CN105037553B

CN105037553B - 一种能够检测癌症的免疫球蛋白

Info

Publication number: CN105037553B
Application number: CN201510513565.4A
Authority: CN
Inventors: 田春艳; 李静
Original assignee: Inner Mongolia Meng Yuan Biological Gene Technology Co Ltd
Current assignee: Inner Mongolia Meng Yuan Biological Gene Technology Co., Ltd.
Priority date: 2015-08-20
Filing date: 2015-08-20
Publication date: 2018-04-17
Anticipated expiration: 2035-08-20
Also published as: CN105037553A

Abstract

本发明涉及MMP9抗体IgG及其在检测癌症中的应用，MMP9抗体IgG的CDR SEQ ID NO.1‑12所示的氨基酸序列。体外试验结果表明，MMP9抗体IgG对人类的MMP9蛋白具有显著的特异性结合作用。具有较好的应用前景以及应用价值。

Description

一种能够检测癌症的免疫球蛋白

技术领域

本发明属生物领域，涉及一种能够检测癌症的免疫球蛋白。

背景技术

基质金属蛋白酶（MMP)是参与形成和重塑细胞外基质的细胞外酶家族。这些酶含有保守催化域，在所述保守催化域中，锌原子由三个组氨酸残基配位。当前，已知这一家族的超过20名成员，所述成员被组织成包括胶原酶、明胶酶、溶基质素（stromelysin)、基质溶素（matrilysin)、釉质溶素（enamelysin)和膜MMP在内的若干群组。

MMP2和MMP9属于基质金属蛋白酶的明胶酶群组。除了含有大多数MMP所共有的信号肽、前肽、催化、锌结合和血液结合素样域以外，明胶酶还含有多个纤维结合蛋白样域和〇-糖基化域。

异常活性的某些MMP已显示在肿瘤生长、癌转移、发炎和血管疾病中起作用。参见，例如胡（Hu)等人（2007)自然评论：药物发现（Nature Reviews :Drug Discovery)6: 480-498。因此，在特定治疗环境中会需要抑制一种或一种以上MMP的活性。然而，某些其它MMP的活性常为正常功能所必需。由于大多数MMP抑制剂靶向保守催化域，且因此抑制许多不同的MMP，故其治疗性使用已引起因为必需的非致病相关MMP受到抑制而导致的副作用。因而，仍然存在对特异性抑制单个MMP的催化活性且不与其它MMP反应的治疗试剂的需求。

现有技术中已有MMP9的抗体，但是其效果并不是特别良好，还有一定的改进空间，使其治疗的效果更好。

发明内容

本发明提供一种抗MMP9的抗体IgG，所述抗体的VL链的互补决定区CDR为以下的CDR氨基酸序列:

SEQ ID NO.1或2所示的 L-CDR1 ；

SEQ ID NO.3或4 或5所示的 L-CDR2 ；

SEQ ID NO.6或7或所示的 L-CDR3 ；

并且所述抗体的Vh链的互补决定区CDR为以下的CDR氨基酸序列:

SEQ ID NO.8或9所示的 H-CDR1；

SEQ ID NO.10或11所示的 H-CDR2 ；

SEQ ID NO.12或13所示的 H-CDR3。

本发明的MMP9抗体IgG可以用于制备检测癌症的药物中的应用。

有益效果:本发明人对已知的MMP9抗体进行了相应的改造，通过了众多的尝试，去掉了不具有功能的改进，获得了15个具有功能的改造后的能够具有更强的结合特性的的免疫球蛋白。

具体实施方式

实施例1 改造的检测癌症的免疫球蛋白的获得

根据CN103140240 B中公开的MMP9抗体IgG的6个CDR序列，根据其方法通过核苷酸合成的方式分别获得相应的抗MMP9抗体IgG的轻链和重链序列，通过本领域常规的蛋白表达方式，获得了相应的抗体，命名为MMP9-1抗体。

根据轻链和重链的6个CDR区域的氨基酸改造，分别获得接近接近40多种不同的抗体变形体，通过活性的筛选，得到了15种抗癌效果较好的抗体类型，其CDR序列分别如下：

MMP9改造的抗体的重链的CDR具有以下氨基酸序列：

CDR1:GFSLLSYGVH(SEQ ID NO :1)或GFSHLSYGVH(SEQ ID NO :2)

CDR2 :VIWTSGTTNYNSALMS(SEQ ID NO :3) 或VHWTGGTTNYNSALMS(SEQ ID NO :4)

CDR3 :YGYGMDY(SEQ ID NO :5) 或YYYGMSY(SEQ ID NO :6)

MMP9改造的抗体的轻链的CDR具有以下氨基酸序列：

CDR1：KAHQDVRNTVA(SEQ ID NO ：7)或 KASQDVGNTVA(SEQ ID NO ：8)

CDR2 : SGSYRNT (SEQ ID NO : 9) 或SSSYRLT (SEQ ID NO : 10)

CDR3 :MQHYITPYT(SEQ ID NO :11)或 QQHYITGYT(SEQ ID NO :12)

其中MMP9-2抗体的6个CDR序列分别为：SEQ ID NO：1、3、6、7、10、12。

其中MMP9-3抗体的6个CDR序列分别为：SEQ ID NO：1、3、6、7、9、11。

其中MMP9-4抗体的6个CDR序列分别为：SEQ ID NO：1、3、6、8、9、12。

其中MMP9-5抗体的6个CDR序列分别为：SEQ ID NO：1、3、6、8、10、12。

其中MMP9-6抗体的6个CDR序列分别为：SEQ ID NO：1、4、5、8、9、11。

其中MMP9-7抗体的6个CDR序列分别为：SEQ ID NO：1、4、6、7、9、12。

其中MMP9-8抗体的6个CDR序列分别为：SEQ ID NO：1、4、6、8、10、11。

其中MMP9-9抗体的6个CDR序列分别为：SEQ ID NO：2、3、5、8、9、11。

其中MMP9-10抗体的6个CDR序列分别为：SEQ ID NO：2、3、5、7、9、10、。

其中MMP9-11抗体的6个CDR序列分别为：SEQ ID NO：2、3、5、8、10、11。

其中MMP9-12抗体的6个CDR序列分别为：SEQ ID NO：2、3、6、8、9、12。

其中MMP9-13抗体的6个CDR序列分别为：SEQ ID NO：2、4、5、7、9、11。

其中MMP9-14抗体的6个CDR序列分别为：SEQ ID NO：2、4、6、7、9、12。

其中MMP9-15抗体的6个CDR序列分别为：SEQ ID NO：2、4、6、8、9、12。

其中MMP9-16抗体的6个CDR序列分别为：SEQ ID NO：2、4、6、8、9、11。

实施例2 具有抗原识别特异性的抗MMP9改造抗体IgG的鉴定

根据CN102827282A中公开的方法，将本发明获得的15种IgG抗体分别与不同的来源的MMP蛋白进行交叉反应实验，其结果表明，本发明改造的抗体，具有极强的特异性和结合特性。说明本发明制备的抗体具有较好的应用前景。（下表中结果为解离常数Kd）

人MMP1

人MMP2

小鼠MMP2

人类MMP3

人类MMP7

人类MMP8

人类MMP9

猕猴MMP9

小鼠MMP9

大鼠MMP9

人类MMP10

人类MMP12

人类MMP13

MMP9-1

>100nM

0.14nM

0.16nM

>100nM

0.35nM

>100nM

MMP9-2

>100nM

0.03nM

>40nM

>100nM

>60nM

>100nM

MMP9-3

>100nM

0.02nM

>40nM

>100nM

>60nM

>100nM

MMP9-4

>100nM

0.03nM

>40nM

>100nM

>60nM

>100nM

MMP9-5

>100nM

0.04nM

>40nM

>100nM

>60nM

>100nM

MMP9-6

>100nM

0.03nM

>40nM

>100nM

>60nM

>100nM

MMP9-7

>100nM

0.02nM

>40nM

>100nM

>60nM

>100nM

MMP9-8

>100nM

0.03nM

>40nM

>100nM

>60nM

>100nM

MMP9-9

>100nM

0.02nM

>40nM

>100nM

>60nM

>100nM

MMP9-10

>100nM

0.03nM

>40nM

>100nM

>60nM

>100nM

MMP9-11

>100nM

0.04nM

>40nM

>100nM

>60nM

>100nM

MMP9-12

>100nM

0.02nM

>40nM

>100nM

>60nM

>100nM

MMP9-13

>100nM

0.03nM

>40nM

>100nM

>60nM

>100nM

MMP9-14

>100nM

0.03nM

>40nM

>100nM

>60nM

>100nM

MMP9-15

>100nM

0.02nM

>40nM

>100nM

>60nM

>100nM

MMP9-16

>100nM

0.04nM

>40nM

>100nM

>60nM

>100nM

从以上结果可以看出，本发明提供的抗体具有较好的结合所述蛋白的效果。而针对其他位点进行的改变，其效果并不突出，或者完全没有结合的作用，在此，申请人不一一列举。

序列表

〈110〉李静

〈120〉一种能够检测癌症的免疫球蛋白

〈210〉1

〈211〉10

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉VH CDR1

GFSLLSYGVH；

〈210〉2

〈211〉 10

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉VH CDR1

GFSHLSYGVH；

〈210〉3

〈211〉 16

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉VH CDR2

VIWTSGTTNYNSALMS；

〈210〉4

〈211〉 16

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉VH CDR2

VHWTGGTTNYNSALMS；

〈210〉5

〈211〉 7

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉VH CDR3

YGYGMDY；

〈210〉6

〈211〉7

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉VH CDR3

YYYGMSY；

〈210〉7

〈211〉11

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉VL CDR1；

KAHQDVRNTVA；

〈210〉8

〈211〉 8

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉VL CDR1

KASQDVGNTVA；

〈210〉9

〈211〉 7

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉VL CDR2

SGSYRNT；

〈210〉10

〈211〉 7

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉VL CDR2

SSSYRLT；

〈210〉11

〈211〉 9

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉VL CDR3

MQHYITPYT；

〈210〉12

〈211〉 9

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉VL CDR3

QQHYITGYT；

Claims

1.一种免疫球蛋白，其特征在于能够特异性结合MMP9蛋白，其中免疫球蛋白的6个CDR序列，按照重链CDR1-CDR3、轻链CDR1-CDR3的顺序提供了(a)-(o)的任意一个形式的免疫球蛋白：

(a)VH CDR1-CDR3：SEQ ID NO：1、3、6，VL CDR1-CDR3：SEQ ID NO：7、10、12；

(b)VH CDR1-CDR3：SEQ ID NO：1、3、6，VL CDR1-CDR3：SEQ ID NO：7、9、11；

(c)VH CDR1-CDR3：SEQ ID NO：1、3、6，VL CDR1-CDR3：SEQ ID NO：8、9、12；

(d)VH CDR1-CDR3：SEQ ID NO：1、3、6，VL CDR1-CDR3：SEQ ID NO：8、10、12；

(e)VH CDR1-CDR3：SEQ ID NO：1、4、5，VL CDR1-CDR3：SEQ ID NO：8、9、11；

(f)VH CDR1-CDR3：SEQ ID NO：1、4、6，VL CDR1-CDR3：SEQ ID NO：7、9、12；

(g)VH CDR1-CDR3：SEQ ID NO：1、4、6，VL CDR1-CDR3：SEQ ID NO：8、10、11；

(h)VH CDR1-CDR3：SEQ ID NO：2、3、5，VL CDR1-CDR3：SEQ ID NO：8、9、11；

(i)VH CDR1-CDR3：SEQ ID NO：2、3、5，VL CDR1-CDR3：SEQ ID NO：7、9、10；

(j)VH CDR1-CDR3：SEQ ID NO：2、3、5，VL CDR1-CDR3：SEQ ID NO：8、10、11；

(k)VH CDR1-CDR3：SEQ ID NO：2、3、6，VL CDR1-CDR3：SEQ ID NO：8、9、12；

(l)VH CDR1-CDR3：SEQ ID NO：2、4、5，VL CDR1-CDR3：SEQ ID NO：7、9、11；

(m)VH CDR1-CDR3：SEQ ID NO：2、4、6，VL CDR1-CDR3：SEQ ID NO：7、9、12；

(n)VH CDR1-CDR3：SEQ ID NO：2、4、6，VL CDR1-CDR3：SEQ ID NO：8、9、12；

(o)VH CDR1-CDR3：SEQ ID NO：2、4、6，VL CDR1-CDR3：SEQ ID NO：8、9、11。

2.权利要求1所述的免疫球蛋白在制备检测癌症的药物中的应用。