CN105018457A - 虫荧光素酶稳定剂 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种虫荧光素酶稳定剂，它包括以下组分：甘油100-250g/L，甘氨酸0.08-0.12mol/L，溶剂为双蒸水；本发明的虫荧光素酶稳定剂对虫荧光素酶的活性有保护作用，降低虫荧光素酶对温度及冻融等因素的敏感度，使虫荧光素酶在使用时只需分装保存在4℃的冰箱中即可，有效提高了虫荧光素酶的稳定性，延长了保存时间，使用更为方便快捷。

Description

虫荧光素酶稳定剂
  
技术领域
本发明涉及一种酶稳定剂，特别是涉及一种虫荧光素酶稳定剂。
背景技术
生物发光是在自然界广泛存在的、有生命的生物产生的一种发光现象。发光的生物种类有很多，包括发光细菌、发光萤火虫、发光鱼、发光海星、发光甲虫等。而能催化荧光素或脂肪醛氧化产生生物发光的一类酶即为荧光素酶。人们从20世纪50年代就已经开始了对荧光素酶的研究。应用荧光素酶大大增加了生物发光免疫分析技术的灵敏度和应用范围，并且由于荧光素酶具有敏感性高，特异性好，反应迅速，操作简单，应用范围广等特点，已普遍应用在医学、生物学、环境科学等领域。
虫荧光素酶能有效的催化由三磷酸腺苷(ATP)、荧光素、氧气组成的反应，将生物能转变成光能发出荧光。虫荧光素酶生物发光技术在食品，医学，农业，生命科学等领域有广阔的应用前景。但虫荧光素酶对温度及冻融等因素极为敏感，使用时需分装保存在-18℃冰箱中，否则极易失活。虫荧光素酶的酶活不稳定性，较大的影响了其开发应用。急需一种虫荧光素酶稳定剂，为虫荧光素酶的大规模应用扫除障碍。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，克服以上现有技术的缺点：提供一种有效提高虫荧光素酶稳定性，延长其保存时间的虫荧光素酶稳定剂。
本发明的技术解决方案如下：一种虫荧光素酶稳定剂，它包括以下组分：甘油100-250g/L，甘氨酸0.08-0.12mol/L，溶剂为双蒸水。
作为优化，它还包括聚乙二醇8-16mmol/L和/或蔗糖40-60mmol/L。
即它包括以下组分：甘油100-250g/L，甘氨酸0.08-0.12mol/L，聚乙二醇8-16mmol/L，溶剂为双蒸水。
或包括以下组分：甘油100-250g/L，甘氨酸0.08-0.12mol/L，蔗糖40-60mmol/L，溶剂为双蒸水。
或包括以下组分：甘油100-250g/L，甘氨酸0.08-0.12mol/L，聚乙二醇8-16mmol/L，蔗糖40-60mmol/L，溶剂为双蒸水。
作为优化，所述甘油为200g/L。
作为优化，所述甘氨酸为0.1mol/L。
所述聚乙二醇为10mmol/L。
所述蔗糖为50mmol/L。
本发明的有益效果是：本发明的虫荧光素酶稳定剂对虫荧光素酶的活性有保护作用，降低虫荧光素酶对温度及冻融等因素的敏感度，使虫荧光素酶在使用时只需分装保存在4℃的冰箱中即可，有效提高了虫荧光素酶的稳定性，延长了保存时间，使用更为方便快捷。
附图说明
图1为虫荧光素酶稳定剂溶质分别为甘油、氨基酸以及它们的混合物时对虫荧光素酶的保护作用。
图2为虫荧光素酶稳定剂溶质分别为甘油、氨基酸、聚乙二醇以及它们的混合物时对虫荧光素酶的保护作用。
图3为虫荧光素酶稳定剂溶质分别为甘油、甘氨酸、蔗糖以及它们的混合物时对虫荧光素酶保护作用。
图4为虫荧光素酶稳定剂溶质为甘油、甘氨酸、聚乙二醇和蔗糖组成的综合稳定剂对虫荧光素酶保护作用。
具体实施方式
下面用具体实施例对本发明做进一步详细说明，但本发明不仅局限于以下具体实施例。
实施例1
虫荧光素酶稳定剂，包括下述组分：甘油200g/L，甘氨酸0.1 mol/L，溶剂为双蒸水。
实施例2
虫荧光素酶稳定剂，包括下述组分：甘油100g/L，甘氨酸0.08 mol/L，溶剂为双蒸水。
实施例3
虫荧光素酶稳定剂，包括下述组分：甘油150g/L，甘氨酸0.12 mol/L，溶剂为双蒸水。
实施例4
虫荧光素酶稳定剂，包括下述组分：甘油200g/L，甘氨酸0.12 mol/L，溶剂为双蒸水。
实施例5
虫荧光素酶稳定剂，包括下述组分：甘油200g/L，甘氨酸0.1 mol/L，聚乙二醇10 mmol/L，溶剂为双蒸水。
实施例6
虫荧光素酶稳定剂，包括下述组分：甘油100g/L，甘氨酸0.08 mol/L，聚乙二醇8 mmol/L，溶剂为双蒸水。
实施例7
虫荧光素酶稳定剂，包括下述组分：甘油200g/L，甘氨酸0.12 mol/L，聚乙二醇10mmol/L，溶剂为双蒸水。
实施例8
虫荧光素酶稳定剂，包括下述组分：甘油250g/L，甘氨酸0.1 mol/L，聚乙二醇16 mmol/L，溶剂为双蒸水。
实施例9
虫荧光素酶稳定剂，包括下述组分：甘油200g/L，甘氨酸0.1 mol/L，蔗糖50 mmol/L，溶剂为双蒸水。
实施例10
虫荧光素酶稳定剂，包括下述组分：甘油100g/L，甘氨酸0.08 mol/L，蔗糖40 mmol/L，溶剂为双蒸水。
实施例11
虫荧光素酶稳定剂，包括下述组分：甘油200g/L，甘氨酸0.12 mol/L，蔗糖60 mmol/L，溶剂为双蒸水。
实施例12
虫荧光素酶稳定剂，包括下述组分：甘油200g/L，甘氨酸0.12 mol/L，蔗糖50mmol/L，溶剂为双蒸水。
实施例13
虫荧光素酶稳定剂，包括下述组分：甘油200g/L，甘氨酸0.1 mol/L，聚乙二醇10 mmol/L，蔗糖50 mmol/L，溶剂为双蒸水。
实施例14
虫荧光素酶稳定剂，包括下述组分：甘油100g/L，甘氨酸0.08 mol/L，聚乙二醇8 mmol/L，蔗糖50mmol/L，溶剂为双蒸水。
实施例15
虫荧光素酶稳定剂，包括下述组分：甘油200g/L，甘氨酸0.12 mol/L，聚乙二醇10 mmol/L，蔗糖60 mmol/L，溶剂为双蒸水。
实施例16
虫荧光素酶稳定剂，包括下述组分：甘油200g/L，甘氨酸0.1 mol/L，聚乙二醇16 mmol/L，蔗糖40 mmol/L，溶剂为双蒸水。
实验效果
按照以上实施方案并各选用4个浓度水平，分别选用不同因素不同浓度水平进行正交试验，按照设计规定的水平进行试验，共16组平行试验。记录试验数据后，按照正交表的极差和方差分析方法分析所得以下结论。
　正交试验的因素和水平
结论一：通过前四组中的甘油和甘氨酸的正交比较发现甘油和甘氨酸都有提高酶稳定作用但是不同的浓度效果不同，当甘油是200g/L，甘氨酸是0.1mol/L时保护效果最佳。
结论二：当在甘油和甘氨酸混合剂的基础上加入聚乙二醇时保护作用进一步加强，其中PEG的最适浓度为10 mmol/L；同样在甘油和甘氨酸混合剂的基础上加入蔗糖也有进一步保护作用其中蔗糖的最适浓度为50mmol/L。
结论三：当把四种保护剂同时加到荧光素酶缓冲液中保护作用最强，通过正交试验发现最佳组合是甘油200g/L，甘氨酸0.1mol/L，聚乙二醇10mmol/L，蔗糖50mmol/L。
以上仅是本发明的特征实施范例，对本发明保护范围不构成任何限制。凡采用同等交换或者等效替换而形成的技术方案，均落在本发明权利保护范围之内。

Claims (6)

1. 一种虫荧光素酶稳定剂，其特征在于：它包括以下组分：甘油100-250g/L，甘氨酸0.08-0.12mol/L，溶剂为双蒸水。
2. 根据权利要求1所述的虫荧光素酶稳定剂，其特征在于：它还包括聚乙二醇8-16mmol/L和/或蔗糖40-60mmol/L。
3. 根据权利要求1或2所述的虫荧光素酶稳定剂，其特征在于：所述甘油为200g/L。
4. 根据权利要求1或2所述的虫荧光素酶稳定剂，其特征在于：所述甘氨酸为0.1mol/L。
5. 根据权利要求2所述的虫荧光素酶稳定剂，其特征在于：所述聚乙二醇为10mmol/L。
6. 根据权利要求2所述的虫荧光素酶稳定剂，其特征在于：所述蔗糖为50mmol/L。
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