CN105037360B - 吡啶酮衍生物及其制备方法和用途 - Google Patents

吡啶酮衍生物及其制备方法和用途 Download PDF

Info

Publication number
CN105037360B
CN105037360B CN201510129984.8A CN201510129984A CN105037360B CN 105037360 B CN105037360 B CN 105037360B CN 201510129984 A CN201510129984 A CN 201510129984A CN 105037360 B CN105037360 B CN 105037360B
Authority
CN
China
Prior art keywords
yuan
substituted
alkyl
unsubstituted
methyl
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201510129984.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN105037360A (zh
Inventor
余洛汀
魏于全
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Apeloa pharmaceutical Limited by Share Ltd
Sichuan University
Original Assignee
Apeloa Pharmaceutical Ltd By Share Ltd
Sichuan University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Apeloa Pharmaceutical Ltd By Share Ltd, Sichuan University filed Critical Apeloa Pharmaceutical Ltd By Share Ltd
Priority to CN201510129984.8A priority Critical patent/CN105037360B/zh
Publication of CN105037360A publication Critical patent/CN105037360A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN105037360B publication Critical patent/CN105037360B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D217/00—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems
    • C07D217/22—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to carbon atoms of the nitrogen-containing ring
    • C07D217/24—Oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/12—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D471/18—Bridged systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/10—Spiro-condensed systems
    • C07D491/113—Spiro-condensed systems with two or more oxygen atoms as ring hetero atoms in the oxygen-containing ring

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明属于化学医药领域，具体涉及吡啶酮衍生物及其制备方法和用途。本发明提供了一种吡啶酮衍生物，其结构如式I所示。本发明还提供了上述吡啶酮衍生物的制备方法及其在制备治疗肿瘤药物中的用途。本发明提供的合成路线较短，反应条件简单，产率高，易衍生，且本发明提供的一系列化合物具有较好的抗肿瘤活性和较低的毒性。本发明为制备抗肿瘤药物提供了新的选择。

Description

吡啶酮衍生物及其制备方法和用途
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及吡啶酮衍生物及其制备方法和用途。
背景技术
表观遗传修饰(epigenetic modification)在包括细胞增殖、分化和细胞存活的许多细胞过程的调节中发挥重要作用。包括在DNA和/或组蛋白甲基化中的整体改变、非编码RNA和核小体重塑失调，其导致肿瘤基因、肿瘤抑制基因和信号通路的异常活化或失活。肿瘤目前仍是当今社会对人类健康和生命危害最大的疾病之一。虽然治疗手段和可用药物越来越多，但这些治疗方法仍然难以解决肿瘤的转移和复发。越来越多的证据表明，对于抗癌治疗的长期有效需要两个或更多的癌基因途经的共同抑制，而采用特异性抑制剂来对癌症表观基因组进行调解可能会直接改变获得性转录抗性机制的有效组合疗法。近些年来，不断有针对表观遗传靶点的小分子化合物经FDA批准上市或进入临床研究阶段，也不断有不同的表观遗传调节子在不断被发现。EZH2为组蛋白甲基转移酶复合物PRC2的重要组成部分，其在弥漫性大B细胞淋巴瘤中突变，导致其能选择性三甲基化H3K27，H3K27me3进而沉默下游基因，包括重要的抑癌基因，myc等，从而促进肿瘤细胞增殖，存活和转移等恶性生物学特性。另外在乳腺癌，结直肠癌，横纹肌瘤等实体瘤中也发现有EZH2的过表达，而这些肿瘤也依赖于EZH2而增殖，存活，这使得EZH2成为治愈肿瘤的潜在靶点。
近年来，研究人员通过对肿瘤细胞表面标记物、增殖能力和致瘤能力等的深入研究，提出了肿瘤干细胞理论(cancer stem-like cells，CSCs)。目前认为肿瘤的发生、治疗抵抗和复发转移皆依赖于肿瘤干细胞的自我更新、多向分化及其高致瘤性。尽管肿瘤干细胞在肿瘤体积中所占的比例还不到5％，其不断的自我更新能力及对放化疗抵抗是肿瘤难以根除的根源所在。目前有文献报道EZH2功能与肿瘤干细胞的自我更新，转移等恶性生物学特性相关，因此开发EZH2选择性抑制剂有望能同时彻底杀死肿瘤干细胞，为彻底治愈肿瘤避免复发带来希望。
因此以EZH2为靶点的靶向小分子抑制剂在多种实体瘤与血液瘤中既能抑制分化细胞的增殖又能彻底杀死肿瘤干细胞，同时有望克服肿瘤获得性耐药，因此开发EZH2抑制剂能避免耐药与复发，从而彻底治愈肿瘤。
发明内容
本发明所要解决的第一个技术问题是提供一类吡啶酮衍生物，结构如式I所示：
其中，X为O或S；
R1、R5、R6、R7独立的为H或C1～C4烷基；
当R2为H或C1～C8烷基时，R3和R4组合形成的环为取代或未取代的C3～C8环烷基、取代或未取代的C5～C10的桥环烷基、取代或未取代的C5～C10的稠环烷基、取代或未取代的C3～C8环烯基、取代或未取代的3～8元饱和杂环烷基、取代或未取代的3～8元不饱和杂环烷基、取代或未取代的5～10元桥环杂环烷基、取代或未取代的C3～C8环酮基、取代或未取代的3～8元饱和杂环酮基、取代或未取代的3～8元不饱和杂环酮基、取代或未取代的5～10元螺环杂环烷基、取代或未取代的C6～C14芳基或C3～C8环烷基稠合C6～C14芳基；
所述取代的C3～C8环烷基、C5～C10的桥环烷基、C5～C10的稠环烷基、C3～C8环烯基、3～8元饱和杂环烷基、3～8元不饱和杂环烷基、C5～C10桥环杂环烷基、C3～C8环酮基、3～8元饱和杂环酮基、3～8元不饱和杂环酮基、5～10元螺环杂环烷基或C6～C14芳基的取代基为-H、卤素、C1～C4烷基、卤素取代的C1～C4烷基、C1～C4烷基取代的氧羰基或C1～C4烷基取代的羰氧基；
所述的3～8元饱和杂环烷基、3～8元不饱和杂环烷基、5～10元桥环杂环烷基、3～8元饱和杂环酮基、3～8元不饱和杂环酮基或5～10元螺环杂环烷基中的杂原子为N、O或S，杂原子个数为1～3个；
或当R4为-H、C1～C4烷基或卤素取代的C1～C4烷基时，R2和R3组合形成的环为取代或未取代的C3～C8环烷基、取代或未取代的C5～C10的桥环烷基、取代或未取代的C5～C10的稠环烷基、取代或未取代的C3～C8环烯基、取代或未取代的3～8元饱和杂环烷基、取代或未取代的3～8元不饱和杂环烷基、取代或未取代的5～10元桥环杂环烷基、取代或未取代的C3～C8环酮基、取代或未取代的3～8元饱和杂环酮基、取代或未取代的3～8元不饱和杂环酮基、取代或未取代的5～10元螺环杂环烷基、取代或未取代的C6～C14芳基或C3～C8环烷基稠合C6～C14芳基；
所述取代的C3～C8环烷基、C5～C10的桥环烷基、C5～C10的稠环烷基、C3～C8环烯基、3～8元饱和杂环烷基、3～8元不饱和杂环烷基、C5～C10桥环杂环烷基、C3～C8环酮基、3～8元饱和杂环酮基、3～8元不饱和杂环酮基、5～10元螺环杂环烷基或C6～C14芳基的取代基为-H、卤素、C1～C4烷基、卤素取代的C1～C4烷基、C1～C4烷基取代的氧羰基或C1～C4烷基取代的羰氧基；
所述的3～8元饱和杂环烷基、3～8元不饱和杂环烷基、5～10元桥环杂环烷基、3～8元饱和杂环酮基、3～8元不饱和杂环酮基或5～10元螺环杂环烷基中的杂原子为N、O或S，杂原子个数为1～3个；
R8为
Y1、Y2独立的为C或N；
R9为-H、卤素、-CN、取代或未取代的C2～C4炔基、取代或未取代的3～8元不饱和杂环烷基、取代或未取代的C6～C14芳基或取代或未取代的5～14元杂芳基；
所述取代的C2～C4炔基、3～8元不饱和杂环烷基、C6～C14芳基或5～14元杂芳基的取代基为3～8元饱和杂环烷基取代的C1～C4烷基、卤素、C1～C4烷基、Cl～C4烷基取代的氨基、-NRaRb、3～8元的饱和杂环烷基取代的羰基或取代或未取代的3～8元的饱和杂环烷基；所述取代的3～8元的饱和杂环烷基的取代基为卤素或Cl～C4烷基；
Ra、Rb独立的为-H或取代或未取代的Cl～C4烷基；所述取代的Cl～C4烷基取代基为-H、-CN、或-NH2；
所述的5～14元杂芳基、3～8元饱和杂环烷基或3～8元不饱和杂环烷基中的杂原子为N、O或S，杂原子个数为1～3个；
R10为-H、卤素或C1～C4烷基；
R11为NR14R15、取代或未取代的吡咯基、取代或未取代的三唑基、取代或未取代的吡唑基或取代或未取代的咪唑基；所述取代的吡咯基、三唑基、吡唑基或咪唑基的取代基为卤素、C1～C4烷基、-ORe、-SRe、-SOORe或-NReRf；Re、Rf独立的为-H或C1～C4烷基；或-NReRf形成取代或未取代的4～6元杂环烷基，杂原子为N，O或S，所述取代的4～6元杂环烷基的取代基为卤素、-OH、酮基、C1～C4的烷基、卤素取代的C1～C6烷基、-CN、-NH2、C1～C4的烷基取代的氨基；
R14为-H或C1～C4的烷基；
R15为取代或未取代的C3～C8环烷基或取代或未取代的3～8元的饱和杂环烷基；所述取代的C3～C8环烷基或3～8元的饱和杂环烷基的取代基为-H或C1～C4烷基；所述的3～8元饱和杂环烷基的杂原子为N、O或S，杂原子个数为1～3个；
X1为C或N；
R12为取代或未取代的C1～C4的烷基、取代或未取代的C3～C8环烷基或取代或未取代的3～8元的饱和杂环烷基；所述取代的C1～C4的烷基、C3～C8环烷基或3～8元的饱和杂环烷基的取代基为-H、卤素、C1～C4烷基、-NH2或-CN；所述的3～8元饱和杂环烷基的杂原子为N、O或S，杂原子个数为1～3个；
R13为-H或C1～C4烷基。
优选的，X为O；
R1、R5、R6、R7独立的为H或C1～C4烷基；
当R2为H或C1～C8烷基时，R3和R4组合形成的环为取代或未取代的C3～C8环烷基、取代或未取代的C5～C10的桥环烷基、取代或未取代的C5～C10的稠环烷基、取代或未取代的C3～C8环烯基、取代或未取代的3～8元饱和杂环烷基、取代或未取代的3～8元不饱和杂环烷基、取代或未取代的5～10元桥环杂环烷基、取代或未取代的C3～C8环酮基、取代或未取代的3～8元饱和杂环酮基、取代或未取代的3～8元不饱和杂环酮基、取代或未取代的5～10元螺环杂环烷基、取代或未取代的C6～C14芳基或C3～C8环烷基稠合C6～C14芳基；
所述取代的C3～C8环烷基、C5～C10的桥环烷基、C5～C10的稠环烷基、C3～C8环烯基、3～8元饱和杂环烷基、3～8元不饱和杂环烷基、C5～C10桥环杂环烷基、C3～C8环酮基、3～8元饱和杂环酮基、3～8元不饱和杂环酮基、5～10元螺环杂环烷基或C6～C14芳基的取代基为-H、卤素、C1～C4烷基、卤素取代的C1～C4烷基、C1～C4烷基取代的氧羰基或C1～C4烷基取代的羰氧基；
所述的3～8元饱和杂环烷基、3～8元不饱和杂环烷基、5～10元桥环杂环烷基、3～8元饱和杂环酮基、3～8元不饱和杂环酮基或5～10元螺环杂环烷基中的杂原子为N、O或S，杂原子个数为1～3个；
R8为
Y1、Y2独立的为C；
R9为-H、卤素、取代或未取代的3～8元不饱和杂环烷基、取代或未取代的C6～C14芳基或取代或未取代的5～14元杂芳基；
所述取代的3～8元不饱和杂环烷基、C6～C14芳基或5～14元杂芳基的取代基为3～8元饱和杂环烷基取代的C1～C4烷基、卤素、C1～C4烷基、Cl～C4烷基取代的氨基或取代或未取代的3～8元的饱和杂环烷基；所述取代的3～8元的饱和杂环烷基的取代基为卤素或Cl～C4烷基；
所述的5～14元杂芳基、3～8元饱和杂环烷基或3～8元不饱和杂环烷基中的杂原子为N、O或S，杂原子个数为1～3个；
R10为-H、卤素或C1～C4烷基；
R11为NR14R15；
R14为-H或C1～C4的烷基；
R15为取代或未取代的C3～C8环烷基或取代或未取代的3～8元的饱和杂环烷基；所述取代的C3～C8环烷基或3～8元的饱和杂环烷基的取代基为-H或C1～C4烷基；所述的3～8元饱和杂环烷基的杂原子为N、O或S，杂原子个数为1～3个；
X1为C或N；
R12为取代或未取代的C1～C4的烷基或取代或未取代的C3～C8环烷基取代；所述取代的C1～C4的烷基、C3～C8环烷基的取代基为-H、卤素、C1～C4烷基、-NH2或-CN；
R13为-H或C1～C4烷基。
进一步优选的，X为O；
R1、R5、R6、R7独立的为H、甲基、乙基或丙基；
当R2为H或C1～C4烷基时，R3和R4组合形成的环为取代或未取代的C5～C8环烷基、取代或未取代的C5～C8的桥环烷基、取代或未取代的C5～C8的稠环烷基、取代或未取代的5～6元饱和杂环烷基、取代或未取代的5～8元桥环杂环烷基、取代或未取代的5～10元螺环杂环烷基或C5～C6环烷基稠合C6～C10芳基；
所述取代的C5～C8环烷基、C5～C8的桥环烷基、C5～C8的稠环烷基、5～6元饱和杂环烷基、5～8元桥环杂环烷基或5～10元螺环杂环烷基的取代基为-H或C1～C4烷基；
所述的5～6桥环杂环烷基、5～6元饱和杂环烷基或5～10元螺环杂环烷基中的杂原子为N或O，杂原子个数为1～3个；
R8为
Y1、Y2独立的为C；
R9为-H、-F、-Cl、-Br、取代或未取代的5～6元不饱和杂环烷基、取代或未取代的苯基或取代或未取代的5～6元杂芳基；
所述取代的5～6元不饱和杂环烷基、苯基或5～6元杂芳基的取代基为5～6元饱和杂环烷基取代的C1～C4烷基、-F、-Cl、-Br、C1～C4烷基或取代或未取代的5～6元的饱和杂环烷基；所述取代的5～6元的饱和杂环烷基的取代基为Cl～C4烷基；
所述的5～6元杂芳基、5～6元饱和杂环烷基或5～6元不饱和杂环烷基中的杂原子为N或O，杂原子个数为1～3个；
R10为-H、甲基、乙基、丙基或异丙基；
R11为NR14R15；
R14为-H或C1～C4的烷基；
R15为C5～C6环烷基或5～6元的饱和杂环烷基；所述5～6元饱和杂环烷基中的杂原子为N或O，杂原子个数为1个；
X1为C或N；
R12为C1～C4的烷基或C5～C6环烷基；
R13为-H或C1～C4烷基。
最优选的，X为O；
R1、R5、R6、R7独立的为H；
当R2为H、甲基或乙基时，R3和R4组合形成的环为取代或未取代的C5～C8环烷基、或取代或未取代的5～6元饱和杂环烷基；所述取代的C5～C8环烷基或5～6元饱和杂环烷基的取代基为-H或C1～C4烷基；所述的5～6元饱和杂环烷基中的杂原子为N或O，杂原子个数为1～2个；
R8为
Y1、Y2独立的为C；
R9为-H、-F、-Cl、-Br、取代或未取代的5～6元不饱和杂环烷基、取代或未取代的苯基或取代或未取代的5～6元杂芳基；所述取代5～6元不饱和杂环烷基、苯基或5～6元杂芳基的取代基为-Cl、C1～C4烷基、所述的5～6元不饱和杂环烷基或5～6元杂芳基中的杂原子为N，杂原子个数为1～3个；
R10为-H、甲基、乙基、丙基或异丙基；
R11为NR14R15；
R14为-H、甲基或乙基；
R15为C4～C6环烷基或5～6元的饱和杂环烷基；所述的5～6元的饱和杂环烷基的杂原子为N或O，个数为1个；
X1为C或N；
R12为
R13为-H、甲基、乙基或丙基。
上述吡啶酮衍生物，当R8为R11为NR14R15，R10为甲基时，其结构如式ⅡA所示：
其中，R2为H或C1～C8烷基，R3和R4组合形成的环为取代或未取代的C3～C8环烷基、取代或未取代的C5～C10的桥环烷基、取代或未取代的C5～C10的稠环烷基、取代或未取代的C3～C8环烯基、取代或未取代的3～8元饱和杂环烷基、取代或未取代的3～8元不饱和杂环烷基、取代或未取代的5～10元桥环杂环烷基、取代或未取代的C3～C8环酮基、取代或未取代的3～8元饱和杂环酮基、取代或未取代的3～8元不饱和杂环酮基、取代或未取代的5～10元螺环杂环烷基、取代或未取代的C6～C14芳基或C3～C8环烷基稠合C6～C14芳基；
R3和R4组合形成的环为取代或未取代的C3～C8环烷基、取代或未取代的C5～C10的桥环烷基、取代或未取代的C5～C10的稠环烷基、取代或未取代的C3～C8环烯基、取代或未取代的3～8元饱和杂环烷基、取代或未取代的3～8元不饱和杂环烷基、取代或未取代的5～10元桥环杂环烷基、取代或未取代的C3～C8环酮基、取代或未取代的3～8元饱和杂环酮基、取代或未取代的3～8元不饱和杂环酮基、取代或未取代的5～10元螺环杂环烷基、取代或未取代的C6～C14芳基或C3～C8环烷基稠合C6～C14芳基；
所述取代的C3～C8环烷基、C5～C10的桥环烷基、C5～C10的稠环烷基、C3～C8环烯基、3～8元饱和杂环烷基、3～8元不饱和杂环烷基、C5～C10桥环杂环烷基、C3～C8环酮基、3～8元饱和杂环酮基、3～8元不饱和杂环酮基、5～10元螺环杂环烷基或C6～C14芳基的取代基为-H、卤素、C1～C4烷基、卤素取代的C1～C4烷基、C1～C4烷基取代的氧羰基或C1～C4烷基取代的羰氧基；
所述的3～8元饱和杂环烷基、3～8元不饱和杂环烷基、5～10元桥环杂环烷基、3～8元饱和杂环酮基、3～8元不饱和杂环酮基或5～10元螺环杂环烷基中的杂原子为N、O或S，杂原子个数为1～3个；
R9为-H、卤素、-CN、取代或未取代的C2～C4炔基、取代或未取代的3～8元不饱和杂环烷基、取代或未取代的C6～C14芳基或取代或未取代的5～14元杂芳基；
所述取代的C2～C4炔基、3～8元不饱和杂环烷基、C6～C14芳基或5～14元杂芳基的取代基为3～8元饱和杂环烷基取代的C1～C4烷基、卤素、C1～C4烷基、Cl～C4烷基取代的氨基、-NRaRb、3～8元的饱和杂环烷基取代的羰基或取代或未取代的3～8元的饱和杂环烷基；所述取代的3～8元的饱和杂环烷基的取代基为卤素或Cl～C4烷基；
Ra、Rb独立的为-H或取代或未取代的Cl～C4烷基；所述取代的Cl～C4烷基取代基为-H、-CN、或-NH2；
所述的5～14元杂芳基、3～8元饱和杂环烷基或3～8元不饱和杂环烷基中的杂原子为N、O或S，杂原子个数为1～3个；
R14为-H或C1～C4的烷基；
R15为取代或未取代的C3～C8环烷基或取代或未取代的3～8元的饱和杂环烷基；所述取代的C3～C8环烷基或3～8元的饱和杂环烷基的取代基为-H或C1～C4烷基；所述的3～8元饱和杂环烷基的杂原子为N、O或S，杂原子个数为1～3个。
优选的，R2为H或C1～C4烷基，R3和R4组合形成的环为取代或未取代的C5～C8环烷基、取代或未取代的C5～C8的桥环烷基、取代或未取代的C5～C8的稠环烷基、取代或未取代的5～6元饱和杂环烷基、取代或未取代的5～8元桥环杂环烷基、取代或未取代的5～10元螺环杂环烷基或C5～C6环烷基稠合C6～C10芳基；
所述取代的C5～C8环烷基、C5～C8的桥环烷基、C5～C8的稠环烷基、5～6元饱和杂环烷基、5～8元桥环杂环烷基、C5～C6元环酮基或5～10元螺环杂环烷基的取代基为-H或C1～C4烷基；
所述的5～6桥环杂环烷基、5～6元饱和杂环烷基或5～10元螺环杂环烷基中的杂原子为N或O，杂原子个数为1～3个；
R9为-H、-F、-Cl、-Br、取代或未取代的5～6元不饱和杂环烷基、取代或未取代的苯基或取代或未取代的5～6元杂芳基；
所述取代的5～6元不饱和杂环烷基、苯基或5～6元杂芳基的取代基为5～6元饱和杂环烷基取代的C1～C4烷基、-F、-Cl、-Br、C1～C4烷基或取代或未取代的5～6元的饱和杂环烷基；所述取代的5～6元的饱和杂环烷基的取代基为Cl～C4烷基；
所述的5～6元杂芳基、5～6元饱和杂环烷基或5～6元不饱和杂环烷基中的杂原子为N或O，杂原子个数为1～3个；
R14为-H或C1～C4的烷基；
R15为C5～C6环烷基或5～6元的饱和杂环烷基；所述5～6元饱和杂环烷基中的杂原子为N或O，杂原子个数为1个。
进一步优选的，R2为H、甲基或乙基，R3和R4组合形成的环为取代或未取代的C5～C8环烷基、或取代或未取代的5～6元饱和杂环烷基；
所述取代的C5～C8环烷基或5～6元饱和杂环烷基的取代基为-H或C1～C4烷基；所述的5～6元饱和杂环烷基中的杂原子为N或O，杂原子个数为1～2个；
R9为-H、-F、-Cl、-Br、取代或未取代的5～6元不饱和杂环烷基、取代或未取代的苯基或取代或未取代的5～6元杂芳基；所述取代5～6元不饱和杂环烷基、苯基或5～6元杂芳基的取代基为-Cl、C1～C4烷基、所述的5～6元不饱和杂环烷基或5～6元杂芳基中的杂原子为N，杂原子个数为1～3个；
R14为-H、甲基或乙基；
R15为C4～C6环烷基或5～6元的饱和杂环烷基；所述的5～6元的饱和杂环烷基的杂原子为N或O，个数为1个。
更进一步优选的，
R9选自-H、-Br、对氯苯基、苯基、
R14为氢、甲基、乙基或丙基；
R15为环戊基、环己基或
上述式ⅡA所示的吡啶酮衍生物，其结构式如下：
上述吡啶酮衍生物，当R8为X1为N时，其结构为式ⅡE所示：
R2为H或C1～C8烷基，R3和R4组合形成的环为取代或未取代的C3～C8环烷基、取代或未取代的C5～C10的桥环烷基、取代或未取代的C5～C10的稠环烷基、取代或未取代的C3～C8环烯基、取代或未取代的3～8元饱和杂环烷基、取代或未取代的3～8元不饱和杂环烷基、取代或未取代的5～10元桥环杂环烷基、取代或未取代的C3～C8环酮基、取代或未取代的3～8元饱和杂环酮基、取代或未取代的3～8元不饱和杂环酮基、取代或未取代的5～10元螺环杂环烷基、取代或未取代的C6～C14芳基或C3～C8环烷基稠合C6～C14芳基；
所述取代的C3～C8环烷基、C5～C10的桥环烷基、C5～C10的稠环烷基、C3～C8环烯基、3～8元饱和杂环烷基、3～8元不饱和杂环烷基、C5～C10桥环杂环烷基、C3～C8环酮基、3～8元饱和杂环酮基、3～8元不饱和杂环酮基、5～10元螺环杂环烷基或C6～C14芳基的取代基为-H、卤素、C1～C4烷基、卤素取代的C1～C4烷基、C1～C4烷基取代的氧羰基或C1～C4烷基取代的羰氧基；
所述的3～8元饱和杂环烷基、3～8元不饱和杂环烷基、5～10元桥环杂环烷基、3～8元饱和杂环酮基、3～8元不饱和杂环酮基或5～10元螺环杂环烷基中的杂原子为N、O或S，杂原子个数为1～3个；
R9为-H、卤素、-CN、取代或未取代的C2～C4炔基、取代或未取代的3～8元不饱和杂环烷基、取代或未取代的C6～C14芳基或取代或未取代的5～14元杂芳基；
所述取代的C2～C4炔基、3～8元不饱和杂环烷基、C6～C14芳基或5～14元杂芳基的取代基为83～8元饱和杂环烷基取代的C1～C4烷基、卤素、C1～C4烷基、Cl～C4烷基取代的氨基、-NRaRb、3～8元的饱和杂环烷基取代的羰基或取代或未取代的3～8元的饱和杂环烷基；所述取代的3～8元的饱和杂环烷基的取代基为卤素或Cl～C4烷基；
Ra、Rb独立的为-H或取代或未取代的Cl～C4烷基；所述取代的Cl～C4烷基取代基为-H、-CN、或-NH2；
所述的5～14元杂芳基、3～8元饱和杂环烷基或3～8元不饱和杂环烷基中的杂原子为N、O或S，杂原子个数为1～3个；
R12为取代或未取代的C1～C4的烷基、取代或未取代的C3～C8环烷基或取代或未取代的3～8元的饱和杂环烷基；所述取代的C1～C4的烷基、C3～C8环烷基或3～8元的饱和杂环烷基的取代基为-H、卤素、C1～C4烷基、-NH2或-CN；所述的3～8元饱和杂环烷基的杂原子为N、O或S，杂原子个数为1～3个。
优选的，R2为H或C1～C4烷基，R3和R4组合形成的环为取代或未取代的C5～C8环烷基、取代或未取代的C5～C8的桥环烷基、取代或未取代的C5～C8的稠环烷基、取代或未取代的5～6元饱和杂环烷基、取代或未取代的5～8元桥环杂环烷基、取代或未取代的5～10元螺环杂环烷基或C5～C6环烷基稠合C6～C10芳基；
所述取代的C5～C8环烷基、C5～C8的桥环烷基、C5～C8的稠环烷基、5～6元饱和杂环烷基、5～8元桥环杂环烷基或5～10元螺环杂环烷基的取代基为-H或C1～C4烷基；
所述的5～6桥环杂环烷基、5～6元饱和杂环烷基或5～10元螺环杂环烷基中的杂原子为N或O，杂原子个数为1～3个；
R9为-H、-F、-Cl、-Br、取代或未取代的5～6元不饱和杂环烷基、取代或未取代的苯基或取代或未取代的5～6元杂芳基；
所述取代的5～6元不饱和杂环烷基、苯基或5～6元杂芳基的取代基为5～6元饱和杂环烷基取代的C1～C4烷基、-F、-Cl、-Br、C1～C4烷基或取代或未取代的5～6元的饱和杂环烷基；所述取代的5～6元的饱和杂环烷基的取代基为Cl～C4烷基；
所述的5～6元杂芳基、5～6元饱和杂环烷基或5～6元不饱和杂环烷基中的杂原子为N或O，杂原子个数为1～3个；
R12为R12为C1～C4的烷基或C5～C6环烷基。
进一步优选的，R2为H、甲基或乙基，R3和R4组合形成的环为取代或未取代的C5～C8环烷基；
R9为-H、-F、-Cl、-Br、或取代或未取代的苯基；所述取代苯基的取代基为
R12为
上述式ⅡE所示的吡啶酮衍生物，其结构式如下：
上述吡啶酮衍生物，当R8为R13为甲基，X1为C时，结构式如式ⅡG所示：
R2为H或C1～C8烷基，R3和R4组合形成的环为取代或未取代的C3～C8环烷基、取代或未取代的C5～C10的桥环烷基、取代或未取代的C5～C10的稠环烷基、取代或未取代的C3～C8环烯基、取代或未取代的3～8元饱和杂环烷基、取代或未取代的3～8元不饱和杂环烷基、取代或未取代的5～10元桥环杂环烷基、取代或未取代的C3～C8环酮基、取代或未取代的3～8元饱和杂环酮基、取代或未取代的3～8元不饱和杂环酮基、取代或未取代的5～10元螺环杂环烷基、取代或未取代的C6～C14芳基或C3～C8环烷基稠合C6～C14芳基；
所述取代的C3～C8环烷基、C5～C10的桥环烷基、C5～C10的稠环烷基、C3～C8环烯基、3～8元饱和杂环烷基、3～8元不饱和杂环烷基、C5～C10桥环杂环烷基、C3～C8环酮基、3～8元饱和杂环酮基、3～8元不饱和杂环酮基、5～10元螺环杂环烷基或C6～C14芳基的取代基为-H、卤素、C1～C4烷基、卤素取代的C1～C4烷基、C1～C4烷基取代的氧羰基或C1～C4烷基取代的羰氧基；
所述的3～8元饱和杂环烷基、3～8元不饱和杂环烷基、5～10元桥环杂环烷基、3～8元饱和杂环酮基、3～8元不饱和杂环酮基或5～10元螺环杂环烷基中的杂原子为N、O或S，杂原子个数为1～3个；
R9为-H、卤素、-CN、取代或未取代的C2～C4炔基、取代或未取代的3～8元不饱和杂环烷基、取代或未取代的C6～C14芳基或取代或未取代的5～14元杂芳基；
所述取代的C2～C4炔基、3～8元不饱和杂环烷基、C6～C14芳基或5～14元杂芳基的取代基为3～8元饱和杂环烷基取代的C1～C4烷基、卤素、C1～C4烷基、Cl～C4烷基取代的氨基、-NRaRb、3～8元的饱和杂环烷基取代的羰基或取代或未取代的3～8元的饱和杂环烷基；所述取代的3～8元的饱和杂环烷基的取代基为卤素或Cl～C4烷基；
Ra、Rb独立的为-H或取代或未取代的Cl～C4烷基；所述取代的Cl～C4烷基取代基为-H、-CN、或-NH2；
所述的5～14元杂芳基、3～8元饱和杂环烷基或3～8元不饱和杂环烷基中的杂原子为N、O或S，杂原子个数为1～3个；
R12为取代或未取代的C1～C4的烷基、取代或未取代的C3～C8环烷基或取代或未取代的3～8元的饱和杂环烷基；所述取代的C1～C4的烷基、C3～C8环烷基或3～8元的饱和杂环烷基的取代基为-H、卤素、C1～C4烷基、-NH2或-CN；所述的3～8元饱和杂环烷基的杂原子为N、O或S，杂原子个数为1～3个。
优选的，R2为H或C1～C4烷基，R3和R4组合形成的环为取代或未取代的C5～C8环烷基、取代或未取代的C5～C8的桥环烷基、取代或未取代的C5～C8的稠环烷基、取代或未取代的5～6元饱和杂环烷基、取代或未取代的5～8元桥环杂环烷基、取代或未取代的5～10元螺环杂环烷基或C5～C6环烷基稠合C6～C10芳基；
所述取代的C5～C8环烷基、C5～C8的桥环烷基、C5～C8的稠环烷基、5～6元饱和杂环烷基、5～8元桥环杂环烷基或5～10元螺环杂环烷基的取代基为-H或C1～C4烷基；
所述的5～6桥环杂环烷基、5～6元饱和杂环烷基或5～10元螺环杂环烷基中的杂原子为N或O，杂原子个数为1～3个；
R9为-H、-F、-Cl、-Br、取代或未取代的5～6元不饱和杂环烷基、取代或未取代的苯基或取代或未取代的5～6元杂芳基；
所述取代的5～6元不饱和杂环烷基、苯基或5～6元杂芳基的取代基为5～6元饱和杂环烷基取代的C1～C4烷基、-F、-Cl、-Br、C1～C4烷基或取代或未取代的5～6元的饱和杂环烷基；所述取代的5～6元的饱和杂环烷基的取代基为Cl～C4烷基；
所述的5～6元杂芳基、5～6元饱和杂环烷基或5～6元不饱和杂环烷基中的杂原子为N或O，杂原子个数为1～3个；
R12为R12为C1～C4的烷基或C5～C6环烷基。
进一步优选的，R2为H、甲基或乙基，R3和R4组合形成的环为取代或未取代的C5～C8环烷基；
R9为-H、-F、-Cl、-Br、或取代或未取代的苯基；所述取代苯基的取代基为
R12为
上述式ⅡG所示的吡啶酮衍生物，其结构式如下：
上述吡啶酮衍生物，当R8为R13为-H，X1为C时，其结构如式ⅡH所示：
R2为H或C1～C8烷基，R3和R4组合形成的环为取代或未取代的C3～C8环烷基、取代或未取代的C5～C10的桥环烷基、取代或未取代的C5～C10的稠环烷基、取代或未取代的C3～C8环烯基、取代或未取代的3～8元饱和杂环烷基、取代或未取代的3～8元不饱和杂环烷基、取代或未取代的5～10元桥环杂环烷基、取代或未取代的C3～C8环酮基、取代或未取代的3～8元饱和杂环酮基、取代或未取代的3～8元不饱和杂环酮基、取代或未取代的5～10元螺环杂环烷基、取代或未取代的C6～C14芳基或C3～C8环烷基稠合C6～C14芳基；
所述取代的C3～C8环烷基、C5～C10的桥环烷基、C5～C10的稠环烷基、C3～C8环烯基、3～8元饱和杂环烷基、3～8元不饱和杂环烷基、C5～C10桥环杂环烷基、C3～C8环酮基、3～8元饱和杂环酮基、3～8元不饱和杂环酮基、5～10元螺环杂环烷基或C6～C14芳基的取代基为-H、卤素、C1～C4烷基、卤素取代的C1～C4烷基、C1～C4烷基取代的氧羰基或C1～C4烷基取代的羰氧基；
所述的3～8元饱和杂环烷基、3～8元不饱和杂环烷基、5～10元桥环杂环烷基、3～8元饱和杂环酮基、3～8元不饱和杂环酮基或5～10元螺环杂环烷基中的杂原子为N、O或S，杂原子个数为1～3个；
R9为-H、卤素、-CN、取代或未取代的C2～C4炔基、取代或未取代的3～8元不饱和杂环烷基、取代或未取代的C6～C14芳基或取代或未取代的5～14元杂芳基；
所述取代的C2～C4炔基、3～8元不饱和杂环烷基、C6～C14芳基或5～14元杂芳基的取代基为3～8元饱和杂环烷基取代的C1～C4烷基、卤素、C1～C4烷基、Cl～C4烷基取代的氨基、-NRaRb、3～8元的饱和杂环烷基取代的羰基或取代或未取代的3～8元的饱和杂环烷基；所述取代的3～8元的饱和杂环烷基的取代基为卤素或Cl～C4烷基；
Ra、Rb独立的为-H或取代或未取代的Cl～C4烷基；所述取代的Cl～C4烷基取代基为-H、-CN、或-NH2；
所述的5～14元杂芳基、3～8元饱和杂环烷基或3～8元不饱和杂环烷基中的杂原子为N、O或S，杂原子个数为1～3个；
R12为取代或未取代的C1～C4的烷基、取代或未取代的C3～C8环烷基或取代或未取代的3～8元的饱和杂环烷基；所述取代的C1～C4的烷基、C3～C8环烷基或3～8元的饱和杂环烷基的取代基为-H、卤素、C1～C4烷基、-NH2或-CN；所述的3～8元饱和杂环烷基的杂原子为N、O或S，杂原子个数为1～3个。
优选的，R2为H或C1～C4烷基，R3和R4组合形成的环为取代或未取代的C5～C8环烷基、取代或未取代的C5～C8的桥环烷基、取代或未取代的C5～C8的稠环烷基、取代或未取代的5～6元饱和杂环烷基、取代或未取代的5～8元桥环杂环烷基、取代或未取代的5～10元螺环杂环烷基或C5～C6环烷基稠合C6～C10芳基；
所述取代的C5～C8环烷基、C5～C8的桥环烷基、C5～C8的稠环烷基、5～6元饱和杂环烷基、5～8元桥环杂环烷基或5～10元螺环杂环烷基的取代基为-H或C1～C4烷基；
所述的5～6桥环杂环烷基、5～6元饱和杂环烷基或5～10元螺环杂环烷基中的杂原子为N或O，杂原子个数为1～3个；
R9为-H、-F、-Cl、-Br、取代或未取代的5～6元不饱和杂环烷基、取代或未取代的苯基或取代或未取代的5～6元杂芳基；
所述取代的5～6元不饱和杂环烷基、苯基或5～6元杂芳基的取代基为5～6元饱和杂环烷基取代的C1～C4烷基、-F、-Cl、-Br、C1～C4烷基或取代或未取代的5～6元的饱和杂环烷基；所述取代的5～6元的饱和杂环烷基的取代基为Cl～C4烷基；
所述的5～6元杂芳基、5～6元饱和杂环烷基或5～6元不饱和杂环烷基中的杂原子为N或O，杂原子个数为1～3个；
R12为R12为C1～C4的烷基或C5～C6环烷基。
进一步优选的，R2为H、甲基或乙基，R3和R4组合形成的环为取代或未取代的C5～C8环烷基；
R9为-H、-F、-Cl、-Br、或取代或未取代的苯基；所述取代苯基的取代基为
R12为
上述式ⅡH所示的吡啶酮衍生物，其结构式为：
本发明所要解决的第二个技术问题是提供上述吡啶酮衍生物的制备方法。
制备ⅡA的路线如下：
1)A与a在碱性条件下进行烷基化反应得到B；所述的碱为三乙酰氧基硼氢化钠、氢氧化钠或氢化钠中的任意一种；溶剂为二氯乙烷、三氯甲烷或二氯甲烷中的任意一种；温度为15～30℃；
2)B与b在碱性条件下进行烷基化反应得到C；所述的碱为三乙酰氧基硼氢化钠、氢氧化钠或氢化钠中的任意一种；溶剂为二氯乙烷、三氯甲烷或二氯甲烷中的任意一种；温度为15～30℃；
3)将C在碱的醇水溶液中水解得到D；所述的碱为碳酸钠、氢氧化钠或氢氧化钾中任意一种；温度为15～60℃；
4)利用偶联剂将D偶联至E上制备得到F；所述的偶联剂为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐、N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑或1-羟基苯并三唑中任意一种；溶剂为二甲亚砜、N，N-二甲基甲酰胺、四氢呋喃或二氯甲烷中任意一种；温度为15～30℃。
5)在钯介导的硼酸或硼酸酯与F偶联得到G；所述的钯为([1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物、醋酸钯或四(三苯基磷)钯)中任意一种；溶剂为二氧六环和水的混合溶液，比例5︰1～1︰1；
制备ⅡE、ⅡG、ⅡH的路线如下：
1)H与R12-X在碱性条件下进行烷基化反应得到I；所述的碱为氢化钠；温度为15～60℃；
2)将I在碱的醇水溶液中水解得到J；温度为15～60℃；
3)利用偶联剂将J偶联至E上制备得到K；所述的偶联剂为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐、N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑或1-羟基苯并三唑中任意一种；温度15～30℃；
4)在钯介导的硼酸或硼酸酯与K偶联得到L；所述的钯为([1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物、醋酸钯或四(三苯基磷)钯)中任意一种；溶剂为二氧六环和水的混合溶液，比例5︰1～1︰1；
本发明所要解决的第三个技术问题是提供上述式I所示的吡啶酮衍生物在制备抗肿瘤药物或自身免疫疾病药物中的用途。
上述用途中，所述的肿瘤为脑癌、成胶质细胞瘤、白血病、淋巴瘤、Bannayan-Zonana综合征、考登病、Lhermitte-Duclos病、乳腺癌、炎性乳腺癌、维尔姆斯瘤、尤因肉瘤、横纹肌肉瘤、室管膜瘤、成神经管细胞瘤、结肠癌、胃癌、膀肤癌、头颈癌、肾癌、肺癌、肝癌、黑素瘤、肾脏癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肉瘤、骨肉瘤、骨巨细胞瘤或甲状腺癌。
上述用途中，所述的自身免疫性疾病为银屑病或红斑狼疮。
本发明所要解决的第四个技术问题是提供一种药物组合物，是由上述式I所示的吡啶酮衍生物添加药学上可以接受的辅助性成分制备而成的。该药物组合物可用于制备抗肿瘤药物或自身免疫疾病药物。
本发明的吡啶酮衍生物是在大量筛选的基础上得到的新化合物，具有抑制EZH2活性，为抗肿瘤和自身免疫性疾病的药物开发和应用提供了新的选择。
附图说明
图1化合物A-2对人胃癌原代肿瘤干细胞的抑制成球实验。
图2化合物A-25对弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞株pfeiffer和弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞株SU-DHL-6两种肿瘤细胞株的H3K27me3表达量的影响。化合物A-25对Pfeiffer和SU-DHL-6细胞中的H3K27me3的减少呈现剂量和时间依赖性(a)Pfeiffer细胞分别用0.625μM，1.25μM，2.5μM，5μM和10μM的化合物A-25处理4天，然后检测H3K27me3的水平(b)5μM的化合物A-25处理Pfeiffer细胞分别达到2-6天，然后检测H3K27me3的水平(c)SU-DHL-6细胞分别用0.625μM，1.25μM，2.5μM，5μM和10μM的化合物A-25处理4天，然后检测H3K27me3，H3K27me2和EZH2的水平。
图3化合物A-29对乳腺癌细胞株MCF-7和乳腺癌细胞株MDA-MB-231两种肿瘤细胞株的H3K27me3表达量的影响。化合物A-29对MCF-7和MDA-MB-231细胞中的H3K27me3的减少呈现剂量和时间依赖性。
图4化合物A-25对SU-DHL-6的细胞周期的影响。化合物A-25对EZH2突变的SU-DHL-6细胞引起了G0/G1期阻滞。SU-DHL-6细胞分别用0.625μM，1.25μM，2.5μM，5μM和10μM的化合物A-25处理14天，然后通过流式细胞术检测细胞周期的变化。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步的阐述。实施例仅用于说明本发明，而不是以任何方式来限制本发明。
实施例1 5-(乙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-4-甲基-N-((1-甲基-3-氧-3,5,6,7-四氢-2H-环戊[c]吡啶-4-基)甲基)-4'-(吗啉甲基)联苯-3-甲酰胺(化合物A-1)的制备
步骤1 2-甲基-3-硝基-5-溴苯甲酸
将N-溴代丁二酰亚胺(15g，84.3mmol)加入到2-甲基-3-硝基-苯甲酸(15g，82.8mmol)的浓硫酸溶液中(60ml)，然后反应液室温搅拌过夜。当反应完成后，将反应液缓慢倾入冰水中(400ml)。将析出物抽滤，并真空干燥，得到预期产物2-甲基-3-硝基-5-溴苯甲酸21g，产率为98％。
步骤2 5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯
将2-甲基-3-硝基-5-溴苯甲酸(16g，61.5mmol)溶于DMF(160ml)溶液中，然后向其中加入碘甲烷(35.7g，248mmol)和碳酸钠(26.3g，248mmol)。反应液60℃搅拌8h。当反应完成后，反应体系过滤以除去无机盐，抽滤的盐用乙酸乙酯洗涤。合并滤液后真空浓缩，加入乙酸乙酯稀释后，用5％的碳酸氢钠水溶液(700ml)洗涤，然后用5M的盐酸溶液(300ml)洗涤。有机相经食盐水洗涤后，用无水硫酸钠干燥，真空浓缩得到5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯16g，产率为94％。
步骤3 2-甲基-3-氨基-5-溴苯甲酸甲酯
将5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯(17g，62mmol)置于乙醇(150ml)和水(75ml)的混合溶液中，然后加入氯化铵(17g，318mmol)，随后加入铁粉(27.8g，498mmol)。反应液90℃搅拌1h。当反应完成后，反应液抽滤，将滤液真空浓缩后，加入饱和的碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥后，真空浓缩，得到2-甲基-3-氨基-5-溴苯甲酸甲酯15g，产率为99％。
步骤4 5-溴-2-甲基-3-((四氢-2H-吡喃)氨基)-苯甲酸甲酯
将2-甲基-3-氨基-5-溴苯甲酸甲酯(1.5g，6.15mmol)和四氢吡喃酮(0.92g，9.2mmol)溶于二氯甲烷(30ml)，向其中加入醋酸(2.2g，36.9mmol)，反应液室温搅拌15分钟，然后将反应液冷却到0℃，加入三乙酰氧基硼氢化钠(3.9g，18.4mmol)。反应液室温搅拌过夜。当反应完毕后，饱和的碳酸氢钠溶液加入调节pH至7～8。有机层分离，水相用乙酸乙酯萃取。合并有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩。采用流动相为二氯甲烷︰甲醇＝40︰1的柱层析条件提纯得到产物1.4g，产率为69％。
步骤5 5-溴-2-甲基-3-(乙基(四氢-2H-吡喃)氨基)-苯甲酸
将5-溴-2-甲基-3-((四氢-2H-吡喃)氨基)-苯甲酸甲酯(1.4g，4.27mmol)溶于氯仿(30ml)，加入乙醛(0.375g，8.52mmol)和醋酸(1.53g，25.6mmol)。反应液室温搅拌15分钟。将反应体系冷却到0℃，加入三乙酰氧基硼氢化钠(2.7g，12.8mmol)。反应液室温搅拌过夜。当反应完成后，用饱和的碳酸氢钠水溶解调节pH至7～8，有机层分离，水相用乙酸乙酯萃取。合并有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩。采用流动相为二氯甲烷︰甲醇＝40︰1的柱层析条件提纯得到产物5-溴-2-甲基-3-(乙基(四氢-2H-吡喃)氨基)-苯甲酸甲酯1.4g，产率93％。
将5-溴-2-甲基-3-(乙基(四氢-2H-吡喃)氨基)-苯甲酸甲酯(1.4g，3.94mmol)溶于乙醇(25ml)中，向其中加入氢氧化钠水溶液(0.24g，6mmol，25ml水)，反应液60℃搅拌1h。当反应完成后，溶液减压浓缩，加入50ml水，搅拌下，加入1N稀盐酸调节pH至没有固体析出，将固体抽滤，干燥，得到产品1.4g，产率为100％。
步骤6
将2-乙酰环戊酮(1.26g，10mmol)、氰基乙酰胺(8.4g，10mmol)和三乙烯二胺六水合物(2.2g，10mmol)加入到无水乙醇中，90℃搅拌8h，停止反应，降至室温后，将析出物抽滤，并用乙醇或甲醇或乙酸乙酯重结晶。
步骤7
将上步产物(1.74g，10mmol)置于四氢呋喃溶液中，冰浴0℃下，加入硼氢化钠(0.87g，23mmol)和碘(2.53g，10mmol)，继续搅拌15分钟，撤去冰浴，缓慢升温至72℃搅拌过夜。停止反应，冰浴下，滴加3N的盐酸(1ml)，真空浓缩反应液。加水搅拌，抽滤，将滤饼干燥，得到产物的盐酸盐，直接用于下一步，无需纯化。
步骤8
在二甲亚砜溶液中，将适量的上步产物与5-溴-2-甲基-3-(乙基(四氢-2H-吡喃)氨基)-苯甲酸(342mg，1mmol)混合，随后加入HOAT(272mg，2mmol)和EDCI(382mg，2mmol)，室温搅拌过夜，加水，抽滤得滤饼，采用流动相为二氯甲烷︰甲醇＝40︰1的柱层析条件提纯得到产物。
步骤9
将上步产物(502mg，1.0mmol)，4-(4-吗啉甲基)苯硼酸频哪酯(330mg，1.1mmol)，[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(40mg，0.05mmol)加入到圆底烧瓶中，随后加入二氧六环(5ml)和3.6N的碳酸钠水溶液(1ml)，氮气置换三次，100℃加热4小时，加水，乙酸乙酯萃取，有机层合并后采用流动相为二氯甲烷︰甲醇＝40︰1的柱层析条件提纯得到产物。产率：78％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.28(s,1H),8.29(s,1H),7.58(s,2H),7.39(s,3H),7.23(s,1H),4.23(m,2H),3.83(m,2H),3.56(m,6H),3.25(s,2H),3.01(m,3H),2.86(s,2H),2.58(m,
4H),2.36(s,3H),2.25(s,3H),2.09(s,2H),1.93(s,2H),1.65(m,2H),1.54(m,2H),0.83(s,3H)。MS-ESI(m/s):599.4(M+1)。
实施例2 5-(乙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-4-甲基-N-((1-甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢喹啉-4-基)甲基)-4'-(吗啉甲基)联苯-3-甲酰胺(化合物A-2)的制备
步骤1
将2-乙酰环己酮(1.4g，10mmol)、氰基乙酰胺(8.4g，10mmol)和三乙烯二胺六水合物(2.2g，10mmol)加入到无水乙醇中，90℃搅拌8h，停止反应，降至室温后，将析出物抽滤，并用乙醇或甲醇或乙酸乙酯重结晶。
步骤2
将上步产物(1.88g，10mmol)置于四氢呋喃溶液中，冰浴0℃下，加入硼氢化钠(0.87g，23mmol)和碘(2.53g，10mmol)，继续搅拌15分钟，撤去冰浴，缓慢升温至72℃搅拌过夜。停止反应，冰浴下，滴加3N的盐酸(1ml)。真空浓缩反应液，加水搅拌，抽滤，将滤饼干燥，得到产物的盐酸盐，直接用于下一步，无需纯化。
步骤3
在二甲亚砜溶液中，将适量的上步产物与5-溴-2-甲基-3-(乙基(四氢-2H-吡喃)氨基)-苯甲酸(342mg，1mmol)混合，随后加入HOAT(272mg，2mmol)和EDCI(382mg，2mmol)，室温搅拌过夜，加水，抽滤得滤饼，采用流动相为二氯甲烷︰甲醇＝40︰1的柱层析条件提纯得到产物。
步骤4
将上步产物(516mg，1.0mmol)，4-(4-吗啉甲基)苯硼酸频哪酯(330mg，1.1mmol)，[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(40mg，0.05mmol)加入到圆底烧瓶中，随后加入5ml二氧六环和1ml 3.6N的碳酸钠水溶液，氮气置换三次，100℃加热4小时，加水，乙酸乙酯萃取，有机层合并后采用流动相为二氯甲烷︰甲醇＝40︰1的柱层析条件提纯得到产物，产率:85％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.50(s,1H),8.17(s,1H),7.58(d,J＝6.8Hz,2H),7.38(m,3H),7.22(s,1H),4.32(s,2H),3.83(d,J＝9.6Hz,2H),3.58(s,4H),3.49(s,2H),3.25(t,J＝10.9Hz,2H),3.08(m,2H),3.02(m,1H),2.75(s,2H),2.37(s,6H),2.25(s,3H),2.10(s,3H),1.65(s,6H),1.53(m,2H),0.84(s,3H)。ESI-MS m/z 613.2(M+H)+。
实施例3 5-(乙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-4-甲基-N-((1-甲基-3-氧-3,5,6,7,8,9-六氢-2H-环庚[c]吡啶-4-基)甲基)-4'-(吗啉甲基)联苯-3-甲酰胺(化合物A-3)的制备
步骤1
在-78℃下，将环庚酮(2.25g，20mmol)的THF溶液缓慢滴加到二异丙基氨基锂(2N的THF溶液)(20ml，40mmol)的THF溶液中，维持-78℃继续搅拌1h，然后缓慢滴加预先冷却的乙酰氯(1.7ml，24mmol)的THF溶液，滴加完毕，继续搅拌1h。当反应完成后，在-78℃下加适量的饱和氯化铵溶液淬灭反应液。反应液用乙酸乙酯萃取，有机层合并后用硫酸镁干燥，过滤，真空浓缩，得到液体粗产品。无需进一步纯化，直接用于下一步。
步骤2
将上一步产物、氰基乙酰胺(8.4g，10mmol)和三乙烯二胺六水合物(2.2g，10mmol)加入到无水乙醇中，90℃搅拌8h，停止反应，降至室温后，将析出物抽滤，并用乙醇或甲醇或乙酸乙酯重结晶。
步骤3
将上步产物(2.02g，10mmol)置于四氢呋喃溶液中，冰浴0℃下，加入硼氢化钠(0.87g，23mmol)和碘(2.53g，10mmol)，继续搅拌15分钟，撤去冰浴，缓慢升温至72℃搅拌过夜。停止反应，冰浴下，滴加3N的盐酸(1ml)。真空浓缩反应液，加水搅拌，抽滤，将滤饼干燥，得到产物的盐酸盐，直接用于下一步，无需纯化。
步骤4
在二甲亚砜溶液中，将适量的上步产物与5-溴-2-甲基-3-(乙基(四氢-2H-吡喃)氨基)-苯甲酸(342mg，1mmol)混合，随后加入HOAT(272mg，2mmol)和EDCI(382mg，2mmol)，室温搅拌过夜，加水，抽滤得滤饼，采用流动相为二氯甲烷︰甲醇＝40︰1的柱层析条件提纯得到产物。
步骤5
将上步产物(530mg，1.0mmol)，4-(4-吗啉甲基)苯硼酸频哪酯(330mg，1.1mmol)，[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(40mg，0.05mmol)加入到圆底烧瓶中，随后加入5ml二氧六环和1ml 3.6N的碳酸钠水溶液，氮气置换三次，100℃加热4小时，加水，乙酸乙酯萃取，有机层合并后采用流动相为二氯甲烷︰甲醇＝40︰1的柱层析条件提纯得到产物，产率:74％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.40(s,1H),8.19(s,1H),7.58(d,J＝7.7Hz,2H),7.39(d,J＝4.0Hz,2H),7.36(s,1H),7.22(s,1H),4.38(d,J＝4.0Hz,2H),3.83(d,J＝10.6Hz,2H),3.58(s,4H),3.48(s,2H),3.25(t,J＝11.2Hz,2H),3.16(m,2H),3.02(m,1H),2.65(d,J＝9.4Hz,2H),2.36(s,4H),2.26(s,3H),2.19(s,3H),1.74(s,2H),1.67(m,2H),1.53(m,4H),1.45(s,2H),1.24(s,2H),0.83(t,J＝6.9Hz,3H)。ESI-MS m/z 627.2(M+H)+。
实施例4 5-(乙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-4-甲基-N-((1-甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8,9,10-八氢环辛[c]吡啶-4-基)甲基)-4'-(吗啉甲基)联苯-3-甲酰胺(化合物A-4)的制备
以环辛酮为原料，经过与合成化合物A-1类似的反应，得到目标化合物。最后一步产率:84％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.35(s,1H),8.18(t,J＝4.8Hz,1H),7.57(d,J＝8.0Hz,2H),7.39(d,J＝4.4Hz,2H),7.36(s,1H),7.21(s,1H),4.37(d,J＝4.6Hz,2H),3.83(d,J＝10.4Hz,2H),3.57(s,4H),3.48(s,2H),3.25(t,J＝11.3Hz,1H),3.08(m,2H),3.02(m,1H),2.60(m,2H),2.36(s,4H),2.24(s,3H),2.21(s,3H),1.66(m,2H),1.58(s,2H),1.54(d,J＝8.0Hz,2H),1.39(s,2H),1.27(s,2H),0.83(t,J＝6.8Hz,3H)。ESI-MS m/z 641.2(M+H)+。
实施例5 N-((1,7-二甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢异喹啉-4-基)甲基)-5-(乙基(四氢-2H-呋喃-4-基)氨基)-4-甲基-4'-(吗啉甲基)联苯-3-甲酰胺(化合物A-5)的制备
以4-甲基环己酮为原料，经过与合成化合物A-1类似的反应，得到目标化合物，产率79％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.49(s,1H),8.16(t,J＝4.4Hz,1H),7.57(d,J＝8.0Hz,2H),7.45–7.26(m,1H),7.21(s,1H),4.31(t,J＝4.0Hz,2H),3.83(d,J＝10.2Hz,2H),3.64–3.53(m,4H),3.48(s,2H),3.25(t,J＝11.2Hz,2H),3.14–3.04(m,2H),3.04–2.87(m,1H),2.61(m,2H),2.36(s,4H),2.25(s,3H),2.10(s,3H),1.90(m,1H),1.80(m,1H),1.66(m,4H),1.52(m,2H),1.19(m,1H),1.01(d,J＝6.4Hz,3H),0.83(t,J＝6.8Hz,3H)。ESI-MS m/z627.2(M+H)+。
实施例6 5-(乙基(四氢-2H-呋喃-4-基)氨基)-N-((7-乙基-1-甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢异喹啉-4-基)甲基-4-甲基-4'-(吗啉甲基)联苯-3-甲酰胺(化合物A-6)的制备
以4-乙基环己酮为原料，经过与合成化合物A-1类似的反应，得到目标化合物，产率74％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.49(s,1H),8.16(s,1H),7.57(s,1H),7.38(s,2H),7.21(s,1H),4.31(s,2H),3.83(s,2H),3.57(s,4H),3.48(s,4H),3.25(s,2H),3.08(s,2H),2.93(m,1H),2.56(s,4H),2.36(s,3H),2.25(s,3H),2.11(s,2H),1.88(m,2H),1.65(m,2H),1.53(m,2H),1.34(m,2H),1.14(m,1H),0.93(s,3H),0.83(s,3H)。ESI-MS m/z 641.2(M+H)+。
实施例7 N-((7-叔丁基-1-甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢异喹啉-4-基)甲基)-5-(乙基(四氢-2H-呋喃-4-基)氨基)-4-甲基-4'-(吗啉甲基)联苯-3-甲酰胺(化合物A-7)的制备
以4-叔丁基环己酮为原料，经过与合成化合物A-1类似的反应，得到目标化合物，产率67％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.49(s,1H),8.16(t,J＝4.4Hz,1H),7.57(d,J＝8.0Hz,2H),7.45–7.26(m,1H),7.21(s,1H),4.31(t,J＝4.0Hz,2H),3.83(d,J＝10.2Hz,2H),3.64–3.53(m,4H),3.48(s,2H),3.25(t,J＝11.2Hz,2H),3.14–3.04(m,2H),3.04–2.87(m,1H),2.61(m,2H),2.36(s,4H),2.25(s,3H),2.10(s,3H),1.90(m,1H),1.80(m,1H),1.66(m,4H),1.52(m,2H),1.19(m,1H),1.01(s,9H),0.83(t,J＝6.8Hz,3H)。ESI-MS m/z 669.2(M+H)+。
实施例8 N-((1，7，7-三甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢异喹啉-4-基)甲基)-5-(乙基(四氢-2H-呋喃-4-基)氨基)-4-甲基-4'-(吗啉甲基)联苯-3-甲酰胺
以4，4-二甲基环己酮为原料，经过与合成化合物A-1类似的反应，得到目标化合物，总产率69％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.51(s,1H),8.21(s,1H),7.57(s,2H),7.45–7.26(m,1H),7.21(s,1H),4.31(t,J＝4.0Hz,2H),3.83(d,J＝10.2Hz,2H),3.64–3.53(m,4H),3.48(s,2H),3.25(t,J＝11.2Hz,2H),3.14–3.04(m,2H),3.04–2.87(m,1H),2.61(m,2H),2.36(s,4H),2.25(s,3H),2.10(s,3H),1.90(m,1H),1.80(m,1H),1.66(m,4H),1.52(m,2H),1.19(m,1H),1.1(s,6H),0.83(t,J＝6.8Hz,3H)。ESI-MS m/z 641.2(M+H)+。
实施例9 N-((1，6-二甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢异喹啉-4-基)甲基)-5-(乙基(四氢-2H-呋喃-4-基)氨基)-4-甲基-4'-(吗啉甲基)联苯-3-甲酰胺
以3-甲基环己酮为原料，经过与合成化合物A-1类似的反应，得到目标化合物，产率80％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.49(s,1H),8.15(t,J＝4.8Hz,1H),7.54(m,2H),7.48–7.30(m,3H),7.22(s,1H),4.33(d,J＝4.8Hz,2H),3.83(d,J＝10.0Hz,2H),3.70–3.53(m,4H),3.48(s,2H),3.25(t,J＝11.2Hz,2H),3.09(m,2H),3.04–2.90(m,2H),2.36(s,6H),2.25(s,3H),2.10(s,3H),1.81(m,1H),1.66(m,3H),1.52(m,2H),1.21(m,2H),1.01(d,J＝6.4Hz,3H),0.83(t,J＝6.8Hz,3H)。ESI-MS m/z 627.2(M+H)+。
实施例10 N-((2-氧-2,3,5,6,7、-四氢苯[f]异喹啉-1-基)甲基)-5-(乙基(四氢-2H-呋喃-4-基)氨基)-4-甲基-4'-(吗啉甲基)联苯-3-甲酰胺
以2-乙酰-3,4-二氢萘-1(2H)-酮为原料，经过与合成化合物A-1类似的反应，得到目标化合物，产率74％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.65(s,1H),8.33(s,1H),7.92(s,1H),7.58(d,J＝7.6Hz,3H),7.46(t,J＝8.0Hz,3H),7.30(s,3H),7.25(s,1H),4.47(d,J＝4.0Hz,2H),3.83(d,J＝10.0Hz,2H),3.57(s,4H),3.48(s,2H),3.25(t,J＝11.3Hz,2H),3.09(d,J＝6.7Hz,2H),3.02(m,1H),2.80(m,2H),2.64(m,2H),2.36(s,4H),2.28(s,6H),1.66(m,2H),1.53(m,2H),1.09(t,J＝7.0Hz,3H),0.83(t,J＝6.6Hz,3H)。ESI-MS m/z 661.2(M+H)+。
实施例11 N-((1,7-二甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢-2,7-萘啶-4-基)甲基)-5-(乙基(四氢-2H吡喃-4-基)氨基)-4-甲基-4'-(吗啉甲基)联苯-3-甲酰胺(化合物A-11)的制备
以4-N-甲基环己酮为原料，经过与合成化合物A-1类似的反应，得到目标化合物，产率83％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.50(s,1H),8.17(s,1H),7.58(d,J＝6.8Hz,2H),7.38(m,3H),7.22(s,1H),4.32(s,2H),3.83(d,J＝9.6Hz,2H),3.58(s,4H),3.49(s,2H),3.25(t,J＝10.9Hz,2H),3.08(m,2H),3.02(m,1H),2.75(s,2H),2.37(s,6H),2.25(s,3H),2.10(s,3H),1.65(s,6H),1.53(m,3H),0.84(s,3H)。ESI-MS m/z 628.2(M+H)+。
实施例12 N-((1,-甲基-3-氧-吡啶酮并金刚烷)甲基)-5-(乙基(四氢-2H吡喃-4-基)氨基)-4-甲基-4'-(吗啉甲基)联苯-3-甲酰胺(化合物A-12)的制备
以金刚烷酮为原料，经过与合成化合物A-1类似的反应，得到目标化合物，产率81％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.35(s,1H),8.18(t,J＝4.8Hz,1H),7.57(d,J＝8.0Hz,2H),7.39(d,J＝4.4Hz,2H),7.36(s,1H),7.21(s,1H),4.37(d,J＝4.6Hz,2H),3.83(d,J＝10.4Hz,2H),3.57(s,4H),3.48(s,2H),3.25(t,J＝11.3Hz,1H),3.08(m,2H),3.02(m,1H),2.60(m,2H),2.36(s,4H),2.24(s,3H),2.21(s,3H),1.66(m,2H),1.54(d,J＝8.0Hz,2H),1.39(s,2H),1.27(s,2H),0.83(t,J＝6.8Hz,3H)。ESI-MS m/z 639.2(M+H)+。
实施例13 5-(乙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-4-甲基-N-((1-甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢-2,7-萘啶-4-基)甲基)-4'-(吗啉甲基)联苯-3-甲酰胺(化合物A-13)的制备
以N-Boc哌啶酮为原料，经过与合成化合物A-1类似的反应，得到目标化合物，产率81％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.48(s,1H),8.17(s,1H),7.58(d,J＝6.8Hz,2H),7.38(m,3H),7.22(s,1H),5.53(s,1H),4.32(s,2H),3.83(d,J＝9.6Hz,2H),3.58(s,4H),3.49(s,2H),3.25(t,J＝10.9Hz,2H),3.08(m,2H),3.02(m,1H),2.75(s,2H),2.37(s,6H),2.25(s,3H),2.10(s,3H),1.65(s,6H),0.84(s,3H)。ESI-MS m/z 614.2(M+H)+。
实施例14 5-(乙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-4-甲基-N-((1'-甲基-3'-氧-3',5',6',8'-四氢-2'H-螺[[1,3]二氧-2,7'-异喹啉]-4'-(吗啉甲基)联苯-3-甲酰胺(化合物A-14)的制备
以4-缩乙二醇环己酮为原料，经过与合成化合物A-1类似的反应，得到目标化合物，产率71％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.45(s,1H),8.16(t,J＝4.4Hz,1H),7.57(d,J＝8.0Hz,2H),7.45–7.26(m,1H),7.21(s,1H),4.31(t,J＝4.0Hz,2H),3.83(d,J＝10.2Hz,2H),3.64–3.53(m,4H),3.48(s,2H),3.25(t,J＝11.2Hz,2H),3.14–3.04(m,2H),3.04–2.87(m,1H),2.61(m,2H),2.36(s,4H),2.25(s,3H),2.10(s,3H),1.90(m,1H),1.80(m,1H),1.66(m,4H),1.52(m,5H),1.19(m,1H),0.83(t,J＝6.8Hz,3H)。ESI-MS m/z 671.2(M+H)+。
实施例15 5-(乙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-4-甲基-N-((1-乙基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢喹啉-4-基)甲基)-4'-(吗啉甲基)联苯-3-甲酰胺(化合物A-15)的制备
经过与合成化合物A-3类似的反应，只是将第一步的原料替换丙酸酐，得到目标化合物，产率63％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.50(s,1H),8.17(s,1H),7.58(d,J＝6.8Hz,2H),7.38(m,3H),7.22(s,1H),4.32(s,2H),3.83(d,J＝9.6Hz,2H),3.58(s,4H),3.49(s,2H),3.25(t,J＝10.9Hz,2H),3.08(m,2H),3.02(m,1H),2.75(s,2H),2.73(s,2H),2.37(s,6H),2.25(s,3H),2.10(s,3H),1.65(s,6H),1.53(m,2H),0.84(s,3H)。ESI-MS m/z 627.2(M+H)+。
实施例16 5-(乙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-4-甲基-N-((1-甲基-3-氧-吡啶酮并奎宁)甲基)-4'-(吗啉甲基)联苯-3-甲酰胺(化合物A-16)的制备
以奎宁酮为原料，经过与合成化合物A-2类似的反应，得到目标化合物，产率73％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.35(s,1H),8.18(t,J＝4.8Hz,1H),7.57(d,J＝8.0Hz,2H),7.39(d,J＝4.4Hz,2H),7.36(s,1H),7.21(s,1H),4.37(d,J＝4.6Hz,2H),3.83(d,J＝10.4Hz,2H),3.57(s,4H),3.48(s,2H),3.25(t,J＝11.3Hz,1H),3.08(m,2H),3.02(m,1H),2.60(m,2H),2.36(s,4H),2.24(s,3H),2.21(s,3H),1.66(m,1H),1.54(d,J＝8.0Hz,2H),1.39(s,2H),1.27(s,2H),0.83(t,J＝6.8Hz,3H)。ESI-MS m/z 640.2(M+H)+。
实施例17 5-(乙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-4-甲基-N-((3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢喹啉-4-基)甲基)-4'-(吗啉甲基)联苯-3-甲酰胺(化合物A-17)的制备
经过与合成化合物A-3类似的反应，只是将第一步的原料替换为甲醛，得到目标化合物，产率73％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.48(s,1H),8.17(s,1H),7.58(d,J＝6.8Hz,2H),7.38(m,3H),7.22(s,1H),4.32(s,2H),3.83(d,J＝9.6Hz,2H),3.58(s,4H),3.49(s,2H),3.25(t,J＝10.9Hz,2H),3.08(m,2H),3.02(m,1H),2.75(s,2H),2.73(s,2H),2.37(s,6H),2.25(s,3H),2.10(s,3H),1.65(s,6H)。ESI-MS m/z 599.2(M+H)+。
实施例18 5-溴-3-(乙基(四氢-2H-呋喃-4-基)氨基)-2-甲基-N-((1-甲基-3-2,3,5,6,7,8-六氢异喹啉-4-基)甲基)苯酰胺
经过与合成化合物A-2类似的反应，只是不进行最后一步反应，得到目标化合物，产率74％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.38(s,1H),8.24(s,1H),7.31(s,1H),7.09(s,1H),4.33(d,J＝4.6Hz,2H),3.83(d,J＝10.0Hz,2H),3.24(t,J＝10.8Hz,2H),3.09–2.97(m,2H),2.97–2.83(m,1H),2.72(s,2H),2.38(s,2H),2.15(s,3H),2.09(s,3H),1.59(m,6H),1.51(m,2H),0.79(t,J＝6.8Hz,2H)。ESI-MS m/z 516.1(M+H)+。
实施例19 5-(乙基(四氢-2H-呋喃-4-基)氨基)-4-甲基-N-((1-甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢异喹啉-4-基)甲基)联苯-3-甲酰胺
经过与合成化合物A-2类似的反应，只是将最后一步反应原料替换为苯硼酸，得到目标化合物，产率77％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ13.30(s,1H),7.46(d,J＝6.6Hz,2H),7.36–7.21(m,5H),4.57(s,2H),3.94(d,J＝10.2Hz,2H),3.31(t,J＝9.6Hz,2H),3.10(d,J＝6.4Hz,2H),3.02(m,1H),2.95(s,2H),2.30(s,2H),1.97(s,3H),1.71(m,7H),1.26(s,4H),0.89(t,J＝6.4Hz,3H)。ESI-MS m/z 514.2(M+H)+。
实施例20 4'-氯-5-(乙基(四氢-2H-呋喃-4-基)氨基)-4-甲基-N-((1-甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢异喹啉-4-基)甲基)联苯-3-甲酰胺
经过与合成化合物A-2类似的反应，只是将最后一步反应原料替换为对氯苯硼酸，得到目标化合物，产率80％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.59(s,1H),8.19(s,1H),7.66(s,2H),7.49(d,J＝5.3Hz,2H),7.42(s,1H),7.25(s,1H),4.33(s,2H),3.82(s,2H),3.25(s,2H),3.05(m,3H),2.75(s,2H),2.37(s,2H),2.27(s,3H),2.10(s,3H),1.64(s,6H),1.53(m,2H),0.83(s,3H)。ESI-MS m/z 548.2(M+H)+。
实施例21 4'-三氟甲基-5-(乙基(四氢-2H-呋喃-4-基)氨基)-4-甲基-N-((1-甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢异喹啉-4-基)甲基)联苯-3-甲酰胺
经过与合成化合物A-2类似的反应，只是将最后一步反应原料替换为对三氟甲基苯硼酸，得到目标化合物，产率64％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.48(s,2H),8.19(s,1H),7.86(m,2H),7.80(m,2H),7.48(s,1H),7.30(s,1H),4.32(s,2H),3.84(d,J＝7.5Hz,2H),3.26(m,2H),3.11(m,2H),3.03(m,1H),2.75(s,2H),2.38(s,2H),2.27(s,3H),2.10(s,3H),1.65(s,6H),1.53(m,2H),0.84(s,3H)。ESI-MS m/z 582.2(M+H)+。
实施例22 4'-甲氧基-5-(乙基(四氢-2H-呋喃-4-基)氨基)-4-甲基-N-((1-甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢异喹啉-4-基)甲基)联苯-3-甲酰胺
经过与合成化合物A-2类似的反应，只是将最后一步反应原料替换为对甲氧基苯硼酸，得到目标化合物，产率77％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.55(s,1H),8.15(t,J＝4.8Hz,1H),7.55(d,J＝8.8Hz,2H),7.35(s,1H),7.18(s,1H),7.00(d,J＝8.8Hz,2H),4.32(d,J＝4.4Hz,2H),3.82(d,J＝10.8Hz,2H),3.78(s,3H),3.24(t,J＝11.2Hz,2H),3.07(m,2H),3.00(m,1H),2.74(s,2H),2.37(s,2H),2.23(s,3H),2.10(s,3H),1.64(s,6H),1.53(m,2H),0.83(t,J＝6.8Hz,3H)。ESI-MS m/z 555.2(M+H)+。
实施例23 5-(乙基(四氢-2H-呋喃-4-基)氨基)-4-甲基-N-((1-甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢异喹啉-4-基)甲基)-4'-吗啉联苯-3-甲酰胺
经过与合成化合物A-2类似的反应，只是将最后一步反应原料替换为4-吗啉苯硼酸，得到目标化合物，产率87％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.49(s,1H),8.12(t,J＝4.6Hz,1H),7.49(d,J＝8.0Hz,2H),7.34(s,1H),7.16(s,1H),7.01(d,J＝8.4Hz,2H),4.31(d,J＝4.4Hz,2H),3.83(d,J＝10.8Hz,2H),3.79–3.68(m,4H),3.25(t,J＝11.2Hz,2H),3.13(m,4H),3.08(m,2H),3.05(s,1H),2.74(s,2H),2.38(s,2H),2.22(s,3H),2.10(s,3H),1.64(m,6H),1.52(m,2H),0.83(t,J＝6.8Hz,3H)。ESI-MS m/z 599.0(M+H)+。
实施例24 5-(乙基(四氢-2H-呋喃-4-基)氨基)-4-甲基-N-((1-甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢异喹啉-4-基)甲基)-3'-吗啉联苯-3-甲酰胺
经过与合成化合物A-2类似的反应，只是将最后一步反应原料替换为3-吗啉苯硼酸，得到目标化合物，产率70％。
1H NMR(400MHz，DMSO)δ11.47(s，1H)，8.13(t，1H)，7.36(s，1H)，7.30(t，J＝8.0Hz1H),7.20(s,1H),7.09(s,1H),7.02(d,J＝8.0Hz,1H),6.94(d,J＝8.0Hz,1H),4.32(d,J＝4.0Hz,2H),3.83(d,J＝12.0Hz,2H),3.76(s,4H),3.25(t,J＝12.0Hz,2H),3.17(m,4H),3.12–3.05(m,1H),3.02(m,1H),2.75(s,2H),2.38(s,2H),2.24(s,3H),2.10(s,3H),1.64(m,6H),1.59–1.43(m,2H),0.83(t,J＝6.8Hz,3H)。ESI-MS m/z 599.0(M+H)+。
实施例25 5-(乙基(四氢-2H-呋喃-4-基)氨基)-4-甲基-N-((1-甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢异喹啉-4-基)甲基)-4'-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)联苯-3-甲酰胺
经过与合成化合物A-2类似的反应，只是将最后一步反应原料替换为4'-(4-甲基哌嗪-1-基)甲基-苯硼酸，得到目标化合物，产率72％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.49(s,1H),8.15(s,1H),7.56(d,J＝8.0Hz,2H),7.48–7.28(m,3H),7.22(s,1H),4.32(s,2H),3.83(d,J＝8.4Hz,2H),3.47(s,2H),3.27(m,6H),3.09(m,3H),2.75(s,2H),2.37(s,6H),2.25(s,3H),2.17(s,3H),2.10(s,3H),1.65(m,6H),1.53(m,2H),0.83(s,3H)。ESI-MS m/z 626.2(M+H)+。
实施例26 3-(乙基(四氢-2H-呋喃-4-基)氨基)-2-甲基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-N-((1-甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢异喹啉-4-基)甲基)甲酰胺
经过与合成化合物A-2类似的反应，只是将最后一步反应原料替换为吡唑硼酸，得到目标化合物，产率60％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.53(s,1H),7.65(s,1H),7.51(s,1H),7.36(s,1H),7.20(s,1H),7.17(s,1H),4.58(d,J＝5.2Hz,2H),3.94(d,J＝10.4Hz,2H),3.86(s,3H),3.31(t,J＝10.0Hz,2H),3.07(d,J＝6.8Hz,2H),2.95(m,3H),2.38(s,2H),2.32(s,3H),2.10(s,3H),1.73(m,4H),0.87(t,J＝6.8Hz,3H)。ESI-MS m/z 518.1(M+H)+。
实施例27 3-(乙基(四氢-2H-呋喃-4-基)氨基)-5-(6-氟吡啶-3-基)-2-甲基-N-((1-甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢异喹啉-4-基)甲基)甲酰胺
经过与合成化合物A-2类似的反应，只是将最后一步反应原料替换为2-氟吡啶-5-硼酸，得到目标化合物，产率85％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.51(s,1H),8.53(s,1H),8.27(t,J＝7.2Hz,1H),8.18(s,1H),7.48(s,1H),7.28(s,1H),7.26(s,1H),4.32(d,J＝4.0Hz,2H),3.83(d,J＝10.5Hz,2H),3.25(t,J＝11.2Hz,2H),3.10(d,J＝6.4Hz,2H),3.03(m,1H),2.75(s,2H),2.37(s,2H),2.21(s,3H),2.10(s,3H),1.64(s,6H),1.52(m,2H),0.82(t,J＝6.4Hz,3H)。ESI-MS m/z 533.0(M+H)+。
实施例28 3-(乙基(四氢-2H-呋喃-4-基)氨基)-5-(6-氯吡啶-3-基)-2-甲基-N-((1-甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢异喹啉-4-基)甲基)甲酰胺
经过与合成化合物A-2类似的反应，只是将最后一步反应原料替换为2-氯吡啶-5-硼酸，得到目标化合物，产率72％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.48(s,1H),8.71(d,J＝2.4Hz,1H),8.34–7.91(m,2H),7.58(d,J＝8.4Hz,1H),7.50(s,1H),7.30(s,1H),4.32(d,J＝4.8Hz,2H),3.83(d,J＝9.6Hz,2H),3.25(t,J＝11.2Hz,2H),3.15–3.06(m,2H),3.03(m,1H),2.75(s,2H),2.38(s,2H),2.27(s,3H),2.10(s,3H),1.66(m,6H),1.57–1.44(m,2H),0.82(t,J＝6.8Hz,3H)。ESI-MS m/z 549.2(M+H)+。
实施例29 3-(乙基(四氢-2H-呋喃-4-基)氨基)-5-(6-氯吡啶-3-基)-2-甲基-N-((1-甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢异喹啉-4-基)甲基)甲酰胺
经过与合成化合物A-2类似的反应，只是将最后一步反应原料替换为2'-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-苯硼酸，得到目标化合物，产率82％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.48(s,1H),8.39(d,J＝2.4Hz,1H),8.12(t,J＝4.8Hz,1H),7.75(m,1H),7.36(s,1H),7.17(s,1H),6.89(d,J＝8.8Hz,1H),4.31(d,J＝4.8Hz,2H),3.83(d,J＝10.2Hz,2H),3.52(s,4H),3.25(t,J＝11.2Hz,2H),3.08(m,2H),3.00(m,1H),2.71(s,2H),2.41(m,8H),2.23(s,3H),2.11(s,3H),1.64(s,7H),1.51(m,2H),0.82(t,J＝6.8Hz,3H)。ESI-MS m/z 613.2(M+H)+。
实施例30 N-((1,7-二甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢异喹啉-4-基)甲基)-5-(乙基(四氢-2H-呋喃-4-基)氨基)-4-甲基-4'-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)联苯-3-甲酰胺
经过与合成化合物A-5类似的反应，只是将最后一步反应原料替换为4'-(4-甲基哌嗪-1-基)甲基-苯硼酸，得到目标化合物，产率70％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.94(s,1H),7.44(m,3H),7.32(m,3H),7.28(s,1H),4.65(m,1H),4.52(m,1H),3.95(d,J＝11.2Hz,2H),3.33(t,J＝10.2Hz,2H),3.20(m,1H),3.11(m,2H),3.05–2.92(m,1H),2.86–2.71(m,2H),2.58(s,6H),2.35(d,J＝8.8Hz,6H),2.04(s,3H),1.95–1.85(m,2H),1.79–1.61(m,6H),1.37–1.17(m,2H),1.07(d,J＝6.4Hz,3H),0.90(t,J＝6.8Hz,3H)。ESI-MS m/z 640.2(M+H)+。
实施例31 N-((1,7-二甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢异喹啉-4-基)甲基)-3-(乙基(四氢-2H-呋喃-4-基)氨基)-2-甲基-5-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)苯酰胺
经过与合成化合物A-5类似的反应，只是将最后一步反应原料替换为2'-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-苯硼酸，得到目标化合物，产率82％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.54(s,1H),8.39(s,1H),8.15(s,1H),7.80(d,J＝8.6Hz,1H),7.36(s,1H),7.17(s,1H),6.89(d,J＝8.6Hz,1H),4.31(s,2H),3.83(d,J＝9.6Hz,2H),3.51(s,4H),3.25(t,J＝11.2Hz,2H),3.08(m,2H),3.03–2.85(m,2H),2.59(m,2H),2.40(s,4H),2.22(s,3H),2.21(s,3H),2.11(s,3H),1.98–1.84(m,1H),1.79(m,1H),1.66(m,3H),1.51(m,2H),1.21(m,3H),1.03(m,3H),0.82(s,3H)。ESI-MS m/z 627.2(M+H)+。
实施例32 5-(环戊基(乙基)氨基)-N-((1,7-二甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢异喹啉-4-基)甲基)-4-甲基-4'-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)联苯-3-甲酰胺
经过与合成化合物A-5类似的反应，只是将反应原料替换为环戊酮和4'-(4-甲基哌嗪-1-基)甲基-苯硼酸，得到目标化合物，产率74％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.47(s,1H),8.17(s,1H),7.55(s,2H),7.38(m,3H),7.21(s,1H),4.31(s,2H),3.56(s,2H),3.46(s,2H),3.17(s,1H),3.01(s,2H),2.93(s,1H),2.62(s,2H),2.51(s,4H),2.31(s,2H),2.25(s,3H),2.14(s,3H),2.10(s,3H),1.88(m,2H),1.69(s,2H),1.60(s,2H),1.49(s,2H),1.37(s,2H),1.23(s,2H),1.01(s,3H),0.82(s,3H)。ESI-MS m/z 624.2(M+H)+。
实施例33 3-(环戊基(乙基)氨基)-N-((1,7-二甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢异喹啉-4-基)甲基)-2-甲基-5-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)哌嗪-3-基)苯酰胺
经过与合成化合物A-5类似的反应，只是将反应原料替换为环戊酮和2'-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-苯硼酸，得到目标化合物，产率79％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.45(s,1H),8.39(s,1H),8.14(s,1H),7.80(d,J＝8.0Hz,1H),7.37(s,1H),7.15(s,1H),6.90(d,J＝8.8Hz,1H),4.3(s,2H),3.51(s,4H),3.05–2.95(m,2H),2.92(m,2H),2.62(m,2H),2.40(s,4H),2.22(d,J＝3.6Hz,6H),2.10(s,3H),1.96–1.84(m,1H),1.79(m,1H),1.69(m,4H),1.49(s,2H),1.36(s,2H),1.21(m,2H),1.01(d,J＝6.4Hz,3H),0.81(t,J＝6.8Hz,3H)。ESI-MS m/z 611.2(M+H)+。
实施例34 5-(环己基(乙基)氨基)-N-((1,7-二甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢异喹啉-4-基)甲基)-4-甲基-4'-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)联苯-3-甲酰胺
经过与合成化合物A-5类似的反应，只是将反应原料替换为环己酮和4'-(4-甲基哌嗪-1-基)甲基-苯硼酸，得到目标化合物，产率78％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.44(s,1H),8.18(s,1H),7.55(d,J＝7.2Hz,2H),7.35(m,3H),7.16(s,1H),4.31(s,2H),3.46(s,2H),3.10(m,2H),2.95(m,1H),2.79–2.60(m,2H),2.33(s,6H),2.22(s,3H),2.12(s,3H),2.11(s,3H),1.99–1.84(m,1H),1.76(m,2H),1.68(m,2H),1.54(s,1H),1.36(m,2H),1.19(m,3H),1.10(m,4H),1.01(m,3H),0.83(s,3H)。ESI-MS m/z638.2(M+H)+。
实施例35 3-(环己基(乙基)氨基)-N-((1,7-二甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢异喹啉-4-基)甲基)-2-甲基-5-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)哌嗪-3-基)苯酰胺
经过与合成化合物A-5类似的反应，只是将反应原料替换为环己酮和2'-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-苯硼酸，得到目标化合物，产率72％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.38(s,1H),8.37(s,1H),8.14(s,1H),7.84(d,J＝8.0Hz,1H),7.29(s,1H),7.12(s,1H),6.89(d,J＝8.9Hz,1H),4.30(s,2H),3.51(s,4H),3.10(d,J＝6.8Hz,2H),2.99–2.86(m,1H),2.67(m,2H),2.40(s,4H),2.21(d,J＝4.4Hz,6H),2.10(s,3H),1.95–1.84(m,1H),1.76(m,6H),1.54(s,1H),1.36(m,2H),1.28–1.06(m,5H),1.01(d,J＝6.4Hz,3H),0.82(t,J＝6.8Hz,3H)。ESI-MS m/z 625.2(M+H)+。
实施例36 4-甲基-N-((1-甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢异喹啉-4-基)甲基)-4'-(吗啉甲基)-5-(四氢-2H-呋喃-4-氨基)联苯-3-甲酰胺
以四氢吡喃酮为原料，经过与合成化合物A-1类似的反应，得到目标化合物，产率67％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.48(s,1H),8.17(s,1H),7.58(d,J＝6.8Hz,2H),7.38(m,3H),7.22(s,1H),5.77(s,1H),4.32(s,2H),3.83(d,J＝9.6Hz,2H),3.58(s,4H),3.49(s,2H),3.25(t,J＝10.9Hz,2H),3.08(m,2H),3.02(m,1H),2.37(s,6H),2.25(s,3H),1.65(s,6H),1.53(m,2H),0.84(s,3H)。ESI-MS m/z 585.2(M+H)+。
实施例37 4-甲基-5-(甲基(四氢-2H-呋喃-4-基)氨基)-N-((1-甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢异喹啉-4-基)甲基)-4'-(吗啉甲基)联苯-3-甲酰胺
以碘甲烷为原料，经过与合成化合物A-1类似的反应，得到目标化合物，产率71％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.50(s,1H),8.17(s,1H),7.58(d,J＝6.8Hz,2H),7.38(m,3H),7.22(s,1H),4.32(s,2H),3.83(d,J＝9.6Hz,2H),3.58(s,4H),3.49(s,2H),3.25(t,J＝10.9Hz,2H),3.08(m,2H),3.02(m,1H),2.37(s,6H),2.25(s,3H),2.10(s,3H),1.65(s,6H),1.53(m,2H),0.84(s,3H)。ESI-MS m/z 599.2(M+H)+。
实施例38 1-环戊基-N-((1-甲基-3-氧-3,5,6,7-四氢-2H-环戊[c]吡啶-4-基)甲基)-6-(4-(吗啉甲基)苯)-1H-吲唑-4-甲酰胺(化合物E-1)的制备
步骤1
将2-甲基-3-氨基-5-溴苯甲酸甲酯(1.5g，6.1mmol)溶于15ml氯仿中，加入醋酸钾(0.63g，6.4mmol)和醋酸酐(1.26g，12.3mmol)，室温搅拌12小时。然后加入亚硝酸叔丁酯(2.53g，24.6mmol)和18-冠-6(0.57g，2.15mmol)，65℃下搅拌3小时。反应完成后，冷却至室温，加入饱和碳酸氢钠水溶液和二氯甲烷，分液，硫酸钠干燥，萃取，浓缩得到产物。
步骤2
将上步产物(1.8g，6.1mmol)溶于甲醇中，加入35mL 6N盐酸，60℃搅拌8小时。反应完成后，浓缩反应液，加入饱和碳酸氢钠溶液调节pH至中性，析出的固体抽滤，并用乙醚洗涤，得到产物。
步骤3
将上步产物(1g，4mmol)加入到乙腈(20mL)中，随后加入碳酸铯(1.9g，6mmol)和溴代环戊烷(1.2g，7.8mmol)。反应体系90℃搅拌3小时。当反应完成后，减压浓缩反应液，加入水和乙酸乙酯，分液，有机层减压浓缩干燥后，采用流动相为正己烷︰乙酸乙酯的柱层析提纯得到产物。
步骤4
饱和氢氧化钠(0.68g，17.2mmol)水溶液加入到上步产物(3.7g，11.45mmol)的乙醇溶液中，60℃搅拌1小时。当反应完成后，减压浓缩反应液，加入1N盐酸调节pH至没有新固体析出，将析出物抽滤干燥，得到产物。
步骤5
在二甲亚砜溶液中，将上步产物(309mg，1mmol)与适量的4-氨甲基-1-甲基-6,7-二氢-2H-环戊酮[c]吡啶-3(5H)-酮盐酸盐混合，随后加入HOAT(272mg，2mmol)和EDCI(382mg，2mmol)，室温搅拌过夜，加水，抽滤得滤饼，采用流动相为二氯甲烷︰甲醇＝40︰1的柱层析条件提纯得到产物。
步骤6
将上步产物(469mg，1.0mmol)，4-(4-吗啉甲基)苯硼酸频哪酯(330mg，1.1mmol)，[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(40mg，0.05mmol)加入到圆底烧瓶中，随后加入5ml二氧六环和1ml 3.6N的碳酸钠水溶液，氮气置换三次，100℃加热4小时，加水，乙酸乙酯萃取，有机层合并后采用流动相为二氯甲烷︰甲醇＝40︰1的柱层析条件提纯得到产物。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.33(s,1H),8.76(s,1H),8.38(s,1H),8.11(s,1H),7.87(s,1H),7.82(d,J＝7.6Hz,2H),7.44(d,J＝8.0Hz,2H),5.35(m,1H),4.35(m,2H),3.59(s,4H),3.52(s,2H),2.87(m,2H),2.38(s,4H),2.10(s,5H),2.04(m,2H),1.89(m,2H),1.71(m,2H),1.63(m,4H),1.23(s,2H)。MS-ESI(m/s):566.3(M+1)。
实施例39 1-环戊基-N-((1-甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢异喹啉-4-基)甲基)-6-(4-(吗啉甲基)苯)-1H-吲唑-4-甲酰胺(化合物E-2)的制备
以环己酮为原料，经过与合成化合物E-1类似的反应，得到目标化合物，产率57％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.35(s,1H),8.62(s,1H),8.37(s,1H),8.10(s,1H),7.85(s,1H),7.81(d,J＝7.6Hz,2H),7.44(d,J＝7.6Hz,2H),5.35(m,1H),4.42(m,2H),3.59(s,4H),3.52(s,2H),2.74(s,2H),2.38(s,6H),2.12(s,5H),2.02(m,2H),1.89(m,2H),1.71(m,2H),1.63(m,4H),1.23(s,2H)。MS(ESI)m/z:580.2。
实施例40 1-环戊基-N-((1,7-二甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢异喹啉-4-基)甲基)-6-(4-(吗啉甲基)苯)-1H-吲唑-4-甲酰胺(化合物E-3)的制备
以4-甲基环己酮为原料，经过与合成化合物E-1类似的反应，得到目标化合物，产率61％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.35(s,1H),8.62(s,1H),8.37(s,1H),8.10(s,1H),7.85(s,1H),7.81(d,J＝7.6Hz,2H),7.44(d,J＝7.6Hz,2H),5.35(m,1H),4.42(m,2H),3.59(s,4H),3.52(s,2H),2.74(s,2H),2.38(s,6H),2.12(s,5H),2.02(m,2H),1.89(m,2H),1.71(m,2H),1.63(m,3H),1.23(s,2H),0.98(s,3H)。MS(ESI)m/z:594.2。
实施例41 1-异丙基-3-甲基-N-((1-甲基-3-氧-3,5,6,7-四氢-2H-环戊[c]吡啶-4-基)甲基)-6-(4-(吗啉甲基)苯)-1H-吲哚-4-甲酰胺(化合物G-1)的制备
步骤1
往6-溴-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酸甲酯(l.0g,3.94mmol)固体在N,N一二甲基甲酰胺(25mL)中的冷却的0℃)溶液中加入氢化钠(0.173g,4.33mmol)。搅拌反应15分钟，此时加入溴代环戊烷(0.554mL,5.90mmol)。然后将反应加温至室温并维持过夜。将反应容器放回至冰浴中并搅拌15分钟。移除冰浴并将反应搅拌1小时。在真空中除去约一半的反应容积并倾倒至饱和氯化铵溶液(200mL)中。用乙醚(2x)萃取并用盐水清洗合并的有机物，干燥(MgS04)并浓缩。采用流动相为二氯甲烷︰甲醇＝40︰1的柱层析条件提纯得到产物。
步骤2
饱和氢氧化钠(0.68g，17.2mmol)水溶液加入到上步产物(3.23g，11.45mmol)的乙醇溶液中，60℃搅拌1小时。当反应完成后，减压浓缩反应液，加入1N盐酸调节pH至没有新固体析出，将析出物抽滤干燥，得到产物。
步骤3
在二甲亚砜溶液中，将上步产物(309mg，1mmol)与适量的4-氨甲基-1-甲基-6,7-二氢-2H-环戊酮[c]吡啶-3(5H)-酮盐酸盐混合，随后加入HOAT(272mg，2mmol)和EDCI(382mg，2mmol)，室温搅拌过夜，加水，抽滤得滤饼，通过柱层析得到产品。
步骤4
将上步产物(455mg，1.0mmol)，4-(4-吗啉甲基)苯硼酸频哪酯(330mg，1.1mmol)，[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(40mg，0.05mmol)加入到圆底烧瓶中，随后加入5ml二氧六环和1mL 3.6N的碳酸钠水溶液，氮气置换三次，100℃加热4小时，加水，乙酸乙酯萃取，有机层合并后采用流动相为二氯甲烷︰甲醇＝40︰1的柱层析条件提纯得到产物。产率：65％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.35(s,1H),8.51(s,1H),8.21(m,1H),7.93(m,1H),7.74(d,J＝1.2Hz,1H),7.25(s,1H),7.19(s,1H),6.93(m,1H),5.87(s,1H),4.3(s,2H),3.51(s,4H),3.05–2.95(m,2H),2.92(m,2H),2.62(m,2H),2.40(s,4H),2.22(d,J＝3.6Hz,6H),2.10(s,3H),1.96–1.84(m,1H),1.79(m,1H),1.69(m,4H),1.54(m,2H),1.49(s,2H),1.21(m,2H),0.81(t,J＝6.8Hz,3H)。MS-ESI(m/s):579.3(M+1)。
实施例42 1-异丙基-3-甲基-N-((1-甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢异喹啉-4-基)甲基)-6-(4-(吗啉甲基)苯)-1H-吲哚-4-甲酰胺(化合物G-2)的制备
以环己酮为原料，经过与合成化合物G-1类似的反应，得到目标化合物，产率71％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.35(s,1H),8.51(s,1H),8.21(m,1H),7.93(m,1H),7.74(d,J＝1.2Hz,1H),7.25(s,1H),7.19(s,1H),6.93(m,1H),5.87(s,1H),4.3(s,2H),3.51(s,4H),3.05–2.95(m,2H),2.92(m,2H),2.62(m,2H),2.40(s,4H),2.22(d,J＝3.6Hz,6H),2.10(s,3H),1.96–1.84(m,1H),1.79(m,1H),1.69(m,4H),1.54(m,2H),1.49(s,2H),1.36(s,2H),1.21(m,2H),0.81(t,J＝6.8Hz,3H)。MS(ESI)m/z:593.2。
实施例43 1-异丙基-3-甲基-N-((1,7-二甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢异喹啉-4-基)甲基)-6-(4-(吗啉甲基)苯)-1H-吲哚-4-甲酰胺(化合物G-3)的制备
以4-甲基环己酮为原料，经过与合成化合物G-1类似的反应，得到目标化合物，产率64％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.35(s,1H),8.51(s,1H),8.21(m,1H),7.93(m,1H),7.74(d,J＝1.2Hz,1H),7.25(s,1H),7.19(s,1H),6.93(m,1H),5.87(s,1H),4.3(s,2H),3.51(s,4H),3.05–2.95(m,2H),2.92(m,2H),2.62(m,2H),2.40(s,4H),2.22(d,J＝3.6Hz,6H),2.10(s,3H),1.96–1.84(m,1H),1.79(m,1H),1.69(m,4H),1.49(s,2H),1.36(s,2H),1.21(m,2H),1.01(d,J＝6.4Hz,3H),0.81(t,J＝6.8Hz,3H)。MS(ESI)m/z:607.2。
实施例44 1-环戊-N-((1-甲基-3-氧-3,5,6,7-四氢-2H-环戊[c]吡啶-4-基)甲基)-6-(4-(吗啉甲基)苯)-1H-吲哚-4-甲酰胺(化合物H-1)的制备
步骤1
往6-溴-1H-吲哚-4-甲酸甲酯(l.0g,3.94mmol)固体在N,N一二甲基甲酰胺(25mL)中的冷却的0℃)溶液中加入氢化钠(0.173g,4.33mmol)。搅拌反应15分钟，此时加入溴代环戊烷(0.554mL,5.90mmol)。然后将反应加温至室温(RT)并维持过夜。将反应容器放回至冰浴中并搅拌15分钟。然后加入过量NaH(60％)并搅拌10分钟，再加入2-嗅丙烷(过量)。移除冰浴并将反应搅拌1小时。在真空中除去约一半的反应容积并倾倒至饱和氯化铵溶液(200mL)中。用乙醚(2x)萃取并用盐水清洗合并的有机物，干燥(MgS04)并浓缩。采用流动相为二氯甲烷︰甲醇＝40︰1的柱层析条件提纯得到产物。
步骤2
饱和氢氧化钠(0.68g，17.2mmol)水溶液加入到上步产物(3.23g，11.45mmol)的乙醇溶液中，60℃搅拌1小时。当反应完成后，减压浓缩反应液，加入1N盐酸调节pH至没有新固体析出，将析出物抽滤干燥，得到产物。
步骤3
在二甲亚砜溶液中，将上步产物(309mg，1mmol)与适量的4-氨甲基-1-甲基-6,7-二氢-2H-环戊酮[c]吡啶-3(5H)-酮盐酸盐混合，随后加入HOAT(272mg，2mmol)和EDCI(382mg，2mmol)，室温搅拌过夜，加水，抽滤得滤饼，通过柱层析得到产品。
步骤4
将上步产物(455mg，1.0mmol)，4-(4-吗啉甲基)苯硼酸频哪酯(330mg，1.1mmol)，[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(40mg，0.05mmol)加入到圆底烧瓶中，随后加入5mL二氧六环和1mL 3.6N的碳酸钠水溶液，氮气置换三次，100℃加热4小时，加水，乙酸乙酯萃取，有机层合并后采用流动相为二氯甲烷︰甲醇＝40︰1的柱层析条件提纯得到产物。产率78％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.35(s,1H),8.51(s,1H),8.21(m,1H),7.93(m,1H),7.74(d,J＝1.2Hz,1H),7.25(s,1H),7.19(s,1H),6.93(m,1H),5.87(s,1H),4.3(s,2H),3.51(s,4H),3.05–2.95(m,2H),2.92(m,2H),2.62(m,2H),2.40(s,4H),2.22(d,J＝3.6Hz,6H),1.96–1.84(m,1H),1.69(m,2H),1.49(s,2H),1.21(m,2H),1.01(d,J＝6.4Hz,3H),0.81(t,J＝6.8Hz,3H)。MS-ESI(m/s):565.3(M+1)。
实施例45 1-环戊-N-((1-甲基-3-氧，2,3,6,7,8-六氢异喹啉-4-基)甲基)-6-(4-(吗啉甲基)苯基)-1H-吲哚-4-甲酰胺(化合物H-2)的制备
以环己酮为原料，经过与合成化合物H-1类似的反应，得到目标化合物，产率74％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.35(s,1H),8.51(s,1H),8.21(m,1H),7.93(m,1H),7.74(d,J＝1.2Hz,1H),7.25(s,1H),7.19(s,1H),6.93(m,1H),5.87(s,1H),4.3(s,2H),3.51(s,4H),3.05–2.95(m,2H),2.92(m,2H),2.62(m,2H),2.40(s,4H),2.22(d,J＝3.6Hz,6H),1.96–1.84(m,1H),1.69(m,2H),1.49(s,2H),1.36(s,2H),1.21(m,2H),1.01(d,J＝6.4Hz,3H),0.81(t,J＝6.8Hz,3H)。MS(ESI)m/z:579.2。
实施例46 1-环戊-N-((1,7-二甲基-3-氧，2,3,6,7,8-六氢异喹啉-4-基)甲基)-6-(4-(吗啉甲基)苯基)-1H-吲哚-4-甲酰胺(化合物H-3)的制备
以4-甲基环己酮为原料，经过与合成化合物H-1类似的反应，得到目标化合物，产率76％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.35(s,1H),8.51(s,1H),8.21(m,1H),7.93(m,1H),7.74(d,J＝1.2Hz,1H),7.25(s,1H),7.19(s,1H),6.93(m,1H),5.87(s,1H),4.3(s,2H),3.51(s,4H),3.05–2.95(m,2H),2.92(m,2H),2.62(m,2H),2.40(s,4H),2.22(d,J＝3.6Hz,6H),1.96–1.84(m,1H),1.79(m,1H),1.69(m,4H),1.49(s,2H),1.36(s,2H),1.21(m,2H),1.01(d,J＝6.4Hz,3H),0.81(t,J＝6.8Hz,3H)。MS(ESI)m/z:593.2。
实施例47 本发明包含的化合物对EZH2酶抑制活性检测
EZH2酶(WT，Y641F和A677G)购自Biogenie公司，化合物GSK-126和EPZ6438购自Xcessbi公司，SAM购自Sigma公司(Cat.No.7007)，384孔检测板和磁珠购自Perkin Elmer公司。
采用AlphaLISA筛选方法对化合物进行EZH2(Y641F)酶活性检测。将化合物储备液(10mM)用DMSO稀释到不同浓度，采用三倍稀释法。分别取100uL的体积加入到384孔检测板中，最高浓度为500nM，最低浓度为0.7nM，每个药物浓度设置3个复孔。分别加入5uL的EZH2酶溶液，1000转/分离心1分钟，室温孵育15分钟。加入5uL修饰后的底物，1000转/分离心1分钟，室温孵育1小时。加入5uL受体磁珠终止酶反应，1000转/分离心1分钟，室温孵育1小时。避光条件下加入10uL供体磁珠，1000转/分离心1分钟，室温孵育30分钟，采用EnSpire的Alpha模式检测信号强度。计算化合物对EZH2酶活性的半数抑制浓度(IC50)，结果见表1。其中，EPZ6438和GSK126是目前文献已报道的EZH2小分子抑制剂，EPZ6438的中文名称N-((4,6-二甲基-2-氧-1,2-二氢-3-基)甲基)-5-(乙基(四氢-2H-呋喃-4-基)氨基)-4-甲基-4'-(吗啉甲基)联苯-3-甲酰胺，结构式为GSK126的中文名称1-异丁基-N-((4,6-二甲基-2-氧-1,2-二氢吡啶-3-基)-3-甲基-6-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-3-甲酰胺，结构式为
表1 化合物的EZH2(WT，Y641F和A677G)酶活性
表1中的“NT”表示没有进行相应测试。
从表1可以看出，大部分化合物表现出了强烈的EZH2酶抑制活性，活性维持在亚纳摩尔到低纳摩尔水平。
实施例48 本发明化合物抑制肿瘤细胞株增殖的实验
弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞株SU-DHL6和HBL-1，肺癌细胞株H460和H1975均购自于美国标准生物品收藏中心(American Type Culture Collection，ATCC)，RPMI 1640培养基，胎牛血清(FBS)均购买自美国GIBICO公司；青霉素和链霉素购自大连宝生物公司；培养细胞用平皿和96孔板等购买于Corning公司；各种规格的离心管购自BD公司；CCK-8试剂购自日本同仁化学研究所(Donjindo)。
弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞株(SU-DHL6)、弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞株(HBL-1)肺癌细胞株(H460)和肺癌细胞株(H1975)均用含10％胎牛血清(FBS)、100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素的常规高糖RPMI1640完全培养基培养于37℃、5％CO2的培养箱中培养。
为了检测新化合物对SU-DHL6、HBL-1、H460和H1975细胞的增殖影响。收集处于对数生长期的细胞，调整细胞浓度为1000～2000个/mL的单细胞悬液，按照每孔100uL接种于96孔板中。将化合物储备液(10mM/L溶于DMSO)用培养基稀释成不同浓度，采用三倍稀释法。按每孔100uL的体积加入96孔板中，最高浓度为30uM，最低浓度为0.1uM，每个药物浓度设置3个复孔，并用含0.1％DMSO培养基和纯培养基处理细胞作为阴性对照，置细胞培养箱中继续培养，弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞SU-DHL6、HBL-1细胞培养10天，肺癌细胞株H460和H1975细胞培养6天。采用CCK-8检测细胞线粒体脱氢酶活性，并计算新化合物对肿瘤细胞的半数有效抑制浓度(IC50)值(表2)。
表2 化合物对肿瘤细胞株的增殖抑制作用(CCK-8法)
注：N/D表示没有进行相应测试。
从表2可以看出，受试化合物对淋巴瘤细胞株和肺癌细胞株都显示出了较强的增殖抑制活性，达到低微摩尔水平。
实施例49 本发明化合物抑制弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞株增殖的实验
弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞株SU-DHL6、Pffeifer和HBL-1均购自于美国标准生物品收藏中心(American Type Culture Collection，ATCC)，RPMI 1640培养基，胎牛血清(FBS)均购买自美国GIBICO公司；青霉素和链霉素购自大连宝生物公司；培养细胞用平皿和96孔板等购买于Corning公司；各种规格的离心管购自BD公司；MTT试剂购自日本同仁化学研究所(Donjindo)。
弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞株(SU-DHL6)、弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞株(HBL-1)和弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞株(Pffeifer)均用含10％胎牛血清(FBS)、100IU/mL青霉素、100μg/ml链霉素的常规高糖RPMI1640完全培养基培养于37℃、5％CO2的培养箱中培养。
为了检测新化合物对SU-DHL6、Pffeifer和HBL-1细胞的增殖影响。收集处于对数生长期的细胞，调整细胞浓度为1000～2000个/mL的单细胞悬液，按照每孔100uL接种于96孔板中。将化合物储备液(10mM/L溶于DMSO)用培养基稀释成不同浓度，采用三倍稀释法。按每孔100uL的体积加入96孔板中，最高浓度为30uM,最低浓度为0.1uM，每个药物浓度设置3个复孔，并用含0.1％DMSO培养基和纯培养基处理细胞作为阴性对照，置细胞培养箱中继续培养4天，采用MTT检测细胞线粒体脱氢酶活性，并计算新化合物对肿瘤细胞的半数有效抑制浓度(IC50)值(表3)。
表3 化合物对三种淋巴瘤细胞株的增殖作用(MTT法)
从表3中可以看出，受试化合物对三种淋巴瘤细胞株显示出强烈的增殖抑制活性，IC50值达到低微摩尔水平。
实施例50 本发明化合物A-2抑制人原代肿瘤干细胞增殖的实验
人源结直肠癌和胃癌原代细胞来自于四川大学华西医院胃肠外科手术切除样本，采用无血清培养方法培养获得。DMEM/F12培养基，胎牛血清(FBS)均购买自美国GIBICO公司；细胞消化液accutase购自Promocell公司；碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)，表皮生长因子(EGF)，B27购自于BD公司；青霉素和链霉素购自大连宝生物公司；培养细胞采用的超低吸附平皿和96孔板等购买于Corning公司；各种规格的离心管购自BD公司；CCK-8试剂购自日本同仁化学研究所(Donjindo)。
结直肠癌和胃癌干细胞采用含2％B27，20ug/L bFGF、20ug/L EGF的DMEM/F12培养基培养于37℃、5％CO2的培养箱中培养。
为了检测新化合物对胃癌和结直肠癌干细胞的增值影响。收集处于对数生长期的细胞，调整细胞浓度为5000～8000个/mL的单细胞悬液，按照每孔100uL接种于96孔板中，待细胞恢复两天后，将化合物储备液(10mM/L溶于DMSO)用培养基稀释成不同浓度，采用三倍稀释法。按每孔100uL的体积加入96孔板中，最高浓度为30uM,最低浓度为0.1uM，每个药物浓度设置3个复孔，并用含0.1％DMSO培养基和纯培养基处理细胞作为阴性对照，置细胞培养箱中继续培养4天，采用CCK-8(2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐)检测细胞线粒体脱氢酶活性，按照CCK-8试剂盒说明书每孔内加入20uLCCK-8溶液，于细胞培养箱中孵育2～4h后，采用全自动酶标仪于450nm吸收波长测定各孔吸光度值(optical density，OD)并记录结果后计算各药物浓度的OD450。按下列公式计算药物对细胞的生长抑制率：细胞生长增殖抑制率(％)＝1-(实验组OD450值/对照组OD450)×100％。最后，用生物统计软件Graphpad Prism计算拟合药物的生长抑制曲线并计算新化合物的半数有效抑制浓度(IC50)值(表4、图1)。
表4 化合物A-2对人原代肿瘤干细胞的增殖抑制作用
化合物A-2对人原代肿瘤干细胞增殖的检测，结果显示本发明制备的化合物A-2对肿瘤干细胞有一定的增殖抑制作用。
实施例51 本发明化合物的溶解度实验
本研究中，为测定化合物的溶解度，先将药物加入到不同的溶剂中，超声30min后，水浴37℃恒温振荡24小时，形成药物的饱和溶液，然后再稀释合适的倍数，离心后取上清液，采用高效液相法测定在不同溶剂中的溶解度。
表5 本发明化合物的溶解度
相对于已报道的EZH2抑制剂EPZ6438，化合物A-2、A-25、A-29在水中或者有机溶剂中溶解度均显著提高，几十倍甚至上百倍的提高。
实施例52 化合物A-25对pfeiffer和SU-DHL-6两种淋巴肿瘤细胞株的H3K27me3表达量的影响
弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞株SU-DHL-6和Pfeiffer均购自于美国标准生物品收藏中心(American Type Culture Collection，ATCC)，RPMI 1640培养基，胎牛血清(FBS)均购买自美国GIBICO公司；青霉素和链霉素购自大连宝生物公司；培养细胞用平皿和96孔板等购买于Corning公司；各种规格的离心管购自BD公司；抗体包括anti-H3K27me3,anti-H3K27me2,anti-EZH2,anti-H3and anti-β-actin选自美国Cell Signaling Technology公司；相应的二抗选自中国的中杉金桥公司。
在37℃下，细胞用不同浓度的化合物处理一定时间后，细胞收集，用冰PBS洗涤，用RIPA缓冲液(Beyotime,中国)溶解。然后测定蛋白浓度，并用5–10％SDS-PAGE分离蛋白，用特定的抗体标记后，并用相应的二抗继续孵育得到检测结果。
从图2可以看出，A-25可以显著减少细胞整体的H3K27me3(组蛋白H3第27位上赖氨酸的三甲基化)的水平，且呈现剂量和时间依赖型。
实施例53 化合物A-29对MCF-7和MDA-MB-231两种乳腺肿瘤细胞株的H3K27me3表达量的影响
乳腺瘤细胞株MCF-7和MDA-MB-231均购自于美国标准生物品收藏中心(AmericanType Culture Collection，ATCC)，RPMI 1640培养基，胎牛血清(FBS)均购买自美国GIBICO公司；青霉素和链霉素购自大连宝生物公司；培养细胞用平皿和96孔板等购买于Corning公司；各种规格的离心管购自BD公司；抗体包括anti-H3K27me3,anti-H3K27me2,anti-EZH2,anti-H3and anti-β-actin选自美国Cell Signaling Technology公司；相应的二抗选自中国的中杉金桥公司。
在37℃下，细胞用不同浓度的化合物处理一定时间后，细胞收集，用冰PBS洗涤，用RIPA缓冲液(Beyotime,中国)溶解。然后测定蛋白浓度，并用5–10％SDS-PAGE分离蛋白，用特定的抗体标记后，并用相应的二抗继续孵育得到检测结果。
从图3可以看出，A-29可以显著减少细胞整体的H3K27me3(组蛋白H3第27位上赖氨酸的三甲基化)的水平，且呈现剂量和时间依赖型。
实施例54 化合物A-25对SU-DHL-6的细胞周期的影响
弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞株SU-DHL-6购自于美国标准生物品收藏中心(American Type Culture Collection，ATCC)，RPMI 1640培养基，胎牛血清(FBS)均购买自美国GIBICO公司；青霉素和链霉素购自大连宝生物公司；培养细胞用平皿和96孔板等购买于Corning公司；各种规格的离心管购自BD公司；其余PI等试剂购自Sigma公司(USA)。
通过流式细胞术研究化合物对细胞周期的影响：收集对数期细胞，调整细胞悬浮浓度，以每孔2～10×105个细胞接种到6孔板，每孔体积2mL；置37℃、5％CO2温箱培养24小时后；小心吸去上清，按浓度梯度每孔加入已配好的含药培养液2mL，并设置不加药物的对照组。置37℃、5％CO2温箱培养48小时。然后按照以下方法处理细胞：(1)收集每个孔中的细胞，按浓度依次编号装入流式管，4℃，2000r/min离心3分钟，弃去上清液；(2)用3mL PBS重悬细胞，相同方法离心，弃去PBS；(3)用75％的乙醇固定细胞30min，相同方法离心，弃去上清液；(4)再用3mL PBS重悬细胞，相同方法离心，弃去PBS；(5)加入含Triton X-100的PI染液1mL，混匀，室温避光20分钟；流式细胞仪检测。
从图3可以看出，SU-DHL-6细胞分别用0.625μM,1.25μM,2.5μM,5μM or 10μM的化合物A-25处理14天，然后通过流式细胞术检测细胞周期的变化。A-25可以显著阻滞化合物的细胞G1期，相应的减少S期，同时对G2/M期没有影响，且造成的影响呈现剂量依赖型。
实施例55 化合物对两种肿瘤细胞株及三种正常细胞株的MTT测试
弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞株SU-DHL-6和Pfeiffer，正常细胞株HEK-293，LO2和VERO均购自于美国标准生物品收藏中心(American Type Culture Collection，ATCC)，RPMI 1640培养基，胎牛血清(FBS)均购买自美国GIBICO公司；青霉素和链霉素购自大连宝生物公司；培养细胞用平皿和96孔板等购买于Corning公司；各种规格的离心管购自BD公司；MTT试剂购自日本同仁化学研究所(Donjindo)。
用完全培养液调整细胞浓度为1-2×104/mL，接种于96孔板，每孔200μL，培养过夜，次日分别用梯度浓度的目标化合物处理细胞，同时设不含药物的阴性对照组和等体积的溶剂对照组，DMSO浓度为0.1％，每个剂量组设5个复孔，37℃，5％CO2培养。培养6天后，每孔加入5mg/mL MTT试剂20μL，振荡混匀15min，用酶标仪(λ＝570nm)测定吸光度(A)值(A值与活细胞数成正比)，取其平均值。
相对细胞增殖抑制率(％)＝(对照组A570-实验组A570)/对照组A 570×100％。
表6 化合物对两种肿瘤细胞株及三种正常细胞株的IC50
从表6可以看出，本发明化合物在作用时间达到6天时，对肿瘤细胞株有较好的抑制作用，达到低微摩尔级别，而对正常细胞株没有毒性作用(大于40微摩尔)，说明了化合物具有一定的体外安全性。

Claims (6)

1.吡啶酮衍生物，其特征在于：结构式如式ⅡA所示：
其中，R2为H或C1～C4烷基，R3和R4组合形成环，所述环为取代或未取代的C5～C8环烷基、取代或未取代的C5～C8的桥环烷基、取代或未取代的C5～C8的稠环烷基、取代或未取代的5～6元饱和杂环烷基、取代或未取代的5～8元桥环杂环烷基、取代或未取代的5～10元螺环杂环烷基；
所述取代的C5～C8环烷基、C5～C8的桥环烷基、C5～C8的稠环烷基、5～6元饱和杂环烷基、5～8元桥环杂环烷基或5～10元螺环杂环烷基的取代基为C1～C4烷基；
所述的5～8元桥环杂环烷基、5～6元饱和杂环烷基或5～10元螺环杂环烷基中的杂原子为N或O，杂原子个数为1～3个；
R9为-H、-F、-Cl、-Br、取代或未取代的苯基或取代或未取代的5～6元杂芳基；
所述取代的苯基或5～6元杂芳基的取代基为5～6元饱和杂环烷基取代的C1～C4烷基、-F、-Cl、-Br、C1～C4烷基或取代或未取代的5～6元的饱和杂环烷基；所述取代的5～6元的饱和杂环烷基的取代基为Cl～C4烷基；
所述的5～6元杂芳基或5～6元饱和杂环烷基中的杂原子为N或O，杂原子个数为1～3个；
R14为-H或C1～C4的烷基；
R15为C5～C6环烷基或5～6元的饱和杂环烷基；所述5～6元饱和杂环烷基中的杂原子为N或O，杂原子个数为1个。
2.根据权利要求1所述的吡啶酮衍生物，其特征在于：
R2为H、甲基或乙基，R3和R4组合形成环，所述环为取代或未取代的C5～C8环烷基、或取代或未取代的5～6元饱和杂环烷基；所述取代的C5～C8环烷基或5～6元饱和杂环烷基的取代基为C1～C4烷基；所述的5～6元饱和杂环烷基中的杂原子为N或O，杂原子个数为1～2个；
R9为-H、-F、-Cl、-Br、取代或未取代的苯基或取代或未取代的5～6元杂芳基；所述取代苯基或5～6元杂芳基的取代基为-Cl、C1～C4烷基、 所述的5～6元杂芳基中的杂原子为N，杂原子个数为1～3个；
R14为-H、甲基或乙基；
R15为C5～C6环烷基或5～6元的饱和杂环烷基；所述的5～6元的饱和杂环烷基的杂原子为N或O，个数为1个。
3.根据权利要求1所述的吡啶酮衍生物，其特征在于：
R9选自-H、-Br、对氯苯基、苯基、
R14为氢、甲基、乙基或丙基；
R15为环戊基、环己基或
4.根据权利要求1所述的吡啶酮衍生物，其特征在于：结构式如下：
5.权利要求1～4任一项所述的吡啶酮衍生物在制备抗肿瘤药物或制备治疗自身免疫疾病药物中的用途。
6.一种药物组合物，是由权利要求1～4任一项所述的吡啶酮衍生物添加药学上可以接受的辅助性成分制备而成的。
CN201510129984.8A 2014-04-28 2015-03-24 吡啶酮衍生物及其制备方法和用途 Active CN105037360B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510129984.8A CN105037360B (zh) 2014-04-28 2015-03-24 吡啶酮衍生物及其制备方法和用途

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2014101757216 2014-04-28
CN201410175721 2014-04-28
CN201510129984.8A CN105037360B (zh) 2014-04-28 2015-03-24 吡啶酮衍生物及其制备方法和用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN105037360A CN105037360A (zh) 2015-11-11
CN105037360B true CN105037360B (zh) 2016-08-17

Family

ID=54444384

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510129984.8A Active CN105037360B (zh) 2014-04-28 2015-03-24 吡啶酮衍生物及其制备方法和用途

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105037360B (zh)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112920176B (zh) * 2020-05-25 2022-11-04 四川大学华西医院 可诱导prc2蛋白复合物核心亚基降解的双功能化合物和药物组合物及应用
WO2021249305A1 (zh) * 2020-06-08 2021-12-16 南京明德新药研发有限公司 联苯类化合物
CN113527275A (zh) * 2021-07-20 2021-10-22 成都师范学院 一种sklb1039化合物及其制备方法和应用
CN114805350B (zh) * 2022-05-31 2023-10-20 四川大学华西医院 一类苯并杂环-吡啶酮衍生物及其制备方法和用途

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT2566327T (pt) * 2010-05-07 2017-05-26 Glaxosmithkline Llc Indoles
WO2012118812A2 (en) * 2011-02-28 2012-09-07 Epizyme, Inc. Substituted 6,5-fused bicyclic heteroaryl compounds
JO3438B1 (ar) * 2011-04-13 2019-10-20 Epizyme Inc مركبات بنزين مستبدلة بأريل أو أريل غير متجانس
US9206128B2 (en) * 2011-11-18 2015-12-08 Constellation Pharmaceuticals, Inc. Modulators of methyl modifying enzymes, compositions and uses thereof
EP2900653A1 (en) * 2012-09-28 2015-08-05 Pfizer Inc. Benzamide and heterobenzamide compounds

Also Published As

Publication number Publication date
CN105037360A (zh) 2015-11-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2016348402B2 (en) Inhibitors of RET
DK3057959T3 (en) INHIBITORS FOR DNA PK
WO2016127074A1 (en) 2-(pyridin-3-yl)-pyrimidine derivatives as ret inhibitors
CN105037360B (zh) 吡啶酮衍生物及其制备方法和用途
TWI716686B (zh) N-(氮雜芳基)環內醯胺-1-甲醯胺衍生物及其製備方法和應用
CN108239083B (zh) 芳香烃受体调节剂
JP2015514804A (ja) Ｄｎａ−ｐｋ阻害剤
MXPA06003557A (es) Compuestos y composiciones como inhibidores de cinasa de proteina.
JP7395807B2 (ja) アミド類化合物の調製方法及びその医薬分野の使用
CA3009669A1 (en) Bruton's tyrosine kinase inhibitors
CN110546145B (zh) 一种氮杂芳基衍生物、其制备方法和在药学上的应用
TW202021589A (zh) 一種新型的喹啉衍生物抑制劑
CN103370324A (zh) 作为蛋白激酶抑制剂的芳炔类衍生物及其医疗用途
KR20170106294A (ko) Dpp-4 억제제인 벤조 6원 고리 유도체 및 이의 응용
CN110746396B (zh) 含硒异唑胺类化合物及其制备方法和用途
CA2937012A1 (en) Fused pyrazole derivative
JP7451765B2 (ja) Ｃｄｋ阻害剤としてのピリジンアセトアミド系誘導体、その調製方法及び用途
CN104822658B (zh) 作为多种激酶抑制剂的稠合三环酰胺类化合物
CN108299420B (zh) 作为选择性雌激素受体下调剂的五环类化合物及其应用
CA3069602A1 (en) Formylpyridine derivative having fgfr4 inhibitory activity, preparation method therefor and use thereof
CA3127892A1 (en) Jak inhibitor and preparation method thereof
CN107286139A (zh) 氘代脱氢苯基阿夕斯丁类化合物的酸加成盐及其在制备抗肿瘤的药物中的应用
AU2021381350A1 (en) Antagonists of the muscarinic acetylcholine receptor m4
CA3223059A1 (en) Pyrimidine-4,6-diamine derivative, a preparation method therefor, and a pharmaceutical application thereof
WO2024199255A1 (en) 5-AMINO-6, 8-DIHYDRO-1H-FURO [3, 4-d] PYRROLO [3, 2-b] PYRIDINE-2-CARBOXAMIDE DERIVATIVES AS MTA-COOPERATIVE INHIBITORS OF PRMT5

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20160118

Address after: 610065 Wuhou District, Chengdu, South Ring Road, No. 1, No. 1, Sichuan

Applicant after: Sichuan University

Applicant after: Apeloa pharmaceutical Limited by Share Ltd

Address before: 610065 Wuhou District, Chengdu, South Ring Road, No. 1, No. 1, Sichuan

Applicant before: Sichuan University

C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant