CN104981245A

CN104981245A - 无副作用的抗癌剂

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Publication number: CN104981245A
Application number: CN201480006400.1A
Authority: CN
Inventors: 贺锦·成; 福岛正和; 江岛清; 加里·艾希莉; 丹尼尔·V·桑蒂
Original assignee: Delta Fly Pharma Inc
Current assignee: Delta Fly Pharma Inc
Priority date: 2013-10-04
Filing date: 2014-02-07
Publication date: 2015-10-14
Anticipated expiration: 2034-02-07
Also published as: TW201513863A; WO2015049883A1; CN104981245B; SG10201703378UA; JP5721806B2; KR20150103749A; SG11201506026PA; HK1214145A1; JP2015091765A; KR101678881B1

Abstract

本发明提供用于治疗癌症的药物组合物，所述组合物包含作为活性成分的由通式I：C-[-CH₂-O-(-CH₂CH₂-O-)_n-X¹-CHR¹-O-CO-NR²-CH₂-X²]₄(I)(其中X¹-CHR¹-O-CO-NR²是连接基，X¹是间隔基，R¹是任选地被取代的C_1-4烷基，R²是苯基或被取代的苯基，X²是SN-38，并且n是200至1,000的整数)代表的化合物。所述组合物的特征为以下：可以以每隔一周一周一次持续至少两次施用的频率，以要求约0.01μmol/kg体重至11μmol/kg体重的单剂量的肠胃外施用的剂量方案将所述组合物用于患有癌症的受试者；且所述组合物没有伊立替康类的不良反应，但以伊立替康的1/10(摩尔比)或更少的剂量赋予与伊立替康相同或更好的癌症增殖抑制活性。还提供用于治疗癌症的方法。

Description

无副作用的抗癌剂

技术领域

本发明涉及用于治疗癌症的药物组合物和方法，其特征为：其中经由涉及SN-38的长期可控释放的连接基将抗癌活性物质SN-38和4-臂PEG彼此共价地结合的类型的抗癌剂的施用和剂量。

背景技术

正在进行对于聚乙二醇化低分子量药物以用于增加其在血液中的稳定性和增强其效力的研究(非专利文献1)。作为这样的低分子量药物，已开发了以聚乙二醇化药物的形式的抗癌剂比如喜树碱、伊立替康、多柔比星、SN-38、紫杉醇、多西紫杉醇、顺铂和吉西他滨。

在这些抗癌剂中，SN-38(正式名称：7-乙基-10-羟基喜树碱)是伊立替康(也被称为“CPT-11”)的活性成分。在该意义上，伊立替康是SN-38的前药。

伊立替康是通过使用在喜树蓝果树科(Camptotheca acuminataNyssaceae)中发现的喜树碱(作为先导化合物)合成的抗肿瘤药物，且在体内激活。其通过肝脏等等的组织中存在的羧基酯酶被转变成活性代谢物SN-38。伊立替康也通过抑制I型DNA拓扑异构酶活性而呈现抗肿瘤功能，且被广泛地用于肺癌、子宫颈癌、卵巢癌、胃癌、大肠癌(或结肠癌)、乳腺癌、和恶性淋巴瘤的癌症化疗。然而，据称这种药物在具有骨髓抑制、感染性疾病、腹泻和/或肠梗阻的症状的患者中引起致命的副作用(专利文献1和非专利文献2)。

存在用于改善伊立替康或SN-38在血液中的稳定性和产生的药物效力的提议。例如，专利文献2描述包括4-臂聚乙二醇化的伊立替康的聚合物前药，并且专利文献3和4描述SN-38的相似的聚合物前药。在所有这些前药中，伊立替康或SN-38的位置20上的OH基团和4-臂PEG经由酯键(-O-CO-)彼此结合，所述酯键容易地通过血液中的酯酶等等被酶促地水解。

此外，专利文献5描述大分子载体和药物的缀合物(所述缀合物包含可以经由速率控制的β-消除释放药物或前药的连接基)，且具体地描述作为实例的4-臂聚乙二醇化的SN-38。连接基和SN-38之间的结合位点是SN-38的酚羟基，且因而，使用不同于酯键的键。

还在专利文献6中描述多臂水溶性的聚合物药物复合物，特别是基于聚合物的前药，比如上文具体提到的前药，所述专利文献6描述多臂聚合物部分和活性物质部分之间的结合部分是合意的以容易地在体内被水解，通常是羧酸酯、碳酸酯、磷酸酯、酸酐、缩醛、缩酮、酰氧基烷基、醚、亚胺、原酸酯(ortho ester)、寡核苷酸等等，优选地羧酸酯或碳酸脂。

现有技术文献

专利文献

[专利文献1]日本专利号4694776

[专利文献2]日本专利公布(Kokai)号2011-213727

[专利文献3]日本专利公布(Kohyo)号2013-500253

[专利文献4]日本专利公布(Kohyo)号2012-524102

[专利文献5]日本专利公布(Kohyo)号2013-528593

[专利文献6]日本专利公布(Kohyo)号2007-505928

[非专利文献]

[非专利文献1]W.Li,Progress in Polymer Science(2013)38:421-444

[非专利文献2]S.Sawada等人,Chem.Pharm.Bull.(1991)39(6):1446-1454

发明概述

要通过本发明解决的问题

抗癌剂伊立替康对多种癌症示出抗癌活性，但已知具有副作用，比如伴随严重的腹泻的消化道紊乱、和严重的白细胞减少症或中性粒细胞减少症(骨髓抑制)。

本发明的目标是提供用于治疗癌症的药物组合物和方法，其特征为下述类型的抗癌剂的施用和剂量：其中SN-38和4-臂PEG经由连接基(其具有能够控制SN-38的长期释放的功能)彼此结合，其中可以重复地施用组合物，因为不需要提供用于等待已经被严重的副作用降低的患者的体力的恢复的停药期，以便可以提供强的抗癌效果而在很大程度上没有浪费患者的体力。

解决问题的手段

总之，本发明具有下列特征。

(1)一种用于癌症治疗的药物组合物，含有作为活性成分的由下列式I代表的化合物：

C-[-CH₂-O-(-CH₂CH₂-O-)_n-X¹-CHR¹-O-CO-NR²-CH₂-X²]₄ (I)

其中X¹-CHR¹-O-CO-NR²代表连接基，X¹代表间隔基，R¹代表可以被取代的C1-C4烷基，R²代表苯基或被取代的苯基，X²是由下列式II代表的基团：

并且n是200至1,000的整数，

其中所述药物组合物在其中以经至少两周每隔一周一周一次的频率将约0.01μmol/kg体重至约11μmol/kg体重的单剂量肠胃外地施用于患有癌症的受试者的施用和剂量下是可用的，且所述药物组合物没有伊立替康类的副作用并且当与伊立替康相比，以低至1/10(摩尔比)或更少的剂量使用时，提供等于或大于伊立替康的癌症生长抑制活性。

(2)根据(1)所述的组合物，其中在式I的化合物中，R¹、R²、X²和n如上文所定义并且X¹是(CH₂)_1-5-CONH-(CH₂)_1-20或(CH₂)_1-5-NHCO-(CH₂)_1-20。

(3)根据(1)或(2)所述的组合物，其中在式I的化合物中，X¹、X²和n如上文所定义，R¹是甲基、乙基、被取代的甲基、或被取代的乙基，并且R²是被取代的苯基。

(4)根据(2)或(3)所述的组合物，其中在式I的化合物中，X¹和X²如上文所定义，R¹是被取代的甲基，R²是4-取代的苯基，并且n是200至800的整数。

(5)根据(4)所述的组合物，其中式I的化合物是由下列式III代表的化合物：

其中n如上文所定义。

(6)根据(1)至(5)中任一项所述的组合物，其中癌症选自由结肠癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫癌、肺癌、胃癌、胰腺癌、食道癌、头颈癌、肝细胞癌、胆囊癌、胆管癌、肉瘤和恶性淋巴瘤组成的组。

(7)一种用于治疗癌症的方法，包括以经至少两周每隔一周一周一次的频率，将根据(1)至(5)中任一项所述的组合物以约0.01μmol/kg体重至约11μmol/kg体重的所述化合物的单剂量肠胃外地施用于患有癌症的受试者，其中没有看到包括严重的腹泻和白细胞减少症和/或中性粒细胞减少症的伊立替康类副作用，并且当与伊立替康相比，剂量低至1/10(摩尔比)或更少时，提供等于或大于伊立替康的癌症生长抑制活性。

(8)根据(7)所述的方法，其中癌症选自由结肠癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫癌、肺癌、胃癌、胰腺癌、食道癌、头颈癌、肝细胞癌、胆囊癌、胆管癌、肉瘤和恶性淋巴瘤组成的组。

(9)根据(7)或(8)所述的方法，其中肠胃外施用是静脉内施用。

(10)根据(9)所述的方法，其中静脉内施用是输注或弹丸注射。

本描述包括日本专利申请号2013-237219和号2013-209574的说明书和/或附图中描述的内容，本申请要求其优先权。

本发明的效果

本发明的药物组合物和治疗方法的特征为用于下述类型的抗癌剂的施用条件：其中SN-38和4-臂PEG经由连接基(其具有能够控制SN-38的长期释放的功能)彼此结合，其中可以重复地施用抗癌剂，因为不需要提供用于等待已经被严重的副作用降低的患者的体力的恢复的停药期，以便可以提供强的抗癌功能而在很大程度上没有浪费患者的体力。可以以经至少两周每隔一周一周一次的频率，将预定范围内的剂量的组合物肠胃外地施用于受试者比如人类，且没有引起如由伊立替康引起的那些的副作用(即，伊立替康类副作用)比如严重的腹泻并且因此，其可以连续地每隔一周重复地施用。因此，可以连续地保持效力，并且因此，可以预期强的抗癌效果。

附图简述

[图1]此图示出在效力测试中确定的大鼠的体重的变化。通过使用作为测试样品的DFP-13318(以50mg/kg、100mg/kg或200mg/kg的剂量)或伊立替康(以70mg/kg的剂量(用于第一次施用)和50mg/kg的剂量(用于第二次施用))进行测试。媒介物被用作对照。

[图2]此图示出在效力测试期间大鼠组的平均体重的变化。通过使用作为测试物品的DFP-13318(以50mg/kg、100mg/kg或200mg/kg的剂量)或伊立替康(以70mg/kg的剂量(用于第一次施用)和50mg/kg的剂量(用于第二次施用))进行测试。媒介物被用作对照。**0.001<P≤0.01；P值：伊立替康相对于媒介物＝0.006。

[图3]此图示出在使用DFP-13318(以50mg/kg、100mg/kg或200mg/kg的剂量)或伊立替康(以70mg/kg的剂量(用于第一次施用)和50mg/kg的剂量(用于第二次施用))治疗大鼠模型(其中皮下地植入HT-29人类结肠癌细胞系)中确定的抗肿瘤活性。媒介物被用作对照。在肿瘤植入之后第9天和第16天静脉内地施用每个测试样品。

[图4]此图指示在DFP-13318的静脉内施用之后，在HT-29肿瘤组织中的DFP-13318的剂量依赖性积聚。

[图5]此图指示在DFP-13318的静脉内施用之后，在HT-29肿瘤组织中的SN-38的剂量依赖性积聚。

实施本发明的模式

将更详细地描述本发明。

<抗癌化合物>

由下列式I代表被用作本发明的药物组合物或治疗方法中的活性成分的化合物：

C-[-CH₂-O-(-CH₂CH₂-O-)_n-X¹-CHR¹-O-CO-NR²-CH₂-X²]₄ (I)

并且n是200至1,000的整数。

此化合物的特征为：在基团X¹和基团X²之间具有由CHR¹-O-CO-NR²-CH₂代表的基团。在日本专利公布(Kohyo)号2013-528593A(或WO 2011/140393)中描述类似于CHR¹-O-CO-NR²-CH₂的基团，并且假设，这样的基团通过由夺取邻近-CHR¹的基团的碳原子上的氢原子(H)引起的β-消除或通过在酸性环境下引起的裂解，在肿瘤中被离解成聚合物部分和活性物质，并且假设，活性物质选择性作用于肿瘤。为了有利地引起β-消除，优选地，基团R¹是吸电子基团。吸电子基团的实例包括氰基、甲磺酰基、三氟甲基、硝基、乙酰氧基和C1-C4烷氧羰基(例如，甲氧羰基或乙氧羰基)。

基团X²是式II的SN-38部分，并且经由醚键(-O-)在SN-38的酚羟基和X¹-CHR¹-O-CO-NR²-CH₂的CH₂之间结合。因而，此醚键不同于据称在体内容易地裂解的酯键。

在基团R²是被取代的苯基的情况下，取代基的实例包括卤素(比如氟、氯、溴、或碘)、C1-C4烷氧羰基(比如甲氧羰基或乙氧羰基)、N,N-二-C1-C4烷基甲酰胺(比如N,N-二乙基甲酰胺)、吗啉基羰基(morphorinocarbonyl)和吗啉基磺酰基(morphorinosulfonyl)。没有限制取代基的数目和取代的位置，并且取代基的数目是1至3，优选地1，并且取代的位置是邻位、对位或间位，优选地对位(其也被称为“4-位”)。

基团X¹是用于将PEG部分与式I中的另外的部分结合的间隔基，且例如，它可以是含有一个或更多个亚甲基的连接基和连接基团比如CONH或NHCO，并且具体地，它包括(CH₂)_1-5-CONH-(CH₂)_1-20、(CH₂)_1-5-NHCO-(CH₂)_1-20或CO-(CH₂)_1-5-CONH-(CH₂)_1-20。

可以通过使具有被添加到4-臂PEG的末端的任何多种官能团的衍生物与(具有末端官能团的X¹部分)-CHR¹-O-CO-NR²-CH₂-X²反应产生式I的化合物。

可以通过经由间隔基(如果必要)将具有任何不同的重均分子量的PEG衍生物结合到例如季戊四醇核上而获得具有被添加到4-臂PEG的末端的任何多种官能团的衍生物。可从例如JenKem Technology Co.,Ltd购买4-臂PEG衍生物。

在式I的化合物的PEG聚合物部分中，n无限制地是约65或更多，例如，约100至约2,300，优选地约200至约1,000，并且聚合物的重均分子量是约3kDa至约100kDa，例如，约4kDa至约80kDa，约5kDa至约60kDa，约8kDa至约40kDa，或约10kDa至约20kDa。考虑到4-臂PEG衍生物的粘度或毒性的影响，优选地，重均分子量是约10kDa至约20kDa。

4-臂PEG衍生物的末端官能团的实例包括但不限于被连接到衍生物的CH₂-O-(-CH₂CH₂-O-)_n-的基团，比如-CH₂-COO-NHS、-CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂-COO-NHS、-CH₂CH₂-CHO、-CH₂CH₂CH₂NH₂、-CH₂CH₂CH(OC₂H₅)₂、-CH₂CH₂CH₂NHCOCH₂CH₂-马来酰亚胺和-CH₂CH₂SH，其中NHS代表N-羟基丁二酰亚胺。

另一方面，与具有PEG部分的末端官能团反应的X¹部分的末端官能团的实例包括但不限于与NHS基团反应的NH₂、OH或SH基团、与CHO基团反应的NH₂基团、与NH₂基团反应的COOH基团、与SH基团反应的SH、马来酰亚胺或COOH基团、与(OC₂H₅)₂基团反应的NH₂基团、和与马来酰亚胺基团反应的SH基团。

优选地，在式I的化合物中，X¹、X²和n如上文所定义，R¹是甲基、乙基、被取代的甲基、或被取代的乙基，并且R²是被取代的苯基。此处，取代基的实例是上文例示的那些。

更优选地，在式I的化合物中，X¹和X²如上文所定义，R¹是被取代的甲基，R²是4-取代的苯基，并且n是200至800的整数。此处，取代基的实例是上文例示的那些。

具体地，式I的化合物是由下列式III代表的化合物：

其中n如上文所定义。

如从稍后的实施例中描述的血液浓度-时间曲线下面积(AUC)估计的，被用作本发明的活性成分的上述化合物在血液中具有比它的代谢物，SN-38或SN-38G(其是SN-38葡糖甘酸)高≥约50,000倍的稳定性。甚至当在一周一次的频率下，以约0.01-11μmol/kg体重的单剂量肠胃外地施用化合物时，抗癌活性成分SN-38以控制的方式经过1周的长周期被释放。因而，此化合物可以呈现药物效力而不引起严重的伊立替康类副作用。

如本文所使用，术语“伊立替康类副作用”指的是包括骨髓抑制的症状比如白细胞减少症或中性粒细胞减少症、和腹泻的副作用。

此外，因为当在上述的施用条件下使用时，被用作本发明的活性成分的上述化合物不引起严重的副作用例如像白细胞减少症或中性粒细胞减少症的骨髓抑制、和腹泻，所以化合物可以在上述的剂量范围内重复地肠胃外地施用于受试者持续至少2周，优选地至少4周或至少6周，而没有采用停药期。有人提出，发生由SN-38引起的严重的腹泻是因为从胆汁排泄的SN-38G在肠道中被转变成SN-38并且这种药物活性成分即SN-38，损伤肠粘膜以诱发腹泻(K.Takasuna等人,Cancer Chemother.Pharmacol.42:280-286,1998)。在本发明的施用条件下使用的式I的化合物在体内产生少至由例如伊立替康产生的SN-38G的1/100或更少的量的SN-38G(参见下文描述的表10)。这就是为什么没有发生严重腹泻的副作用的原因。

此外，当与伊立替康相比，以少至1/10(摩尔比)或更少的剂量使用时，本发明化合物可以提供等于或大于伊立替康(也被称为CPT-11)的癌症生长抑制活性(参见下文描述的表6)(参见图3)。

已经通过在荷瘤大鼠中进行的静脉内施用测试证实了式I的化合物的抗癌活性(图3)，并且因此，它在血液中的保留时间是非常长的，并且因此，化合物接触肿瘤位点的可能性增加。此外，因为化合物是聚合物物质，它可能经由通过内吞作用被并入肿瘤细胞内并且在肿瘤细胞内释放活性物质SN-38的阶段来示出它在体内的效力。因为与正常的细胞相比，肿瘤细胞具有它们容易地并入聚合物物质的性质，所以它们可以并入具有高分子量的本发明的式I的化合物。

<药物组合物>

本发明还提供用于癌症的治疗的药物组合物，所述药物组合物包含作为活性成分的上述的化合物。药物组合物在其中以经至少两周每隔一周一周一次的频率将约0.01-11μmol/kg体重的化合物的单剂量肠胃外地施用于患有癌症的受试者的施用和剂量下是可用的，且药物组合物没有伊立替康类的副作用并且当与伊立替康相比，以低至1/10(摩尔比)或更少的剂量使用时，提供等于或大于伊立替康的癌症生长抑制活性。

化合物的每次施用的剂量取决于受试者的性别、年龄、体重、症状、严重性等等而变化，并且适当地是约0.01-11μmol/kg体重，且例如，约1-11μmol/kg体重、约3.5-7μmol/kg体重、约4-6μmol/kg体重、约0.1-1.8μmol/kg体重、或约0.4-1μmol/kg体重。在稍后描述的实施例中，通过使用大鼠的实验发现有效剂量，并且当将用于大鼠的有效剂量(mg/kg)转变成用于人类的剂量(mg/kg)时，已知用于人类的有效剂量(mg/kg)是用于大鼠的剂量的约1/100至约1/6(或约1/10)。如果化合物是例如式III的化合物(DFP-13318，MW 45,700)，剂量适当地是约0.5-450mg/kg体重，并且例如是约50-450mg/kg体重、约100-300mg/kg体重、约150-300mg/kg体重、约170-250mg/kg体重、约0.5-75mg/kg体重、或约17-42mg/kg体重。本发明的式I的化合物每分子含有4个SN-38活性组分的分子(MW 392)。

如作为通过药物的静脉内施用的肿瘤生长抑制在图3中所示出，当以经2周每隔一周一周一次的频率施用药物时，甚至当与伊立替康相比，以少至1/25(摩尔比)的剂量(200mg/kg)施用DFP-13318时，也示出比伊立替康更强的抗肿瘤活性，并且肿瘤生长抑制(TGI)值是61％(P＝0.030)。

如稍后的实施例2中所描述，在使用大鼠的动物实验中，在以225mg/kg的剂量静脉内施用DFP-13318之后，平均的T_max和C_max值分别被确定是用于DFP-13318的2小时和3.05mg/mL，用于SN-38的1小时和97.6ng/mL，以及用于SN-38G的1小时和12.7ng/mL。此外，DFP-13318具有36.8小时的平均血浆半衰期T_1/2。DFP-13318的平均清除率值和MRT_最后分别被确定是2.02mL/hr/kg和28.8小时。分布的平均体积(Vss)被确定是92.2mL/kg，并且DFP-13318的AUC_最后和AUC_inf的值分别被确定是92.6hr·mg/mL和117hr·mg/mL。此外，AUC_％Extrap的平均值是24.0％。

上述的结果指示，DFP-13318在血液中的保留时间非常长并且因此，它在血液中的稳定性非常高。这个特征可以应用于由本发明的式I代表的任何化合物，包括DFP-13318。

将包括作为活性成分的式I的化合物的药物组合物配制成肠胃外施用制剂。肠胃外途径的实例包括静脉内的、动脉内的、腹膜内的、皮下的、皮内的、肌内的、颅内的、经鼻的、和透粘膜的途径，并且优选的途径是静脉内途径。因此，优选地将组合物配制成用于注射、(滴注)输注或弹丸注射的制剂。可以通过例如在REMINGTON；THE SCIENCE ANDPRACTICE OF PHARMACY(第20版)等等中描述的方法，或通过使用赋形剂、稀释剂、添加剂等等进行配制。可以通过在稀释剂比如生理盐水、缓冲剂或林格氏溶液中溶解上述的有效剂量的式I或III的化合物且允许生成的溶液经过无菌过滤器来配制用于注射、(滴注)输注或弹丸注射的制剂。可以在需要的情况下添加添加剂，比如溶剂或防腐剂。

在本发明中，待被治疗的癌症的实例包括临床上用伊立替康治疗的所有的癌症，比如结肠癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫癌、肺癌、胃癌、胰腺癌、食道癌、头颈癌、肝细胞癌、胆囊癌、胆管癌、肉瘤和恶性淋巴瘤。因为本发明的组合物不引起伊立替康类副作用比如严重的腹泻和白细胞减少症或中性粒细胞减少症，所以认为，组合物还可以对除了上述的癌症之外的癌症有效地使用。

此外，待被治疗癌症的受试者的实例包括动物，包括人类，且优选地，受试者是哺乳动物，比如人类或宠物动物(如狗或猫)。优选地动物是人类。

<治疗方法>

本发明另外提供治疗癌症的方法，所述方法包括以经至少2周、至少4周、或至少6周每隔一周一周一次的频率，将约0.01-11μmol/kg体重的单剂量的式I或式II的化合物肠胃外地施用于患有癌症的受试者，其中没有看到或观察到包括严重的腹泻和白细胞减少症和/或中性粒细胞减少症的伊立替康类副作用，并且当与伊立替康相比，剂量低至1/10(摩尔比)或更少时，提供等于或大于伊立替康的癌症生长抑制活性。

化合物和药物与上述的那些相同。

用于本发明的治疗方法的化合物具有以下特征：在通过例如静脉内施用的施用之后，它在肿瘤内是剂量依赖性地积聚的，且此外，它剂量依赖性地且连续地在肿瘤内释放活性剂SN-38(图4和5)。相反，当在相同的条件下施用伊立替康时，没有在肿瘤中检测到SN-38(参见实施例3)。

待被治疗的癌症和待被治疗的受试者也与上述的那些相同。癌症的优选的实例包括但不限于结肠癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫癌、肺癌、胃癌、胰腺癌、食道癌、头颈癌、肝细胞癌、胆囊癌、胆管癌、肉瘤和恶性淋巴瘤。此外，受试者的优选的实例是人类。

在本发明的治疗方法中，采用肠胃外施用，并且途径的优选的实例是如上述的静脉内途径，且施用的优选的实例包括(滴注)输注和弹丸注射。实施例

现在将参考下列的实施例更具体地描述本发明，并且预期，本发明的技术范围不限于那些实施例。

[实施例1]

<化合物DFP-13318的生产>

1.叠氮基-连接基-SN-38的生产

在10mL无水吡啶中悬浮SN38(1.00g，2.55mmol；Haorui)，然后在50℃下，在真空下浓缩至干。用10mL无水THF重复这个步骤。在N₂气氛下，将生成的浅黄色固体溶解于50mL无水THF和50mL无水DMF中，然后在冰上冷却。添加叔丁醇钾在THF中的1.0M溶液(2.55mL，2.55mmol)，形成初始的深绿色，其变成浓的橙色悬浮液。在15min后，添加7-叠氮基-1-氰基-2-己基N-(氯甲基)-4-(N,N-二乙基甲酰胺)-苯氨基甲酸酯(7.5mL，2.8mmol)的THF溶液。在4℃下15min之后，允许淡橙色混合物加温至室温。在1hr之后，HPLC分析(5μL样品+1mL的CAN/TFA)指示产物/SN38＝86/14。浅黄色混合物用200mL乙酸乙酯稀释，2x100mL水、100mL饱和NaCl水溶液洗涤，在MgSO₄上干燥，过滤，并且蒸发。通过用水研磨油状残留物除去过量的DMF，并将残留物溶解于50mL乙腈中，过滤，并蒸发，以产生2.96g黄色玻璃状物。使用己烷、在己烷中的20％、40％、60％、80％和100％丙酮的200mL每个的阶式梯度，在SiO₂(80g)上色谱层析残留物，提供纯化的叠氮基-连接基-SN38(1.66g，81％)。

将这种材料溶解于50mL丙酮中，并在搅拌下逐滴添加45mL的在水中的0.1％乙酸，直到混合物变成浑浊。在搅拌后，分离固体材料。然后，添加另外的5mL的在水中的0.1％乙酸以完成沉淀。在搅拌2h之后，固体通过真空过滤收集，用水洗涤，并干燥以提供1.44g(70％)的浅黄色粉末。

分析值如下。

¹H-NMR(400MHz,CDCl₃):δ8.15(1H,d,J＝9.2Hz),7.60(1H,s),7.48(1H,dd,J＝2,9Hz),7.40(4H,m),7.25(1H,d,J＝2),5.75(2H,br),5.73(1H,d,J＝16Hz),5.28(1H,d,J＝16Hz),5.22(2H,s),4.99(1H,m),3.84(1H,s),3.53(2H,br),3.53(2H,br),3.17(2H,t,J＝7Hz),3.12(2H,q,J＝7Hz),2.74(1H,dd,J＝1,17Hz),2.54(1H,dd,J＝5,17),1.86(2H,m),1.6(1H,m),1.46(1H,m),1.37(3H,t,J＝7Hz),1.25(6H,m),1.12(4H,m),1.02(3H,t,J＝7.3Hz)。

LC-MS:[M+H]+＝805.3(C₄₄H₅₁N₈O₈的计算值＝805.3)。

2.氨基-连接基-SN38乙酸盐的生产

将三甲基膦在THF中的1M溶液(2.9mL，2.9mmol)添加到叠氮基-连接基-SN38(1.13g，1.4mmol)和乙酸(0.19mL，3.3mmol)在10mL的THF中的溶液。在搅拌2h之后，添加水(1.0mL)且将混合物搅拌另外的1h。在乙醚和水之间分开残留物。用乙酸乙酯洗涤水相一次，并蒸发产生的澄清的黄色水相以提供800mg黄色泡沫状物。将其溶解于THF中，过滤，并通过UV吸光度定量以提供含有1.2μmol(86％)产物的溶液。C18HPLC示出单峰，且LC-MS示出[M+H]+＝779.3(计算的779.4)。

3.化合物DFP-13318的生产(分子量：约45,700)

在75mL的THF中混合4-臂四(琥珀酰亚胺基-羧甲基)-PEG(JenKemTechnology；10.0g,1.0mmol HSE)、实施例1的氨基-连接基-SN38乙酸盐(1.2mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.21mL，1.2mmol)且任其在室温下静置。通过HPLC监控偶联的进展，其指示通过90分钟完成反应。在总的2h之后，将混合物过滤到500mL搅拌的叔丁基甲醚(MTBE)中。沉淀物通过真空过滤收集，用MTBE洗涤，并在真空下干燥以提供作为蜡状浅黄色固体的缀合物(10.1g，95％)。在1.0mL水中的2.0mg样品的分光光度分析指示0.17mM SN-38(从重量计算，0.175mM SN38)，收率96％。C18-HPLC分析指示单个主峰(在363nm处98％的总的峰面积；在256nm处97％)，且0.6mol％游离的SN38作为被污染的量。

[实施例2]

<化合物DFP-13318的抗肿瘤性质>

1.测试条件

通过在表1和2中示出的条件下，将每个测试样品静脉内注射(iv)到荷瘤大鼠进行毒性、药代动力学和效力的研究。

[表1]

用于效力研究的大鼠组和治疗

组	n*	治疗	剂量(mg/kg)**	途径/时间表
					1	5	媒介物对照***	--	iv,qwk x 2周
2	5	DFP-13318	50	iv,qwk x 2周
					3	5	DFP-13318	100	iv,qwk x 2周
4	5	DFP-13318	200	iv,qwk x 2周
					5	5	伊立替康	70/50	iv,qwk x 2周

注解：*n：动物的数目，**剂量：基于体重调整的(10μL/g)，***媒介物对照：10mM乙酸盐缓冲液，pH 5

[表2]

用于药代动力学(PK)评价的辅助组

组	n*	治疗	剂量(mg/kg)**	途径/时间表
					-	3	DFP-13318	200	iv,单次弹丸注射

注解：*n：动物的数目，**剂量：基于体重调整的(10μL/g)

2.测试动物

下列的大鼠被用作测试动物。

物种：褐家鼠(Rattus Norvegicus)

品系：裸大鼠

年龄：6至8周大

性别：雌性

体重：140至180g

动物的数目：25只大鼠+40％额外的大鼠

动物供应商：Vital River Laboratory Animal Technology,Co.,Ltd.

3.细胞系

在5％CO₂/空气的气氛中，在37℃下，在McCoy 5a修饰的培养基(含有10％热灭活的胎牛血清、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素、和L-谷氨酰胺(2mM))中，人类结肠癌细胞系HT-29作为单层培养被维持。通过胰蛋白酶-EDTA治疗，每周两次常规地传代培养肿瘤细胞。指数生长期的细胞被收获并且关于肿瘤植入被计数。

4.肿瘤植入

用在用于肿瘤发育的0.1ml的PBS中的HT-29肿瘤细胞(5x 10⁶)在侧腹处皮下地植入每个裸大鼠。当平均肿瘤大小达到约120mm³时，在肿瘤植入之后第9天开始治疗。对于效力研究和对于药代动力学(PK)研究，每个组由5个荷瘤裸大鼠组成。从肿瘤植入之后第9天开始，一周一次将测试样品两次静脉内地施用到用于效力研究的大鼠，并且一次施用到用于PK评价的辅助组的大鼠。

5.测试物品制剂的制备

在表3中示出测试样品制剂的制备。

[表3]

注解：a.在每次使用前制备新鲜的制剂；b.示出的浓度中的每个以化合物的重量为基础。

6.肿瘤测量和端点

主要的端点是要看是否肿瘤生长可以被延迟或肿瘤是否消失。每周两次测量每个大鼠的体重，并且使用卡尺在二维中每周两次测量肿瘤大小的差异。使用式：V＝a x b²/2(其中a和b分别代表肿瘤的长和短的直径)，以mm³表示肿瘤体积。肿瘤体积被用于肿瘤生长抑制(TGI)值以评价抗肿瘤效力。根据式：TGI＝(1-T/C)x 100％(其中C和T分别代表在特定的一天的对照组和治疗组中的肿瘤的平均体积)计算TGI值。以在治疗时期期间的百分比体重差异为基础评价耐受性。在第二次给药之后两周，从效力研究组收集具有200至400mm³的大小的肿瘤片段，并且在-80℃下储存用于生物分析。

7.药代动力学(PK)研究

在从辅助组给药后的0(给药前)、1、72和120小时采取血液样品用于PK研究。在每个时间间隔，从每个荷瘤裸大鼠的眼球后丛(retro-orbitalplexus)各自吸取0.5mL的全血样品，且直接地添加到50μL的1M柠檬酸盐缓冲液/0.1％Pluronic F68溶液(pH 4.5)中以降低样品pH，以稳定化剩下的测试样品的完整无缺的缀合物并且阻止凝结。将在60分钟内收集的血液样品在4℃下以约1,500x g离心10分钟以收集200至250μL血浆。然后在注射器小瓶中，将血浆分成2等份，且储存在-80℃冷冻箱中，且然后转移到生物分析组用于PK分析(总共12个样品)。通过使用HPLC/FLD和LC-MS/MS方法分析血浆样品中的DFP-13318、SN-38和SN-38G的浓度。8.统计学分析

总结包括平均值、平均值的标准误差(SEM)、每个时间点的肿瘤体积以及TGI的数据。通过使用在肿瘤植入之后第27天或在开始治疗之后第18天测量的最好的抗肿瘤活性的时间点获得的数据来进行组之间的肿瘤体积差异的统计学分析。方差分析的单向ANOVA被进行以比较组之间的体重和肿瘤体积，并且使用软件SPSS 17.0分析所有的数据。P≤0.05被认为是统计学上显著的。

9.通过化合物DFP-13318的副作用减少

通过使用测试动物进行药物耐受性研究。

在图1和2中示出在效力研究中已经用DFP-13318(以50mg/kg、100mg/kg或200mg/kg的剂量)或伊立替康(以70/50mg/kg的剂量)治疗的荷瘤裸大鼠的体重的变化的测量的结果。

10.化合物DFP-13318的肿瘤生长抑制活性

研究了在已经用DFP-13318和伊立替康治疗的荷瘤大鼠中的肿瘤体积的变化和肿瘤生长的抑制。

在表4和5中示出结果，并在图3中描绘肿瘤生长曲线。

[表4]

肿瘤体积(其中被植入人类结肠癌细胞系HT-29的大鼠模型)

注解：a.平均值±SEM.*0.01<P≤0.05,**0.001<P≤0.01,***P≤0.001

[表5]

肿瘤生长抑制(其中被植入人类结肠癌细胞系HT-29的大鼠模型)

注解：a.平均值±SEM；b.相对于媒介物对照

P值：G2相对于G3＝0.031；G2相对于G4<0.001；G2相对于G5＝0.017；G3相对于G4＝0.025；G3相对于G5＝0.784；G4相对于G5＝0.452。

在表6中示出施用的各种测试样品中的摩尔比。

[表6]

在这个研究中，在50、100和200mg/kg的三个剂量水平下评价作为测试化合物的DFP-13318的抗肿瘤活性和药物耐受性，并且与在治疗其中被植入人类结肠癌细胞系HT-29的裸大鼠模型中获得的伊立替康(70/50mg/kg)的那些进行比较。在表4和5和图3中示出在不同的时间点每个治疗组的5只大鼠中的肿瘤体积。

媒介物治疗的组的肿瘤体积在肿瘤植入之后第27天达到1,914mm³，并且低至伊立替康的剂量的1/25(摩尔比)的DFP-13318的剂量(200mg/kg)示出比伊立替康更强的抗肿瘤活性，具有61％的肿瘤生长抑制(TGI)值(P＝0.030)。在接受50mg/kg和100mg/kg剂量的DFP-13318(分别地对应于伊立替康的剂量的1/100和1/50(摩尔比))的组中获得的TGI值分别是13％和35％。以70/50mg/kg给药的伊立替康示出中等的抗肿瘤活性，具有45％的TGI值。DFP-13318的抗肿瘤活性归因于释放的SN-38，其小于来自它的PEG缀合物的总重量的4％，并因此，测试样品的剂量(mg/kg)应该被转变成如表6中所示的DFP-13318和伊立替康之间的摩尔比，以用于公平比较。当如此比较时，很明显，如与伊立替康的抗肿瘤活性相比，DFP-13318的抗肿瘤活性非常强。

关于安全特性，以三种剂量水平的DFP-13318在荷瘤大鼠中被良好地耐受。体重损失最多小于2.0％，且在用DFP-13318治疗的组中没有观察到腹泻。这很可能是因为引起严重的腹泻的SN-38G的产生水平在DFP-13318中非常低且低至在伊立替康中的那种的1/100或更少。具体地，以在稍后描述的表10和11中示出的结果为基础，在225mg/kg和450mg/kg的DFP-13318的剂量下SN-38G与SN-38的产生比分别是0.07倍和0.06倍，但在使用伊立替康中，SN-38G与SN-38的产生比是8.7倍(CancerChemother.Pharmacol.42(4):280-286,1998的表1)。另一方面，当以70mg/kg的初始剂量施用伊立替康时，出现严重的体重损失(16％)，并且因此，在第二次给药时将剂量减少至50mg/kg。

11.用于化合物DFP-13318的药代动力学(PK)研究

将8至12周大的SD大鼠(雌性)(Vital River Laboratory AnimalTechnology,Co.,Ltd.)以3只大鼠随机地分成第一组(单次弹丸静脉内注射)和第二组(10分钟静脉内注射)，以被用于PK研究。在表7中示出在第1天接受单剂量施用的每个动物。

[表7]

测试动物组

在施用的那天，通过使预定量的DFP-13318溶解于10mM乙酸钠缓冲液(pH 5.0)中来制备45mg/mL的DFP-13318的新鲜的溶液，并且在施用之前，允许产生的溶液经过用于灭菌的0.22μm PVDF过滤器。

在表8中示出用于收集用于PK性能分析的血液样品的时间表。

[表8]

血液收集时间表

a.除了“在给药之前”外，每个时间点指的是给药之后的时间，对于所述“在给药之前”，在给药前14分钟收集样品。

HPLC/FLD方法被开发且被用于分析DFP-13318，并且LC-MS/MS方法被建立且被用于定量SN-38和SN-38G。通过采用非房室模型分析(Phoenix(TM)WinNonlin(注册商标),版本6.1,模型血浆(200-202))，将血浆中的DFP-13318和它的代谢物SN-38和SN-38G的浓度用于计算PK参数。在PK参数的计算中排除低于LLOQ(BLLOQ)的血浆浓度。通过使用微软电子表格(Microsoft Excel)计算PK参数的平均值。

表9示出DFP-13318的血浆浓度的测量的结果，表10示出SN-38的血浆浓度的测量的结果，并且表11示出SN-38G的血浆浓度的测量的结果。此外，表12示出DFP-13318的PK参数的计算的结果，表13示出SN-38的PK参数的计算的结果，且表14示出SN-38G的PK参数的计算的结果。

[表9]

在DFP-13318的静脉内施用之后的DFP-13318的血浆浓度(mg/mL)

BLLOQ＝低于定量的下限(LLOQ＝0.01mg/mL)

-＝没有测量

NS＝没有样品

[表10]

在DFP-13318的静脉内施用之后的SN-38的血浆浓度(ng/mL)

BLLOQ＝低于定量的下限(LLOQ＝2.00ng/mL)

-＝没有测量

NS＝没有样品

[表11]

在DFP-13318的静脉内施用之后的SN-38G的血浆浓度(ng/mL)

BLLOQ＝低于定量的下限(LLOQ＝2.00ng/mL)

-＝没有测量

NS＝没有样品

[表12]

在DFP-13318的静脉内施用之后的DFP-13318的药代动力学参数

注解：以在最后三个时间点的浓度为基础通过使用WinNonlin计算T_1/2。据报道，当相关系数(Rsq)小于0.85时，T_1/2是NC(不可计算的)。

-：没有测量的；T_max：对应于施用之后的最大(峰值)浓度的时间；C_max：最大浓度；Cl_obs：清除率；T_1/2:最终的半衰期；AUC_最后：从零至最后的可量化的浓度时间的浓度-时间曲线下面积；AUC_inf：从零至无穷的浓度-时间曲线下面积；AUC_％Extrap：在外推％剩余面积之后推导出的曲线下面积的百分比；MRT_最后：从零至最后的时间点的平均保留时间；AUC_最后/D：AUC_最后与剂量的比率；V_z_obs：表观分布体积；V_ss_obs：稳态分布体积。

[表13]

在DFP-13318的静脉内施用之后的SN-38的药代动力学参数

-：没有测量的；T_max：对应于施用之后的最大(峰值)浓度的时间；C_max：最大浓度；Cl_obs：清除率；T_1/2：最终的半衰期；AUC_最后：从零至最后的可量化的浓度时间的浓度-时间曲线下面积；AUC_inf：从零至无穷的浓度-时间曲线下面积；AUC_％Extrap：在外推％剩余面积之后推导出的曲线下面积的百分比；MRT_最后：从零至最后的时间点的平均保留时间；

[表14]

在DFP-13318的静脉内施用之后的SN-38G的药代动力学参数

在将225mg/kg剂量的DFP-13318静脉内施用于雌性大鼠之后，平均的T_max和C_max值分别被确定为用于DFP-13318的2小时和3.05mg/mL、用于SN-38的1小时和97.6ng/mL、以及用于SN-38G的1小时和12.7ng/mL。此外，DFP-13318具有36.8小时的平均血浆半衰期T_1/2。DFP-13318的清除率和MRT_最后的平均值分别被确定为2.02mL/hr/kg和28.8小时。平均分布体积(Vss)被确定为92.2mL/kg，并且DFP-13318的AUC_最后和AUC_inf的值分别被确定为92.6hr·mg/mL和117hr·mg/mL。此外，AUC_％Extrap的平均值是24.0％。

另一方面，关于代谢物SN-38和SN-38G，平均血浆半衰期T_1/2被确定为用于SN-38的33.2小时，并且因为测量系数(r²)太低，对于SN-38G是不可计算的(NC/NBC)。SN-38和SN-38G的MRT_最后的平均值分别被确定是27.2小时和9.65小时。此外，AUC_最后和AUC_inf的平均值被确定为用于SN-38的1,775hr·ng/mL和2,252hr·ng/mL以及用于SN-38G的120hr·ng/mL和1,948hr·ng/mL。SN-38和SN-38G的AUC_％Extrap的平均值分别是20.8％和91.6％。

在研究期间，发现第一组的大鼠之一(动物编号：78981)在给药后24小时收集样品血液之后死于出血。在样品收集之前没有示出反常的临床体征。这个组的另外两个大鼠没有示出反常的体征，并且可以收集所有的样品血液直到最后的时间点。此外，在全部的生存时间期间，在施用高剂量的DFP-13318的大鼠组中没有观察到反常的临床体征。因此，推断，大鼠的死亡由出血引起且与测试物品无关。

在将450mg/kg的剂量的DFP-13318静脉内施用于雌性大鼠之后，平均的T_max和C_max值分别被确定为用于DFP-13318的0小时和7.24mg/mL、用于SN-38的1小时和315ng/mL、以及用于SN-38G的0小时和53.0ng/mL。此外，DFP-13318具有35.8小时的平均血浆半衰期T_1/2。DFP-13318的清除率和MRT_最后的平均值分别被确定为2.31mL/hr/kg和31.7小时。平均分布体积(Vss)被确定为97.3mL/kg，并且DFP-13318的AUC_最后和AUC_inf的值分别被确定为180hr·mg/mL和195hr·mg/mL。此外，AUC_％Extrap的平均值是7.42％。

另一方面，关于代谢物SN-38和SN-38G，平均血浆半衰期T_1/2被确定是用于SN-38的34.0小时，以及用于SN-38G的18.9小时。SN-38和SN-38G的MRT_最后的平均值分别被确定是30.8小时和19.55小时。此外，AUC_最后和AUC_inf的平均值分别被确定为用于SN-38的6,803hr·ng/mL和7,499hr·ng/mL、以及用于SN-38G的407hr·ng/mL和584hr·ng/mL。SN-38和SN-38G的AUC_％Extrap的平均值分别是8.64％和30.3％。

当通过静脉内弹丸注射225mg/kg的剂量或通过静脉内输注450mg/kg的剂量施用DFP-13318时，用于DFP-13318的C_max和AUC_最后的值通常与剂量成比例增加。然而，关于SN-38和SN-38G，增加的程度大于剂量的比例。在通过静脉内弹丸注射或静脉内输注将DFP-13318施用于动物之后，观察到DFP-13318的相似的药代动力学性能，比如T_1/2、CL和V_ss。

[实施例3]

<肿瘤中的DFP-13318积聚的证实>

这个实施例被进行用于证实：在静脉内施用用于PK/PD(药代动力学/药效学)研究的DFP-13318之后，DFP-13318和它的代谢物SN-38在从HT-29荷瘤裸大鼠模型收集的肿瘤组织中被积聚。

在PK/PD研究中，如表15所示，使用25只裸大鼠。

[表15]

大鼠组和治疗

注解：*n：动物的数目，**剂量：基于体重调整的(10μL/g)，***媒介物对照：10mM乙酸盐缓冲液，pH 5。

在第二次给药之后两周被收集且被储存在-80℃下的25个肿瘤片段(具有200至400mm³的大小)中，来自组2至4的15个样品被用于DFP-13318和SN-38两者的定量，来自组5的5个样品单独用于SN-38。来自组1的五个样品被用于产生校正曲线和用于制备样品。

HPLC/FLD和LC-MS/MS生物分析方法分别被用于定量每个肿瘤样品中的DFP-13318和SN-38。如下进行生物分析方法：

(1)将约200mg的空白(或样品)称量到管中，以1:4的比率向其中添加0.8mL乙酸盐缓冲液(10mM，pH 5)，且使生成物经受超声波破碎(ultrasonicdisruption)。

(2)将生成的样品转移到1.1mL塑料管中。

(3)使每个管涡旋用于充分地混合样品，摇动约10分钟，并在4℃下在1109x g下离心10分钟。

(4)将280μL的量的上清液转移到另一个1.1mL管中，且通过向它吹送氮气在40℃下被干燥。

(5)通过使用10mM乙酸盐缓冲液(pH 5)重构管中剩下的残留物，且使生成物涡旋约1分钟。

(6)将20μL生成的样品溶液注入到HPLC中。

HPLC条件如下：

仪器：Agilent 1200HPLC系统

分析柱：Agilent ZORBAX C18柱(5μm,3.0mm x 50mm柱)

柱温：室温

分析时间：2.0分钟

流动相A：20mM乙酸铵(pH 5.0)，B：乙腈

注入体积：10μL

保留时间：SN-38：0.46分钟，内部标准：0.49分钟

梯度程序：0至2.00分钟的时间：A50％和B50％，0.600mL/min的流速，2.00分钟的时间和此后：A50％和B50％，0.600mL/min的流速。

自动进样器温度：5±3℃

质谱仪条件如下：

仪器：Applied Biosystems/AB Sciex API 4000三重四极质谱仪，Analyst1.5.2软件

源：ESI

离子化模式：正的

监控模式：MRM

毛细管：5500V

气体温度：500℃

峰积分：峰面积

DFP-13318的校正曲线的范围是从0.0100至1.00mg/mL，具有等于0.9957的线性回归系数(HPLC/FLD)。校正标准的单个准确性范围是从91.0％至108％。SN-38的校正曲线范围是从2.00至1,000ng/mL，具有等于0.9961的线性回归系数。校正标准的单个准确性范围是从89.8％至107％。在接受的批次中，至少75％的校正标准的准确性满足接受标准(在标称值的85％至115％内，除了LLOQ，其中它应该在标称值的80％至120％内)。计算所测试的肿瘤样品中的校正标准的浓度和校正曲线参数。

样品的单个准确性范围是从94.0％至111％(对于DFP-13318)以及98.5％至112％(对于SN-38)，所有的这些都满足接受标准(总的样品的至少67％的准确性在标称值的80％至120％内，并且在每个浓度水平下(低、中和高)的样品的至少50％在标称值的80％至120％内)。在表16中总结结果。

在低、中和高浓度水平下的样品的精确性范围分别是用于DFP-13318的从1.52％至3.86％、以及用于SN-38的从1.42％至6.00％。

分别在表17和18中总结单独的肿瘤组织中的DFP-13318和它的代谢物SN-38的含量。图4和5示出肿瘤组织中的DFP-13318和SN-38含量的剂量依赖性。

当以50mg/kg、100mg/kg和200mg/kg的剂量静脉内施用DFP-13318时，HT-29肿瘤组织中的DFP-13318和它的代谢物SN-38的含量以剂量依赖性方式增加。然而，当施用伊立替康(SN-38的前药)时，没有在组5中检测到SN-38。如表19所示，HT-29肿瘤中的SN-38含量始终在DFP-13318的含量的1％附近，并且在以50、100和200mg/kg的剂量静脉内施用化合物之后，母体化合物(具有4个SN-38分子的4-臂PEG)在肿瘤组织中被积聚(分别地表17和图4)。这表明，可以通过从母体化合物的转化维持持久的SN-38水平。

[表16]

样品的结果

加下划线的：对于HPLC-FLD方法，值的准确性偏差是标称值的20％或更多。

NA：不适用

[表17]

在静脉内施用DFP-13318之后，HT-29肿瘤中的DFP-13318的浓度(mg/mL)

DFP-13318的MW：45,700道尔顿；

含量²＝含量¹x 1,000,000/DFP-13318MW

[表18]

在静脉内施用DFP-13318之后，HT-29肿瘤中的SN-38的浓度(ng/mL)

SN-38的MW：392道尔顿；含量²＝含量¹/SN-38MW

NA：不适用

BLLOQ：低于定量的下限

[表19]

DFP-13318和SN-38的肿瘤摄取的总结

NA：不适用；BLLOQ：低于定量的下限；DFP-13318的MW：45,700道尔顿；SN-38的MW：392道尔顿

工业适用性

本发明可以实现没有副作用的癌症治疗，其中可以通过以一周一次的频率以低剂量重复地静脉内施用与伊立替康和SN-38衍生物相关的药物来提供优良的效力而没有伴随严重的副作用比如腹泻，并且因此，本发明在制药工业中是非常有用的。

本文引用的所有的出版物、专利和专利申请以其整体通过引用并入。

Claims

1.一种用于癌症治疗的药物组合物，包括作为活性成分的由下列式I代表的化合物：

C-[-CH₂-O-(-CH₂CH₂-O-)_n-X¹-CHR¹-O-CO-NR²-CH₂-X²]₄ (I)

并且n是200至1,000的整数，

2.根据权利要求1所述的组合物，其中在所述式I的化合物中，R¹、R²、X²和n如上文所定义并且X¹是(CH₂)_1-5-CONH-(CH₂)_1-20或(CH₂)_1-5-NHCO-(CH₂)_1-20。

3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中在所述式I的化合物中，X¹、X²和n如上文所定义，R¹是甲基、乙基、被取代的甲基、或被取代的乙基，并且R²是被取代的苯基。

4.根据权利要求2或3所述的组合物，其中在所述式I的化合物中，X¹和X²如上文所定义，R¹是被取代的甲基，R²是4-取代的苯基，并且n是200至800的整数。

5.根据权利要求4所述的组合物，其中所述式I的化合物是由下列式III代表的化合物：

其中n如上文所定义。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的组合物，其中癌症选自由结肠癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫癌、肺癌、胃癌、胰腺癌、食道癌、头颈癌、肝细胞癌、胆囊癌、胆管癌、肉瘤和恶性淋巴瘤组成的组。

7.一种用于治疗癌症的方法，包括以经至少两周每隔一周一周一次的频率，将根据权利要求1至5中任一项所述的组合物以约0.01μmol/kg体重至约11μmol/kg体重的所述化合物的单剂量肠胃外地施用于患有癌症的受试者，其中没有看到包括严重的腹泻和白细胞减少症和/或中性粒细胞减少症的伊立替康类副作用，并且当与伊立替康相比，剂量低至1/10(摩尔比)或更少时，提供等于或大于伊立替康的癌症生长抑制活性。

8.根据权利要求7所述的方法，其中癌症选自由结肠癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫癌、肺癌、胃癌、胰腺癌、食道癌、头颈癌、肝细胞癌、胆囊癌、胆管癌、肉瘤和恶性淋巴瘤组成的组。

9.根据权利要求7或8所述的方法，其中所述肠胃外施用是静脉内施用。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述静脉内施用是输注或弹丸注射。