CN105126117B

CN105126117B - 长非编码核糖核酸uc.48+小干扰核糖核酸在制备糖尿病并发神经病理痛药物中的应用

Info

Publication number: CN105126117B
Application number: CN201510504601.0A
Authority: CN
Inventors: 梁尚栋; 王寿玉; 吴炳; 邹丽芳; 刘双梅; 高云; 李桂林; 吴琴; 张熙; 应末凤
Original assignee: Nanchang University
Current assignee: Nanchang University
Priority date: 2015-08-17
Filing date: 2015-08-17
Publication date: 2018-10-23
Anticipated expiration: 2035-08-17
Also published as: CN105126117A

Abstract

长非编码核糖核酸uc.48+小干扰核糖核酸在制备糖尿病并发神经病理痛药物中的应用，实验证实NONRATT021972小干扰核糖核酸可降低背根神经节神经元P2X3受体的表达，降低糖尿病大鼠背根神经节细胞炎性因子—肿瘤坏死因子(TNF‑α)的生成，抑制背根神经节的伤害性信息传递，减轻神经损伤及炎性物质的伤害剌激，减轻2型糖尿病神经病理痛大鼠的痛行为，可应用于制备糖尿病并发神经病理痛、糖尿病并发神经损伤相关疾病、糖尿病并发感觉神经炎性疾病的药物。

Description

长非编码核糖核酸uc.48+小干扰核糖核酸在制备糖尿病并发神经病理痛药物中的应用

技术领域

本发明涉及糖尿病并发神经病理痛药物用途发明领域。

背景技术

糖尿病(Diabetes Mellitus，DM)是一组代谢性临床综合征，随着社会的发展和人们生活水平的提高糖尿病的患病率逐年升高，在发达国家糖尿病患病率已达3％-7％，成为仅次于癌症、艾滋病、心脑血管病之后第4位需要优先考虑的疾病，已成为世界第5位死亡主因。糖尿病分为1型(胰岛素依赖性)和2型(非胰岛素依赖性)糖尿病。据估计，全球六个人里面就有一个人处于患糖尿病并发症的危险中。我国糖尿病人群的构成以2型糖尿病为主，占糖尿病人群的90％以上，严重影响着人民健康和社会发展。糖尿病神经病变是常见的糖尿病并发症之一，其最常见的神经病变类型是周围神经损伤，如手，足。糖尿病是低度炎性疾病，炎性物质可加重糖尿病并发神经损伤。糖尿病并发的周围神经病变以感觉异常为主，其中以疼痛最痛苦、最显著。临床多见于血糖控制不佳的患者，常表现为远端肢体自发性疼痛、痛觉过敏、异常性疼痛(如烧灼感、蚁走感或针刺感)等，对于这些异常性感觉的治疗方法很局限，严重时导致终身残疾。因此，对于糖尿病神经病理痛的防治工作已成为糖尿病研究领域的热点和重点。

在19世纪70年代初Burnstock提出“嘌呤能神经学说”后，作为神经递质的ATP的研究工作倍受关注。嘌呤类物质包括三磷酸腺苷(ATP)以及其代谢产物二磷酸腺苷/一磷酸腺苷(ADP/AMP)和腺苷等均参与信息传递。胞外核苷酸的受体称为P2受体，ATP及其类似物作用于P2受体。P2受体分为配体门控性离子通道型受体(P2X受体)和G蛋白偶联型受体(P2Y受体)。目前已克隆出7种P2X受体亚型(P2X₁、P2X₂、P2X₃、P2X₄、P2X₅、P2X₆、P2X₇)和8种P2Y受体亚型(P2Y₁、P2Y₂、P2Y₄、P2Y₆、P2Y₁₁、P2Y₁₂、P2Y₁₃、P2Y₁₄)。疼痛、伤害性剌激使损伤细胞、应激细胞和感觉神经末梢释放大量ATP，ATP及其作用的P2X受体涉及痛觉及伤害性信息在初级感觉神经元的传递。其中主要是P2X₃受体参与初级感觉神经元的痛觉及伤害性信息传递。基因敲除P2X₃受体或应用选择性P2X₃受体拮抗剂A317491可降低P2X₃受体的表达减轻模型动物神经病理痛痛行为。

随着基因组测序计划的完成以及新一代深度测序技术的应用，人们发现哺乳动物细胞中多于95％的转录序列为非编码核糖核酸(noncoding RNA,ncRNA)。非编码RNA是一类不编码蛋白质但具有生物学调控功能的RNA分子，它可通过参与mRNA的稳定和翻译水平的调节、蛋白质的运输、RNA的加工和修饰以及影响染色体的结构等机制，调控生物体的基本生命活动，同时与一些重要疾病的病理生理过程相关。非编码RNA包括短非编码核糖核酸(包括siRNA、miRNA、piRNA)和长非编码核糖核酸(long non-coding RNA,lncRNA)。长度大于200个碱基(200nt)为长链非编码RNA(lncRNA)。目前长度小于50个核苷酸的非编码RNA(如microRNA、siRNA和piRNA)等的研究已取得突破性进展，但对具有功能的长非编码RNA的研究不多。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供长非编码核糖核酸uc.48+小干扰RNA的第一个新用途，即长非编码核糖核酸uc.48+小干扰RNA在制备糖尿病并发神经病理痛疾病药物中的应用。

本发明的第二个目的在于提供长非编码核糖核酸uc.48+小干扰RNA的第二个新用途，即长非编码核糖核酸uc.48+小干扰RNA在制备糖尿病并发神经损伤疾病药物中的应用。

本发明的第三个目的在于提供长非编码核糖核酸uc.48+小干扰RNA的第三个新用途，即长非编码核糖核酸uc.48+小干扰RNA在制备糖尿病并发感觉神经炎性相关疾病药物中的应用。

本发明用SOLiD高通量测序并通过生物信息学预测和分子生物学验证确定大鼠背根神经节(DRG)存在长非编码核糖核酸uc.48+(http://genome.ucsc.edu/cgi-bin/hgc？hgsid＝427967671_gIIKDUiyguaFXCbRBiWSM7gFOgqn&c＝chr2&o＝20462844&t＝20463142&g＝ct_Ultra_7128&i＝％28null％29+uc.48)，并发现糖尿病模型大鼠背根神经节长非编码核糖核酸uc.48+表达较对照组明显增加，提示背根神经节的长非编码核糖核酸uc.48+与糖尿病引发的感觉神经病理变化有关。

本发明通过2型糖尿病大鼠模型，观察长非编码核糖核酸uc.48+小干扰RNA处理后2型糖尿病大鼠痛行为的变化，以及与介导神经病理痛的P2X₃受体表达变化的关系，为长非编码核糖核酸uc.48+小干扰RNA用于糖尿病并发神经病理痛的预防和治疗提供帮助。

长非编码核糖核酸uc.48+小干扰核糖核酸(RNA)在制备降低糖尿病并发的神经病理痛的药物中的应用的作用机理涉及抑制背根神经节嘌呤2X(P2X)₃受体介导的痛觉信息传递。

长非编码核糖核酸uc.48+的小干扰核糖核酸处理后同时可下调2型糖尿病大鼠背根神经节P2X₃受体的表达，降低糖尿病大鼠背根神经节细胞炎性因子—肿瘤坏死因子(TNF-α)的表达。因此，长非编码核糖核酸uc.48+的小干扰核糖核酸可能通过减少TNF-α的生成、降低2型糖尿病神经病理大鼠背根神经节P2X₃受体的表达、抑制背根神经节P2X₃受体介导的炎性伤害性信息传递，减轻2型糖尿病神经病理痛大鼠的痛行为。

附图说明

图1为2型糖尿病大鼠制模过程中的机械缩足反射阈值变化图。长非编码核糖核酸uc.48+的小干扰RNA处理后对2型糖尿病大鼠的机械痛行为具有抑制作用。实验分组：对照组；2型糖尿病模型组；2型糖尿病模型+长非编码核糖核酸uc.48+的小干扰RNA处理组；2型糖尿病模型+乱序的小干扰RNA阴性(NCsi)对照组。其中^*p<0.05表示和正常组比较，^#p<0.01表示与糖尿病模型组比较。

图2为2型糖尿病大鼠制模过程中的热缩足反射阈值变化图。长非编码核糖核酸uc.48+的小干扰RNA处理后对2型糖尿病大鼠的热敏痛行为具有抑制作用。其中实验分组：对照组；2型糖尿病模型组；2型糖尿病模型+长非编码核糖核酸uc.48+的小干扰RNA处理组；2型糖尿病模型+乱序的小干扰RNA阴性对照组。其中^*p<0.05，^**p<0.01表示和正常组比较，^##p<0.01表示与糖尿病模型组比较。

图3为2型糖尿病大鼠DRG的P2X₃受体RT-PCR检测结果图。长非编码核糖核酸uc.48+的小干扰RNA处理后可降低2型糖尿病大鼠DRG上调的P2X₃受体水平。实验分组：对照组；2型糖尿病模型组；2型糖尿病模型+长非编码核糖核酸uc.48+的小干扰RNA处理组；2型糖尿病模型+乱序的小干扰RNA阴性对照组。图3(a)为RT-PCR实验结果图，图3(b)为实验数据分析比较柱状图，其中^**p<0.01表示和正常组比较，^##p<0.01表示与糖尿病模型组比较。

图4为2型糖尿病大鼠DRG的P2X₃受体蛋白印迹检测结果图。长非编码核糖核酸uc.48+的小干扰RNA处理后可降低2型糖尿病大鼠DRG上调的P2X₃受体水平。实验分组：对照组；2型糖尿病模型组；2型糖尿病模型+长非编码核糖核酸uc.48+的小干扰RNA处理组；2型糖尿病模型+乱序的小干扰RNA阴性对照组。图4(a)为蛋白印迹实验结果图，图4(b)为实验数据分析比较柱状图，其中^**p<0.01表示和正常组比较，^##p<0.01表示与糖尿病模型组比较。

图5为2型糖尿病大鼠血清TNF-α变化检测结果图。长非编码核糖核酸uc.48+的小干扰RNA处理后可降低2型糖尿病大鼠上调的血清TNF-α变化水平。实验分组：对照组；2型糖尿病模型组；2型糖尿病模型+长非编码核糖核酸uc.48+的小干扰RNA处理组；2型糖尿病模型+乱序的小干扰RNA阴性对照组。图5(a)为蛋白印迹实验结果图，图5(b)为实验数据分析比较柱状图，其中^**p<0.01表示和正常组比较，^##p<0.01表示与糖尿病模型组比较。

具体实施方式

下面结合实施例并对照附图对本发明作进一步详细说明。

实施例1。

用本技术领域公知的方法，制成适用于糖尿病神经病理痛治疗的口服或注射的长非编码核糖核酸uc.48+小干扰RNA制剂。

实施例2。

用本技术领域公知的方法，制成适用于涉及糖尿病并发神经损伤相关疾病治疗的口服或注射的长非编码核糖核酸uc.48+小干扰RNA制剂。

实施例3。

用本技术领域公知的方法，制成适用于涉及糖尿病并发感觉神经炎性相关疾病治疗的口服或注射的长非编码核糖核酸uc.48+小干扰RNA制剂。

总之，长非编码核糖核酸uc.48+小干扰核糖核酸以口服、注射、含片或其它局部或全身用药剂型药物进行上述疾病防治。

为了更好地理解本发明的实质，下面以长非编码核糖核酸uc.48+小干扰核糖核酸对P2X₃受体介导的相关疾病治疗作用研究的实验和结果来证明长非编码核糖核酸uc.48+小干扰核糖核酸的用途。

一、材料和方法。

1.动物和分组。

健康Sprague-Dawley(SD)大鼠，南昌大学医学院实验动物科学部提供。健康SD雄性大鼠60只，体重200g左右，适应性饲养1周后，随机分成2组，对照组(Ctrl)8只，喂以基础饲料；其余大鼠(52只)为糖尿病造模组，喂以高糖高脂饲料(高糖高脂饲料配方：基础饲料66.5％，蔗糖20％，猪油10％，胆固醇2.5％，胆酸钠1％，做成球状放在恒温鼓风干燥箱中80℃干烤2天)。第5周末，所有大鼠测体重、空腹血糖和餐后血糖后，造模组大鼠空腹腹腔注射STZ 30mg/kg(STZ溶液的配制：临用前将STZ溶解于4℃冰箱预冷的pH为4.2的0.1mol/L柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液中，配制成2.5g/L的STZ溶液)，对照组大鼠腹腔注射相同体积的0.1mol/L，pH为4.2柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液。第6周末测血糖，空腹血糖＜7.8mmol/L且餐后血糖＜11.1mmol/L的造模组大鼠再次给予空腹腹腔注射STZ 30mg/kg。第7周末测血糖，空腹血糖大于7.8mmol/L，或餐后血糖＞11.1mmol/L为成模标准。

长非编码核糖核酸uc.48+小RNA干扰(siRNA)序列由Invitrogen(Carlsbad,CA)公司提供，靶序列为5’-GGCACTACTACTTGCAGAA-3’；阴性对照scrambled siRNA(CNsi)购至Invitrogen(Carlsbad,CA)公司。在体转染试剂由Entranster^TM公司提供。根据Entranster^TM在体转染说明书，实验第7周末对糖尿病造模成功的大鼠进行长非编码核糖核酸uc.48+-siRNA在体小干扰实验。

在第7周末将糖尿病造模成模的大鼠随机分成3组，即：糖尿病模型+生理盐水组(DM+NS)，糖尿病模型+长非编码核糖核酸uc.48+小干扰核糖核酸(siRNA)处理组(DM+长非编码核糖核酸uc.48+si)，糖尿病模型+scrambled siRNA(乱序小干扰核糖核酸)阴性对照(negative control siRNA，NCsi)组(DM+NCsi)。DM+长非编码核糖核酸uc.48+si和DM+NCsi的大鼠分别给予舌下静脉注射长非编码核糖核酸uc.48+siRNA和NC siRNA。前期的Ctrl和DM组舌下静脉注射生理盐水，分别成为生理盐水对照组(Ctrl+NS)和糖尿病模型+生理盐水组(DM+NS)。1周后测血糖后取材(背根神经节)。

2.药物与试剂。

链脲佐菌素(Sigma公司)，动物体内转染试剂(Entranster^TM-in vivo)、兔源性嘌呤2X₃(P2X₃)抗体(Abcam公司)。

3.主要仪器。

消毒纱布、手巾、棉签等，碘酒及75％酒精，手术器械包：剪刀、眼科小弯镊、血管钳、丝线、有齿镊等。

4.大鼠行为学测定。

分别于第1，5，7，8周末测量各组大鼠机械缩足反射阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL)，每次测量的时间及其他条件保持一致

(1)机械缩足反射阈值的检测：采用的装置为Von Frey细丝。将大鼠置于长宽高为20cm×10cm×30cm的透明有机玻璃盒中，并放在铁丝网上，此装置高于实验台，以便能够清楚地观察大鼠足底，适应半个小时后进行检测。Von Frey的折力分别为0.008、0.02、0.04、0.07、0.16、0.4、0.6、1.0、1.4、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、15.0、26.0。用细丝刺激大鼠右足底，每只大鼠每个力度试验10次，相邻两次测试的间隔时间至少为30秒，刺激引起的反应(如舔足、甩腿等)完全消失后才可以进行下次试验。测量时从最小力度开始，直到某个力度刺激大鼠引起反应的次数大于5次时，记下此力度，即为机械缩足反射阈值。大于26.0g时记为26.0g。

(2)热痛敏缩足反射阈值的检测：本测试采用的仪器是BME-410C型全自动热痛刺激仪。将与上述相同的玻璃盒放在3mm厚的玻璃板上，大鼠置于玻璃盒中，待适应30分钟后进行测试。采用热辐射照射大鼠右足底，记录从照射到出现抬腿的时间，即TWL。为防止组织损伤，切断时间为30s。

5、逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)。

(1)提取总RNA并逆转录成cDNA：所有器械均经DEPC处理。在第8周末取材，分别取各组大鼠背根神经节，用DEPC处理过的PBS冲洗，置于RNA Store液中﹣20℃保存，提取RNA时将神经节取出移至加有1ml Trizol匀浆器中，研磨后转移到1.5ml的无核酶离心管中，加入0.2ml氯仿，剧烈震荡15s，静置3min，低温离心12000g×15min，收集上层无色液相，加入与液相等体积的异丙醇，混匀，常温静置25min，沉淀RNA，之后4℃离心12000g×10min，弃上清，在管底可见少许白色沉淀为RNA，加入1ml无核酶水配置的75％乙醇，充分洗涤RNA。4℃离心5000g×3min后，吸弃上清液，倒置2分钟，略干燥(切勿过分干燥，否则RNA不溶于水)，加20μl无RNase水溶解沉淀。采用50μl逆转录反应体系：无核酶水11.75μl，5×buffer 10μl，dNTP 3μl，Olig DT 2μl，MMLV 2μl，Rnasin 1.25μl，RNA样本20μl，共50μl，离心，恒温37℃水浴1小时。

(2)设计引物：参考文献设计长非编码核糖核酸P2X₃受体引物序列。本发明选用β-actin作为标准内参，引物序列分别为：

(3)聚合酶链式反应反应体系(共30μl)：

(4)聚合酶链式反应反应条件：

(5)琼脂糖凝胶电泳：制备1.5％琼脂糖凝胶，用移液枪取PCR产物按10μL/孔进行上样，电泳缓冲液为1×TAE，电压100V，电流300mA，电泳时间40min，采用凝胶成像系统拍照，分析数据。用β-actin作为内参对长非编码核糖核酸UC.48+和P2X₃受体的密度进行标化。

6、蛋白印迹。

(1)蛋白提取：将DRG置于加有200μl组织裂解液(含PMSF)的1ml匀浆器中，于冰上研磨充分。反复裂解后，将匀浆样品转移到1.5ml EP管中，4℃，12000g离心10min，取上清，按比例加入5×loading buffer和DTT，混匀后煮沸5min，使蛋白变性，-20℃保存，备用。

(2)十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳：

制备SDS-PAGE凝胶，所用试剂如下表：

十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳构成(ml)

试剂	分离胶(10％)	积层胶(5％)
			ddH₂O	4.9	5.5
30％丙烯酰胺溶液	6	1.3
			1.5M Tris-HC(pH8.8)	3.8	/
1.0M Tris-HC(pH6.8)	/	1.0
			10％SDS	0.15	0.08

AP	0.15	0.08
			TEMED	0.006	0.008
总体积	15	8

(3)上样及电泳：每孔上样量为25μl(蛋白含量约为20μg)，样本两边加2μl蛋白Marker。浓缩胶恒压90V(约45min)，分离胶120V，待溴酚蓝迁移至胶的下缘时(约90min)停止电泳。

(4)转膜：根据蛋白Marker的指示和目的蛋白的分子量准备合适大小的PVDF膜和2张4层的滤纸，PVDF膜浸入甲醇作用5min后，放入转膜缓冲液中(滤纸置于转膜缓冲液中)浸泡以备用。电泳完毕后转膜，300mA转膜1个小时。

(5)免疫反应：

A)封闭：将膜置于含5％BSA的TBST封闭液中，水平摇床室温作用2h。

B)一抗结合：将膜放入用5％BSA配制的一抗(兔来源的P2X₃稀释比例1:1000，小鼠抗β-actin单抗稀释比例1:800)中，4℃过夜，或室温平摇3h，TBST洗膜3次。

C)二抗结合：将膜用IgG-HRP二抗反应液(P2X₃二抗为山羊抗兔，按1:2000溶于封闭液，β-actin为山羊抗小鼠，按1：5000溶于封闭液)孵育，室温平摇1.5h后，TBST洗膜10min×4次。

D)、免疫复合物的检测：膜加ECL发光剂反应3min后，用保鲜膜包裹，置于X线暗盒，暗室中剪大小合适X线胶片，曝光10s～10min，显影、定影，

(7)半定量分析：胶片扫描后，通过Image图像分析软件分析目的条带在的光密度值，以各组β-actin条带的光密度值标化其相应组P2X₃的蛋白表达量。

7、统计学方法。

应用SPSS统计软件对实验数据进行分析，结果以均数±标准差(x±s)表示，各组之间差异性采用方差分析，组间比较采用LSD法，p<0.05表示有显著性差异，p<0.01为极显著差异。

二、结果。

(一)行为学结果。

各组大鼠造模中均未见肢体运动障碍和自残现象。造模前测定各组间机械缩足反射阈值及热缩足反射潜伏期的基础值差异无显著性(p>0.05,F_3,28＝2.15)。

1、机械痛敏(MWT)测定结果。

在给予糖尿病饮食4周后，糖尿病模型大鼠的机械缩足反射阈值开始降低，但与对照组相比其降低无统计学意义(p>0.05)；给予STZ腹腔注射后2周，糖尿病模型大鼠的机械缩足反射阈值明显降低，与对照组相比具有显著性差异(p<0.05)；糖尿病模型大鼠给予长非编码核糖核酸uc.48+小干扰核糖核酸处理后一周，机械缩足反射阈值明显增加，与对照相比其差异无统计学意义(p>0.05)，而与糖尿病模型组相比有显著性差异(p<0.05)；而模型+乱序小干扰处理组的与对照组之间相比有显著性差异(p<0.05)，但与糖尿病模型组相比其差异无统计学意义(p>0.05)(见图1)。

2、热痛敏(TWL)测定结果。

在给予糖尿病饮食4周后，糖尿病模型大鼠的热缩足反射阈值开始降低，但与对照组相比其降低无统计学意义(p>0.05)；给以STZ腹腔注射后2周，糖尿病模型大鼠组的热缩足反射阈值明显降低，与对照组相比具有显著性差异(p<0.05)；糖尿病模型大鼠给予长非编码核糖核酸uc.48+小干扰核糖核酸处理后一周，热缩足反射阈值明显增加，与对照组相比其差异无统计学意义(p>0.05)，与糖尿病模型大鼠组相比有显著性差异(p<0.05)；而给以模型+乱序小干扰处理组的与对照组之间相比有显著性差异(p<0.05)，但与糖尿病模型组相比其差异无统计学意义(p>0.05)(见图2)。

(二)逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)。

采用凝胶成像系统软件分析P2X₃的RT-PCR结果表明：糖尿病模型组DRG中P2X₃受体mRNA表达水平较对照组明显增加(p<0.01)，糖尿病模型+长非编码核糖核酸uc.48+小干扰核糖核酸组与对照组之间差异无统计学意义(p>0.05)，而与糖尿病模型组之间差异有统计学意义(p<0.01)。糖尿病模型+乱序小干扰处理组P2X₃受体mRNA的表达高于对照组(p<0.01)，而与糖尿病模型组之间无显著性差异(p>0.05)(见图3)。

(三)蛋白印迹。

1、蛋白印迹检测P2X₃蛋白表达。采用软件分析P2X₃蛋白印迹结果表明：糖尿病模型组DRG中P2X₃受体表达水平较对照组明显增加(p<0.01)；糖尿病模型+长非编码核糖核酸uc.48+小干扰核糖核酸组与对照组P2X₃受体表达水平之间差异无统计学意义(p>0.05)，而与糖尿病模型组之间差异有显著性意义(p<0.01)。糖尿病模型+乱序小干扰处理组P2X₃受体蛋白的表达高于对照组(p<0.01)，而与糖尿病模型组相比其差异无统计学意义(p>0.05)(见图4)。

2、蛋白印迹检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达。采用软件分析TNF-α蛋白印迹结果表明：糖尿病模型组DRG中TNF-α表达水平较对照组明显增加(p<0.01)；糖尿病模型+长非编码核糖核酸uc.48+小干扰核糖核酸组与对照组TNF-α表达水平之间差异无统计学意义(p>0.05)，而与糖尿病模型组之间差异有显著性意义(p<0.01)。糖尿病模型+乱序小干扰处理组TNF-α蛋白的表达高于对照组(p<0.01)，而与糖尿病模型组相比其差异无统计学意义(p>0.05)(见图5)。

发明人研究发现注射长非编码核糖核酸uc.48+的小干扰核糖核酸后，观察到糖尿病大鼠的机械痛和热敏痛阈值升高，表明长非编码核糖核酸uc.48+的小干扰核糖核酸可降低2型糖尿病神经病理大鼠的痛行为、改善感觉神经的损伤现象。长非编码核糖核酸uc.48+的小干扰核糖核酸处理后同时可下调2型糖尿病大鼠背根神经节P2X₃受体的表达，降低糖尿病大鼠背根神经节细胞炎性因子—肿瘤坏死因子(TNF-α)的表达。因此，长非编码核糖核酸uc.48+的小干扰核糖核酸可能通过减少TNF-α的生成、降低2型糖尿病神经病理大鼠背根神经节P2X₃受体的表达、抑制背根神经节P2X₃受体介导的炎性伤害性信息传递，减轻2型糖尿病神经病理痛大鼠的痛行为。

Claims

1.长非编码核糖核酸uc.48+小干扰核糖核酸在制备治疗糖尿病并发神经病理痛疾病药物中的应用；所述的长非编码核糖核酸uc.48+序列如SEQ ID NO.3所示，所述的小干扰核糖核酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。