CN105198750A - 灵芝孢子中的新成分及其提取分离方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种灵芝孢子中的新成分及其提取分离方法，其中新成分的化学名称为10-epi-Chaxine？B，提取分离方法包括萃取-脱脂-梯度洗脱-反相柱-梯度洗脱-等度洗脱-收集等步骤。本发明提供的灵芝孢子中新成分的提取分离工艺成功从灵芝孢子中提取分离了一种新成分，为灵芝孢子油进一步的药理药效提供了物质基础。
Description
技术领域
本发明涉及提取分离技术领域，尤其涉及一种灵芝孢子中的新成分提取分离方法。
背景技术
灵芝又称林中灵(学名：GanodermaLucidumKarst)，以林中生长的灵芝最佳。外形呈伞状，菌盖肾形、半圆形或近圆形，为多孔菌科真菌灵芝的子实体。具有补气安神、止咳平喘的功效，用于眩晕不眠、心悸气短、虚劳咳喘。
灵芝孢子粉(Ganodermaspore)，是灵芝在生长成熟期，从灵芝菌褶中弹射出来的极其微小的卵形生殖细胞即灵芝的种子。每个灵芝孢子只有4－6个微米，是活体生物体，双壁结构，外被坚硬的几丁质纤维素所包围，人体很难充分吸收。破壁后更适合人体肠胃直接吸收。它凝聚了是灵芝的精华，具有灵芝的全部遗传物质和保健作用。
灵芝孢子油主要成份是灵芝酸、不饱和脂肪酸、灵芝多糖等。诱导或促进巨噬细胞的吞噬作用直接和间接毒杀肿瘤细胞。本品能够提高机体免疫力，减少因放、化疗引起的精神不佳、食欲减退、呕吐、脱发等情况的发生。
一般认为灵芝孢子油的临床作用与其含量丰富的成分有密切的关系，但是目前尚未能对灵芝孢子油成分全部鉴定。
发明内容
本发明提供了一种灵芝孢子中的新成分提取分离方法。
其中，一种灵芝孢子中的新成分，其特征在于：所述新成分的化学名称为10-epi-ChaxineB，化学结构式为
一种灵芝孢子中的新成分提取分离方法，包括以下步骤：
(1)取灵芝孢子粉，将其装入超临界萃取釜中，经萃取釜萃取并通过分离釜Ⅰ、分离釜Ⅱ二级分离，收集分离釜II中灵芝孢子油；
(2)灵芝孢子油用体积分数75～85％乙醇萃取三次，乙醇萃取液用石油醚萃取二次进一步脱脂，减压浓缩稀醇液得乙醇提取物；
(3)乙醇提取物上硅胶柱，用石油醚-丙酮以质量比100:0、98:2、95:5、9:1、8:2、7:3、0:100梯度洗脱；
(4)合并石油醚-丙酮质量比9:1～7:3洗脱部分得组份样品，该组份样品上反相柱，用甲醇-甲酸以质量比7:3、8:2、9:1、100:0梯度洗脱；
(5)甲醇-甲酸质量比9:1洗脱部分得三个组份A、B、C；
(6)三个组份分别进HPLC，用体积分数75～85％乙腈等度洗脱，收集tR＝244～257min的峰，其中一个组分可得新化合物10-epi-ChaxineB。
优选的，所述步骤(1)中，萃取釜压力为25～35MPa、温度为55～65℃；分离釜I压力为11～15Mpa、温度为50～60℃；分离釜II压力为5～7Mpa、温度为40～50℃；夹带剂为95％乙醇；萃取时间为60～120分钟。
优选的，所述步骤(2)中，灵芝孢子油用体积分数80％乙醇萃取。
优选的，所述步骤(3)中，硅胶柱为100～200目。
优选的，所述步骤(4)中，反相柱的填料为ODS。
优选的，所述步骤(5)中，甲酸体积分数为1％。
优选的，所述步骤(6)中，乙腈体积分数为80％。
本发明提供的灵芝孢子中的新成分及其提取分离工艺成功从灵芝孢子中提取分离了一种新成分，为灵芝孢子油进一步的药理药效提供了物质基础。
附图说明
图1是本发明提取分离的新成分分子结构式。
具体实施方式
下面的实施例是对本发明的进一步详细描述。
实施例1
一种灵芝孢子中的新成分提取分离方法，包括以下步骤：
(1)取灵芝孢子粉，将其装入超临界萃取釜中，经萃取釜萃取并通过分离釜Ⅰ、分离釜Ⅱ二级分离，收集分离釜II中灵芝孢子油；其中萃取釜压力为25MPa、温度为55℃；分离釜I压力为11Mpa、温度为50℃；分离釜II压力为5Mpa、温度为40℃；夹带剂为95％乙醇；萃取时间为60分钟；
(2)灵芝孢子油用体积分数75％乙醇萃取三次，乙醇萃取液用石油醚萃取二次进一步脱脂，减压浓缩稀醇液得乙醇提取物；
(3)乙醇提取物上硅胶(100g,100目)柱，用石油醚-丙酮以质量比100:0、98:2、95:5、9:1、8:2、7:3、0:100梯度洗脱；
(4)合并石油醚-丙酮质量比9:1～7:3洗脱部分得组份样品，该组份样品上反相柱(ODS，40-75μm)，用甲醇-甲酸以质量比7:3、8:2、9:1、100:0梯度洗脱；
(5)甲醇-1％甲酸质量比9:1洗脱部分得三个组份A、B、C；
(6)三个组份分别进HPLC，用75％乙腈等度洗脱，收集tR＝244～257min的峰，其中一个组分可得新化合物10-epi-ChaxineB。
实施例2
一种灵芝孢子中的新成分提取分离方法，包括以下步骤：
(1)取灵芝孢子粉，将其装入超临界萃取釜中，经萃取釜萃取并通过分离釜Ⅰ、分离釜Ⅱ二级分离，收集分离釜II中灵芝孢子油；其中萃取釜压力为35MPa、温度为65℃；分离釜I压力为15Mpa、温度为60℃；分离釜II压力为7Mpa、温度为50℃；夹带剂为95％乙醇；萃取时间为120分钟；
(2)灵芝孢子油用体积分数85％乙醇萃取三次，乙醇萃取液用石油醚萃取二次进一步脱脂，减压浓缩稀醇液得乙醇提取物；
(3)乙醇提取物上硅胶(100g,150目)柱，用石油醚-丙酮以质量比100:0、98:2、95:5、9:1、8:2、7:3、0:100梯度洗脱；
(4)合并石油醚-丙酮质量比9:1～7:3洗脱部分得组份样品，该组份样品上反相柱(ODS，40-75μm)，用甲醇-甲酸以质量比7:3、8:2、9:1、100:0梯度洗脱；
(5)甲醇-1％甲酸质量比9:1洗脱部分得三个组份A、B、C；
(6)三个组份分别进HPLC，用85％乙腈等度洗脱，收集tR＝244～257min的峰，其中一个组分可得新化合物10-epi-ChaxineB。
实施例3
一种灵芝孢子中的新成分提取分离方法，包括以下步骤：
(1)取灵芝孢子粉，将其装入超临界萃取釜中，经萃取釜萃取并通过分离釜Ⅰ、分离釜Ⅱ二级分离，收集分离釜II中灵芝孢子油；其中萃取釜压力为30MPa、温度为60℃；分离釜I压力为13Mpa、温度为55℃；分离釜II压力为6Mpa、温度为45℃；夹带剂为95％乙醇；萃取时间为60分钟；
(2)灵芝孢子油用体积分数80％乙醇萃取三次，乙醇萃取液用石油醚萃取二次进一步脱脂，减压浓缩稀醇液得乙醇提取物；
(3)乙醇提取物上硅胶(100g,200目)柱，用石油醚-丙酮以质量比100:0、98:2、95:5、9:1、8:2、7:3、0:100梯度洗脱；
(4)合并石油醚-丙酮质量比9:1～7:3洗脱部分得组份样品，该组份样品上反相柱(ODS，40-75μm)，用甲醇-甲酸以质量比7:3、8:2、9:1、100:0梯度洗脱；
(5)甲醇-1％甲酸质量比9:1洗脱部分得三个组份A、B、C；
(6)三个组份分别进HPLC，用80％乙腈等度洗脱，收集tR＝244～257min的峰，其中一个组分可得新化合物10-epi-ChaxineB。
新成分鉴定如下：
表茶树菇素乙(10-epi-ChaxineB)：白色固体；[α]D 25+65.9(c0.78,MeOH)；UV(MeOH)λmaxnm(1ogε)：228(3.91),208(4.00)；1HNMR(600MHz,CDCl3)δ:5.53(1H,d,J＝2.2,H-7),5.27(1H,dd,J＝15.3,7.6Hz,H-23),5.15(1H,dd,J＝15.3,8.4Hz,H-22),4.47(1H,brs,H-3),3.12(1H,dd,J＝13.5,3.6Hz,H-4b),2.69(1H,m,H-11b),2.54(1H,m,H-14),2.51(1H,m,H-11a),2.40(1H,dd,J＝13.5,4.7Hz,H-4a),2.24(1H,m,H-12b),2.17(1H,m,H-1a),2.10(1H,m,H-20),2.07(1H,m,H-2a),2.03(1H,m,H-1a),1.90(1H,m,H-16b),1.89(1H,m,H-24),1.70(1H,m,H-12a)1.66(1H,m,H-2a),1.61(1H,m,H-15b),1.50(1H,m,H-15a),1.48(2H,m,H-16a,H-25),1.46(1H,s,H-19),1.43(1H,m,H-17),1.04(1H,d,J＝6.6Hz,H-21),0.92(1H,d,J＝6.8Hz,H-28),0.89(1H,s,H-18),0.84(1H,d,J＝6.8,H-26),0.82(1H,d,J＝6.8,H-27)；13CNMR(150MHz,CDCl3)δ:34.5(C-1),28.1(C-2),70.3(C-3),46.5(C-4),205.2(C-5),165.3(C-6),117.5(C-7),154.5(C-8),203.5(C-9),84.4(C-10),38.6(C-11),37.7(C-12),46.1(C-13),57.4(C-14),22(C-15),28.9(C-16),55.5(C-17)，12.1(C-18),20.4(C-19),40.0(C-20),21(C-21),134.5(C-22),133(C-23),42.8(C-24),33(C-25),19.9(C-26),19.6(C-27),17.5(C-28)；ESI(+)MSm/z:939[2M+Na]+,497[M+K]+,481[M+Na]+；ESI(-)MSm/z:493[M+Cl]–。
表1.1H(600MHz)and13C(150MHz)NMRdata
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (8)
1.一种灵芝孢子中的新成分，其特征在于：所述新成分的化学名称为10-epi-ChaxineB，化学结构式为
2.一种灵芝孢子中的新成分提取分离方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)取灵芝孢子粉，将其装入超临界萃取釜中，经萃取釜萃取并通过分离釜Ⅰ、分离釜Ⅱ二级分离，收集分离釜II中灵芝孢子油；
(2)灵芝孢子油用体积分数75～85％乙醇萃取三次，乙醇萃取液用石油醚萃取二次进一步脱脂，减压浓缩稀醇液得乙醇提取物；
(3)乙醇提取物上硅胶柱，用石油醚-丙酮以质量比100:0、98:2、95:5、9:1、8:2、7:3、0:100梯度洗脱；
(4)合并石油醚-丙酮质量比9:1～7:3洗脱部分得组份样品，该组份样品上反相柱，用甲醇-甲酸以质量比7:3、8:2、9:1、100:0梯度洗脱；
(5)甲醇-甲酸质量比9:1洗脱部分得三个组份A、B、C；
(6)三个组份分别进HPLC，用体积分数75～85％乙腈等度洗脱，收集tR＝244～257min的峰，其中一个组分可得新化合物10-epi-ChaxineB。
3.如权利要求2所述的灵芝孢子中的新成分提取分离方法，其特征在于：所述步骤(1)中，萃取釜压力为25～35MPa、温度为55～65℃；分离釜I压力为11～15Mpa、温度为50～60℃；分离釜II压力为5～7Mpa、温度为40～50℃；夹带剂为95％乙醇；萃取时间为60～120分钟。
4.如权利要求2所述的灵芝孢子中的新成分提取分离方法，其特征在于：所述步骤(2)中，灵芝孢子油用体积分数80％乙醇萃取。
5.如权利要求2所述的灵芝孢子中的新成分提取分离方法，其特征在于：所述步骤(3)中，硅胶柱为100～200目。
6.如权利要求2所述的灵芝孢子中的新成分提取分离方法，其特征在于：所述步骤(4)中，反相柱的填料为ODS。
7.如权利要求2所述的灵芝孢子中的新成分提取分离方法，其特征在于：所述步骤(5)中，甲酸体积分数为1％。
8.如权利要求2所述的灵芝孢子中的新成分提取分离方法，其特征在于：所述步骤(6)中，乙腈体积分数为80％。
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| CN104611226A (zh) * | 2014-11-28 | 2015-05-13 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种灵芝孢子活性成分的提取方法及其应用 |
-
2015
- 2015-10-28 CN CN201510718357.8A patent/CN105198750B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20110020931A1 (en) * | 2008-01-29 | 2011-01-27 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Proliferation promoting agent for neural stem cells |
| CN104611226A (zh) * | 2014-11-28 | 2015-05-13 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种灵芝孢子活性成分的提取方法及其应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| JAE-HOON CHOI ET AL.: "Chaxines B, C, D, and E from the edible mushroom Agrocybe chaxingu", 《TETRAHEDRON》 * |
| 卢锦熙等: "灵芝孢子油化学成分研究", 《广州中医药大学学报》 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN105198750B (zh) | 2017-06-06 |
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