CN105061446A - 源于桔青霉的penicitrinine A及在制备抗鼻咽癌药物上的应用 - Google Patents

源于桔青霉的penicitrinine A及在制备抗鼻咽癌药物上的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN105061446A
CN105061446A CN201510422144.0A CN201510422144A CN105061446A CN 105061446 A CN105061446 A CN 105061446A CN 201510422144 A CN201510422144 A CN 201510422144A CN 105061446 A CN105061446 A CN 105061446A
Authority
CN
China
Prior art keywords
penicillium citrinum
preparation
compound
nasopharyngeal carcinoma
application
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201510422144.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN105061446B (zh
Inventor
郑秋红
刘沁颖
陈立
应敏刚
周彤
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
FUJIAN CANCER HOSPITAL
Original Assignee
FUJIAN CANCER HOSPITAL
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by FUJIAN CANCER HOSPITAL filed Critical FUJIAN CANCER HOSPITAL
Priority to CN201510422144.0A priority Critical patent/CN105061446B/zh
Publication of CN105061446A publication Critical patent/CN105061446A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN105061446B publication Critical patent/CN105061446B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/12—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D491/20—Spiro-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
    • C12P17/182—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring heteroatoms in the condensed system

Landscapes

  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明涉及一种源于桔青霉的penicitrinine？A制备方法及其应用。该化合物具有抑制人鼻咽癌细胞增殖作用。其结构式为：

Description

源于桔青霉的penicitrinine A及在制备抗鼻咽癌药物上的应用
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及一种源于桔青霉的penicitrinineA制备方法及其抑制人鼻咽癌细胞增殖方面的应用。
背景技术
生物碱是一类由生物次级代谢产生的含氮有机化合物，自然界中的生物碱种类较多，大多来源于植物，因此又有植物碱之称。生物碱对人和动物有重要的生理作用，包括平喘镇咳、降血糖、降血脂、抗菌、抗肿瘤、镇痛等，其中以抗菌、抗肿瘤活性最为突出。天然结构生物碱是创新药物研究中发现先导化合物的重要来源，目前应用于临床的生物碱药物已经近百种。研究发现，一些海洋真菌能够在次级代谢过程中产生结构新颖、活性好的生物碱，具有很好的药用和产业化前景。
本发明人研究得知，桔青霉(Penicilliumcitrinum)IBPT-5，(已于2013年12月25日保藏在中国典型培养物保藏中心，地址:武汉武汉大学，保藏编号是：CCTCCNO：M2013713)的发酵产物的粗提取物有很好的细胞增殖抑制活性，遂对其活性成分进行研究。研究发现所示生物碱类化合物具有抗鼻咽癌活性，目前尚未见该化合物对人鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2的增殖抑制活性的报道，因此市场上也尚未见有与此相关的药物。
发明内容
本发明的目的在于提供一种源于桔青霉的生物碱类化合物penicitrinineA制备方法及其抑制人鼻咽癌细胞增殖方面的应用。该化合物具有抑制人鼻咽癌细胞增殖作用，具有抗人鼻咽癌活性。其结构式为：
。
该化合物的制备方法，是通过发酵培养桔青霉(Penicilliumcitrinum)IBPT-5，获取发酵物，然后从发酵物中分离纯化出该化合物。具体步骤如下：
1发酵生产
培养微生物的常规方法，取桔青霉(Penicilliumcitrinum)IBPT-5接种到PDA固体斜面培养基上在28℃培养箱中培养4天，然后接种到培养液中，28℃静止培养30天后，获得菌丝体和发酵液；所述培养液组成：每升水含甘露醇20.0g、酵母膏3.0g、麦芽糖20.0g、味精10.0g、葡萄糖10.0g、KH2PO40.5g、MgSO40.3g、NaCl30.0g；
2浸膏的获得
用纱布将菌丝体和发酵液分离。将发酵液用乙酸乙酯1:2(v/v)萃取两次，萃取液减压蒸馏至干，得到发酵液的乙酸乙酯浸膏32.0g。
3化合物的分离精制
该浸膏通过100-200目硅胶拌样后，以石油醚：二氯甲烷：甲醇为洗脱液用减压硅胶色谱柱梯度洗脱，得到11个组分。组分7(4.2g)(二氯甲烷：甲醇v/v=100:1的洗脱物)以二氯甲烷：甲醇为洗脱液，进一步通过加压硅胶柱层析梯度洗脱，得到的亚组分7-6(二氯甲烷：甲醇v/v=50:1的洗脱物)通过半制备液相色谱(1010型ODS-A，10×250mm，5μm)：分离流速为5mL/min，流动相为75%乙腈含0.1%TFA，得到所示化合物(97.9mg，tR19.3min)。
所述桔青霉(Penicilliumcitrinum)IBPT-5，已于2013年12月25日保藏在中国典型培养物保藏中心，地址:武汉武汉大学，保藏编号是：CCTCCNO：M2013713。
所述的化合物在制备抑制人鼻咽癌细胞增殖药物中的应用，及该化合物在制备抗人鼻咽癌药物中的应用。所述肿瘤细胞为人鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2。
本发明的显著优点：研究所示该生物碱化合物较为罕见，所述生物碱类化合物具有显著的抑制人鼻咽癌细胞增殖活性，目前尚未见该化合物对人鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2增殖抑制活性的报道，因此市场上也尚未见有与此相关的药物。
附图说明
图1PenicitrinineA主要的COSY，HMBC和NOESY信号。
具体实施方式
在如下的实施例中所指的化合物的化学结构：
。
实施例1该化合物的发酵生产及分离精制
1发酵生产
生产菌的发酵培养：按培养微生物的常规方法，取桔青霉（Penicilliumcitrinum）IBPT-5(已于2013年12月25日保藏在中国典型培养物保藏中心，地址:武汉武汉大学，保藏编号是：CCTCCNO：M2013713)接种到PDA固体斜面培养基上在28℃培养箱中培养4天。
取斜面培养4天的桔青霉（Penicilliumcitrinum）IBPT-5接种到装有400mL培养液[培养液组成(克/升)：甘露醇20.0，酵母膏3.0，麦芽糖20.0，味精10.0，葡萄糖10.0，KH2PO40.5，MgSO40.3，NaCl30.0定容]的1000mL锥形瓶中，28℃静止培养30天后，获得菌丝体和发酵液。
2浸膏的获得
用纱布将菌丝体和发酵液分离。将发酵液用乙酸乙酯1:2(v/v)萃取两次，萃取液减压蒸馏至干，得到发酵液的乙酸乙酯浸膏32.0g。
3化合物的分离精制
该浸膏通过200目硅胶拌样后，以石油醚：二氯甲烷：甲醇为洗脱液用减压硅胶色谱柱梯度洗脱，得到11个组分。组分7(4.2g)(二氯甲烷：甲醇v/v=100:1的洗脱物)以二氯甲烷：甲醇为洗脱液，进一步通过加压硅胶柱层析梯度洗脱，得到的亚组分7-6(二氯甲烷：甲醇v/v=50:1的洗脱物)通过半制备液相色谱(1010型ODS-A，10×250mm，5μm)：分离流速为5mL/min，流动相为75%乙腈含0.1%TFA，得到所示化合物(97.9mg，tR19.3min)。
化合物黄色油状，高分辨质谱HRESI-MS在m/z484.2711处给出分子离子峰[M–H]–，(calcd.forC28H38NO6,484.2705)，提示分子量为485，结合波谱信息推测分子式为C28H39NO6。1H和13C-NMR数据见表1，主要的COSY，HMBC和NOESY信号见图1。
表1NMR化合物的1H和13C-NMR数据(500MHz1Hand125MHz13C，inCDCl3)
实施例2体外抗肿瘤活性的测试
1实验样品及实验方法
被测样品溶液的配制测试样品为上述实施1中分离精制的化合物纯品。精密称取适量样品，用DMSO配制成所需浓度的溶液，供测活性。
细胞系及细胞的继代培养采用肿瘤细胞系，肿瘤细胞用含10%FBS的RPMI1640培养基，在37℃于通入5%CO2的培养箱中继代培养。
细胞增殖抑制活性测试方法
WST-1法取对数生长期的肿瘤细胞，将细胞密度调至每毫升5×104个细胞，按每孔100μL接种于96孔细胞培养板中，于37℃通入5%CO2的培养箱中培养过夜。吸去上清液，加入含样品的培养基100μL，继续培养48h。每孔加入10μLWST-1液，培养4h。利用Bio-Rad公司产680型酶标仪测定每孔在450nm处的吸光值(OD)值。在同一块96孔板中样品的每个浓度均设置五孔，另设五孔空白对照和无细胞调零孔(如果药物有颜色要做相应药物浓度无细胞调零)。各孔OD值先做相应无细胞调零，再取五孔平均OD值按IR(%)=(OD空白对照-OD样品)/OD空白对照×100%式计算每个浓度下细胞增殖抑制率(IR%)。
2.实验结果
细胞增殖抑制活性测试结果
在WST-1法测试中，根据不同浓度的该化合物的肿瘤细胞增殖抑制率，应用SPSS16.0软件进行数据处理并计算半数抑制浓度IC50值。结果见表2。
表2化合物对人鼻咽癌细胞增殖的抑制活性
3.结论
该化合物对人鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2具有较好的抗肿瘤活性。可作为制备人鼻咽癌细胞增殖抑制药物或抗肿瘤药物用于人鼻咽癌的研究。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims (5)

1.源于桔青霉的penicitrinineA，其特征在于：所述化合物结构式为。
2.如权利要求1所述penicitrinineA的制备方法，其特征在于：发酵培养桔青霉(Penicilliumcitrinum)IBPT-5，获取发酵物，然后从发酵物中分离纯化出penicitrinineA，所述桔青霉(Penicilliumcitrinum)IBPT-5，已于2013年12月25日保藏在中国典型培养物保藏中心，地址:武汉武汉大学，保藏编号是：CCTCCNO：M2013713。
3.如权利要求1所述源于桔青霉的penicitrinineA在制备抑制人鼻咽癌细胞增殖药物中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述的肿瘤细胞为人鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2。
5.如权利要求1所述源于桔青霉的penicitrinineA在制备抗人鼻咽癌药物中的应用。
CN201510422144.0A 2015-07-17 2015-07-17 源于桔青霉的penicitrinine A及在制备抗鼻咽癌药物上的应用 Expired - Fee Related CN105061446B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510422144.0A CN105061446B (zh) 2015-07-17 2015-07-17 源于桔青霉的penicitrinine A及在制备抗鼻咽癌药物上的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510422144.0A CN105061446B (zh) 2015-07-17 2015-07-17 源于桔青霉的penicitrinine A及在制备抗鼻咽癌药物上的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN105061446A true CN105061446A (zh) 2015-11-18
CN105061446B CN105061446B (zh) 2017-04-26

Family

ID=54491007

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510422144.0A Expired - Fee Related CN105061446B (zh) 2015-07-17 2015-07-17 源于桔青霉的penicitrinine A及在制备抗鼻咽癌药物上的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105061446B (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105131006A (zh) * 2015-07-17 2015-12-09 福建省肿瘤医院 源于桔青霉的penicitrinine A及在制备抗恶性黑色素瘤药物上的应用
CN105153176A (zh) * 2015-07-17 2015-12-16 福建省肿瘤医院 源于桔青霉的penicitrinine A及其制备抗人肺癌药物的应用
CN105153175A (zh) * 2015-07-17 2015-12-16 福建省肿瘤医院 源于桔青霉的penicitrinine A及其制备抗人食管癌药物的应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004000333A1 (en) * 2002-06-20 2003-12-31 Astion Dermatology A/S Novel complexes of fatty acid esters of polyhydroxyalkanes and pyridine carboxy derivatives
WO2006075395A1 (ja) * 2005-01-11 2006-07-20 The Kitasato Institute β−ラクタム抗生物質の活性増強剤及びその製造法
CN104478891A (zh) * 2014-12-18 2015-04-01 福州大学 源于桔青霉的桔霉素类化合物penicitrinol O及其制备方法和应用
CN104592082A (zh) * 2014-12-18 2015-05-06 福州大学 源于桔青霉的青霉烯醇d2制备方法及其应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004000333A1 (en) * 2002-06-20 2003-12-31 Astion Dermatology A/S Novel complexes of fatty acid esters of polyhydroxyalkanes and pyridine carboxy derivatives
WO2006075395A1 (ja) * 2005-01-11 2006-07-20 The Kitasato Institute β−ラクタム抗生物質の活性増強剤及びその製造法
CN104478891A (zh) * 2014-12-18 2015-04-01 福州大学 源于桔青霉的桔霉素类化合物penicitrinol O及其制备方法和应用
CN104592082A (zh) * 2014-12-18 2015-05-06 福州大学 源于桔青霉的青霉烯醇d2制备方法及其应用

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105131006A (zh) * 2015-07-17 2015-12-09 福建省肿瘤医院 源于桔青霉的penicitrinine A及在制备抗恶性黑色素瘤药物上的应用
CN105153176A (zh) * 2015-07-17 2015-12-16 福建省肿瘤医院 源于桔青霉的penicitrinine A及其制备抗人肺癌药物的应用
CN105153175A (zh) * 2015-07-17 2015-12-16 福建省肿瘤医院 源于桔青霉的penicitrinine A及其制备抗人食管癌药物的应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN105061446B (zh) 2017-04-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104478891A (zh) 源于桔青霉的桔霉素类化合物penicitrinol O及其制备方法和应用
CN103865808B (zh) 一种源于桔青霉的青霉烯醇a1的抗肿瘤用途
CN103865809A (zh) 一种源于桔青霉的青霉烯醇b1的抗肿瘤新用途
CN104402898A (zh) 源于桔青霉的桔霉素类化合物penicitrinol M及其制备方法和应用
CN104402899B (zh) 源于桔青霉的桔霉素类化合物penicitrinol L及其制备方法和应用
CN104531540A (zh) 一种源于桔青霉的青霉烯醇a2的抗肿瘤用途
CN104447781A (zh) 源于桔青霉的桔霉素类化合物penicitrinol N及其制备方法和应用
CN104592082A (zh) 源于桔青霉的青霉烯醇d2制备方法及其应用
CN105061446B (zh) 源于桔青霉的penicitrinine A及在制备抗鼻咽癌药物上的应用
CN104447475B (zh) 源于桔青霉的青霉烯醇 d1制备方法及其应用
CN105061444B (zh) 源于桔青霉的penicitrinine A及其制备抗人结直肠癌药物的应用
CN105061445B (zh) 源于桔青霉的penicitrinine A及其制备抗人胃癌药物的应用
CN105001228B (zh) 源于桔青霉的penicitrinine A在制备抗人口腔表皮样瘤药物中的应用
CN105153176A (zh) 源于桔青霉的penicitrinine A及其制备抗人肺癌药物的应用
CN105153175A (zh) 源于桔青霉的penicitrinine A及其制备抗人食管癌药物的应用
CN105061443A (zh) 源于桔青霉的penicitrinine A及其制备抗人肝癌药物的应用
CN105131006B (zh) 源于桔青霉的penicitrinine A及在制备抗恶性黑色素瘤药物上的应用
CN105017272B (zh) 源于桔青霉的penicitrinine A及其制备抗人乳腺癌药物的应用
CN107325085B (zh) 桔霉素类化合物dicitrinone D制备方法及其在淋巴癌方面的应用
CN107325088B (zh) 桔霉素类化合物dicitrinone D制备方法及在鼻咽癌方面的应用
CN107325087A (zh) 桔霉素类化合物dicitrinone D及其在恶性黑色素瘤方面的应用
CN106432035A (zh) 源于桔绿木霉的青霉烯醇e1在恶性黑色素瘤方面的应用
CN103865807A (zh) 一种源于桔青霉的青霉烯醇b2的抗肿瘤新用途
CN107325086B (zh) 桔霉素类化合物dicitrinone D制备方法及其在结肠癌方面的应用
CN107325081B (zh) 桔霉素类化合物dicitrinone D制备方法及其在肺癌方面的应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20170426

Termination date: 20190717

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee