CN105309301A - 鼓槌石斛种苗商品化生产方法 - Google Patents

鼓槌石斛种苗商品化生产方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种鼓槌石斛种苗商品化生产方法,属于植物生物技术领域。本发明是以鼓槌石斛的果荚为外植体,采用改良的Ma基本培养基,在培养各阶段添加去皮的马铃薯泥、香蕉泥,建立鼓槌石斛无菌快繁技术体系,包括良种选育、培养基制备、瓶苗培育、假植培育等相关技术,能有效解决了鼓槌石斛优良种苗的来源和种苗纯度性,与常规种苗组培快繁相比,种子萌发率提高到98%以上,生产成本降低20%,生长周期缩短了60天,污染率降低5%,炼苗、移栽成活率提高到95%以上,假植培育60~90天,可出售或移栽,与分株繁殖种苗种植相比,本发明培育鼓槌石斛种苗种植的每丛新抽生的幼苗增加5~7株。

Description

鼓槌石斛种苗商品化生产方法
技术领域
本发明涉及食药观植物鼓槌石斛种苗商品化生产方法,属于植物生物技术领域。
背景技术
鼓槌石斛(Dendrobiumchrysotoxum)为兰科石斛属多年生附生草本植物,别名金弓石斛,是一种集食、药、观赏为一身石斛种类,鼓槌石斛花呈金黄色,茎呈纺锤形,观赏价值极高,既可作切花和盆栽观赏,花又可开发系列鼓槌石斛茶、酒、鲜花饼等产品,鼓槌石斛花资源丰富,据报道含有22个化合物,具有美容明目、安神补血、抗癌解郁、降三高等功效;其茎可药用,具有清热解毒,增强免疫力等功效,由于鼓槌石斛资源花的差异大而颜色多,以唇瓣中心斑块颜色为紫红色最艳丽,茎的长短、粗细差异大而形态多,以中杆茎粗的品质及观赏最佳;近年来,人们过渡采挖,加上自然条件下种子萌发率极低,导致野生资源濒临枯竭,那么选择优良鼓槌石斛进行人工杂交授粉选育出新品种,进行组培快繁育苗,为鼓槌石斛规模化种植提供大量优质种苗,解决市场上原料紧缺,加快创新育种的进程,对其资源的保护及开发利用具有深远的意义。
近年来,有关鼓槌石斛组培繁殖有一些报道,通过组织培养试验也获得一定的组培苗,但在石斛规模化生产技术上,培育的种苗根细而少,种胚萌发率低75%,污染率高达10%,种苗繁殖周期长(8个月以上),种苗生产成本高达1.2元/丛,因此,开展鼓槌石斛有性系的组培繁育研究,提高鼓槌石斛种苗商品化生产技术,还存在以下问题:
1、由于鼓槌石斛种质资源性状上差异较大,而在产量上遗传性比较稳定,茎、叶、花的生长差异明显,鼓槌石斛自然结果,在光照和水肥不足,果荚发育小而不好,品种的纯度性低,导致萌发率低、增殖速度慢、种苗质量差。
2、目前,鼓槌石斛种苗主要是采用分株繁殖,原材料浪费大,发芽率低,难以满足市场需求;而鼓槌石斛现有的组培技术,是以自然结果的果荚为外植体,种胚萌发率低、种苗生产速度慢、苗黄化严重、增殖倍数低等问题使种苗生产速度慢、生根苗质量差、炼苗和移栽成活率低、生长慢,极大的影响了鼓槌石斛种苗商品化生产的规模和速度。
加快鼓槌石斛种苗商品化生产速度,降低成本,提高移栽成活率、鲜花产量、增加花观赏价值及有效成份含量是急需解决的问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种鼓槌石斛人工有性杂交授粉育种,培育良种,种苗商品化生产速度快、生产成本低、自然光炼苗和假植培育成活率高、出圃率高的种苗商品化生产方法。
鼓槌石斛种苗商品化生产方法,包括以下方法步骤:
良种选育方法:
(1)优良母株选择:
鼓槌石斛的盛花期为4~5月,选择生长健壮花期长、花朵大而艳丽、植株形态美观、有效成分高的优良母株进行种内人工杂交异株异花授粉;
(2)杂交授粉方法:
①工具:直径6cm培养皿一套,7cm小镊子1把,75%酒精和棉球,套袋,标签;
②授粉方法:一般在早上10点以前,镊子用75%酒精消毒后,将花药取出放在培养皿中,再用镊子去掉母本上花朵的药帽,将父本的花药小心放入母本花朵的柱头窝内,每授一朵花,镊子、培养皿用75%酒精消毒后才能再使用,每穗花穗授粉5~8朵,授完粉后,用白色无纺布做成口袋套上,挂上标签,2~3天之内不能浇水,加强大田管理,保证充足阳光,提高果实的质量,一般经过150~180天果实成熟。
基本母液采用改良的MS(无水氯化钙、铁盐浓度减半、肌醇不用)为Ma的制备方法:大量元素配成50倍液(用量20毫克/升),微量元素配成200倍液(用量5毫克/升),植物激素配成50倍液,所有药剂用纯净水溶解定容,微量元素用低温保存,母液保存不要超过一个月。
培养基的配制方法:按培养基的配方要求,称取去皮的马铃薯或香蕉,按马铃薯或香蕉∶水(体积比)=1∶3,用果汁机打碎成泥加入定容桶内,量取母液和激素、称取琼脂和白糖,按琼脂粉+白糖∶母液+水(混合,体积比)=1∶5,用木棍边搅边加热至沸腾加入定容桶内,用纯净水定容,充分混合均匀,用1摩尔的NaOH(氢氧化钠)和HCl(盐酸)溶液调PH值5.8-6.0,将培养液倒入不锈钢桶内放在恒温磁力搅拌器(900~1000r/min)不停搅拌,用塑料杯趁热分装,分装标准:小瓶18~20瓶/L,大瓶9~10瓶/L;培养基厚度:小瓶1.4~1.6cm,大瓶2.0~2.2cm,在123~125℃高温下灭菌20分钟,出锅时拧紧瓶盖,标签注明培养基编号、日期,放置3天后备用。
瓶苗培育:
(1)外植体选择与消毒:
将成熟未开裂的果荚用0.01%洗衣粉冲洗干净后,经75%酒精浸泡60秒,用0.1%HgCl2(升汞)灭菌20分钟,然后用无菌水冲洗5~6次,过滤纸吸干水分;
(2)培养基与培养条件:
①原球茎诱导培养:切开消毒过的果荚,将种子接种于1/2Ma+NAA(α-萘乙酸)0.1毫克/升+2%马铃薯泥培养基上进行诱导培养,暗培养5d,再转入光照培养,5d后,种胚漫漫吸水膨大,逐渐撑破种皮,形成针尖样淡绿色原球茎,培养45天后,诱导大量的类原球茎或分化小苗;
②增殖分化培养:将分化的小苗接种于3/4Ma+6-BA(6-苄基腺嘌呤)0.1毫克/升+NAA0.2毫克/升+8%马铃薯泥+2%香蕉泥培养基中进行增殖分化培养,苗间距1.5~2cm,2~3株/丛,培养50天后,长成高2~3cm丛生苗,叶2~4片;
③壮苗生根培养:将2~3cm高的丛生苗接种于3/5Ma+IBA(吲哚丁酸)0.2毫克/升+NAA(c[-萘乙酸)0.5毫克/升+AC(活性炭)0.5克/升+3%马铃薯泥+7%香蕉泥培养基中进行壮苗生根培养,苗间距2~2.5cm,1~2株/丛,培养60天后,每丛苗高4~6cm,根长3-4cm,生根数6~8条/株;
④培养条件:白糖20克/升,琼脂粉4克/升,PH值5.8~6.0,培养温度25±2℃,光照强度1600~20001x,光照时间12小时/天。
假植培育:
(1)炼苗:选取生根苗株高3~5cm,根长3cm以上,将瓶苗置于荫蔽度75%的塑料大棚内炼苗20d,苗瓶之间间隔1~2cm,通风透气,控制好光照;
(2)栽培基质:杂木屑∶树皮屑∶腐质土(混合,体积比)=1∶1∶1,假植前1-2d,将基质配比好,均匀铺在苗床上,苗床的标准(高80cm、宽120cm、长10m),用0.1%~0.2%高锰酸钾等消毒液将基质淋透消毒处理,基质厚度为8~10cm,下层4cm为粗基质,上层4cm为细基质;
(3)移栽:移栽时将瓶苗取出,洗净根上附着的培养基,用0.05%精甲、咯菌腈+0.1%百毒剂+0.01%硫酸铜混合液浸泡10min,捞起放在透气塑料筐中晾干至根部发白后移栽,按3株/丛,株行距5cm×5cm,移栽时根基部与基质平,根不能外露,苗不能睡倒在基质上,根据天气情况,掌握浇水次数,保持基质湿润,控制好光照,移栽10d后,可结合浇水喷一些低浓度叶面肥,培育60~90d后即可出圃移栽;
(4)出圃:将抽新根发新叶达到标准的苗,轻轻拔起,不要伤根,按10丛/捆,用2cm宽的报纸条缠紧,整齐放进纸箱内,标明出苗日期和数量。
本发明技术方案具有以下有益效果:
选用鼓槌石斛良种进行快繁;采用改良的基本培养基Ma与标准基本培养基MS相比无水氯化钙、铁盐浓度减半、肌醇不用;附加物马铃薯和香蕉去皮直接打成泥,可减少用量,提高营养成分,琼脂粉、糖、母液加热至沸腾,有利于培养基均匀溶解,降低污染率,本方法有效解决了鼓槌石斛优良种苗的来源和种苗纯度性,与常规种苗组培快繁相比,种胚萌发率提高到98%以上,生产成本降低20%,生长周期缩短了60天,污染率降低5%,炼苗、移栽成活率提高到95%以上;种苗假植培育60~90天,可出售或规模化栽培,与分株繁殖种苗种植相比,本发明培育鼓槌石斛种苗种植的每丛新抽生的幼芽增加5~7株。
具体实施方式
鼓槌石斛种苗商品化生产方法,包括以下方法步骤:
良种选育方法:
(1)优良母株选择:
鼓槌石斛的盛花期为4~5月,选择生长健壮花期长、花朵大而艳丽、植株形态美观、有效成分高的优良母株进行种内人工杂交异株异花授粉;
(2)杂交授粉方法:
①工具:直径6cm培养皿一套,7cm小镊子1把,75%酒精和棉球,套袋,标签;
②授粉方法:一般在早上10点以前,镊子用75%酒精消毒后,将花药取出放在培养皿中,再用镊子去掉母本上花朵的药帽,将父本的花药小心放入母本花朵的柱头窝内,每授一朵花,镊子、培养皿用75%酒精消毒后才能再使用,每穗花穗授粉5~8朵,授完粉后,用白色无纺布做成口袋套上,挂上标签,2~3天之内不能浇水,加强大田管理,保证充足阳光,提高果实的质量,一般经过150~180天果实成熟。
基本母液采用改良的MS(无水氯化钙、铁盐浓度减半、肌醇不用)为Ma的制备方法:大量元素配成50倍液(用量20毫克/升),微量元素配成200倍液(用量5毫克/升),植物激素配成50倍液,所有药剂用纯净水溶解定容,微量元素用低温保存,母液保存不要超过一个月。
培养基的配制方法:按培养基的配方要求,称取去皮的马铃薯或香蕉,按马铃薯或香蕉∶水(体积比)=1∶3,用果汁机打碎成泥加入定容桶内,量取母液和激素、称取琼脂和白糖,按琼脂粉+白糖∶母液+水(混合,体积比)=1∶5,用木棍边搅边加热至沸腾加入定容桶内,用纯净水定容,充分混合均匀,用1摩尔的NaOH(氢氧化钠)和HCl(盐酸)溶液调PH值5.8-6.0,将培养液倒入不锈钢桶内放在恒温磁力搅拌器(900~1000r/min)不停搅拌,用塑料杯趁热分装,分装标准:小瓶18~20瓶/L,大瓶9~10瓶/L;培养基厚度:小瓶1.4~1.6cm,大瓶2.0~2.2cm,在123~125℃高温下灭菌20分钟,出锅时拧紧瓶盖,标签注明培养基编号、日期,放置3天后备用。
瓶苗培育:
(1)外植体选择与消毒:
将成熟未开裂的果荚用0.01%洗衣粉冲洗干净后,经75%酒精浸泡60秒,用0.1%HgCl2(升汞)灭菌20分钟,然后用无菌水冲洗5~6次,过滤纸吸干水分;
(2)培养基与培养条件:
①原球茎诱导培养:切开消毒过的果荚,将种子接种于1/2Ma+NAA(α-萘乙酸)0.1毫克/升+2%马铃薯泥培养基上进行诱导培养,暗培养5d,再转入光照培养,5d后,种胚漫漫吸水膨大,逐渐撑破种皮,形成针尖样淡绿色原球茎,培养45天后,诱导大量的类原球茎或分化小苗;
②增殖分化培养:将分化的小苗接种于3/4Ma+6-BA(6-苄基腺嘌呤)0.1毫克/升+NAA0.2毫克/升+8%马铃薯泥+2%香蕉泥培养基中进行增殖分化培养,苗间距1.5~2cm,2~3株/丛,培养50天后,长成高2~3cm丛生苗,叶2~4片;
③壮苗生根培养:将2~3cm高的丛生苗接种于3/5Ma+IBA(吲哚丁酸)0.2毫克/升+NAA(α-萘乙酸)0.5毫克/升+AC(活性炭)0.5克/升+3%马铃薯泥+7%香蕉泥培养基中进行壮苗生根培养,苗间距2~2.5cm,1~2株/丛,培养60天后,每丛苗高4~6cm,根长3-4cm,生根数6~8条/株;
④培养条件:白糖20克/升,琼脂粉4克/升,PH值5.8~6.0,培养温度25±2℃,光照强度1600~20001x,光照时间12小时/天。
假植培育:
(1)炼苗:选取生根苗株高3~5cm,根长3cm以上,将瓶苗置于荫蔽度75%的塑料大棚内炼苗20d,苗瓶之间间隔1~2cm,通风透气,控制好光照;
(2)栽培基质:杂木屑∶树皮屑∶腐质土(混合,体积比)=1∶1∶1,假植前1-2d,将基质配比好,均匀铺在苗床上,苗床的标准(高80cm、宽120cm、长10m),用0.1%~0.2%高锰酸钾等消毒液将基质淋透消毒处理,基质厚度为8~10cm,下层4cm为粗基质,上层4cm为细基质;
(3)移栽:移栽时将瓶苗取出,洗净根上附着的培养基,用0.05%精甲、咯菌腈+0.1%百毒剂+0.01%硫酸铜混合液浸泡10min,捞起放在透气塑料筐中晾干至根部发白后移栽,按3株/丛,株行距5cm×5cm,移栽时根基部与基质平,根不能外露,苗不能睡倒在基质上,根据天气情况,掌握浇水次数,保持基质湿润,控制好光照,移栽10d后,可结合浇水喷一些低浓度叶面肥,培育60~90d后即可出圃移栽;
(4)出圃:将抽新根发新叶达到标准的苗,轻轻拔起,不要伤根,按10丛/捆,用2cm宽的报纸条缠紧,整齐放进纸箱内,标明出苗日期和数量。

Claims (5)

1.鼓槌石斛种苗商品化生产方法,其特征在于以下步骤:
(1)良种选育方法:
以优良母株盛花期进行种内人工杂交异株异花授粉;
将父本的花药小心放入母本花朵的柱头窝内,授完粉后,套上袋,经过150-180天果实成熟;
(2)培养基制备方法:
采用MS为基本培养基(无水氯化钙、铁盐浓度减半、肌醇不用)改良基本母液为Ma;
去皮的马铃薯或香蕉打成泥,母液、琼脂、白糖加热至沸腾,充分混合均匀,出锅时拧紧瓶盖,放置3天后备用;
(3)瓶苗培育方法:
以果荚为外植体采用0.1%HgCl2(升汞)灭菌20分钟处理后;将种子接种于1/2Ma+NAA(α-萘乙酸)0.1毫克/升+2%马铃薯泥原球茎诱导培养上,进行诱导培养;
将分化的小苗接种于3/4Ma+6-BA(6-苄基腺嘌呤)0.1毫克/升+NAA(α-萘乙酸)0.2毫克/升+8%马铃薯泥+2%香蕉泥增殖分化培养中,进行增殖分化培养;
将2-3cm长的丛生苗接种于3/5Ma+IBA(吲哚丁酸)0.2毫克/升+NAA(α-萘乙酸)0.5毫克/升+AC(活性炭)0.5克/升+3%马铃薯泥+7%香蕉泥生根培养中,进行壮苗生根培养;
培养条件:白糖20克/升,琼脂粉4克/升,PH值5.8~6.0,培养温度25±2℃,光照强度1600~20001x,光照时间12小时/天;
(4)假植培育方法:
将瓶苗置于荫蔽度75%的塑料大棚内炼苗20天,通风透气,控制好光照;
基质配比为杂木屑∶树皮屑∶腐质土(混合,体积比)=1∶1∶1,将混合基质均匀铺在苗床上,厚度8~10cm,用0.1%~0.2%高锰酸钾对基质消毒处理;
将清洗干净的生根苗用0.05%精甲、咯菌腈+0.1%百毒剂+0.01%硫酸铜混合液浸泡10分钟,晾干至根部发白后,按3株/丛,株行距5cm×5cm,移栽,加强水肥管理,控制好温度和光照,培育60~90天后即可出圃移栽;将苗拔起,按10丛/捆,用2cm宽的报纸条缠紧,装箱出圃。
2.根据权利要求1所述的一种鼓槌石斛种苗商品化生产方法,其特征在于:步骤1)中,所述良种选育方法是:以优良母株盛花期进行种内人工杂交异株异花授粉;将父本的花药小心放入母本花朵的柱头窝内,授完粉后,套上袋,经过150~180d果实成熟。
3.根据权利要求1所述的一种鼓槌石斛种苗商品化生产方法,其特征在于:步骤2)中,所述培养基的配制方法为:改良基本母液Ma,去皮的马铃薯或香蕉打成泥,母液、琼脂、白糖加热至沸腾,充分混合均匀,出锅时拧紧瓶盖。
4.根据权利要求1所述的一种鼓槌石斛种苗商品化生产方法,其特征在于:步骤3)中,所述瓶苗培育方法为:以果荚为外植体采用0.1%HgCl2(升汞)灭菌20分钟处理后;将种子接种于1/2Ma+NAA(α-萘乙酸)0.1毫克/升+2%马铃薯泥原球茎诱导培养上,进行诱导培养;将分化的小苗接种于3/4Ma+6-BA(6-苄基腺嘌呤)0.1毫克/升+NAA0.2毫克/升+8%马铃薯泥+2%香蕉泥增殖分化培养中,进行增殖分化培养;将2~3cm长的丛生苗接种于3/5Ma+IBA(吲哚丁酸)0.2毫克/升+NAA(α-萘乙酸)0.5毫克/升+AC(活性炭)0.5克/升+3%马铃薯泥+7%香蕉泥生根培养上,进行壮苗生根培养;所述培养条件为白糖20克/升,琼脂粉4克/升,PH值5.8~6.0,培养温度25±2℃,光照强度1600~20001x,光照时间12小时/天。
5.根据权利要求1所述的一种鼓槌石斛种苗商品化生产方法,其特征在于:步骤4)中,所术假植培育方法为:将瓶苗置于荫蔽度75%的塑料大棚内炼苗20天,通风透气,控制好光照;基质配比为树皮屑∶腐质土(混合,体积比)=1∶1∶1,用0.1%~0.2%高锰酸钾对基质消毒处理;清洗的生根苗用0.05%精甲、咯菌腈+0.1%百毒剂+0.01%硫酸铜混合液浸泡10分钟,晾干至根部发白后,按3株/丛,株行距5cm×5cm,移栽,加强水肥管理,控制好温度和光照,培育60~90天后即可出圃移栽;将苗拔起,按10丛/捆,用2cm宽的报纸条缠紧,装箱出圃。
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