CN105254765A - 重组蛋白MOG35-55-I-Abβ1-α1及其基因和应用 - Google Patents
重组蛋白MOG35-55-I-Abβ1-α1及其基因和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种重组蛋白MOG35-55-I-Abβ1-α1及其基因和应用。该重组蛋白MOG35-55-I-Abβ1-α1，其氨基酸序列如SEQ？ID？No.1所示。本发明根据原核表达系统的密码子偏好性设计了一段融合基因MOG35-55-I-Abβ1-α1，并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达此可溶性蛋白MOG35-55-I-Abβ1-α1。该可溶性蛋白有望通过封闭MOG35-55特异性T细胞缓解EAE，为后续进一步诱导C57BL/6小鼠T细胞产生免疫耐受的研究奠定物质基础。
Description
技术领域
本发明涉及医学生物技术领域，具体地指一种重组蛋白MOG35-55-I-Abβ1-α1及其基因和应用。
背景技术
主要组织相容性分子(MajorHistocompatibilityComplex，MHC)对于机体免疫应答的发生与强度具有十分重要的作用。在天然情况下，抗原提呈细胞(Antigenpresentingcell，APC)将抗原肽提呈给T细胞，CD4+T细胞识别抗原肽/MHC-Ⅱ类分子复合物；而CD8+T细胞识别抗原肽/MHC-Ⅰ类分子复合物。在此过程中，T细胞的充分活化需要双信号：
①TCR与共受体CD4/CD8与pMHC特异性结合，提供T细胞活化的第一信号；
②APC和T细胞表面的多种共刺激分子相互作用，提供T细胞激活所必须的共刺激信号。
如果只有pMHC提供的第一信号，缺乏共刺激信号，则该特异性T细胞会发生克隆无能(clonalanergy)，表现为特异性免疫耐受。基于这个原理，近二十年来，国内、外实验室研究开发出多种形式的可溶性pMHC分子，它们能够有效地结合、封闭抗原特异性T细胞，但是由于缺乏共刺激分子所提供的第二信号，导致相应的T细胞发生克隆无能及免疫耐受，在同种移植排斥、自身免疫性疾病、超敏反应等多个疾病领域表现出重要的治疗潜力。
实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimentalautoimmuneencephalomyelitis,EAE)是人类自身免疫性疾病多发性硬化症(multiplesclerosis,MS)的动物模型，髓鞘磷脂少突胶质细胞糖蛋白(myelinoligodendrocyteglycoprotein，MOG)的优势表位MOG35-55能够在C57BL/6小鼠中诱生自身反应性T细胞从而导致疾病的发生。研制一种可溶性pMHC分子对小鼠EAE模型进行治疗，可为人类多发性硬化的治疗提供依据。
目前，还没有一种用于治疗人类自身免疫性疾病多发性硬化症的药品。
发明内容
本发明所要解决的技术问题就是提供一种重组蛋白MOG35-55-I-Abβ1-α1及其基因和应用。该重组蛋白可以用于治疗人类自身免疫性疾病多发性硬化症的药品的研发。
为实现上述目的，本发明提供的一种重组蛋白MOG35-55-I-Abβ1-α1，其氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。
本发明还提供了一种编码重组蛋白MOG35-55-I-Abβ1-α1的基因MOG35-55-I-Abβ1-α1，其核苷酸序列如SEQIDNo.2。
本发明还提供了一种重组表达载体，它含有权利要求2所述基因的原核表达载体；其中，所述的原核表达载体为pET30a表达载体。
本发明还提供了一种含有上述重组表达载体的大肠杆菌BL21表达菌株。
下述各项之一在合成用于治疗人类自身免疫性疾病多发性硬化症的药品中应用。
1)含有编码重组蛋白MOG35-55-I-Abβ1-α1的基因MOG35-55-I-Abβ1-α1的重组表达载体，
2)含有上述的重组表达载体的大肠杆菌BL21表达菌株。
本发明还提供了一种重组蛋白在治疗人类自身免疫性疾病多发性硬化症的药品中应用。
本发明的有益效果在于：
本发明根据原核表达系统的密码子偏好性设计了一段融合基因MOG35-55-I-Abβ1-α1，并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达此可溶性蛋白MOG35-55-I-Abβ1-α1。该可溶性蛋白有望通过封闭MOG35-55特异性T细胞缓解EAE，为后续进一步诱导C57BL/6小鼠T细胞产生免疫耐受的研究奠定物质基础。
附图说明
图1为融合蛋白MOG35-55-I-Abβ1-α1的蛋白表达图。
具体实施方式
为了更好地解释本发明，以下结合具体实施例进一步阐明本发明的主要内容，但本发明的内容不仅仅局限于以下实施例。
实验材料
pET30a质粒、BL21(DE3)菌株为我室保存；ProteinMarker购自Fermentas，货号26610；Acr、Bis、Tris等购自Sigma公司；SDS购自Amresco公司；Tyrptone、YeastExtract购自OXOID公司。
实施例1
1、重组融合基因MOG35-55-I-Abβ1-α1的密码子优化及全基因合成
在Genebank分别查出MOG35-55、I-Abβ1和I-Abα1的核苷酸序列，进行拼接，得到一段融合蛋白的氨基酸序列MOG35-55-I-Abβ1-α1如SEQIDNo.1所示。
按照原核表达系统使用密码子的偏性对表达上述融合蛋白的基因序列进行优化，加入起始密码子与终止密码子，得到优化后的融合重组MOG35-55-I-Abβ1-α1，其核苷酸序列如SEQIDNo.2。
并将上述序列亚克隆到pET30a载体中构建重组质粒pET30a[MOG35-55-I-Abβ1-α1]。基因测序结果与目的序列进行分析比对。
实施例2
1、蛋白表达
1)将pET[MOG35-55-I-Abβ1-α1]质粒转化BL21(DE3)感受态细胞。
2)挑取阳性克隆接种到5ml含有卡那霉素的LB培养基。
3)37℃振荡培养过夜，第二天按1:100接种到5ml含有卡那霉素的LB培养基，共4组。37℃振荡培养到OD550＝0.5，按照下面条件进行表达诱导：
(1)IPTG0mM37℃培养3h
(2)IPTG0.5mM37℃诱导3h
(3)IPTG0.5mM30℃诱导12h
(4)IPTG0.5mM37℃诱导24h
4)收集诱导完毕的细胞，超声裂解，离心收集上清和沉淀分别进行SDS-PAGE电泳检测目的蛋白分布。
2结果
2.1融合基因MOG35-55-I-Abβ1-α1的鉴定
将密码子优化后的融合基因进行全基因合成，对合成好的基因进行基因测序。测序结果与目的基因比对的结果证明合成基因正确无误，附比对结果。
2.2融合基因MOG35-55-I-Abβ1-α1的表达
全基因合成MOG35-55-I-Abβ1-α1融合基因，亚克隆到pET30a载体，转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态，挑取克隆在含有卡那霉素的LB培养基中培养并用IPTG诱导表达。采用37℃，30℃，13℃三个诱导条件进行诱导小试。实验表明，融合蛋白MOG35-55-I-Abβ1-α1在原核表达系统中获得了成功表达，并且，30℃诱导12h的表达量最高，多数蛋白分布在沉淀中，少量蛋白分布在上清中，图1。
其它未详细说明的部分均为现有技术。尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。
Claims (7)
1.一种重组蛋白MOG35-55-I-Abβ1-α1，其氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。
2.编码权利要求1所述蛋白的基因MOG35-55-I-Abβ1-α1，其核苷酸序列如SEQIDNo.2。
3.一种重组表达载体，其特征在于：它含有权利要求2所述基因的原核表达载体。
4.根据权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于：所述的原核表达载体为pET30a表达载体。
5.含有权利要求3和4所述重组表达载体的大肠杆菌BL21表达菌株。
6.下述各项之一在合成用于治疗人类自身免疫性疾病多发性硬化症的药品中应用。
1)权利要求3或4所述的重组表达载体，
2)含有权利要求3或4所述重组表达载体的大肠杆菌BL21表达菌株。
7.一种权利要求1所述的重组蛋白在治疗人类自身免疫性疾病多发性硬化症的药品中应用。
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| WO2023279771A1 (zh) * | 2021-07-05 | 2023-01-12 | 广东省科学院动物研究所 | 一种抗多发性硬化的重组蛋白及其制备方法和用途 |
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| CN103221424A (zh) * | 2010-09-03 | 2013-07-24 | 俄勒冈健康科学大学 | 具有共价结合肽的重组t细胞受体配体 |
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2015
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