31％。

19.根据实施方案14应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂能够减少总体夜间低血糖发作至少35％。

20.根据实施方案14应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂能够减少总体夜间低血糖发作至少39％。

21.根据实施方案18应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂的剂量为0.6mg/天。

22.根据实施方案19应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂的剂量为1.2mg/天。

23.根据实施方案20应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂的剂量为1.2mg/天。

24.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂能够减少自低血糖发作恢复需要的外源性葡萄糖的量和/或减少血糖波动的严重程度。

25.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中当以1.2mg/mL每天一次的剂量给予时，GLP-1受体激动剂能够减少用于低血糖发作后恢复需要的外源性葡萄糖的量至少19％。

26.根据实施方案1-24中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中当以0.6mg/mL每天一次的剂量给予时，GLP-1受体激动剂能够减少用于低血糖发作后恢复需要的外源性葡萄糖的量至少23％。

27.根据实施方案1-24中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中相对于安慰剂组，当以1.8mg/mL每天一次的剂量给予时，GLP-1受体激动剂能够减少用于低血糖发作后恢复需要的外源性葡萄糖的量至少约37％。

28.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂以足以减少患者自低血糖发作恢复的外源性葡萄糖需求的剂量给予。

29.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂以足以最大限度地减少患者自潜在低血糖发作恢复的外源性葡萄糖需求的剂量给予。

30.根据实施方案1-4和11-29中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂为索马鲁肽。

31.根据实施方案1-4和11-29中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中所给予的GLP-1受体激动剂为利拉糖肽，并且足以最佳地在患者减少自潜在低血糖发作恢复的外源性葡萄糖需求的剂量为在0.6mg每天-1.8mg每天之间(例如在0.6mg-1.2mg每天之间)。

32.根据实施方案1-4和11-29中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂为利拉糖肽，并且足以最佳地在患者减少自潜在低血糖发作恢复的外源性葡萄糖需求的剂量选自0.6mg每天、1.2mg每天和1.8mg每天。

33.根据实施方案1-4和11-29中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂以0.6mg/mL每天一次的剂量给予，以减少患者自低血糖发作恢复的外源性葡萄糖需求。

34.根据实施方案1-4和11-29中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂以1.2mg/mL每天一次的剂量给予，以减少患者自低血糖发作恢复的外源性葡萄糖需求。

35.根据实施方案1-4和11-29中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂以1.8mg/mL每天一次的剂量给予，以减少患者自低血糖发作恢复的外源性葡萄糖需求。

36.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中1型糖尿病呈现完全或部分胰岛素缺乏。

37.根据实施方案1-36中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中1型糖尿病呈现绝对的或基本上绝对的胰岛素缺乏。

38.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂与药学上可接受的载体、媒介物、稀释剂和/或赋形剂一起配制。

39.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂用于大于1天的治疗期(例如2天或至少2天的时间段、3天或至少3天的时间段、4天或至少4天的时间段、5天或至少5天的时间段、6天或至少6天的时间段、1周或至少1周的时间段、2周或至少2周的时间段、3周或至少3周的时间段、4周或至少4周的时间段、1个月或至少1个月的时间段、2个月或至少2个月的时间段、3个月或至少3个月的时间段、4个月或至少4个月的时间段、5个月或至少5个月的时间段、6个月或至少6个月的时间段、以及连续或不确定的时间段)。

40.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂用于每天治疗。

41.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂用于每周治疗。

42.根据前述实施方案中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中GLP-1受体激动剂用于与一种或多种另外的抗糖尿病药物组合使用。

43.根据实施方案42应用的GLP-1受体激动剂，其中一种或多种其它或另外的药物与所使用的GLP-1受体激动剂同时或连续给予。

44.根据实施方案43应用的GLP-1受体激动剂，其中一种或多种另外的抗糖尿病药物与供使用的GLP-1受体激动剂同时或连续给予。

45.根据实施方案44应用的GLP-1受体激动剂，其中一种或多种另外的抗糖尿病药物与用于相同制剂的GLP-1受体激动剂同时给予。

46.根据实施方案42-45中任一个应用的GLP-1受体激动剂，其中一种或多种另外的抗糖尿病药物选自：胰岛素和敏化剂(比如双胍类和噻唑烷二酮类)。

47.根据实施方案46应用的GLP-1受体激动剂，其中一种或多种抗糖尿病药物为或包括胰岛素。

48.GLP-1激动剂在制备药物中的用途，所述药物用于在患有1型糖尿病的患者治疗或预防低血糖或低血糖发作。

49.一种在患有1型糖尿病的患者治疗或预防低血糖或低血糖发作的方法，该方法包括给予需要治疗的个体有效量的GLP-1激动剂。

实施例

本发明现借助以下实施例和图更详细地进行描述。

缩写

CGM＝连续葡萄糖监测

IG＝间质葡萄糖

PDE＝暴露的人天

实施例A-利拉糖肽在1型糖尿病中作为胰岛素的辅助：在随机、双盲交叉试验中对血糖控制和安全性的影响

介绍

在1型糖尿病受试者的小规模研究和单病例报告表明，用GLP-1激动剂¹比如利拉糖肽^2，3治疗可导致：

-改善血糖控制

-减少葡萄糖波动

-降低低血糖的频率

-减少胰岛素需求

-重量减轻

在研究低血糖性夹钳期间辅助胰岛素的利拉糖肽治疗对反调节反应的影响的试验中，我们还评价了4周治疗期期间的血糖控制和安全性。

方法

45名患有1型糖尿病的成年人以交叉设计，随机分配至3个辅助胰岛素的利拉糖肽或者辅助胰岛素的安慰剂剂量组中的1个和2个顺序(利拉糖肽/安慰剂或安慰剂/利拉糖肽)中的1个，并且在治疗之间具有间歇期(图1)。

利拉糖肽的起始剂量为0.6mg/天，每周增加0.6mg，直到达到目标剂量。受试者接受目标剂量最少2周。

在治疗4周后，评价胰岛素剂量、HbA1c、脉搏和体重方面估计的治疗差异。在整个治疗期评价低血糖和低血糖发作以及总体安全参数。

结果

所有结果为辅助胰岛素的利拉糖肽与辅助胰岛素的安慰剂组相比较。基线的受试者特征在组间类似(表1)。

胰岛素剂量

每天的胰岛素剂量用1.2mg利拉糖肽减少27％(p＜0.001)和用1.8mg利拉糖肽减少24％(p＜0.001)。在利拉糖肽0.6mg和安慰剂组之间未见差异(图2)。

HbA1c

与安慰剂组相比较，对利拉糖肽可见，基线和治疗4周后的HbA1c变化没有变化并且没有差异。

低血糖和/或低血糖发作

低血糖和/或低血糖发作按照ADA低血糖分类定义和评价(图3)。

在整个治疗可见患有低血糖的受试者数量或低血糖的数量没有系统性差异。在整个治疗可见患有低血糖发作的受试者数量或低血糖发作的数量没有系统性差异。低血糖或低血糖发作均不严重(表2)。

不良事件

与安慰剂组相比较，在利拉糖肽治疗期间不良事件(AEs)的数量更高(表3)。

差异是由于对利拉糖肽有更多的胃肠(GI)AEs。可见随着剂量增大GIAEs的数量增加。恶心是最常见的报道。所有的GIAEs严重性为轻度或中度。

生命体征

在该试验期间未见报道生命体征的临床上重要发现(包括血压、脉搏和体温)。

体重

与安慰剂组相比较，对所有利拉糖肽组可见体重方面统计学显著的减少。估计的治疗差异：0.6mg组＝-2.0kg，p＜0.001；1.2mg组＝-3.7kg，p＜0.001；1.8mg组＝-3.3kg，p＜0.001(图4)。

结论

在用1.2mg和1.8mg利拉糖肽治疗后胰岛素剂量显著减少表明，辅助胰岛素的利拉糖肽对1型糖尿病具有可助于血糖控制的药理作用。辅助胰岛素的利拉糖肽不影响低血糖的数量或低血糖发作的总体数量。

在患有1型糖尿病的受试者的这项短期试验中，没有确认意想不到的利拉糖肽相关的安全性或耐受性问题。

对利拉糖肽观察到的重量减轻对患有1型糖尿病的受试者具有潜在的临床益处。

参考文献

1)Kielgastetal.Diabetes2011；60(5)：1599-1607；

2)Kielgastetal.DiabetesCare2011；34(7)：1463-1468；

3)Varanasietal.EurJEndocrinol2011；165(1)：77-84。

实施例B-利拉糖肽作为胰岛素的辅助对1型糖尿病的低血糖的反调节激素反应的影响：一项随机、双盲交叉试验

介绍

基于肠促胰岛素的疗法可降低患有1型糖尿病的受试者的胰高血糖素水平^1-3。

胰高血糖素为一种低血糖的重要反调节激素，但是在患有1型糖尿病的受试者可能缺乏胰高血糖素的低血糖反应⁴。如果胰高血糖素反应由于用GLP-1受体激动剂比如GLP-1类似物治疗受到进一步损害，其可能为利拉糖肽作为胰岛素治疗的辅助的安全使用的限制因素。

该试验用于研究用作为胰岛素治疗的辅助的利拉糖肽治疗4周后，对患有1型糖尿病的受试者的低血糖的反调节激素反应。

方法

45名患有1型糖尿病的成年人以交叉设计，随机分配至3个辅助胰岛素的利拉糖肽或辅助胰岛素的安慰剂剂量组中的1个，以及2个顺序(利拉糖肽/安慰剂或安慰剂/利拉糖肽)中的1个，并且在治疗之间具有间歇期(图1)。

在每个治疗期结束时，经控制的i.v.胰岛素/葡萄糖输注实施逐步的低血糖性夹钳(图5)。连续的血浆葡萄糖(PG)水平为5.5、3.5、2.5mmol/L(最低点(nadir))和4.0mmol/L(恢复)。在夹钳期间，于每个连续的PG水平测量反调节激素(胰高血糖素、肾上腺素、去甲肾上腺素、皮质醇和生长激素)和生命体征(脉搏、血压)。葡萄糖输注速率也进行评价。

结果

所有结果为辅助胰岛素的利拉糖肽与辅助胰岛素的安慰剂组相比较。基线的受试者特征在组间类似：年龄：34.5±11.2岁，BMI：23.9±2.4kg/m²，HbA1c：7.6±0.8％，糖尿病病程：16.6±9.4年[平均值±SD](参见表1)。

反调节反应

在所有组可见胰高血糖素的低血糖反应很少，在治疗之间没有系统性差异(图6)。

在最低点PG，对于利拉糖肽相对于安慰剂组未见胰高血糖素的显著差异：0.6mg组＝0.91[0.66；1.25]，1.2mg组＝0.77[0.56；1.08]，1.8mg组＝0.76[0.55；1.05](比率[95％CI])。然而，在1.2mg和1.8mg组，在最低点和其它PG水平，胰高血糖素水平呈下降趋势(图6)。

可见低血糖的其它反调节激素的浓度增大，但是在利拉糖肽和安慰剂组之间未观察到系统性差异(图7)。

生命体征

与安慰剂组相比较，对于所有利拉糖肽剂量，在所有的血浆葡萄糖水平脉搏明显更高。然而，当查看脉搏(每分钟心跳次数[BPM])的变化，在利拉糖肽和安慰剂组之间，从血浆葡萄糖水平5.5mmol/L至最低点水平没有显著差异：0.6mg组＝0.6BPM[-5.5；6.7]，1.2mg组＝2.3BPM[-4.0；8.7]，1.8mg组＝-3，4BPM[-9.6；2.9](估计的治疗差异[95％CI])。在低血糖性夹钳期间，在利拉糖肽和安慰剂组之间收缩压和舒张压没有系统性差异。

葡萄糖输注速率

在低血糖性夹钳期间对于葡萄糖输注速率的曲线下面积，与安慰剂组相比较，对于所有利拉糖肽剂量组明显更低：0.6mg组＝0.76[0.62；0.93]p＝0.010，1.2mg组＝0.81[0.66；1.00]p＝0.047，1.8mg组＝0.63[0.51；0.77]p＜0.001(比率[95％CI]p-值)(图8)。

低血糖和/或低血糖发作的数量

通过负二项回归模型分析低血糖事件(定义为IG≤3.9mmol/L)的数量，log连接函数和log(CGM的持续时间[天])作为补偿。模型包括治疗和周期作为固定因素和受试者作为随机效应。CGM＝连续葡萄糖监测；IG＝间质葡萄糖；PDE＝暴露的人天。结果显示在图9中。

在所有剂量，对利拉糖肽相对于安慰剂组在连续葡萄糖监测期间低于3.9mmol/L的低血糖(hypos)的数量较低，对于1.2mg是统计学显著的。估计为0.65，如在图9中可见的那样，这相当于利拉糖肽1.2mg相对于安慰剂组的低血糖数量降低35％。然而，0.6(0.69＝低31％)非常接近统计学显著性。1.8mg利拉糖肽(0.61＝低39％)显著性水平设置为p＝0.050。

对于所有利拉糖肽组看到较低数量的低血糖值≤3.9mmol/L；对于利拉糖肽1.2mg，与安慰剂组相比较，数量统计学上显著更低(1.1相对于1.7个事件每1个患者天暴露，p＝0.044)。对于数值＜3.1mmol/L看到类似的结果。

低血糖和/或低血糖发作的持续时间

分析CGM期间低血糖发作(IG≤3.9mmol/L)的持续时间，并且结果显示在图10中。利拉糖肽与安慰剂组相比较，低血糖发作的持续时间得到减少。对于0.6mg和1.8mg剂量看到这种趋势，并且在1.2mg结果为统计学显著的，显著性水平设置为p＝0.050。

结论

在患有1型糖尿病的受试者，与低血糖的反调节反应有关的安全性问题没有随着作为胰岛素治疗的辅助的利拉糖肽而升高。

用辅助胰岛素的利拉糖肽治疗的患有1型糖尿病的受试者需要较少的葡萄糖以在整个低血糖性夹钳期间获得所选择的血浆葡萄糖水平。

用辅助胰岛素的利拉糖肽治疗的患有1型糖尿病的受试者有较少的低血糖发作。

用辅助胰岛素的利拉糖肽治疗的患有1型糖尿病的受试者有较短的低血糖发作持续时间。

参考文献

1)Kielgastetal.Diabetes2011；60(5)：1599-1607

2)Kielgastetal.DiabetesCare2011；34(7)：1463-1468

3)Varanasietal.EurJEndocrinol2011；165(1)：77-84

4)CryerPE.EndocrinolMetabClinNorthAm2010；39(3)：641-654.

实施例C-一般方法

以下方法可用于测定一个或多个关于本发明描述的因素。

体外效力(AlphaScreen，膜)

该测定的目的是体外测试GLP-1受体激动剂比如GLP-1衍生物的活性或者效力。GLP-1受体激动剂比如GLP-1衍生物的效力可如以下描述的那样，即作为含有表达人GLP-1受体的膜的培养基中环腺苷酸(cAMP)形成的刺激进行测定。

原理

来自稳定转染的细胞系BHK467-12A(tk-ts13)，表达人GLP-1受体的纯化质膜，用所讨论的GLP-1受体激动剂比如GLP-1类似物或衍生物刺激，并采用来自埃尔默珀金生命科学(PerkinElmerLifeSciences)的AlphaScreenTMcAMP测定试剂盒测量cAMP产生的效力。AlphaScreen测定的基本原理是内源性cAMP与外源性加入的生物素-cAMP之间的竞争。通过采用缀合于受体珠的特异性抗体实现cAMP的捕获。

细胞培养与膜的制备

选择稳定转染的细胞系和高表达克隆用于筛选。细胞在5％CO₂下，在DMEM、5％FCS、1％Pen/Strep(青霉素/链霉素)和0.5mg/ml的筛选标记G418中生长。以约80％融合的细胞用PBS洗涤两次，并用维尔烯(Versene)(乙二胺四乙酸四钠盐的水溶液)收获，以1000rpm离心5分钟并去除上清液。另外的步骤全部在冰上进行。细胞颗粒用Ultrathurax在10ml缓冲液1(20mMNa-HEPES，10mMEDTA，pH＝7.4)中均化20-30秒，以20000rpm离心15分钟，并把颗粒重新悬浮于10ml缓冲液2(20mMNa-HEPES，0.1mMEDTA，pH＝7.4)中。把悬浮液均化20-30秒，并以20000rpm离心15分钟。把悬浮于缓冲液2中、均化和离心重复一次，并把膜重新悬浮于缓冲液2中。测定蛋白浓度，并把膜储存于-80℃下直到使用。

在平底96-孔板(Costar目录号：3693)实施测定。每孔的最终体积为50μl。

溶液和试剂

来自埃尔默珀金生命科学(PerkinElmerLifeSciences)的AlphaScreencAMP测定试剂盒(目录号：6760625M)，含有抗-cAMP受体珠(10U/μl)、链霉亲和素供体珠(10U/μl)和生物素化的-cAMP(133U/μl)。AlphaScreen缓冲液(pH＝7.4)：50mMTris-HCl(Sigma，目录号：T3253)、5mMHEPES(Sigma，目录号：H3375)、10mMMgCl₂，6H₂O(默克公司(Merck)，目录号：5833)、150mMNaCl(Sigma，目录号：S9625)、0.01％吐温(默克公司(Merck)，目录号：822184)。使用前向AlphaScreen缓冲液加入以下(表示最终浓度)：BSA(Sigma，目录号A7906)：0.1％；IBMX(Sigma，目录号I5879)：0.5mM；ATP(Sigma，目录号A7699)：1mM；GTP(Sigma，目录号G8877)：1μM。

cAMP标准(测定的稀释因子＝5)：cAMP溶液：5μL的5mMcAMP-储备液+495μLAlphaScreen缓冲液。

制备cAMP标准以及要测试的GLP-1受体激动剂比如GLP-1类似物或衍生物在AlphaScreen缓冲液中的适当稀释系列，例如以下8个浓度的GLP-1化合物：10^-7、10^-8、10^-9、10^-10、10^-11、10^-12、10^-13和10^-14M，以及例如从10^-6至3x10^-11的cAMP系列。

膜/受体珠

自hGLP-1/BHK467-12A细胞制备膜，浓度为6μg/孔，相当于0.6mg/ml(每孔(pr.well)使用的膜量可以变化)。

“没有膜”：在AlphaScreen缓冲液中的受体珠(最终15μg/ml)

“6μg/孔膜”：在AlphaScreen缓冲液中的膜+受体珠(最终15μg/ml)向cAMP标准(每孔一式两份)及阳性和阴性对照组加入“没有膜”的等分试样(10μl)

向GLP-1和类似物(每孔一式两份或一式三份)加入“6μg/孔膜”的等分试样10μl

阳性对照组：10μl“没有膜”+10μlAlphaScreen缓冲液

阴性对照组：10μl“没有膜”+10μlcAMP储备溶液(50μM)

当珠对直射光敏感时，任何处理在黑暗中(尽可能地黑暗)或在绿光下。所有稀释在冰上进行。

程序

1.制备AlphaScreen缓冲液。

2.以AlphaScreen缓冲液溶解和稀释GLP-1/类似物/cAMP标准。

3.通过混合链霉亲和素供体珠(2单位/孔)和生物素化的cAMP(1.2单位/孔)制备供体珠溶液，并在室温下于黑暗中温育20-30分钟。

4.向板加入cAMP/GLP-1/类似物：每孔10μl。

5.制备膜/受体珠溶液，并向板加入该溶液：每孔10μl。

6.加入供体珠：每孔30μl。

7.以铝箔缠绕板，并在室温下于振动器上温育3小时(非常缓慢)。

8.在AlphaScreen上计数-每个板在计数前于AlphaScreen中预温育3分钟。

体外效力(CRE荧光素酶；全细胞)

该实施例的目的是体外测试GLP-1受体激动剂比如GLP-1衍生物的活性或者效力。体外效力为全细胞测定中人GLP-1受体激活的量度。该方法优选于以上描述的方法。

GLP-1受体激动剂比如GLP-1衍生物的效力可如以下描述的那样测定。

原理

通过在报告基因测定中，测量人GLP-1受体的反应测定体外效力。以表达人GLP-1受体并含有偶联于启动子的cAMP反应元件(CRE)的DNA和萤火虫荧光素酶(CRE荧光素酶)基因的稳定转染的BHK细胞系实施测定。当人GLP-1受体被激活，这导致产生cAMP，后者转而导致荧光素酶蛋白的表达。当测定温育完成时，加入荧光素酶底物(荧光素)，并且酶把荧光素转化为氧化荧光素，以产生生物体发光。发光作为测定的读数进行测量。

为了测试GLP-1受体激动剂比如衍生物与白蛋白的结合，在血清白蛋白不存在下以及在相当高浓度的血清白蛋白存在下实施测定(最终测定浓度1.0％)。体外效力、EC₅₀值在血清白蛋白存在下的增加表明与血清白蛋白的亲和力，并代表预测受试物质在动物模型的延长的药代动力学曲线的方法。

细胞培养和准备

用于该项测定的细胞(克隆FCW467-12A/KZ10-1)为BHK细胞，BHKTS13为母细胞系。细胞源于表达人GLP-1受体的克隆(FCW467-12A)，并通过用CRE荧光素酶进一步转染来建立，以获得目前的克隆。

细胞在细胞培养基中，在5％CO₂下进行培养。将其等分并储存于液氮下。每次测定前取出等分试样并以PBS洗涤两次，之后以期望的浓度悬浮于测定特异性缓冲液中。对于96-孔板，制备悬浮液，得到最终浓度为5x10³细胞/孔。

材料

测定中使用以下化学品：普朗尼克F-68(10％)(Gibco2404)、人血清白蛋白(HSA)(SigmaA9511)、卵清蛋白(SigmaA5503)、DMEMw/o酚红(Gibco11880-028)、1MHepes(Gibco15630)、Glutamax100x(Gibco35050)和steadyliteplus(珀金埃尔默(PerkinElmer)6016757)。

缓冲液

细胞培养基由含有10％FBS(胎牛血清；Invitrogen16140-071)、1mg/mlG418(Invitrogen15140-122)、240nMMTX(甲氨蝶呤；SigmaM9929)和1％pen/strep(青霉素/链霉素；Invitrogen15140-122)的DMEM培养基组成。

测定培养基由DMEMw/o酚红、10mMHepes和1xGlutamax组成。1％测定用缓冲液由测定培养基中的2％卵清蛋白、0.2％普朗尼克F-68和2％HSA组成。0％测定用缓冲液由测定培养基中的2％卵清蛋白和0.2％普朗尼克F-68组成。

程序

1)把细胞储备液在37℃水浴下解冻。

2)把细胞以PBS洗涤3次。

3)计数细胞，并以测定培养基调节至5x10³细胞/50μl(1x10⁵细胞/ml)。把50μl的细胞等分试样转移至测定板的每个孔。

4)对于0％HSACRE荧光素酶测定以0％测定用缓冲液，和对于1％HSACRE荧光素酶测定用1％测定用缓冲液，把受试化合物和参比化合物的储备液稀释至0.2μM的浓度。化合物稀释10倍得到以下浓度：2x10^-7M、2x10^-8M、2x10^-9M、2x10^-10M、2x10^-11M、2x10^-12M、2x10^-13M和2x10^-14M。

5)把50μl的化合物或空白的等分试样从稀释板转移至测定板。在以下最终浓度测试化合物：1x10^-7M、1x10^-8M、1x10^-9M、1x10^-10M、1x10^-11M、1x10^-12M、1x10^-13M和1x10^-14M。

6)把测定板在37℃下于5％CO₂温育器温育3小时。

7)自温育器取出测定板，并使得在室温下放置15分钟。

8)把100μl的steadyliteplus试剂的等分试样加入到测定板的每孔中(试剂为光敏的)。

9)每个测定板用铝箔覆盖以避光，并在室温下振摇30分钟。

10)每个测定板以PackardTopCountNXT仪读取。

计算和结果

把来自TopCount仪的数据移至GraphPadPrism软件。软件进行非线性回归(log(激动剂)相对于反应)。

GLP-1受体结合

该实施例的目的是体外测试GLP-1受体激动剂比如GLP-1衍生物的受体结合活性。受体结合为GLP-1受体激动剂比如衍生物对于人GLP-1受体亲和力的量度。

原理

GLP-1受体激动剂比如GLP-1衍生物与人GLP-1受体的受体结合以竞争性结合测定来测量。在这种类型的测定中，标记的配体(在这种情况下¹²⁵I-GLP-1)结合于受体。每种GLP-1受体激动剂比如衍生物以一系列的浓度加入到含有人GLP-1受体的隔离膜，并监测所标记配体的置换。作为自受体置换一半所标记的配体的浓度(IC₅₀值)报告受体结合。为了测试GLP-1受体激动剂比如衍生物与白蛋白的结合，在非常低的血清白蛋白浓度(最终测定浓度最大为0.001％)以及在相当高浓度的血清白蛋白(最终测定浓度2.0％)存在下进行测定。在血清白蛋白存在下的IC₅₀值增大表明与血清白蛋白的亲和力，并代表预测受试物质在动物模型的延长的药代动力学曲线的方法。

材料

测定中使用以下化学品：人血清白蛋白(HSA)(SigmaA1653)、DMEMw/o酚红(Gibco11880-028)、Pen/strep(Invitrogen15140-122)、G418(Invitrogen10131-027)、1MHepes(Gibco15630)、EDTA(Invitrogen15575-038)、PBS(Invitrogen14190-094)、胎牛血清(Invitrogen16140-071)、EGTA、MgCl₂(默克公司(Merck)1.05832.1000)、吐温20(Amresco0850C335)、SPA粒子(麦胚凝集素(WGA)SPA珠，珀金埃尔默(PerkinElmer)RPNQ0001)、[¹²⁵I]-GLP-1]-(7-36)NH₂(内部产生)、OptiPlate^TM-96(Packard6005290)。缓冲液1由20mMNa-HEPES加上10mMEDTA组成，并把pH调节至7.4。缓冲液2由20mMNa-HEPES加上0.1mMEDTA组成，并把pH调节至7.4。测定用缓冲液由用5mMEGTA、5mMMgCl₂、0.005％吐温20补充的50mMHEPES组成，并把pH调节至7.4。8％白蛋白储备液由以8％(w/v)溶解于测定用缓冲液的HSA组成。0.02％白蛋白储备液由以0.02％(w/v)溶解于测定用缓冲液的HSA组成。

细胞培养与膜制备

用于该项测定的细胞(克隆FCW467-12A)为BHK细胞，BHKTS13为母细胞系。细胞表达人GLP-1受体。细胞在5％CO₂下，在DMEM、10％胎牛血清、1％Pen/Strep(青霉素/链霉素)和1.0mg/ml的筛选标记G418中生长。为了进行膜制备，使细胞生长至约80％融合。细胞用磷酸盐缓冲盐水洗涤两次并收获。细胞采用短暂的离心使成颗粒，并把细胞颗粒保持在冰上。细胞颗粒用ULTRA-THURRAX^TM分散仪在适量的缓冲液1(例如10ml)中均化20-30秒。把匀浆离心15分钟。把颗粒重新悬浮(均化)于10ml缓冲液2中并离心。把该步骤再重复一次。把生成的颗粒重新悬浮于缓冲液2中，并测定蛋白浓度。把膜等分，并储存于-80℃下。

程序

1.对于受体结合测定，在低的HSA(0.005％)存在下，把50μl的测定用缓冲液加入到测定板的每孔中。测定继续步骤3。

2.对于受体结合测定，在高的HSA(2％)存在下，把50μl的8％白蛋白储备液加入到测定板的每孔中。测定继续步骤3。

3.受试化合物进行连续稀释以得到以下浓度：8x10^-7M、8x10^-8M、8x10^-9M、8x10^-10M、8x10^-11M、8x10^-12M和8x10^-13M。向测定板的适当孔中加入25μl。

4.把细胞膜等分试样解冻，并稀释至其工作浓度。向测定板的每孔中加入50μl。

5.把WGASPA珠以20mg/ml悬浮于测定用缓冲液中。就在加入到测定板之前以测定用缓冲液把悬浮液稀释至10mg/ml。向测定板的每孔中加入50μl。

6.通过向测定板的每孔中加入25μl的480pM[¹²⁵I]-GLP-1]-(7-36)NH₂溶液开始温育。25μl的等分试样保存用于测量总计数/孔。

7.测定板在30℃下温育2小时。

8.把测定板离心10分钟。

9.在PackardTopCountNXT仪读取测定板。

计算

把来自TopCount仪的数据移至GraphPadPrism软件。软件把平行测定的数值求平均值，并进行非线性回归。用软件计算IC₅₀值，并以nM报告。

在db/db小鼠的药效学研究

这项研究的目的是验证在糖尿病背景下GLP-1受体激动剂比如GLP-1衍生物对血糖(BG)和体重(BW)的急性效应。

如以下描述的那样，在肥胖的、糖尿病小鼠模型(db/db小鼠)，以剂量-反应研究测试GLP-1受体激动剂比如GLP-1衍生物。

对于这项研究，每个要测试的化合物登记56只约10周龄的db/db小鼠(来自Taconic，丹麦)，自出生开始用饮食NIH31(NIH31M啮齿动物食物，可市售得自TaconicFarms，Inc.，US，参见www.taconic.com)喂饲。小鼠自由进食标准饲料(例如Altromin1324，Brogaarden，根措夫特(Gentofte)，丹麦)和自来水，并保持在24℃下。在适应1-2周后，连续2天(即在上午9点)评价基础血糖两次。具有最低血糖值的8只小鼠自试验中排除。基于平均血糖值，选择剩余的48只小鼠用于进一步试验，并分配至与血糖水平和体重相匹配的8个组(n＝6)。小鼠用于持续时间48小时和最多4次的试验，在最后一次试验后，把小鼠实施安乐死。

8个组可接受如下的治疗：1：媒介物，s.c.；2：GLP-1受体激动剂(例如GLP-1衍生物)，0.3nmol/kg，s.c.；3：GLP-1受体激动剂(例如GLP-1衍生物)，1.0nmol/kg，s.c.；4：GLP-1受体激动剂(例如GLP-1衍生物)，3.0nmol/kg，s.c.；5：GLP-1受体激动剂(例如GLP-1衍生物)，10nmol/kg，s.c.；6：GLP-1受体激动剂(例如GLP-1衍生物)，30nmol/kg，s.c.；7：GLP-1受体激动剂(例如GLP-1衍生物)，100nmol/kg，s.c.；8：GLP-1受体激动剂(例如GLP-1衍生物)，300nmol/kg，s.c.。小鼠组数和具体剂量必须视情况而定。

媒介物：50mM磷酸钠、145mM氯化钠、0.05％吐温80(pH7.4)。把GLP-1受体激动剂(例如GLP-1衍生物)溶于媒介物中，至浓度为0.05、0.17、0.5、1.7、5.0、17.0和50nmol/ml。s.c.给予动物6ml/kg的剂量-体积(即300μl每50g小鼠)。

在给药当天，于-1/2小时(上午8.30)评价血糖，之后把小鼠称重。在约上午9点(时间为0)时给予GLP-1受体激动剂(例如GLP-1衍生物)。

在给药当天，于1、2、4和8h(上午10点、上午11点、下午1点和下午5点)时评价血糖。

在接下来的日子里，在给予后24和48小时(其它时间段，可包括72和96小时)时(即在第2和3天(并且也许是第4和5天)的上午9点)评价血糖。在每一天，把小鼠在血糖抽样后称重。

把小鼠在数字秤上单独称重。

用于测量血糖的样品得自有意识小鼠的尾尖毛细血管。把10μl血液收集至肝素化毛细管，并转移至500μl葡萄糖缓冲液(EKF系统溶液，埃普多夫(Eppendorf)，德国)。葡萄糖浓度采用葡萄糖氧化酶法(葡萄糖分析仪Biosen5040，EKFDiagnostic，GmbH，巴尔莱本(Barleben)，德国)测量。样品在室温下保持最多1小时直到分析。如果分析不得不推迟，把样品在4℃下保持最多24小时。

ED₅₀为引起半数最大效应的以nmol/kg表示的剂量。该值如下文所解释的那样基于GLP-1受体激动剂(例如衍生物)降低体重的能力以及降低血糖的能力计算。

对于体重的ED₅₀作为在皮下给予GLP-1受体激动剂(例如衍生物)后deltaBW24小时引起半数最大效应的剂量来计算。例如，如果24小时后体重的最大减少为2.0g，那么ED₅₀体重应为24小时后引起体重减少1.0g的以nmol/kg表示的剂量。该剂量(ED₅₀体重)可自剂量-反应曲线读取。

对于血液葡萄糖的ED₅₀作为皮下给予GLP-1受体激动剂(例如类似物)后AUCdeltaBG24小时和/或48小时引起半数最大效应的剂量来计算。

ED₅₀值仅可在存在适当的具有清晰定义的最大响应的S形剂量-反应关系时进行计算。因此，如果不是这种情况，所讨论的GLP-1受体激动剂(例如衍生物)在不同的剂量范围内重新测试，直到获得S形剂量-反应关系。

在小型猪的药代动力学研究

该项研究的目的是测定GLP-1受体激动剂比如GLP-1衍生物在i.v.给予小型猪后的体内延长，即其在体内时间，从而为其作用时间的延长。这以药代动力学(PK)研究进行，其中测定所讨论的GLP-1受体激动剂(例如衍生物)的终末半衰期。终末半衰期通常意指初始分布阶段后测量的使一定血浆浓度减半花费的时间段。

研究A：得自(Dalmose，丹麦)，约7-14个月龄和体重约16-35kg的雄性小型猪用于这项研究。小型猪单独(猪具有永久性导管)或成群居住，并且有限制地每天一次或两次喂饲SDS小型猪饲料(特殊饮食服务(SpecialDietsServices)，埃塞克斯(Essex)，UK)。

在适应至少2周后，在每只动物的腔静脉尾部(venacavacaudalis)或颅植入两个永久性中央静脉导管。使动物在手术后恢复1周，并然后用于重复的药代动力学研究，在连续的给予GLP-1受体激动剂(例如GLP-1衍生物)之间具有适当的间歇期。

把GLP-1受体激动剂比如GLP-1衍生物溶于50mM磷酸钠、145mM氯化钠、0.05％吐温80(pH7.4)中，至浓度通常为20-60nmol/ml。通过一个导管或通过venflon给予静脉注射化合物(体积通常相当于1-2nmol/kg，例如0.033ml/kg)，并在预定的时间点采集血样，直到给药后13天(优选地通过另一个导管或经静脉穿刺)。以EDTA缓冲液(8mM)收集血液样品(例如0.8ml)，并然后在4℃和1942G下离心10分钟。

研究B：得自(Dalmose，丹麦)，约5个月龄和体重约9kg的雄性小型猪用于这项研究。小型猪棚圈式居住，稻草为床，每个棚圈6只一起，并且有限制地每天一次或两次喂饲Altromin9023小型猪饲料(Chr.PetersenA/S，DK-4100，Ringsted(灵斯泰兹))。猪用于重复的药代动力学研究，在连续的给予GLP-1受体激动剂(例如GLP-1衍生物)之间具有适当的间歇期。允许1周的适应期，期间小型猪被训练固定于背面，便于血液采样，和固定于索具，便于i.v.给药。动物的所有处理、给药和血液采样由训练有素和熟练的员工实施。

在给药前约18小时和给药后0-4小时将动物禁食，但是自始至终随意获得水。

把GLP-1受体激动剂比如GLP-1衍生物溶于50mM磷酸钠、145mM氯化钠、0.05％吐温80(pH7.4)中，至浓度通常为20-60nmol/ml。作为静脉注射经插入耳静脉的Venflon给予静脉注射化合物(体积通常相当于2nmol/kg，例如0.1ml/kg)，同时它们未经麻醉置于吊带中。剂量体积为0.1ml/kg，并在预定的时间点采集血样，直到给药后17天(自颈静脉用注射器采集样品)。以EDTA缓冲液(8mM)收集血液样品(例如0.8ml)，并然后在4℃和2000G下离心10分钟。

采样和分析(研究A和B)：把血浆移液至干冰上的微量管(Micronictubes)中，并保持在-20℃下，直到采用基于ELISA或类似抗体的测定比如LOCI或LC-MS分析相应GLP-1化合物的血浆浓度。通过非腔室模型，以WinNonlinv.5.0或Phoenixv.6.2(PharsightInc.，MountainView，CA，USA)或者用于PK分析的其它相关软件，分析个体的血浆浓度-时间曲线，并确定得到的终末半衰期(调和平均值)。

在LYD猪的药效学研究

该试验的目的是研究GLP-1受体激动剂比如GLP-1衍生物对猪食物摄取的影响。这以如以下描述的药效学(PD)研究进行，其中与媒介物治疗的对照组相比较，在给予单一剂量的GLP-1受体激动剂(例如GLP-1衍生物)后1-4天测量食物摄取。

采用约3个月龄、重约30-35kg的雌性LandraceYorkshireDuroc(LYD)猪(每组n＝3-4)。动物在适应动物设施期间成群居住约1周。在试验期间，为了测量单个食物摄取，给药之前和在整个试验期间把动物置于单个棚圈至少2天。动物在适应和试验阶段两者期间的所有时间随意喂饲猪饲料(Svinefoder，DanishTop)。通过每15分钟记录饲料重量，在线监测食物摄取。采用的系统为Mpigwin(EllegaardSystems，福堡(Faaborg)，丹麦)。

把GLP-1受体激动剂比如GLP-1衍生物，以12、40、120、400或1200nmol/ml的浓度(对应于0.3、1、3、10或30nmol/kg的剂量)，溶于磷酸盐缓冲液(50mM磷酸盐，0.05％吐温80，pH8；或50mM磷酸盐，145mM氯化钠，0.05％吐温80，pH7.4)中。磷酸盐缓冲液用作媒介物。动物在第1天的早上皮下单一剂量给予GLP-1受体激动剂(例如GLP-1衍生物)或媒介物(通常剂量体积为0.025ml/kg)，并在给药后测量食物摄取1-4天。在每个研究的最后一天、给药后1-4天，自麻醉动物的心脏采集血液样品，用于测量GLP-1受体激动剂(例如GLP-1衍生物)的血浆暴露。动物之后用心脏内过量的戊巴比妥实施安乐死。采用基于ELISA或类似抗体的测定或者LC-MS分析GLP-1受体激动剂(例如GLP-1衍生物)的血浆含量。

食物摄取作为24小时时间间隔(0-24h、24-48h、48-72h和72-96h)的24小时食物摄取的平均值±SEM计算。

采用双向ANOVA重复测量进行24小时时间间隔的媒介物相对于GLP-1受体激动剂(例如GLP-1衍生物)组的食物摄取的统计比较，随后进行邦弗朗尼事后检验(Bonferronipost-test)。

在大鼠的药代动力学研究

该实施例的目的是研究大鼠的体内终末半衰期。

如以下描述的那样，用目标GLP-1受体激动剂(例如GLP-1衍生物)实施大鼠的体内药代动力学研究。

体重约400g，相同年龄的雄性SpragueDawley大鼠得自Taconic(丹麦)，并基于体重通过简单随机分配给治疗组，每组约4只大鼠。把GLP-1受体激动剂(例如GLP-1衍生物)(约6nmol/ml)溶于50mM磷酸钠、145mM氯化钠、0.05％吐温80(pH7.4)中。通过植入右颈静脉的导管给予静脉注射(1.0ml/kg)化合物，或者它们经侧尾静脉IV给药。给药后5天自舌下静脉采集血样。以EDTA缓冲液(8mM)收集血液样品(200μl)，并然后在4℃和10000G下离心5分钟。把血浆样品保持在-20℃下，直到分析相应GLP-1化合物的血浆浓度。

采用基于ELISA或类似抗体的测定比如LOCI或LC-MS测定GLP-1化合物的血浆浓度。LOCI指的是发光氧通道免疫测定，其由Poulsen和Jensen在JournalofBiomolecularScreening2007，第12卷，第240-247页通常描述用于胰岛素的测定。供体珠包覆链霉亲和素，而受体珠与识别肽的中间-/C-末端表位的单克隆抗体缀合。将对N-末端特异性的另一种单克隆抗体生物素化。3种反应物与分析物组合，并形成两位点免疫复合物。复合物的发光自供体珠释放单线态氧原子，其被引导至受体珠中，并触发化学发光，这以Envision板读取器测量。光的量与化合物的浓度成正比。

通过非腔室模型，以WinNonlinv.5.0或Phoenixv.6.2(PharsightInc.，MountainView，CA，USA)或者用于PK分析的其它相关软件，分析个体的血浆浓度-时间曲线，并确定得到的终末半衰期(调和平均值)。

表

表1-基线的受试者特征在组间类似

数据作为平均值±SD呈现，除非另外指明。

缩写：n＝受试者的数量；U＝单位

表2-治疗期间的低血糖发作

缩写：E＝事件的数量；N＝受试者的数量；％＝受试者的百分数

重度：需要来自第三方帮助的事件

表3-试验期间的不良事件

缩写：AE＝不良事件；E＝事件的数量；GI＝胃肠的；N＝受试者的数量；％＝受试者的百分数

尽管本发明的某些特征本文已经说明和描述，但是现在，本领域的普通技术人员将会想到许多修饰、替换、变化和等价物。因此，应该理解，附加的权利要求打算包括处于本发明的真实精神范围内的所有这种修饰和变化。

Claims (15)

1.一种在治疗1型糖尿病中应用的GLP-1受体激动剂，其中所述应用包括减少：

i)低血糖或低血糖发作的数量；

ii)血糖波动的严重程度；

iii)用于自低血糖或低血糖发作恢复需要的外源性葡萄糖的量；和/或

iv)低血糖或低血糖发作的持续时间。

2.根据前述权利要求中任一项应用的GLP-1受体激动剂，其中所述应用包括减少低血糖或低血糖发作的数量。

3.根据前述权利要求中任一项应用的GLP-1受体激动剂，其中所述应用包括减少血糖波动的严重程度。

4.根据前述权利要求中任一项应用的GLP-1受体激动剂，其中所述应用包括减少自低血糖或低血糖发作恢复需要的外源性葡萄糖的量。

5.根据前述权利要求中任一项应用的GLP-1受体激动剂，其中所述应用包括减少低血糖或低血糖发作的持续时间。

6.根据前述权利要求中任一项应用的GLP-1受体激动剂，其中所述GLP-1受体激动剂用于与一种或多种另外的抗糖尿病药物比如胰岛素组合使用。

7.根据前述权利要求中任一项应用的GLP-1受体激动剂，其中受试者经过一段时间患有的低血糖的所述数量，与给予所述GLP-1受体激动剂之前所述受试者经相同的时间段患有的发作数量相比较得到减少。

8.根据前述权利要求中任一项应用的GLP-1受体激动剂，其中在前述权利要求中任一项定义的所述减少为用GLP-1受体激动剂治疗之前与给予GLP-1受体激动剂的受试者相比较。

9.根据前述权利要求中任一项应用的GLP-1受体激动剂，其中在前述权利要求中任一项定义的所述减少为至少5%，比如至少10%或至少15%。

10.根据前述权利要求中任一项应用的GLP-1受体激动剂，其中所述GLP-1受体激动剂为GLP-1片段、衍生物或类似物。

11.根据前述权利要求中任一项应用的GLP-1受体激动剂，其中所述GLP-1受体激动剂与GLP-1(7-37)相比较包含不多于5个，比如不多于4个或不多于3个已被替换、插入或缺失的氨基酸残基。

12.根据前述权利要求中任一项应用的GLP-1受体激动剂，其中所述GLP-1受体激动剂选自：GLP-1(7-37)、GLP-1(7-36)酰胺、艾塞那肽、艾塞那肽LAR、利拉糖肽、索马鲁肽、他司鲁肽、阿必鲁肽、利司那肽和杜拉鲁肽。

13.根据前述权利要求中任一项应用的GLP-1受体激动剂，其中所述受体激动剂为利拉糖肽。

14.根据前述权利要求中任一项应用的GLP-1受体激动剂，其中所述GLP-1受体激动剂与药学上可接受的载体、媒介物、稀释剂和/或赋形剂一起配制。

15.一种用于在用胰岛素治疗的受试者减少以下的方法：

i)所患的低血糖或低血糖发作的数量；

ii)所患的血糖波动的严重程度；

iii)自低血糖恢复需要的外源性葡萄糖的量；和/或

iv)低血糖或低血糖发作的持续时间，

所述方法包括给予所述受试者分别有效减少i)、ii)、iii)和/或iv)的量的GLP-1受体激动剂。