CN105061565A - 干扰素调节因子5抑制多肽及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及药物领域，具体涉及具有抑制干扰素调节因子5，其序列为TCMIPRDTHDGAFYRA是全新的序列，能预防和治疗类风湿性关节炎的多肽，可通过多种给药方式治疗和预防类风湿关节炎疾病，包括皮下或肌肉注射，静脉注射或者静脉滴注，口服给药如药丸、胶囊等，鼻喷剂等。本发明的有益效果是可用于治疗类风湿性关节炎，具有潜在的新药开发价值。

Description

干扰素调节因子5抑制多肽及其应用

技术领域：

本发明涉及药物领域，具体涉及用于预防和治疗或预防类风湿性关节炎的干扰素调节因子5多肽抑制多肽。

背景技术：

干扰素调节因子(IRF)是转录因子家族成，可以通过与干扰素基因中顺式元件(ISRE)的相互作用而调节干扰素及干扰素诱导基因的表达，在干扰素基因的调控中占有重要地位。干扰素调节因子-5是该家族其中的一员，IRF5能诱导IFN-α、IFN-β产生,也能促进IL-6、IL-12b、IL-17、IL-23、TNF等细胞因子的分泌,从而参与机体的免疫反应、细胞生长、细胞分化、细胞凋亡、肿瘤发生和细胞信号转导等过程。干扰素调节因子-5在人体许多疾病的发生、发展中起重要作用.研究发现干扰素调节因子-5(IRF-5)基因rs2004640位点基因多态性与河北汉族人群类风湿关节炎(RA)存在高度的相关性。IRF5不仅可以诱导产生干扰素，并且通过Toll样受体通路激活干扰素下游靶基因，因此，IRF5在自身免疫性疾病发病中起重要的作用，成为治疗类风湿关节炎的新靶点。

类风湿关节炎(rheumatoidarthritis，RA)是临床最常见的炎性关节病和主要致残因素之一。在全世界约为0.5％-1.0％，RA的发病在我国约为0.4％。RA可发生于任何年龄，随着年龄的增长，发病率也随之增高。女性高发年龄为45-55岁，性别与RA发病关系密切，男女之比约1:3。RA是一种病因尚未明了的慢性全身性炎症性疾病，以慢性、对称性、多滑膜关节炎和关节外病变为主要临床表现，属于自身免疫炎性疾病。类风湿关节炎的病因和发病机制尚未完全明了，其基本病理特点是血管炎和滑膜炎。关节内滑膜血管增生，形成血管翳，导致滑膜增厚，渗出增多，分泌多种细胞因子，侵犯软骨并引起骨质损害。对其周围的肌腔、韧带、腱鞘以及肌肉等组织也均可侵蚀，从而影响关节的稳定，容易发生关节畸形而出现功能障碍。血管炎亦可侵犯周身各脏器组织，形成系统性疾病。

目前治疗RA的药物分为两大类：控制症状药和控制疾病药。由于RA病因不明，故当今并无堪称控制疾病的药。控制症状的抗风湿药分为四类：一、非甾体类抗炎药，通常称为一线药，这类药物种类繁多，国内市场已多达数十种。二、类固醇激素，激素是一个非常好的止痛抗炎药，但长期单独使用不能改善病情，反而带来许多副作用，激素作为二线慢作用药起效前的过渡性用是可以的，但用量要小，时间不宜过长。在病情较重，伴有关节外表现的患者，短期治疗冲击，并联合二线药治疗时必须的。三、慢作用抗风湿药，通常称为二线药，所谓慢作用药包括抗疟药、金盐、青霉胺和柳氮碘胺吡啶，它们治疗RA起效慢，长期作用对RA病情有一定缓解作用，故也称病情改善药。四、免疫抑制多肽：常用有甲氨喋呤、环磷酰胺、硫唑嘌呤、雷公藤、青风藤等。先有的抗类风湿关节炎药物都差强人意。因此，急需开发新型的抗类风湿关节炎药物。

目前尽管研究认为，IRF5是治疗RA的新靶点。但是并没有成熟开发的干扰素调节因子5抑制多肽问世，用于治疗RA。

发明内容：

本发明目的是针对现有抗类风湿关节炎药物的特点，设计一种IRF5多肽拮抗剂，可以用于预防或治疗类风湿关节炎。

本发明技术方案是提供一种干扰素调节因子5抑制多肽，其序列为TCMIPRDTHDGAFYRA，及在治疗或预防类风湿性关节炎药物中的应用。可通过多种给药方式治疗和预防类风湿关节炎疾病，包括皮下或肌肉注射，静脉注射或者静脉滴注，口服给药如药丸、胶囊等，鼻喷剂等。

有益结果：

本发明中的干扰素调节因子5抑制多肽序列TCMIPRDTHDGAFYRA，可以靶向抑制IRF5，抑制干扰素调节因子5受体产生的生理或病理的效应，达到预防或治疗类风湿性关节炎的效果。

发明人经过大量实验获知干扰素调节因子5抑制多肽能够抑制佐剂型大鼠类风湿关节炎和DBA/1小鼠胶原型类风湿性关节炎的发展，体内实验证明具有显著的治疗类风湿型关节炎的效果。说明本发明设计的干扰素调节因子5抑制多肽科学、合理、可行有效，能作为治疗或预防类风湿性关节炎药物。

具体实施方式

实施例1

干扰素调节因子5抑制多肽在胶原诱导小鼠关节炎动物模型体内免疫保护作用

构建胶原型小鼠关节炎动物模型，研究干扰素调节因子5抑制多肽对小鼠胶原诱导性关节炎(collageninducedarthritis，CIA)的治疗作用。采用小鼠作为受试动物，SPF级DBA/1小鼠60只(由上海西普尔-必凯实验动物有限公司(Sino-BritishSIPPRLab.AnimalLtd)提供，动物生产许可证号码：SCXK(沪)2008-0016)，雄性，7-8周龄，体重为18-22g，随机分成6组，分别是正常对照组，模型对照组，多肽低中高3个剂量组(1，2，4mg/kg)和阳性药对照组(甲氨蝶呤2mg/kg)。除正常组外，第0天各实验组建立小鼠CIA模型，方法是鸡软骨Ⅱ型胶原(cⅡ)用0.1mol/l醋酸溶解成4mg/ml的溶液，于4℃冰箱过夜。实验当天用Ⅱ型胶原与含4mg/mlMyeobaeteriumtuberculosisstrainH37Rv的完全弗氏佐剂(CFA)等体积充分乳化，待DBA/1小鼠麻醉后，于其尾部皮内每只注射乳化剂50μl进行致敏，21d后用4mg/ml的Ⅱ型胶原(cⅡ)与不完全弗氏佐剂(IFA)等体积充分乳化后以相同剂量的乳化剂于尾部进行再次免疫。造模第30d起皮下注射给药：多肽的3个剂量组(1，2，4mg/kg)：每日两次，连续7天；阳性药对照组(甲氨蝶呤2mg/kg)：每3天一次，连续3次；正常对照组和模型对照组(生理盐水)：连续7天。分别于造模后第38天测关节评分、分别检测左右后足足踝直径来观察药物对小鼠胶原型关节炎的影响。

干扰素调节因子5抑制多肽在胶原诱导小鼠关节炎动物模型体内免疫保护作用具体结果如下：干扰素调节因子5抑制多肽对小鼠胶原型关节肿胀度率的影响，阳性对照组、干扰素调节因子5抑制多肽高、中、低剂量组关节肿胀度率与模型组比较，均有极显著性差异(P<0.01)实验结果具有统计学意义。干扰素调节因子5抑制多肽对小鼠胶原型关节炎足爪肿胀度率的影响，阳性对照组、干扰素调节因子5抑制多肽高、中、低剂量组足爪肿胀度率与模型组比较，均有极显著性差异(P<0.01)，实验结果具有统计学意义。多肽对胶原型关节炎小鼠关节评分的影响，多肽低、中、高剂量组四肢评分显著低于模型对照组(P＜0.01)，与模型对照组比较极显著性差异，实验结果具有统计学意义。

表1干扰素调节因子5抑制多肽对胶原型关节炎的影响(means±SD)

*P<0.05；**P<0.01(和模型组比较)

结论：干扰素调节因子5抑制多肽对小鼠胶原型关节炎具有治疗作用。

实施例2

干扰素调节因子5抑制多肽对佐剂型大鼠关节炎动物模型体内免疫保护作用

构建佐剂型大鼠关节炎动物模型，研究多肽对佐剂性关节炎(Adjuvantarthritis，AA)大鼠的治疗作用。采用大鼠作为受试动物，SPF级SD大鼠60只(由上海西普尔-必凯实验动物有限公司(Sino-BritishSIPPRLab.AnimalLtd)提供，动物生产许可证号码：SCXK(沪)2008-0016)，雄性，体重为140g-160g，随机分成6组，分别是正常对照组，模型对照组，干扰素调节因子5抑制多肽低中高3个剂量组(0.5，1，2mg/kg)和阳性药对照组(甲氨蝶呤1mg/kg)。除正常组外，第0天各实验组建立大鼠AA模型，方法是在大鼠的左侧后足足跎注射含灭活的结核分枝杆菌(H37RA，10mg/ml)完全弗氏佐剂0.1ml造成大鼠佐剂性关节炎模型。造模第10天起皮下注射给药：多肽的3个剂量组(0.5，1，2mg/kg)：每日两次，连续7天；阳性药对照组(甲氨蝶呤1mg/kg)：每3天一次，连续3次；正常对照组和模型对照组(生理盐水)：连续7天。造模后第18天，关节评分、分别检测左右后足足踝直径来观察药物对大鼠佐剂型关节炎的影响。

多肽在佐剂性大鼠关节炎动物模型体内免疫保护作用，具体结果如下：干扰素调节因子5抑制多肽对大鼠原发性关节炎足爪肿胀度率的影响，大鼠阳性对照组、干扰素调节因子5抑制多肽的低、中、高剂量组左后足踝直径与模型组比较，有极显著性差异(P<0.01)；干扰素调节因子5抑制多肽对大鼠继发性关节炎右后足踝直径的影响，大鼠阳性对照组、干扰素调节因子5抑制多肽低、中、高剂量组右后足踝直径与模型组比较，有显著性差异(P<0.05)。干扰素调节因子5抑制多肽对佐剂型关节炎大鼠关节评分的影响，多肽低、中、高剂量组四肢评分显著低于模型对照组(P＜0.05)，与模型对照组比较差异均有统计学意义。

表2干扰素调节因子5抑制多肽对佐剂型关节炎的影响(means±SD)

*P<0.05；**P<0.01(和模型组比较)

结论：干扰素调节因子5抑制多肽对AA大鼠关节炎具有治疗作用。

SEQUENCELISTING

<110>苏州普罗达生物科技有限公司

<120>干扰素调节因子5抑制多肽及其应用

<130>

<160>1

<170>PatentInversion3.3

<210>1

<211>16

<212>PRT

<213>人工序列

<400>1

ThrCysMetIleProArgAspThrHisAspGlyAlaPheTyrArgAla

151015

Claims (3)

1.干扰素调节因子5抑制多肽，其特征在于其序列为TCMIPRDTHDGAFYRA。

2.权利要求1的抑制多肽在制备治疗和预防类风湿关节炎疾病药物中的应用。

3.根据权利要求1-2任一所述抑制多肽的用途，其特征在于：可通过多种给药方式治疗和预防类风湿关节炎疾病，包括皮下或肌肉注射，静脉注射或者静脉滴注，口服给药如药丸、胶囊等，鼻喷剂等。