海发菜活性成分的提取制备方法及其应用
技术领域
本发明涉及一种海发菜活性成分的制备方法及其应用,属于海洋植物应用技术领域,尤其是指一种海发菜多酚和多糖的提取制备方法及其应用。
背景技术
海发菜俗称水云,江蓠科(Gigartinales)江蓠的藻体,富含海藻多醣、碘、钙、铁等多种人体必须的常、微量元素和维生素A、B1、C等。日本研究证明,海发菜(水云)有清肺通便、养颜瘦身、降血压血脂和调作身体机能等功效。传统食用海发菜是日本国冲绳岛人平均寿命居世界之最的主要原因,所以水云在日本国有长寿菜之誉。唐孟诜《食疗本草》载“海藻下气、久服瘦人”。明李时珍《本草纲目》载“海藻,咸能润下,寒能泄热引水,故能消瘿瘤、结核、阴溃之坚聚,而除浮肿、脚气、留饮、痰气之湿热,使邪气自小便出也”。海藻消痰、软坚、利水、泄热,有清肺通便、养颜瘦身、降血压血脂、抑制甲状腺机能亢进的功能。现代人受方便食品和肉食的影响,血液普遍呈酸性,而海藻是一种天然碱性食品,对清理肺部及肠道毒素、排除体内垃圾有奇效,经常食用可平衡体内环境,保证排泄畅通,是女人减肥美容和中老年人习惯性便秘最理想的纯天然海洋保健食品。
海发菜活性成分的研究始于这几年,一般采用传统的高温中性水提法,研究发现这种方法制备的提取物多为胶体部分,非胶体活性部分的提取率较低,而且关键的是活性成分的活性差。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中的不足和缺陷,提供一种海发菜活性成分的制备方法,该制备方法能够提取到海发菜多酚和多糖,活性好,纯度高,快速高效。
本发明的第二个目的在于提供上述海发菜抗氧化活性成分的应用。
为了实现第一个目的,本发明按照以下技术方案实现:
一种海发菜活性成分的提取制备方法,其包括有以下步骤:
S1、制备海发菜干粉,将新鲜海发菜洗净、干燥后粉碎,成海发菜干粉;
S2、制备粗提液,将S1步骤的海发菜干粉用50%~90%的乙醇水溶液浸提,离心得上清液和残渣,残渣再以乙醇酸水溶液重复浸提若干次,合并多次浸提所得的上清液,上清液经旋转蒸发去除乙醇后得粗提液,残渣备用;
S3、萃取粗提液,将S2步骤中的粗提液以等体积正己烷或石油醚重复萃取,正己烷或石油醚预先加0.1%-0.5%冰醋酸酸化,去除有机相,萃取后经旋转蒸发浓缩至膏状;
S4、提取海发菜多酚,将S3步骤中的膏状物溶于50%乙醇溶液,然后过不同分子量的超滤包,真空冷冻干燥后得不同分子量的海发菜多酚。
S5、将S2步骤中的残渣加含挥发性酸0.1%~5%的热水,在40℃条件下浸提24小时,纱布过滤,取滤液,经真空浓缩冻干,得海发菜多糖。
进一步,所述S1步骤中,海发菜洗净后在小于40℃条件下干燥,粉碎后的海发菜干粉需过20目筛,且将海发菜干粉在-20℃条件下急冻后室温缓慢解冻,使细胞破坏易于萃取。
进一步,所述S2步骤中,乙醇酸水溶液含挥发性酸0.1%~5%,海发菜干粉与乙醇酸水溶液的重量体积比为1:6~1:60,浸提时间为每次24小时,浸提温度小于40℃,离心得上清液和残渣,残渣再以乙醇酸水溶液重复浸提2次,合并3次所得上清液。
进一步,所述S3步骤中,旋转蒸发温度小于40℃。
进一步,所述S4步骤中,50%乙醇溶液含挥发性酸0.1%~5%,所得浸膏与乙醇溶液的重量体积比为1:8,过不同分子量的超滤包,超滤包截留分子量分别为30K、10K及1K,真空冷冻干燥后得不同分子量的海发菜多酚。
进一步,所述S4步骤中,不同分子量的海发菜多酚分别为分子量大于30K的多酚I、分子量小于30K大于10K的多酚II、分子量小于10K大于1K的多酚III、及分子量小于1K的多酚IV。
为了实现第二个目的,本发明按照以下技术方案实现:
海发菜活性成分的应用,所述抗衰老保健品和化妆品中采用了由新鲜海发菜制取的海发菜多酚和/或海发菜多糖。
本发明与现有技术相比,其有益效果为:
本发明以新鲜海发菜为原料,通过不同溶剂提取和超滤获得具有抗氧化功能的海发菜多酚及多糖提取物,活性高,纯度高,快速高效,为海发菜活性成分的开发利用奠定有效基础,具有较好的经济效益和社会效益。
为了能更清晰理解本发明,以下将详细阐述本发明的具体实施方式。
具体实施方式
本实施例所述海发菜多酚和多糖的提取制备方法,其包括有以下步骤:
S1、制备海发菜干粉,将新鲜海发菜洗净、干燥后粉碎,成海发菜干粉;
S2、制备粗提液,将S1步骤的海发菜干粉用50%~90%的乙醇水溶液浸提,离心得上清液和残渣,残渣再以乙醇酸水溶液重复浸提若干次,合并多次浸提所得的上清液,上清液经旋转蒸发去除乙醇后得粗提液,残渣备用;
S3、萃取粗提液,将S2步骤中的粗提液以等体积正己烷或石油醚重复萃取,正己烷或石油醚预先加0.1%-0.5%冰醋酸酸化,去除有机相,萃取后经旋转蒸发浓缩至膏状;
S4、提取海发菜多酚,将S3步骤中的膏状物溶于50%乙醇溶液,然后过不同分子量的超滤包,真空冷冻干燥后得不同分子量的海发菜多酚。
S5、将S2步骤中的残渣加含挥发性酸0.1%~5%的热水,在40℃条件下浸提24小时,纱布过滤,取滤液,经真空浓缩冻干,得海发菜多糖。
上述S1步骤中,海发菜洗净后在小于40℃条件下干燥,粉碎后的海发菜干粉需过20目筛,且将海发菜干粉在-20℃条件下急冻后室温缓慢解冻,使细胞破坏易于萃取。
上述S2步骤中,乙醇酸水溶液含挥发性酸0.1%~5%,海发菜干粉与乙醇酸水溶液的重量体积比为1:6~1:60,浸提时间为每次24小时,浸提温度小于40℃,离心得上清液和残渣,残渣再以乙醇酸水溶液重复浸提2次,合并3次所得上清液。
上述S3步骤中,旋转蒸发温度小于40℃。
上述S4步骤中,50%乙醇溶液含挥发性酸0.1%~5%,所得浸膏与乙醇溶液的重量体积比为1:8,过不同分子量的超滤包,超滤包截留分子量分别为30K、10K及1K,真空冷冻干燥后得不同分子量的海发菜多酚。进一步,所述不同分子量的海发菜多酚分别为分子量大于30K的多酚I、分子量小于30K大于10K的多酚II、分子量小于10K大于1K的多酚III、及分子量小于1K的多酚IV。
在应用中,所述抗衰老保健品和化妆品中采用了上述由新鲜海发菜制取的海发菜多酚和/或海发菜多糖。
实验:海发菜多酚及多糖的抗氧化活性试验如下。
1.清除氧化自由基DPPH的实验
海发菜提取液稀释了0倍,比较海藻提取液对DPPH·的清除作用,加入DPPH后测定吸光度,再用公式:DPPH·清除效率=「A0—Ai」%/A0,计算对DPPH·清除效率。以5μg/ml的没食子酸作为阳性对照,结果如表1所示:
表1自由基清除试验
2.保护皮肤防紫外线抗衰老实验
正常组:不进行紫外照射且不给药;模型组:紫外照射并外涂蒸馏水;多酚低剂量组:紫外照射并外涂1%多酚水溶液;多酚高剂量组:紫外照射并外涂5%多酚水溶液。
外涂组小鼠在进行紫外线照射前10min给药。除正常对照组外,其余各组小鼠以10%Na2S溶液取背部正中皮肤脱毛,暴露2cm×2cm大小皮肤。UV照射,照射光源:UVA灯80W、UVB灯160W,光源在距离小鼠约40cm处进行照射。第1周每天照射1次,每次1h,第2周起每天照射2次,每次40min。第60天末次照射2h后,脱颈椎处死小鼠,取脱毛部位皮肤作羟脯氨酸含量检测;另取脱毛部位皮肤以20%福尔马林溶液固定,作成纤维细胞计数;取余脱毛背部皮肤作MDA和SOD检测。实验结果见表2。
表2海发菜提取物对小鼠皮肤抗衰老的影响(n=5)
在现代医学众多衰老学说中,衰老的自由基学说已受到现代医学界普遍认同。皮肤老化是机体衰老的一部分,大量的研究证明自由基的积累损伤是皮肤组织老化的重要原因。本实验结果中,海发菜提取物可明显增强光老化小鼠皮肤组织SOD活性,降低MDA含量,表明海发菜提取物可增强皮肤组织的抗氧化能力,降低皮肤组织自由基含量,使自由基对成纤维细胞损害减轻,发挥延缓皮肤光老化的作用。
本发明并不局限于上述实施方式,如果对本发明的各种改动或变型不脱离本发明的精神和范围,倘若这些改动和变型属于本发明的权利要求和等同技术范围之内,则本发明也意图包含这些改动和变型。