CN104988092A - 一种苏云金芽孢杆菌、制备方法及应用 - Google Patents
一种苏云金芽孢杆菌、制备方法及应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104988092A CN104988092A CN201510357016.2A CN201510357016A CN104988092A CN 104988092 A CN104988092 A CN 104988092A CN 201510357016 A CN201510357016 A CN 201510357016A CN 104988092 A CN104988092 A CN 104988092A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- bacillus thuringiensis
- bollworm
- preparation
- bacterial strain
- borer population
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 241000193388 Bacillus thuringiensis Species 0.000 title claims abstract description 53
- 229940097012 bacillus thuringiensis Drugs 0.000 title claims abstract description 53
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 241000255967 Helicoverpa zea Species 0.000 claims abstract description 47
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims abstract description 24
- 230000019617 pupation Effects 0.000 claims abstract description 13
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 claims abstract description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 235000021405 artificial diet Nutrition 0.000 claims description 16
- 230000032669 eclosion Effects 0.000 claims description 12
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 10
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 10
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 8
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 7
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 claims description 7
- 229960002523 mercuric chloride Drugs 0.000 claims description 7
- LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L mercury dichloride Chemical compound Cl[Hg]Cl LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 7
- 235000015099 wheat brans Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 6
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 6
- DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N [Na].[Cl] Chemical compound [Na].[Cl] DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 claims description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 6
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 6
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 6
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 claims description 5
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 5
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims description 5
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 claims description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 4
- HZLHRDBTVSZCBS-UVJJDBRNSA-N 4-[(e)-(4-aminophenyl)-(4-imino-3-methylcyclohexa-2,5-dien-1-ylidene)methyl]-2-methylaniline;hydrochloride Chemical compound Cl.C1=CC(=N)C(C)=C\C1=C(C=1C=C(C)C(N)=CC=1)/C1=CC=C(N)C=C1 HZLHRDBTVSZCBS-UVJJDBRNSA-N 0.000 claims description 3
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 claims description 3
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 244000037666 field crops Species 0.000 claims description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 3
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 claims description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 3
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 claims description 3
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 claims description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 3
- RCTYPNKXASFOBE-UHFFFAOYSA-M chloromercury Chemical compound [Hg]Cl RCTYPNKXASFOBE-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 230000000249 desinfective effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 5
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 abstract description 5
- 230000000749 insecticidal effect Effects 0.000 abstract description 5
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract description 3
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 abstract 1
- 241000219146 Gossypium Species 0.000 description 8
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 4
- 241000382353 Pupa Species 0.000 description 3
- MEIRRNXMZYDVDW-MQQKCMAXSA-N (2E,4E)-2,4-hexadien-1-ol Chemical compound C\C=C\C=C\CO MEIRRNXMZYDVDW-MQQKCMAXSA-N 0.000 description 2
- 241000193365 Bacillus thuringiensis serovar israelensis Species 0.000 description 2
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 2
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 2
- 241000256259 Noctuidae Species 0.000 description 2
- 241000237502 Ostreidae Species 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 2
- 210000004681 ovum Anatomy 0.000 description 2
- 235000020636 oyster Nutrition 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 241000256173 Aedes albopictus Species 0.000 description 1
- 241000625764 Anticarsia gemmatalis Species 0.000 description 1
- 241001292007 Chrysopa Species 0.000 description 1
- 101710151559 Crystal protein Proteins 0.000 description 1
- 241000256057 Culex quinquefasciatus Species 0.000 description 1
- 241000256113 Culicidae Species 0.000 description 1
- 241000255925 Diptera Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 240000002024 Gossypium herbaceum Species 0.000 description 1
- 235000004341 Gossypium herbaceum Nutrition 0.000 description 1
- 241000578422 Graphosoma lineatum Species 0.000 description 1
- 241001147381 Helicoverpa armigera Species 0.000 description 1
- 241001371826 Ichneumon suspiciosus Species 0.000 description 1
- 241000255777 Lepidoptera Species 0.000 description 1
- 241000256618 Trichogramma Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000000967 entomopathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 231100000225 lethality Toxicity 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 1
- 230000029264 phototaxis Effects 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 244000062645 predators Species 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 230000000452 restraining effect Effects 0.000 description 1
- 238000007665 sagging Methods 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/07—Bacillus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Virology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
本发明公开了一种苏云金芽孢杆菌、制备方法及应用，该菌株为苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)ML53，于2014年9月24日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2014446。本发明的苏云金芽孢杆菌，是从大田中死亡的棉铃虫分离筛选出的对棉铃虫具有防治效果的一株细菌菌株ML53，该菌株对初孵棉铃虫幼虫具有很高的杀虫活性，并能有效阻止棉铃虫幼虫化蛹及羽化，使幼虫发育历期延长，发育缓慢，不能生长为成虫，从而对防治植物棉铃虫虫害具有显著的效果。
Description
技术领域
本发明属于植物病虫害的生物防治技术领域，具体涉及一种苏云金芽孢杆菌，同时还涉及一种苏云金芽孢杆菌的制备方法及应用。
背景技术
棉铃虫(Helicoverpa armigera)属鳞翅目夜蛾科昆虫的一种，是棉花蕾铃期的一大害虫，广泛分布在中国及世界各地，寄主植物有20多科200余种。棉铃虫是棉花蕾铃期重要钻蛀性害虫，主要蛀食蕾、花、铃，也取食嫩叶。该虫是中国棉区蕾铃期害虫的优势种，近年为害十分猖獗。
棉铃虫成虫白天隐藏在叶背等处，黄昏开始活动，取食花蜜，有趋光性，卵散产于棉株上部。幼虫5～6龄。初龄幼虫取食嫩叶，其后为害蕾、花、铃，多从基部蛀入蕾、铃，在内取食，并能转移为害。受害幼蕾苞叶张开、脱落，被蛀青铃易受污染而腐烂。老熟幼虫吐丝下垂，多数入土作土室化蛹，以蛹越冬。棉铃虫天敌很多，已知有赤眼蜂、姬蜂、寄蝇等寄生性天敌和草蛉、黄蜂、猎蝽等捕食性天敌，及一些细菌、真菌、病毒等可对棉铃虫的卵和幼虫起到抑制作用。
苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis，简称Bt)于1901年首次发现于日本(Lam PH,Boon C S,Yng N Y,et al.Aedes albopictus control with spray application of Bacillusthuringiensis israelensis,strain AM 65-52[J].Southeast Asian J Trop Med Public Health,2010,41(5):1071-1081)，是一种广泛分布于自然界的革兰氏阳性菌(Gobatto V,Giani S G,Camassola M,et al.Bacillus thuringiensis isolates entomopathogenic for Culex quinquefasciatus(Diptera:Culicidae)and Anticarsia gemmatalis(Lepidoptera:Noctuidae)[J].Braz J Biol,2010,70(4):1039-1046)；因其能够产生对多种昆虫具有很强毒性作用的杀虫晶体蛋白，并对人畜无害、对环境无污染(Lopes J,Arantes O M,Cenci M A,et al.Evaluation of a newformulation of Bacillus thuringiensis israelensis[J].Braz J Biol,2010,70(4):1109-1113)，而成为全球应用最成功的生物杀虫剂之一。
发明内容
本发明的目的是提供一种可防治植物棉铃虫虫害的苏云金芽孢杆菌。
本发明的第二个目的是提供一种苏云金芽孢杆菌的制备方法。
本发明的第三个目的是提供一种苏云金芽孢杆菌在防治植物棉铃虫虫害方面的应用。
为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是：
一种苏云金芽孢杆菌，该菌株为苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)ML53，于2014年9月24日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO：M 2014446。
一种上述的苏云金芽孢杆菌的制备方法，包括下列步骤：
1)对采集自大田的死亡棉铃虫进行分离，得到苏云金芽孢杆菌菌株；
2)以初孵棉铃虫和二龄幼虫为试虫，进行生物活性测试，通过比较初孵棉铃虫死亡率和以二龄幼虫为试虫时棉铃虫的化蛹率、羽化率，筛选得到所述的苏云金芽孢杆菌ML53。
步骤1)中，从死亡棉铃虫中分离苏云金芽孢杆菌菌株的方法包括：
a.采集大田中死亡的棉铃虫，在乙醇溶液中浸泡，然后用氯化汞溶液消毒，再用无菌水冲洗后，于灭菌的研钵中研磨，加入无菌水得研磨液原液；
b.取步骤a所得研磨液原液的稀释液，涂布于NA培养基平板上，在30℃下培养，挑取似Bt菌落涂片，用石炭酸复红染色镜检，将检出的Bt菌株划线培养、分离纯化，备用。
所述似Bt菌落的特征为菌落乳白色，不透明，表面粗糙，边缘不整齐。
步骤a中，所述乙醇溶液中乙醇的体积分数为75％；所述氯化汞溶液中氯化汞的质量分数为1％。
步骤a中，在乙醇溶液中浸泡时间为30s；用氯化汞溶液消毒时间为3min。
步骤a中，制备研磨液原液时，加入无菌水的量为：每1头棉铃虫加入2～3ml无菌水。
步骤b中，所述研磨液原液的稀释液的稀释倍数为10～100。
步骤b中，所述NA培养基的配方为：牛肉浸膏5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，琼脂18g，加蒸馏水至1000ml。
步骤2)中，所述生物活性测试的方法包括：
i)将步骤1)所得苏云金芽孢杆菌菌株活化培养，离心后用灭菌水悬浮得悬浮液；
ii)将步骤i)所得悬浮液与饲喂棉铃虫的人工饲料混合均匀，得混合饲料；
iii)将初孵棉铃虫接于步骤ii)所得混合饲料上，饲养6h后，统计死、活虫数量，计算死亡率：
死亡率(％)＝死亡虫数/供试虫数×100；
将二龄幼虫接于步骤ii)所得混合饲料上，饲养至羽化，统计化蛹数和羽化数，计算化蛹率和羽化率：
化蛹率(％)＝化蛹虫数/供试虫数×100；
羽化率(％)＝羽化虫数/化蛹虫数×100。
步骤i)中，所述活化培养采用NB培养基，配方为：牛肉浸膏5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，加蒸馏水至1000ml。
步骤i)中，所述悬浮液中菌株的浓度为300μg/ml。
步骤ii)中，所述人工饲料的配方为：每500ml人工饲料含有琼脂8g、麦麸70g、干酵母10g、玉米油3ml、山梨酸1g、抗坏血酸1.5g。所述麦麸为无菌麦麸。
人工饲料的制备方法为：将琼脂加水煮沸使琼脂融化，在温度低于90℃后依次加入无菌麦麸、干酵母、玉米油、山梨醇、抗坏血酸，搅拌均匀，定容即得。
步骤ii)中，悬浮液与人工饲料的体积比为1:25。
一种上述的苏云金芽孢杆菌在防治植物棉铃虫虫害方面的应用。
本发明的苏云金芽孢杆菌，是从大田中死亡的棉铃虫分离筛选出的对棉铃虫具有防治效果的一株细菌菌株ML53，该菌株对初孵棉铃虫幼虫具有很高的杀虫活性，并能有效阻止棉铃虫幼虫化蛹及羽化，使幼虫发育历期延长，发育缓慢，不能生长为成虫，从而对防治植物棉铃虫虫害具有显著的效果。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步的说明。
具体实施方式中，细菌平板培养用NA培养基，配方为：牛肉浸膏5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，琼脂18g，加蒸馏水至1000ml；液体培养用NB培养基，配方为：牛肉浸膏5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，加蒸馏水至1000ml。
实施例1
本实施例的苏云金芽孢杆菌的制备方法，包括下列步骤：
1)菌株分离：对采集自大田的死亡棉铃虫进行分离，得到苏云金芽孢杆菌菌株，具体为：
a.采集大田中死亡的棉铃虫2头，在体积分数为75％的乙醇溶液中浸泡30s，然后用质量分数为1％的氯化汞溶液消毒3min，再用无菌水冲洗5次后，于灭菌的研钵中研磨，加入5ml无菌水混合均匀，得研磨液原液；
b.取步骤a所得研磨液原液的100倍稀释液200μl，涂布于NA培养基平板上，在30℃下培养，挑取似Bt菌落(菌落乳白色，不透明，表面粗糙，边缘不整齐)涂片，用石炭酸复红染色镜检，将检出的Bt菌株划线培养、分离纯化，得到苏云金芽孢杆菌菌株4株，分别为ML17、ML23、ML51、ML53，4℃冰箱中保存备用；
2)以初孵棉铃虫和二龄幼虫为试虫，进行生物活性测试，通过比较初孵棉铃虫死亡率和以二龄幼虫为试虫时棉铃虫的化蛹率、羽化率，具体为：
i)将步骤1)所得苏云金芽孢杆菌菌株ML17、ML23、ML51、ML53分别用NB培养基活化培养，离心后分别用灭菌水悬浮得悬浮液；悬浮液中菌株的浓度为300μg/ml；
ii)将步骤i)所得悬浮液分别与饲喂棉铃虫的人工饲料以体积比为1:25的比例混合均匀，得混合饲料；
其中，所述人工饲料的配方为：每500ml人工饲料含有琼脂8g、无菌麦麸70g、干酵母10g、玉米油3ml、山梨酸1g、抗坏血酸1.5g，余量为水。人工饲料的制备方法为：将琼脂加水煮沸使琼脂融化，在温度低于90℃后依次加入无菌麦麸、干酵母、玉米油、山梨醇、抗坏血酸，搅拌均匀，定容即得。
iii)将初孵棉铃虫分别接于步骤ii)所得混合饲料上，每个样品每次处理供试虫为30头，饲养6h后，统计死、活虫数量，重复3次，计算死亡率：
死亡率(％)＝死亡虫数/供试虫数×100；
统计及计算结果如表1所示；
将二龄幼虫分别接于步骤ii)所得混合饲料上，每个样品每次处理供试虫为20头，饲养至羽化，统计化蛹数和羽化数，重复3次，计算化蛹率和羽化率：
化蛹率(％)＝化蛹虫数/供试虫数×100；
羽化率(％)＝羽化虫数/化蛹虫数×100；
统计及计算结果如表2、3所示。
其中，CK为对照组，即仅采用人工饲料饲喂初孵棉铃虫或二龄幼虫，不加苏云金芽孢杆菌菌株，其余同实施例1。
表1苏云金芽孢杆菌对棉铃虫初孵幼虫死亡率的影响
以初孵棉铃虫为试虫，进行杀虫活性测定的结果如表1，从表1可以看出，对照组死亡率仅为16.7％，而人工饲料中混入苏云金芽孢杆菌ML53的处理组死亡率最高，为94.4％。实验结果表明，苏云金芽孢杆菌ML53的杀虫活性最高，对棉铃虫的致死性最强。
表2苏云金芽孢杆菌对棉铃虫化蛹率的影响
从表2可以看出，对照组化蛹率为76.7％，而人工饲料中混入苏云金芽孢杆菌ML53的处理组化蛹率最低，为11.7％；同时，该处理组中，棉铃虫蛹个体偏小，并且幼虫的发育历期延长。
表3苏云金芽孢杆菌对棉铃虫羽化率的影响
从表3可以看出，对照组羽化率为80.3％，而人工饲料中混入苏云金芽孢杆菌ML53的处理组羽化率最低，为11.1％。同时，该处理组中，棉铃虫蛹的发育历期延长。
对苏云金芽孢杆菌ML53进行保藏，保藏信息为：该菌株为苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)ML53，于2014年9月24日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO：M 2014446。
Claims (10)
1.一种苏云金芽孢杆菌，其特征在于：该菌株为苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)ML53，于2014年9月24日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2014446。
2.一种如权利要求1所述的苏云金芽孢杆菌的制备方法，其特征在于：包括下列步骤：
1)对采集自大田的死亡棉铃虫进行分离，得到苏云金芽孢杆菌菌株；
2)以初孵棉铃虫和二龄幼虫为试虫，进行生物活性测试，通过比较初孵棉铃虫死亡率和以二龄幼虫为试虫时棉铃虫的化蛹率、羽化率，筛选得到所述的苏云金芽孢杆菌ML53。
3.根据权利要求2所述的苏云金芽孢杆菌的制备方法，其特征在于：步骤1)中，从死亡棉铃虫中分离苏云金芽孢杆菌菌株的方法包括：
a.采集大田中死亡的棉铃虫，在乙醇溶液中浸泡，然后用氯化汞溶液消毒，再用无菌水冲洗后，于灭菌的研钵中研磨，加入无菌水得研磨液原液；
b.取步骤a所得研磨液原液的稀释液，涂布于NA培养基平板上，在30℃下培养，挑取似Bt菌落涂片，用石炭酸复红染色镜检，将检出的Bt菌株划线培养、分离纯化，备用。
4.根据权利要求3所述的苏云金芽孢杆菌的制备方法，其特征在于：步骤a中，所述乙醇溶液中乙醇的体积分数为75％；所述氯化汞溶液中氯化汞的质量分数为1％。
5.根据权利要求3或4所述的苏云金芽孢杆菌的制备方法，其特征在于：步骤a中，在乙醇溶液中浸泡时间为30s；用氯化汞溶液消毒时间为3min。
6.根据权利要求3所述的苏云金芽孢杆菌的制备方法，其特征在于：步骤b中，所述NA培养基的配方为：牛肉浸膏5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，琼脂18g，加蒸馏水至1000ml。
7.根据权利要求2所述的苏云金芽孢杆菌的制备方法，其特征在于：步骤2)中，所述生物活性测试的方法包括：
i)将步骤1)所得苏云金芽孢杆菌菌株活化培养，离心后用灭菌水悬浮得悬浮液；
ii)将步骤i)所得悬浮液与饲喂棉铃虫的人工饲料混合均匀，得混合饲料；
iii)将初孵棉铃虫接于步骤ii)所得混合饲料上，饲养6h后，统计死、活虫数量，计算死亡率：
死亡率(％)＝死亡虫数/供试虫数×100；
将二龄幼虫接于步骤ii)所得混合饲料上，饲养至羽化，统计化蛹数和羽化数，计算化蛹率和羽化率：
化蛹率(％)＝化蛹虫数/供试虫数×100；
羽化率(％)＝羽化虫数/化蛹虫数×100。
8.根据权利要求7所述的苏云金芽孢杆菌的制备方法，其特征在于：步骤i)中，所述活化培养采用NB培养基，配方为：牛肉浸膏5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，加蒸馏水至1000ml。
9.根据权利要求7所述的苏云金芽孢杆菌的制备方法，其特征在于：步骤ii)中，所述人工饲料的配方为：每500ml人工饲料含有琼脂8g、麦麸70g、干酵母10g、玉米油3ml、山梨酸1g、抗坏血酸1.5g。
10.一种如权利要求1所述的苏云金芽孢杆菌在防治植物棉铃虫虫害方面的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510357016.2A CN104988092B (zh) | 2015-06-25 | 2015-06-25 | 一种苏云金芽孢杆菌、制备方法及应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510357016.2A CN104988092B (zh) | 2015-06-25 | 2015-06-25 | 一种苏云金芽孢杆菌、制备方法及应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104988092A true CN104988092A (zh) | 2015-10-21 |
| CN104988092B CN104988092B (zh) | 2019-01-18 |
Family
ID=54299987
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510357016.2A Expired - Fee Related CN104988092B (zh) | 2015-06-25 | 2015-06-25 | 一种苏云金芽孢杆菌、制备方法及应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104988092B (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107557476A (zh) * | 2017-08-25 | 2018-01-09 | 华侨大学 | 一种分析苏云金杆菌制剂对靶虫活性低下原因的方法 |
| CN108841746A (zh) * | 2018-06-25 | 2018-11-20 | 青岛农业大学 | 产纤维素酶且抑制灿烂弧菌的苏云金芽孢杆菌及使用方法 |
| CN109593659A (zh) * | 2019-01-04 | 2019-04-09 | 湖南农业大学 | 一种杂色曲霉hy12的筛选方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1302866A (zh) * | 2001-02-26 | 2001-07-11 | 南开大学 | 具优良基因组合的高效Bt15A3菌株、分离及应用 |
| WO2002014517A1 (en) * | 2000-08-11 | 2002-02-21 | Monsanto Technology Llc | BROAD-SPECTRUM δ-ENDOTOXINS |
| US20080047034A1 (en) * | 2001-01-09 | 2008-02-21 | Bayer Bioscience N.V. | Nucleic acid molecules encoding novel bacillus thuringiensis Cry2Ae insecticidal proteins, plant cells, plant or seeds comprising the nucleic acid molecules and methods of using same |
-
2015
- 2015-06-25 CN CN201510357016.2A patent/CN104988092B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002014517A1 (en) * | 2000-08-11 | 2002-02-21 | Monsanto Technology Llc | BROAD-SPECTRUM δ-ENDOTOXINS |
| US20080047034A1 (en) * | 2001-01-09 | 2008-02-21 | Bayer Bioscience N.V. | Nucleic acid molecules encoding novel bacillus thuringiensis Cry2Ae insecticidal proteins, plant cells, plant or seeds comprising the nucleic acid molecules and methods of using same |
| CN1302866A (zh) * | 2001-02-26 | 2001-07-11 | 南开大学 | 具优良基因组合的高效Bt15A3菌株、分离及应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 焦蕊等: "苏云金芽孢杆菌HBF-1芽孢对棉铃虫幼虫生长发育及酶活的影响", 《中国生物防治》 * |
| 许丽娟等: "我国微生物农药的应用现状及发展前景", 《农药研究与应用》 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107557476A (zh) * | 2017-08-25 | 2018-01-09 | 华侨大学 | 一种分析苏云金杆菌制剂对靶虫活性低下原因的方法 |
| CN108841746A (zh) * | 2018-06-25 | 2018-11-20 | 青岛农业大学 | 产纤维素酶且抑制灿烂弧菌的苏云金芽孢杆菌及使用方法 |
| CN108841746B (zh) * | 2018-06-25 | 2020-07-03 | 青岛农业大学 | 产纤维素酶且抑制灿烂弧菌的苏云金芽孢杆菌及使用方法 |
| CN109593659A (zh) * | 2019-01-04 | 2019-04-09 | 湖南农业大学 | 一种杂色曲霉hy12的筛选方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104988092B (zh) | 2019-01-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104798734B (zh) | 捕食性秽蝇幼虫室内饲养的方法 | |
| CN1631091A (zh) | 果园生态生防控制方法 | |
| WO2017107872A1 (zh) | 一种微生物诱捕剂及应用 | |
| CN104222023B (zh) | 一种斯氏线虫大批量繁殖培育方法 | |
| Manjula et al. | Studies on biology, feeding habits and natural enemies of fall armyworm, Spodoptera frugiperda, a new invasive pest in India | |
| CN104988092A (zh) | 一种苏云金芽孢杆菌、制备方法及应用 | |
| CN102965346B (zh) | 美国白蛾核型多角体病毒生产工艺 | |
| Mahapatro et al. | Indigenous approaches for the management of termite and white grub in upland rice | |
| CN101366394B (zh) | 一种复合生物杀虫剂 | |
| KR20140052117A (ko) | 노랑무당벌레의 인공 사육방법 | |
| Kaur et al. | Biorational Approaches for the Management of Insect Pests of Vegetable Cropss | |
| Webster | Manipulation of environment to facilitate use of nematodes in biocontrol of insects | |
| KR102024201B1 (ko) | 파밤나방 기피용 미생물제제 | |
| Sathe et al. | Cotton pests and biocontrol agents | |
| CN105039208A (zh) | 一种蜡状芽孢杆菌、制备方法及应用 | |
| Halder et al. | Sucking pests menace and their management on floricultural crops | |
| Kumar et al. | Insect pest management | |
| Hussey | Agricultural production in the third world-a challenge for natural pest control | |
| Elsayed et al. | Reproduction of Poecilocerus bmtonius fed on Calotropis procera compared with Zygophylum simplex and Pulicaria crispa | |
| CN109315412B (zh) | Eurycomanone在昆虫拒食活性和抑制昆虫生长发育的应用 | |
| Di Vitantonio | Natural and anthropogenic factors affecting the life cycle of exotic and native insect species | |
| Singh et al. | Biocoenology and control of whiteflies in sericulture | |
| Wardani et al. | Local resource utilization in integrated pest management in Lampung Province | |
| Svinningen et al. | Nomuraea rileyi: a plausible fungi selectively controlling lepidopteron, Paraponyx stratiotata L. damaging queen palm (Livistona rotundifolia L.) | |
| Bhowmick et al. | SPIDERS AS NATURAL ENEMIES TO CONTROL INSECT PESTS |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20190118 |