CN105309301A

CN105309301A - 鼓槌石斛种苗商品化生产方法

Info

Publication number: CN105309301A
Application number: CN201410392173.2A
Authority: CN
Inventors: 高燕; 白燕冰; 李泽生; 李桂琳; 李薇莎
Original assignee: Dehong Tropical Agriculture Institute of Yunnan
Current assignee: Dehong Tropical Agriculture Institute of Yunnan
Priority date: 2014-08-01
Filing date: 2014-08-01
Publication date: 2016-02-10
Anticipated expiration: 2034-08-01
Also published as: CN105309301B

Abstract

本发明公开了一种鼓槌石斛种苗商品化生产方法，属于植物生物技术领域。本发明是以鼓槌石斛的果荚为外植体，采用改良的Ma基本培养基，在培养各阶段添加去皮的马铃薯泥、香蕉泥，建立鼓槌石斛无菌快繁技术体系，包括良种选育、培养基制备、瓶苗培育、假植培育等相关技术，能有效解决了鼓槌石斛优良种苗的来源和种苗纯度性，与常规种苗组培快繁相比，种子萌发率提高到98％以上，生产成本降低20％，生长周期缩短了60天，污染率降低5％，炼苗、移栽成活率提高到95％以上，假植培育60～90天，可出售或移栽，与分株繁殖种苗种植相比，本发明培育鼓槌石斛种苗种植的每丛新抽生的幼苗增加5～7株。

Description

鼓槌石斛种苗商品化生产方法

技术领域

本发明涉及食药观植物鼓槌石斛种苗商品化生产方法，属于植物生物技术领域。

背景技术

鼓槌石斛(Dendrobiumchrysotoxum)为兰科石斛属多年生附生草本植物，别名金弓石斛，是一种集食、药、观赏为一身石斛种类，鼓槌石斛花呈金黄色，茎呈纺锤形，观赏价值极高，既可作切花和盆栽观赏，花又可开发系列鼓槌石斛茶、酒、鲜花饼等产品，鼓槌石斛花资源丰富，据报道含有22个化合物，具有美容明目、安神补血、抗癌解郁、降三高等功效；其茎可药用，具有清热解毒，增强免疫力等功效，由于鼓槌石斛资源花的差异大而颜色多，以唇瓣中心斑块颜色为紫红色最艳丽，茎的长短、粗细差异大而形态多，以中杆茎粗的品质及观赏最佳；近年来，人们过渡采挖，加上自然条件下种子萌发率极低，导致野生资源濒临枯竭，那么选择优良鼓槌石斛进行人工杂交授粉选育出新品种，进行组培快繁育苗，为鼓槌石斛规模化种植提供大量优质种苗，解决市场上原料紧缺，加快创新育种的进程，对其资源的保护及开发利用具有深远的意义。

近年来，有关鼓槌石斛组培繁殖有一些报道，通过组织培养试验也获得一定的组培苗，但在石斛规模化生产技术上，培育的种苗根细而少，种胚萌发率低75％，污染率高达10％，种苗繁殖周期长(8个月以上)，种苗生产成本高达1.2元/丛，因此，开展鼓槌石斛有性系的组培繁育研究，提高鼓槌石斛种苗商品化生产技术，还存在以下问题：

1、由于鼓槌石斛种质资源性状上差异较大，而在产量上遗传性比较稳定，茎、叶、花的生长差异明显，鼓槌石斛自然结果，在光照和水肥不足，果荚发育小而不好，品种的纯度性低，导致萌发率低、增殖速度慢、种苗质量差。

2、目前，鼓槌石斛种苗主要是采用分株繁殖，原材料浪费大，发芽率低，难以满足市场需求；而鼓槌石斛现有的组培技术，是以自然结果的果荚为外植体，种胚萌发率低、种苗生产速度慢、苗黄化严重、增殖倍数低等问题使种苗生产速度慢、生根苗质量差、炼苗和移栽成活率低、生长慢，极大的影响了鼓槌石斛种苗商品化生产的规模和速度。

加快鼓槌石斛种苗商品化生产速度，降低成本，提高移栽成活率、鲜花产量、增加花观赏价值及有效成份含量是急需解决的问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种鼓槌石斛人工有性杂交授粉育种，培育良种，种苗商品化生产速度快、生产成本低、自然光炼苗和假植培育成活率高、出圃率高的种苗商品化生产方法。

鼓槌石斛种苗商品化生产方法，包括以下方法步骤：

良种选育方法：

(1)优良母株选择：

鼓槌石斛的盛花期为4～5月，选择生长健壮花期长、花朵大而艳丽、植株形态美观、有效成分高的优良母株进行种内人工杂交异株异花授粉；

(2)杂交授粉方法：

①工具：直径6cm培养皿一套，7cm小镊子1把，75％酒精和棉球，套袋，标签；

②授粉方法：一般在早上10点以前，镊子用75％酒精消毒后，将花药取出放在培养皿中，再用镊子去掉母本上花朵的药帽，将父本的花药小心放入母本花朵的柱头窝内，每授一朵花，镊子、培养皿用75％酒精消毒后才能再使用，每穗花穗授粉5～8朵，授完粉后，用白色无纺布做成口袋套上，挂上标签，2～3天之内不能浇水，加强大田管理，保证充足阳光，提高果实的质量，一般经过150～180天果实成熟。

基本母液采用改良的MS(无水氯化钙、铁盐浓度减半、肌醇不用)为Ma的制备方法：大量元素配成50倍液(用量20毫克/升)，微量元素配成200倍液(用量5毫克/升)，植物激素配成50倍液，所有药剂用纯净水溶解定容，微量元素用低温保存，母液保存不要超过一个月。

培养基的配制方法：按培养基的配方要求，称取去皮的马铃薯或香蕉，按马铃薯或香蕉∶水(体积比)＝1∶3，用果汁机打碎成泥加入定容桶内，量取母液和激素、称取琼脂和白糖，按琼脂粉+白糖∶母液+水(混合，体积比)＝1∶5，用木棍边搅边加热至沸腾加入定容桶内，用纯净水定容，充分混合均匀，用1摩尔的NaOH(氢氧化钠)和HCl(盐酸)溶液调PH值5.8-6.0，将培养液倒入不锈钢桶内放在恒温磁力搅拌器(900～1000r/min)不停搅拌，用塑料杯趁热分装，分装标准：小瓶18～20瓶/L，大瓶9～10瓶/L；培养基厚度：小瓶1.4～1.6cm，大瓶2.0～2.2cm，在123～125℃高温下灭菌20分钟，出锅时拧紧瓶盖，标签注明培养基编号、日期，放置3天后备用。

瓶苗培育：

(1)外植体选择与消毒：

将成熟未开裂的果荚用0.01％洗衣粉冲洗干净后，经75％酒精浸泡60秒，用0.1％HgCl2(升汞)灭菌20分钟，然后用无菌水冲洗5～6次，过滤纸吸干水分；

(2)培养基与培养条件：

①原球茎诱导培养：切开消毒过的果荚，将种子接种于1/2Ma+NAA(α-萘乙酸)0.1毫克/升+2％马铃薯泥培养基上进行诱导培养，暗培养5d，再转入光照培养，5d后，种胚漫漫吸水膨大，逐渐撑破种皮，形成针尖样淡绿色原球茎，培养45天后，诱导大量的类原球茎或分化小苗；

②增殖分化培养：将分化的小苗接种于3/4Ma+6-BA(6-苄基腺嘌呤)0.1毫克/升+NAA0.2毫克/升+8％马铃薯泥+2％香蕉泥培养基中进行增殖分化培养，苗间距1.5～2cm，2～3株/丛，培养50天后，长成高2～3cm丛生苗，叶2～4片；

③壮苗生根培养：将2～3cm高的丛生苗接种于3/5Ma+IBA(吲哚丁酸)0.2毫克/升+NAA(c[-萘乙酸)0.5毫克/升+AC(活性炭)0.5克/升+3％马铃薯泥+7％香蕉泥培养基中进行壮苗生根培养，苗间距2～2.5cm，1～2株/丛，培养60天后，每丛苗高4～6cm，根长3-4cm，生根数6～8条/株；

④培养条件：白糖20克/升，琼脂粉4克/升，PH值5.8～6.0，培养温度25±2℃，光照强度1600～20001x，光照时间12小时/天。

假植培育：

(1)炼苗：选取生根苗株高3～5cm，根长3cm以上，将瓶苗置于荫蔽度75％的塑料大棚内炼苗20d，苗瓶之间间隔1～2cm，通风透气，控制好光照；

(2)栽培基质：杂木屑∶树皮屑∶腐质土(混合，体积比)＝1∶1∶1，假植前1-2d，将基质配比好，均匀铺在苗床上，苗床的标准(高80cm、宽120cm、长10m)，用0.1％～0.2％高锰酸钾等消毒液将基质淋透消毒处理，基质厚度为8～10cm，下层4cm为粗基质，上层4cm为细基质；

(3)移栽：移栽时将瓶苗取出，洗净根上附着的培养基，用0.05％精甲、咯菌腈+0.1％百毒剂+0.01％硫酸铜混合液浸泡10min，捞起放在透气塑料筐中晾干至根部发白后移栽，按3株/丛，株行距5cm×5cm，移栽时根基部与基质平，根不能外露，苗不能睡倒在基质上，根据天气情况，掌握浇水次数，保持基质湿润，控制好光照，移栽10d后，可结合浇水喷一些低浓度叶面肥，培育60～90d后即可出圃移栽；

(4)出圃：将抽新根发新叶达到标准的苗，轻轻拔起，不要伤根，按10丛/捆，用2cm宽的报纸条缠紧，整齐放进纸箱内，标明出苗日期和数量。

本发明技术方案具有以下有益效果：

选用鼓槌石斛良种进行快繁；采用改良的基本培养基Ma与标准基本培养基MS相比无水氯化钙、铁盐浓度减半、肌醇不用；附加物马铃薯和香蕉去皮直接打成泥，可减少用量，提高营养成分，琼脂粉、糖、母液加热至沸腾，有利于培养基均匀溶解，降低污染率，本方法有效解决了鼓槌石斛优良种苗的来源和种苗纯度性，与常规种苗组培快繁相比，种胚萌发率提高到98％以上，生产成本降低20％，生长周期缩短了60天，污染率降低5％，炼苗、移栽成活率提高到95％以上；种苗假植培育60～90天，可出售或规模化栽培，与分株繁殖种苗种植相比，本发明培育鼓槌石斛种苗种植的每丛新抽生的幼芽增加5～7株。

具体实施方式

鼓槌石斛种苗商品化生产方法，包括以下方法步骤：

良种选育方法：

(1)优良母株选择：

(2)杂交授粉方法：

瓶苗培育：

(1)外植体选择与消毒：

(2)培养基与培养条件：

③壮苗生根培养：将2～3cm高的丛生苗接种于3/5Ma+IBA(吲哚丁酸)0.2毫克/升+NAA(α-萘乙酸)0.5毫克/升+AC(活性炭)0.5克/升+3％马铃薯泥+7％香蕉泥培养基中进行壮苗生根培养，苗间距2～2.5cm，1～2株/丛，培养60天后，每丛苗高4～6cm，根长3-4cm，生根数6～8条/株；

假植培育：

Claims

1.鼓槌石斛种苗商品化生产方法，其特征在于以下步骤：

(1)良种选育方法：

以优良母株盛花期进行种内人工杂交异株异花授粉；

将父本的花药小心放入母本花朵的柱头窝内，授完粉后，套上袋，经过150-180天果实成熟；

(2)培养基制备方法：

采用MS为基本培养基(无水氯化钙、铁盐浓度减半、肌醇不用)改良基本母液为Ma；

去皮的马铃薯或香蕉打成泥，母液、琼脂、白糖加热至沸腾，充分混合均匀，出锅时拧紧瓶盖，放置3天后备用；

(3)瓶苗培育方法：

以果荚为外植体采用0.1％HgCl2(升汞)灭菌20分钟处理后；将种子接种于1/2Ma+NAA(α-萘乙酸)0.1毫克/升+2％马铃薯泥原球茎诱导培养上，进行诱导培养；

将分化的小苗接种于3/4Ma+6-BA(6-苄基腺嘌呤)0.1毫克/升+NAA(α-萘乙酸)0.2毫克/升+8％马铃薯泥+2％香蕉泥增殖分化培养中，进行增殖分化培养；

将2-3cm长的丛生苗接种于3/5Ma+IBA(吲哚丁酸)0.2毫克/升+NAA(α-萘乙酸)0.5毫克/升+AC(活性炭)0.5克/升+3％马铃薯泥+7％香蕉泥生根培养中，进行壮苗生根培养；

培养条件：白糖20克/升，琼脂粉4克/升，PH值5.8～6.0，培养温度25±2℃，光照强度1600～20001x，光照时间12小时/天；

(4)假植培育方法：

将瓶苗置于荫蔽度75％的塑料大棚内炼苗20天，通风透气，控制好光照；

基质配比为杂木屑∶树皮屑∶腐质土(混合，体积比)＝1∶1∶1，将混合基质均匀铺在苗床上，厚度8～10cm，用0.1％～0.2％高锰酸钾对基质消毒处理；

将清洗干净的生根苗用0.05％精甲、咯菌腈+0.1％百毒剂+0.01％硫酸铜混合液浸泡10分钟，晾干至根部发白后，按3株/丛，株行距5cm×5cm，移栽，加强水肥管理，控制好温度和光照，培育60～90天后即可出圃移栽；将苗拔起，按10丛/捆，用2cm宽的报纸条缠紧，装箱出圃。

2.根据权利要求1所述的一种鼓槌石斛种苗商品化生产方法，其特征在于：步骤1)中，所述良种选育方法是：以优良母株盛花期进行种内人工杂交异株异花授粉；将父本的花药小心放入母本花朵的柱头窝内，授完粉后，套上袋，经过150～180d果实成熟。

3.根据权利要求1所述的一种鼓槌石斛种苗商品化生产方法，其特征在于：步骤2)中，所述培养基的配制方法为：改良基本母液Ma，去皮的马铃薯或香蕉打成泥，母液、琼脂、白糖加热至沸腾，充分混合均匀，出锅时拧紧瓶盖。

4.根据权利要求1所述的一种鼓槌石斛种苗商品化生产方法，其特征在于：步骤3)中，所述瓶苗培育方法为：以果荚为外植体采用0.1％HgCl2(升汞)灭菌20分钟处理后；将种子接种于1/2Ma+NAA(α-萘乙酸)0.1毫克/升+2％马铃薯泥原球茎诱导培养上，进行诱导培养；将分化的小苗接种于3/4Ma+6-BA(6-苄基腺嘌呤)0.1毫克/升+NAA0.2毫克/升+8％马铃薯泥+2％香蕉泥增殖分化培养中，进行增殖分化培养；将2～3cm长的丛生苗接种于3/5Ma+IBA(吲哚丁酸)0.2毫克/升+NAA(α-萘乙酸)0.5毫克/升+AC(活性炭)0.5克/升+3％马铃薯泥+7％香蕉泥生根培养上，进行壮苗生根培养；所述培养条件为白糖20克/升，琼脂粉4克/升，PH值5.8～6.0，培养温度25±2℃，光照强度1600～20001x，光照时间12小时/天。

5.根据权利要求1所述的一种鼓槌石斛种苗商品化生产方法，其特征在于：步骤4)中，所术假植培育方法为：将瓶苗置于荫蔽度75％的塑料大棚内炼苗20天，通风透气，控制好光照；基质配比为树皮屑∶腐质土(混合，体积比)＝1∶1∶1，用0.1％～0.2％高锰酸钾对基质消毒处理；清洗的生根苗用0.05％精甲、咯菌腈+0.1％百毒剂+0.01％硫酸铜混合液浸泡10分钟，晾干至根部发白后，按3株/丛，株行距5cm×5cm，移栽，加强水肥管理，控制好温度和光照，培育60～90天后即可出圃移栽；将苗拔起，按10丛/捆，用2cm宽的报纸条缠紧，装箱出圃。