CN105284233A - 一种东北岩高兰种子催芽方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种促进东北岩高兰种子发芽的方法，包括以下步骤：(1)选择完格的东北岩高兰种子用浓硫酸溶液浸泡；(2)对浸泡后的种子进行赤霉素溶液浸泡；(3)浸泡消毒，消毒试剂为：酒精、次氯酸钠溶液；(4)对处理后种子进行变温沙层积处理。本发明所述方法打破了东北岩高兰种子休眠，提高了东北岩高兰种子的发芽率，并防止东北岩高兰物种灭绝，做好了资源保护工作，为发展和合理利用濒危东北岩高兰资源提供了一条可持续的发展途径。
Description
技术领域：
本发明涉及植物种子发芽领域，具体涉及一种东北岩高兰种子催芽方法。
背景技术
东北岩高兰为岩高兰科岩高兰属植物，生于我国东北大兴安岭海拔775-1460米的石山或林中。在我国仅东北岩高兰1变种，为珍稀植物，是我国二级濒危保护植物，对于研究植物区系，植物地理都具有一定的科学价值。当地鄂温克居民将东北岩高兰作为治疗保肝护肝的民间药“肝复灵”使用。然而东北岩高兰种子具有很强的休眠性，未经解除休眠的种子发芽率极低，东北岩高兰种子的深休眠特性给东北岩高兰的物种保护工作带来了很大困难。随着东北岩高兰药学研究的逐步加深，东北岩高兰大规模种植势在必行，这更使东北岩高兰育种保护工作迫在眉睫。因此，寻找到东北岩高兰种子的催芽方法成为当前急待解决的问题。现有关东北岩高兰催芽的具体有效方法甚少。本发明将提出一种东北岩高兰种子催芽方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种东北岩高兰种子催芽的方法。
为了实现上述目的，本发明提供的东北岩高兰种子催芽方法，包括以下步骤：
(1)取东北岩高兰种子100粒，浸泡于98％浓硫酸中，侵泡时间1分钟；
(2)搓去氧化后的种皮，将种子取出浸泡于500ppm的赤霉素中，浸泡12个小时；
(3)用75％酒精和2％次氯酸钠对浸泡后的种子进行浸泡消毒，先用75％酒精浸泡30秒，用蒸馏水洗净种子表面残留酒精后，将种子沥干置于2％次氯酸钠中浸泡20分钟；
(4)将消毒后种子平铺于置有1厘米厚细沙的培养皿中，再覆盖一层0.5厘米厚的细沙，将培养皿置于18℃光照培养箱6周进行温层积处理，期间保持细沙湿润；
(5)取经过温层积处理的培养皿，置于5℃低温冰箱6周进行低温层积处理，期间持续保持细沙湿润；
(6)取出培养皿，置于室温培养箱下培养并记录发芽数。
上述方法中：
本发明使用浓硫酸浸泡种子，在操作过程中需要注意种子浸泡于浓硫酸前必须保证干燥，所用浓硫酸没过全部种子即可。清洗5次种子，并搓去氧化后的种皮。由于浓硫酸遇水放热，所以第一次清洗应是将种子倒入大量水中。一方面，浓硫酸属于强酸，不冲洗的话，容易腐蚀容器，引起安全问题，另一方面，种子表面残留酸溶液易导致种子内部受到伤害，进而使种子受到伤害，影响发芽。本发明使用酒精浸泡，穿透细菌孢子的能力强，杀菌效果好。次氯酸再进一步分解形成新生态氧，新生态氧的极强氧化性使菌体和病毒上的蛋白质等物质变性，从而使病源微生物致死。采用酒精结合次氯酸钠对东北岩高兰种子消毒，不仅可以对种子外表面等进行消毒处理，而且还能对种子表皮内部进行消毒，最大可能的杀死寄存在种子中的细菌等有害物质，消毒效果突出，同时安全性高。实验中所涉及的沙，应经20目筛选后经湿式灭菌法20分钟除杂种子、虫卵的细沙，在层积过程中保证沙床保持湿润。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，
本发明所用化学试剂均为可以从市场上购得的常规试剂。
本发明中出现的百分号％均指体积百分数。
实施例1
(1)选择完整的东北岩高兰种子，用98％的浓硫酸浸泡1分钟；之后用蒸馏水冲洗5次，冲洗干净种子表面残留的酸溶液，并搓去氧化种皮。
(2)将种子平铺在干燥滤纸上，置于鼓风烘箱中，28℃下烘1小时，进行干燥处理。
(3)将干燥种子浸泡于100ppm赤霉素溶液12小时。
(4)将浸泡后的种子用75％的酒精中浸泡30秒，取出后用无菌水冲洗3-5次，洗掉种子表面的酒精。
(5)将酒精浸泡过的种子转移到2％的次氯酸钠溶液中，浸泡20分钟，浸泡结束后用无菌水清洗5次。
(6)将消毒后种子平铺于置有1厘米厚细沙的培养皿中，再覆盖一层0.5厘米厚的细沙，将培养皿置于18℃光照培养箱6周进行温层积处理，期间保持细沙湿润。
(7)取出培养皿，置于室温培养箱下培养并记录发芽数。
实施例2
(1)选择完整的东北岩高兰种子，用98％的浓硫酸浸泡1分钟；之后用蒸馏水冲洗5次，冲洗干净种子表面残留的酸溶液，并搓去氧化种皮。
(2)将种子平铺在干燥滤纸上，置于鼓风烘箱中，28℃下烘1小时，进行干燥处理。
(3)将干燥种子浸泡于200ppm赤霉素溶液12小时。
(4)将浸泡后的种子用75％的酒精中浸泡30秒，取出后用无菌水冲洗3-5次，洗掉种子表面的酒精。
(5)将酒精浸泡过的种子转移到2％的次氯酸钠溶液中，浸泡20分钟，浸泡结束后用无菌水清洗5次。
(6)将消毒后种子平铺于置有1厘米厚细沙的培养皿中，再覆盖一层0.5厘米厚的细沙，将培养皿置于18℃光照培养箱6周进行温层积处理，期间保持细沙湿润。
(7)取出培养皿，置于室温培养箱下培养并记录发芽数。
实施例3
(1)选择完整的东北岩高兰种子，用98％的浓硫酸浸泡1分钟；之后用蒸馏水冲洗5次，冲洗干净种子表面残留的酸溶液，并搓去氧化种皮。
(2)将种子平铺在干燥滤纸上，置于鼓风烘箱中，28℃下烘1小时，进行干燥处理。
(3)将干燥种子浸泡于500ppm赤霉素溶液12小时。
(4)将浸泡后的种子用75％的酒精中浸泡30秒，取出后用无菌水冲洗3-5次，洗掉种子表面的酒精。
(5)将酒精浸泡过的种子转移到2％的次氯酸钠溶液中，浸泡20分钟，浸泡结束后用无菌水清洗5次。
(6)将消毒后种子平铺于置有1厘米厚细沙的培养皿中，再覆盖一层0.5厘米厚的细沙，将培养皿置于18℃光照培养箱6周进行温层积处理，期间保持细沙湿润。
(7)取出培养皿，置于室温培养箱下培养并记录发芽数。
实施例4
(1)选择完整的东北岩高兰种子，用98％的浓硫酸浸泡1分钟；之后用蒸馏水冲洗5次，冲洗干净种子表面残留的酸溶液，并搓去氧化种皮。
(2)将种子平铺在干燥滤纸上，置于鼓风烘箱中，28℃下烘1小时，进行干燥处理。
(3)将干燥种子浸泡于100ppm赤霉素溶液12小时。
(4)将浸泡后的种子用75％的酒精中浸泡30秒，取出后用无菌水冲洗3-5次，洗掉种子表面的酒精。
(5)将酒精浸泡过的种子转移到2％的次氯酸钠溶液中，浸泡20分钟，浸泡结束后用无菌水清洗5次。
(6)将消毒后种子平铺于置有1厘米厚细沙的培养皿中，再覆盖一层0.5厘水厚的细沙，将培养皿置于18℃光照培养箱6周进行温层积处理，期间保持细沙湿润。
(7)取出培养皿，置于5℃冷藏箱中，冷藏6周进行低温层积处理，期间保持细沙湿润。
(8)取出培养皿，置于室温培养箱下培养并记录发芽数。
实施例5
(1)选择完整的东北岩高兰种子，用98％的浓硫酸浸泡1分钟；之后用蒸馏水冲洗5次，冲洗干净种子表面残留的酸溶液，并搓去氧化种皮。
(2)将种子平铺在干燥滤纸上，置于鼓风烘箱中，28℃下烘1小时，进行干燥处理。
(3)将干燥种子浸泡于200ppm赤霉素溶液12小时。
(4)将浸泡后的种子用75％的酒精中浸泡30秒，取出后用无菌水冲洗3-5次，洗掉种子表面的酒精。
(5)将酒精浸泡过的种子转移到2％的次氯酸钠溶液中，浸泡20分钟，浸泡结束后用无菌水清洗5次。
(6)将消毒后种子平铺于置有1厘米厚细沙的培养皿中，再覆盖一层0.5厘米厚的细沙，将培养皿置于18℃光照培养箱6周进行温层积处理，期间保持细沙湿润。
(7)取出培养皿，置于5℃冷藏箱中，冷藏6周进行低温层积处理，期间保持细沙湿润。
(8)取出培养皿，置于室温培养箱下培养并记录发芽数。
实施例6
(1)选择完整的东北岩高兰种子，用98％的浓硫酸浸泡1分钟；之后用蒸馏水冲洗5次，冲洗干净种子表面残留的酸溶液，并搓去氧化种皮。
(2)将种子平铺在干燥滤纸上，置于鼓风烘箱中，28℃下烘1小时，进行干燥处理。
(3)将干燥种子浸泡于500ppm赤霉素溶液12小时。
(4)将浸泡后的种子用75％的酒精中浸泡30秒，取出后用无菌水冲洗3-5次，洗掉种子表面的酒精。
(5)将酒精浸泡过的种子转移到2％的次氯酸钠溶液中，浸泡20分钟，浸泡结束后用无菌水清洗5次。
(6)将消毒后种子平铺于置有1厘米厚细沙的培养皿中，再覆盖一层0.5厘米厚的细沙，将培养皿置于18℃光照培养箱6周进行温层积处理，期间保持细沙湿润。
(7)取出培养皿，置于5℃冷藏箱中，冷藏6周进行低温层积处理，期间保持细沙湿润。
(8)取出培养皿，置于室温培养箱下培养并记录发芽数。
对比例1：浓硫酸处理，未经赤霉素浸泡，温层积处理。
(1)选择完整的东北岩高兰种子，用98％的浓硫酸浸泡1分钟；之后用蒸馏水冲洗5次，冲洗干净种子表面残留的酸溶液，并搓去氧化种皮。
(2)将种子平铺在干燥滤纸上，置于鼓风烘箱中，28℃下烘1小时，进行干燥处理。
(3)将干燥种子用75％的酒精中浸泡30秒，取出后用无菌水冲洗3-5次，洗掉种子表面的酒精。
(4)将酒精浸泡过的种子转移到2％的次氯酸钠溶液中，浸泡20分钟，浸泡结束后用无菌水清洗5次。
(5)将消毒后种子平铺于置有1厘米厚细沙的培养皿中，再覆盖一层0.5厘米厚的细沙，将培养皿置于18℃光照培养箱6周进行温层积处理，期间保持细沙湿润。
(6)取出培养皿，置于室温培养箱下培养并记录发芽数。
对比例2：浓硫酸处理，未经赤霉素浸泡，变温层积处理。
(1)选择完整的东北岩高兰种子，用98％的浓硫酸浸泡1分钟；之后用蒸馏水冲洗5次，冲洗干净种子表面残留的酸溶液，并搓去氧化种皮。
(2)将种子平铺在干燥滤纸上，置于鼓风烘箱中，28℃下烘1小时，进行干燥处理。
(3)将干燥种子用75％的酒精中浸泡30秒，取出后用无菌水冲洗3-5次，洗掉种子表面的酒精。
(4)将酒精浸泡过的种子转移到2％的次氯酸钠溶液中，浸泡20分钟，浸泡结束后用无菌水清洗5次。
(5)将消毒后种子平铺于置有1厘米厚细沙的培养皿中，再覆盖一层0.5厘米厚的细沙，将培养皿置于18℃光照培养箱6周进行温层积处理，期间保持细沙湿润。
(6)取出培养皿，置于5℃冷藏箱中，冷藏6周进行低温层积处理，期间保持细沙湿润。
(7)取出培养皿，置于室温培养箱下培养并记录发芽数。
对比例3：浓硫酸处理，100ppm赤霉素浸泡，未经层积处理。
(1)选择完整的东北岩高兰种子，用98％的浓硫酸浸泡1分钟；之后用蒸馏水冲洗5次，冲洗干净种子表面残留的酸溶液，并搓去氧化种皮。
(2)将种子平铺在干燥滤纸上，置于鼓风烘箱中，28℃下烘1小时，进行干燥处理。
(3)将干燥种子浸泡于100ppm赤霉素溶液12小时。
(4)将浸泡后的种子用75％的酒精中浸泡30秒，取出后用无菌水冲洗3-5次。洗掉种子表面的酒精。
(5)将酒精浸泡过的种子转移到2％的次氯酸钠溶液中，浸泡20分钟，浸泡结束后用无菌水清洗5次。
(6)将消毒后种子平铺于置有1厘米厚细沙的培养皿中，再覆盖一层0.5厘米厚的细沙，将培养皿置于，置于室温培养箱下培养并记录发芽数。
对比例4：浓硫酸处理，200ppm赤霉素浸泡，未经层积处理。
(1)选择完整的东北岩高兰种子，用98％的浓硫酸浸泡1分钟；之后用蒸馏水冲洗5次，冲洗干净种子表面残留的酸溶液，并搓去氧化种皮。
(2)将种子平铺在干燥滤纸上，置于鼓风烘箱中，28℃下烘1小时，进行干燥处理。
(3)将干燥种子浸泡于200ppm赤霉素溶液12小时。
(4)将浸泡后的种子用75％的酒精中浸泡30秒，取出后用无菌水冲洗3-5次，洗掉种子表面的酒精。
(5)将酒精浸泡过的种子转移到2％的次氯酸钠溶液中，浸泡20分钟，浸泡结束后用无菌水清洗5次。
(6)将消毒后种子平铺于置有1厘米厚细沙的培养皿中，再覆盖一层0.5厘米厚的细沙，将培养皿置于，置于室温培养箱下培养并记录发芽数。
对比例5：浓硫酸处理，500ppm赤霉素浸泡，未经层积处理。
(1)选择完整的东北岩高兰种子，用98％的浓硫酸浸泡1分钟；之后用蒸馏水冲洗5次，冲洗干净种子表面残留的酸溶液，并搓去氧化种皮。
(2)将种子平铺在干燥滤纸上，置于鼓风烘箱中，28℃下烘1小时，进行干燥处理。
(3)将干燥种子浸泡于500ppm赤霉素溶液12小时。
(4)将浸泡后的种子用75％的酒精中浸泡30秒，取出后用无菌水冲洗3-5次，洗掉种子表面的酒精。
(5)将酒精浸泡过的种子转移到2％的次氯酸钠溶液中，浸泡20分钟，浸泡结束后用无菌水清洗5次。
(6)将消毒后种子平铺于置有1厘米厚细沙的培养皿中，再覆盖一层0.5厘米厚的细沙，将培养皿置于，置于室温培养箱下培养并记录发芽数。
对比例6：浓硫酸处理，未赤霉素浸泡，未经层积处理。
(1)选择完整的东北岩高兰种子，用98％的浓硫酸浸泡1分钟；之后用蒸馏水冲洗5次，冲洗干净种子表面残留的酸溶液，并搓去氧化种皮。
(2)将种子平铺在干燥滤纸上，置于鼓风烘箱中，28℃下烘1小时，进行干燥处理。
(4)将干燥种子用75％的酒精中浸泡30秒，取出后用无菌水冲洗3-5次，洗掉种子表面的酒精。
(5)将酒精浸泡过的种子转移到2％的次氯酸钠溶液中，浸泡20分钟，浸泡结束后用无菌水清洗5次。
(6)将消毒后种子平铺于置有1厘米厚细沙的培养皿中，再覆盖一层0.5厘米厚的细沙，将培养皿置于，置于室温培养箱下培养并记录发芽数。
经统计测算，以上六组实施例中，种子发芽率分别为24％、28％、37％、40％、53％、85％。对比施例种子发芽率均为10％、14％、9％、16％、17％、7％。所以，施例六为本专利最优组。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同范围限定。
Claims (7)
1.一种促进东北岩高兰种子发芽的方法，其特征在于，包括如下步骤：
取东北岩高兰种子100粒，浸泡于98％浓硫酸中；
搓去氧化后的种皮，将种子取出浸泡于赤霉素溶液中，浸泡时间12小时；
用酒精和次氯酸钠溶液对浸泡后的种子进行浸泡消毒，先用酒精浸泡30秒，用蒸馏水洗净种子表面残留酒精后，将种子沥干置于次氯酸钠中浸泡20分钟；
将消毒后种子平铺于置有1厘米厚细沙的培养皿中，再覆盖一层0.5厘米厚的细沙，将培养皿置于18℃光照培养箱6周进行温层积处理，期间保持细沙湿润；
取经过温层积处理的培养皿，置于5℃低温冰箱6周进行低温层积处理，期间持续保持细沙湿润；
取出培养皿，置于室温培养箱下培养并记录发芽数。
2.如权利要求1所述的促进东北岩高兰种子发芽的方法，其特征在于，浓硫酸浸泡种子1分钟。
3.如权利要求1所述的促进东北岩高兰种子发芽的方法，其特征在于，用500ppm的赤霉素浸泡。
4.如权利要求1所述的促进东北岩高兰种子发芽的方法，其特征在于，用75％酒精和2％次氯酸钠消毒。
5.如权利要求1所述的促进东北岩高兰种子发芽的方法，其特征在于，温层积处理六周，低温层积处理六周。
6.如权利要求1所述的促进东北岩高兰种子发芽的方法，其特征在于，温层积处理温度18℃。
7.如权利要求1所述的促进东北岩高兰种子发芽的方法，其特征在于，低温层积处理温度5℃。
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| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20171229 Termination date: 20190204 |
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| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |