CN104997034A - 抗氧化沙棘hg型果胶膳食纤维及其分离纯化方法与应用 - Google Patents
抗氧化沙棘hg型果胶膳食纤维及其分离纯化方法与应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104997034A CN104997034A CN201510433348.4A CN201510433348A CN104997034A CN 104997034 A CN104997034 A CN 104997034A CN 201510433348 A CN201510433348 A CN 201510433348A CN 104997034 A CN104997034 A CN 104997034A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- dietary fiber
- buckthorn
- sea
- oxidant
- pectin
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 235000013325 dietary fiber Nutrition 0.000 title claims abstract description 62
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 title claims abstract description 62
- 239000001814 pectin Substances 0.000 title claims abstract description 61
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 title claims abstract description 61
- 235000003145 Hippophae rhamnoides Nutrition 0.000 title claims abstract description 59
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 238000000746 purification Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 230000003064 anti-oxidating effect Effects 0.000 title claims abstract description 11
- 240000000950 Hippophae rhamnoides Species 0.000 title abstract 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 title description 3
- 241000229143 Hippophae Species 0.000 claims abstract description 73
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 claims abstract description 34
- 235000003935 Hippophae Nutrition 0.000 claims abstract description 16
- AEMOLEFTQBMNLQ-YMDCURPLSA-N D-galactopyranuronic acid Chemical compound OC1O[C@H](C(O)=O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-YMDCURPLSA-N 0.000 claims abstract description 8
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 238000009826 distribution Methods 0.000 claims abstract description 8
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims abstract description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 5
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 claims abstract description 5
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 claims description 34
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 claims description 33
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 24
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 23
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 22
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 22
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 22
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 19
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims description 14
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 13
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 12
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 12
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 12
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 12
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 11
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 claims description 10
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 10
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 9
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 claims description 8
- GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N DEAE-cellulose Chemical compound OC1C(O)C(O)C(CO)O[C@H]1O[C@@H]1C(CO)OC(O)C(O)C1O GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N 0.000 claims description 7
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 7
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 7
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 6
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 6
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 6
- 238000005204 segregation Methods 0.000 claims description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 4
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 claims description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 3
- 230000005070 ripening Effects 0.000 claims description 3
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 9
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 abstract description 5
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 abstract description 4
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- 239000011575 calcium Substances 0.000 abstract description 4
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 abstract description 4
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 abstract description 4
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 abstract description 4
- 239000011591 potassium Substances 0.000 abstract description 4
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 abstract description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 abstract description 4
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 abstract description 4
- 239000000835 fiber Substances 0.000 abstract description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 abstract 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 abstract 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 abstract 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 abstract 1
- -1 butylhydroxy Chemical group 0.000 description 15
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 13
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 11
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 10
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 6
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 5
- HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N dpph Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+](=O)[O-])=CC([N+]([O-])=O)=C1[N]N(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M Superoxide Chemical compound [O-][O] OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 4
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 4
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 4
- 230000002000 scavenging effect Effects 0.000 description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 3
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 3
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 3
- 239000001117 sulphuric acid Substances 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- 235000010354 butylated hydroxytoluene Nutrition 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 238000004192 high performance gel permeation chromatography Methods 0.000 description 2
- QWPPOHNGKGFGJK-UHFFFAOYSA-N hypochlorous acid Chemical compound ClO QWPPOHNGKGFGJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 2
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 2
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 2
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 2
- 238000010183 spectrum analysis Methods 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- SPSPIUSUWPLVKD-UHFFFAOYSA-N 2,3-dibutyl-6-methylphenol Chemical compound CCCCC1=CC=C(C)C(O)=C1CCCC SPSPIUSUWPLVKD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 2-deoxy-D-ribose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)CC=O ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 0.000 description 1
- RXGJTUSBYWCRBK-UHFFFAOYSA-M 5-methylphenazinium methyl sulfate Chemical compound COS([O-])(=O)=O.C1=CC=C2[N+](C)=C(C=CC=C3)C3=NC2=C1 RXGJTUSBYWCRBK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- ZGZLYKUHYXFIIO-UHFFFAOYSA-N 5-nitro-2h-tetrazole Chemical compound [O-][N+](=O)C=1N=NNN=1 ZGZLYKUHYXFIIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 229940123457 Free radical scavenger Drugs 0.000 description 1
- 229920002488 Hemicellulose Polymers 0.000 description 1
- 208000035150 Hypercholesterolemia Diseases 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 229920001202 Inulin Polymers 0.000 description 1
- 229920001491 Lentinan Polymers 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 102000003896 Myeloperoxidases Human genes 0.000 description 1
- 108090000235 Myeloperoxidases Proteins 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 1
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 1
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000061458 Solanum melongena Species 0.000 description 1
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 1
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- AEMOLEFTQBMNLQ-BKBMJHBISA-N alpha-D-galacturonic acid Chemical group O[C@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-BKBMJHBISA-N 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001142 anti-diarrhea Effects 0.000 description 1
- 230000003143 atherosclerotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 208000030303 breathing problems Diseases 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001460 carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000005660 chlorination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 210000002249 digestive system Anatomy 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 238000005562 fading Methods 0.000 description 1
- 239000010408 film Substances 0.000 description 1
- 230000007760 free radical scavenging Effects 0.000 description 1
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 description 1
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 1
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 1
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N inulin Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)OC[C@]1(OC[C@]2(OC[C@]3(OC[C@]4(OC[C@]5(OC[C@]6(OC[C@]7(OC[C@]8(OC[C@]9(OC[C@]%10(OC[C@]%11(OC[C@]%12(OC[C@]%13(OC[C@]%14(OC[C@]%15(OC[C@]%16(OC[C@]%17(OC[C@]%18(OC[C@]%19(OC[C@]%20(OC[C@]%21(OC[C@]%22(OC[C@]%23(OC[C@]%24(OC[C@]%25(OC[C@]%26(OC[C@]%27(OC[C@]%28(OC[C@]%29(OC[C@]%30(OC[C@]%31(OC[C@]%32(OC[C@]%33(OC[C@]%34(OC[C@]%35(OC[C@]%36(O[C@@H]%37[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O%37)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%36)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%35)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%34)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%33)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%32)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%31)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%30)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%29)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%28)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%27)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%26)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%25)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%24)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%23)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%22)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%21)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%20)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%19)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%18)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%17)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%16)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%15)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%14)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%13)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%12)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%11)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%10)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O9)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O8)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O7)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O6)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N 0.000 description 1
- 229940029339 inulin Drugs 0.000 description 1
- 229940115286 lentinan Drugs 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005272 metallurgy Methods 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000007639 printing Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 1
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 238000010408 sweeping Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- YMBCJWGVCUEGHA-UHFFFAOYSA-M tetraethylammonium chloride Chemical compound [Cl-].CC[N+](CC)(CC)CC YMBCJWGVCUEGHA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009941 weaving Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
- C08B37/0045—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid alpha-D-Galacturonans, e.g. methyl ester of (alpha-1,4)-linked D-galacturonic acid units, i.e. pectin, or hydrolysis product of methyl ester of alpha-1,4-linked D-galacturonic acid units, i.e. pectinic acid; Derivatives thereof
- C08B37/0048—Processes of extraction from organic materials
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
Abstract
本发明涉及一种抗氧化沙棘HG型果胶膳食纤维，该果胶膳食纤维是指整体形态由长5~100μm、直径0.02~3.7μm的纤维丝交联而成的大小不同、表面平整光滑、分布均匀的片状结构，其糖链化学结构以α-(1→4)-D-Gal<i>p</i>A残基形成主链的HG型果胶；其分子量为4.4~180.7？kDa，半乳糖醛酸含量≥95%，葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖总含量＜5%，蛋白质含量＜1%，余量为人体必需金属元素。本发明从沙棘果实中分离纯化得到一种具有抗氧化活性的HG型果胶膳食纤维，其具有的膳食纤维功能性结构不仅能够有效阻止自由基的产生，而且能够显著清除已产生的自由基。此外，还含有少量的钠、镁、钾、铁、钙等人体必需金属元素。同时，本发明还公开了该果胶膳食纤维的纯化方法及应用。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及抗氧化沙棘HG型果胶膳食纤维及其分离纯化方法与应用。
背景技术
氧化应激是指细胞活性氧（reactive oxygen species，ROS）生成和防止ROS损伤的抗氧化能力之间失去平衡的状态，倾向于氧化，自由基的产生超过了抗氧化剂的防御能力，而导致的细胞损伤（Gupta-Elera Gaytri et al. European Journal of Cancer Prevention, 2012, 21: 155-162。研究表明，ROS与多种疾病有息息相关，在动脉粥样硬化、糖尿病、冠心病、皮肤病、呼吸道疾病等疾病中，ROS都起着重要作用，尤其是在癌症和心血管疾病等发病率日益增高的疾病中的作用，已引起当今各国学者的广泛关注（Ishdorj Ganchimeg et al. Leukemia & Lymphoma, 2012, 53: 26-33; Lijnen Paul et al. Cardiovascular Therapeutics, 2012, 30: e1-e8; Vurusaner Beyza et al. Free Radical Biology and Medicine, 2012, 52: 7-18）。
目前，由于合成抗氧化剂如二丁基羟基甲苯（BHT）、丁基羟基茵香醚（BHA）等多数技术复杂，成本较高，且有较大的毒性甚至致癌作用，使人们对合成抗氧化剂产生疑虑和排斥心理，临床应用有较大的局限性，而天然抗氧化剂安全，低毒，符合新世纪人们对健康的需求，因此，从资源丰富的天然药物中寻找高效、低毒、价廉的抗氧化剂已成为该领域研究的一个重要方向，其抗氧化作用机制的研究，对进一步天然抗氧化药物的研究开发具有重要意义。
膳食纤维是指植物中天然存在的、提取的或合成的碳水化合物的聚合物，其聚合度DP≥3、不能被人体小肠消化吸收、对人体有健康意义的物质，包括纤维素、半纤维素、果胶、菊粉及其它一些膳食纤维单体成分等（《GBZ 21922-2008 食品营养成分基本术语》）。膳食纤维是健康饮食不可缺少的，纤维在保持消化系统健康上扮演着重要的角色，同时摄取足够的纤维也可以预防心血管疾病、癌症、糖尿病以及其它疾病。其中，Homogalacturonans（简称HG型）果胶类膳食纤维是由α-D-半乳糖醛酸残基通过1 ,4糖苷键连接而成的线性糖链，由100~500个GaUA 残基组成。由于具有良好的胶凝性和乳化性，HG型果胶类膳食纤维在食品工业、医药、化妆品、纺织、印染、冶金、烟草等行业中都有广泛的应用。近年来研究表明，果胶类多糖具有抗菌、止血、消肿、解毒、止泻、降血脂、抗辐射等作用，还是一种优良的药物制剂基质，可单独或与其它制剂合用配制软膏、膜、栓剂、微囊等药物制剂。
而目前，已公开或授权的专利中还没有抗氧化HG型果胶膳食纤维的报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种抗氧化沙棘HG型果胶膳食纤维。
本发明所要解决的另一个技术问题是提供该抗氧化沙棘HG型果胶膳食纤维的分离纯化方法。
本发明所要解决的第三个技术问题是提供该抗氧化沙棘HG型果胶膳食纤维的应用。
为解决上述问题，本发明所述的抗氧化沙棘HG型果胶膳食纤维，其特征在于：该果胶膳食纤维是指整体形态由长5~100μm、直径0.02~3.7μm的纤维丝交联而成的大小不同、表面平整光滑、分布均匀的片状结构，其糖链化学结构以α-(1→4)-D-GalpA残基形成主链的HG型果胶；其分子量为4.4~180.7 kDa，半乳糖醛酸含量≥95%，葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖总含量＜5%，蛋白质含量＜1%，余量为人体必需金属元素。
如上所述的抗氧化沙棘HG型果胶膳食纤维的分离纯化方法，包括以下步骤：
⑴将沙棘果加水经微波-超声波协同提取，得到提取液，该提取液经离心去除沉淀，收集上清液A；所述上清液A在温度为60~80℃的条件下浓缩至原体积的20~40%后，得到浓缩液，该浓缩液用其质量3~4倍且体积浓度为95~100%的乙醇沉淀得到多糖沉淀；所述多糖沉淀经冷冻干燥得沙棘多糖；
⑵将所述沙棘多糖按其质量的10~20倍加水复溶，经离心去除沉淀，得到上清液B，该上清液B经DEAE-纤维素层析柱层析后，依次用2~3倍柱体积的蒸馏水和0.5 mol/L NaCl水溶液洗脱，并根据糖含量分布曲线收集0.5 mol/L NaCl水溶液的洗脱液A；所述洗脱液A依次经透析除盐、冷冻干燥，得到沙棘酸性多糖；
⑶将所述沙棘酸性多糖按其质量的5~10倍加水溶解后，用Sepharose CL-6B层析柱纯化，并根据糖含量分布曲线收集4.4~180.7 kDa分子量范围的洗脱液B；所述洗脱液B依次经透析除盐、冷冻干燥，即得沙棘HG果胶型膳食纤维。
所述步骤⑴中的沙棘果是指沙棘的成熟果实。
所述步骤⑴中的微波-超声波协同提取条件是指料液质量比为1：15~25，微波功率为340~400W，超声波功率为800~860W，提取总时间为20~32min，温度为90~100℃。
所述步骤⑴和所述步骤⑵中的离心条件均是指离心转速为4000~10000 rpm，离心时间为10~60 min。
所述步骤⑴和所述步骤⑵及所述步骤⑶中的冷冻干燥条件均是指真空度10~100Pa、温度为-55℃~ -70℃的条件下冷冻干燥24~72h。
所述步骤⑵的DEAE-纤维素层析柱层析的条件是指色谱柱直径10~30cm、长度50~100cm，流动相依次为蒸馏水和0.5 mol/L NaCl，流速为20~40cm/h。
所述步骤⑵和所述步骤⑶中的透析除盐条件均是指透析袋截留分子量500~3500Da，蒸馏水中透析24~48h。
所述步骤⑶中的Sepharose CL-6B层析柱纯化条件是指色谱柱直径1~5cm、长度80~120cm，流动相为0.05~0.5mol/L NaCl水溶液，流速为10~20cm/h。
如上所述的抗氧化沙棘HG型果胶膳食纤维的应用，其特征在于：在具有抗氧化功能产品中至少包含有该抗氧化沙棘HG型果胶膳食纤维。
本发明与现有技术相比具有以下优点：
1、本发明从沙棘果实中分离纯化得到一种具有抗氧化活性的HG型果胶膳食纤维，其具有的膳食纤维功能性结构不仅能够有效阻止自由基的产生，而且能够显著清除已产生的自由基。此外，还含有少量的钠、镁、钾、铁、钙等人体必需金属元素。
2、本发明抗氧化沙棘HG型果胶膳食纤维兼具膳食纤维和天然抗氧化剂的功能，在制备用于氧化应激相关疾病如肿瘤、高血压、高胆固醇血症、高血糖等的药品及保健食品中有着重要作用，具有极高的应用价值和广阔的市场前景。
3、本发明抗氧化沙棘HG型果胶膳食纤维经PMP柱前衍生化法分析（参见图3），主要由95%以上的半乳糖醛酸组成，还含有少量的葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖；考马斯亮蓝法检测，其蛋白质含量＜1%；经Sepharose CL-6B分子筛柱层析和HPGPC分析（参见图2和图3），分子量分布范围4.4~180.7 kDa；红外光谱和核磁共振波谱分析（参见图4、图5），其糖链化学结构是以α-(1→4)-D-GalpA残基形成直链HG型果胶。扫描电镜分析发现（参见图6），沙棘HG果胶型膳食纤维显现出由长5~100μm、直径0.02~3.7μm的纤维丝交联而成的大小不同的片状结构，且表面平整光滑、分布均匀。X射线能谱分析表明（参见图7），沙棘HG果胶型膳食纤维除了含有53.47%的碳元素和43.64%的氧元素以外，还含有少量的钠、镁、钾、铁、钙等人体必需金属元素。
4、经抗氧化能力评价结果表明，本发明沙棘HG果胶型膳食纤维不仅能够有效阻止自由基的产生，而且能够显著清除已产生的自由基。其自由基产生必需中间体O2-·清除效果的IC50值为6.74 mg/mL，H2O2清除效果的IC50值为3.44 mg/mL，DPPH自由基清除效果的IC50值为4.20 mg/mL，羟基自由基（·OH）清除效果的IC50值为1.26 mg/mL。
沙棘HG果胶型膳食纤维阻止自由基产生活性分析采用自由基产生必需中间体超氧负离子（O2 -·）清除实验和H2O2清除实验，自由基清除活性分析采用DPPH自由基清除实验和羟基自由基（·OH）清除实验。
⑴超氧负离子（O2-·）清除实验：
活性氧指的是一系列由氧产生的化学活性分子，大量研究表明其与人体的衰老以及多种疾病（肿瘤、心脑血管等）密切相关。O2-·作为活性氧的一种，由氧分子在自然条件下得到一个电子而产生，其活性并不很强。但是，它能够在自然条件或过氧化物歧化酶的作用下得到一个电子成为H2O2，继而产生活性极强的·OH。本实验采用PMS-NADH-NBT体系测定多糖的O2 -·清除能力。
具体操作：取1 mL不同浓度样品溶液（0.25~4 mg/mL），加入1 mL氯化硝基四氮唑NBT（300 μM），1 mL还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NADH（936 μM），加入1 mL吩嗪硫酸二甲酯PMS（120 μM）启动反应，25℃水浴反应5 min后，测定其560 nm处的吸光值（A560 nm）。0.1 M pH 7.4的磷酸盐缓冲液作为空白对照，抗坏血酸为阳性对照。按下面公式计算超氧负离子（O2 -·）清除率：
超氧负离子（O2 -·）清除率=(1–Asample/Acontrol)×100%，其中Asample为测试样品的A560 nm，Acontrol为空白对照的A560 nm。
⑵H2O2清除实验：
H2O2也是活性氧的一种，虽属中等活性，但却是许多活性较强的自由基产生过程的中间体，如H2O2在髓过氧化物酶的作用下，参与产生次氯酸（HClO），在金属离子存在下，参与产生羟自由基。因此，清除H2O2就阻止了自由基产生的链式反应。本实验采用辣根过氧化物酶法测定多糖对H2O2的清除作用。
具体操作：取1 mL不同浓度样品溶液（0.25~4 mg/mL），加入0.4 mL H2O2（5 mM），在室温下放置20 min，再加入0.6 mL辣根过氧化物酶（HRpase 300 μg/mL，苯酚红4.5 mM在100 mM pH7.4磷酸缓冲液中），静置10 min后，测定其610 nm处的吸光值A610 nm。按下面公式计算多糖的H2O2清除率：
H2O2清除率=(1–Asample/Acontrol)×100%，其中Asample为测试样品的A610 nm，Acontrol为空白对照的A610 nm。
⑶DPPH自由基清除实验：
DPPH是一种稳定的有机自由基，其乙醇溶液呈紫红色，在可见光区最大吸收峰为517 nm。当存在自由基清除剂时，由于与其单电子配对而使其逐渐消失，其褪色程度与所接受的电子数成定量关系，因而可用分光光度法进行定量分析。利用DPPH的以上特性，用分光光度法测定加入胶陀螺多糖后混合溶液517 nm波长处的吸光值（A517 nm）的变化程度可以反映其对有机自由基的消除能力。
具体操作：取4 mL不同浓度的多糖溶液（0.5~4 mg/mL），与0.1 M DPPH甲醇溶液1 mL混合，剧烈振荡，于暗处静置15 min，再于室温下静置20 min。蒸馏水作为空白对照，抗坏血酸为阳性对照。用分光光度计测定反应溶液的A517 nm。按照下面的公式计算多糖的DPPH清除率：
DPPH清除率=(1–Asample/Acontrol)×100%，其中Asample为测试样品的A517 nm，Acontrol为空白对照的A517 nm。
⑷羟基自由基（·OH）清除实验：
羟基自由基（·OH）是代谢过程中产生的非常活泼的自由基，毒性很大，能够造成蛋白质、核酸、脂类等生物大分子的损伤，从而导致体内代谢紊乱，引起许多病理变化。本研究采用脱氧核糖-铁体系法对多糖的羟基自由基（·OH）清除能力进行测定。
具体操作：依次向试管中加入50 mM pH 7.5的磷酸盐缓冲液0.4 mL，0.5~10 mg/mL的样品溶液0.1 mL（对照用蒸馏水），1 mM的EDTA溶液0.1 mL，10 mmol/L的H2O2 0.1 mL，2 mM的抗坏血酸溶液0.1 mL，60 mM的脱氧核糖溶液0.1 mL（样品空白不加），1 mM的FeCl3溶液0.1 mL，各管最终体积为1.0 mL，37℃水浴1 h，取出后迅速加入10%的三氯乙酸1.0 mL终止反应，再加入1%硫代巴比妥酸1.0 mL，沸水浴反应15 min后立即冷却，于532 nm波长处测定吸光值（A532 nm），按下式计算清除率：
羟基自由基（·OH）清除率=(1–Asample/Acontrol)×100%，其中Asample为测试样品的A532 nm，Acontrol为空白对照的A532 nm。
⑸统计方法：
所获得数值型实验数据以SPSS13.0软件进行统计分析，半数抑制浓度（IC50，mg/mL）采用概率单位回归计算得出，多组样本之间的两两比较采用方差分析q检验。检验水准α=0.01。
所得沙棘HG果胶型膳食纤维抗的抗氧化作用如表1所示。IC50值可以体现天然产物的抗氧化能力，是抗氧化功能评价的一个常用指标，该值没有一个界限值，通常数值越小表明抗氧化能力越强。从上述结果可以看出，沙棘HG果胶型膳食纤维的抗氧化能力显著优于阳性对照物香菇多糖。因此，可以看出本方法分离纯化得到的沙棘HG果胶型膳食纤维具有良好的抗氧化活性。
表1 沙棘HG果胶型膳食纤维抗氧化能力评价结果
附图说明
下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明。
图1为本发明沙棘多糖的DEAE-纤维素柱层析洗脱图。
图2为本发明沙棘酸性糖的Sepharose CL-6B柱层析洗脱图。
图3为本发明抗氧化沙棘HG果胶型膳食纤维的HPGPC洗脱图。
图4为本发明抗氧化沙棘HG果胶型膳食纤维的红外光谱图。
图5为本发明抗氧化沙棘HG果胶型膳食纤维的13C核磁共振波谱图。
图6为本发明抗氧化沙棘HG果胶型膳食纤维的扫面电镜照片。
图7为本发明抗氧化沙棘HG果胶型膳食纤维的X射线能谱图。
具体实施方式
实施例1 抗氧化沙棘HG型果胶膳食纤维，该果胶膳食纤维是指整体形态由长5~100μm、直径0.02~3.7μm的纤维丝交联而成的大小不同、表面平整光滑、分布均匀的片状结构，其糖链化学结构以α-(1→4)-D-GalpA残基形成主链的HG型果胶；其分子量为4.4~180.7 kDa，半乳糖醛酸含量≥95%，葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖总含量＜5%，蛋白质含量＜1%，余量为人体必需金属元素（钠、镁、钾、铁、钙等）。
实施例2 该抗氧化沙棘HG型果胶膳食纤维的分离纯化方法，包括以下步骤：
⑴将沙棘果加水经微波-超声波协同提取，得到提取液，该提取液经离心去除沉淀，收集上清液A；上清液A在温度为60~80℃的条件下浓缩至原体积的20~40%后，得到浓缩液，该浓缩液用其质量3~4倍且体积浓度为95~100%的乙醇沉淀得到多糖沉淀；多糖沉淀经冷冻干燥得沙棘多糖。所得沙棘多糖得率为10.98%，糖含量为48.06 %（苯酚-硫酸法，以半乳糖醛酸计），抗氧化能力TEAC为730.22 mg TE/100g。
其中：沙棘果是指沙棘（Hippophae rhamnoides Linn.）的成熟果实。
微波-超声波协同提取条件是指料液质量比（g：g）为1：15~25，微波功率为340~400W，超声波功率为800~860W，提取总时间为20~32min，温度为90~100℃。
离心条件均是指离心转速为4000~10000 rpm，离心时间为10~60 min。
冷冻干燥条件均是指真空度10~100Pa、温度为-55℃~ -70℃的条件下冷冻干燥24~72h。
⑵将沙棘多糖按其质量的10~20倍加水复溶，经离心去除沉淀，得到上清液B，该上清液B经DEAE-纤维素层析柱层析后，依次用2~3倍柱体积的蒸馏水和0.5 mol/L NaCl水溶液洗脱（参见图1），并根据糖含量分布曲线收集0.5 mol/L NaCl水溶液的洗脱液A；洗脱液A依次经透析除盐、冷冻干燥，得到沙棘酸性多糖。所得沙棘酸性多糖得率为7.68%，糖含量为82.7 %（苯酚-硫酸法，以半乳糖醛酸计）。
其中：离心条件均是指离心转速为4000~10000 rpm，离心时间为10~60 min。
DEAE-纤维素层析柱层析的条件是指色谱柱直径10~30cm、长度50~100cm，流动相依次为蒸馏水和0.5 mol/L NaCl，流速为20~40cm/h。
透析除盐条件均是指透析袋截留分子量500~3500Da，蒸馏水中透析24~48h。
冷冻干燥条件均是指真空度10~100Pa、温度为-55℃~ -70℃的条件下冷冻干燥24~72h。
⑶将沙棘酸性多糖按其质量的5~10倍加水溶解后，用Sepharose CL-6B层析柱纯化（参见图2），并根据糖含量分布曲线收集4.4~180.7 kDa分子量范围的洗脱液B；洗脱液B依次经透析除盐、冷冻干燥，即得沙棘HG果胶型膳食纤维。所得沙棘HG果胶型膳食纤维得率为4.40%，糖含量为95.3 %（苯酚-硫酸法，以半乳糖醛酸计）。
其中：Sepharose CL-6B层析柱纯化条件是指色谱柱直径1~5cm、长度80~120cm，流动相为0.05~0.5mol/L NaCl水溶液，流速为10~20cm/h。
透析除盐条件均是指透析袋截留分子量500~3500Da，蒸馏水中透析24~48h。
冷冻干燥条件均是指真空度10~100Pa、温度为-55℃~ -70℃的条件下冷冻干燥24~72h。
实施例3 该抗氧化沙棘HG型果胶膳食纤维的应用是指：在具有抗氧化功能产品中至少包含有该抗氧化沙棘HG型果胶膳食纤维。
沙棘购自青海省海西蒙古族藏族自治州都兰县沙棘加工企业；提取装置为XH-300B微波超声波合成/萃取仪（北京祥鹄科技发展有限公司），冷冻干燥机为FD-2型冷冻干燥机（北京博医康实验仪器有限公司）。
上述实施例1~3中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
上述实施例1~3中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
Claims (10)
1.抗氧化沙棘HG型果胶膳食纤维，其特征在于：该果胶膳食纤维是指整体形态由长5~100μm、直径0.02~3.7μm的纤维丝交联而成的大小不同、表面平整光滑、分布均匀的片状结构，其糖链化学结构以α-(1→4)-D-GalpA残基形成主链的HG型果胶；其分子量为4.4~180.7 kDa，半乳糖醛酸含量≥95%，葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖总含量＜5%，蛋白质含量＜1%，余量为人体必需金属元素。
2.如权利要求1所述的抗氧化沙棘HG型果胶膳食纤维的分离纯化方法，包括以下步骤：
⑴将沙棘果加水经微波-超声波协同提取，得到提取液，该提取液经离心去除沉淀，收集上清液A；所述上清液A在温度为60~80℃的条件下浓缩至原体积的20~40%后，得到浓缩液，该浓缩液用其质量3~4倍且体积浓度为95~100%的乙醇沉淀得到多糖沉淀；所述多糖沉淀经冷冻干燥得沙棘多糖；
⑵将所述沙棘多糖按其质量的10~20倍加水复溶，经离心去除沉淀，得到上清液B，该上清液B经DEAE-纤维素层析柱层析后，依次用2~3倍柱体积的蒸馏水和0.5 mol/L NaCl水溶液洗脱，并根据糖含量分布曲线收集0.5 mol/L NaCl水溶液的洗脱液A；所述洗脱液A依次经透析除盐、冷冻干燥，得到沙棘酸性多糖；
⑶将所述沙棘酸性多糖按其质量的5~10倍加水溶解后，用Sepharose CL-6B层析柱纯化，并根据糖含量分布曲线收集4.4~180.7 kDa分子量范围的洗脱液B；所述洗脱液B依次经透析除盐、冷冻干燥，即得沙棘HG果胶型膳食纤维。
3.如权利要求2所述的抗氧化沙棘HG型果胶膳食纤维的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤⑴中的沙棘果是指沙棘的成熟果实。
4.如权利要求2所述的抗氧化沙棘HG型果胶膳食纤维的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤⑴中的微波-超声波协同提取条件是指料液质量比为1：15~25，微波功率为340~400W，超声波功率为800~860W，提取总时间为20~32min，温度为90~100℃。
5.如权利要求2所述的抗氧化沙棘HG型果胶膳食纤维的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤⑴和所述步骤⑵中的离心条件均是指离心转速为4000~10000 rpm，离心时间为10~60 min。
6.如权利要求2所述的抗氧化沙棘HG型果胶膳食纤维的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤⑴和所述步骤⑵及所述步骤⑶中的冷冻干燥条件均是指真空度10~100Pa、温度为-55℃~ -70℃的条件下冷冻干燥24~72h。
7.如权利要求2所述的抗氧化沙棘HG型果胶膳食纤维的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤⑵的DEAE-纤维素层析柱层析的条件是指色谱柱直径10~30cm、长度50~100cm，流动相依次为蒸馏水和0.5 mol/L NaCl，流速为20~40cm/h。
8.如权利要求2所述的抗氧化沙棘HG型果胶膳食纤维的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤⑵和所述步骤⑶中的透析除盐条件均是指透析袋截留分子量500~3500Da，蒸馏水中透析24~48h。
9.如权利要求2所述的抗氧化沙棘HG型果胶膳食纤维的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤⑶中的Sepharose CL-6B层析柱纯化条件是指色谱柱直径1~5cm、长度80~120cm，流动相为0.05~0.5mol/L NaCl水溶液，流速为10~20cm/h。
10.如权利要求1所述的抗氧化沙棘HG型果胶膳食纤维的应用，其特征在于：在具有抗氧化功能产品中至少包含有该抗氧化沙棘HG型果胶膳食纤维。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510433348.4A CN104997034B (zh) | 2015-07-23 | 2015-07-23 | 抗氧化沙棘hg型果胶膳食纤维及其分离纯化方法与应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510433348.4A CN104997034B (zh) | 2015-07-23 | 2015-07-23 | 抗氧化沙棘hg型果胶膳食纤维及其分离纯化方法与应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104997034A true CN104997034A (zh) | 2015-10-28 |
| CN104997034B CN104997034B (zh) | 2018-02-13 |
Family
ID=54370124
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510433348.4A Active CN104997034B (zh) | 2015-07-23 | 2015-07-23 | 抗氧化沙棘hg型果胶膳食纤维及其分离纯化方法与应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104997034B (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110790848A (zh) * | 2019-11-20 | 2020-02-14 | 新疆农业大学 | 沙棘总多糖的制备方法及其应用 |
| CN113549164A (zh) * | 2021-07-13 | 2021-10-26 | 中国科学院西北高原生物研究所 | 一种果胶类多糖亚硒酸酯化物及其制备方法和应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003189820A (ja) * | 2001-09-25 | 2003-07-08 | Nutrinova Nutrition Specialties & Food Ingredients Gmbh | 改良された製品特性を有するカプセル封入されたカロブファイバー、それの製造方法並びに使用法 |
| CN1454441A (zh) * | 2000-08-14 | 2003-11-05 | 诺基亚公司 | 提供模式选择进程的通信系统与方法 |
| CN101171266A (zh) * | 2005-02-28 | 2008-04-30 | 株式会社日冷食品 | 来源于西印度樱桃果实的果胶和其应用 |
-
2015
- 2015-07-23 CN CN201510433348.4A patent/CN104997034B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1454441A (zh) * | 2000-08-14 | 2003-11-05 | 诺基亚公司 | 提供模式选择进程的通信系统与方法 |
| JP2003189820A (ja) * | 2001-09-25 | 2003-07-08 | Nutrinova Nutrition Specialties & Food Ingredients Gmbh | 改良された製品特性を有するカプセル封入されたカロブファイバー、それの製造方法並びに使用法 |
| CN101171266A (zh) * | 2005-02-28 | 2008-04-30 | 株式会社日冷食品 | 来源于西印度樱桃果实的果胶和其应用 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 杜晶晶 等: "沙棘多糖抗氧化活性的研究", 《黑龙江八一农垦大学学报》 * |
| 赵二劳 等: "微波辅助提取沙棘果胶", 《中国食品添加剂》 * |
| 金婷: "沙棘多糖的提取纯化、结构鉴定及其抗氧化性的研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库》 * |
| 魏海香 等: "果胶制备的研究进展", 《食品研究与开发》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110790848A (zh) * | 2019-11-20 | 2020-02-14 | 新疆农业大学 | 沙棘总多糖的制备方法及其应用 |
| CN113549164A (zh) * | 2021-07-13 | 2021-10-26 | 中国科学院西北高原生物研究所 | 一种果胶类多糖亚硒酸酯化物及其制备方法和应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104997034B (zh) | 2018-02-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Jeong et al. | Structure analysis and antioxidant activities of an amylopectin-type polysaccharide isolated from dried fruits of Terminalia chebula | |
| Chen et al. | Structural characterization and antioxidant activity of a new polysaccharide from Bletilla striata fibrous roots | |
| Ji et al. | Comparison of structural characterization and antioxidant activity of polysaccharides from jujube (Ziziphus jujuba Mill.) fruit | |
| Xu et al. | Effects of ultrasound irradiation on the characterization and bioactivities of the polysaccharide from blackcurrant fruits | |
| Ma et al. | Extraction, characterization and antioxidant activity of polysaccharide from Pouteria campechiana seed | |
| Hui et al. | Structural characterization, antioxidant and antibacterial activities of two heteropolysaccharides purified from the bulbs of Lilium davidii var. unicolor Cotton | |
| Zhang et al. | Ultrasound extraction of polysaccharides from mulberry leaves and their effect on enhancing antioxidant activity | |
| Pei et al. | Structural features and antitumor activity of a novel polysaccharide from alkaline extract of Phellinus linteus mycelia | |
| Chen et al. | Optimization extraction, characterization and antioxidant activities of pectic polysaccharide from tangerine peels | |
| Zou et al. | Immunomodulatory acidic polysaccharides from Zizyphus jujuba cv. Huizao: Insights into their chemical characteristics and modes of action | |
| Yu et al. | Structural elucidation and biological activity of a novel polysaccharide by alkaline extraction from cultured Cordyceps militaris | |
| Song et al. | Physicochemical and functional properties of a water-soluble polysaccharide extracted from Mung bean (Vigna radiate L.) and its antioxidant activity | |
| Zhao et al. | Microwave-assisted extraction, chemical characterization of polysaccharides from Lilium davidii var. unicolor Salisb and its antioxidant activities evaluation | |
| Guo et al. | Pectic polysaccharides from purple passion fruit peel: A comprehensive study in macromolecular and conformational characterizations | |
| Safdar et al. | Flaxseed gum: Extraction, bioactive composition, structural characterization, and its potential antioxidant activity | |
| Zhao et al. | Selenylation modification can enhance antioxidant activity of Potentilla anserina L. polysaccharide | |
| CN104987433B (zh) | 一种具有抗衰老活性的rg‑i型枸杞果胶的制备方法 | |
| Yang et al. | Hovenia dulcis polysaccharides: Influence of multi-frequency ultrasonic extraction on structure, functional properties, and biological activities | |
| Lin et al. | Structural characteristics of water-soluble polysaccharides from Rabdosia serra (MAXIM.) HARA leaf and stem and their antioxidant capacities | |
| Yang et al. | Degradation models, structure, rheological properties and protective effects on erythrocyte hemolysis of the polysaccharides from Ribes nigrum L | |
| Ji et al. | Structural elucidation and antioxidant activities of a neutral polysaccharide from Arecanut (Areca catechu L.) | |
| Yan et al. | Extracellular polysaccharide with novel structure and antioxidant property produced by the deep-sea fungus Aspergillus versicolor N2bc | |
| Deng et al. | Structural characterization and hypolipidemic activities of purified stigma maydis polysaccharides | |
| Li et al. | Structural characterization, antiproliferative and immunoregulatory activities of a polysaccharide from Boletus Leccinum rugosiceps | |
| Li et al. | Effect of steaming process on the structural characteristics and antioxidant activities of polysaccharides from Polygonatum sibiricum rhizomes |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |