CN104962597A

CN104962597A - 一种龟甲胶原蛋白多肽的提取方法及其在制备睡眠面膜中的应用

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Publication number: CN104962597A
Application number: CN201510399868.8A
Authority: CN
Inventors: 严宜昌
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2015-07-09
Filing date: 2015-07-09
Publication date: 2015-10-07

Abstract

本发明涉及中药化妆品技术领域，具体公开了一种龟甲胶原蛋白多肽的提取方法及其在制备睡眠面膜中的应用。本发明首先将龟甲经水煎煮提取，提取液依次用胃蛋白酶、胰蛋白酶酶解成胶原蛋白及多肽组合物，再加入乳酸、羟基乙酸以及各种常用辅料即可制成具有祛斑润肤、美白抗皱、保湿营养的睡眠面膜及各种化妆品。本发明的睡眠面膜与现有技术相比更加适合消费者的消费需求，也能更好地体现中药材的功效。

Description

一种龟甲胶原蛋白多肽的提取方法及其在制备睡眠面膜中的应用

技术领域

本发明涉及中药化妆品技术领域，具体涉及一种龟甲胶原蛋白多肽的提取方法及其在制备睡眠面膜中的应用。

背景技术

龟甲(龟板)为龟科动物乌龟Chinemys reevesii(Gray)的背甲及腹甲。咸、甘，微寒。归肝、肾、心经。具有滋阴潜阳，益肾强骨，养血补心，固经止崩的作用；用于阴虚潮热，骨蒸盗汗，头晕目眩，虚风内动，筋骨痿软，心虚健忘，崩漏经多。乌龟为我国传统常用中药材和药食两用资源，也是著名的滋补食品，是“滋阴”圣品，龟甲始载于东汉《神农本草经》，列为上品，谓之“龟甲味咸平，主漏下赤白，破症瘕……”；宋代《日华本草》视龟甲为极阴之物，用于补阴；元朝朱丹溪创导滋阴学说以后，补阴必用。

胶原蛋白通常是由18种人体必须氨基酸组成的由3条肽链拧成螺旋形的纤维状高分子蛋白质。通过对胶原蛋白复合酶解工艺水解，可变成可溶解性的水解胶原蛋白，是片段的，但具有活性的三螺旋多肽结构，这种丝状的胶原蛋白纤维能使皮肤保持结实而有弹性，它存在于人体皮肤、骨骼、牙齿、肌腱等部位，主要生理机能是做结缔组织的粘合物质，在体内以胶原纤维形式存在。通常胶原蛋白的分子量在2000-3000道尔顿时，最利于人体吸收，并能充分发挥其保湿、美白、消除色班和皱纹、紧致肌肤的作用，在人体皮肤成分中，有70％是由胶原多肽所组成，胶原蛋白是机体的主要结构蛋白，它是一种促纤维细胞生长因子，约占入体内蛋白质总量的三分之一，其特有的极低抗原性、可生物降解性、生物吸收性、止血性能和促进细胞生长的功能。补充胶原蛋白多肽，可以预防皮肤衰老，淡化皮肤色斑。简单地说胶原多肽有保湿、亮肤、紧肤、防皱、淡斑、修复皮肤等作用。

本发明旨在提取中药材龟甲的胶原蛋白多肽，佐以现代先进的化妆品制造工艺，为大众提供优良的护肤产品。现有技术中尚未有相关报道。

发明内容

针对现有技术中存在的不足，本发明的目的首先在于提供了一种二次发酵提取龟甲胶原蛋白多肽的方法，该方法能够获得分子量较小的肽链。

一种二次发酵提取龟甲胶原蛋白多肽的方法，依次包括如下步骤：

(1)水煮提取

取龟甲(血板)，水提三次，合并提取液，具体操作如下：

第一次加入2-5倍龟甲重量的水，加热至微沸并保持15-30h，收集滤液；

第二次加入2-5倍龟甲重量的水，加热至微沸并保持15-30h，收集滤液；

第三次加入2-5倍龟甲重量的水，加热至微沸并保持15-30h，收集滤液。

合并上述三次滤液，沸水浴中浓缩至重量为原料龟甲重量的0.8-1.2倍，浓缩液静置待用。

(2)胃蛋白酶酶解

取步骤(1)所得浓缩液，用1mol/L的HCl调节pH值至1-3，然后加入胃蛋白酶，在35-55℃下酶解12h；

所述胃蛋白酶的加入量为步骤(1)所得浓缩液重量的0.1-10％，优选2％。

(3)胰蛋白酶酶解

将步骤(2)胃蛋白酶酶解后的溶液用1mol/L的NaOH调pH值至8-10，加入胰蛋白酶，在35-55℃下酶解4h；

所述胰蛋白酶的加入量为步骤(1)所得浓缩液重量的0.1-10％，优选5％。

(4)灭活

将步骤(3)胰蛋白酶酶解后的溶液加热至沸腾并保持沸腾10-20min，过滤去渣，滤液用1mol/L的HCl调节pH值至7，即得龟甲胶原蛋白多肽。

经检测，所得龟甲胶原蛋白多肽中相对分子质量小于5000道尔顿的龟甲胶原蛋白多肽占总质量的50％以上；相对分子质量小于3000道尔顿的龟甲胶原蛋白多肽占总质量的30％以上。

在此基础上，本发明的第二个目的在于，将上述方法获得的龟甲胶原蛋白多肽用于制备睡眠面膜，所制得的睡眠面膜化妆品具有较温和的祛斑润肤、美白抗皱、保湿营养等改善皮肤肤质的作用。

优选的，每100mL所述睡眠面膜中含有0.5-3.5g羟基乙酸，优选3.5g，所述睡眠面膜中用于调节pH的物质为乳酸。

所述睡眠面膜中除了含有龟甲胶原蛋白多肽、羟基乙酸及乳酸以外，其余成分为水和辅料。

进一步，每100mL所述睡眠面膜的原料配方如下：

进一步，本发明提供了一种利用所述龟甲胶原蛋白多肽制备睡眠面膜的工艺，其步骤如下：

(1)油相A混合：将白油、硅油、肉豆蔻酸异丙酯、维生素E、Tween-80、Span-80混合，缓慢加热至80℃混溶，现配现用；

(2)水相B混合：将龟甲胶原蛋白多肽、甘油和维生素C磷酸酯镁混合，缓慢加热至80℃混溶；然后用20wt％的乳酸调节pH值至4.0-5.0，加入去离子水至本工艺最终所得睡眠面膜体积的一半，现配现用；

(3)趁热将油相A缓慢加入水相B中，并快速搅拌，当油相A和水相B混合液在搅拌中降温至50℃时，加入羟基乙酸，并快速搅拌，羟基乙酸完全溶解后加入尼泊金甲酯、尼泊金丙酯以及香精，继续搅拌至常温，脱气既得。

与现有技术相比，本发明具有以下优点和效果：

1、现有技术中以中药材作为原材料，制备化妆品的很多，但多以药粉或粗提物用于产品的为多，而像本发明用现代生物技术对中药材进行深加工来制备化妆品的不多，因此，本发明的产品更加适合消费者的消费需求，也能更好地体现中药材的功效。

2、现有技术中对各种原料的胶原蛋白的提取技术多见，但本发明所采用人体仿生提取技术对龟甲中的胶原蛋白进行提取，未见报道；本发明中的提取技术更符合人体需要，更适宜于人体应用，更加自然温和。

具体实施方式

下面申请人将结合具体的实施例对本发明的产品及其制备方法和应用做进一步的详细说明，应理解，以下内容不以任何方式对本发明的保护范围加以限制。

以下实施例中所用主要试剂及材料介绍如下：

胃蛋白酶(猪源)(1：15000)，上海晶纯生化科技股份有限公司；

胰蛋白酶(猪源)(1:250)，上海研谨生物科技有限公司，Sigma；

其他均为常规市售试剂及材料。

实施例1：

(1)水煮提取

取龟甲(血板)1Kg，水提三次，具体操作如下：

第一次加入5Kg去离子水，加热至微沸并保持24h，收集滤液；

第二次加入3Kg去离子水，加热至微沸并保持24h，收集滤液；

第三次加入2Kg去离子水，加热至微沸并保持24h，收集滤液。

合并上述三次滤液，沸水浴中浓缩至1Kg，浓缩液静置待用。

(2)胃蛋白酶酶解

取步骤(1)所得的1Kg浓缩液，用1mol/L的HCl调节pH值至1.8，然后加入胃蛋白酶20g，在45℃下酶解12h。

(3)胰蛋白酶酶解

将步骤(2)胃蛋白酶酶解后的溶液用1mol/L的NaOH调pH值至9，加入胰蛋白酶50g，在55℃下酶解4h。

(4)灭活

将步骤(3)胰蛋白酶酶解后的溶液加热至沸腾并保持沸腾15min，过滤去渣，滤液用1mol/L的HCl调节pH值至7，即得龟甲胶原蛋白多肽。

经检测，所得龟甲胶原蛋白多肽中相对分子质量小于5000道尔顿的龟甲胶原蛋白多肽占总质量的56％；相对分子质量小于3000道尔顿的龟甲胶原蛋白多肽占总质量的35％。

实施例2：

(1)水煮提取

取龟甲(血板)1Kg，水提三次，具体操作如下：

第一次加入4Kg去离子水，加热至微沸并保持20h，收集滤液；

第二次加入3Kg去离子水，加热至微沸并保持20h，收集滤液；

第三次加入3Kg去离子水，加热至微沸并保持20h，收集滤液。

合并上述三次滤液，沸水浴中浓缩至1Kg，浓缩液静置待用。

(2)胃蛋白酶酶解

取步骤(1)所得的1Kg浓缩液，用1mol/L的HCl调节pH值至2.5，然后加入胃蛋白酶50g，在50℃下酶解12h。

(3)胰蛋白酶酶解

将步骤(2)胃蛋白酶酶解后的溶液用1mol/L的NaOH调pH值至9，加入胰蛋白酶40g，在45℃下酶解4h。

(4)灭活

经检测，所得龟甲胶原蛋白多肽中相对分子质量小于5000道尔顿的龟甲胶原蛋白多肽占总质量的57％；相对分子质量小于3000道尔顿的龟甲胶原蛋白多肽占总质量的34％。

实施例3：

(1)水煮提取

取龟甲(血板)1Kg，水提三次，具体操作如下：

第一次加入4Kg去离子水，加热至微沸并保持18h，收集滤液；

第二次加入4Kg去离子水，加热至微沸并保持18h，收集滤液；

第三次加入4Kg去离子水，加热至微沸并保持18h，收集滤液。

合并上述三次滤液，沸水浴中浓缩至1Kg，浓缩液静置待用。

(2)胃蛋白酶酶解

取步骤(1)所得的1Kg浓缩液，用1mol/L的HCl调节pH值至2，然后加入胃蛋白酶65g，在45℃下酶解12h。

(3)胰蛋白酶酶解

将步骤(2)胃蛋白酶酶解后的溶液用1mol/L的NaOH调pH值至9，加入胰蛋白酶25g，在40℃下酶解4h。

(4)灭活

经检测，所得龟甲胶原蛋白多肽中相对分子质量小于5000道尔顿的龟甲胶原蛋白多肽占总质量的54％；相对分子质量小于3000道尔顿的龟甲胶原蛋白多肽占总质量的36％。

实施例4：利用实施例1制得的龟甲胶原蛋白多肽制备0.1L睡眠面膜的工艺实施例，步骤如下：

(1)油相A混合：将白油12mL、硅油15mL、肉豆蔻酸异丙酯(IPM)8mL、维生素E 3mL、Tween-80 4.2mL和Span-80 3.1mL混合，缓慢加热至80℃混溶；现配现用；

(2)水相B混合：将实施例1制备的龟甲胶原蛋白多肽20mL、甘油5mL和维生素C磷酸酯镁2g混合，缓慢加热至80℃混溶；然后用20wt％的乳酸调节pH值至4.5；加入去离子水至51mL；现配现用；

(3)趁热将油相A缓慢加入水相B中，并快速搅拌，当油相A和水相B混合液在搅拌中降温至50℃时，加入羟基乙酸3.5g，并快速搅拌，羟基乙酸完全溶解后加入尼泊金甲酯0.1g、尼泊金丙酯0.1g以及0.2g薰衣草香精，继续搅拌至常温，脱气既得。

本实施例中所用原料均为医药级。

本实施例的产品性状根据QB/T 1857-2013检测结果如下表1所示：

表1

指标名称	指标要求(水包油型O/W)
		外观	膏体细腻，均匀一致，
香气	薰衣草香型
		pH值(25℃)	4.0-4.5
耐热	符合规定
		耐寒	符合规定
卫生指标	符合规定

涂抹本实施例的产品2周后，人体手背与大鼠皮肤均无过敏反应。

实验例5：为了使本领域技术人员更好地理解本发明，下面申请人将通过临床试验报告来进一步说明本发明具有的技术效果。

1、试用者资料：女30例，年龄为20～60周岁之间，包括具有色斑、面黄无光泽、皮肤松弛明显者以及正常皮肤自愿者。

2、试验材料：

实施例4制备的睡眠面膜。

3、试验方法：每周使用两次，试验时间为两个月。使用期间不得与其他化妆品同时混用。睡前使用，用温水洗净面部，用实施例4制备的睡眠面膜2-3ml均匀涂抹于面上，不得涂抹眼周。涂抹后最好不见强光，次日起床后洗净面部。正常使用防晒霜及其他化妆品。

4、试验结果；

评分标准：

1.过敏、面部痛痒、红肿、水肿、发炎等不良症状发生一次计1分，严重时计10分。

2.保湿营养。凭感受评分，无作用0分至作用良好10分；

3.祛斑润肤。凭感受评分，无作用0分至作用良好10分；

4.美白抗皱。凭感受评分，无作用0分至作用良好10分；

5.综合评价。最低0分，最高10分。

结果见表2。

表2.睡眠面膜试用评分结果(n＝30)

评分项目	极小值	极大值	中值	众数	平均值
						不良	0	2	0	0	0.13±0.43
保湿营养	6	10	8	8	8.35±0.93
						祛斑润肤	5	10	8	8	8.07±1.31
美白抗皱	4	10	7	8	7.00±1.72
						综合评价	6	10	8	7	7.97±1.33

试用人均未出现过敏性反应，偶见瘙痒占总试用次数的0.8％，不能排除其他环境因素；各试用人均感觉面部皮肤饱满、有弹性、滋润有光泽、斑痕得到有效的改善。从上表可以看出，本发明在保湿营养、祛斑润肤两方面效果令试用者满意，在美白抗皱上评分稍逊于保湿营养、祛斑润肤；但总体评价令人满意。

实施例6：用实施例2提取的龟甲胶原蛋白多肽来重复实施例4，其余均不变。所得产品性状根据QB/T 1857-2013检测结果如下表3所示：

表3

实施例7：用实施例3提取的龟甲胶原蛋白多肽来重复实施例4，其余均不变。所得产品性状根据QB/T 1857-2013检测结果如下表4所示：

表4

实施例8：用实施例6的产品重复实施例5，结果见表5。

表5.睡眠面膜试用评分结果(n＝30)

评分项目	极小值	极大值	中值	众数	平均值
						不良	0	1	0	0	0.03±0.19
保湿营养	6	10	8	8	8.10±1.07
						祛斑润肤	5	10	8	8	7.63±1.25
美白抗皱	5	9	7	8	6.77±1.35

综合评价

5

9

7

7.43±0.95

试用人均未出现过敏性反应，偶见瘙痒占总试用次数的0.2％，不能排除其他环境因素；各试用人均感觉面部皮肤饱满、有弹性、滋润有光泽、斑痕得到有效的改善。从上表可以看出，本发明在保湿营养、祛斑润肤两方面效果令试用者满意，在美白抗皱上评分稍逊于保湿营养、祛斑润肤；但总体评价令人满意。

实施例9：用实施例7的产品重复实施例5，结果见表6。

表6.睡眠面膜试用评分结果(n＝30)

评分项目	极小值	极大值	中值	众数	平均值
						不良	0	3	0	0	0.17±0.60
保湿营养	5	10	8	8	8.23±1.15
						祛斑润肤	4	10	8	8	7.80±1.46
美白抗皱	5	9	7	8	6.77±1.35
						综合评价	6	9	7.5	7	7.63±0.93

试用人均未出现过敏性反应，偶见瘙痒占总试用次数的1.0％，不能排除其他环境因素；各试用人均感觉面部皮肤饱满、有弹性、滋润有光泽、斑痕得到有效的改善。从上表可以看出，本发明在保湿营养、祛斑润肤两方面效果令试用者满意，在美白抗皱上评分稍逊于保湿营养、祛斑润肤；但总体评价令人满意。

Claims

1.一种二次发酵提取龟甲胶原蛋白多肽的方法，依次包括如下步骤：

(1)水煮提取

取龟甲，水提三次，合并提取液，沸水浴中浓缩至重量为原料龟甲重量的0.8-1.2倍，浓缩液静置待用；

(2)胃蛋白酶酶解

取步骤(1)所得浓缩液，用HCl调节pH值至1-3，然后加入胃蛋白酶，在35-55℃下酶解12h；

所述胃蛋白酶的加入量为步骤(1)所得浓缩液重量的0.1-10％；

(3)胰蛋白酶酶解

将步骤(2)胃蛋白酶酶解后的溶液用NaOH调pH值至8-10，加入胰蛋白酶，在35-55℃下酶解4h；

所述胰蛋白酶的加入量为步骤(1)所得浓缩液重量的0.1-10％；

(4)灭活

将步骤(3)胰蛋白酶酶解后的溶液加热至沸腾并保持沸腾10-20min，过滤去渣，滤液用HCl调节pH值至7，即得龟甲胶原蛋白多肽。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述龟甲为血板。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述胃蛋白酶的加入量为步骤(1)所得浓缩液重量的2％。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述胰蛋白酶的加入量为步骤(1)所得浓缩液重量的5％。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述水提三次的具体操作如下：

6.根据权利要求1-5中任一所述的方法提取的龟甲胶原蛋白多肽在制备化妆品中的应用。

7.根据权利要求1-5中任一所述的方法提取的龟甲胶原蛋白多肽在制备睡眠面膜中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：每100mL所述睡眠面膜中含有0.5-3.5g羟基乙酸，所述睡眠面膜中用于调节pH的物质为乳酸；

9.一种睡眠面膜，每100mL所述睡眠面膜的原料配方如下：

10.一种权利要求9所述的睡眠面膜的制备工艺，其步骤如下：