CN105154072A - 一种具有活体细胞显影功能的咔唑衍生物/金/半胱氨酸纳米复合双光子吸收材料及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种具有活体细胞显影功能的咔唑衍生物/金/半胱氨酸纳米复合双光子吸收材料及其制备方法，其中咔唑衍生物/金/半胱氨酸纳米复合双光子吸收材料是由咔唑衍生物与纳米金在半胱氨酸辅助下原位复合得到的复合材料；纳米复合双光子吸收材料中咔唑衍生物、纳米金及半胱氨酸的物质的量之比为80：1：80；所述咔唑衍生物的结构式为：

Description

一种具有活体细胞显影功能的咔唑衍生物/金/半胱氨酸纳米复合双光子吸收材料及其制备方法

一、技术领域

本发明涉及一种双光子吸收材料及其制备方法，具体地说是一种具有活体细胞显影功能的咔唑衍生物/金/半胱氨酸纳米复合双光子吸收材料及其制备方法。

二、背景技术

有机/无机纳米复合材料自然界中广泛存在，综合了有机、无机及纳米材料的优良特性，可以形成重要的多功能新材料，具有良好的机械、光、电和磁等功能特性，在许多领域包括在生命活动过程中具有广阔的应用前景。有机/无机纳米复合材料是在纳米尺度通过共价键/非共价键结合而产生，不同性能之间匹配、协同及整合，复合过程可以带来性质的增强甚至改变。

近年来，随着双光子吸收材料的发展，生物样品内的双光子荧光技术有了重大突破。双光子跃迁具有很强的选择激发性，可以实现生物组织中一些特殊物质显微成像；采用近红外或红外波段的激光作为光源，红外光在组织内的穿透能力强，组织自身吸收少，干扰小，可以获得较强的样品荧光。生物内源分子的双光子吸收截面大都很小，故而能够实现暗场成像，背景干扰很小。双光子荧光具有长波激发、短波发射的特点，长波激发光的穿透能力使其能到达深层的样品内部；而且，长波光源能量小对生物体的光损伤也较小，受生物组织散射的影响更小。由于激发只存在于交点处，焦点以外的区域都不会发生光漂白现象。与共聚焦成像相比，双光子成像不需要光学滤波器(共焦针孔)，提高了对荧光的收集率和图像对比度，因而在光电子集成、荧光探针、生物分子探测、医疗诊断和荧光显微成像技术等领域中有巨大应用潜力和广阔应用前景。

随着纳米技术的深入开发和广泛应用，具有双光子吸收性能的纳米材料作为双光子吸收材料在细胞显影、生物分子探测和医疗诊断等领域迅速发展，近年来，有机/无机纳米复合双光子吸收材料的制备、性质研究、生物学应用成为一个新的研究热点(J.Geng,K.Li,D.Ding,X.Zhang,W.Qin,B.Z.TangandB.Lin,Small,2012,8,3655-3663)。

咔唑基团具有刚性结构，共平面性强，咔唑衍生物具有良好空穴传输能力和高荧光量子效率，在光致、电致发光材料以及生物荧光探针等方面都表现出良好应用。近年来，人们对具有双光子活性的咔唑衍生物作为双光子敏化材料有较大兴趣(Y.Gao,J.Wu,Y.Li,P.Sun,H.Zhou,J.Xiang,S.Li,B.Jin,Y.Tian,J.Am.Chem.Soc.,2008,131,5208-5213)。

发明人对本申请的相关内容作了如下检索：

1、http://scholar.google.com网检索结果：(2015/10/18)

2、中国知网检索结果：(2014/8/1)

检索方式一：

篇名-----具有双光子细胞显影功能的咔唑衍生物-金-半胱氨酸纳米复合材料无。

篇名-----咔唑衍生物-金-半胱氨酸纳米复合双光子吸收材料无。

篇名-----咔唑衍生物-金-半胱氨酸纳米复合材料1项，均与目标化合物无关。

检索方式二：

全文-----具有双光子细胞显影功能的咔唑衍生物-金-半胱氨酸纳米复合材料133项，均与目标化合物无关。

全文-----咔唑衍生物-金-半胱氨酸纳米复合双光子吸收材料435项，均与目标化合物无关，

全文------咔唑衍生物-金-半胱氨酸纳米复合材料4853项，均与目标化合物无关。

检索方式三：

关键词----具有双光子细胞显影功能的咔唑衍生物-金-半胱氨酸纳米复合材料无相关文献。

关键词-----咔唑衍生物-金-半胱氨酸纳米复合双光子吸收材料无相关文献。

关键词-----咔唑衍生物-金-半胱氨酸纳米复合材料无相关文献。

三、发明内容

本发明旨在提供一种具有活体细胞显影功能的咔唑衍生物/金/半胱氨酸纳米复合双光子吸收材料(简称为咔唑衍生物/金/半胱氨酸纳米复合材料)及其制备方法，所要解决的技术问题是：遴选合适的具有双光子吸收性质的有机结构，并使其与纳米金在半胱氨酸辅助下进行原位复合，优化材料的双光子吸收性能，并使其具备低细胞毒性和强双光子显影功能，从而适于生物学应用。

本发明以具有双光子吸收性质的咔唑衍生物作为有机组分，金作为无机组分，通过原位复合自组装方法，简洁高效地制备了具有双光子吸收活性的咔唑衍生物/金/半胱氨酸纳米复合材料，测得其具有较低的细胞毒性和活体细胞双光子荧光显影功能。

本发明具有活体细胞显影功能的咔唑衍生物/金/半胱氨酸纳米复合双光子吸收材料，是由咔唑衍生物与纳米金在半胱氨酸辅助下原位复合得到的纳米复合双光子吸收材料；

纳米复合双光子吸收材料中咔唑衍生物、纳米金与半胱氨酸的物质的量之比为80：1：80。

所述咔唑衍生物的结构式为：

本发明具有活体细胞显影功能的咔唑衍生物/金/半胱氨酸纳米复合双光子吸收材料的制备方法如下：

a、将0.167g咔唑、0.45g溴己烷和0.07gNaH溶于DMF中，140℃搅拌反应24h，反应结束后冷却到室温，加入100mLCH₂Cl₂，用水萃取3-4次，无水MgSO₄干燥，蒸除溶剂，得到中间体1；

b、将12.55g中间体1、92mLPOCl₃和39mLDMF置于500mL圆底烧瓶中，80℃搅拌反应1h，倒入冰水中得到淡黄色固体，用NaOH调节pH值至中性后用乙酸乙酯萃取，合并有机层，依次用水、饱和食盐水洗涤，用无水MgSO₄干燥，蒸除溶剂，固体用石油醚柱层析得到白色中间体2；

c、将2.80g中间体2溶于甲醇中，加入0.76gNaBH₄，室温下搅拌反应6h，蒸除甲醇得到中间体3；为降低反应剧烈程度，分三批加入NaBH₄，每次加入的量相等，每次加入的间隔时间为15min；

d、将2.80g中间体3和3.9g三苯基磷溶于氯仿中得到混合液，另取1.70gKI溶于水中得到KI溶液，将所述混合液和KI溶液混合，加入5mL冰醋酸和0.03g催化剂18-C-6，65℃搅拌反应七天，TLC跟踪至中间体3反应完全，蒸除溶剂，将反应混合物倒入500mL对二甲苯中洗去三苯基磷，收集析出的固体，干燥，得中间体4；

e、将0.65g中间体4溶于DMF得到中间体4的DMF溶液，另取对苯二甲醛0.13g溶于DMF中得到对苯二甲醛的DMF溶液，将中间体4的DMF溶液和对苯二甲醛的DMF溶液混合，室温搅拌反应8-12小时，TLC跟踪至反应完全；反应结束后将反应混合物加入500mLCH₂Cl₂中，依次用水洗涤、无水MgSO₄干燥，旋干溶剂；固体产物经柱层析(洗脱液为体积比50:1的石油醚和乙酸乙酯混合液)，得到黄色中间体5；

f、将0.38g中间体5、0.10g丙二腈和0.16gNa₂CO₃溶于乙醇中，回流搅拌反应8-12小时，TLC跟踪至反应完全，反应结束后将反应混合物加入500mLCH₂Cl₂中，依次用水洗涤、无水MgSO₄干燥，旋干溶剂；产物经柱层析(洗脱液为体积比50:1的石油醚和乙酸乙酯混合液)，得到黄色固体HCBDMN；

g、将9.2mgHCBDMN、100mg十二烷基磺酸钠(SDS)、2.5mg半胱氨酸溶于乙二醇中，微波加热至溶解，随后滴加5滴0.01mol/L的HAuCl₄乙二醇溶液，微波辐射(560W)2分钟，自然冷却至室温，得到咔唑衍生物/金/半胱氨酸纳米复合双光子吸收材料。

本发明以咔唑为起始原料，a：先制备中间体1己基咔唑，b：由中间体1制备中间体2(己基咔唑单醛)，c：由中间体2制备中间体3(己基咔唑-3-醇)，d：由中间体3制备中间体4，e：由中间体4制备中间体5，f：由中间体5制备HCBDMN(3-(2,2'-二氰基-乙烯基-4-苯乙烯基)-N-己基咔唑)，最后在半胱氨酸的存在下由乙二醇在微波辐射条件下还原氯金酸制得纳米金，继而发生原位复合自组装得到咔唑衍生物/金/半胱氨酸纳米复合双光子吸收材料，具体制备路线如下：

1、中间体1的制备：

将咔唑(0.167g,1mmoL)、溴己烷(0.45g,3mmoL)和NaH(0.07g,3mmoL)溶于DMF(20mL)中，140℃搅拌反应24h，冷却到室温，加入100mLCH₂Cl₂，用水萃取4次，每次30mL，无水MgSO₄干燥，蒸除溶剂，得到0.25g中间体1；

所述中间体1的结构式为：

2、中间体2的制备

将中间体1(12.55g，0.05mol)、POCl₃(92mL)和DMF(39mL)置于500mL圆底烧瓶中，80℃搅拌反应1h，倒入冰水中得到淡黄色固体，用NaOH调节pH值至中性后用150mL乙酸乙酯萃取3次，合并有机层，依次用水、饱和食盐水洗涤，用无水MgSO₄干燥有机层，蒸除溶剂，固体用石油醚柱层析得到8.9g白色中间体2；

所述中间体2的结构式为：

3、中间体3的制备

将中间体2(2.80g,0.01moL)溶于20mL甲醇中，加入到100mL圆底烧瓶，加入NaBH₄(0.76g,0.02moL)，室温下搅拌反应6h，蒸除甲醇得到中间体3；为降低反应剧烈程度，NaBH₄每隔15min分三批加入。

所述中间体3的结构式为：

4、中间体4的制备

将中间体3(2.80g,0.01mol)和三苯基磷(3.9g,0.015mol)溶于氯仿(30mL)中，加入到250mL圆底烧瓶中，另取KI(1.70g，0.01mol)溶于水(1mL)中，混合两种溶液，加入冰醋酸(5mL)和0.03g催化剂18-C-6，65℃搅拌反应七天，TLC跟踪至中间体3反应完全，蒸除溶剂，将反应混合物倒入500mL对二甲苯中洗去三苯基磷，收集析出的固体，干燥，得中间体4；

所述中间体4的结构式为：

5、中间体5的制备

将中间体4(0.65g，1.0mmol)溶于DMF(5mL)，加入到100mL圆底烧瓶中，另取对苯二甲醛(0.13g，1.0mmol)溶于DMF(5mL)中，混合两种溶液，室温搅拌反应8-12小时，TLC跟踪至反应完全；反应结束后将反应混合物加入500mLCH₂Cl₂中，100mL水洗四次，无水MgSO₄干燥，旋干溶剂，产物经柱层析(洗脱液为体积比50:1的石油醚和乙酸乙酯混合液)，得到黄色中间体5；

所述中间体5的结构式为：

6、HCBDMN的制备

将中间体5(0.38g,1.0mmol)、丙二腈(0.10g，1.5mmol)和Na₂CO₃(0.16g，1.5mmol)溶于乙醇(30mL)，加入到250mL圆底烧瓶中，回流搅拌反应8-12小时，TLC跟踪至反应完全，反应结束后将反应混合物加入500mLCH₂Cl₂中，100mL水洗四次，无水MgSO₄干燥，旋干溶剂，产物经柱层析(洗脱液为体积比50:1的石油醚和乙酸乙酯混合液)，得到黄色固体HCBDMN；

所述HCBDMN的结构式为：

7、HCBDMN/Au/Cys纳米复合材料的制备

将9.2mgHCBDMN、100mg十二烷基磺酸钠(SDS)、2.5mg半胱氨酸溶于5mL乙二醇中，加入到50mL的圆底烧瓶，微波加热30s溶解，滴加5滴0.01mol/L的HAuCl₄乙二醇溶液，微波辐射2分钟，自然冷却至室温，得到咔唑衍生物/金/半胱氨酸纳米复合双光子吸收材料。

本发明以的咔唑基团作为主体，简洁高效地制备了HCBDMN，继而在半胱氨酸存在下与纳米金原位复合，得到咔唑衍生物/金/半胱氨酸纳米复合双光子吸收材料，该复合物具有较强的双光子吸收活性，发明人对其进行了双光子细胞显影的研究。

实验发现，人体肝癌细胞HepG2被咔唑衍生物/金/半胱氨酸纳米复合材料染色后，可清晰地观察到该复合材料对HepG2细胞溶酶体具有高的识别能力。这一研究结果的发现，对于有机/无机纳米复合双光子吸收材料的设计、制备和生物体内荧光成像研究具有重大的意义。

与已有技术相比，本发明的有益效果体现在：

1、本发明合成的咔唑衍生物/金/半胱氨酸纳米复合材料是一类具有细胞显影功能的双光子吸收材料，与其它材料相比，具有较大的双光子吸收截面，激发能量低、波长长、穿透性强、光损伤小、低细胞毒性等优点，因此，对细胞无损伤，可用于活体细胞检测，具有明显的应用价值；

2、HepG2细胞被目标产物染色后，可清晰地观察到该复合材料对细胞溶酶体具有高的识别能力；

3、本发明通过微波辐射法制备目标产物，步骤简单，节能减排。

四、附图说明

图1为本发明的制备路线图。

图2是本发明咔唑衍生物/金/半胱氨酸纳米复合材料的SEM衍射花样(a)和高分辨图像(HRTEM，b)。从HRTEM中可以看出，复合材料中金纳米颗粒的晶格条纹间距是0.244nm，为面心立方结构。从SEM衍射花样可以看出复合材料整体呈纳米带状结构，咔唑衍生物内部镶嵌着金纳米粒子，金纳米颗粒的粒径在4nm左右。

图3为本发明咔唑衍生物/金/半胱氨酸纳米复合材料的开孔Z扫描曲线，激发波长为810nm。从图3中可以看出，复合材料在810nm处具有很强的双光子吸收。

图4是复合材料对人体肝癌细胞HepG2荧光共聚焦双光子荧光显微成像照片。从图4可以清楚地看到，目标产物咔唑衍生物/金/半胱氨酸纳米复合材料已透过HepG2细胞的细胞膜并进入细胞质，对其完全均匀的着色，细胞溶酶体对目标产物的摄取率很高，说明目标产物对HepG2细胞溶酶体具有很高的识别能力。这种复合材料的制备对于细胞显影材料的遴选、制备、对于生命科学、材料科学等方面都有着重要的意义。

五、具体实施方式

1、中间体1的制备

将咔唑0.167g(1mmoL)、溴己烷0.45g(3mmoL)和NaH0.07g(3mmoL)溶于20mLDMF中，140℃搅拌反应24h，冷却到室温，加入100mLCH₂Cl₂，用水萃取4次，每次30mL，无水MgSO₄干燥，蒸除溶剂，得到中间体10.25g，产率～100％)。

¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ(ppm):8.091(d,2H,J＝7.6Hz),7.461～7.393(m,J＝7.2Hz,4H),7.205(d,2H,J＝10.8Hz),4.295(t,2H,J＝7.2Hz),1.865(m,2H,J＝7.6Hz),1.483～1.285(m,6H,J＝3.2Hz),0.862(t,3H,J＝6.8Hz)；¹³CNMR(100MHz,CDCl₃)δ14.01,22.55,26.99,28.94,31.60,43.10,108.65,118.68,120.33,122.83,125.56,140.44；FT-IR(KBr,cm^-1):3050(m),2955(s),2924(s),2855(s),1594(s),1453(s),1324(s),752(s),724(s)。

2、中间体2的制备

将12.55g(0.05mol)中间体1，92mLPOCl₃和39mLDMF置于500mL圆底烧瓶中，80℃搅拌反应1h，倒入冰水中得到淡黄色固体，用NaOH调节pH值至中性后用150mL乙酸乙酯萃取3次，合并有机层，依次用水、饱和食盐水洗涤，用无水MgSO₄干燥有机层，蒸除溶剂，固体用石油醚柱层析得到8.9g白色中间体2(产率64％)。

¹HNMR(400MHz,CDCl₃):δ(ppm)10.123(s,1H),8.641(d,1H,J＝1.2Hz),8.196(d,1H,J＝7.6Hz),8.029(m,1H,J＝1.6Hz),7.562(d,1H,J＝7.6Hz),7.493(t,2H,J＝7.2Hz),7.350(t,1H,J＝7.2Hz),4.363(t,2H,J＝6.8Hz),1.951(m,2H,J＝8.2Hz)；1.421～1.317(m,6H,J＝7.8Hz),0.868(t,3H,J＝7.2Hz)；¹³CNMR(100MHz,CDCl₃)δ:13.96,22.50,26.91,28.89,31.50,43.49,108.94,109.38,120.28,120.74,123.01,123.08,123.99,126.69,127.16,128.52,141.18,144.09,191.76；FT-IR(KBr,cm^-1):2951(m),2925(m),2856(m),1689(C＝O,s),1594(m),1131(m),748(m),729(m)。

3、中间体3的制备

将2.80g(0.01moL)中间体2溶于20mL甲醇，加入到100mL圆底烧瓶，分三次加入NaBH₄，每次加入的间隔时间为15min，三次加入的NaBH₄总量为0.76g(0.02moL)，室温下搅拌反应6h，蒸除甲醇得到中间体3；

4、中间体4的制备

将2.80g(0.01mol)中间体3和3.9g(0.015mol)三苯基磷溶于30mL氯仿中，加入到250mL圆底烧瓶中，另取1.70g(0.01mol)KI溶于1mL水中，混合两种溶液，加入5mL冰醋酸和0.03g催化剂18-C-6，65℃搅拌反应七天，TLC跟踪至中间体3反应完全，蒸除溶剂，将反应混合物倒入500mL对二甲苯中洗去三苯基磷，收集析出的固体，干燥，得中间体4；

5、中间体5的制备

将0.65g(1.0mmol)中间体4溶于5mLDMF中，加入到100mL圆底烧瓶中，另取0.13g(1.0mmol)对苯二甲醛溶于5mLDMF中，混合两种溶液，搅拌反应8-12小时，TLC跟踪至反应完全，反应结束后将反应混合物溶于500mLCH₂Cl₂中，100mL水洗四次，无水MgSO₄干燥，旋干溶剂，产物经体积比50:1的石油醚和乙酸乙酯混合溶液柱层析，得到黄色中间体5，产率71.4％。

¹HNMR(400MHz,CDCl₃)：δ(ppm)10.04(s,1H)；8.52(d,1H)；8.25(d,1H,J＝7.6Hz)；7.98(d,2H,J＝8.4Hz)；7.90(d,2H,J＝8.4Hz)；7.87(d,1H,J＝8.4Hz)；7.74～7.66(m,3H)；7.54(t,1H,J＝7.2Hz)；7.47～7.23(d,1H,J＝16.4Hz)；7.29(t,1H,J＝7.2Hz)；4.46(t,2H,J＝7.2Hz)；1.84(m,2H)；1.34(m,6H)；0.87(m,3H,J＝6.8Hz)；.

6、HCBDMN的制备

将0.38g(1.0mmol)中间体5、0.10g(1.5mmol)丙二腈和0.16g(1.5mmol)Na₂CO₃溶于30mL乙醇，加入到250mL圆底烧瓶中，回流搅拌反应8-12小时，TLC跟踪至反应完全，反应结束后将反应混合物溶于500mLCH₂Cl₂中，100mL水洗四次，无水MgSO₄干燥，旋干溶剂，产物经经体积比50:1的石油醚和乙酸乙酯混合溶液柱层析，得到黄色固体3-(2,2'-二氰基-乙烯基-4-苯乙烯基)-N-己基咔唑(HCBDMN)。产率59.3％

¹HNMR(400MHz,CDCl3)：δ(ppm)8.46(d,2H,J＝4.0Hz)；8.20(d,2H,J＝7.8Hz)；8.00(d,2H,J＝8.4Hz)；7.86(d,2H,J＝8.4Hz)；7.81(d,2H,J＝8.8Hz)；7.74(d,1H,J＝16.4Hz)；7.63(d,2H,J＝8.8Hz)；7.15(t,1H,J＝7.6Hz)；7.41(d,1H,J＝16.4Hz)；7.24(t,1H,J＝7.6Hz)；4.41(m,2H(CH₂))；1.78(m,2H(CH₂))；1.24(m,6H(CH₂))；0.81(m,3H(CH₃))。FT-IR(KBrcm^-1):2922(m),2206(C≡N,m),1621(m),1561(s),1460(s),1389,1208(s),754(m)；

7、咔唑衍生物/金/半胱氨酸纳米复合双光子吸收材料的制备

将9.2mgHCBDMN、100mg十二烷基磺酸钠(SDS)、2.5mg半胱氨酸溶于5mL乙二醇中，加入到50mL的圆底烧瓶，微波加热30s溶解，滴加5滴0.01mol/L的HAuCl₄乙二醇溶液，微波辐射(560W)2分钟，自然冷却至室温，得到咔唑衍生物/金/半胱氨酸纳米复合双光子吸收材料；

8、目标产物咔唑衍生物/金/半胱氨酸纳米复合双光子吸收材料双光子荧光细胞显影效果的测试

将清洗干净且灭菌的盖玻片放入6孔组织培养板中，肝癌细胞(HepG2)5×10⁵个/孔的密度接种在直径35mm的6孔板培养皿中，注入DMEM高糖培养基。细胞培养皿置于含5％CO₂和95％O₂的培养箱中维持温度37℃进行细胞培养24h，用PBS(磷酸缓冲液)洗涤三次，洗去培养基。然后分别加入4μL目标产物咔唑衍生物/金/半胱氨酸纳米复合双光子吸收材料的DMSO溶液(20μM)，培养30min，用4℃PBS缓冲溶液冲洗盖玻片6～7次，滴1mL4％多聚甲醛/PBS溶液固定细胞10min，蒸馏水冲洗盖玻片6～7次。将盖玻片卡在洁净载玻片上，置于激光共聚焦显微镜(LSM-710，Zeiss，德国)下观察细胞形态及荧光摄取情况。

从图4可以清楚地看到，目标产物已透过HepG2细胞的细胞膜，进入细胞质，并对它完全均匀的着色，细胞溶酶体对目标产物的摄取率很高，说明目标产物对HepG2细胞溶酶体具有很高的识别能力。这种复合材料的制备对于细胞显影材料的遴选、制备、对于生命科学、材料科学等方面都有着重要的意义。

Claims (4)

1.一种具有活体细胞显影功能的咔唑衍生物/金/半胱氨酸纳米复合双光子吸收材料，其特征在于：是由咔唑衍生物与纳米金在半胱氨酸辅助下原位复合得到的复合材料；

纳米复合双光子吸收材料中咔唑衍生物、纳米金及半胱氨酸的物质的量之比为80：1：80；

所述咔唑衍生物的结构式为：

2.一种权利要求1所述的具有活体细胞显影功能的咔唑衍生物/金/半胱氨酸纳米复合双光子吸收材料的制备方法，其特征在于按以下步骤操作：

a、将0.167g咔唑、0.45g溴己烷和0.07gNaH溶于DMF中，140℃搅拌反应24h，反应结束后冷却到室温，加入100mLCH₂Cl₂，用水萃取3-4次，无水MgSO₄干燥，蒸除溶剂，得到中间体1；

b、将12.55g中间体1、92mLPOCl₃和DMF置于500mL圆底烧瓶中，80℃搅拌反应1h，倒入冰水中得到淡黄色固体，用NaOH调节pH值至中性后用乙酸乙酯萃取，合并有机层，依次用水、饱和食盐水洗涤，用无水MgSO₄干燥，蒸除溶剂，固体用石油醚柱层析得到白色中间体2；

c、将2.80g中间体2溶于甲醇中，加入0.76gNaBH₄，室温下搅拌反应6h，蒸除甲醇得到中间体3；

d、将2.80g中间体3和3.9g三苯基磷溶于氯仿中得到混合液，另取1.70gKI溶于水中得到KI溶液，将所述混合液和KI溶液混合，加入5mL冰醋酸和0.03g催化剂18-C-6，65℃搅拌反应七天，TLC跟踪至中间体3反应完全，蒸除溶剂，将反应混合物倒入500mL对二甲苯中洗去三苯基磷，收集析出的固体，干燥，得中间体4；

e、将0.65g中间体4溶于DMF得到中间体4的DMF溶液，另取对苯二甲醛0.13g溶于DMF中得到对苯二甲醛的DMF溶液，将中间体4的DMF溶液和对苯二甲醛的DMF溶液混合，室温搅拌反应8-12小时，TLC跟踪至反应完全；反应结束后将反应混合物加入500mLCH₂Cl₂中，依次用水洗涤、无水MgSO₄干燥，旋干溶剂；固体产物经柱层析，得到黄色中间体5；

f、将0.38g中间体5、0.10g丙二腈和0.16gNa₂CO₃溶于乙醇中，回流搅拌反应8-12小时，TLC跟踪至反应完全，反应结束后将反应混合物加入500mLCH₂Cl₂中，依次用水洗涤、无水MgSO₄干燥，旋干溶剂；产物经柱层析，得到黄色固体HCBDMN；

g、将9.2mgHCBDMN、100mg十二烷基磺酸钠、2.5mg半胱氨酸溶于乙二醇中，微波加热至溶解，随后滴加5滴0.01mol/L的HAuCl₄乙二醇溶液，微波辐射2分钟，自然冷却至室温，得到咔唑衍生物/金/半胱氨酸纳米复合双光子吸收材料。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：

步骤c中为降低反应剧烈程度，分三批加入NaBH₄，每次加入的量相等，每次加入的间隔时间为15min。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：

步骤g中微波辐射的功率为560W。