CN105085410B - 一种二芳基嘧啶类hiv‑1抑制剂及其制备方法 - Google Patents

一种二芳基嘧啶类hiv‑1抑制剂及其制备方法 Download PDF

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    • C07D239/48—Two nitrogen atoms

Abstract

本发明公开了一种二芳基嘧啶类HIV‑1抑制剂及其制备方法。在惰性气体保护下，以2‑(对氰基苯胺基)‑4‑氯嘧啶为原料，在碱的作用下，与苄胺或者取代苄胺在溶剂中发生亲核取代反应得到上述二芳基嘧啶。本发明设计合成的新化合物具有较好的HIV‑1细胞水平抑制活性，部分化合物对HIV‑1 IIIB这一重要病毒株的抑制活性强于作为参考的上市药物奈韦拉平、依法韦伦和依曲韦林，且毒性很小，可用于进一步开发为抗艾滋病药物。

Description

一种二芳基嘧啶类HIV-1抑制剂及其制备方法
技术领域
本发明属医药技术领域，具体涉及一种二芳基嘧啶类HIV-1抑制剂及其制备方法。
背景技术
艾滋病即获得性免疫缺陷综合症(Acquired immune deficiency syndrome，AIDS)是由人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiencyvirus,HIV)所导致的流行性传染病。逆转录酶(RT)在HIV-1病毒复制周期中起着不可替代的作用，是抗艾滋病药物设计的重要靶点之一。在现有抗HIV药物研究中，非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTIs)因其高效低毒等优点成为各国药物化学家关注的热点之一。目前经过美国FDA批准上市的NNRTIs共有五种新化学实体：奈韦拉平(Nevirapine)、德拉韦定(Delavirdine)、依非韦伦(Efavirenz)，依曲韦林(Etravirine,TMC125)和利匹韦林(Rilpivirine，TMC278)。其中，依曲韦林和利匹韦林均具有二芳基嘧啶结构，这类化合物通称为二芳基嘧啶类HIV-1抑制剂(DAPYs)。目前药物化学家发现了许多具有结构多样性的DAPYs(在文献Curr.Med.Chem.2011,18(3),359-376和Bioorg.Med.Chem.2011,19(23),7093-7099均有叙述)。所有这些结构的DAPYs都有一个共同点，就是嘧啶环与芳环之间的连接基都是单原子(O,N,S或C)连接基。考虑到分子柔性对HIV-1抑制剂活性的重要性，有必要研究一种具有全新结构的DAPYs。
发明内容
本发明的目的在于将传统DAPYs的嘧啶环和芳环之间的一个连接基由传统的单原子连接基(-X-，X为O,N,S或C)改造为柔性更好的双原子连接基(-CH2-NH-)，合成得到一类具有全新结构的DAPYs。另一目的在于提出上述化合物的制备方法。
一种二芳基嘧啶类HIV-1抑制剂，具有如下的结构通式(Ⅰ)：
其中R为单取代基或多取代基；所述取代基为氟原子、氯原子、溴原子、甲基、甲氧基或三氟甲基。
上述二芳基嘧啶类HIV-1抑制剂的制备方法包括以下步骤：
在惰性气体保护下，以2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶为原料，在碱的作用下，与苄胺或者取代苄胺在溶剂中发生亲核取代反应得到上述二芳基嘧啶。
按上述方案，所述的碱为碳酸钾、碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化钾或钠氢中的一种化合物或几种混合物。
按上述方案，所述的溶剂为二氧六环、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺，二甲基亚砜和乙腈中的一种溶剂或几种溶剂组成混合溶剂。
本发明的有益效果如下：
本发明设计合成的新化合物具有较好的HIV-1细胞水平抑制活性，部分化合物对HIV-1IIIB这一重要病毒株的抑制活性强于作为参考的上市药物奈韦拉平、依法韦伦和依曲韦林，且毒性很小，可用于进一步开发为抗艾滋病药物。
具体实施方式
以下实施例进一步阐释本发明的技术内容，但不作为对本发明保护范围的限制。
实施例1
4-[(4-(苯甲基氨基)-2-嘧啶基)氨基]苯腈(Ⅰ-1)的制备方法1：
称取0.28g的苄胺和0.45g K2CO3加入50mL两口烧瓶中，再加入20mL 1,4-二氧六环，搅拌。抽真空，氮气保护。0.3g固体中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶先用1,4-二氧六环溶解后注入烧瓶，搅拌加热回流14h。TLC监测显示中间体消失，停止加热和搅拌。待反应液冷却至室温后，用乙酸乙酯稀释反应液，充分振摇，饱和食盐水90mL分三次洗涤至洗涤液pH≈7，有机相用无水硫酸钠干燥。抽滤，将滤液旋干，得到浅棕色粗品。柱层析纯化，洗脱剂为二氯甲烷/乙酸乙酯混合溶剂(50:1，V/V)，收集目标化合物组分减压蒸干，真空干燥，得到白色固体Ⅰ-1，收率68.9％。熔点：176～177℃；1H NMR(DMSO-d6，400M)δ：7.29～7.87(m，11H，ArH)，9.54(s，H，4-CNArNH-)，6.08～6.10(d，H，-CH2NH-)，4.52(d，2H，-CH2NH-)；MS(ESI)：302.44(M+1)+。
实施例2
Ⅰ-1的制备方法2：
称取0.28g的苄胺和0.40g Na2CO3加入50mL两口烧瓶中，再加入20mLN,N-二甲基甲酰胺，搅拌。抽真空，氮气保护。0.3g固体中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶先用N,N-二甲基甲酰胺溶解后注入烧瓶，搅拌加热回流14h。TLC监测显示中间体消失，停止加热和搅拌。待反应液冷却至室温后，用乙酸乙酯稀释反应液，充分振摇，饱和食盐水90mL分三次洗涤至洗涤液pH≈7，有机相用无水硫酸钠干燥。抽滤，将滤液旋干，得到浅棕色粗品。柱层析纯化，洗脱剂为二氯甲烷/乙酸乙酯混合溶剂(50:1，V/V)，收集目标化合物组分减压蒸干，真空干燥，得到白色固体Ⅰ-1，收率50.7％。熔点：176～177℃；1H NMR(DMSO-d6，400M)δ：7.29～7.87(m，11H，ArH)，9.54(s，H，4-CNArNH-)，6.08～6.10(d，H，-CH2NH-)，4.52(d，2H，-CH2NH-)；MS(ESI)：302.44(M+1)+。
实施例3
Ⅰ-1的制备方法3：
称取0.28g的苄胺和0.20g钠氢加入50mL两口烧瓶中，再加入20mL四氢呋喃，搅拌。抽真空，氮气保护。0.3g固体中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶先用四氢呋喃溶解后注入烧瓶，搅拌加热回流13h。TLC监测显示中间体消失，停止加热和搅拌。待反应液冷却至室温后，用乙酸乙酯稀释反应液，充分振摇，饱和食盐水90mL分三次洗涤至洗涤液pH≈7，有机相用无水硫酸钠干燥。抽滤，将滤液旋干，得到浅棕色粗品。柱层析纯化，洗脱剂为二氯甲烷/乙酸乙酯混合溶剂(50:1，V/V)，收集目标化合物组分减压蒸干，真空干燥，得到白色固体Ⅰ-1，收率57.5％。熔点：176～178℃；MS(ESI)：302.44(M+1)+。
实施例4
Ⅰ-1的制备方法4：
称取0.28g的苄胺和0.20g KOH加入50mL两口烧瓶中，再加入20mL四氢呋喃，搅拌。抽真空，氮气保护。0.3g固体中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶先用乙腈溶解后注入烧瓶，搅拌加热回流16h。TLC监测显示中间体消失，停止加热和搅拌。待反应液冷却至室温后，用乙酸乙酯稀释反应液，充分振摇，饱和食盐水90mL分三次洗涤至洗涤液pH≈7，有机相用无水硫酸钠干燥。抽滤，将滤液旋干，得到浅棕色粗品。柱层析纯化，洗脱剂为二氯甲烷/乙酸乙酯混合溶剂(50:1，V/V)，收集目标化合物组分减压蒸干，真空干燥，得到白色固体Ⅰ-1，收率49.8％。熔点：176～177℃；MS(ESI)：302.44(M+1)+。
实施例5
Ⅰ-1的制备方法5：
称取0.28g的苄胺和0.15g NaOH加入50mL两口烧瓶中，再加入20mL二甲基亚砜，搅拌。抽真空，氮气保护。0.3g固体中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶先用1,4-二氧六环溶解后注入烧瓶，搅拌加热回流17h。TLC监测显示中间体消失，停止加热和搅拌。待反应液冷却至室温后，用乙酸乙酯稀释反应液，充分振摇，饱和食盐水90mL分三次洗涤至洗涤液pH≈7，有机相用无水硫酸钠干燥。抽滤，将滤液旋干，得到浅棕色粗品。柱层析纯化，洗脱剂为二氯甲烷/乙酸乙酯混合溶剂(50:1，V/V)，收集目标化合物组分减压蒸干，真空干燥，得到白色固体Ⅰ-1，收率56.2％。熔点：175～177℃；MS(ESI)：302.44(M+1)+。
实施例6
4-[(4-((2-氯苯甲基)氨基)-2-嘧啶基)氨基]苯腈(Ⅰ-2)的制备：
称取0.37g的2-氯苄胺和0.63g K2CO3加入50mL两口烧瓶中，再加入20mL 1,4-二氧六环，搅拌。抽真空,氮气保护。0.3g固体中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶先用1,4-二氧六环溶解后注入烧瓶，搅拌加热回流14h。TLC监测显示中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶消失，停止加热和搅拌。待反应液冷却至室温后，用15mL乙酸乙酯稀释反应液，移入250mL梨形漏斗中，再加入150mL乙酸乙酯，充分振摇，饱和食盐水90mL分三次洗涤至洗涤液pH≈7，有机相用无水硫酸钠干燥。抽滤，将滤液旋干，得到浅棕色固体，即4-[(4-((2-氯苯甲基)氨基)-2-嘧啶基)氨基]苯腈粗品。柱层析纯化，洗脱剂为二氯甲烷/乙酸乙酯混合溶剂(50:1，V/V)，收集目标化合物组分减压蒸干，真空干燥，得到白色固体0.235g Ⅰ-2，收率54％。熔点：254～255℃；1H NMR(DMSO-d6，400M)δ：7.12～7.77(m，10H，ArH)，9.42(s，H，4-CNArNH-)，6.24～6.26(d，H，-CH2NH-)，4.45(d，2H，-CH2NH-)；MS(ESI)：336.72(M+1)+。
实施例7
4-[(4-((3-氯苯甲基)氨基)-2-嘧啶基)氨基]苯腈(Ⅰ-3)的制备：
称取0.37g的3-氯苄胺和0.63g K2CO3加入50mL两口烧瓶中，再加入20mL 1,4-二氧六环，搅拌。抽真空,氮气保护。0.3g固体中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶先用1,4-二氧六环溶解后注入烧瓶，搅拌加热回流14h。TLC监测显示中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶消失，停止加热和搅拌。用15mL乙酸乙酯稀释反应液，移入250mL梨形漏斗中，再加入150mL乙酸乙酯，充分振摇，饱和食盐水90mL分三次洗涤至洗涤液pH≈7，有机相用无水硫酸钠干燥。抽滤，将滤液旋干，得到浅棕色固体，即4-[(4-((3-氯苯甲基)氨基)-2-嘧啶基)氨基]苯腈粗品。柱层析纯化，洗脱剂为二氯甲烷/乙酸乙酯混合溶剂(50:1，V/V)，收集目标化合物组分减压蒸干，真空干燥，得到白色固体0.218g Ⅰ-3，收率50％。熔点：202～203℃；1H NMR(DMSO-d6，400M)δ：7.25～7.89(m，10H，ArH)，9.54(s，H，4-CNArNH-)，6.08(s，H，-CH2NH-)，4.45(d，2H，-CH2NH-)；MS(ESI)：336.72(M+1)+。
实施例8
4-[(4-((4-氯苯甲基)氨基)-2-嘧啶基)氨基]苯腈(Ⅰ-4)的制备：
称取0.37g的4-氯苄胺和0.63g K2CO3加入50mL两口烧瓶中，再加入20mL 1,4-二氧六环，搅拌。抽真空,氮气保护。0.3g固体中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶先用1,4-二氧六环溶解后注入烧瓶，搅拌加热回流14h。TLC监测显示中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶消失，停止加热和搅拌。用15mL乙酸乙酯稀释反应液，移入250mL梨形漏斗中，再加入150mL乙酸乙酯，充分振摇，饱和食盐水90mL分三次洗涤至洗涤液pH≈7，有机相用无水硫酸钠干燥。抽滤，将滤液旋干，得到浅棕色固体，即4-[(4-((4-氯苯甲基)氨基)-2-嘧啶基)氨基]苯腈粗品。柱层析纯化，洗脱剂为二氯甲烷/乙酸乙酯混合溶剂(50:1，V/V)，收集目标化合物组分减压蒸干，真空干燥，得到白色固体0.212g Ⅰ-4，收率48.5％。熔点：201～202℃；1HNMR(DMSO-d6，400M)δ：7.21～7.78(m，10H，ArH)，9.45(s，H，4-CNArNH-)，6.11(s，H，-CH2NH-)，4.45(d，2H，-CH2NH-)；MS(ESI)：336.72(M+1)+。
实施例9
4-[(4-((2-溴苯甲基)氨基)-2-嘧啶基)氨基]苯腈(Ⅰ-5)的制备：
称取0.48g 2-溴苄胺和0.63g K2CO3加入50mL两口烧瓶中，再加入20mL 1,4-二氧六环，搅拌。抽真空,氮气保护。0.3g固体中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶先用1,4-二氧六环溶解后注入烧瓶，搅拌加热回流14h。TLC监测显示中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶消失，停止加热和搅拌。用15mL乙酸乙酯稀释反应液，移入250mL梨形漏斗中，再加入150mL乙酸乙酯，充分振摇，饱和食盐水90mL分三次洗涤至洗涤液pH≈7，有机相用无水硫酸钠干燥。抽滤，将滤液旋干，得到浅棕色固体，即4-[(4-((2-溴苯甲基)氨基)-2-嘧啶基)氨基]苯腈粗品。柱层析纯化，洗脱剂为二氯甲烷/乙酸乙酯混合溶剂(50:1，V/V)，收集目标化合物组分减压蒸干，真空干燥，得到白色固体0.228g Ⅰ-5，收率47.1％。熔点：261～262℃；1HNMR(DMSO-d6，400M)δ：7.25～7.88(m，10H，ArH)，9.54(s，H，4-CNArNH-)，6.07(s，H，-CH2NH-)，4.45(d，2H，-CH2NH-)；MS(ESI)：381.24(M+1)+。
实施例10
4-[(4-((3-溴苯甲基)氨基)-2-嘧啶基)氨基]苯腈(Ⅰ-6)的制备：
称取0.484g(2.6mmol)的3-溴苄胺和0.629g(4.56mmol)K2CO3加入50mL两口烧瓶中，再加入20mL 1,4-二氧六环，搅拌。抽真空,氮气保护。0.3g固体中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶先用1,4-二氧六环溶解后注入烧瓶，搅拌加热回流14h。TLC监测显示中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶消失，停止加热和搅拌。用15mL乙酸乙酯稀释反应液，移入250mL梨形漏斗中，再加入150mL乙酸乙酯，充分振摇，饱和食盐水90mL分三次洗涤至洗涤液pH≈7，有机相用无水硫酸钠干燥。抽滤，将滤液旋干，得到浅棕色固体，即4-[(4-((3-溴苯甲基)氨基)-2-嘧啶基)氨基]苯腈粗品。柱层析纯化，洗脱剂为二氯甲烷/乙酸乙酯混合溶剂(50:1，V/V)，收集目标化合物组分减压蒸干，真空干燥，得到白色固体0.24g(Ⅰ-6)，收率50.5％。熔点：202～203℃；1H NMR(DMSO-d6，400M)δ：7.24～7.84(m，10H，ArH)，9.53(s，H，4-CNArNH-)，6.06(s，H，-CH2NH-)，4.48(s，2H，-CH2NH-)；MS(ESI)：381.24(M+1)+。
实施例11
4-[(4-((4-溴苯甲基)氨基)-2-嘧啶基)氨基]苯腈(Ⅰ-7)的制备：
称取0.484g(2.6mmol)的4-溴苄胺和0.629g(4.56mmol)K2CO3加入50mL两口烧瓶中，再加入20mL 1,4-二氧六环，搅拌。抽真空,氮气保护。0.3g固体中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶先用1,4-二氧六环溶解后注入烧瓶，搅拌加热回流14h。TLC监测显示中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶消失，停止加热和搅拌。用15mL乙酸乙酯稀释反应液，移入250mL梨形漏斗中，再加入150mL乙酸乙酯，充分振摇，饱和食盐水90mL分三次洗涤至洗涤液pH≈7，有机相用无水硫酸钠干燥。抽滤，将滤液旋干，得到浅棕色固体，即4-[(4-((4-溴苯甲基)氨基)-2-嘧啶基)氨基]苯腈粗品。柱层析纯化，洗脱剂为二氯甲烷/乙酸乙酯混合溶剂(50:1，V/V)，收集目标化合物组分减压蒸干，真空干燥，得到白色固体0.213g Ⅰ-7，收率44％。熔点：201～202℃；1H NMR(DMSO-d6，400M)δ：7.21～7.80(m，10H，ArH)，9.48(s，H，4-CNArNH-)，6.06(s，H，-CH2NH-)，4.44(s，2H，-CH2NH-)；MS(ESI)：381.24(M+1)+。
实施例12
4-[(4-((2-氟苯甲基)氨基)-2-嘧啶基)氨基]苯腈(Ⅰ-8)的制备：
将0.325g的2-氟苄胺和0.629g(4.56mmol)K2CO3加入50mL两口烧瓶中，再加入20mL1,4-二氧六环，搅拌。抽真空,氮气保护。0.3g固体中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶先用1,4-二氧六环溶解后注入烧瓶，搅拌加热回流14h。TLC监测显示中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶消失，停止加热和搅拌。用15mL乙酸乙酯稀释反应液，移入250mL梨形漏斗中，再加入150mL乙酸乙酯，充分振摇，饱和食盐水90mL分三次洗涤至洗涤液pH≈7，有机相用无水硫酸钠干燥。抽滤，将滤液旋干，得到浅棕色固体，即4-[(4-((2-氟苯甲基)氨基)-2-嘧啶基)氨基]苯腈粗品。柱层析纯化，洗脱剂为二氯甲烷/乙酸乙酯混合溶剂(50:1，V/V)，收集目标化合物组分减压蒸干，真空干燥，得到白色固体0.3g Ⅰ-8，收率72.3％。熔点：221～222℃；1H NMR(DMSO-d6，400M)δ：7.11～7.85(m，10H，ArH)，9.48(s，H，4-CNArNH-)，6.06(s，H，-CH2NH-)，4.44(s，2H，-CH2NH-)；MS(ESI)：320.32(M+1)+。
实施例13
4-[(4-((3-氟苯甲基)氨基)-2-嘧啶基)氨基]苯腈(Ⅰ-9)的制备：
将0.325g(2.6mmol)的3-氟苄胺和0.629g(4.56mmol)K2CO3加入50mL两口烧瓶中，再加入20mL 1,4-二氧六环，搅拌。抽真空,氮气保护。0.3g固体中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶先用1,4-二氧六环溶解后注入烧瓶，搅拌加热回流14h。TLC监测显示中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶消失，停止加热和搅拌。用15mL乙酸乙酯稀释反应液，移入250mL梨形漏斗中，再加入150mL乙酸乙酯，充分振摇，饱和食盐水90mL分三次洗涤至洗涤液pH≈7，有机相用无水硫酸钠干燥。抽滤，将滤液旋干，得到浅棕色固体，即4-[(4-((3-氟苯甲基)氨基)-2-嘧啶基)氨基]苯腈粗品。柱层析纯化，洗脱剂为二氯甲烷/乙酸乙酯混合溶剂(50:1，V/V)，收集目标化合物组分减压蒸干，真空干燥，得到白色固体0.267g Ⅰ-9，收率64.5％。熔点：186～187℃；1H NMR(DMSO-d6，400M)δ：6.97～7.81(m，10H，ArH)，9.50(s，H，4-CNArNH-)，6.04(s，H，-CH2NH-)，4.48(s，2H，-CH2NH-)。
实施例14
4-[(4-((4-氟苯甲基)氨基)-2-嘧啶基)氨基]苯腈(Ⅰ-10)的制备：
将0.325g(2.6mmol)的4-氟苄胺和0.629g(4.56mmol)K2CO3加入50mL两口烧瓶中，再加入20mL 1,4-二氧六环，搅拌。抽真空,氮气保护。0.3g固体中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶先用1,4-二氧六环溶解后注入烧瓶，搅拌加热回流14h。TLC监测显示中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶消失，停止加热和搅拌。用15mL乙酸乙酯稀释反应液，移入250mL梨形漏斗中，再加入150mL乙酸乙酯，充分振摇，饱和食盐水90mL分三次洗涤至洗涤液pH≈7，有机相用无水硫酸钠干燥。抽滤，将滤液旋干，得到浅棕色固体，即4-[(4-((4-氟苯甲基)氨基)-2-嘧啶基)氨基]苯腈粗品。柱层析纯化，洗脱剂为二氯甲烷/乙酸乙酯混合溶剂(50:1，V/V)，收集目标化合物组分减压蒸干，真空干燥，得到白色固体0.256g Ⅰ-10，收率61.7％。熔点：187～188℃；1H NMR(DMSO-d6，400M)δ：7.05～7.78(m，10H，ArH)，9.45(s，H，4-CNArNH-)，6.07(s，H，-CH2NH-)，4.48(s，2H，-CH2NH-)；MS(ESI)：320.32(M+1)+。
实施例15
4-[(4-((4-甲基苯甲基)氨基)-2-嘧啶基)氨基]苯腈(Ⅰ-11)的制备：
称取0.315g(2.6mmol)的4-甲基苄胺和0.449g(3.25mmol)K2CO3加入50mL两口烧瓶中，再加入20mL 1,4-二氧六环，搅拌。抽真空,氮气保护。0.3g固体中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶先用1,4-二氧六环溶解后注入烧瓶，搅拌加热回流14h。TLC监测显示中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶消失，停止加热和搅拌。用15mL乙酸乙酯稀释反应液，移入250mL梨形漏斗中，再加入150mL乙酸乙酯，充分振摇，饱和食盐水90mL分三次洗涤至洗涤液pH≈7，有机相用无水硫酸钠干燥。抽滤，将滤液旋干，得到浅棕色固体，即4-[(4-((4-甲基苯甲基)氨基)-2-嘧啶基)氨基]苯腈粗品。柱层析纯化，洗脱剂为二氯甲烷/乙酸乙酯混合溶剂(50:1，V/V)，收集目标化合物组分减压蒸干，真空干燥，得到白色固体0.297g Ⅰ-11，收率73.4％。熔点：180～181℃；1H NMR(DMSO-d6，400M)δ：7.07～7.82(m，10H，ArH)，9.51(s，H，4-CNArNH-)，6.04(s，H，-CH2NH-)，4.44(s，2H，-CH2NH-)；MS(ESI)：316.37(M+1)+。
实施例16
4-[(4-((2-甲氧基苯甲基)氨基)-2-嘧啶基)氨基]苯腈(Ⅰ-12)的制备：
称取0.357g(2.6mmol)的2-甲氧基苄胺和0.449g(3.25mmol)K2CO3加入50mL两口烧瓶中，再加入20mL 1,4-二氧六环，搅拌。抽真空,氮气保护。0.3g固体中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶先用1,4-二氧六环溶解后注入烧瓶，搅拌加热回流14h。TLC监测显示中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶消失，停止加热和搅拌。用15mL乙酸乙酯稀释反应液，移入250mL梨形漏斗中，再加入150mL乙酸乙酯，充分振摇，饱和食盐水90mL分三次洗涤至洗涤液pH≈7，有机相用无水硫酸钠干燥。抽滤，将滤液旋干，得到浅棕色固体，即4-[(4-((2-甲氧基苯甲基)氨基)-2-嘧啶基)氨基]苯腈粗品。柱层析纯化，洗脱剂为二氯甲烷/乙酸乙酯混合溶剂(50:1，V/V)，收集目标化合物组分减压蒸干，真空干燥，得到白色固体0.362g Ⅰ-12，收率86.6％。熔点：220～221℃；1H NMR(DMSO-d6，400M)δ：6.80～7.78(m，10H，ArH)，9.51(s，H，4-CNArNH-)，6.04(s，H，-CH2NH-)，4.44(s，2H，-CH2NH-)；3.64(s，3H，-CH3)；MS(ESI)：332.28(M+1)+。
实施例17
4-[(4-((3-甲氧基苯甲基)氨基)-2-嘧啶基)氨基]苯腈(Ⅰ-13)的制备：
称取0.357g(2.6mmol)的3-甲氧基苄胺和0.449g(3.25mmol)K2CO3加入50mL两口烧瓶中，再加入20mL 1,4-二氧六环，搅拌。抽真空,氮气保护。0.3g固体中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶先用1,4-二氧六环溶解后注入烧瓶，搅拌加热回流14h。TLC监测显示中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶消失，停止加热和搅拌。用15mL乙酸乙酯稀释反应液，移入250mL梨形漏斗中，再加入150mL乙酸乙酯，充分振摇，饱和食盐水90mL分三次洗涤至洗涤液pH≈7，有机相用无水硫酸钠干燥。抽滤，将滤液旋干，得到浅棕色固体，即4-[(4-((3-甲氧基苯甲基)氨基)-2-嘧啶基)氨基]苯腈粗品。柱层析纯化，洗脱剂为二氯甲烷/乙酸乙酯混合溶剂(50:1，V/V)，收集目标化合物组分减压蒸干，真空干燥，得到白色固体0.257g Ⅰ-13，收率61.6％。熔点：160～161℃；1H NMR(DMSO-d6，400M)δ：6.71～7.80(m，10H，ArH)，9.50(s，H，4-CNArNH-)，6.04(s，H，-CH2NH-)，4.44(s，2H，-CH2NH-)；3.63(s，3H，-CH3)；MS(ESI)：332.28(M+1)+。
实施例18
4-[(4-((4-甲氧基苯甲基)氨基)-2-嘧啶基)氨基]苯腈(Ⅰ-14)的制备：
称取0.357g(2.6mmol)的4-甲氧基苄胺和0.449g(3.25mmol)K2CO3加入50mL两口烧瓶中，再加入20mL 1,4-二氧六环，搅拌。抽真空,氮气保护。0.3g固体中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶先用1,4-二氧六环溶解后注入烧瓶，搅拌加热回流14h。TLC监测显示中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶消失，停止加热和搅拌。用15mL乙酸乙酯稀释反应液，移入250mL梨形漏斗中，再加入150mL乙酸乙酯，充分振摇，饱和食盐水90mL分三次洗涤至洗涤液pH≈7，有机相用无水硫酸钠干燥。抽滤，将滤液旋干，得到浅棕色固体，即4-[(4-((4-甲氧基苯甲基)氨基)-2-嘧啶基)氨基]苯腈粗品。柱层析纯化，洗脱剂为二氯甲烷/乙酸乙酯混合溶剂(50:1，V/V)，收集目标化合物组分减压蒸干，真空干燥，得到白色固体0.304g Ⅰ-14，收率72.8％。熔点：161～162℃；1H NMR(DMSO-d6，400M)δ：6.80～7.85(m，10H，ArH)，9.52(s，H，4-CNArNH-)，6.05(s，H，-CH2NH-)，4.45(s，2H，-CH2NH-)；3.63(s，3H，-CH3)；MS(ESI)：332.28(M+1)+。
实施例19
4-[(4-((2-三氟甲基苯甲基)氨基)-2-嘧啶基)氨基]苯腈(Ⅰ-15)的制备：
称取0.455g(2.6mmol)的2-三氟甲基苄胺和0.718g(5.2mmol)K2CO3加入50mL两口烧瓶中，再加入20mL 1,4-二氧六环，搅拌。抽真空,氮气保护。0.3g固体中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶先用1,4-二氧六环溶解后注入烧瓶，搅拌加热回流14h。TLC监测显示中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶消失，停止加热和搅拌。用15mL乙酸乙酯稀释反应液，移入250mL梨形漏斗中，再加入150mL乙酸乙酯，充分振摇，饱和食盐水90mL分三次洗涤至洗涤液pH≈7，有机相用无水硫酸钠干燥。抽滤，将滤液旋干，得到浅棕色固体，即4-[(4-((2-三氟甲基苯甲基)氨基)-2-嘧啶基)氨基]苯腈粗品。柱层析纯化，洗脱剂为二氯甲烷/乙酸乙酯混合溶剂(50:1，V/V)，收集目标化合物组分减压蒸干，真空干燥，得到白色固体0.234g Ⅰ-15，收率50.2％。熔点：237～238℃；1H NMR(DMSO-d6，400M)δ：7.48～7.95(m，10H，ArH)，9.52(s，H，4-CNArNH-)，6.10(s，H，-CH2NH-)，4.59(s，2H，-CH2NH-)；MS(ESI)：370.34(M+1)+。
实施例20
4-[(4-((3-三氟甲基苯甲基)氨基)-2-嘧啶基)氨基]苯腈(Ⅰ-16)的制备：
称取0.455g(2.6mmol)的2-三氟甲基苄胺和0.718g(5.2mmol)K2CO3加入50mL两口烧瓶中，再加入20mL 1,4-二氧六环，搅拌。抽真空,氮气保护。0.3g固体中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶先用1,4-二氧六环溶解后注入烧瓶，搅拌加热回流14h。TLC监测显示中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶消失，停止加热和搅拌。用15mL乙酸乙酯稀释反应液，移入250mL梨形漏斗中，再加入150mL乙酸乙酯，充分振摇，饱和食盐水90mL分三次洗涤至洗涤液pH≈7，有机相用无水硫酸钠干燥。抽滤，将滤液旋干，得到浅棕色固体，即4-[(4-((3-三氟甲基苯甲基)氨基)-2-嘧啶基)氨基]苯腈粗品。柱层析纯化，洗脱剂为二氯甲烷/乙酸乙酯混合溶剂(50:1，V/V)，收集目标化合物组分减压蒸干，真空干燥，得到白色固体0.227g Ⅰ-16，收率48.7％。熔点：200～201℃；1H NMR(DMSO-d6，400M)δ：7.51～7.95(m，10H，ArH)，9.55(s，H，4-CNArNH-)，6.10(s，H，-CH2NH-)，4.59(s，2H，-CH2NH-)；MS(ESI)：370.34(M+1)+。
实施例21
4-[(4-((4-三氟甲基苯甲基)氨基)-2-嘧啶基)氨基]苯腈(Ⅰ-17)的制备：
称取0.455g(2.6mmol)的3-三氟甲基苄胺和0.718g(5.2mmol)K2CO3加入50mL两口烧瓶中，再加入20mL 1,4-二氧六环，搅拌。抽真空,氮气保护。0.3g固体中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶先用1,4-二氧六环溶解后注入烧瓶，搅拌加热回流14h。TLC监测显示中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶消失，停止加热和搅拌。用15mL乙酸乙酯稀释反应液，移入250mL梨形漏斗中，再加入150mL乙酸乙酯，充分振摇，饱和食盐水90mL分三次洗涤至洗涤液pH≈7，有机相用无水硫酸钠干燥。抽滤，将滤液旋干，得到浅棕色固体，即4-[(4-((4-三氟甲基苯甲基)氨基)-2-嘧啶基)氨基]苯腈粗品。柱层析纯化，洗脱剂为二氯甲烷/乙酸乙酯混合溶剂(50:1，V/V)，收集目标化合物组分减压蒸干，真空干燥，得到白色固体0.216g Ⅰ-17，收率46.4％。熔点：200～201℃；1H NMR(DMSO-d6，400M)δ：7.50～7.91(m，10H，ArH)，9.53(s，H，4-CNArNH-)，6.10(s，H，-CH2NH-)，4.55(s，2H，-CH2NH-)；MS(ESI)：370.34(M+1)+。
实施例22
4-[(4-((3,4-二甲基苯甲基)氨基)-2-嘧啶基)氨基]苯腈(Ⅰ-18)的制备：
称取0.352g(2.6mmol)的3,4-二甲基苄胺和0.449g(3.25mmol)K2CO3加入50mL两口烧瓶中，再加入20mL 1,4-二氧六环，搅拌。抽真空,氮气保护。0.3g固体中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶先用1,4-二氧六环溶解后注入烧瓶，搅拌加热回流14h。TLC监测显示中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶消失，停止加热和搅拌。用15mL乙酸乙酯稀释反应液，移入250mL梨形漏斗中，再加入150mL乙酸乙酯，充分振摇，饱和食盐水90mL分三次洗涤至洗涤液pH≈7，有机相用无水硫酸钠干燥。抽滤，将滤液旋干，得到浅棕色固体，即4-[(4-((3，4-二甲基苯甲基)氨基)-2-嘧啶基)氨基]苯腈粗品。柱层析纯化，洗脱剂为二氯甲烷/乙酸乙酯混合溶剂(50:1，V/V)，收集目标化合物组分减压蒸干，真空干燥，得到白色固体0.349g Ⅰ-18，收率82.9％。熔点：167～173℃；1H NMR(DMSO-d6，400M)δ：6.98～7.84(m，9H，ArH)，9.52(s，H，4-CNArNH-)，6.04(s，H，-CH2NH-)，4.42(s，2H，-CH2NH-)；2.11～2.13(d，6H，3,4-diCH3)；MS(ESI)：330.47(M+1)+。
实施例23
4-[(4-((2，4-二氟苯甲基)氨基)-2-嘧啶基)氨基]苯腈(Ⅰ-19)的制备：
称取0.372g(2.6mmol)的2,4-二氟苄胺和0.718g(5.2mmol)K2CO3加入50mL两口烧瓶中，再加入20mL 1,4-二氧六环，搅拌。抽真空,氮气保护。0.3g固体中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶先用1,4-二氧六环溶解后注入烧瓶，搅拌加热回流14h。TLC监测显示中间体2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶消失，停止加热和搅拌。用15mL乙酸乙酯稀释反应液，移入250mL梨形漏斗中，再加入150mL乙酸乙酯，充分振摇，饱和食盐水90mL分三次洗涤至洗涤液pH≈7，有机相用无水硫酸钠干燥。抽滤，将滤液旋干，得到浅棕色固体，即4-[(4-((2，4-二氟苯甲基)氨基)-2-嘧啶基)氨基]苯腈粗品。柱层析纯化，洗脱剂为二氯甲烷/乙酸乙酯混合溶剂(50:1，V/V)，收集目标化合物组分减压蒸干，真空干燥，得到白色固体0.261g Ⅰ-19，收率59.7％。熔点：210～213℃；1H NMR(DMSO-d6，400M)δ：6.91～7.77(m，9H，ArH)，9.45(s，H，4-CNArNH-)，6.00(s，H，-CH2NH-)，4.42(s，2H，-CH2NH-)；MS(ESI)：338.23(M+1)+。
对实施例所得个目标产物进行抗HIV生物活性测试：
体外细胞水平的抗HIV病毒活性测定，主要包括对HIV感染的MT-4细胞的抑制活性及细胞毒性两方面。方法描述如下：使化合物在HIV感染的MT-4细胞中，于感染HIV不同时间，用MTT法测定药物对HIV诱变的细胞病变的保护作用，计算使50％的细胞免于HIV诱导的细胞病变所需的浓度半数有效浓度EC50，毒性测定与抗HIV活性实验平行进行，也是在MT-4细胞培养中，用MTT法测定使50％的未感染细胞发生细胞病变的浓度(CC50)。
材料与方法：各化合物的抗HIV活性由药物对HIV在细胞中引起的细胞病变的抑制作用效率来监控。采用MT-4细胞进行细胞培养。采用的病毒株为HIV-1病毒株IIIB。
具体操作如下：将化合物用DMSO或水溶解后用磷酸盐缓冲食盐水溶液稀释，将3×105MT-4细胞用100μL各化合物不同浓度此溶液在37℃预培养lh，然后向该化合物中加入100μL适当的病毒稀释液，将细胞于37℃培养lh。洗涤三次后，将细胞再次分别悬浮于含有或不含有化合物的培养介质中。接着将细胞在5％二氧化碳氛围中，于37℃下再培养7天，并于感染后第三天用含有或不含有化合物的培养介质替换补充培养液。每种培养液条件都重复操作两次。对病毒的细胞病变作用每天都用反向光学显微镜监控。典型来讲，本实验中所用的病毒稀释液常常会在病毒感染后第五天导致细胞病变。药物抑制浓度以药物对病毒细胞病变作用产生50％抑制作用而同时对细胞无直接毒性的浓度(CC50)。需要强调的是，当化合物水溶性较差，需要用DMSO才能溶解时，DMSO比浓度相对于水来讲，一般低于10％，(DMSO在MT-4细胞培养介质中最终浓度小于2％)。因为DMSO能影响测试化合物的抗病毒活性，对含有相同浓度DMSO溶液抗病毒活性对比空白实验也应该平行进行。另外，DMSO最终浓度(1/1000)远远低于影响HIV-1在T细胞中复制所需的浓度。
表1中列出了目标化合物抑制HIV-1IIIB的EC50、CC50。上市药物Nevirapine、Efavirenz和TMC125也被同时测试作为参考。此外，我们还测试了目标化合物对HIV-1逆转录酶(HIV-1RT)的抑制活性IC50，见表1。
表1
由表1可知，所测试的19个化合物均具有较好的HIV-1细胞水平抑制活性，部分化合物对HIV-1 IIIB这一重要病毒株的抑制活性强于作为参考的上市药物奈韦拉平、依法韦伦和依曲韦林，且毒性很小，可用于进一步开发为抗艾滋病药物。同时，HIV-1逆转录酶抑制活性数据也证实了这类化合物确实是作为HIV-1逆转录酶抑制剂而发挥抗HIV效力的。

Claims (4)

1.一种二芳基嘧啶类HIV-1抑制剂，其特征在于具有如下的结构通式(Ⅰ)：
其中R为单取代基或多取代基；所述取代基为氟原子、氯原子、溴原子、甲基、甲氧基或三氟甲基。
2.权利要求1所述二芳基嘧啶类HIV-1抑制剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
在惰性气体保护下，以2-(对氰基苯胺基)-4-氯嘧啶为原料，在碱的作用下，与取代苄胺在溶剂中发生亲核取代反应得到上述二芳基嘧啶。
3.如权利要求2所述二芳基嘧啶类HIV-1抑制剂的制备方法，其特征在于所述的碱为碳酸钾、碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化钾或钠氢中的一种化合物或几种混合物。
4.如权利要求2所述二芳基嘧啶类HIV-1抑制剂的制备方法，其特征在于所述的溶剂为二氧六环、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺，二甲基亚砜和乙腈中的一种溶剂或几种溶剂组成混合溶剂。
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