CN105010333A - 杀菌剂及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种杀菌剂及其应用。该杀菌剂溶液是以硫胺素二月桂基硫酸盐、乙醇和水为活性成分的杀菌剂溶液。所述杀菌剂溶液中各组分的组成具体如下：硫胺素二月桂基硫酸盐的体积百分浓度为0.1％-1.0％，具体为0.1％-0.5％或0.5％-1.0％。乙醇的体积百分浓度为5％-20％；余量为水。采用本杀菌剂处理1min可达到至少降低E.coli？O157:H7、沙门氏菌和单增李斯特菌7log？CFU/mL的效果，如用于清洗蔬菜如菠菜，按体积/质量比10L：1Kg将杀菌剂与蔬菜混匀，1200rpm/min振荡清洗1分钟，可达到至少降低E.coli？O157:H74log？CFU/叶的效果。

Description

杀菌剂及其应用

技术领域

本发明涉及一种杀菌剂及其应用。

背景技术

蔬菜在采前至采后整个供应链期间均存在污染E.coli O157：H7的情况，消费者食用污染E.coli O157：H7的蔬菜，易引发腹泻、内出血等危害健康的病症，严重者会导致死亡。目前采用的控制蔬菜E.coli O157：H7的方法主要为物理杀菌方法和化学杀菌方法，其中物理杀菌方法包括辐照、电子束、紫外线等方法，化学方法包括杀菌剂如次氯酸钠、电解水(含次氯酸钠)、二氧化氯及表面活性剂等，它们分别存在如下缺陷：

1、物理杀菌方法具有无污染的优点，但需要专门的设备及防护要求，需要到专门的机构进行杀菌，紫外杀菌虽然可以实现工厂生产应用，但因蔬菜表面结构复杂，导致杀菌效果不佳。

2.化学杀菌方法具有应用方便的优点，在加工厂可以普遍使用，但含氯剂如次氯酸钠容易与有机物反应，形成致癌物；二氧化氯不稳定且气味很大，因而寻找次氯酸钠的替代物成为蔬菜采后致病微生物控制的方向。表面活性剂具有安全的特点，但存在杀菌效果不佳的问题，需要进一步的开发研制。

发明内容

本发明的目的是提供一种杀菌剂溶液及其应用。

本发明提供了一种杀菌剂溶液，该杀菌剂溶液是以硫胺素二月桂基硫酸盐(TDS)、乙醇和水为活性成分的杀菌剂。

当然，所述杀菌剂溶液也可只由上述硫胺素二月桂基硫酸盐、乙醇和水组成；

所述杀菌剂溶液中各组分的组成具体如下：硫胺素二月桂基硫酸盐的体积百分浓度为0.1％-1.0％，具体为0.1％-0.5％或0.5％-1.0％；

所述乙醇的体积百分浓度为5％-20％；

余量为水。 

所述乙醇的体积百分浓度具体可为5-20％；

再具体的，所述杀菌剂溶液可为由如下体积百分浓度的各组分组成：

硫胺素二月桂基硫酸盐0.1％、乙醇20％，余量为水；

硫胺素二月桂基硫酸盐0.5％、乙醇5-20％，余量为水；

硫胺素二月桂基硫酸盐1.0％、乙醇5-20％，余量为水。

所述菌具体可选自大肠杆菌、沙门氏菌和李斯特菌中的至少一种；

其中，所述大肠杆菌具体为E.coli O157：H7；所述李斯特菌具体为单增李斯特菌。

另外，上述本发明提供的杀菌剂溶液在杀菌中的应用，也属于本发明的保护范围。其中，所述菌选自大肠杆菌、沙门氏菌和李斯特菌中的至少一种；

其中，所述大肠杆菌具体为E.coli O157：H7；所述李斯特菌具体为单增李斯特菌。

所述杀菌包括如下步骤：

将前述本发明提供的杀菌剂溶液与杀菌对象混合。

所述杀菌对象为蔬菜，具体为菠菜；

所述杀菌剂溶液与杀菌对象的体积与质量比≥2L：1Kg，具体为10L：1Kg；

所述杀菌还包括如下步骤：

在所述混合步骤之后，对体系进行振荡清洗；

所述振荡清洗步骤中，振荡的速率具体为大于0，更具体为1200rpm/min；

振荡清洗的时间具体为不小于1分钟，更具体为1分钟；

所述振荡清洗的部位具体为蔬菜的表面。本发明采用表面活性剂硫胺素二月桂基硫酸盐结合20％乙醇的方法，其中20％乙醇为助溶剂，在1小时内无杀菌作用，硫胺素二月桂基硫酸盐同时也是一种营养补充剂，1g的生理功能相当于盐酸硫胺素(V_B1)约0.41g，因其表面活性作用强，具有乳化作用，易与油脂类混合，故多用于人造奶油、色拉油、蛋黄酱、白米、小麦粉、面包、面条、酱油、乳制品、胶姆糖、糕点等。本方法解决了生产上常用化学杀菌方法的缺点：一，次氯酸钠潜在的化学反应问题；二，无刺激性气味的问题，其优点和积极效果如下：

1、在叶类蔬菜上如菠菜的杀菌效果达到甚至优于次氯酸钠的效果。

2、易于配制，采用20％乙醇作为助溶剂，解决了硫胺素二月桂基硫酸盐41℃溶入水的问题。

3、由于是一种营养补充剂，不存在污染环境的问题。

4、采用本方法清洗蔬菜如菠菜，可达到至少降低E.coli O157:H7 4 log CFU/叶的效果。

附图说明

图1为TDS对E.coli O157:H7数量的影响。

图2为溶剂乙醇对E.coli O157:H7的影响。

图3为TDS对沙门氏菌数量的影响。

图4为TDS对单增李斯特菌数量的影响。

图5为TDS对E.coli O157:H7细胞形态的影响；其中，A.完整的E.coli O157:H7细胞；B.含20％乙醇的1％TDS处理1min后的E.coli O157:H7。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但本发明并不限于以下实施例。所述方法如无特别说明均为常规方法。所述原材料如无特别说明均能从公开商业途径获得。

实施例1、表面活性剂硫胺素二月桂基硫酸盐(TDS)杀菌效果

TDS对E.coli O157:H7的杀灭效果。 

方法：采用100％乙醇配制TDS母液，然后使用无菌水稀释分别得到浓度为0.1％、0.5％和1.0％的TDS工作液，其乙醇浓度分别约为2％，10％和20％。用移液枪各吸取10μL E.coli O157:H7(浓度约为9log CFU/mL)，分别加到990μL上述不同浓度的TDS溶液中，混匀，室温下放置1min和24hrs，然后吸取100μL涂板(胰蛋白胨大豆琼脂培养基，TSA)，37℃培养24h，计数，实验数值为3次重复的平均值。

所得结果如表1所示。

表1、TDS对E.coli O157:H7数量的影响

注：E.coli O157:H7初始数量为7.14±0.09log CFU/ml.

由表1可知，TDS具有较好的杀灭E.coli O157:H7效果，在离体实验中，取得杀灭7log CFU/mL E.coli O157:H7的优势效果。

TDS对沙门氏菌的杀灭效果。

按照与上相同的步骤，仅将乙醇浓度固定为20％，同时将E.coli O157:H7替换为沙门氏菌(浓度均为7log CFU/mL)，24hrs的室温放置时间替换为1hr。所得结果见图3。由图可知，含有20％乙醇的0.1％-1.0％TDS处理1min可杀灭7log CFU/mL的沙门氏菌。

TDS对单增李斯特菌的杀灭效果。

方法：采用100％乙醇配制TDS母液，然后使用无菌水稀释分别得到浓度为0.1％、0.5％和1％的TDS工作液，乙醇浓度分别约为1％、5％、10％和20％。用移液枪各吸 取10μL单增李斯特菌(浓度约为7log CFU/mL)，分别加到990μL上述不同浓度的TDS溶液中，混匀，室温下放置1min和1hr，然后吸取100μL涂板(TSA)，37℃培养24h，计数，实验数值为3次重复的平均值。

所得结果见图4。由图可知，含有20％乙醇的0.1％-1.0％TDS及含有≥5％乙醇的≥0.5％的TDS处理1min均可杀灭7log CFU/mL的单增李斯特菌。

对TDS的作用机理(对E.coli O157:H7细胞的显微结构影响)进行研究，实验方法如下：取0.01mL约9log CFU/mL E.coli O157:H7，分别加入0.99mL含有20％乙醇的1％TDS和无菌水(对照)溶液中处理1min，各取0.1mL加入0.9mL戊二醛固定24小时，然后按照扫描电镜样品制备方法，采用1％锇酸固定，系列乙醇脱水，醋酸异戊酯置换，SPI临界点干燥，喷金，扫描电镜观察。

所得结果如图5所示。

由图5可知，TDS杀灭E.coli O157:H7的原理为TDS导致E.coli O157:H7细胞变形、皱缩、破裂，从而造成E.coli O157:H7死亡。

清洗(清水、20％乙醇、200mg/L次氯酸钠和1.0％TDS(20％乙醇作溶剂)及贮藏(4℃)对菠菜E.coli O157:H7数量的影响研究。

实验方法如下：分别配制20％乙醇、200mg/L次氯酸钠和1.0％TDS(20％乙醇作溶剂)及清水，按照体积/质量比10：1，加入接种0.1mL约9log CFU/mL E.coli O157:H7的菠菜叶片，采用1200rpm/min振荡1min，实验3次，每次3个重复，每个处理分别取处理前、处理后的叶片，按照微生物检测方法，进行均质及适宜的梯度稀释，取100μL涂板(TSA)，37℃培养24h，计数，实验数值为9次重复的平均值。

所得结果如表2所示。

表2、不同清洗方法及贮藏(4℃)对菠菜E.coliO157:H7数量的影响

由表2可知，采用清水、20％乙醇清洗后，菠菜上的E.coli O157:H7分别减少1.76、1.72log CFU/叶,而采用200mg/L次氯酸钠和1.0％TDS清洗，则减少了E.coli O157:H74.42-4.80log CFU/叶。

Claims (7)

1.一种杀菌剂溶液，其活性成分为硫胺素二月桂基硫酸盐、乙醇和水。

2.根据权利要求1所述的杀菌剂溶液，其特征在于：所述杀菌剂溶液由硫胺素二月桂基硫酸盐、乙醇和水组成；或者，

所述杀菌剂溶液中各组分的组成具体如下：硫胺素二月桂基硫酸盐的体积百分浓度为0.1％-1.0％；

所述乙醇的体积百分浓度为5％-20％；

余量为水。

3.根据权利要求1-2中任一所述的杀菌剂溶液，其特征在于：所述菌选自大肠杆菌、沙门氏菌和李斯特菌中的至少一种；

其中，所述大肠杆菌具体为E.coli O157：H7；所述李斯特菌具体为单增李斯特菌。

4.权利要求1-3中任一所述杀菌剂溶液在杀菌中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述菌选自大肠杆菌、沙门氏菌和李斯特菌中的至少一种；

其中，所述大肠杆菌具体为E.coli O157：H7；所述李斯特菌具体为单增李斯特菌。

6.根据权利要求4或5所述的应用，其特征在于：所述杀菌包括如下步骤：

将权利要求1-3中任一所述杀菌剂溶液与杀菌对象混合。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述杀菌对象为蔬菜，具体为菠菜；

所述杀菌剂溶液与杀菌对象的体积与质量比≥2L：1Kg，具体为10L：1Kg；

所述杀菌还包括如下步骤：

在所述混合步骤之后，对体系进行振荡清洗；

所述振荡清洗步骤中，振荡的速率具体为大于0，更具体为1200rpm/min；

振荡清洗的时间具体为不小于1分钟，更具体为1分钟；

所述振荡清洗的部位具体为蔬菜的叶片。