CN105296583A - 一种鸡蛋膜蛋白多肽的生产方法及其应用 - Google Patents

Abstract

一种鸡蛋膜蛋白多肽的生产方法，该方法由以下步骤组成：1）将鸡蛋壳压碎，烘干后将鸡蛋膜分离；2）鸡蛋膜碎片及粉；3）配制胃蛋白酶溶液；4）将鸡蛋膜碎片及粉与蛋白酶溶液混合，搅拌制得混合料；5）将混合料pH值调至8～10；6）向混合料中加入碱性蛋白酶，搅拌；7）加入NaOH溶液，搅拌，静置；8）取上清液，调节pH值到7～11制得膜蛋白液；9）将膜蛋白液膜过滤，膜脱盐浓缩，在温度180℃以下喷雾干燥制得鸡蛋膜蛋白多肽。本发明提供的一种鸡蛋膜蛋白多肽的生产方法及其应用，生产的多肽产品蛋白质含量高，表面活性强、生物可降性好，可规模化替代石油化工产品；应用领域广。

Description

一种鸡蛋膜蛋白多肽的生产方法及其应用

技术领域

本发明涉及能用于保健品、食品、医药、洗漱品及化妆品的蛋白多肽生产领域，尤其是一种能用于保健品、食品、医药、洗漱品及化妆品领域的鸡蛋膜蛋白多肽的生产方法及其应用。

背景技术

鸡蛋壳作为人类生活的副产品大量存在，其内附着的鸡蛋壳膜尤其容易造成极大的污染环境。鸡蛋膜含有多种蛋白质（含量在90%左右）如：胶原蛋白（I、V、X型）、骨桥蛋白、白蛋白、唾液蛋白等，还含有硫酸软骨素、透明质酸、N～乙酰氨基葡萄糖半乳糖、葡萄糖醛酸等，主要用于治疗和缓解关节痛等，是美容、保健品、化妆品、日化洗涤等上等原料。鸡蛋膜蛋白在重金属离子选择性吸附材料、人造皮肤或皮肤治疗用敷料材料、酶固定载体、细胞黏附生长基质或药物可控缓释材料等方面具有广泛的应用前景。

但是，鸡蛋膜不易大规模的从鸡蛋壳中分离出，目前还没有关于从鸡蛋膜生产多肽表面活性剂的报导。同时，鸡蛋膜含有大量的交联键而难以溶解,但是过强的不合适的处理条件会导致多肽过分降解，产品难于分离提纯。这些特性限制了鸡蛋膜的生产和应用。

尽管现有技术对蛋白质的酶解过程机理已经相当了解，出于不同原材料限制、不同产品的要求，新的处理过程往往需要专门开发出来以满足技术和经济要求。如：

1、于淑娟等（齐齐哈尔轻工学院学报，1994,10（30）:30～35）用酸酶法水解玉米蛋白质制备复合氨基酸，即经酸作用后再加蛋白酶进行水解，此法可减少酸法和酶法两种方法的弊端，使产品中的氨基酸种类较齐全、含量较高、具有很强的溶解度和乳化能力，在提高产品的利用率的同时，减少污染物的排放。

2、王翠华等人（蛋白质类发泡剂的合成及其泡沫稳定性[J].南京工业大学学报，2006，28（4）：92～96）采用牛蹄角为主要蛋白质原料，在适量氢氧化钙和少量NaHSO₃存在的条件下水解，成功的合成蛋白质型泡沫混凝土用发泡剂。

3、卢珍华等（木瓜蛋白酶水解绿豆蛋白制备可溶性肽的研究[J]。食品科技，2005,11:56～58）研究木瓜蛋白酶对绿豆蛋白的水解作用。酶解的最佳条件为酶浓度8%（E/S质量比），底物浓度7%（绿豆蛋白与水的比），反应温度65℃，反应时间3h，pH6.5,此工作开辟了植物蛋白新来源。

4、邓乾春等（白果活性蛋白的酶法水解及抗氧化活性研究[J]。农业工程学报，2005，21（11）：155～159）研究了酶法水解制备白果肽段的方法及其抗氧化活性的变化，通过单因素分析、正交试验以及对试验结果的分析，确定了碱性蛋白酶水解白果活性蛋白的最佳水解条件为底物浓度为1%,pH值8.5，水解温度45℃,酶浓度7000U.g^～1，反应时间6h。通过研究发现白果肽段的生物活性明显提高，为白果深加工研究及其新产品的开发打下了基础。

5、PushkarSinghBora（Functionalpropertiesofnativeandsuccinylatedlentil(lensculiaris)globulins[J].FoodChemistry,2002,77:171～176)研究了琥珀酰化后的和未酰化所得到的小扁豆球蛋白的性能，其中酰化后的小扁豆球蛋白的等电点从4.5变化到3.5，提高了在pH大于4时的可溶性，亲水性，粘度有100%的提高，乳化性和乳化稳定性也有很大的提高，起泡性稍有降低。

6、冯光炷等人（复合氨基酸月桂醇脂的合成机性能[J]。郑州工程学院学报，2003,24（4）：42～45）研究了以菜籽粕水解得到的复合氨基酸浓缩液为原料，与月桂醇酯化制得复合氨基酸月桂醇酯，确定了合成反应的最佳条件是月桂醇与复合氨基酸的摩尔比为1:2，甲苯作带水剂（反应温度110～122℃），反应时间为4h,催化剂浓H₂SO₄的量为复合氨基酸的8%，少量的聚乙二醇（PEG600）作相转移催化剂，制得的产品具有良好的泡沫稳定性，而且刺激性小、毒性低、降解性能好和降解产物毒性低等优良特性。

上述的这些例子清楚地说明每一类型的多肽产品常常有其相应的原料，相应的加工条件及工艺过程，也就是说，当前已经报导的蛋白多肽生产方法都不适用于从鸡蛋膜批量生产多肽或多肽表面活性剂。除受原料性能限制之外，现有技术在产品质量控制、可操作性、能源耗费、特别是实现规模化、环境友好生产等方面都存在问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种鸡蛋膜蛋白多肽的生产方法及其应用，可以解决从鸡蛋膜批量生产蛋白多肽的问题，生产的多肽产品蛋白质含量高；应用领域广，能应用于保健品、食品、医药、洗漱品及化妆品领域。

为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：一种鸡蛋膜蛋白多肽的生产方法，该方法由以下步骤组成：

1）将洗净灭菌的鲜鸡蛋壳压碎，烘干后将鸡蛋膜从壳膜混合物中分离出来；

2）将步骤1）分离的鸡蛋膜粉碎至40目以上得鸡蛋膜碎片及粉，去除其中的鸡蛋壳；

3）配制胃蛋白酶溶液，蛋白酶浓度为600～800U/L；

4）将步骤2）制得的鸡蛋膜碎片及粉与步骤3）制得的蛋白酶溶液在温度35～45℃下按固液比1:3混合，pH值控制在3～5恒温搅拌2～3小时制得混合料；

5）将步骤4）制得的混合料pH值调至8～10；

6）向混合料中加入质量浓度为0.15%碱性蛋白酶，pH值控制在8～10恒温搅拌2～3小时得混合料；

7）向步骤6）制得的混合料中缓慢加入NaOH溶液，使得混合料中的NaOH的质量浓度为1～5%，在温度45～90℃下搅拌3～4小时，静置；

8）取步骤7）的上清液，用稀盐酸调节pH值到7～11制得膜蛋白液；

9）将步骤8）所得的膜蛋白液，初滤、除杂，经脱盐、浓缩和干燥后，得到鸡蛋膜蛋白多肽。

优选的，步骤9）的初滤、除杂是采用膜孔径为300k的膜，去除生物大分子及不容物，取其滤过液。

优选的，步骤9）膜过滤得到的滤过液采用膜孔径为1k的膜脱盐、浓缩，将浓缩液在温度180℃以下喷雾干燥得到鸡蛋膜蛋白多肽。

优选的，步骤9）的脱盐是用纯净水洗脱膜蛋白液至pH值为7；干燥为膜过滤后浓缩液180℃以下喷雾干燥或冷冻干燥。

步骤1）中采用人工筛选的方式分离鸡蛋膜。

步骤2）中采用人工筛选的方式去除其中的鸡蛋壳。

步骤5）中，将步骤4）制得的混合料pH值调至9，步骤6）中，恒温搅拌时的pH值为9。

步骤7）中，加入NaOH溶液后，混合料中的NaOH的质量浓度为1～5%。

步骤8）中，制得的膜蛋白液的体积为原上清液的1.5～5倍。

一种化妆品，该化妆品包含有0.01wt%～20wt%的鸡蛋膜蛋白多肽。

优选的，鸡蛋膜蛋白多肽含量为0.1wt%～10wt%。

优选的，鸡蛋膜蛋白多肽含量为0.1wt%～5wt%。

一种日化洗涤用品，该日化洗涤用品包含有0.01wt%～5wt%的鸡蛋膜蛋白多肽。

优选的，鸡蛋膜蛋白多肽含量为0.1wt%～2wt%。

优选的，鸡蛋膜蛋白多肽含量为0.1wt%～3wt%。

与现有技术相比，本发明利用酶的高效性、专一性特点，对通常手段难降解的鸡蛋膜，在特定的温度和pH范围内进行高效生物降解，对降解的鸡蛋膜采用膜分离进行浓缩和纯化，实施规模化工业生产鸡蛋膜蛋白多肽。

本发明由于操作步骤以及条件简单，可规模化生产鸡蛋膜蛋白多肽，能耗低同时不污染环境，采用此生产工艺生产的蛋白多肽成分在水溶液中的表面张力在30mN/m，通过改变操作条件，蛋白多肽的性能可得到调节控制。

本发明首次报导了这些可规模化生产的蛋白多肽的主要表面和界面特征。这些鸡蛋膜多肽制成的表面活性剂是现时已知的蛋白质和多肽中降低表面张力能力最强的，在与传统形成的混合系统能进一步降低表面张力，这些混合系统能形成非常稳定的泡沫和乳化液，其相对稳定性可通过多肽类型及混合体系组成进行调节。

作为天然蛋白多肽产品，配合采用的绿色生物降解及温和的膜分离提纯生产过程，利用鸡蛋膜生产所得到的蛋白多肽制成的蛋白多肽表面活性剂可替代从石油原料所生产的传统表面活性物质（表面活性剂和表面活性聚合物或他们的混合物），用于改进现有产品或复合新产品。天然多肽制成的表面活性剂对皮肤和毛发的作用温和，有较强的亲和力和润湿效果，而且无毒、无刺激性，在洗涤的同时还能利于皮肤或毛发对多肽的吸收，特别适合皮肤过敏者及婴儿使用（李异，朱海洋，李华山，等。N-脂肪酰基谷氨酸系表面活性剂在日用化学品中的应用[J].日用化学品科学，2003,26（4）：20-23）。

本研究工作显示，鸡蛋膜蛋白多肽在和少量的其他表面活性剂协调作用时具有更好的洗涤能力，纯天然鸡蛋膜蛋白多肽无毒、易于生物降解和吸收，符合人类绿色环保的要求。鸡蛋膜蛋白多肽在生物医药、药学、生物材料、化妆品和保健食品等中享有广阔的应用前景

本发明生产的多肽产品蛋白质含量高（蛋白质含量大于80%），应用领域广，能应用于保健品、食品、医药、洗漱品及化妆品领域；质量浓度为0.05～25%该鸡蛋白多肽在水溶液中的表面张力为29～35mN/m，使用极少量该鸡蛋膜多肽与其他离子表面活性剂配合使用，可以更好的降低水溶液的表面张力，降低其他活性剂的使用量。

附图说明

图1是制得的鸡蛋膜蛋白多肽溶液的浓度变化对表面张力的影响示意图；

图2是不同浓度的鸡蛋膜蛋白多肽溶液与不同浓度的sodiumdodecylsulphate(SDS)混合使用水溶液表面张力图；

图3是浓度为1.7g/LCEMP在pH5、pH6.5时与SDS混合表面张力图。

图4是1.1g/L制得的鸡蛋膜蛋白多肽在pH5和pH6.5时与表面活性剂DTAB（（Dodecyltrimethylammoniumbromide）混合使用时的效果图。

图5是1.6克/升鸡蛋膜蛋白多肽与SDS在氧化硅表面的共吸附曲线图。

具体实施方式

实施例1

一种鸡蛋膜蛋白多肽的生产方法，该方法由以下步骤组成：

1）将洗净灭菌的鲜鸡蛋壳压碎，烘干后将鸡蛋膜从壳膜混合物中分离出来；

2）将步骤1）分离的鸡蛋膜粉碎至40目以上得鸡蛋膜碎片及粉，去除其中的鸡蛋壳；

3）配制胃蛋白酶溶液，蛋白酶浓度为600～800U/L；

4）将步骤2）制得的鸡蛋膜碎片及粉与步骤3）制得的蛋白酶溶液在温度35～45℃

下按固液比1:3混合，pH值控制在3恒温搅拌2～3小时制得混合料；

5）将步骤4）制得的混合料pH值调至8；

6）向混合料中加入质量浓度为0.15%碱性蛋白酶，pH值控制在8恒温搅拌2～3小时得混合料；

7）向步骤6）制得的混合料中缓慢加入NaOH溶液，使得混合料中的NaOH的质量浓度为1%，在温度45～90℃下搅拌3～4小时，静置；

8）取步骤7）的上清液，用稀盐酸调节pH值到7～11制得膜蛋白液；

9）将步骤8）鸡蛋膜蛋白溶液经脱盐、浓缩后，在180℃以下喷雾干燥或冷冻干燥后制得鸡蛋膜蛋白多肽。

步骤1）中采用人工筛选的方式分离鸡蛋膜。

步骤2）中采用人工筛选的方式去除其中的鸡蛋壳。

步骤8）中，制得的膜蛋白液的体积为原上清液的1.5～5倍。

实施例2

一种鸡蛋膜蛋白多肽的生产方法，该方法由以下步骤组成：

1）将洗净灭菌的鲜鸡蛋壳压碎，烘干后将鸡蛋膜从壳膜混合物中分离出来；

2）将步骤1）分离的鸡蛋膜粉碎至40目以上得鸡蛋膜碎片及粉，去除其中的鸡蛋壳；

3）配制胃蛋白酶溶液，蛋白酶浓度为600～800U/L；

4）将步骤2）制得的鸡蛋膜碎片及粉与步骤3）制得的蛋白酶溶液在温度35～45℃下按固液比1:3混合，pH值控制在5恒温搅拌2～3小时制得混合料；

5）将步骤4）制得的混合料pH值调至10；

6）向混合料中加入质量浓度为0.15%碱性蛋白酶，pH值控制在10恒温搅拌2～3小时得混合料；

7）向步骤6）制得的混合料中缓慢加入NaOH溶液，使得混合料中的NaOH的质量浓度为5%，在温度45～90℃下搅拌3～4小时，静置；

8）取步骤7）的上清液，用稀盐酸调节pH值到7～11制得膜蛋白液；

9）将步骤8）鸡蛋膜蛋白溶液经脱盐、浓缩后，在180℃以下喷雾干燥或冷冻干燥后制得鸡蛋膜蛋白多肽。

步骤9）的初滤是采用膜孔径为300k的膜除去生物大分子和杂质。

步骤9）的脱盐是用纯净水洗脱膜蛋白液至pH值为7；浓缩是采用膜孔径为1k的膜过滤去处大部分的水分至物料浓度大于10%；干燥为膜过滤后浓缩液180℃以下喷雾干燥或冷冻干燥。

步骤1）中采用人工筛选的方式分离鸡蛋膜。

步骤2）中采用人工筛选的方式去除其中的鸡蛋壳。

步骤8）中，制得的膜蛋白液的体积为原上清液的1.5～5倍。

实施例3

一种鸡蛋膜蛋白多肽的生产方法，该方法由以下步骤组成：

1）将洗净灭菌的鲜鸡蛋壳压碎，烘干后将鸡蛋膜从壳膜混合物中分离出来；

2）将步骤1）分离的鸡蛋膜粉碎至40目以上得鸡蛋膜碎片及粉，去除其中的鸡蛋壳；

3）配制胃蛋白酶溶液，蛋白酶浓度为600～800U/L；

4）将步骤2）制得的鸡蛋膜碎片及粉与步骤3）制得的蛋白酶溶液在温度35～45℃下按固液比1:3混合，pH值控制在4恒温搅拌2～3小时制得混合料；

5）将步骤4）制得的混合料pH值调至9；

6）向混合料中加入质量浓度为0.15%碱性蛋白酶，pH值控制在9恒温搅拌2～3小时得混合料；

7）向步骤6）制得的混合料中缓慢加入NaOH溶液，使得混合料中的NaOH的质量浓度为1.5%，在温度45～90℃下搅拌3～4小时，静置；

8）取步骤7）的上清液，用稀盐酸调节pH值到7～11制得膜蛋白液；

9）将步骤8）鸡蛋膜蛋白溶液经脱盐、浓缩后，在180℃以下喷雾干燥或冷冻干燥后制得鸡蛋膜蛋白多肽。

步骤9）的初滤、除杂是采用膜孔径为300k的膜除去生物大分子和杂质。

步骤9）的脱盐是用纯净水洗脱膜蛋白液至pH值为7；浓缩是采用膜孔径为1k的膜过滤去除大部分的水份至物料浓度大于10%；干燥为膜过滤后浓缩液180℃以下喷雾干燥或冷冻干燥。

步骤1）中采用人工筛选的方式分离鸡蛋膜。

步骤2）中采用人工筛选的方式去除其中的鸡蛋壳。

步骤8）中，制得的膜蛋白液的体积为原上清液的1.5～5倍。

实施例4

一种鸡蛋膜蛋白多肽的生产方法，该方法由以下步骤组成：

1）将洗净灭菌的鲜鸡蛋壳压碎，烘干后将鸡蛋膜从壳膜混合物中分离出来；

2）将步骤1）分离的鸡蛋膜粉碎至40目以上得鸡蛋膜碎片及粉，去除其中的鸡蛋壳；

3）配制胃蛋白酶溶液，蛋白酶浓度为600～800U/L；

4）将步骤2）制得的鸡蛋膜碎片及粉与步骤3）制得的蛋白酶溶液在温度35～45℃下按固液比1:3混合，pH值控制在4恒温搅拌2～3小时制得混合料；

5）将步骤4）制得的混合料pH值调至9；

6）向混合料中加入质量浓度为0.15%碱性蛋白酶，pH值控制在9恒温搅拌2～3小时得混合料；

7）向步骤6）制得的混合料中缓慢加入NaOH溶液，使得混合料中的NaOH的质量浓度为4%，在温度45～90℃下搅拌3～4小时，静置；

8）取步骤7）的上清液，用稀盐酸调节pH值到7～11制得膜蛋白液；

9）将步骤8）鸡蛋膜蛋白溶液经脱盐、浓缩后，在180℃以下喷雾干燥或冷冻干燥后制得鸡蛋膜蛋白多肽。

步骤9）的初滤、除杂是采用膜孔径为300k的膜除去生物大分子和杂质。

步骤9）的脱盐是用纯净水洗脱膜蛋白液至pH值为7；浓缩是采用膜孔径为1k的膜过滤去除大部分水分至物料浓度大于10%；干燥为膜过滤后浓缩液180℃以下喷雾干燥或冷冻干燥。

步骤1）中采用人工筛选的方式分离鸡蛋膜。

步骤2）中采用人工筛选的方式去除其中的鸡蛋壳。

步骤8）中，制得的膜蛋白液的体积为原上清液的1.5～5倍。

实施例5

一种鸡蛋膜蛋白多肽的生产方法，该方法由以下步骤组成：

1）将洗净灭菌的鲜鸡蛋壳压碎，烘干后将鸡蛋膜从壳膜混合物中分离出来；

2）将步骤1）分离的鸡蛋膜粉碎至40目以上得鸡蛋膜碎片及粉，去除其中的鸡蛋壳；

3）配制胃蛋白酶溶液，蛋白酶浓度为600～800U/L；

4）将步骤2）制得的鸡蛋膜碎片及粉与步骤3）制得的蛋白酶溶液在温度35～45℃下按固液比1:3混合，pH值控制在5恒温搅拌2～3小时制得混合料；

5）将步骤4）制得的混合料pH值调至10；

6）向混合料中加入质量浓度为0.15%碱性蛋白酶，pH值控制在10恒温搅拌2～3小时得混合料；

7）向步骤6）制得的混合料中缓慢加入NaOH溶液，使得混合料中的NaOH的质量浓度为3%，在温度45～90℃下搅拌3～4小时，静置；

8）取步骤7）的上清液，用稀盐酸调节pH值到7～11制得膜蛋白液；

9）将步骤8）鸡蛋膜蛋白溶液经脱盐、浓缩后，在180℃以下喷雾干燥或冷冻干燥后制得鸡蛋膜蛋白多肽。

步骤9）的初滤、除杂是采用膜孔径为300k的膜除去生物大分子和杂质。

步骤9）的脱盐是用纯净水洗脱膜蛋白液至pH值为7；浓缩是采用膜孔径为1k的膜过滤大部分水分至物料浓度大于10%；干燥为膜过滤后浓缩液180℃以下喷雾干燥或冷冻干燥。

步骤1）中采用人工筛选的方式分离鸡蛋膜。

步骤2）中采用人工筛选的方式去除其中的鸡蛋壳。

步骤8）中，制得的膜蛋白液的体积为原上清液的1.5～5倍。

产品的性能检测实验结果如下：

实施例6

从图1（制得的鸡蛋膜蛋白多肽溶液的浓度变化对表面张力的影响示意图）可以看出，当ＣＥＭＰ的浓度从０.０３２增加到２５ｇ／Ｌ时，表面张力的变化见上图。浓度越高，表面张力越低。高浓度的CEMP可以将水溶液的表面张力降低到29mN/m.很少有产品能将水溶液表面张力降低到这个程度，特别是蛋白、多肽类产品。

实施例7

从图2（不同浓度的鸡蛋膜蛋白多肽溶液与不同浓度的sodiumdodecylsulphate(SDS)混合使用水溶液表面张力图）可以看出，当SDS的浓度很低，CEMP的浓度在1-1.7g/L时，其混合物的水溶液的表面张力维持在33mN/m左右。

实施例8

从图3（浓度为1.7g/LCEMP在pH5、pH6.5时与SDS混合表面张力图）可以看出，在SDS浓度为0.00003g/L时,其水溶液的表面张力为69mN/m,几乎与纯水接近，然而，当加入1.7g/L的CEMP时，其水溶液的表面张力发生明显变化，并降低为30.5和33.5mN/m。

实施例9

从图4（1.1g/L制得的鸡蛋膜蛋白多肽在pH5和pH6.5时与表面活性剂DTAB（（Dodecyltrimethylammoniumbromide）混合使用时的效果图）中可以看出，当单个DTAB、CEMP的浓度极低为0.0001g/L时，他们在水溶液中的表面张力几乎与纯水的表面张力没有太大的区别。然而，当DATB、CEMP的浓度提高十倍（任然很低）为0.001g/L时，DATB的表面张力从71.4mN/m降低到61.2mN/m.但DATM与1.1g/L的CEMP混合使用在pH5、pH6.5时，其表面张力发生了很大的变化，分别为29.5和29.3mN/m。

实例10

D、泡沫稳定性

D1、鸡蛋膜蛋白多肽的泡沫稳定性

低表面张力和高泡沫稳定性是相关联的，不过不是所有的低表面张力都能产生高泡沫稳定性。在了解多肽活性剂系统性能后，取决于实际应用情况，可对系统稳定性进行调整。下面的试验表明，将不同的蛋白溶解在水中。浓度均为1毫克/毫升。将试剂瓶同样震荡1分钟。静置2分钟后，鸡蛋膜蛋白多肽产品泡沫仍然很稳定，与贝塔酪蛋白(beta-casein）的泡沫类似，并好于牛血清蛋白(BSA)。相比而言，溶菌酶(chickeneggwhitelysozyme)，免疫球蛋白的泡沫减少很多，其稳定性相对差。

将浓度为1毫克/毫升的贝塔酪蛋白(beta-casein)，鸡蛋膜蛋白多肽，牛血清蛋白(BSA)，免疫球蛋白,溶菌酶(lysozyme)置于试剂瓶中。将四个试剂瓶同样震荡1分钟。静置2分钟后，拍照。结果显示鸡蛋膜蛋白多肽能产生稳定泡沫,而免疫球蛋白和溶菌酶却不能。

D2、鸡蛋膜蛋白多肽含有SDS的泡沫稳定性

将浓度为1克/升的贝塔酪蛋白，鸡蛋膜蛋白多肽，牛血清蛋白，免疫球蛋白,溶菌酶中加入0.2mMSDS。将四个试剂瓶同样震荡1分钟。静置2分钟后，拍照。

稳定泡沫，免疫球蛋白也一样形成不稳定泡沫，但由牛血清蛋白和溶菌酶所成形的泡沫的稳定性却变得相反了。

结果同时显示，改变SDS和鸡蛋膜多肽活性剂各自浓度能改变泡沫的稳定性，就是说，混合体系泡沫的稳定性和不稳定性可以通过选择不同的多肽活性剂类型、浓度等条件来控制。不难想象，泡沫稳定性和不稳定性也可以通过其它条件，活性剂、盐、其它添加剂的种类、浓度等调节。说明在实际应用中可根据产品使用要求，通过组分来控制泡沫的稳定性和不稳定性，如使洁面水不需要稳定泡沫出现，但是发乳却一般需要有少许稳定性，而食品泡沫常常要求很好的稳定性。

按照如上描述的原理，通过与阳离子、非离子及其它生物的或合成的界面活性材料（天然表面活性剂，改性纤维素，聚丙烯酰胺）复合，鸡蛋膜多肽可调节泡沫的稳定性，取决于用法。

E、乳化稳定性

E1、鸡蛋膜蛋白多肽的乳化稳定性

将浓度为1毫克/毫升的贝塔酪蛋白（beta-casein），鸡蛋膜蛋白多肽，牛血清蛋白(BSA)，溶菌酶(lysozyme)，免疫球蛋白与正己烷1比1混合。将四个试剂瓶同样震荡1分钟。静置2分钟后，拍照。结果显示鸡蛋膜蛋白多肽的乳化效果好于贝塔酪蛋白（beta-casein），牛血清蛋白（BSA）和溶菌酶(lysozyme)。免疫球蛋白的稳定性能也最弱，此趋势与泡沫稳定性相同。

E2、鸡蛋膜蛋白多肽的在加入SDS后的乳化稳定性

将浓度为1克/升的贝塔酪蛋白（beta-casein），鸡蛋膜蛋白多肽，牛血清蛋白（BSA），免疫球蛋白,溶菌酶（lysozyme）中加入0.2mMSDS，再与正己烷1比1混合。将试剂瓶同样震荡1分钟。静置2分钟后，拍照。

在纯蛋白质乳化液稳定性实验的基础上，在每一个试样里加入0.2mMSDS，再与正己烷1比1混合。将试剂瓶同样震荡1分钟。静置2分钟后，拍照。结果与鸡蛋膜蛋白多肽加入SDS泡沫的稳定性类似，表明加入少量表面活性剂确实可调节表面张力，影响界面分子结构及泡沫的稳定性。免疫球蛋白和鸡蛋膜蛋白多肽的相对稳定性与不加SDS相同，但是加入SDS可调节稳定性。进一步的实验显示，乳化液的稳定性可通过调节多肽和SDS浓度来控制。类似地，调节多肽的类型及溶剂性能都能达到控制乳化液稳定性的目的，这一性能对控制以乳化液为基础的产品稳定性有很强的指导意义。

F、选择性吸附

在许多表面中，我们常常需要表面在清洗后其表面组份有所不同，比如，洗发水洗去油脂后，护发素会留下有光泽的吸附层，以改进头发的美观。类似的性能也可应用于洗面液，除臭液，其它类型的护发、护肤、美容产品。

图5是1.6克/升鸡蛋膜蛋白多肽与SDS在氧化硅表面的共吸附曲线图。从图5中可以看出：实验pH在6.5-7之间，温度在22-23度。表面吸附量由椭圆光度仪测量。60分钟后，溶液被取出，并放入同样量的水，并继续测量。由于溶液浓度的降低，升起的吸附由活性肽引起。

鸡蛋膜蛋白多肽在许多介质表面都有很强的吸附，这从表面接触角的变化可容易确定。同时，吸附了的鸡蛋膜蛋白多肽不易用水或缓冲液冲洗掉，显示其很强的不可逆性。

以上实验的目的在于表明鸡蛋膜蛋白多肽在固体表面的选择吸附能力。氧化硅表面亲水并带弱负电，与头发类似。因此SDS在表面不吸附。相反，鸡蛋膜蛋白多肽由于熵的作用会在表面吸附。因此，增加SDS浓度会抑制鸡蛋膜蛋白多肽在表面吸附。在SDS浓度为5mM时,鸡蛋膜蛋白多肽无明显吸附。然而，在溶液稀释或清洗时，由于SDS浓度急剧下降，其影响力减小。相比而言，鸡蛋膜蛋白多肽在表面吸附与浓度关系不大，导致鸡蛋膜蛋白多肽在表面吸附。因此，鸡蛋膜蛋白多肽在表面的吸附能够通过混合物比例来调节。结果同时表明鸡蛋膜蛋白多肽具有较强的表面活性，条件合适时可以通过冲洗在表面吸附。

通过上面的鸡蛋膜蛋白多肽与常用的表面活性剂SDS和DTAB进行实验的结果，可以得出很少量的鸡蛋膜蛋白多肽在与SDS和DTAB混合使用时，可以快速降低水溶液的表面张力，不但减少自身和其他表面活性剂的使用量，既节约成本，又环保。因此，CEMP在增加湿润性、乳化性、起泡性、流变性、环境清洁、健康修复等方面提供了广阔的应用空间

使用本发明实施例1至5制得的鸡蛋膜蛋白多肽，分别制得如下的各种化妆品：

实施例11护发素

取0.01wt%鸡蛋膜蛋白多肽，掺加3wt％IncroquatBehe??nylTMC（Behentrionium氯，鲸蜡硬脂醇），1％苯基trimethiocone，0.2wt％的防腐剂，0.1％山梨酸钾，2wt％PROCAPIL?（含有PPG-26-Butech-25，丁烯乙二醇，少量水，PEG-40氢化蓖麻油，芹菜素，齐墩果酸和Biotinyl三肽-1），0.1％，香水，0.025wt％sarcolactic酸，水达到100wt％。乳液轻轻擦拭，能促进在真皮的休止期毛发再生。

实施例12抗皱霜与皮肤美白

取2wt%鸡蛋膜蛋白多肽，掺加0.1wt%Ultrez10（卡波姆），3wt%transcutol，8wt％甘油，0.1％山梨酸钾，0.6wt％VolpoS2（Steareth2），4wt％CrodafosCES（鲸蜡硬脂醇，双十六烷基磷酸，磷酸盐ceteth10），2wt％DC344（cyclomethicone），10wt％CRODAMOLGTCC（辛酸/癸甘油三酯），1.6wt％CrUl3（山梨醇硬脂酸），0.3wt％混合苯甲酸酯，0.3wt％的NaOH（30％），3000Matriixyl?3WT％（甘油，丁烯乙二醇，水，卡波姆，聚山梨酯20，棕榈酰寡肽，棕榈四肽-3，4wt％LUMISKXN?（辛酸/癸甘油三酯，双乙酰boldine），0.1％的清香，水，达到100wt％。此肽复合体抗皱霜是适合皮肤美容治疗，包括鱼尾纹，皱纹，色素沉着斑，刺激排毒系统。

实施例13身体乳液

取0.1wt%鸡蛋膜蛋白多肽，掺加0.3wt％柠檬酸，1.2wt％柠檬酸trisodique，10wt％alcool，0.2wt％的甲基苯，1WT％VolpoG26（glycereth26），Crillet1（聚山梨醇酯20），0.1％的香水。此乳液滋润，保湿，提供放松的感觉和青春外观。

实施例15身体乳液

取5wt%鸡蛋膜蛋白多肽，掺加0.3wt％柠檬酸，1.2wt％柠檬酸trisodique，10wt％alcool，0.2wt％的甲基苯，1WT％VolpoG26（glycereth26），Crillet1（聚山梨醇酯20），0.1％的香水。此乳液滋润，保湿，提供放松的感觉和青春外观。

实施例16身体乳液

取20wt%鸡蛋膜蛋白多肽，掺加0.3wt％柠檬酸，1.2wt％柠檬酸trisodique，10wt％alcool，0.2wt％的甲基苯，1WT％VolpoG26（glycereth26），Crillet1（聚山梨醇酯20），0.1％的香水。此乳液滋润，保湿，提供放松的感觉和青春外观。

实施例17天然沐浴露

配方：1杯（50毫升）水，玉米淀粉1茶匙（5毫升），2汤匙甘油（20毫升），1茶匙蔗糖，2汤匙鸡蛋膜蛋白多肽（2克），5～10滴的自然香味油（柠檬或桔子），1～2滴的红色或黄色的食用色素（可选），放置在一个碗或烧杯中，混合所有成分。倒入成挤压瓶，在48小时内使用。需要较长期使用，添加防腐剂。

实施例18

本发明所要求的生产及产品包括所有含有鸡蛋膜降解活性多肽或多肽活性剂产品，其中多肽活性剂产品含量通常在0.01wt%～20wt%之间,在大部分产品中其含量在0.1wt%～10wt%之间，或在0.1wt%～5wt%之间。这些生产过程和产品（如洗面水，面霜，防皮肤老化霜，乳液，药膏，牙膏，除臭喷雾剂）中经常含有含量通常在0.01wt%-15wt%之间的如下物质：

1、维生素包括A，B，C，D，E，K系列和它们的派生物，视黄醇（维生素A）化合物包括C2-C22视黄醇酯,维生素A棕榈酸酯，维生素A醋酸，丙酸维生素A，视黄酸；

2、水杨酸化合物（酯类和盐类）;包括β-sitosterols，lupenol，豆甾醇，植物甾醇，

3、取代的和未取代的黄酮类化合物，包括黄酮类，香豆素，chromanols（例如，大豆黄酮（7,4'-二羟基异黄酮）），

4、天然的和取代的氨基酸，如N-酰基苯丙氨酸（天然氨基酸，乙酰氨基酸，甲基氨基酸，N-undecylenoyl-L-phenylalanine，N-十四烷基赖氨酸），

5、设计和仿生物的短肽，包括二肽、三肽、四肽、五肽、六肽等，如Val-Trp,Asp-Phe,Ala-His,Arg-Lys-Arg,His-Gly-Gly,Gly-His-Lys,Gly-Gly-His,Gly-His-Gly,Lys-Phe-Lys,Gly-Gln-Pro-Arg,lipopeptidessuchasN-PalmitoylAla-His,N-Palmitoyl-GlyLys-HisandN-Palmitoyl-Lys-Thr-Thr-Lys-Ser,N-Palmitoyl-Tyr-Gly-Gly-Phe-XwithXdenotingMetorLeu,N-Palmitoyl-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly等（由Sedermaand其它公司供给），

6、颗粒状材料添加剂包括有色和无色颜料，有机和无机粉末，粘度增强和荧光增白粒子和它们在不同形状和组分下的组合，如玻璃，氧化锌，氧化硅，蚕丝，多孔或无孔的微粒材料，其他地球矿物，如三氧化二铝和粘土，硅共聚物，聚苯乙烯衍生物，这些颗粒或许具有涂层，

7、防晒霜活性成分，包括有机和无机的抗UV-A和UV-B化合物，如对氨基苯甲酸衍生物，乙基-PABA的衍生物，肉桂衍生物，乙基己基水杨酸，methoxydibenzoylmethane丁酯，乙基己基三嗪酮，二苯甲酮-3苯基苯并咪唑，

8、局部麻醉剂，包括苯佐卡因，利多卡因，布比卡因，chlorprocaine，dibucaine，氯胺酮，普鲁卡因和丁卡，

9、粉刺活性成分，包括过氧化苯甲酰，脱氢乙酸，锌，硫，间苯二酚，红霉素，水杨酸，

10、保湿和调理剂，包括尿素，胍，乙醇酸盐，烷基胺盐，乳酸，多羟基醇，如山梨醇，甘露醇，木糖醇，甘油，丙二醇，聚乙二醇，糖，淀粉及其衍生物，透明质酸，烷基糖和淀粉酯，合成水溶性的非离子型和离子聚合物，如改性的聚乙二醇和聚丙烯乙二醇，

11、消炎药，包括皮质类固醇，如氢化可的松，吡罗昔康，阿司匹林，布洛芬及衍生物，从天然来源（植物，真菌，微生物）提取的此类物质，

12、晒黑活性物质，包括dihydroacetone（DHA或1,3-二羟基-2-丙酮），

13、美白剂，包括曲酸，氢醌，氨基酚衍生物（N-胆固醇氧羰基对氨基酚等，

14、抗菌药物，包括煤焦油，硫磺，三氯化铝，trichlosan，茶树油，丁香叶油，thiobendazole，多烯，hydroxypyridone，过氧化苯甲酰，3-羟基苯甲酸，苯并咪唑，

15、增稠和胶凝剂，包括羧酸聚合物，交联聚丙烯酸酯聚合物，聚丙烯酰胺聚合物，如羧甲基羟乙基纤维素多糖，醋酸纤维素丙酸羧酸，羟丙基纤维素，微晶纤维素，钠纤维素硫酸和它们的混合物，

16、表面活性剂，包括阴离子（十二烷基硫酸盐及衍生物），阳离子（十六烷基三甲基氯化铵及衍生物），非离子型（Triton系列）和两性表面活性剂（天然或合成的类脂及其衍生物），

17、阳离子、阴离子、非离子和两性聚合物及其共聚物，

18、头发和皮肤调理剂，包括任何改进头发、皮肤光泽，柔软性，兼容性，身体，抗静电性能，损坏，油腻的材料。这些材料通常不溶于水，但是可水分散，做成分散或乳化液，包括有机硅（硅油，阳离子有机硅，有机硅牙龈，高折射率有机硅，碳氢油类等组分，

19、去屑活性成分包括pyridinethione盐，唑类，硒氯和硫。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

实施例19

一种洗发水，其中鸡蛋膜蛋白多肽含量为0.1wt%。

实施例20

一种洗发水，其中鸡蛋膜蛋白多肽含量为2wt%。

实施例21

一种洗发水，其中鸡蛋膜蛋白多肽含量为3wt%。

Claims (10)

1.一种鸡蛋膜蛋白多肽的生产方法，其特征在于该方法由以下步骤组成：

1）将洗净灭菌的鲜鸡蛋壳压碎，烘干后将鸡蛋膜从壳膜混合物中分离出来；

2）将步骤1）分离的鸡蛋膜粉碎至40目以上得鸡蛋膜碎片及粉，去除其中的鸡蛋壳；

3）配制胃蛋白酶溶液，蛋白酶浓度为600～800U/L；

4）将步骤2）制得的鸡蛋膜碎片及粉与步骤3）制得的蛋白酶溶液在温度35～45℃

下按固液比1:3混合，pH值控制在3～5恒温搅拌2～3小时制得混合料；

5）将步骤4）制得的混合料pH值调至8～10；

6）向混合料中加入质量浓度为0.15%碱性蛋白酶，pH值控制在8～10恒温搅拌2～3小时得混合料；

7）向步骤6）制得的混合料中缓慢加入NaOH溶液，使得混合料中的NaOH的质量浓度为1～5%，在温度45～90℃下搅拌3～4小时，静置；

8）取步骤7）的上清液，用稀盐酸调节pH值到7～11制得膜蛋白液；

9）将步骤8）鸡蛋膜蛋白溶液经脱盐、浓缩后，在180℃以下喷雾干燥或冷冻干燥后制得鸡蛋膜蛋白多肽。

2.根据权利要求1所述的一种鸡蛋膜蛋白多肽的生产方法，其特征在于：步骤9）的初滤、除杂是采用膜孔径为300k的膜分离，取其滤过液；脱盐是用纯净水洗脱膜蛋白液至pH值为7；浓缩是采用膜孔径为1k的膜过滤去处大部分的水分至物料浓度大于10%；干燥为膜过滤后浓缩液180℃以下喷雾干燥或冷冻干燥。

3.根据权利要求1所述的一种鸡蛋膜蛋白多肽的生产方法，其特征在于：步骤5）中，将步骤4）制得的混合料pH值调至9，步骤6）中，恒温搅拌时的pH值为9。

4.根据权利要求1所述的一种鸡蛋膜蛋白多肽的生产方法，其特征在于：步骤7）中，加入NaOH溶液后，混合料中的NaOH的质量浓度为1～4%。

5.一种化妆品，其特征在于：该化妆品包含有0.01wt%～20wt%的鸡蛋膜蛋白多肽。

6.根据权利要求7所述的化妆品，其特征在于：鸡蛋膜蛋白多肽含量为0.1wt%～10wt%。

7.根据权利要求7所述的化妆品，其特征在于：鸡蛋膜蛋白多肽含量为0.1wt%～5wt%。

8.一种日化洗涤用品，其特征在于：该日化洗涤用品包含有0.01wt%～5wt%的鸡蛋膜蛋白多肽。

9.根据权利要求10所述的日化洗涤用品，其特征在于：鸡蛋膜蛋白多肽含量为0.1wt%～2wt%。

10.根据权利要求10所述的日化洗涤用品，其特征在于：鸡蛋膜蛋白多肽含量为0.1wt%～3wt%。