CN105209492A - 抗嗜酸细胞活化趋化因子抗体在治疗炎症性肠病中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了非天然抗体构架区中CAT-212-213VH和/或VL结构域的一或多个互补决定区(CDR)或者完整VH、VL、CAT-212或CAT-213抗体在治疗对象中炎症性疾病如炎症性肠病中的应用。

Description

抗嗜酸细胞活化趋化因子抗体在治疗炎症性肠病中的应用

发明领域

本发明提供了非天然抗体构架区中CAT-212-213VH和/或VL结构域的一或多个互补决定区(CDR)或者完整的VH、VL、CAT-212或CAT-213抗体在治疗对象炎症性疾病如炎症性肠病中的应用。

发明背景

人嗜酸细胞活化趋化因子是趋化因子CC(Cys-Cys)亚家族的快速扩展组的一个成员。这组分子特征在于存在4个保守半胱氨酸，前两个是相邻的，并呈现序列相同性在20-75％之间。这个家族的成员包括嗜酸细胞活化趋化因子-2、嗜酸细胞活化趋化因子-3、单核细胞趋化蛋白(MCP)-l、MCP-2、MCP-3、MCP-4、MCP-5、巨噬细胞炎症蛋白(MIP)-l、MBP-13、TARC、LARC、1309和RANTES。

嗜酸细胞活化趋化因子可以通过多种正常细胞类型产生，包括上皮细胞、成纤维细胞、内皮细胞、T-淋巴细胞、单核细胞和巨噬细胞。嗜酸细胞活化趋化因子表达可以从不同细胞类型中通过许多促炎介质诱导，如肿瘤坏死因子-α、干扰素和白细胞介素-1。

嗜酸细胞活化趋化因子-1是一种趋化蛋白，其结合特异性受体CCR3，其主要在嗜酸性粒细胞上表达并将嗜酸性粒细胞募集至组织。在结合嗜酸性粒细胞上CCR3时，嗜酸细胞活化趋化因子导致细胞内钙动员、起始细胞内肌动蛋白聚合化、上调整联蛋白表达及诱导氧自由基产生。

嗜酸性粒细胞是促炎白细胞，其组成小百分比的循环血细胞。在健康状态，大多数这些细胞位于胃肠道中，在胃和肠道的固有层内。

嗜酸性粒细胞分泌毒性炎症介质，其贮存于预先形成的小泡中，也是在细胞激活后重新合成。由嗜酸性粒细胞分泌的主要蛋白质是嗜酸性粒细胞阳离子蛋白、主要碱性蛋白、嗜酸性粒细胞蛋白X、嗜酸性粒细胞衍生的神经内毒素以及嗜酸性粒细胞过氧化物酶。这些导致对组织的伤害，在靶细胞膜上插入空，及通过产生毒性氧自由基增加平滑肌反应性。

嗜酸性粒细胞在胃肠道炎症性疾病如炎症性肠病(IBD)中起作用。

术语炎症性肠病("1BD")描述了未知因素导致的一组慢性炎症性病变，其中肠道(肠)发炎，通常导致反复发生的腹痛和腹泻。IBD一般分为溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病。这些肠道疾病中的炎症过程包括许多炎症性细胞，如淋巴细胞、巨噬细胞、肥大细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞。嗜酸性粒细胞在IBD中所起的两个最重要的作用似乎是作为促炎和促胃肠动力剂，因此产生如腹泻、炎症、组织破坏、纤维化和狭窄以及最近提示的甚至修复的形成。

在UC中，炎症性反应受限于结肠的黏膜层和黏膜下层，具有清晰的界限；在克罗恩病中，全部的胃肠道均可涉及，炎症可以通过肠壁从黏膜层扩展至浆膜。炎症区域可以散在相对正常的黏膜层。在克罗恩病中，主要症状是腹泻、腹痛和体重降低，而在UC中，腹泻是主要症状，通常伴随直肠出血。这两种疾病在工业化国家很常见，在北美和北欧发病率最高。这两种疾病发生的高峰年龄是15-30岁，第二个稍弱高峰年龄是55-80岁。克罗恩病在女性比男性中示出更高的发病率。

IBD的满意治疗不符合医疗要求，因为现有的治疗剂未成功治愈疾病和防止手术治疗。接近全部溃疡性结肠炎患者的40％经历手术，这典型包括由于大量出血、慢性衰弱性病症、结肠穿孔或者癌症危险而除去部分大肠或者进行完全的结肠造口术。这种手术不能治愈克罗恩病，因为全部患者的75％在其生命中经历至少一次手术，接近90％的这些患者需要另外手术。因此，可以成功治疗炎症性肠病的治疗剂将具有改善患者生活质量的益处，同时潜在地节省与侵入性手术方法相关的医疗保健系统的千百万美元的花费。

发明概述

在一个实施方案中，本发明提供了治疗对象中炎症性肠病的方法，包括给予所述对象施用包含结合人嗜酸细胞活化趋化因子的特异性结合成员的组合物。

在一个实施方案中，所述结合成员包含抗体VH结构域，其包含VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3，其中所述VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别由SEQIDNO:5、SEQIDNO:6和SEQIDNO:7的氨基酸序列组成。

在另一个实施方案中，抗体VH结构域包含SEQIDNO:2序列。

在另一个实施方案中，结合成员包含抗体VL结构域，其包含VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3。

在另一个实施方案中，VLCDR1由氨基酸序列SEQIDNO:8组成。

在另一个实施方案中，VLCDR2由氨基酸序列SEQIDNO:9组成。

在另一个实施方案中，VLCDR3由氨基酸序列SEQIDNO:10组成。

在另一个实施方案中，抗体VL结构域包含SEQIDNO:4。

在一个实施方案中，炎症性肠病是溃疡性结肠炎。

在另一个实施方案中，炎症性肠病是克罗恩病。

在另一个实施方案中，炎症性肠病是胶原性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎、缺血性结肠炎、改道性结肠炎(Diversioncolitis)、贝切特病(disease)或者未定型结肠炎。

附图简述

图1示出用抗嗜酸细胞活化趋化因子-1抗体与对照抗体治疗相比，DSS-诱导的结肠炎小鼠的疾病活性指数。

图2示出用抗嗜酸细胞活化趋化因子-1抗体与对照抗体治疗相比，DSS-诱导的结肠炎小鼠体重与其注射前体重相比的改变百分比(％)。

图3示出用抗嗜酸细胞活化趋化因子-1抗体(B)与对照IgG(A)治疗相比，DSS诱导的结肠炎小鼠的体重随着时间的改变。

图4示出用抗嗜酸细胞活化趋化因子-1抗体(B)与对照抗体(A)相比治疗的DSS-诱导的结肠炎小鼠的代表性实例。出血和腹泻症状减轻。

图5示出用抗嗜酸细胞活化趋化因子-1抗体与对照抗体相比治疗的DSS-诱导的结肠炎小鼠中结肠的重量/长度比率(A)。图(B)和(C)示出接受抗嗜酸细胞活化趋化因子-1(C)或对照抗体(B)的DSS-处理的小鼠中结肠长度的实例。

发明详述

在一个实施方案中，本发明提供了治疗或预防对象中炎症性肠病的方法，包括给予所述对象施用包含结合人嗜酸细胞活化趋化因子的特异性结合成员的组合物。

在另一个实施方案中，本发明提供了抑制或阻抑对象中炎症性肠病的方法，包括给予所述对象施用包含结合人嗜酸细胞活化趋化因子的特异性结合成员的组合物。

在另一实施方案中，本发明提供了降低对象中炎症性肠病发生率的方法，包括给予所述对象施用包含结合人嗜酸细胞活化趋化因子的特异性结合成员的组合物。

在另一个实施方案中，本发明提供了抑制或中和对象中嗜酸细胞活化趋化因子的方法，包括给予所述对象施用包含结合人嗜酸细胞活化趋化因子的特异性结合成员的组合物。

在另一个实施方案中，本发明提供了与嗜酸细胞活化趋化因子激活物竞争结合嗜酸细胞活化趋化因子的方法，包括给予所述对象施用包含结合人嗜酸细胞活化趋化因子的特异性结合成员的组合物。在另一实施方案中，本发明提供了与嗜酸细胞活化趋化因子受体竞争嗜酸细胞活化趋化因子结合位点的方法，包括给予所述对象施用包含结合人嗜酸细胞活化趋化因子的特异性结合成员的组合物。

在另一个实施方案中，本发明提供了阻断结合嗜酸细胞活化趋化因子的方法，包括给予所述对象施用包含结合人嗜酸细胞活化趋化因子的特异性结合成员的组合物。在一个实施方案中，所述结合成员阻断嗜酸细胞活化趋化因子激活物的结合。在另一个实施方案中，所述结合成员阻断嗜酸细胞活化趋化因子受体的结合。

在一个实施方案中，本发明提供了包含如本文所述的结合人嗜酸细胞活化趋化因子的特异性结合成员的组合物的方法和应用。在一个实施方案中，所述组合物包含至少一种额外成分，如药物可接受的赋形剂。

在一个实施方案中，本发明提供了结合人嗜酸细胞活化趋化因子的特异性结合成员的方法和应用。在一个实施方案中，所述结合成员包含CAT-212VH结构域：

QVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSIKHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRTDDTAVYYCAGDTDYGDIDPWGQGTMVTVSS(SEQIDNO:2)。

在一个实施方案中，所述结合成员包含CAT-212VL结构域:

DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQDISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQASSFPSITFGQGTRLEIKR(SEQIDNO:4)。

在另一个实施方案中，结合人嗜酸细胞活化趋化因子的特异性结合成员是本领域已知的结合成员。在一个实施方案中，所述结合成员是本领域已知的人抗嗜酸细胞活化趋化因子-1抗体。

通常，VH结构域与VL结构域配对以提供抗体抗原结合位点，但是VH结构域单独可用于结合抗原。在一个优选实施方案中，CAT-212VH结构域(SEQIDNO:2)与CAT-212VL结构域(SEQIDNO:4)配对，以便形成包含CAT-212VH和VL这两个结构域的抗体抗原结合位点。在其它实施方案中，CAT-212VH与除了CAT-212VL之外的VL结构域配对。轻链混杂性(promiscuity)在本领域充分确立。

本文描述的结合人嗜酸细胞活化趋化因子的特异性结合成员在美国专利号6,946,546；7,323,311；8,067,564以及美国专利申请公开号US2012-0270265中更详细描述，所述专利以其全部内容并入本文做参考，包括产生这种结合成员和相关变体的方法以及结合成员的结合及其它特性。

简而言之，已经示出中和人嗜酸细胞活化趋化因子1的人单链片段可变抗体(CAT-212)通过使用抗体噬菌体展示技术产生，并将其转变为完整抗体IgG4形式(CAT-213)。可变重链互补决定区3的长度减少一个氨基酸，导致与亲代抗嗜酸细胞活化趋化因子1抗体相比效力增加>1000-倍。该优化的抗体结合嗜酸细胞活化趋化因子1，具有高亲和性(80.4pM)和特异性。CAT-213和CAT-212不结合或中和许多其它人蛋白质，包括人单核细胞趋化蛋白-1，这是一种结构相似的趋化因子。CAT-213中和嗜酸细胞活化趋化因子1的导致细胞内钙信号传导增加(IC(50)值为2.86nM)、表达CCR3的L1.2细胞迁移(IC(50)值为0.48nM)以及抑制嗜酸细胞活化趋化因子1诱发的在体外人嗜酸性粒细胞形态的改变(IC(50)为0.71nM)的能力。将CAT-213局部给予小鼠(1-100microgkg(-l))减弱由人嗜酸细胞活化趋化因子1诱导的皮肤嗜酸细胞增多症，达到>90％的嗜酸性粒细胞流入抑制。CAT-213因此在抑制其中嗜酸细胞活化趋化因子1和嗜酸性粒细胞起主要作用的疾病如严重哮喘中可具有治疗价值。

在一个实施方案中，一或多个CDR可取自CAT-212VH或VL结构域，并掺入合适的构架中。CAT-212VH包括CDR1(SYGMH,SEQIDNO:5)、CDR2(VISYDGSIKHYADSVKG,SEQIDNO:6)和CDR3(DTDYGDIDP,SEQIDNO:7)。CAT-212VL包括CDR1(RASQDISSWLA,SEQIDNO:8)、CDR2(AASSLQS,SEQIDNO:9)和CDR3(QQASSFPSIT,SEQIDNO:10)。

序列在本文示出及可用于嗜酸细胞活化趋化因子的特异性结合成员中的VH和VL结构域及CDR的变体可以通过序列改变或突变及筛选方法获得。本发明也提供了这种方法。

其序列在本文特别揭示的任何VH和VL结构域的可变结构域氨基酸序列变体可根据本发明使用，如本文论述。特定变体可包括一或多个氨基酸序列改变(添加、缺失、取代和/或插入氨基酸残基)，可以少于大约20个改变、少于大约15个改变、少于大约10个改变或者少于大约4、3、2或1个改变。改变可以在一或多个构架区和/或一或多个CDR中产生。

除了抗体序列之外，本发明的特异性结合成员可包含其它氨基酸，例如形成肽或多肽，如折叠的结构域，或者赋予分子除了结合抗原之外的另外功能特性。本发明的特异性结合成员可携带可检测标记，或者可以与毒素或酶缀合(例如通过肽键或接头)。

在进一步的方面，本发明提供了分离的核酸，其包含编码本发明的特异性结合成员、VH或VL结构域的序列，及提供了制备本发明的特异性结合成员、VH和/或VL结构域的方法，包括在使得所述特异性结合成员、VH结构域和/或VL结构域产生的条件下表达所述核酸并回收其。

携带本发明CDR的结构通常是抗体重链或轻链序列或者其主要部分，其中CDR位于相应于由重排的免疫球蛋白基因编码的天然发生的VH和VL抗体可变结构域的CDR的位置。免疫球蛋白可变结构域的结构和位置可以通过参考目前在互联网上可获得的Kabat,E.A.etal,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest.4thEdition,USDepartmentofHealthandHumanServices.1987及其更新内容(http://immuno.bme.nwu.edul)而确定。

优选地，基本如本文所述的CDR氨基酸序列在人可变结构域或其主要部分中作为CDR携带。基本如本文所述的VHCDR3序列代表本发明的优选实施方案，优选其均作为VHCDR3在人重链可变结构域或者其主要部分中携带。

用于本发明中的可变结构域可得自任何种系或重排的人可变结构域，或者可以是基于已知人可变结构域的共有序列合成的可变结构域。本发明的CDR序列(例如CDR3)可以通过使用重组DNA技术导入缺少CDR(例如CDR3)的可变结构域的库集(repertoire)中。

为此的技术为本领域已知，技术人员能使用这种技术通过本领域已知的常规方法提供本发明的特异性结合成员。

免疫球蛋白可变结构域的主要部分包含至少三个CDR区，以及其介于之中的构架区。优选地，该部分还包括第一个或第四个构架区任一或这二者的至少大约50％，50％是第一个构架区的C-末端50％及第四个构架区N-末端50％。在可变结构域主要部分的N-末端或C-末端的其它残基可以是与天然发生的可变结构域区域非正常相关的那些残基。例如，通过重组DNA技术制成的本发明的特异性结合成员的构建可导致由导入的接头编码的NB或C-末端残基的导入，以促进克隆或其它操纵步骤。其它操纵步骤包括导入接头以连接本发明的可变结构域与进一步的蛋白质序列包括免疫球蛋白重链、其它可变结构域(例如在产生双抗体中)或者蛋白质标记，如在下文更详细论述。

尽管在本发明的一个优选方面中，优选特异性结合成员包含一对VH和VL结构域，但是基于VH或VL结构域序列的单一结合结构域也组成本发明的另一方面。已知单一免疫球蛋白结构域、特别是VH结构域能以特异性方式结合靶抗原。

本发明的特异性结合成员可进一步包含抗体恒定区或其部分。例如，VL结构域可在其C-末端附着于抗体轻链恒定区结构域，包括人Cκ或Cλ链，优选Cλ链。相似地，基于VH结构域的特异性结合成员可以在其C-末端附着于衍生自任何抗体同种型的所有或部分免疫球蛋白重链，例如IgG、IgA、IgE和IgM以及任何同种型亚类，特别是IgGl和IgG4。优选IgG4。

本发明的特异性结合成员可以用可检测标记或功能性标记进行标记。可检测的标记包括放射性标记，如¹³¹I或者⁹⁹Tc，其可以通过抗体成像领域中已知的常规化学技术附着于本发明的抗体。标记也可以包括酶标记，如辣根过氧化物酶。标记进一步包括化学部分如生物素，其可以通过与特异性同源可检测部分例如标记的抗生物素蛋白被检测。

本发明的特异性结合成员设计为用于人和动物对象优选人的诊断或治疗方法中。在一个实施方案中，如本文所用术语“对象”包括任何哺乳动物对象，如灵长类动物(人和非人)、小鼠、大鼠、其它鼠物种、狗、猫、马、牛、羊和猪。在一个实施方案中，对象是伴生动物。伴生动物是指认为是宠物的任何非人动物，包括但不限于狗、猫、兔、猴等。

本发明的特异性结合成员可用于人和动物体的治疗或诊断方法中，如人患者的疾病或失调的治疗方法(包括预防性治疗)，所述方法包括给予所述患者有效量的本发明的特异性结合成员。

因此，本发明的进一步的方面提供了包括给予本发明提供的特异性结合成员的治疗方法、包含这种特异性结合成员的药物组合物，以及这种特异性结合成员在生产给予的药物中的应用，例如用于在生产包含配制特异性结合成员与药物可接受的赋形剂的药物或药物组合物的方法中。

在一个实施方案中，本发明提供了治疗或预防对象中慢性复发性炎症状况的方法，包括给予所述对象施用包含结合人嗜酸细胞活化趋化因子的特异性结合成员的组合物。

在另一个实施方案中，本发明提供了治疗或预防对象中与炎症相关失调的方法，包括给予所述对象施用包含结合人嗜酸细胞活化趋化因子的特异性结合成员的组合物。在另一个实施方案中，本发明提供了治疗或预防对象中炎症性失调的方法，包括给予所述对象施用包含结合人嗜酸细胞活化趋化因子的特异性结合成员的组合物。

在另一个实施方案中，本发明提供了治疗或预防在其痰液中具有高浓度嗜酸性粒细胞和嗜酸细胞活化趋化因子-1的对象中状况、疾病或失调的方法，包括给予所述对象施用包含结合人嗜酸细胞活化趋化因子的特异性结合成员的组合物。

在另一个实施方案中，本发明提供了预防或降低对象组织中嗜酸性粒细胞积聚的方法，包括给予所述对象施用包含结合人嗜酸细胞活化趋化因子的特异性结合成员的组合物。在另一个实施方案中，本发明提供了预防得自对象组织中嗜酸性粒细胞积聚的组织损伤和/或炎症的方法。

在另一个实施方案中，本发明提供了治疗或预防对象中自身免疫失调的方法，包括给予所述对象施用包含结合人嗜酸细胞活化趋化因子的特异性结合成员的组合物。

在一个实施方案中，抗-嗜酸细胞活化趋化因子抗体可用于治疗具有炎症性肠病(在一个实施方案中是溃疡性结肠炎或克罗恩病)及嗜酸性粒细胞结肠炎/肠炎/胃肠炎/舒尔曼综合征的对象和/或阻抑或抑制炎症性肠病的症状。在一个实施方案中，抗-嗜酸细胞活化趋化因子抗体可用于降低群体中的炎症性肠病发生率，所述群体在一个实施方案中是由于遗传倾向、环境因素、生活习惯或者这些因素的组合而易感炎症性肠病的群体。

在另一个实施方案中，炎症性肠病是胶原性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎、缺血性结肠炎、改道性结肠炎、贝切特病，或者未定型结肠炎。

嗜酸性粒细胞在以此为特征的这些疾病的病灶中似乎是主要细胞类型。

一些形式的脉管炎，特别是特发的，Hugues-Stovin综合征、丘斯综合征、支气管中心性肉芽肿病(bronchocentricgranulomatosis)、嗜酸性细胞性肺炎(吕弗勒综合征)、迁延性肺嗜酸细胞侵润症、Omenn's综合征、威斯科特-奥尔德里奇综合征、家族性嗜酸细胞增多症及特发性嗜酸细胞增多症可以用抗-嗜酸细胞活化趋化因子治疗。

未知因素的嗜酸细胞增多症可导致并发症如肺炎、脉管炎、结肠炎、肠炎、胃肠炎、吕弗勒心内膜炎和心瓣膜纤维化以及许多影响结缔组织的综合征。嗜酸细胞增多症也可以与恶性疾病(特别是淋巴瘤、白血病和胃肠癌)、药物治疗(例如细胞因子注入)和慢性疲劳综合征相关。抗-嗜酸细胞活化趋化因子治疗可用于任何这些疾病中。相似地，嗜酸细胞增多症-肌痛综合征、油毒综合征、弥漫性嗜酸细胞增多性筋膜炎(嗜酸性粒细胞性筋膜炎)以及嗜酸性粒细胞性肌炎可以用抗-嗜酸细胞活化趋化因子治疗。

由寄生物所致的嗜酸性粒细胞吸引可能是有害作用，因此在这些状况中用抗-嗜酸细胞活化趋化因子干预可提供益处。涉及由病原体所致嗜酸性粒细胞吸引的疾病包括原生动物感染，及后生动物感染如寄生虫侵害及特别是线虫感染(例如丝虫病、钩虫病、盘尾丝虫病、弓蛔虫病、蛔虫病和旋毛虫病、血管圆线虫病[嗜酸性粒细胞脑膜炎])。无症状寄生物疾病可以导致许多特发性嗜酸性粒细胞介导的疾病。

抗-嗜酸细胞活化趋化因子治疗对于除了嗜酸性粒细胞之外的细胞可具有作用，例如表达CCR-3的那些细胞，如嗜碱性粒细胞。

其中抗-嗜酸细胞活化趋化因子抗体可用于提供治疗益处的其它临床适应症包括哮喘、湿疹(特应性皮炎)及其它特应性疾病如鼻炎、结膜炎、食物过敏、过敏性结肠炎，这些被认为是嗜酸性粒细胞介导的疾病。实验证据表明嗜酸性粒细胞是导致大多数特应性病例的因素，因此抗-嗜酸细胞活化趋化因子治疗对于所有这些疾病可能均有效。还有其它过敏性状况如过敏性支气管肺曲霉病和热带嗜酸细胞增多症，其特征在于高周围血嗜酸性粒细胞计数，可以进行抗-嗜酸细胞活化趋化因子治疗。

根据这个方面及在一个实施方案中，本发明提供了治疗或预防对象中哮喘的方法，包括给予所述对象施用包含结合人嗜酸细胞活化趋化因子的特异性结合成员的组合物。在一个实施方案中，所述哮喘是重度哮喘。

目前明确需要改良的治疗以预防哮喘症状及治疗一旦已经发生的更严重的症状。抗-嗜酸细胞活化趋化因子治疗可以口服、注射(例如皮下或在紧急时静脉内给予)、吸入(与任何不希望的作用相比优化有益作用的模式)或者通过另外的施用途径给予。施用途径可以根据治疗的物理化学特性、对疾病的特殊考虑而确定，以优化效力或使副作用最小化。

此外，本发明提供了治疗或预防对象中过敏性疾病的方法，包括给予所述对象施用包含结合人嗜酸细胞活化趋化因子的特异性结合成员的组合物。在一个实施方案中，所述过敏性疾病是结膜炎。在另一个实施方案中，所述过敏性疾病是鼻炎。

皮肤状况可以最佳用抗-嗜酸细胞活化趋化因子局部治疗。患病的皮肤与健康皮肤相比通常具有增加的吸收能力，因此局部治疗可以在需要的部位提供最佳的治疗途径而没有在机体别处的不希望的作用。如果皮肤状况覆盖机体大部分或者如果疾病是重度的(也许影响其它器官以及皮肤)，则通过注射或通过其它有效方式施用也许是比局部途径更合适的。局部注射在某些情况中也许是合适的(见先前段落)。

根据这个方面及在一个实施方案中，本发明提供了治疗或预防对象中皮肤疾病或者皮肤失调的方法，包括给予所述对象施用包含结合人嗜酸细胞活化趋化因子的特异性结合成员的组合物。在一个实施方案中，皮肤疾病是炎症性皮肤疾病。在一个实施方案中，炎症性皮肤疾病是特应性皮炎。在一个实施方案中，所述皮肤失调是大疱性类天疱疮，这是特征在于炎症细胞激活的一种罕见的自身免疫性皮肤病，导致患者皮肤损害。

在另一个实施方案中，本发明提供了抑制对象中血管发生的方法，包括给予所述对象施用包含结合人嗜酸细胞活化趋化因子的特异性结合成员的组合物。

在另一个实施方案中，本发明提供了治疗或预防对象中细胞增殖性失调的方法，包括给予所述对象施用包含结合人嗜酸细胞活化趋化因子的特异性结合成员的组合物。在另一个实施方案中，本发明提供了治疗或预防对象中癌症的方法，包括给予所述对象施用包含结合人嗜酸细胞活化趋化因子的特异性结合成员的组合物。在另一个实施方案中，本发明提供了治疗或预防对象中肿瘤发展的方法，包括给予所述对象施用包含结合人嗜酸细胞活化趋化因子的特异性结合成员的组合物。在另一实施方案中，本发明提供了治疗或预防对象中癌前病变生长的方法，包括给予所述对象施用包含结合人嗜酸细胞活化趋化因子的特异性结合成员的组合物。

在一个实施方案中，所述癌症或肿瘤是乳腺癌或肿瘤。在另一个实施方案中，所述癌症或肿瘤是肺、结肠、结肠直肠、胃、胃肠、前列腺、脑、肝、肾、膀胱、皮肤、胰腺、脾、胸腺、睾丸、卵巢、子宫颈或子宫癌症或肿瘤。在一个实施方案中，所述脑癌是胶质母细胞瘤。

在另一个实施方案中，本发明提供了治疗或预防对象中慢性眼病的方法，包括给予所述对象施用包含结合人嗜酸细胞活化趋化因子的特异性结合成员的组合物。在一个实施方案中，所述慢性眼病是春季角结膜炎(VKC)。在另一个实施方案中，所述慢性眼病是特应性角结膜炎(AKC)。

在另一个实施方案中，本发明提供了治疗或预防对象中胃肠病学、肿瘤学、皮肤病学、眼科学、呼吸病学、皮肤病学或者神经病学-相关失调的方法，包括给予所述对象施用包含结合人嗜酸细胞活化趋化因子的特异性结合成员的组合物。在另一个实施方案中，本发明提供了治疗或预防对象中年龄相关认知下降(ACD)的方法，包括给予所述对象施用包含结合人嗜酸细胞活化趋化因子的特异性结合成员的组合物。

设想抗-嗜酸细胞活化趋化因子治疗不限于在临床应用。患者可以自身给予治疗，优选根据复合给药方案每日给予一次。

组合治疗可用于提供显著的协同效应，特别是组合抗-嗜酸细胞活化趋化因子特异性结合成员与一或多种抗-白细胞介素-5(IL-5)药物。本发明的特异性结合成员可以组合或加入一或多种皮质类激素提供，特别是一或多种全身性皮质类激素。与一或多种其它抗-哮喘/抗-过敏剂、特别是其它哮喘预防药如色甘酸盐、白三烯(受体)拮抗剂、黄嘌呤类和长效支气管扩张剂的组合治疗可用于哮喘治疗。相似考虑的组合用于皮肤及其它特应性状况的抗-嗜酸细胞活化趋化因子治疗应用中。

所有形式的银屑病、荨麻疹(包括急性荨麻疹、慢性复发性荨麻疹、迟发型压力性荨麻疹、寒冷型荨麻疹、皮肤划痕荨麻疹)、结节性痒疹、丘疹性红斑疹、类天疱疮、迟发性皮肤卟啉症、持续光反应、韦尔斯综合征、嗜酸性粒细胞性蜂窝组织炎、药疹、脉管炎(皮肤表现)、紫癜及其它皮肤状况均可以用本发明的抗-嗜酸细胞活化趋化因子治疗。这些状况可覆盖机体的大部分，可涉及除了皮肤之外的器官或者可以不引起皮肤具有增加的通透性。即使在作用部位有效地局部应用，但是同特应性适应症相同的考虑，优选的途径可以是全身性的(通过机体)。具有相关全身性表现的重度皮肤病是其中与局部治疗或局部注射相比优选全身性治疗的良好实例。

在一个实施方案中，本文描述的方法可用于治疗炎症性肠病。在一个实施方案中，本文描述的方法可用于治疗胶原性结肠炎。在一个实施方案中，本发明描述的方法可用于治疗淋巴细胞性结肠炎。在一个实施方案中，本文描述的方法可用于治疗缺血性结肠炎。在一个实施方案中，本文描述的方法可用于治疗改道型结肠炎。在一个实施方案中，本文描述的方法可用于治疗贝切特病。在一个实施方案中，本文描述的方法可用于治疗未定型结肠炎。

在一个实施方案中，使用本文描述的组合物在患有任一种前述疾病的患者中进行临床研究，例如在一个非限制性实施方案中，是活动性中度至重度溃疡性结肠炎(UC)。在一个实施方案中，患者患有活动性中度至重度UC。在一个实施方案中，评估在4周时间给予3次静脉内(IV)注入CAT-212的临床效力。在一个实施方案中，评估的CAT-212剂量为5或10mg/kg或者匹配的安慰剂。在一个实施方案中，所述研究可以是随机研究。在一个实施方案中，所述研究可以是双盲研究。在一个实施方案中，所述研究可以是安慰剂对照研究。在一个实施方案中，所述研究可以是平行组研究。在一个实施方案中，所述研究可以是多中心研究。在一个实施方案中，进行4周双盲处理，期间以两周间隔给予三次IV注入。在一个实施方案中，患者是抗-TNF难治者/无反应者。

在一个实施方案中，所述研究包括雄性。在一个实施方案中，所述研究包括雌性。在一个实施方案中，患者年龄为18-70岁(包括端点)。在一个实施方案中，所述研究包括根据标准诊断标准最少三个月诊断为活动性中度至重度UC的患者。在一个实施方案中，所述研究包括在筛选访视(ScreeningVisit)的Mayo得分为6-12(包括端点)的患者。在一个实施方案中，所述研究包括通过可屈性乙状结肠镜检查评定具有活动性粘膜疾病的内窥镜检查迹象的患者。在一个实施方案中，所述研究包括内窥镜检查分项分数(EndoscopicFindingSub-score)≥2(中心评定)的患者。在一个实施方案中，所述研究包括直肠出血分项分数≥1的患者。在一个实施方案中，所述研究包括医生总体评估(PGA)分数≥2的患者。在一个实施方案中，所述研究包括活检的结肠组织中嗜酸细胞活化趋化因子-1水平≥100pg/mg蛋白的患者。在一个实施方案中，所述研究包括通过研究人员确定及通过筛选实验室评估和身体检查结果而具有适度心、肾和肝功能的患者。在其它实施方案中，可以使用上述标准的任何组合。

在一个实施方案中，所述研究不包括具有除了痔疮手术或阑尾切除术之外的结肠或直肠手术病史的患者。在一个实施方案中，所述研究不包括目前接受全肠外营养(TPN)的患者。在一个实施方案中，所述研究不包括具有艰难梭菌毒素粪便检查阳性的患者。在一个实施方案中，所述研究不包括经检测是活动性/潜伏性结核分枝杆菌(TB)感染的患者。在一个实施方案中，所述研究不包括处于妊娠或哺乳期或者在研究期间计划妊娠的患者。在一个实施方案中，所述研究不包括具有任何已知CAT-212或任何药物赋形剂超敏性的患者。在一个实施方案中，所述研究不包括在筛选的30天内具有需要任何IV给予抗生素、抗病毒或抗真菌药物治疗的感染病史的患者，或者在筛选的14天内给予任何口服抗感染剂的患者。在一个实施方案中，所述研究不包括通过如下一或多个毒性迹象表明具有重度UC的患者：静息心率>100次/分钟，体温>37.8℃，血红蛋白<10.5g/dL。在一个实施方案中，事实上研究不包括具有溃疡性直肠炎的患者，该病定义为限于距离肛外缘小于15cm的疾病。在一个实施方案中，所述研究不包括在筛选之前4周内接受疫苗或其它免疫刺激剂的患者。在一个实施方案中，所述研究不包括在筛选访视前2周内使用>4.8g美沙拉嗪或等效物的患者。在一个实施方案中，如果在筛选访视之前2周期间剂量是稳定的，则允许美沙拉嗪≤4.8g。在一个实施方案中，所述研究不包括在筛选访视之前4周内使用超过20mg/天强的松的全身性应用皮质类激素的患者。在一个实施方案中，所述研究不包括在筛选访视之前4周内免疫抑制剂(例如皮质类激素、6-巯基嘌呤[6-MP]、硫唑嘌呤)的剂量变化的患者。在一个实施方案中，所述研究不包括在筛选访视60天内使用TNF-阻断剂(例如英夫利昔单抗或阿达木单抗)的患者。在一个实施方案中，所述研究不包括使用长期非类固醇抗炎(NSAID)治疗的患者。在一个实施方案中，允许对于头痛、关节炎、肌肉痛、痛经等偶尔使用NSAIDs或者对醋氨酚，或者允许针对心血管疾病预防而每日使用低剂量(81-162mg)阿司匹林。在一个实施方案中，所述研究不包括具有乙型肝炎和丙型肝炎血清学或者人免疫缺陷病毒(HIV)感染阳性病史的患者。在一个实施方案中，所述研究不包括具有先天性或者获得性免疫缺陷(例如常见变异型免疫缺陷、器官移植)的患者。在一个实施方案中，所述研究不包括具有临床显著异常实验室检查结果的患者，除非研究人员认为在研究时与疾病相关，包括但不限于血红蛋白水平<10.0g/dL，白细胞计数<3×10³/μL，淋巴细胞计数<0.5×10³/μL，血小板计数<100×10³/μL或者>1200×10³/μL，丙氨酸转氨酶(ALT)或者天冬氨酸转氨酶(AST)>正常上限(ULN)的3倍，碱性磷酸酶>3倍ULN，血清肌酐>2倍ULN；前述任何单一或任何组合迹象。在一个实施方案中，所述研究不包括具有活动性乙醇或药物滥用的患者。在一个实施方案中，所述研究不包括具有降低预期寿命的恶性病或恶性病史的患者。在一个实施方案中，所述研究不包括具有在研究人员的观点中如果参与研究方案则将患者置于不可接受的危险中的任何状况的患者。

在一个实施方案中，CAT-212是一种重组人IgG4单克隆抗体，其中和人嗜酸细胞活化趋化因子-1(嗜酸细胞活化趋化因子)，药物产物由在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中配制的CAT-212组成，浓度为10mg/mL，以10mL透明玻璃瓶中的无菌透明无色溶液呈现。在一个实施方案中，在30分钟通过静脉内注入施用5mg/kg和10mg/kg的CAT-212。在一个实施方案中，在30分钟通过静脉内注入施用安慰剂磷酸盐缓冲盐水(PBS)。

在一个实施方案中，临床研究的终点包括Mayo得分的改变，其中临床应答定义为与处理前筛选时Mayo得分相比降低至少3点和至少30％。在一个实施方案中，临床研究的终点包括与处理前筛选时直肠出血的分项分数相比降低至少1点或者直肠出血分项分数为0或1。在一个实施方案中，临床研究的终点包括UCEIS得分与筛选时相比的改变。在一个实施方案中，临床研究的终点包括临床缓解，定义为总Mayo得分为2点或更低，无单独的分项分数超过1点。在一个实施方案中，临床研究的终点包括在第42天粘膜愈合，定义为内窥镜检查的绝对分项分数为0或1。在一个实施方案中，临床研究的终点包括部分Mayo得分从第0天至所有计划的测量时间点的变化(疗效随访)。前述每个终点均可单独评估或者任意组合评估，作为另外的实施方案。

在一个实施方案中也进行CAT-212浓度的药物动力学分析。在给药时期(给药前及在开始研究药物注入后30分钟和4小时)及在随访时收集血样。计算如下PK参数：Cmax、Tmax、Cavg、Cmin和t1/2。如果确实需要，计算其它标准和探测性PK参数。

在一个实施方案中，研究的药效学(PD)终点包括从第0天(基线)至所有计划的测量时间点的粪便钙网蛋白改变。在一个实施方案中，研究的药效学(PD)终点包括分析嗜酸性粒细胞形态改变：在给药时期(给药前及非限制性地仅在第0天，在开始研究药物注入后4小时)及在随访时收集血样。在一个实施方案中，研究的药效学(PD)终点包括从第0天至任何单独或所有计划的测量时间点的嗜酸性粒细胞计数、血清嗜酸细胞活化趋化因子-1或hs-CRP或者任意其组合的改变。在一个实施方案中，研究的药效学(PD)终点包括从筛选时至给药后时间点如在一非限制性实例中是在第42天在活检组织中嗜酸细胞活化趋化因子-1浓度和嗜酸性粒细胞计数的改变。

根据本发明提供的组合物可以给予个体。优选以“治疗有效量”给予，即足以示出有益于患者的量。这种益处可以至少是至少一个症状的减轻。给予的实际量及给予的速度和时程依赖于被治疗的性质和严重度。治疗的处方如剂量决定等在一般执业医生及其它医生的职责内。抗体的合适剂量为本领域熟知，见LedermannJ.A.etal.(1991)LitJ.Cancer47:659-664；BagshaweK.D.etal(1991)Antibody,ImmunoconjugatesandRadiopharmaceuticals4:915-922。

精确剂量依赖于许多因素，包括抗体是用于诊断还是治疗、治疗区域的大小和位置、抗体的精确性质(例如完全抗体、片段或双抗体)，以及与抗体附着的任何可检测标记或其它分子的性质。对于全身性应用，典型的抗体剂量是在0.5mg-100g之间，对于局部应用，抗体的剂量是10μg-1mg。典型地，抗体是完全抗体，优选IgG4同种型。这是对于成年患者的单一治疗的剂量，对于儿童和婴儿可以按比例调整，对于其它抗体形式也可以根据分子量比例调整。根据医生判断，治疗可以重复进行，每天一次、一周两次、一周一次或者一月一次。

本发明的特异性结合成员通常是以药物组合物形式施用，所述药物组合物除了所述特异性结合成员之外还可包含至少一种成分。

因此，本发明的及根据本发明使用的药物组合物除了活性成分之外，还可包含药物可接受的赋形剂、载体、缓冲剂、稳定剂或者本领域技术人员熟知的其它材料。这种材料应是无毒性的，及应不干扰活性成分的效力。载体或其它材料的精确性质依赖于施用途径，可以是口服或注射，例如静脉内注射。

口服施用的药物组合物可以是片剂、胶囊、粉末或者液体形式。片剂可包含固体载体如明胶或佐剂。液体药物组合物通常包含液体载体如水、石油、动物油或植物油、矿物油或者合成油。可包含生理盐水溶液、葡萄糖或其它糖溶液或者二醇如乙二醇、丙二醇或者聚乙二醇。

对于静脉内注射，或者在受累部位注射，活性成分将是肠道外可接受的水溶液形式，其是无热原的及具有合适的pH、等渗性和稳定性。本领域相关技术人员使用例如等渗载体如氯化钠注射液、Ringer's注射液和乳酸Ringer's注射液可以制备合适的溶液。如果需要，可以包含防腐剂、稳定剂、缓冲剂、抗氧化剂和/或其它添加剂。

组合物可以单独或者组合其它治疗施用，根据治疗的状况同时或相继施用。其它治疗可包括施用合适剂量的缓解疼痛药物如非类固醇抗炎药(例如阿司匹林、扑热息痛、布洛芬或者酮洛芬)或者阿片制剂如吗啡，或者止吐药。

本发明提供了一种导致或允许本发明提供的特异性结合成员与嗜酸细胞活化趋化因子结合的方法。如述，这种结合可以在体内发生，例如在给予特异性结合肠成员或者编码特异性结合成员的核酸之后，或者可以在体外发生，例如在ELISA、Western印迹、免疫细胞化学、免疫沉淀或者亲和性层析中。

特异性结合成员与嗜酸细胞活化趋化因子结合的量可以确定。量化可以与检测样品中抗原的量相关，其可以是诊断感兴趣的。

样品中抗体的反应性可以通过任何合适方式确定。放射性免疫测定(RIA)是一种可能性。将放射性标记的抗原与未标记的抗原(检测样品)混合，并使得与所述抗体结合。将结合的抗原与未结合的抗原物理分离，确定与抗体结合的放射性抗原的量。检测样品中抗原越多，则越少的放射性抗原与抗体结合。竞争性结合测定也可以用非放射性抗原，使用与报道分子连接的抗原或类似物。报道分子可以是荧光染料、磷光或激光染料，具有光谱分离的吸收或发射特性。合适的荧光染料包括荧光素、罗丹明、藻红蛋白和德克萨斯红。合适的生色染料包括二氨基联苯胺。

其它报道物包括大分子胶体粒子或者颗粒材料如乳珠，其是有色的、磁性或顺磁性及生物或化学活性物质，可以直接或间接导致通过目测、电子检测或者另外记录的可检测信号。这些分子可以是酶，例如催化发生或改变颜色的反应，或者导致电学性质改变。其可以是分子易激的，由此能量状态之间的电子跃迁导致特征性光谱吸收或发射。它们可包括用于与生物传感器结合的化学实体。可以使用生物素/抗生物素蛋白或者生物素/链霉亲和素及碱性磷酸酶检测系统。

由各个抗体-报道物缀合物产生的信号可用于获得在样品(正常与检测样品)中相关抗体结合的可量化的绝对或相对数据。

本发明还提供了上述特异性结合成员在竞争测定中测量抗原水平的应用，即通过在竞争测定中应用本发明提供的特异性结合成员测量样品中抗原水平的方法。这可以不需要结合与未结合的抗原的物理性分离。将报道分子与特异性结合成员连接，以便在结合时发生物理或光学改变是一种可能性。报道分子可以直接或间接产生可检测的优选可测量的信号。报道分子的键连可以是直接或间接的例如通过肽键的共价键连或者非共价键连。通过肽键的键连可以是编码抗体和报道分子的基因融合体重组表达的结果。

本发明还提供了通过应用本发明的特异性结合成员在例如生物传感器系统中直接测量抗原水平。

确定结合的模式不是本发明的特征，本领域技术人员根据其偏好和一般知识可以选择合适的模式。

本发明进一步提供了编码本发明的特异性结合成员的分离的核酸。在一个实施方案中，核酸是DNA序列。在另一个实施方案中，核酸是RNA序列。在一个实施方案中，本发明提供了编码本发明的CDR、VH结构域、VL结构域或者其组合的核酸。在一个实施方案中，编码VH结构域的核酸是：

CAGGTGCAGCTGGTGCAATCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAAGCATTAAACATTATGCAGACTCCGTGAAGrGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAACTGACGACACGGCTGTATATTACTGTGCGGGAGATACGGACTACGGGGACATCGACCCGTGGGGTCAGGGCACCATGGTGACGGTCTCGAGT(SEQIDNO:1)。

在一个实施方案中，编码VH结构域的核酸是：

ACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCTTCCGTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTGTCGGGCGAGTCAGGATATTAGCAGCTGGTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCTGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTACTATTGTCAGCAGGCTAGCAGTTTCCCCTCGATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAAACGT(SEQIDNO:3)。

本发明还提供了包含上述至少一种多核苷酸的质粒、载体、转录或表达盒形式的构建体。

本发明还提供了重组宿主细胞，其包含如上述一或多种构建体。编码本发明提供的任何CDR、VH或VL结构域或特异性结合成员的核酸其自身组成了本发明的一个方面，以及产生编码的产物的方法，所述方法包括从编码核酸表达。表达可便利地通过在适当条件下培养含有所述核酸的重组宿主细胞而实现。通过表达产生后，VH或VL结构域或者特异性结合成员可以使用任何合适的技术分离和/或纯化，然后适当使用。

本发明的特异性结合成员、VH和/或VL结构域及编码核酸分子和载体可以提供为例如从其天然环境中分离的和/或纯化的基本纯的或均质的形式，或者在核酸情况中，没有或基本没有除了编码具有希望功能的多肽的序列之外的核酸或基因来源。本发明的核酸可包含DNA或RNA，及可以是完全或部分合成的。除非特别说明，本文提及核苷酸序列时涵盖具有特定序列的DNA分子，及涵盖具有特定序列的RNA分子，其中U取代T。

在多种不同宿主细胞中克隆和表达多肽的系统为本领域熟知。合适的宿主细胞包括细菌、哺乳动物细胞、酵母和杆状病毒系统。在本领域可获得的表达异源多肽的哺乳动物细胞系包括中国仓鼠卵巢细胞、HeLa细胞、幼仓鼠肾细胞、NSO小鼠黑素瘤细胞等。常优选的细菌宿主是大肠杆菌。

本领域已经充分确立了在原核细胞如大肠杆菌中表达抗体和抗体片段。参见例如Pluckthun,A.Bio/Technology9:545-551(1991)。在培养的真核细胞中表达也可以作为本领域技术人员作为产生特异性结合成员的选项，见例如Ref,M.E.(1993)Curr.OpinionBiotech.4:573-576；TrillJ.J.etal.(1995)Curr.OpinionBiotech6:553-560。

可以选择或构建合适的载体，其含有合适的调节序列，包括启动子序列、终止子序列、聚腺苷酸化序列、增强子序列、标记基因及其它合适的序列。载体可以适当地是质粒、病毒例如噬菌体或噬粒。关于进一步的详细描述见例如MolecularCloning:aLaboratoryManual:2ndedition,Sanibrooketal.,1989,ColdSpringHarborLaboratory-Press。例如在制备核酸构建体、诱变、测序、将DNA导入细胞中及基因表达以及蛋白质分析中操纵核酸的许多已知技术和方案在CurrentProtocolsinMolecularBiology,SecondEdition,Ausubeletal.eds.,JohnWiley&Sons,1992中详细描述。Sambrook等和Ausubel等的揭示在此并入作参考。

因此，本发明进一步的方面提供了含有如本文揭示的核酸的宿主细胞。本发明再一方面提供了包括将这种核酸导入宿主细胞中的方法。所述导入可应用任何可获得的技术。对于真核细胞，合适的技术可包括磷酸钙转染、DEAE-Dextran、电穿孔、脂质体介导的转染和转导，使用逆转录病毒或其它病毒如痘苗病毒；或者对于昆虫细胞，使用杆状病毒。对于细菌细胞，合适的技术可包括氯化钙转化、电穿孔和使用噬菌体转染。

在导入后，例如通过在基因表达的条件下培养宿主细胞可导致或允许核酸表达。

在一个实施方案中，本发明的核酸被整合进宿主细胞的基因组(例如染色体)中。整合可以通过根据标准技术包含促进与基因组重组的序列而促进。

本发明还提供了一种包括在表达系统中使用上述构建体以表达如上述特异性结合成员或多肽的方法。

在一个实施方案中，IBD或结肠炎通过内窥镜评定。在一个实施方案中，IBD或结肠炎通过分析促炎趋化因子和细胞因子而评定，在一个实施方案中是KG、IL-lβ、TNFα、IL-6、IFN-γ、IL-10或者其组合。在另一个实施方案中，IBD或结肠炎使用粪便渗透性测量而评定。在另一个实施方案中，IBD或结肠炎通过使用ElectricCell-substrateImpedanceSensing(ECIS)测量上皮电阻而评定。这些技术为本领域已知。

在另一个实施方案中，本发明提供了诊断对象中嗜酸性粒细胞相关疾病、状况或失调的方法，包括给予所述对象施用包含结合人嗜酸细胞活化趋化因子的特异性结合成员的组合物。在一个实施方案中，用于诊断的结合成员是标记的。在一个实施方案中，用于诊断的结合成员是探针。在另一个实施方案中，所述方法进一步包括检测标记以定量确定所述对象中感兴趣区域中嗜酸细胞活化趋化因子的水平的步骤。在一个实施方案中，感兴趣区域是消化道。在另一个实施方案中，感兴趣区域是肠。在另一个实施方案中，感兴趣区域是胃。在另一个实施方案中，感兴趣区域是结肠。在另一个实施方案中，如果对象经诊断为患有嗜酸性粒细胞相关疾病、状况或失调，所述诊断方法则进一步包括治疗所述嗜酸性粒细胞相关疾病、状况或失调的步骤。在另一个实施方案中，特异性结合成员用于诊断和治疗所述嗜酸性粒细胞相关疾病、状况或失调，及在一个实施方案中，所述诊断和治疗是同时实现的。在一个实施方案中，所述嗜酸性粒细胞相关疾病、状况或失调是炎症性肠病。在一个实施方案中，体内成像用于检测标记的特异性结合成员。在另一个实施方案中，诊断对象中嗜酸性粒细胞相关疾病、状况或失调的方法包括从所述对象中分离组织样品并将所述样品与所述特异性结合成员离体接触的步骤。在一个实施方案中，样品如活检组织样品，在一个实施方案中取自健康对象组织，以确定嗜酸细胞活化趋化因子水平的基线值。在一个实施方案中，取自对象的样品与基线值对比，如果其超过基线值预定量(百分比)，则该对象诊断为患有嗜酸性粒细胞相关疾病。

在另一个实施方案中，本发明的结合成员作为单一接种给予对象。在另一个实施方案中，结合成员给予两次。在另一个实施方案中，结合成员给予三次。在另一个实施方案中，结合成员给予四次。在另一个实施方案中，结合成员给予至少四次。在另一个实施方案中，结合成员给予四次以上。在多次给予结合成员的情况中，在一个实施方案中，结合成员在不同部位给予，而在另一个实施方案中，结合成员每次在相同部位给予。在另一个实施方案中，结合成员以1周间隔给予。在另一个实施方案中，结合成员以2周间隔给予。在另一个实施方案中，结合成员以3周间隔给予。在另一个实施方案中，结合成员以4周间隔给予。在另一个实施方案中，结合成员以1个月间隔给予。

在一个实施方案中，本发明的方法包括治疗状况、疾病或失调。在一个实施方案中，“治疗”是指治疗性处理。在另一个实施方案中，本发明的方法包括预防疾病或失调，在一个实施方案中，是指预防性措施，其中目的是防止或减轻如上述被靶向的病理学状况或失调。因此，在一个实施方案中，治疗可包括对所述疾病、失调或状况或其组合的直接影响或治愈、阻抑、抑制、预防、降低严重性、延缓发作、减少相关症状。因此，在一个实施方案中，“治疗”是指延迟进展、加快缓解、诱导缓解、扩大缓解、加速恢复、增加效力或降低对另外治疗的抗性，或者其组合。在一个实施方案中，“预防”是指延缓症状的发生、预防疾病复发、降低复发发作的次数或频率、延长症状发作之间的潜伏期，或者其组合。在一个实施方案中，“阻抑”或“抑制”是指降低症状的严重度、降低急性发作的严重度、减少症状的数目、降低疾病相关症状的发病率、减少症状的潜伏、减轻症状、减少继发症状、降低继发感染、延长患者生存期，或者其组合。

在一个实施方案中，本发明的组合物和方法有效地降低IBD获得率(acquisitionrate)、IBD症状持续时间、IBD症状频率或者其组合。

术语

特异性结合成员

该术语描述了一对分子的成员，其彼此具有结合特异性。特异性结合对的成员可以是天然衍生的或者完全或部分合成产生的。这对分子的一个成员在其表面上有一区域或空腔，与该对分子的另一成员的特定空间和极性组构特异性结合及因此互补。因此，这对成员具有彼此特异性结合的性质。特异性结合对的类型例如是抗原-抗体、生物素-抗生物素蛋白、激素-激素受体、受体-配体、酶-底物。本申请涉及抗原-抗体类型反应。

抗体

该术语描述了无论天然或者部分或全部合成产生的免疫球蛋白。该术语还涵盖了具有结合结构域的任何多肽或蛋白质，所述结合结构域与抗体结合结构域同源或基本同源。抗体例如是免疫球蛋白同种型及其同种型亚类；包含抗原结合结构域的片段如Fab、scFv、Fv、dAb、Fd；以及双抗体。

可以利用单克隆抗体或其它抗体及使用重组DNA技术产生保留原始抗体特异性的其它抗体或嵌合分子。这种技术可包括将编码免疫球蛋白可变区或者抗体的互补决定区(CDR)的DNA导入不同免疫球蛋白的恒定区或者恒定区加上构架区。见例如EP-A-184187、GB2188638A或EP-A-239400所述。可以对杂交瘤或者产生抗体的其它细胞进行突变或其它改变，这可以改变或不改变产生的抗体的结合特异性。

由于抗体可以通过多种方式修饰，因此术语“抗体”应理解为包括具有需要的特异性的结合结构域的任何特异性结合成员或物质。因此，该术语包括抗体片段、抗体的衍生物、功能等价物和同系物，包括包含免疫球蛋白结合结构域的任何多肽，无论是天然或是完全或部分合成的。因此本发明还包括包含与另一多肽融合的免疫球蛋白结合结构域或等价物的嵌合分子。嵌合抗体的克隆与表达在EP-A-0120694和EP-A-0125023中描述。

已经示出完整抗体的片段可进行结合抗原的功能。结合片段例如是：(i)由VL、VH、CL和CH1结构域组成的Fab片段；(ii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(iii)由单一抗体的VL和VH结构域组成的Fv片段；(iv)由VH结构域组成的dAb片段(Ward,E.S.etal..Nature341,544-546(1989))；(v)分离的CDR区域；(vi)F(ab')2片段，包含两个连接的Fab片段的二价片段；(vii)单链Fv分子(scFv)，其中VH结构域和VL结构域通过肽接头连接，使得这两个结构域结合形成抗原结合位点(Birdetal,Science,242,423-426,1988；Hustonetal,PNASUSA,85,5879-5883,1988)；(viii)双特异性单链Fv二聚体(PCT/US92/09965)；及(ix)“双抗体”，通过基因融合构建的多价或多特异性片段(WO94/13804；P.Hoiligeretal,Proc.Natl.Acad.Sci.USA906444-6448,1993)。Fv、scFv或双抗体可以通过掺入连接VH与VL结构域的二硫键而稳定化(Y.Reiteretal,NatureBiotech,14,1239-1245,1996)。也可以产生包含与CH3结构域结合的scFv的小抗体(Minibody)(S.Huetal.CancerRes,56,3055-3061,1996)。

双抗体是多肽的多聚体，每个多肽均包含具有免疫球蛋白轻链的结合区的第一结构域和包含免疫球蛋白重链的结合区的第二结构域，这两个结构域是连接的(例如通过肽接头)，但是不能彼此结合以形成抗原结合位点：抗原结合位点是通过多聚体内一个多肽的第一结构域与多聚体内另一多肽的第二结构域结合形成的(WO94/13804)。

在使用双特异性抗体的情况中，这些抗体可以是常规的双特异性抗体，其可以通过各种方式产生(Holliger,P.andWinterG.CurrentOpinionBiotechnol,4,446-449(3993))，例如通过化学制备或者从杂交的杂交瘤中制备，或者可以是上述任何双特异性抗体片段。可以仅使用可变结构域构建无Fc区的双抗体和scFv，潜在地降低抗独特型反应的作用。

与双特异性完整抗体相反，双特异性双抗体由于其易于构建及在大肠杆菌中表达也可以是特别有用的。具有适当结合特异性的双抗体(及一些其它多肽如抗体片段)可易于通过使用噬菌体展示技术(WO94/13804)从文库中选择。如果双抗体的一个臂保持恒定，例如具有针对抗原X的特异性，则可以产生其中另一臂是可变的文库并选择具有适当特异性的抗体。双特异性完整抗体可以通过钮-扣工程技术(knobs-into-holesengineering)产生(J.B.B.Ridgewayetal,ProteinEng.,9,616-621,1996)。

抗原结合结构域

该术语描述了抗体的一部分，其包含特异性结合并与部分或全部抗原互补的区域。在大抗原的情况中，抗体可以仅结合抗原的特定部分，该部分被称作表位。抗原结合结构域可以由一或多个抗体可变结构域(例如所谓的由VH结构域组成的Fd抗体片段)提供。优选地，抗原结合结构域包含抗体轻链可变区(VL)和抗体重链可变区(VH)。

特异性

该术语用于描述其中特异性结合对的一个成员未示出与除了其特异性结合配偶体之外的分子有任何明显结合的情况。该术语还可用于其中例如抗原结合结构域特异于由许多抗原携带的特定表位的情况中，在这种情况中携带抗原结合结构域的特异性结合成员将能结合携带所述表位的各种抗原。

分离的

该术语是指其中本发明的特异性结合成员或者编码这种结合成员的核酸的根据本发明的状态。所述成员和核酸没有或者基本上没有其天然相关的材料，如在其天然环境中或者在制备(当这种制备是通过重组DNA技术在体外或体内进行时)其的环境中(例如细胞培养)发现的其它多肽或核酸。

所述成员和核酸可以用稀释剂或佐剂配制，对于实施目的仍是分离的，例如如果用于包被微滴定平板以用于免疫测定，所述成员通常与明胶或其它载体混合，或者当用于诊断或治疗时将与药物可接受的载体或稀释剂混合。特异性结合成员可以是糖基化的，通过天然或者异源真核细胞系统(例如CHO或NSO(ECACC85110503))糖基化，或者可以是未糖基化的(例如如果通过在原核细胞中表达而产生)。

“基本如所述”是指本发明的相关CDR或者VH或VL结构域与本文所述的序列的指定区域相同或高度相似。“高度相似”是指在所述CDR和/或VH或VL结构域中可产生1-5个、优选1-4个如1-3或者1或2或3或4个取代。

在一些实施方案中，本发明的及用于本发明方法中的任何结合成员在本文所述的任何形式或实施方案中均包含如本文所述的一或多个本发明的VH结构域、VL结构域或者特定序列，或者其组合。在一些实施方案中，本发明的及用于本发明方法中的任何结合成员在本文所述的任何形式或实施方案中均由本发明的一或多个VH结构域、VL结构域或者特定序列或者其组合组成。在一些实施方案中，本发明的结合成员在本文所述的任何形式或实施方案中基本由本发明的一或多个VH结构域、VL结构域或者特定序列或者其组合组成。在一些实施方案中，术语“包含”是指包含其它活性成分，包括加强本发明的结合成员的效力或者降低其副作用的其它结合成员或其它物质。在一些实施方案中，术语“基本由…组成”是指这样的结合成员，其具有本发明的一或多个特定VH结构域、VL结构域或特定序列或者其组合。然而，也可以包含其它元件，其不直接参与本发明的一或多个VH结构域、VL结构域或特定序列的实用性。在一些实施方案中，术语“由…组成”是指结合分子在本文所述的任何形式或实施方案中具有特别描述的本发明的一或多个VH结构域、VL结构域或特定序列或者其组合。

在一些实施方案中，本发明的任何方法在本文所述的任何形式或实施方案中均包括施用如本文所述的本发明的一或多个VH结构域、VL结构域或特定序列或其组合。在一些实施方案中，本发明的任何方法在本文所述的任何形式或实施方案中均由施用本发明的一或多个VH结构域、VL结构域或特定序列组成。在一些实施方案中，本发明的任何方法在本文所述的任何形式或实施方案中均基本由施用本发明的一或多个VH结构域、VL结构域或特定序列组成。在一些实施方案中，术语“包括”是指包括其它活性步骤，包括施用其它结合成员或者其它物质以加强本发明的结合成员的效力或者降低其副作用。在一些实施方案中，术语“基本由…组成”是指方法主要具有本发明中描述的特定步骤。然而，可以包括不直接参与施用本发明的一或多个VH结构域、VL结构域或者特定序列的方法的其它步骤。在一些实施方案中，术语“由…组成”是指方法在本文所述的任何形式或实施方案中具有特别描述的施用本发明的一或多个VH结构域、VL结构域或特定序列或者其组合的步骤。

应理解本发明的及用于本发明中的结合成员与本文描述的结合成员可以是同源的，只要其保留本文所述结合成员证实的抗-嗜酸细胞活化趋化因子结合功能即可。根据这个方面及在一个实施方案中，本发明的及用于本发明中的结合成员与SEQIDNO:2和4-10在一个实施方案中是70％同源的，在另一个实施方案中是80％同源的，在另一个实施方案中是85％同源的，在另一个实施方案中是90％同源的，在另一个实施方案中是95％同源的，及在另一个实施方案中是98％同源的。在一个实施方案中，这种同源的结合成员可用于阻抑、抑制、预防或治疗嗜酸细胞活化趋化因子在其中起作用的一或多种状况、疾病或失调。

在另一个实施方案中，“同源性”是指与选自SEQIDNO:2、4-10的序列具有高于70％的相同性。在另一个实施方案中，“同源性”是指与选自SEQIDNO:2、4-10的序列具有高于72％的相同性。在另一个实施方案中，“同源性”是指与SEQIDNO:2、4-10之一具有高于75％的相同性。在另一个实施方案中，“同源性”是指与选自SEQIDNO:2、4-10的序列具有高于78％的相同性。在另一个实施方案中，“同源性”是指与SEQIDNO:2、4-10之一具有高于80％的相同性。在另一个实施方案中，“同源性”是指与SEQIDNO:2、4-10之一具有高于82％的相同性。在另一个实施方案中，“同源性”是指与选自SEQIDNO:2、4-10的序列具有高于83％的相同性。在另一个实施方案中，“同源性”是指与SEQIDNO:2、4-10之一具有高于85％的相同性。在另一个实施方案中，“同源性”是指与SEQIDNO:2、4-10之一具有高于87％的相同性。在另一个实施方案中，“同源性”是指与选自SEQIDNO:2、4-10的序列具有高于88％的相同性。在另一个实施方案中，“同源性”是指与SEQIDNO:2、4-10之一具有高于90％的相同性。在另一个实施方案中，“同源性”是指与SEQIDNO:2、4-10之一具有高于92％的相同性。在另一个实施方案中，“同源性”是指与选自SEQIDNO:2、4-10的序列具有高于93％的相同性。在另一个实施方案中，“同源性”是指与SEQIDNO:2、4-10之一具有高于95％的相同性。在另一个实施方案中，“同源性”是指与选自SEQIDNO:2、4-10的序列具有高于96％的相同性。在另一个实施方案中，“同源性”是指与SEQIDNO:2、4-10之一具有高于97％的相同性。在另一个实施方案中，“同源性”是指与SEQIDNO:2、4-10之一具有高于98％的相同性。在另一实施方案中，“同源性”是指与SEQIDNO:2、4-10之一具有高于99％的相同性。

在一个实施方案中，术语“同源性”、“同源”等提及任何蛋白质或肽时在一个实施方案中是指在排列序列及如果需要则导入缺口以实现最大百分比同源性之后，候选序列中与相应天然多肽的残基相同的AA残基百分比，任何保守取代不认为是序列相同性的一部分。序列排列对比的方法和计算机程序为本领域熟知。

在另一个实施方案中，同源性是通过针对序列排列的计算机算法确定的，通过本领域熟知的方法进行。例如，核酸序列同源性的计算机算法分析可包括利用各种可获得的软件包，例如BLAST、DOMAIN、BEAUTY(BLASTEnhancedAlignmentUtility)、GENPEPT和TREMBL软件包。

在另一个实施方案中，本发明提供了试剂盒，其包含用于进行本发明方法的疫苗。在另一个实施方案中，本发明提供了试剂盒，其包含本发明的疫苗。

在一个实施方案中，将本发明的特异性结合成员施用给对象。在一个实施方案中，“施用”是指通过注射或其它方式将本发明的组合直接导入对象中。在另一个实施方案中，“施用”是指将对象的免疫系统细胞与结合成员接触。

应理解本文描述的任何方法也描述了本文所述结合成员的各种应用，例如结合人嗜酸细胞活化趋化因子的特异性结合成员在治疗或预防炎症性肠病的方法中的应用。相似地，应理解本文描述的任何方法均还描述了本文所述结合成员在制备治疗炎症性肠病的组合物中的应用。例如，本发明描述了结合人嗜酸细胞活化趋化因子的特异性结合成员在制备治疗炎症性肠病的组合物中的应用。

本发明的各个方面和实施方案通过参考如下实验举例说明。

实施例1

抗嗜酸细胞活化趋化因子-1抗体在具有DSS-诱导的结肠炎小鼠中是治疗性的

材料和方法

所有研究均根据动物保护和使用委员会(InstitutionalAnimalCareandUseCommittee)要求进行。雄性Balb/C小鼠用于此项研究。

在所有小鼠中通过提供已经加入3.5％右旋葡聚糖硫酸钠(DSS；分子量42kDa；ICBiochemicals,Aurora,OH)的饮用水诱导结肠炎(第1天)。将小鼠经i.p.用同种型对照抗体(mIgG2a(R&D#54447)或者抗-嗜酸细胞活化趋化因子-1(mab420，R&D，4mg/kg；100μg/动物)在第0天(即在DDS诱导前24小时)和第4天处理。在第7天处死小鼠，评估：(1)疾病活性指数(包括体重、腹泻和便血)；(2)切除后的结肠长度和重量(组织水肿的标志)；(3)结肠的H&E染色；以及(4)组织髓过氧化物酶(MPO)活性。

确定疾病活性指数(DAI)

在所有动物中，每天确定体重、便血、肉眼血便及粪便稠度。疾病活性指数(DAI)通过组合a)体重减轻、b)粪便稠度和c)出血(除以3)得分确定。每项分值如下确定：体重变化(0:<1％；1:1-5％；2:5-10％；4:>15％)，便血(0:阴性；2:阳性)或者肉眼血便(4)，以及粪便稠度(0:正常；2:稀便；4:腹泻)。体重减轻以原始体重与任何特定天时实际体重之间差异百分比计算。典型地，在DSS结肠炎中，动物在10天内将丧失10-15％的体重。腹泻的出现被定义为粘膜/粪便附着于肛门皮毛。腹泻存在与不存在分别记分为1或0，腹泻的累计得分通过将每天的得分相加并处以暴露天数而计算。直肠出血被定义为含有可见血液/粘液或肉眼直肠出血的腹泻，以如腹泻相同记分。

结肠炎的组织学得分评定

对H&E-染色的结肠切片编码以进行炎症(即DSS诱导的结肠炎)的盲显微镜评估。组织学得分基于3个参数。炎症的严重度如下记分：0，固有层中罕见炎症细胞；1，固有层中粒细胞数目增加；2，炎症细胞铺满扩展至粘膜下层；3，炎症侵润的透壁扩展。隐窝(Crypt)损害如下所述记分：0，完整隐窝；1，丧失1/3；2，丧失2/3；3，全部隐窝丧失；4，糜烂的上皮表面改变；5，铺满的糜烂。溃疡如下所述记分：0，不存在溃疡；1，1或2个溃疡灶；2，3或4个溃疡灶；3，铺满或广泛溃疡。相加数值，最大组织学得分为11。

髓过氧化物酶(MPO)测定

将结肠组织样品在冰冷的含有0.5％十六烷基三甲基溴化铵(Sigma)的磷酸钾缓冲液(50mMK₂HPO₄和50mMKH₂PO₄，pH6.0)中均质。然后将均质物超声处理，冷冻-解冻三次，及在17,500rcf离心15分钟。将上清(20μl)或MPO标准物加入1mg/mL邻联茴香胺盐酸盐(Sigma)和0.0005％H₂O₂中，测量在450nm的吸光度的改变。1个单位的MPO活性被定义为每分钟降解1μmol过氧化物酶的量。结果以与水处理的小鼠(标准化为1)相比的相对MPO活性表示。

结果

图1示出与对照抗体相比用抗-嗜酸细胞活化趋化因子-1抗体处理的DSS诱导的结肠炎小鼠的疾病活性指数。用抗-嗜酸细胞活化趋化因子l抗体处理小鼠在DSS结肠炎小鼠模型中阻止结肠炎发展。图2示出与对照抗体相比用抗-嗜酸细胞活化趋化因子-l抗体处理的DSS诱导的结肠炎小鼠的体重与其注射前体重相比的变化百分比(％)。体重丧失略有降低(图2)。图3示出与对照IgG(A)相比用抗-嗜酸细胞活化趋化因子-l抗体(B)处理的DSS诱导的结肠炎小鼠体重随着时间的改变。图4示出与对照抗体(A)相比用抗-嗜酸细胞活化趋化因子-l抗体(B)处理的DSS诱导的结肠炎小鼠的代表性实例。在接受抗-嗜酸细胞活化趋化因子l抗体的DSS处理的小鼠中出血和腹泻症状改善。图5示出与对照抗体相比用抗-嗜酸细胞活化趋化因子-l抗体处理的DSS诱导的结肠炎小鼠中结肠的重量/长度比率(A)。图(B)和(C)示出接受抗-嗜酸细胞活化趋化因子-l(C)或对照抗体(B)的DSS处理的小鼠中结肠长度实例。在抗嗜酸细胞活化趋化因子l处理的DSS诱导的结肠炎小鼠中结肠重量与长度的比率较低。

实施例2

CAT-213对于溃疡性结肠炎的II期人临床试验

进行随机、双盲、安慰剂对照的平行组多中心研究以评估CAT-213在活动的中等至重度溃疡性结肠炎(UC)患者中的安全性、效力、药动学和药效学谱。该研究被设计为在患有活动性中等至重度UC的患者中评估在4周施用3次静脉内(IV)注入CAT-213的安全性和临床效力。该研究的二级目的包括在患有活动性中等至重度UC的患者中评估CAT-213的药动学(PK)和药效学(PD)。

研究是在患有活动性中等至重度UC的成年患者中的随机、双盲、安慰剂对照的平行组多中心研究。将合适资格的患者随机以1:1:1比率指派为三个处理组之一，CAT-213组(5或10mg/kg)或者匹配安慰剂组。研究包括三期：直至2周的筛选期，4周双盲处理期(间隔2周三次静脉内注入)，大约9周的安全性和效力随访期。这项研究征募了36个患者，以1:1:1比率随机分成3组，不超过一半的患者是抗-TNF难治/无反应患者。

在筛选期间-访视1(第-14至-1天)，筛选患者的研究适合性。进行如下评定：人口数据、病史、曾用药、体检、身高和体重、生命体征、ECG、活动性/潜伏期肺结核(TB)筛查、粪便中艰难梭菌毒素筛查、活检组织的可屈性乙状结肠镜检查、溃疡性结肠炎内窥镜检查严重度指数(UCEIS)、Mayo评分(Mayo评分为6-12(包括端点)；活动性UC的内窥镜检查迹象[即Mayo内窥镜检查分项分数≥2]，除非临床指定结肠镜检查则通过可屈性乙状结肠镜检查评定；Mayo直肠出血分项分数≥1；至少中等疾病的医生全面评估(PGA)(Mayo分项分数≥2))，组织中嗜酸细胞活化趋化因子-1水平及嗜酸性粒细胞计数，粪便样品中钙网蛋白及实验室评估(血液学、生物化学和血清妊娠检测[对于具有生育潜力的女性])。筛选访视可以在多天进行。符合所有入选标准及无一除外标准的患者随机分成处理组。

在处理期间-访视2(第0天)、访视3(第14天)、访视4(第28天)，在复查入选和除外标准之后，在每个处理访视给药前进行如下评定：体检、生命体征、ECG、部分Mayo评分、嗜酸性粒细胞计数、血清嗜酸细胞活化趋化因子-1、高敏性C反应蛋白(hs-CRP)、嗜酸性粒细胞形态改变测定、给药前血样以进行PK分析(CAT-213浓度)、粪便样品中钙网蛋白、尿液妊娠试验(对于具有生育潜力的女性)及安全性实验室评估(血液学、生物化学、CAT-213抗体)。在每次处理访视，在完成给药前评估后，将CAT-213/匹配安慰剂在30分钟经静脉内注入施用。在开始研究药物注入后的15分钟(注入期间)、30分钟(注入后即刻)、2小时和4小时记录生命体征。在30分钟(注入后立即)进行ECG。在开始研究药物注入后30分钟和4小时收集血样进行CAT-213浓度分析(PK分析)。仅在第0天，在开始研究药物注入后4小时，收集血样以测量嗜酸性粒细胞形态改变。记录注射部位反应(在开始给药后30分钟和4小时)、不利事件(AE)和联合用药情况。

在随访期间-访视5(第35天)、访视6(第42天)、访视7(第60天)和访视8(第90天)，进行如下评估：体检、生命体征、ECG、AE和联合用药记录、部分Mayo评分(访视5、7和8)、安全性实验室评估(血液学、生物化学、CAT-213抗体)、血样以进行CAT-213浓度分析(PK分析)及嗜酸性粒细胞形态改变测定、嗜酸性粒细胞计数、血清嗜酸细胞活化趋化因子-1和hs-CRP。评估粪便样品中钙网蛋白。访视6(第42天)还包括活检组织的可屈性乙状结肠镜检查，及评估UCEIS、Mayo得分、组织样品中嗜酸细胞活化趋化因子-1和嗜酸性粒细胞计数。

入选标准包括如下：(1)男性或女性，18-70岁(包括端点)；(2)根据标准诊断标准经诊断患有活动性中等至重度UC最少3个月，在筛选访视期Mayo得分为6-12(包括端点)，通过可屈性乙状结肠镜检查具有活动性粘膜疾病的内窥镜检查迹象，内窥镜检查分项分数≥2(中心评估)，直肠出血分项分数≥1，医生整体评估(PGA)分项分数≥2；(3)活检结肠组织中嗜酸细胞活化趋化因子-1水平≥100pg/mg蛋白质；(4)适当的心、肾和肝功能，通过研究者确定及通过筛选实验室评估和体检结果证实；这些检查结果必须均在正常限范围内或者由研究者判断无临床意义；(5)具有生育潜力的女性必须同意在研究期间持续使用有效的避孕措施(如激素避孕或两种形式的屏障避孕)及在筛选时具有阴性血清妊娠测试结果及在每次研究处理施用之前具有阴性尿液妊娠测试结果；(6)男性必须同意在研究期间持续使用有效的屏障避孕措施；(7)自愿且能坚持研究访视方案及其它方案要求；以及(8)自愿且能提供自愿书面知情同意书。

除外标准包括：(1)除了痔疮手术或阑尾切除术之外的结肠或直肠手术病史；(2)目前接受全肠道外营养(TPN)；(3)粪便艰难梭菌毒素检测阳性；(4)活动性/潜伏性肺结核(TB)感染检测阳性；(5)妊娠或哺乳期，或者在研究期间计划妊娠；(6)已知对CAT-213或任何药物赋形剂超敏；(7)在筛选30天内需要任何静脉内施用抗生素、抗病毒或抗真菌药物或者在筛选的14天内需要任何口服抗感染剂的感染病史；(8)通过如下毒性迹象证实重度UC：静息心率>100次/分钟，体温>37.8℃，血红蛋白<10.5g/dL；(9)溃疡性直肠炎，该疾病定义为限于距离肛外缘小于15cm；(10)在筛选前4周内接受疫苗或其它免疫刺激剂；(11)在筛选访视之前2周内使用≥4.8g美沙拉嗪或等价物，如果在筛选访视之前2周期间剂量是稳定的，则允许使用美沙拉嗪≤4.8g；(12)在筛选访视之前4周内使用超过等于20mg/天的强的松的全身性皮质类固醇；(13)在筛选访视之前4周内免疫抑制药物(例如皮质类固醇、6-巯基嘌呤[6-MP]、硫唑嘌呤)的剂量改变；(14)在筛选访视60天内使用TNF-阻断剂(例如英夫利西单抗或阿达木单抗)；(15)使用长期非类固醇抗炎(NSAID)治疗。针对头痛、关节炎、肌肉痛、痛经等偶尔使用NSAIDs或醋氨酚，或者针对预防心血管疾病每日使用低剂量的(81-162mg)阿司匹林是允许的；(16)在筛选访视90天内经诊断具有克罗恩病、憩室炎或憩室病、未定型结肠炎(在UC与克罗恩病之间不能区分[由研究者评定)、显微镜结肠炎(胶原性或淋巴细胞性结肠炎)、缺血性或感染性结肠炎、艰难梭菌结肠炎，在筛选访视90天内寄生物病，或者在筛选访视90天内全身性真菌感染；(17)乙型肝炎或丙型肝炎或者人免疫缺陷病毒(HIV)感染阳性血清学病史；(18)先天性或获得性免疫缺陷(例如常见变异型免疫缺陷、器官移植)；(19)临床显著的异常实验室检测结果，除非研究者认为与UC相关，包括但不限于：血红蛋白水平<10.0g/dL，白细胞计数<3×10³/μL，淋巴细胞计数<0.5×10³/μL，血小板计数<100×10³/μL或者>1200×10³/μL，丙氨酸转氨酶(ALT)或天冬氨酸转氨酶(AST)>3×正常值上限(ULN)，碱性磷酸酶>3×ULN，血清肌酐>2×ULN；(20)主动的乙醇或药物滥用；(21)可降低预期寿命的已知的恶性病或者恶性病史；(22)研究者认为如果参与该研究方案则将患者处于不可接受的危险中的任何状况；及(23)在筛选访视1个月内参与研究(未许可的)产品的临床试验。

CAT-213是一种重组人IgG4单克隆抗体，其中和人嗜酸细胞活化趋化因子-1(嗜酸细胞活化趋化因子)；药物产品由在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中配制的CAT-213组成，浓度为10mg/mL，呈现为在10mL透明玻璃瓶中的无菌透明无色溶液。将5mg/kg或10mg/kg的CAT-213在30分钟内通过静脉注入施用。安慰剂磷酸盐缓冲液水(PBS)在30分钟内通过静脉内注入施用。

该研究的主要终点包括：(1)从筛选时至第42天(访视6)Mayo得分的变化，其中在第42天的临床反应定义为：(a)与处理前筛选Mayo得分相比降低至少3点及至少30％；(b)与处理前筛选直肠出血分项分数相比降低至少1点，或者直肠出血分项分数为0或1；(2)从筛选时至第42天UCEIS得分的改变，其中在第42天临床反应。该研究的次要终点包括：(1)在第42天临床缓解，定义为总Mayo得分为2点或更低，无单独的分项分数超过1点；(2)在第42天粘膜愈合，定义为内窥镜检查绝对分项分数为0或1；及(3)从第0天至所有计划的测量时间点的部分Mayo得分改变(疗效随访)。

也进行对CAT-213浓度的药动学分析：在给药时期(给药前及在开始研究药物注入之后30分钟和4小时)及在随访时收集血样。计算如下PK参数：Cmax、Tmax、Cavg、Cmin和t1/2。如果认为需要，计算另外的标准和探测性PK参数。

该研究的药效学(PD)终点包括：(1)从第0天(基线)至所有计划的测量时间点的粪便钙网蛋白变化；(2)嗜酸性粒细胞形态改变的PD分析：在给药时期(给药前及仅在第0天开始研究药物注入之后4小时)及在随访时收集血样；从第0天至所有计划的测量时间点的嗜酸性粒细胞计数、血清嗜酸细胞活化趋化因子-1和hs-CRP的变化；(3)从筛选时至第42天活检组织中嗜酸细胞活化趋化因子-1浓度和嗜酸性粒细胞计数的变化。

安全性终点包括：(1)不利事件(AE)；(2)注射部位反应；(3)体检；(4)生命体征(血压、心率、体温和呼吸速率)；(5)ECG；(6)联合用药；及(7)实验室评估(血液学、生物化学、抗-CAT-213抗体)。

这个试验中的分析包括安全性、修改的意向-治疗分析(mITT)和符合方案分析(PP)。所有测量的变量和获得的参数均单独列出。通过处理组根据其性质如下概括结果：对于两分法变量：分为成功/失败样类别；然后与安慰剂组对比在活动性疾病组中失败和相对失败危险的具有95％置信区间的发生率。

对于数值型连续终点：描述统计和摘要表格包括针对活动性处理组校正的在处理组和安慰剂组的相关时间点的样品大小、算术平均值、标准偏差、中位数、最小和最大值，及对于平均数的95％置信区间(CI)。对于安排的分类终点：不同类别中的发生率及在两分法变量分类为成功/失败样类别之后活动性疾病组中相对于安慰剂组的失败和相对失败危险的具有95％置信区间的发生率。

这项研究的结果表明抗-嗜酸细胞活化趋化因子l处理良好耐受，具有明确的治疗作用。

实施例3

肠道嗜酸细胞活化趋化因子-1-嗜酸性粒细胞轴在炎症性肠病中的作用，前瞻性观测研究

进行研究以评估与健康对照相比克罗恩病(CD)和溃疡性结肠炎(UC)患者中嗜酸细胞活化趋化因子-1的血清和组织水平。血清样品和肠道活检得自经历筛选结肠镜检查具有已知CD或UC自愿患者或者健康个体。活检用于定量评定组织嗜酸细胞活化趋化因子-1水平及组织学评估组织嗜酸细胞增多症。与对照组相比，组织嗜酸细胞活化趋化因子-1水平在活动性UC和CD患者中显著增加，该水平与组织嗜酸细胞增多症相关。这项研究支持了嗜酸细胞活化趋化因子-1在UC和CD中的作用，特别是其作为粘膜炎症的局部介质的重要性。

Claims (11)

1.一种治疗对象中炎症性肠病的方法，包括给所述对象施用包含结合人嗜酸细胞活化趋化因子的特异性结合成员的组合物。

2.权利要求1的方法，其中所述结合成员包含抗体VH结构域，其包含VHCDRl、VHCDR2和VHCDR3，其中所述VHCDRl、VHCDR2和VHCDR3分别由SEQIDNO:5、SEQIDNO:6和SEQIDNO:7的氨基酸序列组成。

3.权利要求2的方法，其中所述抗体VH结构域包含SEQIDNO:2。

4.权利要求1的方法，其中所述结合成员包含抗体VL结构域，其包含VLCDRl、VLCDR2和VLCDR3。

5.权利要求4的方法，其中所述VLCDRl由SEQIDNO:8的氨基酸序列组成。

6.权利要求4的方法，其中所述VLCDR2由SEQIDNO:9的氨基酸序列组成。

7.权利要求4的方法，其中所述VLCDR3由SEQIDNO:10的氨基酸序列组成。

8.权利要求4的方法，其中所述抗体VL结构域包含SEQIDNO:4。

9.权利要求1的方法，其中所述炎症性肠病是溃疡性结肠炎。

10.权利要求1的方法，其中所述炎症性肠病是克罗恩病。

11.权利要求1的方法，其中所述炎症性肠病是胶原性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎、缺血性结肠炎、改道性结肠炎、贝切特病或者未定型结肠炎。